本发明涉及白藜芦醇和白藜芦醇甙的分离方法及其应用，特别是涉及从中药虎杖根茎 分离白藜芦醇和白藜芦醇甙的方法和白藜芦醇和白藜芦醇甙作为保健品或食品、饮料、保 健添加剂的应用。
早已有人发现，心血管疾病的发生与红葡萄酒的消费量呈负相关。经研究发现 (E.H.Siemann and L.L.Creasy：Am.J.Enol.Vitic.43：49-50，1992)，红葡萄酒中对心血 管起保护作用的生理活性物质是其中所含的白藜芦醇(Resveratrol)和白藜芦醇甙 (Polydatin或Piceid)。还有研究发现，这类化合物还具有防止血栓形成、保护肝脏、 抗氧化、清除自由基、抗炎症、抗某些真菌和细菌及抗癌等功效(余传林等，中药药理与 临床，1994，10(2)：33；单春文，药学学报，1988，23(5)：394；久保道德等，国 外医学药学分册，1982：3；Meishiang J et al.Science 1997，Vol 275：218-220)。但 目前获得白藜芦醇及其甙主要是化学合成方法，存在着工艺复杂、成本高等问题。
虎杖(Polygonum Caspidatum Sieb et Zace)是我国传统中草药，含有较丰富的(含 量随产地不同而异)白藜芦醇和白藜芦醇甙。虎杖目前主要用来治疗关节痹痛、湿热黄疸、 闭经、咳嗽多痰、水火烫伤、跌扑跌伤、痈肿疮毒等。虎杖的成份非常复杂，还含有蒽醌 类化合物、黄酮类化合物、萘醌、多糖、氨基酸、微量元素、脂肪酸等多种物质。因此， 从虎杖中分离并提纯白藜芦醇及白藜芦醇甙具有较大的难度。从虎杖中提取白藜芦醇及白 藜芦醇甙仅见于日本专利昭60-9455(1985)，该专利公开的方法提取工艺繁杂，而且使用 了危险性较大的乙醚作为溶剂。尤其是，用该专利方法仅能得到含有白藜芦醇和白藜芦醇 甙混合物的终产物，纯度较低。
本发明旨在从虎杖中提取白藜芦醇及白藜芦醇甙，提供一种工艺简便、快速、易操作、 纯度高、成本低并能大规模生产的分离及提纯方法。本发明的另一目的是将白藜芦醇和白 藜芦醇甙作为药品、保健品或食品、饮料、保健添加剂的应用。
以下是本发明的具体内容：
1、提取
将干燥虎杖根茎粉碎后，用可与水混溶的有机溶剂提取2次，每次提取溶剂用量为药粉 重量的5倍，合并提取液，减压蒸馏浓缩至原提取液体积的1/20。所得浓缩物中再加入该浓 缩物体积1-2倍的水，用碱性物质调pH至7.5-8.0。再分别用5倍和4倍体积的乙酸乙酯萃取 二次，合并两次萃取液，减压蒸馏浓缩至萃取液体积的1/15-1/20，最后所得的浓缩物是粗 提物，作为进一步纯化的原料。
所述与水混溶的有机溶剂系指：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮以及这些溶剂任意 的组合。
2、分离纯化
用柱层析法和结晶法进行分离及纯化，白藜芦醇及其甙以收集柱层析洗脱液的先后顺 序不同而分离，先收集的洗脱组分中含有白藜芦醇，后收集的洗脱组分中含有白藜芦醇甙。 层析柱填充物是硅胶，层析洗脱液为氯仿∶甲醇＝4～8∶1；或乙酸乙酯∶乙醇＝90～100∶ 0～10，优选95∶5。
将第一次柱层析中收集到白藜芦醇甙洗脱组分浓缩后在室温下静置，析出结晶，用甲 醇∶氯仿＝1∶8～10重结晶，可得到纯度高达97％以上的结晶。
白藜芦醇需经二次硅胶柱层析。将第一次柱层析中首先收集到白藜芦醇洗脱组份浓缩， 作为第二次硅胶柱层析的上样原料进行再次层析，层析洗脱液为氯仿∶乙酸乙酯＝70～ 100∶20～30，将二次洗脱液浓缩、室温下静置，析出白藜芦醇结晶，用丙酮∶氯仿＝1∶8～ 10重结晶，也得到纯度高达97％以上的结晶。
以上各操作中的溶剂、洗脱剂回收容易，并可反复使用，从而降低了成本。
各次重结晶后的母液均可留待与下次虎杖粉提取液合并后，再次分离纯化用。
3、制剂
将白藜芦醇甙或白藜芦醇或两者混合物与食品或药品上可接受的辅剂、赋形剂混合后， 用适当工艺制成各种剂型，如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、油膏剂、霜剂等， 作为药品、保健品、化妆品等。也可以作为食品添加剂加入食品、饮料、制成各种形式的 保健食品、饮料、酒类。
本发明提供的分离纯化方法工艺简便、操作容易、安全，成本低廉，便于大规模生产， 所得产物纯度高。
