M-CSF的抗体.pdf

本发明涉及可与M-CSF(优选为人类M-CSF)特异性结合并发挥抑制M-CSF的作用的抗体及其抗原结合部分。本发明还涉及人类抗M-CSF的抗体及其抗原结合部分。本发明还涉及抗体，其可为嵌合的、双特异性(bispecific)的、衍生的、单链抗体或融合蛋白的部分。本发明还涉及来自人类抗M-CSF抗体的分离的重链及轻链免疫球蛋白及编码此种免疫球蛋白的核酸分子。本发明还涉及制备人类抗M-CSF抗体的方法、包含这些抗体的组合物及使用该抗体与组合物用于诊断及治疗的方法。本发明还提供使用编码重链及/或轻链免疫球蛋白分子的核酸分子的基因疗法，其中该免疫球蛋白包括人类抗M-CSF抗体。本发明还涉及包含本发明核酸分子的转基因动物及转基因植物。

1.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 2.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗选自下述的病况：关节炎、脓毒症、中毒性休克综合征、阿尔茨海默氏病、中风、神经创伤、哮喘、成人呼吸道窘迫综合征、脑型疟、慢性肺炎性疾病、硅肺、肺部类肉瘤病、骨质再吸收疾病、骨质疏松症、再狭窄、心脏及肾脏再灌注伤害、血栓形成、肾小球肾炎、糖尿病、移植物与宿主的反应、同种异体移植物排斥、炎性肠病、多发性硬化症、肌肉变性、湿疹、接触性皮炎、牛皮癣、晒伤、结膜炎性休克及动脉硬化；其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 3.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗选自下述的病况：牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎、莱特氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、创伤性关节炎、风疹关节炎和急性滑膜炎；其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 4.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗选自下述的病况：脓毒性休克、内毒素休克和革兰氏阴性脓毒症；其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 5.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗选自下述的病况：局限性回肠炎和溃疡性结肠炎；其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 6.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗实体肿瘤，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 7.抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在有此需要的受试者中治疗选自下述的病况：乳腺癌、肝癌和结肠癌；其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；或i)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36。 8.根据权利要求1-7中任一项的用途，其中所述单克隆抗体或其抗原结合部分包含处于下述各组的重链和轻链氨基酸序列之中的可变区氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；i)SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：56；j)SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：56；k)SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：56；l)SEQ ID NO：82和SEQ ID NO：28；m)SEQ ID NO：102和SEQ ID NO：28；n)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；o)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：44；p)SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：60；q)SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：60；r)SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：44；s)SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：60；t)SEQ ID NO：98和SEQ ID NO：32；u)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36；v)SEQ ID NO：46和SEQ ID NO：48；w)SEQ ID NO：50和SEQ ID NO：52；x)SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：52；y)SEQ ID NO：70和SEQ ID NO：52；或z)SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：48。 9.根据权利要求1-7中任一项的用途，其中所述单克隆抗体包含下述各组的重链和轻链氨基酸序列：a)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4；b)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8；c)SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12；d)SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16；e)SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20；f)SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24；g)SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：28；h)SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：28；i)SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：56；j)SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：56；k)SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：56；l)SEQ ID NO：82和SEQ ID NO：28；m)SEQ ID NO：102和SEQ ID NO：28；n)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：32；o)SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：44；p)SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：60；q)SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：60；r)SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：44；s)SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：60；t)SEQ ID NO：98和SEQ ID NO：32；u)SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：36；v)SEQ ID NO：46和SEQ ID NO：48；w)SEQ ID NO：50和SEQ ID NO：52；x)SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：52；y)SEQ ID NO：70和SEQ ID NO：52；或z)SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：48，无信号序列。 10.根据权利要求1-7中任一项的用途，其中所述单克隆抗体包含：无信号序列的SEQ ID NO：30的重链氨基酸序列，和无信号序列的SEQ ID NO：32的轻链氨基酸序列。 11.根据权利要求2-7中任一项的用途，其中所述受试者为人类。

