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1、10申请公布号CN104131072A43申请公布日20141105CN104131072A21申请号201410222978222申请日20140523C12Q1/6820060171申请人公安部物证鉴定中心地址100038北京市西城区木樨地南里17号72发明人李彩霞孙敬韩俊萍赵兴春刘鹏74专利代理机构北京同立钧成知识产权代理有限公司11205代理人刘芳54发明名称一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统57摘要本发明提供一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统，该方法包括提取未知检材DNA，获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座。
2、AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，所述STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述YSTR基因座为DYS448，所述Y染色体插入/缺失位点为M134；根据未知检材17个基因座的基因型进行个体识别和亲权鉴定。本发明还提供了对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的系统。本发明的方案能进行常染色体STR基因座和Y染色体基因座同时检测，并能缩短检测时间，提高了个体识别的效率。51INTCL权利要求书2页说明书11页序列表9页。
3、附图4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书11页序列表9页附图4页10申请公布号CN104131072ACN104131072A1/2页21一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法，其特征在于，该方法包括1提取未知检材的DNA；2获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、。
4、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；3根据未知检材17个基因座的基因型进行个体识别和亲权鉴定；其中2包括采用与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤，扩增过程中采用的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220S；72，3MIN；25，保温。2根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列。3根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，扩增过程中采用的扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物0。
5、2L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM。4根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中2还包括在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述17个基因座的基因型的步骤。5一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定系统，其特征在于，所述系统包括DNA提取体系，复合检测体系，以及推断体系；所述DNA提取体系用于提取未知检材的DNA；所述复合检测体系用于获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个。
6、基因座的分型结果，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；获得所述17个基因座的分型结果的过程包括采用与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤，扩增过程中采用的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220S；72，3MIN；25，保温；所述推断体系用于根据未知。
7、检材17个基因座的基因型进行个体识别和亲权鉴定。6根据权利要求5所述的系统，其特征在于，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列。7根据权利要求5或6所述的系统，其特征在于，扩增过程中采用的扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM。8根据权利要求5所述的系统，其特征在于，获得所述17个基因座的分型结果的过程包括中还包括在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述17个基因权利要求书C。
8、N104131072A2/2页3座的基因型的步骤。9一种复合检测体系，其特征在于，所述体系包括未知检材DNA，扩增引物，以及扩增体系，所述复合检测体系用于利用所述扩增引物和扩增体系扩增未知检材的DNA的17个基因座获得扩增产物，并由所述扩增产物获得未知检材的DNA的17个基因座的基因型；所述17个基因座为14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座和性别决定基因座AMELOGENIN，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、D18S5。
