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1、(10)申请公布号 CN 101967088 A (43)申请公布日 2011.02.09 CN 101967088 A *CN101967088A* (21)申请号 201010210240.6 (22)申请日 2010.06.28 C07C 49/83(2006.01) C07C 45/78(2006.01) (71)申请人 南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边 108 号 01 幢 701-702 室 (72)发明人 刘东锋 郭琴 杨成东 (54) 发明名称 一种酸模素的提取纯化方法 (57) 摘要 本发明提供一种酸模素的提取纯化方法， 分 为。
2、原料用溶剂提取得提取液， 再经大孔树脂富集 分离和结晶三部分组成， 具体步骤为 ： 将原料经 粉碎后加溶剂提取 3 次， 合并三次提取液， 将提取 液上样至大孔树脂吸附， 洗脱剂为氯仿、 乙酸乙 酯、 丙酮、 甲醇中的一种或两种以上混合溶液洗脱 或不同比例梯度洗脱， 收集洗脱液， 浓缩干燥得黄 色粗提物 ； 重结晶溶剂为乙酸乙酯 ； 超临界 CO2流 体抗溶剂结晶， 结晶条件为 ： 压力 15MPa， 温度 78。产品含量最高可达 98.5以上。该提取 纯化工艺， 产品纯度高、 速度快、 周期短。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 。
3、1 页 说明书 4 页 CN 101967088 A1/1 页 2 1. 一种酸模素的提取纯化方法， 包括溶剂提取、 大孔树脂富集分离、 溶剂结晶和超临界 CO2抗溶剂结晶纯化， 其特征在于 ： 所述原料为毛脉酸模或羊蹄等酸模属植物， 提取溶剂为 甲醇， 提取方法可选渗漉提取、 回流提取或超声提取， 浓缩成浸膏， 然后用大孔树脂富集， 不 同溶剂梯度洗脱， 浓缩洗脱液， 收集酸模素流分， 浓缩干燥， 再采用乙酸乙酯重结晶， 最后用 超临界 CO2抗溶剂结晶纯化。 2.按权利要求1所述的方法， 其特征在于 ： 所述大孔树脂可选XSD-1、 DA201、 DM301， LSA 型大孔树脂等。 3.。
4、 按权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述洗脱剂每次洗脱用量为 3-8BV。 4. 按权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述超临界 CO2抗溶剂结晶压力为 10-15MPa， 温度 45-78。 权 利 要 求 书 CN 101967088 A1/4 页 3 一种酸模素的提取纯化方法 技术领域 ： 0001 本发明涉及一种酸模素的提取纯化方法， 尤其是一种采用树脂吸附和超临界 CO2 抗溶剂结晶结合的分离纯化方法。 背景技术 ： 0002 酸模素 (Musizin)， 又名羊蹄根素。 0003 化学名称 ： 1-(1， 8-dihydroxy-3-methylnaphtha。
5、len-2-yl)ethanone ； 0004 分子式 ： C13H12O3； 分子量 ： 216.23 ； 0005 分子结构为 ： 0006 0007 理化性质 ： 为黄色针状结晶， mp.164 -165。 0008 药理研究表明酸模素具有抗菌、 抗真菌作用。对深红色发癣菌、 枯草杆菌、 白色念 珠菌和八迭球菌的最低抑菌浓度分别为 ： 50， 25， 100， 100g/ml ； 可以作为抗氧化剂用于 食品和化妆品。对睪丸激素还原酶有抑制作用 ； 含有酸模素的牙粉制品可以预防和治疗牙 龈炎和牙床的脓溢。中国专利 ( 申请号 200610046584.1) 利用羊蹄根根部所含的大黄素、 。
6、酸模素等成份， 抑制、 杀灭红色毛癣菌、 及其它致病菌， 达到治愈脚气病的目的。 0009 酸模素天然存在于蓼科植物酸模属植物中， 其中羊蹄 ( 药圃 ) 中酸模素含量为 0.3883， 羊蹄 ( 南京 ) 中含量为 0.6601， 羊蹄 ( 佘山 ) 中含量 0.1370， 齿果酸模中中 含量 0.1429， 金不换中含量 0.1377， 酸模中含量 0.0108。 0010 目前国内尚无酸模素提取纯化工艺方面的专利， 郑水庆等发表的 “中药羊蹄化学 成分的研究 (I)” ， 采用 80乙醇室温冷浸提取多次， 减压浓缩， 依次用二氯甲烷等多种溶 剂萃取， 在二氯甲烷的提取物经硅胶柱层析分离得。
