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1、(10)申请公布号 CN 102935090 A (43)申请公布日 2013.02.20 CN 102935090 A *CN102935090A* (21)申请号 201210529536.3 (22)申请日 2012.04.28 201210132519.6 2012.04.28 A61K 35/56(2006.01) A61P 19/06(2006.01) (71)申请人 上海中医药大学 地址 201203 上海市浦东新区张江高科技园 区蔡伦路 1200 号 (72)发明人 李医明 郭夫江 张刘强 (74)专利代理机构 上海海颂知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 31258 代理人。
2、 何葆芳 (54) 发明名称 一种富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途 (57) 摘要 本发明公开了一种富含三萜类皂苷元的海参 提取物的用途。所述的海参提取物中含三萜类皂 苷元的质量百分比达 50% 以上， 所述提取物可作 为活性成分用于制备预防和 / 或治疗高尿酸血症 的药物制剂。药理试验证明本发明所述的富含三 萜类皂苷元的海参提取物， 在体内具有较强的降 尿酸作用， 可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤 氧化酶的活性， 且由于水解掉了皂苷的糖配基， 不 再具有表面活性特性， 因此也显著降低了细胞毒 性， 具有药用前景。 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 。
3、6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途， 所述提取物中含三萜类皂苷元的质量 百分比达50%以上， 其特征在于 ： 以所述提取物作为活性成分用于制备预防和/或治疗高尿 酸血症的药物制剂。 权 利 要 求 书 CN 102935090 A 2 1/6 页 3 一种富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途 技术领域 0001 本发明涉及一种海参提取物的用途， 具体说， 是涉及一种含三萜类皂苷元的质量 百分比达 50% 以上的海参提取物的用途， 属于中药技术领域。 背景技术 0002。
4、 海参为棘皮动物门 （Echinodermata） 海参纲 （Holothuroidea） 动物， 全世界共有 1100 余种， 其中 40 多种可以食用。因 “其性温补， 足胜人参” 而得名。海参味美可口， 营养 丰富， 有较高的药用价值。明代以后， 收入 本草纲目 ， 列为补益类药。 0003 海参皂苷是海参的主要次生代谢产物， 也是其化学防御的物质基础。从上世纪 四五十年代日本科学家 Nigrelli 和 Yamanouchi 分离出两个三萜皂苷开始， 迄今已有 100 余种三萜皂苷被分离鉴定， 他们有抗真菌、 抗病毒、 抗放射、 免疫调节、 降脂、 降尿酸等 多种药理活性。但韩玉谦等人。
5、研究报道 【 “海参皂甙的研究进展” ， 天然产物研究与开发， 2005,17(5):669-672】 ： 海参皂苷在体内外有细胞毒性， 其原因是海参皂苷具有表面活性剂 的特征， 会对细胞产生溶血性。 发明内容 0004 针对现有技术存在的上述问题， 本发明的目的是提供一种富含三萜类皂苷元的海 参提取物的用途， 实现海参提取物在保健品和药品中的广泛应用。 0005 本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其特征在于 ： 所述提取物中含三 萜类皂苷元的质量百分比达 50% 以上。 0006 一种所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途， 是以其作为活性成分用于制 备预防和 / 或治疗高尿酸血。
6、症的药物制剂。 0007 所述的药物制剂形式是任何可药用的口服剂型或注射剂， 包括 ： 片剂、 糖衣片剂、 薄膜衣片剂、 肠溶衣片剂、 胶囊剂、 硬胶囊剂、 软胶囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸 剂、 散剂、 注射液、 粉针剂等。 0008 一种所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法， 其特征在于， 包括如下 步骤 ： 0009 a) 用乙醇水溶液对海参原料进行提取 ； 0010 b) 减压浓缩干提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0011 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液洗脱， 收 集用体积浓度为 70。
7、% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份 ； 0012 d) 减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏， 用酸水解所得浸膏 ； 0013 e) 用有机溶剂萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的有机溶剂， 然后干燥， 得到的固 体粉末即为所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物。 0014 所述的海参原料可以为刺海参、 海地瓜或北极刺参。 0015 作为一种优选方案， 用于提取的乙醇水溶液的体积百分比浓度为 20% 70% ； 每次 说 明 书 CN 102935090 A 3 2/6 页 4 提取时， 1 克海参原料所用乙醇水溶液的体积为 5 50 毫升。 0016 作为进一步优选方案， 所述提取为浸渍提取或回流提取，。
8、 共提取 1 3 次。 0017 作为一种优选方案， 用于洗脱的 70% 的乙醇水溶液的体积为柱体积的 310 倍。 0018 作为一种优选方案， 步骤 d) 中用于水解的酸是质量百分比浓度为 1% 5% 的硫酸 或盐酸水溶液。 0019 作为进一步优选方案， 进行酸水解的条件是加热水解或加热加压水解。 0020 作为一种优选方案， 步骤 e) 中用于萃取水解液的有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲 烷。 0021 药理试验证明 ： 含三萜类皂苷元的质量百分比达 50% 以上的海参提取物在体内具 有较强的降尿酸作用， 可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤氧化酶的活性， 且由于水解掉 了皂苷的糖配基， 不再具。
