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1、(10)授权公告号 CN 102557912 B (45)授权公告日 2015.01.07 CN 102557912 B (21)申请号 201110462813.9 (22)申请日 2011.12.31 C07C 50/28(2006.01) C07C 46/10(2006.01) (73)专利权人 内蒙古金达威药业有限公司 地址 010206 内蒙古自治区呼和浩特市托县 工业园区 专利权人 厦门金达威集团股份有限公司 (72)发明人 吴轶 王炳荣 詹光煌 付志杰 张斌 高志伟 (74)专利代理机构 呼和浩特北方科力专利代理 有限公司 15100 代理人 王社 CN 1608136 A,20。
2、05.04.20, 说明书第 5-19 页 . 李聚海等 . 皂化法提取胞内辅酶 Q10 的研 究 .农产品加工学刊 .2007,( 第 3 期 ), 第 14-17 页 . 刘玲等 . 不同提取方法从热带假丝酵母 中提取辅酶 Q10 的比较研究 .食品研究与开 发 .2008, 第 29 卷 ( 第 3 期 ), 第 42-44 页 . (54) 发明名称 一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法 (57) 摘要 本发明公开一种辅酶 Q10 提取液的皂化方 法， 工艺过程是辅酶 Q10 提取液与碱液按一定比 例进入静态混合器充分混合皂化后， 经过离心机 分离， 使有机相和废碱液相分开， 有机相再与。
3、水按 一定比例进入另一静态混合器充分混合水洗， 经 过另一台离心机分离， 使有机相和废水相分开， 所 得有机相即为皂化后的辅酶 Q10 提取液。皂化后 的提取液杂质含量较皂化前明显减少， 浓缩物的 辅酶 Q10 含量显著提高， 有效提高后续层析提纯 的收率、 层析填料的使用次数和产品的质量。 本方 法可实现连续生产， 设备利用率高、 占地面积小， 皂化损失少、 收率高， 并有效防止原搅拌工艺存在 易乳化的问题， 避免引入破乳剂造成最终产品会 有破乳剂残留的问题。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李虎强 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国。
4、家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102557912 B CN 102557912 B 1/1 页 2 1. 一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法， 其特征在于 ： 往辅酶 Q10 菌粉加入 2 5 倍体积 的非极性有机溶剂， 所述非极性有机溶剂为石油醚、 戊烷、 正己烷、 庚烷、 辛烷中的一种， 在 10 50温度下搅拌 1 3 小时进行提取， 提取次数为 2 4 次， 过滤分离， 合并提取液， 将提取液与浓度为 0.5 5mol/L 的碱液按体积比为 1 4 1 的进料速度进入静态混合 器I充分混合皂化， 碱为氢氧化钠、 氢氧化钾。
5、、 碳酸钠、 碳酸氢钠中的一种， 皂化温度为10 50， 经过离心机 I 分离， 使有机相和废碱液相分开， 有机相再与水按一定比例的进料速度 进入静态混合器 II 充分混合水洗， 经过离心机 II 分离， 使有机相和废水相分开， 所得有机 相即为皂化后的辅酶 Q10 提取液， 所述提取液与碱液、 有机相与水的进料速度采用计量泵 自动控制， 并向静态混合器连续输送。 2. 根据权利要求 1 所述的一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法， 其特征在于 ： 皂化时所述 提取液和碱液进料速度按体积比为 2 1。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 水洗时有机相和水进料速度按体积比为 1 。