以下实施例进一步对本发明进行详述，使有助于理解本发明内容。
实施例1
1、提取
将干燥虎杖根茎粉碎过40目筛后，称取300g，加入1500ml丙酮，室温搅拌浸泡24小时， 然后进行抽滤，滤渣再用1500ml丙酮按同样的方法浸泡、提取一次，将两次滤液合并。经 高压液相色谱定量分析得知：上述所得滤液中含白藜芦醇0.75g，白藜芦醇甙5.16g。
将上述所得滤液加热减压浓缩至180ml，加入300ml蒸馏水，再用2NNaOH调pH至8.0。然 后用2.5L、2.0L乙酸乙酯萃取两次，合并两次的萃取液，浓缩至200ml。经高压液相色谱定 量分析得知：此滤液中含白藜芦醇0.70g，白藜芦醇甙4.81g。
2、层析
称取460g柱层析用硅胶(100-200目)，用乙酸乙酯悬浮装入一根直径为60mm，长500mm 的玻璃层析柱中，用此洗脱液平衡柱后，把步骤1中200ml乙酸乙酯提取浓缩液加到此柱上， 用乙酸乙酯洗脱，洗脱液流速为20-25ml/min，至色素刚开始洗出时开始收集洗脱液，每瓶 收集300ml，前3瓶含有白藜芦醇和黄色素。第6瓶开始白藜芦醇甙被洗出，第16瓶白藜芦醇 甙洗脱几乎完全。
合并7-12瓶的高浓度洗脱液浓缩至500ml，室温黑暗处静置24hr以上，可见容器中有大 量结晶析出。倾出母液(该母液及13-16瓶洗脱液可留待与下一批乙酯萃取液合并后再浓缩， 上柱分离，如此循环操作)，得结晶3.82g，用甲醇∶氯仿＝1∶10重结晶、可得白藜芦醇 甙3.25g，收率63％，经高压液相色谱分析，纯度为98％。
称取120g柱层析用硅胶(100-200目)，用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1悬浮装入一根直径为 30mm，长500mm的玻璃层析柱中，柱子经平衡后，将第一次柱层析中收集的1-3瓶洗脱液浓缩 成25ml加到该柱子上，用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1进行洗脱，洗脱液流速控制在5ml/min，收 集含有白藜芦醇的洗脱液，然后将洗脱液浓缩至结晶析出，室温黑暗处静置，待结晶完全 时倾出母液，结晶再用丙酮∶氯仿＝1∶10重结晶，得纯度为97.5％的白藜芦醇0.54g，收率 72％。
实施例2
称取460g柱层析用硅胶(100-200目)，用氯仿∶甲醇＝5∶1悬浮液装入一根直径为 60mm，长500mm的玻璃层析柱中，平衡后按实施例1方法所得到的乙酸乙酯提取浓缩液50ml 加到此柱上，用氯仿∶甲醇＝5∶1洗脱液洗脱，洗脱速度为25ml/min。分别收集白藜芦醇 及白藜芦醇甙的洗脱液，白藜芦醇甙的收集液经浓缩结晶析出，析出的结晶再经甲醇∶氯 仿＝1∶10反复重结晶二次，得纯度98.6％白藜芦醇甙0.81g。
实施例3
1、提取
将干燥虎杖根茎粉碎过40目筛后，称取1kg，加入5L95％乙醇，60℃搅拌浸泡24小时， 然后进行抽滤，滤渣再用5L95％乙醇按同样的方法浸泡、提取一次，将两次滤液合并。经高 压液相色谱定量分析得知：上述所得滤液中含白藜芦醇2.63g，白藜芦醇甙16.80g。
将上述所得滤液加热减压浓缩至600ml，加入1000ml蒸馏水，再用2NNaOH调pH至7.8。 然后用8L、6.5L乙酸乙酯萃取两次，合并两次的萃取液，减压浓缩至785ml。经高压液相色 谱定量分析得知：此浓缩液中含白藜芦醇2.5g，白藜芦醇甙15.6g。
2、层析
将785ml浓缩液分成四次进行柱层析，层析和结晶以及重结晶方法按实施例1所述进行。 白藜芦醇和白藜芦醇甙的重结晶是将四次粗结晶合并后，一次性进行重结晶。
最终从1kg虎杖中得到重结晶的白藜芦醇甙11.3g，收率67％；经高压液相色谱分析，纯 度为98.3％；得到重结晶的白藜芦醇1.95g，收率74％；经高压液相色谱分析，纯度为98.1％。
实施例4
将白藜芦醇甙3mg与1g葡萄糖粉混合后制成颗粒剂，装入铝箔包装袋中。
实施例5
将白藜芦醇甙3mg与0.25g淀粉混合后装入暗色胶囊。
实施例6
将白藜芦醇2mg与0.25g糊精混合后装入暗色胶囊。
实施例7
将白藜芦醇甙按15mg/L加入红葡萄酒中。
实施例8
将白藜芦醇10mg/L加入葡萄汁中，制成保健饮料。