7、到酸模素， 该方法提取率低， 提取时间 长， 分离量小， 不适用于大规模生产。 发明内容 ： 0011 本发明旨在为开发一种抗真菌中药新药提供高纯度原料酸模素， 所要解决的技术 问题为酸模素的提取分离纯化方法。本发明的技术方案是以酸模属植物为原料， 用溶剂提 取得提取液， 再经大孔树脂富集分离和结晶三部分组成， 其特征在于 ： 所述原料为毛脉酸模 或羊蹄等酸模属植物， 提取溶剂为甲醇或乙醇， 提取方法可选渗漉提取、 回流提取或超声提 取， 浓缩成浸膏， 然后用大孔树脂富集， 不同溶剂梯度洗脱， 浓缩洗脱液， 收集酸模素流分， 浓缩干燥， 再采用乙酸乙酯重结晶， 最后用超临界 CO2抗溶剂结晶纯。
8、化。 0012 具体步骤为 ： 0013 1) 将原料粉碎后加 1-15 倍有机溶剂提取， 合并提取液 ； 说 明 书 CN 101967088 A2/4 页 4 0014 2) 将提取液浓缩成浸膏， 上样至大孔树脂吸附， 洗脱剂为氯仿、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇中的一种或两种以上混合溶液洗脱或不同比例梯度洗脱， 收集洗脱液， 主要收集含量 65以上的酸模素流分， 浓缩干燥成黄色粉末， 采用乙酸乙酯重结晶 2-3 次， 纯度达 95以 上 ； 0015 3) 将纯度 95以上产品配制成乙酸乙酯饱和溶液， 投入超临界 CO2流体抗溶剂结 晶装置， 结晶条件为 ： 压力 15MPa， 温度 78 。
9、； 停机收集结晶可制得纯度 98.5以上酸 模素。 0016 所述提取溶剂为乙醇或甲醇。 0017 所述洗脱剂每次洗脱用量为 3-8BV。 0018 所述大孔树脂可选 XSD-1、 DA201、 DM301， LSA 型大孔树脂等。 0019 所述超临界 CO2抗溶剂结晶压力为 10-15MPa， 温度 45-7， 时间 30-100 分钟。 0020 本发明为医药企业提供一种酸模素的提取纯化方法， 集溶剂提取大孔树脂吸 附溶剂重结晶超临界 CO2抗溶剂结晶方法对酸模属植物进行加工制备高纯度酸模 素单体。该提取纯化工艺具有产品纯度高、 速度快、 周期短， 安全、 不污染环境等优点。 具体实施方。
10、式 ： 0021 下述实施例中酸模素的检测采用高效液相色谱法 ( 参照原源等 “HPLC 法测定酸模 属植物根中酸模素的含量” 文献 )， 具体方法如下 ： 0022 色谱条件 ： 0023 色谱柱 ： C18(10m， 2504.5mm) ； 0024 柱温 ： 室温 ； 0025 流动相 ： 甲醇 - 水 - 高氯酸 (800 200 1) ； 0026 紫外检测波长 ： 254nm ； 0027 流速 ： 1.0ml/min ； 0028 灵敏度 ： 0.5AUFS ； 0029 进样量 ： 20l。 0030 实施例 1 ： 0031 a.称取1kg金不换根粉碎成粗粉， 装填入渗漉柱中。
11、， 向渗漉柱中加入700ml甲醇溶 液， 在 40-5下浸泡 30 分钟使其充分渗透， 保温状态下开启渗漉柱出口阀， 同时自渗漉柱 顶部连续加入甲醇溶液， 控制流速在 15ml/min， 直至收集到 3000ml 渗漉提取液 ； 0032 b. 将提取液浓缩成浸膏， 用 DM301 大孔吸附树脂层析柱吸附， 吸附速度 3ml/min， 用3BV去离子水冲洗层析柱， 弃去该步骤的洗脱液， 再用5BV乙酸乙酯-甲醇(12)洗脱， HPLC 跟踪监测， 收集含量高于 65的目标流分， 浓缩干燥洗脱液成黄色粉末 ； 0033 c. 将上述黄色粉末加入乙酸乙酯饱和溶解， 抽滤结晶， 重结晶 2 次， 得。
12、到纯度为 95.4的酸模素 ； 0034 d. 将上述结晶产物用乙酸乙酯饱和溶解至有微量晶体析出， 冷却到 45-5， 再置 于超临界 CO2结晶釜中， 结晶压力控制在 12MPa， 进行超临界抗溶剂结晶 50 分钟 ； 0035 e. 结束后， 取样检测， 可得到含量 98.5以上高纯度酸模素 1.2g。 0036 实施例 2 ： 说 明 书 CN 101967088 A3/4 页 5 0037 a. 称取 2kg 羊蹄根 ( 酸模素含量约 0.66 ) 粉碎成粗粉， 按照质量比 1 4 的比 例， 加入百分比浓度为 80的乙醇水溶液， 加热回流提取 3 次， 每次 2.5 小时， 过滤， 。