6、4 1。 4.根据权利要求1所述的一种辅酶Q10提取液的皂化方法， 其特征在于 ： 离心机I和离 心机 II 采用蝶式离心机、 卧式螺旋离心机、 管式离心机中的一种， 离心转速 3000 转 / 分 钟， 离心操作在氮气保护下进行。 权 利 要 求 书 CN 102557912 B 2 1/4 页 3 一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法 技术领域 0001 本发明涉及一种皂化方法， 特别指一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法。 背景技术 0002 从发酵菌体中提取的辅酶Q10提取物， 除了含辅酶Q10外， 还包含大量的脂肪酸甘 油酯及各种游离脂肪酸等非水溶性物质。 这些物质难溶于水， 而易溶于有。
7、机溶剂， 从而影响 后续的纯化操作及产品的最终纯度， 因此有必要先把这些杂质除去。用皂化法可以将上述 杂质转移至水相， 而脂溶性的辅酶 Q10 留在有机相， 再将有机相水洗至中性， 除去其中溶于 水的物质和多余的碱， 这样后续的提纯过程就可以得到较纯的辅酶 Q10。 0003 目前， 皂化操作的一般工艺是往待皂化物中加入一定比例的碱醇溶液， 一定温度 下搅拌反应一段时间， 静置分层， 油层再加一定量的水进行搅拌水洗， 再静置分层， 最终得 到皂化后的辅酶 Q10 提取液。如中国专利申请号为 200710070806.8“产辅酶 Q10 新菌 株鞘氨醇单胞菌 ZUTE03 及其应用” 提到的皂化。
8、提取方法 ： 将湿菌体 2g 移入容器内， 加 入0.30.7g焦性没子酸， 12.5g KOH， 1020ml甲醇， 37ml蒸馏水， 混匀， 同时加入 正己烷3070ml， 在7090水浴锅中回流。 文献 “发酵菌体中辅酶Q10的提取及其测定 方法” ( 王根华， 钱和， 肖刚 . 无锡轻工大学学报 Vol.22 No.2 Mar.2003)，“皂化法分离测定 三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的研究” (吴品芳， 陆茂林， 陶文沂.生物技术Vol.16No.1 ： 45 Feb.2006)，“皂化法提取胞内辅酶 Q10 的研究” ( 李聚海， 岳田利， 袁亚宏 . 农产品加工 学 刊 第 3 。
9、期 ( 总第 94 期 )2007 年 3 月 ) 提到的皂化方法都是将菌体移入容器内， 加入焦性 没子酸、 KOH、 甲醇、 蒸馏水混匀， 加热回流一定时间， 用自来水迅速冷却至室温， 倒入分液漏 斗， 加入石油醚， 剧烈震荡萃取辅酶Q10。 以上方法能够达到皂化的目的， 但分层操作采用的 是自然沉降方法， 依靠的是两相密度不同来实现分离， 故存在以下缺点 ： (1) 属于间歇式操 作， 单批操作时间长， 工业化规模生产需要的反应罐数量多、 体积大、 设备利用率低 ； (2) 容 易产生乳化现象， 分层慢， 静置时间长， 废碱液夹带油层多造成辅酶 Q10 损失， 收率低 ； (3) 通常会加。
10、入一些破乳剂 ( 如上述专利采用甲醇 ) 来破乳， 常常会造成最终产品会有破乳剂 残留的问题 ； (4) 皂化温度高， 皂化时间长， 辅酶 Q10 长时间在高温的碱性条件下容易破坏。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供一种辅酶 Q10 提取液的皂化方法， 这种方法可克 服传统皂化方法无法连续自动化操作、 容易出现乳化或需要添加破乳剂等缺点。 0005 本发明要解决的的技术问题由如下方案来实现 ： 一种辅酶 Q10 提取液的皂化方 法， 其特征在于 ： 往辅酶 Q10 菌粉加入 2 5 倍体积的非极性有机溶剂， 所述非极性有机溶 剂为石油醚、 戊烷、 正己烷、 庚烷、 辛烷中的一种。
11、， 在 10 50温度下搅拌 1 3 小时进行 提取， 提取次数为 2 4 次， 过滤分离， 合并提取液， 将提取液与浓度为 0.5 5mol/L 的碱 液按一定比例的进料速度进入静态混合器 I 充分混合皂化， 碱为氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸 钠、 碳酸氢钠中的一种， 皂化温度为 10 50， 经过离心机 I 分离， 使有机相和废碱液相分 说 明 书 CN 102557912 B 3 2/4 页 4 开， 有机相再与水按一定比例的进料速度进入静态混合器 II 充分混合水洗， 经过离心机 II 分离， 使有机相和废水相分开， 所得有机相即为皂化后的辅酶 Q10 提取液， 可进入下一工序 操作。。