本申请是申请日为2004年9月9日、申请号为200480028051.X、发明名称为“M-CSF的抗体”的发明专利申请的分案申请。

本申请要求2003年9月10日提交的美国临时申请60/502,163的权益。

发明背景

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是称为集落刺激因子(CSFs)的蛋白质家族的一员。M-CSF为一种分泌性或细胞表面糖蛋白，此种糖蛋白包括二个以二硫键连结的亚基，且其总分子量在40至90kD间变化(Stanley E.R.等人，Mol.Reprod.Dev.，46：4-10(1997))。如同其它CSF s，M-CSF是由巨噬细胞、单核细胞及人类关节组织细胞(如软骨细胞及滑膜成纤维细胞)对蛋白质(如白细胞介素-1或肿瘤坏死因子-α)反应而产生的。M-CSF刺激多潜能造血祖干细胞形成巨噬细胞集落(Stanley E.R.等人，Mol.Reprod.Dev.，46：4-10(1997))。

M-CSF通常与其受体c-fms结合以发挥生物作用。c-fms包含五种细胞外Ig结构域、一跨透膜结构域及具有二个激酶结构域的细胞内结构域。当M-CSF与c-fms结合时，受体会同-二聚体化并启始包含JAK/STAT、PI3K及ERK途径的信号转导途径级联。

M-CSF为单核细胞/巨噬细胞的功能、活化及存活的重要调节物。许多动物模型已证实M-CSF于多种疾病(包含类风湿性关节炎(RA)及癌症)中的作用。巨噬细胞包括RA中的关键效应细胞。在RA中滑膜巨噬细胞的浸润程度显示出与潜在关节破坏程度有密切关系。于类风湿病关节中，由单核细胞/巨噬细胞、成纤维细胞及内皮细胞所内源性产生的M-CSF可作用于单核细胞/巨噬细胞系的细胞以促进其存活并分化为可破坏骨质的破骨细胞并增加前-炎性细胞功能，如细胞毒性、超氧化物产生、吞噬作用、驱化性及次级细胞因子产生。例如在大鼠无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)超声处理-诱导的实验性关节炎模型中用M-CSF的处理导致病变增强(Abd，A.H.等人，Lymphokine Cytokine Res.10：43-50(1991))。同样地，于胶原蛋白诱导的关节炎鼠模型(CIA)(其为一种RA模型)中以皮下注射M-CSF导致RA疾病的症状明显恶化(Campbell I.K.等人，J.Leuk.Biol.68：144-150(2000))。此外，对RA及其它自身免疫疾病有高易感性的MRL/lpr鼠具有高的基础M-CSF血清浓度(Yui M.A.等人，Am.j.Pathol.139：255-261(1991))。维持C I A需要内源性M-CSF，此可由M-CSF中和鼠单克隆抗体能显著减少已发生疾病的严重程度来证实(Campbell I.K.等人，J.Leuk.Biol.68：144-150(2000))。

有关癌症方面，以反义寡核苷酸抑制集落刺激因子可通过减缓巨噬细胞-介导的ECM破坏而抑制肿瘤小鼠中胚胎和结肠肿瘤异种移植物中的肿瘤生长(Seyedhossein，A.等人，Cancer Research，62：5317-5324(2002))。

M-CSF与c-fms结合及其后续对单核细胞/巨噬细胞的活化作用对许多疾病状态十分重要。除RA与癌症外，其余M-CSF相关疾病状态实例包含骨质疏松症、破坏性关节炎、动脉粥样硬化生成、肾小球肾炎、川崎病(Kawasaki dsease)及HIV-1感染，其中单核细胞/巨噬细胞与相关细胞类型发挥了重要作用。如破骨细胞类似巨噬细胞并部分由M-CSF调节。破骨细胞成熟初期由M-CSF所诱导的生长及分化信号对破骨细胞后续于骨中的活性为必要的。

病灶骨质侵蚀及更具扩散性的近-关节(juxta-articular)骨质疏松症二种形式的破骨细胞介导的骨丢失为RA主要未解决的问题。此种骨丢失后果包括关节畸形、功能残废、骨折风险增加及死亡率增高。对破骨细胞生成而言，M-CSF为非常必需的，且于关节炎的动物模型中实验性地阻断此种细胞因子可成功地阻止关节破坏。已知其它形式的破坏性关节炎(如牛皮癣性关节炎)中也有类似的破坏性途径运作，并可呈现类似的干预作用。

绝经后的骨丢失起因于缺陷性骨骼重塑，其继发于失衡的(uncoupling)骨质形成与因雌激素缺乏所导致的高度增生的破骨细胞介导的骨质再吸收。于小鼠活体内使用阻断性抗体来中和M-CSF显示 完全预防破骨细胞数量增加、骨质重吸收增加及由卵巢切除术诱发所产生的骨质流失。