9、有表面活性特性， 因此也显著降低了细胞毒性 ； 可望开发成预防和 / 或治疗高尿酸血症的药物制剂， 具有药用前景。 具体实施方式 0022 下面结合实施例对本发明作进一步详细、 完整地说明， 但并不因此限制本发明 ； 本 领域的技术人员根据下述内容所作的一些非本质的改进或替换均属于本发明的保护范围。 0023 下述实施例是参照文献 ：“海峡预防医学杂志， 2008， 14（3） ， 46 47 ： 分光光度法 测定灵芝孢子粉中总三萜含量” 中所述方法进行三萜类皂苷元含量的测定。 0024 实施例 1 0025 a) 用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液对切片刺海参进行浸渍提取 ： 浸渍温度为 6。
10、5， 每次浸渍时 1 克刺海参用 70% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次浸渍时间为 12 小时， 共浸 渍提取 3 次 ； 0026 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0027 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0028 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 1% 的硫酸水溶液， 加热煮沸水解 24 小时 ； 0029 e) 用乙酸乙酯萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯， 真空或。
11、冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 57%。 0030 实施例 2 0031 a)用体积浓度为50%的乙醇水溶液对切片刺海参进行回流提取 ： 每次提取时， 1克 刺海参用 50% 的乙醇水溶液 25 毫升 ； 每次回流时间为 5 小时， 共回流提取 3 次 ； 0032 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0033 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0034 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液。
12、进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 3% 的硫酸水溶液， 加热煮沸水解 10 小时 ； 0035 e) 用乙酸乙酯萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯， 真空或冷冻干燥， 得 说 明 书 CN 102935090 A 4 3/6 页 5 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 61%。 0036 实施例 3 0037 a) 用体积浓度为 60% 的乙醇水溶液对切片刺海参进行浸渍提取 ： 浸渍温度为 15， 每次浸渍时 1 克刺海参用 60% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次浸渍时间为 2。
13、4 小时， 共浸 渍提取 3 次 ； 0038 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0039 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0040 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的硫酸水溶液， 加热煮沸水解 4 小时 ； 0041 e) 用二氯甲烷萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷。
14、元的 质量百分比为 62%。 0042 实施例 4 0043 a)用体积浓度为60%的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取 ： 每次提取时， 1克 海地瓜用 60% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 2 小时， 共回流提取 3 次 ； 0044 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0045 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0046 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的盐酸。
15、水溶液， 于高压锅内， 120、 0.1MPa 下 水解 1 小时 ； 0047 e) 用乙酸乙酯萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 59%。 0048 实施例 5 0049 a)用体积浓度为70%的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取 ： 每次提取时， 1克 海地瓜用 70% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 1 小时， 共回流提取 3 次 ； 0050 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0051 c) 上大孔树脂。
16、柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0052 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的盐酸水溶液， 加热煮沸水解 3 小时 ； 0053 e) 用乙酸乙酯萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 55%。 0054 实施例 6 0055 a)用体积浓度为50%的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取 ： 每次提取时， 1克 说 。