13、合并滤 液 ； 0038 b.将滤液浓缩成浸膏， 用LSA-21大孔吸附树脂层析柱吸附， 吸附速度5ml/min， 用 3BV 去离子水冲洗层析柱， 弃去该步骤的洗脱液， 再用氯仿 - 甲醇 100 1、 50 1、 10 1、 5 1 的梯度进行洗脱， 每次洗脱用量为 3-5 柱体积， HPLC 跟踪监测， 收集含量高于 65的 目标流分， 浓缩干燥洗脱液成黄色粉末 ； 0039 c. 将上述黄色粉末加入乙酸乙酯饱和溶解， 抽滤结晶， 重结晶 3 次， 得到纯度为 96的酸模素 ； 0040 d. 将上述结晶产物用乙酸乙酯饱和溶解至有微量晶体析出， 冷却到 45-5， 再置 于超临界 CO2。
14、结晶釜中， 结晶压力控制在 14MPa， 进行超临界抗溶剂结晶 40 分钟 ； 0041 e. 结束后， 取样检测， 可得到含量 99以上高纯度酸模素 11.7g。 0042 实施例 3 ： 0043 a.称取2kg齿果酸模粉碎成粗粉， 投入超声提取罐中， 按照质量比18的比例加 入甲醇溶液， 于功率为 50W 超声提取 1 小时， 提取 3 次， 过滤， 合并滤液 ； 0044 b.将滤液浓缩成浸膏， 用LSA-5B大孔吸附树脂层析柱吸附， 吸附速度4ml/min， 用 4BV去离子水冲洗层析柱， 弃去该步骤的洗脱液， 再用氯仿-乙酸乙酯201、 101、 51 的梯度进行洗脱， 每次洗脱用。
15、量为3-5柱体积， HPLC跟踪监测， 收集含量高于65的目标流 分， 浓缩干燥洗脱液成黄色粉末 ； 0045 c. 将上述黄色粉末加入乙酸乙酯饱和溶解， 抽滤结晶， 重结晶 2 次， 得到纯度为 96的酸模素 ； 0046 d. 将上述结晶产物用乙酸乙酯饱和溶解至有微量晶体析出， 冷却到 45-5， 再置 于超临界 CO2结晶釜中， 结晶压力控制在 10MPa， 进行超临界抗溶剂结晶 65 分钟 ； 0047 e. 结束后， 取样检测， 可得到含量 99以上高纯度酸模素 2.4g。 0048 实施例 4 ： 0049 a.称取5kg羊蹄(药圃)根粉碎成粗粉， 装填入渗漉柱中， 向渗漉柱中加入。
16、3500ml 浓度百分比为90的乙醇溶液， 在40-5下浸泡45分钟使其充分渗透， 保温状态下开启渗 漉柱出口阀， 同时自渗漉柱顶部连续加入 90乙醇溶液， 控制流速在 12ml/min， 直至收集 到 20L 渗漉提取液 ； 0050 b.将提取液浓缩成浸膏， 用LSA-20大孔吸附树脂层析柱吸附， 吸附速度5ml/min， 用4BV去离子水冲洗层析柱， 弃去该步骤的洗脱液， 再用8BV乙酸乙酯-甲醇(13)洗脱， HPLC 跟踪监测， 收集含量高于 65的目标流分， 浓缩干燥洗脱液成黄色粉末 ； 0051 c. 将上述黄色粉末加入乙酸乙酯饱和溶解， 抽滤结晶， 重结晶 3 次， 得到纯度为。
17、 96以上的酸模素 ； 0052 d. 将上述结晶产物用乙酸乙酯饱和溶解至有微量晶体析出， 冷却到 45-5， 再置 于超临界 CO2结晶釜中， 结晶压力控制在 13MPa， 进行超临界抗溶剂结晶 90 分钟 ； 0053 e. 结束后， 取样检测， 可得到含量 99.3以上高纯度酸模素 17.2g。 0054 实施例 5 ： 0055 a. 称取 8kg 金不换根粉碎成粗粉， 按照质量比 1 5 的比例， 加入甲醇溶液， 加热 说 明 书 CN 101967088 A4/4 页 6 回流提取 3 次， 每次 2 小时， 过滤， 合并滤液 ； 0056 b. 将滤液浓缩成浸膏， 用 XSD-1。
18、 大孔吸附树脂层析柱吸附， 吸附速度 3ml/min， 用 3BV 去离子水冲洗层析柱， 弃去该步骤的洗脱液， 再用氯仿 - 乙酸乙酯 15 1、 10 1、 5 1、 1 1 的梯度进行洗脱， 每次洗脱用量为 3-5 柱体积， HPLC 跟踪监测， 收集含量高于 65的目标流分， 浓缩干燥洗脱液成黄色粉末 ； 0057 c. 将上述黄色粉末加入乙酸乙酯饱和溶解， 抽滤结晶， 重结晶 3 次， 得到纯度为 96以上的酸模素 ； 0058 d. 将上述结晶产物用乙酸乙酯饱和溶解至有微量晶体析出， 冷却到 45-5， 再置 于超临界 CO2结晶釜中， 结晶压力控制在 10MPa， 进行超临界抗溶剂结晶 55 分钟 ； 0059 e. 结束后， 取样检测， 可得到含量 99以上高纯度酸模素 9.8g。 说 明 书 。