9、1、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；所述扩增引物由与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物组成，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列；所述扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM；扩增过程的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220S；72，3MIN；25，保温。10一种快速检测试剂盒，其特。
10、征在于，包括权利要求9所述的复合检测体系。权利要求书CN104131072A1/11页4一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统技术领域0001本发明涉及一种个体识别和亲权鉴定的方法和系统，尤其涉及一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统。背景技术0002STR分型技术由于具有特异性好，检测灵敏度高，能复合多位点扩增等优点，自20世纪90年代以来已成为第二代法医DNA分型技术的核心。然而现有的STR分型技术因受限于各种因素包括检材的状态，引物，扩增位点，扩增条件，使用的扩增体系等，仅PCR过程就耗时3个多小时，已有学者针对快速DNA聚合酶、快速热循环仪、微流控芯片技术等缩短PC。
11、R扩增时间进行了研究，但都没有获得理想的缩短检测时间的效果。伴随突发案事件的增多，现有检测体系无法满足公安实战对于法医DNA的快速检验和现场检验能力的要求。0003同时由于从法医案件例如性侵案件现场中提取的未知检材既有可能来自男性个体，也有可能来自女性个体，确定性别通常是案件侦察和侦破的必经程序，法医DNA的快速检验对于传统的只针对常染色体STR基因座检测试剂盒提出了更多的要求，即在对刑事案件现场DNA分型过程中需要在检测常染色体STR基因座同时对Y染色体基因座进行检测，以能提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率。0004如何实现常染色体STR基因座和Y染色体基因座的同时检测，以及缩短检测时间，从而提。
12、高个体识别的效率成为有待解决的问题。发明内容0005本发明提供了一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法，能快速获得未知检材包括14个常染色体STR基因座和2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，实现了常染色体STR基因座和Y染色体基因座的同时检测，并可用于对未知检材进行快速的个体识别和亲权鉴定。0006本发明还提供一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定系统，通过该体系可以实现对未知来源个体针对上述17个基因座的快速、准确分型，从而对未知检材进行高效的个体识别和亲权鉴定。0007本发明还提供了一种复合检测体系，所述检测体系能快速获得未知检材包括1。
13、4个常染色体STR基因座和2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果。0008本发明还提供了一种快速检测试剂盒，包括所述的复合检测体系。0009本发明提供的一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法，该方法包括00101提取未知检材的DNA；00112获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PEN。
14、TA说明书CN104131072A2/11页5E、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；00123根据未知检材17个基因座的基因型进行个体识别和亲权鉴定；0013其中2包括采用与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤，扩增过程中采用的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220S；72，3MIN；25，保温。0014在本发明的方案中，所述17个基因座是申请人通过对中国人群的生活环境、种族起源等进行综合分析，考察各地区民族人口的表型特。
15、征差异，包括外形特征，生理指标等，针对这些差异进行文献和网络数据库调研，在已有研究的基础上获得的能进行个体识别和亲权鉴定的特异性基因座的组合。所述未知检材可以为来自人体的血样、脱落细胞、骨头、牙齿、精斑和口腔拭子等样本，这些样本的个体来源未知。0015进一步的，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列。0016在本发明的一个具体实施方式中，扩增过程中采用的扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM。。
16、0017在本发明的另一个具体实施方式中，其中2还包括在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述17个基因座的基因型的步骤。在本发明的方案中，所述遗传分析仪可以是本领域技术人员常规使用的遗传分析仪，例如ABI3130或ABI3500型遗传分析仪，通过软件或其他GENEMAPPER软件等分析该PCR扩增产物中所述17个基因座的基因型。0018本发明一种对未知检材进行个体识别和亲权鉴定系统，所述系统包括DNA提取体系，复合检测体系，以及推断体系；0019所述DNA提取体系用于提取未知检材的DNA；0020所述复合检测体系用于获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基。