有多重证据显示M-CSF于动脉粥样硬化生成及机械性伤害动脉壁后的增殖性内膜增生中的重要作用。动脉粥样硬化病变中所有主要的细胞类型皆显示表达M-CSF，且其可通过暴露于氧化脂蛋白而进一步被上调。以中和c-fms抗体阻断M-CSF信号发生可减少以高脂肪食物喂食的载脂蛋白E缺陷性小鼠主动脉根部的巨噬细胞-衍生泡沫细胞的堆积。

于实验性及人类肾小球肾炎中，肾小球M-CSF的表达发现会与局部巨噬细胞堆积、活化及增殖共同存在(co-localize)且与肾小球损伤及蛋白尿程度有关。通过针对其受体c-fms的抗体阻断M-CSF信号发生可显著地下调于实验性单侧输尿管阻塞所诱导的肾炎症反应期间小鼠的局部巨噬细胞堆积。

川崎病(KD)为一种未知原因的急性、热性的儿科血管炎。其最常见及严重的并发症包含动脉瘤性扩张形式的冠状动脉血管系统。血清M-CSF水平在急性期川崎病中呈显著升高，而以静脉内免疫球蛋白治疗后呈正常化。巨细胞关节炎(GCA)为一种炎症性血管病变，主要发生于年长者，其中T细胞及巨噬细胞浸润中大型动脉壁所导致的临床后果包含失明及继发于动脉阻塞的中风。巨噬细胞于GCA中的活性作用可由血管损害中源自炎性介体的巨噬细胞浓度升高而证实。

已报告M-CSF可使人类单核细胞衍生的巨噬细胞体外更易受HIV-1感染。在近期的研究中，M-CSF增加单核细胞-衍生的巨噬细胞受感染的频率、每个受感染细胞中所表达的HIV mRNA的量及每个受感染的培养物中所表达的前病毒DNA的浓度。

由于M-CSF在多种疾病中的重要作用，故需要可抑制M-CSF活性的方法。 

目前强烈需求治疗性抗M-CSF抗体。

发明简述

本发明提供特异性结合人M-CSF并作为M-CSF拮抗剂的分离的人抗体或其抗原结合部分，以及包含所述抗体或部分的组合物。

本发明也提供组合物，其包含该治疗中有效的本发明的抗M-CSF抗体的重链及/或轻链、其可变区或其抗原结合部分，或编码该抗体、抗体链或其可变区的核酸分子，及药物可接受载体。于某些实施方案中，该组合物可进一步包含另一组分，如治疗剂或诊断剂。本发明亦提供诊断及治疗方法。于某些实施方案中，该组合物以治疗或预防特定疾病或病况所需的治疗有效量使用。

本发明亦提供以有效量的本发明抗M-CSF抗体或其抗原结合部分、编码该抗体或其重链及/或轻链、可变区或其抗原结合部分的核酸来治疗或预防各种疾病及病况的方法，如(但不限于)炎症、癌症、动脉粥样硬化生成、神经障碍及心脏疾患。

本发明提供分离的细胞系，如产生抗M-CSF抗体或其抗原结合部分的杂交瘤。

本发明还提供编码抗M-CSF抗体的重链及/或轻链、其可变区或其抗原结合部分的核酸分子。

本发明提供包含核酸分子的载体及宿主细胞以及重组产生由该核酸分子所编码的多肽的方法。

本发明还提供表达抗M-CSF抗体的重链及/或轻链或其抗原结合部分的非-人类转基因动物或植物。

附图简述

图1A及1B说明随时间变化的抗M-CSF抗体导致的雄猴及雌猴体内总单核细胞计数的剂量相关的下降情况。单核细胞计数通过使用Abbott Diagnostics Inc.Cell Dyn系统的光散射确定。单核细胞计数监测时间自给药后24小时直到3周，给药内容有载体或抗体8.10.3，0、0.1、1或5mg/kg，剂量体积为3.79mL/kg，给药时间约5分钟。

