一种女贞子多糖的制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种女贞子多糖的制备方法，尤其是一种利用压榨、Sevage法和超滤膜技术提取纯化女贞子多糖的方法。
背景技术
女贞子多糖是女贞子具有多种功效的物质基础之，现代药理研究表明女贞子多糖有抗氧化、抗衰老、增强免疫等功效，经鉴定主要由鼠李糖，阿拉伯糖，葡萄糖及岩藻糖四种糖组成，分子量在2-100万之间。
鼠李糖为甘露糖6位的一个羟基被氢取代的衍生物，即6-脱氧-L-甘露糖。又称甲基戊糖。和墨角藻糖并列的典型6-脱氧己糖的一种。是甘露糖的第6位脱氧，最后变成-CH3的化合物，天然分布的是L型，也有称为6-脱氧-L-甘露糖(6-de-oxy-L-mannose)地。分子式：C6H12O5。纯品鼠李糖为无色结晶性粉末，能溶于水和甲醇，微溶于乙醇，其结晶呈两种形式，α型和β型。α型含有一分子结晶水，加热后失去结晶水，转变为β型(分子量为164.16)；β型极易吸湿，在空气中吸潮转变为α型。常见的为α-L-鼠李糖，其分子量为182.11在通常的条件下得a-L-鼠李糖一水合物结晶，片状晶体，熔点82-92℃，比旋光度-7.7°→+8.9°，溶于水和乙醇；β-L-鼠李糖(无水)为针状晶体有吸湿性，熔点122-126℃，+38.4°→+8.9°，溶于水和乙醇。有甜味，在水溶液中以吡喃形式存在。有还原性，用溴水氧化生成鼠李酸，经硝酸氧化生成L-阿拉伯三羟戈二酸。用钠汞齐还原则得鼠李糖醇。
L-阿拉伯糖，又被称为L(+)-树胶醛糖、L(+)-阿戊糖、果胶糖等，英文名称为L-Arabinose，分子式：C6H12O5。L-阿拉伯糖为白色结晶性粉末，无气味，有甜味(甜度为蔗糖的50％左右)，熔点159-160℃，相对密度1.625，比旋光度+190.5°→+104.5°(C＝3)，溶于水，但溶解度低于蔗糖；对热和酸的稳定性高。
葡萄糖(glucose)生化简写G，是己醛糖，化学式：C6H12O6，分子量：180。白色晶体，易溶于水，味甜，熔点146℃。
岩藻糖(fucose)是六碳糖的一种，又称6-脱氧-L-半乳糖，并可以看做是一种甲基戌糖。自然界存在的岩藻糖绝大多数为L-岩藻糖，D构型的岩藻糖仅作为稀有糖，发现于一些糖甘类化合物中。L-岩藻糖较大量地存在于海藻及树胶中，也发现于某些细菌的多糖中。岩藻糖作为糖蛋白中糖链的组成部分，广泛存在于各类细胞表面的质膜上。岩藻糖比一般六碳糖在第六碳原子上少一个羟基，所以岩藻糖比其他单糖亲水性弱，而疏水性强一些。在某些血型物质分子中的岩藻糖是一定的血型的标记。α-L-岩藻糖结晶，熔点145℃。分子式：C6H12O5，分子量：164。
有关女贞子多糖的提取方法报道很少，方法比较局限。现有方法是原料脱脂，醇提，水提、浓缩、萃取、脱色、洗涤、干燥，得到产品，如张兴辉等《不同产地女贞子中多糖的含量测定》，李曼玲等《女贞子不同部位多糖的提取及含量测定》。脱脂使用石油醚，用量大、毒性大；工艺所用有机溶剂种类多，容易导致有效成分流失。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单，生产安全，纯度较高的女贞子多糖制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：
1)压榨：将女贞子提取过三萜酸的残渣在常温下压榨，药渣加入温水浸泡3-5h，常温压榨2-3次，合并压榨液；
2)洗涤：将压榨液低压浓缩为浸膏，用无水乙醇洗涤3次，得残留固体；
3)脱蛋白：残留固体用去离子水复溶，用Sevage法去除少量的残留蛋白质，得脱蛋白溶液；
4)超滤：将脱蛋白溶液通过超滤膜浓缩，截留相烘干即得女贞子多糖。
上述的制备方法，其特征在于1)步骤压榨压力为80-100Mpa，水温30-50℃，每次用量为原料的3-5倍量(V/W)。
上述的制备方法，其特征在于2)步骤无水乙醇3次用量分别为浸膏质量的4-6倍、3-5倍、3-4倍(V/W)。
上述的制备方法，其特征在于3)步骤条件：去离子水用量为残留固体的10倍量，Sevage试剂为氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)混合液，用量为水溶液的1/5。
上述的制备方法，其特征在于4)步骤超滤膜系统为聚矾中空纤维超滤膜系统，截留分子量为20000。
综上所述，本发明存在以下优点：本工艺采用浸泡压榨提取女贞子多糖，溶剂简单；超滤除具有明显的滤除胶体杂质的性能外，还具有良好的脱色效果；女贞子多糖在水中的溶解度随温度变化敏感，结晶效果好；有机溶剂用量少，毒性低，生产较安全。
采用上述技术方案制备女贞子多糖，操作简单，成本较低，纯度较高，利于大生产操作。
下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
实施例1
取女贞子提取过三萜酸的残渣1kg，加入每次3L30℃温水浸泡，80Mpa重复压榨2次，合并压榨液。压榨液浓缩为浸膏282g，先后用1.2L、850ml、850ml无水乙醇洗涤浸膏。残留固体用3L去离子水分散，加600ml氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)混合液用Sevage法除去蛋白质。最后将剩余溶液通过截留分子量20000的聚矾中空纤维超滤膜系统浓缩，烘干即得女贞子多糖3.8g，经HPLC检测，纯度为98.5％。
实施例2
取女贞子提取过三萜酸的残渣1kg，加入每次4L40℃温水浸泡，90Mpa重复压榨2次，合并压榨液。压榨液浓缩为浸膏294g，先后用1.5L、1.5L、900ml无水乙醇洗涤浸膏。残留固体用3L去离子水分散，加600ml氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)混合液用Sevage法除去蛋白质。最后将剩余溶液通过截留分子量20000的聚矾中空纤维超滤膜系统浓缩，烘干即得女贞子多糖3.9g，经HPLC检测，纯度为98.6％。
实施例3
取女贞子提取过三萜酸的残渣1kg，加入每次5L40℃温水浸泡，100Mpa重复压榨3次，合并压榨液。压榨液浓缩为浸膏302g，先后用1.5L、1.2L、1.2L无水乙醇洗涤浸膏。残留固体用3L去离子水分散，加600ml氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)混合液用Sevage法除去蛋白质。最后将剩余溶液通过截留分子量20000的聚矾中空纤维超滤膜系统浓缩，烘干即得女贞子多糖3.8g，经HPLC检测，纯度为99.2％。
实施例4
取女贞子提取过三萜酸的残渣1kg，加入每次3L50℃温水浸泡，100Mpa重复压榨3次，合并压榨液。压榨液浓缩为浸膏282g，先后用1.6L、1.4L、850ml无水乙醇洗涤浸膏。残留固体用3L去离子水分散，加600ml氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)混合液用Sevage法除去蛋白质。最后将剩余溶液通过截留分子量20000的聚矾中空纤维超滤膜系统浓缩，烘干即得女贞子多糖4.0g，经HPLC检测，纯度为99.5％。