17、明 书 CN 102935090 A 5 4/6 页 6 海地瓜用 50% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 2 小时， 共回流提取 3 次 ； 0056 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0057 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0058 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的盐酸水溶液， 加热煮沸水解 3 小时 ； 0059 e) 用乙酸乙酯萃取水解液， 减压浓缩干。
18、萃取液中的乙酸乙酯， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 53%。 0060 实施例 7 0061 a) 用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取 ： 每次提取时， 1 克北极刺参用 70% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 1 小时， 共回流提取 3 次 ； 0062 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0063 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0064 d) 。
19、收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 3% 的硫酸水溶液， 于高压锅内， 120、 0.1MPa 下 水解 1 小时 ； 0065 e) 用二氯甲烷萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 55%。 0066 实施例 8 0067 a) 用体积浓度为 60% 的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取 ： 每次提取时， 1 克北极刺参用 60% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 2 小时。
20、， 共回流提取 3 次 ； 0068 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0069 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0070 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的盐酸水溶液， 加热煮沸水解 3 小时 ； 0071 e) 用二氯甲烷萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量。
21、百分比为 54%。 0072 实施例 9 0073 a) 用体积浓度为 50% 的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取 ： 每次提取时， 1 克北极刺参用 50% 的乙醇水溶液 50 毫升 ； 每次回流时间为 4 小时， 共回流提取 3 次 ； 0074 b) 减压蒸馏除去提取液中的乙醇， 然后加适量水稀释浓缩液， 得粗提液 ； 0075 c) 上大孔树脂柱， 先用水洗脱到无色， 再用柱体积 310 倍量的体积浓度为 70% 的 乙醇水溶液洗脱 ； 0076 d) 收集用体积浓度为 70% 的乙醇水溶液进行洗脱的流份， 减压浓缩干所收集流份 说 明 书 CN 102935090 A 6 5/6。
22、 页 7 中的乙醇至浸膏， 加入质量百分比浓度为 5% 的盐酸水溶液， 加热煮沸水解 3 小时 ； 0077 e) 用二氯甲烷萃取水解液， 减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷， 真空或冷冻干燥， 得 到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物， 其中含三萜类皂苷元的 质量百分比为 54%。 0078 实施例 10 0079 应用黄嘌呤氧化酶活性测定方法， 测定各样品在体外对黄嘌呤氧化酶活性的影 响。 0080 通过酶动力学试验测试得知 ： 含三萜类皂苷元的质量百分比为 95% 的海参提取物 样品 （是经过对实施例3制备的海参提取物进一步应用硅胶柱层析纯化而得） 的半数抑制剂 量 （IC。
23、50） 为 5g/mL ； 含三萜类皂苷元的质量百分比为 53% 的海参提取物样品 ( 由实施例 6 获得 ) 的半数抑制剂量 （IC50） 为 25g/mL ； 说明本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参 提取物具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的显著作用。 0081 实施例 11 0082 制备两种小鼠高尿酸血症模型 ： 一种是利用尿酸生成的前体物质次黄嘌呤为模型 药物， 制备小鼠高尿酸血症模型 ； 另一种是利用尿酸酶 （此酶只在鼠类存在， 而人体中没有） 抑制剂氧嗪酸钾作为模型药物， 制备小鼠高尿酸血症模型 （此模型为国际公认的高尿酸血 症模型） ； 观察各用药组在体内的降尿酸作用， 具体结果见表 1。
24、 和表 2 所示。 0083 表 1 各用药组对次黄嘌呤造成的小鼠高尿酸血症模型的影响 0084 0085 0086 注 ： *P0.01vs 模型生理盐水组 0087 表 2 各用药组对氧嗪酸钾造成的小鼠高尿酸血症模型的影响 0088 说 明 书 CN 102935090 A 7 6/6 页 8 0089 注 ： *P0.05， *P0.01vs 模型生理盐水组 0090 综上所述可见 ： 本发明所提供的富含三萜类皂苷元的海参提取物在体内具有较强 的降尿酸作用， 可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤氧化酶的活性， 且由于水解掉了皂苷 的糖配基， 不再具有表面活性特性， 因此也显著降低了细胞毒性 ； 可望开发成预防和 / 或治 疗高尿酸血症的药物制剂， 具有药用前景。 说 明 书 CN 102935090 A 8 。