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1、10申请公布号CN104046582A43申请公布日20140917CN104046582A21申请号201410245469122申请日20140604C12N1/20200601C12R1/3820060171申请人辽宁大学地址110000辽宁省沈阳市沈北新区道义南大街58号72发明人徐成斌王闻烨东天马溪平孟雪莲李鲜珠74专利代理机构沈阳杰克知识产权代理有限公司21207代理人杨乃力54发明名称一种富集耳炎假单胞菌的培养基57摘要本发明公开一种富集耳炎假单胞菌的培养基，包括基础培养基、葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素D；每1000ML基础培养基加入1050G葡萄糖、0105。
2、G碳酸氢钠、1050G的蛋白胨、0105G硝酸铵、00501G的酵母膏和00501G维生素D。用本发明的培养基培养富集耳炎假单胞菌，培养速度快，成本低。弥补了耳炎假单胞菌生长期过慢等方面的不足之处，提高了生长速率，使达到最大生长量的时间缩短了911个小时。51INTCL权利要求书1页说明书3页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页10申请公布号CN104046582ACN104046582A1/1页21一种富集耳炎假单胞菌的培养基，其特征在于，包括基础培养基、葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素D，每1000ML基础培养基加入葡萄糖。
3、1050G、碳酸氢钠0105G、蛋白胨1050G、硝酸铵0105G、酵母膏00501G和维生素D00501G。2根据权利要求1所述的富集耳炎假单胞菌的培养基，其特征在于每1000ML基础培养基加入葡萄糖30G、碳酸氢钠03G、蛋白胨30G、硝酸铵03G、酵母膏007G和维生素D007G。3一种利用权利要求1或2所述的培养基富集培养耳炎假单胞菌的方法，其特征在于将权利要求1或2所述的富集耳炎假单胞菌的培养基的PH调至7072，121灭菌30MIN，将耳炎假单胞菌按1的接种量接种于富集耳炎假单胞菌的培养基中，振荡混匀，在温度为30的恒温培养箱中培养。权利要求书CN104046582A1/3页3一种。
4、富集耳炎假单胞菌的培养基技术领域0001本发明涉及一种富集细菌的培养基，具体涉及一种富集耳炎假单胞菌的培养基。背景技术0002耳炎假单胞菌PSEUDOMONASOTITIDIS是在2006年鉴定出的新型假单胞菌属的菌株，该菌株第一次是从感染的人耳临床样本中分离得到的，一种致病力较低但抗药性强的杆菌。该菌株是一种条件致病菌，只在某种特定条件下才能致病。并且耳炎假单胞菌具有潜在工业运用的标志性特征，该菌株可用于水体净化，具有好氧反硝化的功能，营养需求简单，因此，应用前景十分广阔，耳炎假单胞菌可降解废水中的一些污染物质，因此又具有很高的研究和应用价值。耳炎假单胞菌的推广和应用，关键在于需要合适的培养。
5、基质，由于耳炎假单胞菌生长期过慢，目前采用的富集耳炎假单胞菌的培养基，其平均富集时间为2835D，周期均较长。发明内容0003为了解决现有技术存在的缺陷和不足，本发明提供一种富集耳炎假单胞菌的培养基，用本发明的培养基培养富集耳炎假单胞菌，培养速度快，成本低。弥补了耳炎假单胞菌生长期过慢等方面的不足之处，提高了生长速率，使达到最大生长量的时间缩短了911个小时。0004本发明所采用的技术方案为一种富集耳炎假单胞菌的培养基，包括基础培养基、葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素D，每1000ML基础培养基加入葡萄糖1050G、碳酸氢钠0105G、蛋白胨1050G、硝酸铵0105G、酵母膏。
6、00501G和维生素D00501G。0005优选的，每1000ML基础培养基加入葡萄糖30G、碳酸氢钠03G、蛋白胨30G、硝酸铵03G、酵母膏007G和维生素D007G。0006基础培养基是假单胞菌的常用培养基。可以选用现有技术中经常用的，并已公开的假单胞菌培养基。0007利用上述的培养基富集培养耳炎假单胞菌的方法将上述富集耳炎假单胞菌的培养基的PH调节至7072，121灭菌30MIN，将耳炎假单胞菌按1的接种量接种于富集耳炎假单胞菌的培养基中，振荡混匀，在温度为30的恒温培养箱中培养。0008葡萄糖对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着葡萄糖的浓度的增加而增大，经过20H的避光培养后，当葡萄糖的。
7、用量为30G/L时每1000ML基础培养基加入30G，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当葡萄糖的用量小于30G/L时，菌液OD600小于150。因此，葡萄糖的用量以30G/L为宜。0009碳酸氢钠对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着碳酸氢钠的浓度的增加而增大，经过20H的避光培养后，当碳酸氢钠的用量为03G/L时每1000ML基础培养基加入03G，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当碳酸氢钠的用量小于03G/L时，菌液OD600小于说明书CN104046582A2/3页4150。因此，碳酸氢钠的用量以03G/L为宜。0010蛋白胨对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着蛋白胨的浓度。