17、因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；获得所述17个基因座的分型结果的过程包括采用与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤，扩增过程中采用的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220。
18、S；72，3MIN；25，保温；0021所述推断体系用于根据未知检材17个基因座的基因型进行个体识别和亲权鉴定。0022进一步的，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列。0023在本发明的一个具体实施方式中，扩增过程中采用的扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM。0024更进一步的，获得所述17个基因座的分型结果的过程包括中还包括在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述17个。
19、基因座的基因型的步骤。说明书CN104131072A3/11页60025本发明提供的一种复合检测体系，所述体系包括未知检材DNA，扩增引物，以及扩增体系，0026所述复合检测体系用于利用所述扩增引物和扩增体系扩增未知检材的DNA的17个基因座获得扩增产物，并由所述扩增产物获得未知检材的DNA的17个基因座的基因型；0027所述17个基因座为14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座和性别决定基因座AMELOGENIN，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTA。
20、E、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；0028所述扩增引物由与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物组成，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列；0029所述扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM；0030扩增过程的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220。
21、S；72，3MIN；25，保温。0031在本发明的方案中，所述DNA聚合酶可以是FASTSTARTDNA聚合酶、TAQDNA聚合酶、HOTSTARTDNA聚合酶中的一种或多种。0032本发明还提供了一种快速检测试剂盒，包括所述的复合检测体系。0033在本发明的方案中，本发明利用所述复合检测体系进行17个基因座的分型的方法，包括1将提取的未知检材DNA作为模板；2使用所述扩增引物利用上述扩增体系，在所述热循环参数下对作为模板的未知检材DNA进行多重PCR扩增反应以得到扩增产物；3将所述扩增产物利用遗传分析仪进行分析，以获得17个基因座的分型结果。0034在本发明的方案中，所述17个基因座信息如表。
22、1所示0035表10036基因座等位基因范围PCR产物长度/BP荧光标记物D6S10439213102153FAMD21S112537103259FAMD7S820714246282FAMCSF1PO615292328FAMD2S13381528346398FAMD3S13581220107141HEXD13S317814152183HEX说明书CN104131072A4/11页7D8S1179718193241HEXD16S539514245285HEXPENTAE524305405HEXD5S818714122158TAMRAVWA1321165221TAMRAD18S5110262266。
23、30TAMRAFGA1730332400TAMRAM1348890FAMDYS4481724410452FAMAMELOGENINX,Y104110TAMRA0037本发明提供的优选扩增引物序列如下。所述17对扩增引物及其相对应的基因座如下表2所示，PCRU代表上游引物，PCRL代表下游引物；0038表20039说明书CN104131072A5/11页80040说明书CN104131072A6/11页90041发明人通过比较各样本的检出率、等位基因丢失率和非特异扩增情况，检验结果表明本发明的方法和系统具有结果一致性、检测灵敏度、案例样本适应性。0042本发明方案具有以下的优点00431、本发明。
24、提供的对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的方法和系统中，优化了获得未知检材DNA扩增体系，使得可在1小时左右完成PCR扩增，与3小时左右的常规检测系统相比，显著缩短了PCR时间，从而使得对未知检材进行个体来源和亲权鉴定的检测过程时间大大缩短。00442、本申请人经过添加Y染色体插入/缺失位点M134以及YSTR基因座DYS448作为性别鉴定的补充位点，由于M134位点扩增片段较短，适合于降解DNA的检验，DYS448除了可以作为性别鉴定的补充，还可与常规YSTR检验的结果进行比对，这使得本申请提供的方法和系统无论对于正常状态下的DNA，还是降解DNA都能同时进行常染色体STR基因座和对Y染色体基。