12、 0006 本发明还包括如下方案 ： 皂化时所述提取液和碱液进料速度比为141(体积 比 )。水洗时有机相和水进料速度比为 1 4 1( 体积比 )。离心机 I 和离心机 II 采用 蝶式离心机、 卧式螺旋离心机、 管式离心机中的一种， 离心转速 3000 转 / 分钟， 离心操作 在氮气保护下进行。 0007 根据本发明， 所述的非极性有机溶剂包括石油醚、 戊烷、 正己烷、 庚烷、 辛烷等， 优 选正己烷和石油醚， 最优选正己烷 ； 0008 根据本发明， 皂化反应涉及的提取液和碱液进料速度比例为 1 1 4 1( 体积 比 )， 优选 2/1， 进料速度控制采用流量计来实现 ； 0009 。
13、根据本发明， 皂化反应温度控制在 10 50； 优选 20 30， 最优选 25； 温度 控制是通过提取液和碱液预先加热来实现的， 提取液和碱液的加热方式可采用夹套加热或 管道加热器加热的方法 ； 0010 根据本发明， 碱液配制所用的碱可以是氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠中 的一种， 优选氢氧化钠或氢氧化钾 ； 0011 根据本发明， 碱液浓度控制在 0.5 5mol/L， 优选 1.5 2mol/L ； 0012 根据本发明， 皂化反应和水洗操作是通过静态混合器来实现的， 提取液和碱液 ( 或水 ) 同时分别用计量泵向静态混合器连续输送， 从而达到连续充分混合的目的 ； 001。
14、3 根据本发明， 所用的离心机选择防爆离心机， 为进一步增加操作的安全性， 离心机 增加氮气保护装置， 所有离心操作在氮气保护下进行。 0014 本发明的优点 ： 0015 (1) 实现连续自动化皂化操作， 提高设备利用率， 减少设备占地面积， 减轻员工劳 动强度 ； 0016 (2) 反应时间短、 分离速度快， 避免 Q10 长时间在碱性条件作用下造成破坏 ； 0017 (3) 采用高速离心分离油水两相， 分离效果好， 有效防止废碱液和废水相夹带油层 现象， 皂化损失少、 收率高 ； 0018 (4) 未添加任何破乳剂， 产品无破乳剂残留的危险 ； 0019 (5) 皂化后的提取液杂质含量较。
15、皂化前明显减少， 浓缩物的辅酶 Q10 含量显著提 高， 有效提高后续层析提纯的收率、 层析填料的使用次数和产品的质量。 附图说明 0020 图 1 是本发明的工艺流程示意图。 具体实施方式 0021 下面结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是本领域技术人员将会理 解， 下面的实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限定本发明的范围。 实施例中未注明具体 条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为 可以通过市购获得的常规产品。 说 明 书 CN 102557912 B 4 3/4 页 5 0022 实施例 1 0023 取 1000Kg 辅酶 。
16、Q10 菌粉， 加 4000L 正己烷 30下分三次提取， 过滤分离， 合并提 取液， 共 3400L， 测得提取液的辅酶 Q10 含量为 8.03mg/ml， 提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量 为 42.34。提取液和 NaOH 溶液 (1.5mol/L) 分别以 1m3/h 和 0.5m3/h 的流速同时进入静 态混合器 I 进行皂化， 经过静态混合器 I 后的混合液， 进入碟式离心机 I 离心分离 ( 离心转 速 8000r/min)， 得到轻组分 ( 有机相 )3310L， 有机相和水再分别以 1m3/h 和 0.5m3/h 的流速 同时进入静态混合器 II 进行水洗， 经过静态混合器。
17、 II 后的混合液， 进入碟式离心机 II 离 心分离 ( 离心转速 8000r/min)， 得到轻组分 ( 有机相， 即皂化后的提取液 )3300L， 测得皂化 后的提取液的辅酶 Q10 含量为 8.12mg/ml， 浓缩物的辅酶 Q10 含量为 57.38， 皂化收率为 98.15， 皂化后提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量提高 15.04。 0024 实施例 2 0025 取 1000Kg 辅酶 Q10 菌粉， 加 4000L 正己烷 30下分三次提取， 过滤分离， 合并提 取液， 共 3380L， 测得提取液的辅酶 Q10 含量为 8.13mg/ml， 提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量为。