8、的增加而增加，经过20H的避光培养后，当蛋白胨的用量为30G/L每1000ML基础培养基加入30G时，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当蛋白胨的用量大于30G/L时，菌液OD600小于150。因此，蛋白胨以30G/L为宜。0011硝酸铵对耳炎假单胞菌的生长量的影响随着硝酸铵的浓度的增加而增大，经过20H的避光培养后，当硝酸铵的用量为03G/L时每1000ML基础培养基加入03G，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当硝酸铵的用量小于03G/L时，菌液OD600小于150。因此，硝酸铵的用量以03G/L为宜。0012酵母膏对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着酵母膏的浓度的增加而。
9、增加，经过20H的避光培养后，当酵母膏的用量为007G/L每1000ML基础培养基加入007G时，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当酵母膏的用量大于007G/L时，菌液OD600小于150。因此，酵母膏以007G/L为宜。0013维生素D对耳炎假单胞菌的生长量的影响，随着维生素D的浓度的增加而增加，经过20H的避光培养后，当维生素D的用量为007G/L每1000ML基础培养基加入007G时，其菌体繁殖速度很快，菌液OD600达150，当维生素D的用量大于007G/L时，菌液OD600小于150。因此，维生素D以007G/L为宜。0014本发明的有益效果是0015利用本发明的培养基富。
10、集培养耳炎假单胞菌的方法富集培养速度快，由于在基础培养基中加入了葡萄糖、碳酸氢钠、蛋白胨、硝酸铵、酵母膏和维生素D等营养成分，为微生物的生长不仅提供了碳源、氮源、能源，而且加入了作为生长因子的酵母膏和维生素D，从而为耳炎假单胞菌创造了一个更好的营养条件，使耳炎假单胞菌生长繁殖速度迅速提升，培养20H后，其OD600达到150左右。0016耳炎假单胞菌生长期延长，最大生长量提高。随着培养时间的增加，菌液OD600逐渐增加，培养20H时，其OD600为150，菌液生长量达最高峰，比使用基础培养基培养耳炎假单胞菌时的OD600有所提高，其生长量最大值提前了911小时，对其繁殖更有促进作用。附图说明0。
11、017图1是本发明与常规培养基，在培养基富集培养过程中，光密度OD600的变化图。0018图中，A代表常规培养基，B代表本发明富集耳炎假单胞菌的培养基。具体实施方式0019实施例10020一一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制0021基础培养基磷酸氢二钾38G、磷酸二氢钾10G、氯化钠10G、氯化铵01G、硫酸镁02G，蒸馏水1000ML。0022在上述基础培养基中，加入30G葡萄糖、03G碳酸氢钠、30G蛋白胨、03G硝酸铵、007G酵母膏和007G维生素D。0023二耳炎假单胞菌的培养说明书CN104046582A3/3页50024将上述培养基的PH调至70，121灭菌30MIN。将耳炎假单胞。
12、菌按1的接种量接种于培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中培养，温度30。0025富集培养结果恒温培养18H后，菌液OD600为140，恒温培养20H后，达到最大生长量，菌液OD600为150，使耳炎假单胞菌的最大生长量提前了10H。0026实施例20027一一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制0028基础培养基磷酸氢二钾38G、磷酸二氢钾10G、氯化钠10G、氯化铵01G、硫酸镁02G，蒸馏水1000ML。0029在上述基础培养基中，加入10G葡萄糖、01G碳酸氢钠、10G蛋白胨、01G硝酸铵、005G酵母膏和005G维生素D。0030二耳炎假单胞菌的培养0031将上述培养基的PH调至70，121。
13、灭菌30MIN。将耳炎假单胞菌按1的接种量接种于培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中培养，温度30。0032富集培养结果光照培养18H后，菌液OD600为130，避光培养21H后，达到最大生长量，菌液OD600为150，使鲍曼不动杆菌的最大生长量提前了9H。0033实施例30034一一种富集耳炎假单胞菌培养基的配制0035基础培养基磷酸氢二钾38G、磷酸二氢钾10G、氯化钠10G、氯化铵01G、硫酸镁02G，蒸馏水1000ML。0036在上述基础培养基中，加入50G葡萄糖、05G碳酸氢钠、50G蛋白胨、05G硝酸铵、01G酵母膏和01G维生素D。0037二耳炎假单胞菌的培养0038将上述培养基。
14、的PH调至70，121灭菌30MIN。将耳炎假单胞菌按1的接种量接种于培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中培养，温度30。0039富集培养结果避光培养20H后，达到最大生长量，菌液OD600为150，使耳炎假单胞菌的最大生长量提前了9H11H。0040对比例0041分别取实施例1中富集耳炎假单胞菌的培养基与已公开的实施例1中的基础培养基，分别调节培养基的PH为7，121灭菌30MIN。将耳炎假单胞菌按1的接种量分别接种于两种培养基中，振荡混匀，置于恒温培养箱中培养，温度30。避光培养40H，测定培养基富集培养过程中光密度OD600变化如图1所示。从图1中A可知，使用常规的基础培养基培养耳炎假单胞菌，30H左右时菌液OD600为0985；从图1中B可知，使用本发明培养基培养耳炎假单胞菌，随着培养时间的增加，菌液OD600逐渐增加，培养20H左右，其OD600为150，本发明的培养基使耳炎假单胞菌达到最大生长量的时间提前了9H11H，并且对其繁殖和快速培养更有促进作用。说明书CN104046582A1/1页6图1说明书附图CN104046582A。