25、因座的检测。00453、虽然本发明方法和系统扩增时间由以前的三小时缩短到了1小时左右，但分型结果依然非常准确稳定，对于DNA浓度大于05NG/L以上的检材，检出率即可达100。00464、通过对猪、羊、鼠、兔的DNA检测，证明本文方法具有良好的种属特异性，并且通过对各类常见中国人体生物学样本包括血样、脱落细胞、骨头、牙齿、精斑和口腔拭子等均能得到较好的DNA分型结果，表明其具有广泛的案例样本适用性。附图说明0047图1采用本发明方法和系统得到的17个基因座的分型图谱。图1中YSTR基因座为DYS448，所述Y染色体插入/缺失位点YDIP为M134。0048图2采用DNATYPER15试剂盒得到。
26、的15个基因座的分型图谱。0049图3显示了使用本发明方法和系统获得的男性血样本的分型图谱。图3中YSTR基因座为DYS448，所述Y染色体插入/缺失位点YDIP为M134。0050图4显示了使用本发明方法和系统获得的女性血样本的分型图谱。0051图5显示了本发明方法和系统的灵敏度检测结果。0052图6显示了本发明方法和系统的种属特异性检测结果。具体实施方式0053以下实施例中使用的120份人新鲜抗凝血男性60份，女性60份，收集于北京市中关村社区医院；0054猪、羊、鼠、兔的DNA各2份，由公安部物证鉴定中心提供；005530例实际案例样本血斑9例、脱落细胞7例、骨头4例、牙齿5例、精斑1例。
27、、口腔拭子4例，由公安部物证鉴定中心提供。0056以下实施例中使用的方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂耗材和仪器如下说明书CN104131072A7/11页10表所示0057FASTSTARTDNA聚合酶QIAGEN公司DNTP混合物TAKARA公司PCR缓冲液贝克曼公司DNA聚合酶DNAPOLYMERASE贝克曼公司MASTERCYCLERNEXUSPCR扩增仪EPPENDORFABI3130XL型遗传分析仪ABIQIAAMPDNABLOODMIDI试剂盒QIAGEN公司NANODROP2000CSPECTROPHOTOMETERTHERMO公司0058实施例1、对本发明的对未知检材进行。
28、个体识别和亲权鉴定的方法和系统准确性的验证0059在本实施例中，所述未知检材为120份人新鲜抗凝血男性60份，女性60份，这些检材为申请人从北京市中关村社区医院收集的样本，已知其个体来源，但在本申请实施例1的实施过程中设定其个体来源未知，采用本申请方法和系统对其进行个体识别和亲权鉴定，包括00601利用本发明的系统中的DNA提取体系提取未知检材的DNA，2利用本发明的系统中的复合检测体系获得所述DNA包括14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座，以及性别决定基因座AMELOGENIN在内共17个基因座的分型结果，3利用本发明的系统中所述推断体系，根据未知检材17个基因座的基因型进行个体识。
29、别和亲权鉴定。0061本实施例中，所述复合检测体系包括检材DNA，扩增引物，以及扩增体系，所述复合检测体系用于利用所述扩增引物和扩增体系扩增未知检材的DNA的17个基因座获得扩增产物，并由所述扩增产物获得未知检材的DNA的17个基因座的基因型；所述17个基因座为14个常染色体STR基因座、2个Y染色体基因座和性别决定基因座AMELOGENIN，所述常染色体STR基因座为D6S1043、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、D13S317、D8S1179、D16S539、PENTAE、D5S818、VWA、D18S51、FGA，所述2个Y染色体基因座为Y染色体。
30、插入/缺失位点M134和YSTR基因座DYS448；0062所述扩增引物由与所述17个基因座一一对应的17对扩增引物组成，所述扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列；0063所述扩增体系为10缓冲液1L，DNTP混合物02L，25MM的MGCL204L，扩增引物2L，DNA聚合酶02L，作为模板的未知检材DNA1NG，灭菌水52L，其中，所述DNTP混合物中每种DNTP的浓度为10MM；0064扩增过程的热循环参数为95，4MIN；2830个循环，每个循环9520S，5920S，7220S；72，3MIN；25，保温。说明书CN104131072A108/11页11。
31、00651、提取待检测的120样本的DNA作为模板0066采用QIAAMPDNABLOODMIDI试剂盒QIAGEN公司，德国分别提取上述120样本的DNA，使用NANODROP2000CSPECTROPHOTOMETERTHERMO公司，美国进行定量。提取DNA步骤和定量步骤按照试剂盒说明书进行。00672、利用所述复合检测体系进行17个基因座的分型，包括将提取的未知检材DNA作为模板；使用所述扩增引物利用上述扩增体系在所述热循环参数下对提取的DNA模板进行多重PCR扩增反应，以获得扩增产物；将扩增产物利用遗传分析仪确定17个基因座的分型结果。具体过程如下006821、引物池配置0069扩增。
32、引物池的配置，其中所述扩增引物中为所述17个基因座一一对应的17对扩增引物，本实施例中，优选的，所述17个基因座的扩增引物为序列表中SEQIDNO1至SEQIDNO34的核苷酸序列；本发明提供的各种引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。0070将合成好的引物用去离子水稀释到240M，从34管PCR引物中浓度为240M各取5L加入到一个新的离心管中，作为17重PCR引物池，引物终浓度约为25M。007122、多重PCR反应0072本实施例使用EPPENDORFMASTERCYCLERNEXUSPCR扩增仪进行多重PCR反应。00731配置PCRMIX007400752扩增程序说明书CN。