18、 42.88。 提取液的皂化和水洗方法除采用KOH替代NaOH外， 其它条件均同实施例1， 最后得 到皂化后的提取液3290L， 测得皂化后的提取液辅酶Q10含量8.24mg/ml， 浓缩物的辅酶Q10 含量 58.93， 皂化收率为 98.65， 皂化后提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量提高 16.05。 0026 实施例 3 0027 取 1000Kg 辅酶 Q10 菌粉， 加 4000L 正己烷 30下分三次提取， 过滤分离， 合并提 取液， 共 3410L， 测得提取液的辅酶 Q10 含量为 8.09mg/ml， 提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量为 41.75。 提取液和NaOH溶液(1。
19、.5mol/L)分别以2m3/h和1m3/h的流速同时进入静态混合器 1 进行皂化， 经过静态混合器 I 后的混合液， 进入碟式离心机 I 离心分离 ( 离心转速 8000r/ min)， 得到轻组分 ( 有机相 )3310L， 有机相和水再分别以 2m3/h 和 1m3/h 的流速同时进入静 态混合器 II 进行水洗， 经过静态混合器 II 后的混合液， 进入碟式离心机 II 离心分离 ( 离 心转速8000r/min)， 得到轻组分(有机相， 即皂化后的提取液)3320L， 测得皂化后的提取液 的辅酶 Q10 含量为 8.21mg/ml， 浓缩物的辅酶 Q10 含量为 58.25， 皂化收。
20、率为 98.80， 皂 化后提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量提高 16.50。 0028 对照例 1 0029 取 1000Kg 辅酶 Q10 菌粉， 加 4000L 正己烷 30下分三次提取， 过滤分离， 合并提 取液， 共 3420L， 测得提取液的辅酶 Q10 含量为 8.22mg/ml， 提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量为 42.63。 将提取液泵入搅拌罐， 再泵入1700LNaOH溶液(1.5mol/L)， 搅拌30min， 静置2h， 分 去下层废碱液， 再加入 1700L 水， 搅拌 5min， 静置 2h， 分去下层废水相， 得到有机相 ( 即皂化 后的提取液 )3200L， 。
21、测得皂化后的提取液的辅酶 Q10 含量为 8.30mg/ml， 浓缩物的辅酶 Q10 含量为 58.14， 皂化收率为 94.48， 皂化后提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量提高 15.51。 0030 对照例 2 0031 取 1000Kg 辅酶 Q10 菌粉， 加 4000L 正己烷 30下分三次提取， 过滤分离， 合并提 取液， 共 3400L， 测得提取液的辅酶 Q10 含量为 8.18mg/ml， 提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量为 42.03。 将提取液泵入搅拌罐， 再泵入1700L NaOH溶液(1.5mol/L)和850L 95乙醇， 搅 拌 30min， 静置 2h， 分去下层废碱液， 再加入 1700L 水， 搅拌 5min， 静置 2h， 分去下层废水相， 得到有机相 ( 即皂化后的提取液 )3250L， 测得皂化后的提取液的辅酶 Q10 含量为 8.27mg/ 说 明 书 CN 102557912 B 5 4/4 页 6 ml， 浓缩物的辅酶 Q10 含量为 58.20， 皂化收率为 96.64， 皂化后提取液浓缩物的辅酶 Q10 含量提高 16.17。 说 明 书 CN 102557912 B 6 1/1 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 102557912 B 7 。