33、104131072A119/11页1200760077007823、PCR产物分型0079取1LPCR产物与95L甲酰胺、TYPER500内标混匀，953MIN后立即冰浴5MIN。对扩增产物采用ABI3130XL型遗传分析仪通过软件进行分析，获得所述17个基因座的基因型。008024、为了验证分型结果的准确性，从120份DNA样品中随机抽取50份DNA样品，对17个基因座进行测序北京迈奥德恩生物科技有限公司测序，采用本实施例的复合检测体系获得的所有的分型结果与测序结果均一致，一致性达到100，此结果证本发明复合检测体系分型结果的准确。00813、根据所述未知检材17个基因座的基因型进行个体识别。
34、和亲权鉴定。由本实施例方法获得的上述120份检材的个体来源和亲权鉴定结果，与其已知的个体来源和亲权鉴定结果一致，说明本发明方法可以进行未知检材个体识别和亲权鉴定。0082实施例2本发明的对未知检材进行个体识别和亲权鉴定的系统与现有个体识别用的试剂盒的比较0083将实施例1的120份DNA样品用本申请的系统进行17个基因座的分型分型过程同实施例1，不同之处在于扩增过程的循环数为28，同时采用现有的DNATYPER15TM试剂盒即常规检测系统对上述样品常染色体基因座进行分型采用该试剂盒本身参数,将该分型结果作为常染色体基因座的阳性对照，YLERTM试剂盒对Y染色体基因座进行分型采用该试剂盒本身参数。
35、,将该分型结果作为Y染色体基因座的阳性对照，另外设置空白试剂为阴性对照，平行重复3次。0084本发明的系统所得DNA分型图谱与DNATYPER15TM试剂盒PCR扩增所得分型结果比对，14个常染色体STR基因座除AMELOGENIN分型正确且各等位基因峰高大于50RFUS，为有效分型，如图1采用本发明方法和系统得到的17个基因座的分型图谱和图2采用DNATYPER15试剂盒得到的15个基因座的分型图谱所示。0085将本发明的系统，与常规DNATYPER15TM和YLERTM试剂盒相比，在相同基因座上获得的DNA检测结果一致，检出率均达100，结果见表3，各组实验重复结果按照同一基因座出现该峰2。
36、次以上的统计原则进行综合分析。分型效果分析指标采用“检出率”有效分型次数/重复次数、“等位基因丢失率”等位基因丢失条带数/预计等位基因条带数。结果表明本发明的系统具有较好的准确性和一致性，可以用于个体识别。说明书CN104131072A1210/11页130086表3120份血液样本的DNA检测结果00870088进一步的，在采用本发明的系统进行的17个基因座的分型结果中，男性样本在M134和DYS448基因座上有分型出现如图3所示，而女性样本在M134和DYS448基因座上则没有分型出现如图4所示。说明本发明的复合检测体系能同时进行常染色体STR基因座和对Y染色体基因座的检测，从而可以进行个。
37、体识别和亲权鉴定。0089实施例3本发明方法和系统结果的灵敏性0090分别取标准DNA样本2NG、1NG、075NG、05NG、025NG、0125NG，按本发明提供的方法进行扩增并检测，平行重复3次，结果如图5所示。0091结果见表4，可以看出本发明方法最佳DNA模板量在052NG之间，对于DNA浓度大于05NG/L以上的检材，检出率即可达100，该检测线略低于目前法医领域常用的STR检测试剂盒0125NG的检测水平，但1小时左右的扩增时间明显短于这些常规试剂盒，这些试剂盒通常需要3小时左右的扩增时间。0092表4灵敏度验证的DNA检测结果009300940095实施例4本发明方法和系统结果。
38、的种属特异性0096分别取猪、羊、鼠、兔的DNA按实施例1方法进行扩增并分型，平行重复3次。0097采用本发明方法对猪、羊、鼠、兔的DNA进行检验，结果仅有猪和羊在AMELOGENIN位点上分别检测出2个片段和1个片段，且均不在等位基因BIN上，其与人检测结果有明显区别，故不影响人样本的判型图6。AMELOGENIN基因位于X和Y染色体上，在脊椎动物的进化过程具有相对较高的保守性，在猪，羊等动物性别鉴定研究中都已有报道。可以看出本发明的方法和系统具有良好的种属特异性。0098实施例5本发明方法和系统结果的案例样本适用性009930例实际案例样本包括血样9例、脱落细胞7例、骨头4例、牙齿5例、精。
39、斑1例和口腔拭子4例经提取与定量后，采用本发明方法进行检测。0100血样、脱落细胞、骨头、牙齿、精斑和口腔拭子样本经提取与定量后，采用本文方法说明书CN104131072A1311/11页14检测，除1例精斑样本得到混合DNA分型外常规检测系统的检测结果也为混合分型，其他均可获得完整的单一DNA分型，且结果与DNATYPER15TM和YLERTM试剂盒相同位点常规PCR扩增的DNA检测结果一致，见表5。0101表5案例样本的DNA检测结果01020103本发明的方法和系统可在1小时5分钟内完成PCR扩增，与3小时左右的常规检测系统相比，显著缩短了检测时间，且对样本的适用性较强，可以满足快速检验。
40、的要求。M134位点作为性别鉴定的补充位点，由于其扩增片段较短，适合于降解DNA的检验，DYS448基因座除了可以作为性别鉴定的补充，还可与常规YSTR检验的结果进行比对。因此本发明的方法和系统可以用于对未知检材个体识别和亲权鉴定，并能显著缩短检测时间。说明书CN104131072A141/9页1500010002序列表CN104131072A152/9页160003序列表CN104131072A163/9页170004序列表CN104131072A174/9页180005序列表CN104131072A185/9页190006序列表CN104131072A196/9页200007序列表CN104131072A207/9页210008序列表CN104131072A218/9页220009序列表CN104131072A229/9页23序列表CN104131072A231/4页24图1图2说明书附图CN104131072A242/4页25图3图4说明书附图CN104131072A253/4页26图5说明书附图CN104131072A264/4页27图6说明书附图CN104131072A27。