图1A为雄猴。

图1B为雌猴。

图2A及2B说明抗M-CSF治疗在雄猴及雌猴中导致CD14+CD16+单核细胞百分比下降。监测时间为给药后0-21日，给药内容有载体或抗体8.10.3，0、0.1、1或5mg/kg，剂量体积为3.79mL/kg，给药时间约5分钟。于8.10.3注射后第1、3、7、14及21日，于每次抽血后测定每只受测猴子CD14+CD16+亚型中的单核细胞比例。

图2A为雄猴。

图2B为雌猴。

图3A及3B说明与受测前的单核细胞水平相比，所有剂量的抗体8.10.3F及抗体9.14.4I的抗M-CSF治疗导致总单核细胞百分比变化减少。

图3A显示由使用抗体8.10.3F的实验所收集的数据。

图3B显示由使用抗体9.14.4I的实验所收集的数据。

图4为来自26种抗M-CSF抗体的轻链及重链可变区的预期氨基酸序列的序列与相应的可变区基因的种系氨基酸序列比较的序列比对。抗体序列与种系基因序列间的差异以粗体表示。虚线代表与种系无异。各比对中下划线的序列由左至右表示为FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR 3、CDR3及FR4序列。

图4A显示抗体252的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：4的残基21-127)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4B显示抗体88的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：8的残基21-127)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4C显示抗体100的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：12的残基21-127)与种系VkL2，Jk3序列(SEQ ID NO：107)的比对。

图4D显示抗体3.8.3的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：16的残基23-130)与种系VkL5，Jk3序列(SEQ ID NO：109)的比对。

图4E显示抗体2.7.3的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：20的残基23-130)与种系VkL5，Jk4序列(SEQ ID NO：117)的比对。

图4F显示抗体1.120.1的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：24的残基21-134)与种系VkB3，Jk1序列(SEQ ID NO：112)的比对。

图4G显示抗体252的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：2的残基20-136)与种系VH3-11，DH7-27 JH6序列(SEQ ID NO：106)的比对。

图4H显示抗体88的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：6的残基20-138)与种系VH3-7，DH6-13，JH4序列(SEQ ID NO：105)的比对。

图4I显示抗体100的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：10的残基20-141)与种系VH3-23，DH1-26，JH4序列(SEQ ID NO：104)的比对。

图4J显示抗体3.8.3的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：14的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4序列(SEQ ID NO：108)的比对。

图4K显示抗体2.7.3的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：18的残基20-137)与种系VH3-33，DH1-26，JH4序列(SEQ ID NO：110)的比对。

图4L显示抗体1.120.1的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：22的残基20-139)与种系VH1-18，DH4-23，JH4序列(SEQ ID NO：111)的比对。

图4M显示抗体8.10.3的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：44的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4N显示抗体8.10.3的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：30的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4O显示抗体9.14.4的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：28的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4P显示抗体9.14.4的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：38的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4Q显示抗体9.7.2的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：  48的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4R显示抗体9.7.2的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：46的残基20-136)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4S显示抗体9.14.4I的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：28的残基23-130)与种系VkO12Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4T显示抗体9.14.4I的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：26的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4U显示抗体8.10.3F的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：32的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4V显示抗体8.10.3F的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：30的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4W显示抗体9.7.2IF的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：36的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4X显示抗体9.7.2IF的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：34的残基20-136)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4Y显示抗体9.7.2C-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：52的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4Z显示抗体9.7.2C-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：50的残基20-136)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4AA显示抗体9.14.4C-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：56的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4BB显示抗体9.14.4C-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ  ID NO：54的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4CC显示抗体8.10.3C-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：60的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4DD显示抗体8.10.3C-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：58的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4EE显示抗体8.10.3-CG2的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：60的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4FF显示抗体8.10.3-CG2的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：62的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4GG显示抗体9.7.2-CG2的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：52的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4HH显示抗体9.7.2-CG2的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：66的残基20-136)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4II显示抗体9.7.2-CG4的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：52的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4JJ显示抗体9.7.2-CG4的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：70的残基20-135)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4KK显示抗体9.14.4-CG 2的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：56的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4LL显示抗体9.14.4-CG2的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：74的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4MM显示抗体9.14.4-CG4的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：56的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4NN显示抗体9.14.4-CG4的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：78的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4OO显示抗体9.14.4-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：28的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4PP显示抗体9.14.4-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：82的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4QQ显示抗体9.7.2-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：48的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4RR显示抗体9.7.2-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：86的残基20-136)与种系VH3-11，DH6-13，JH6b序列(SEQ ID NO：115)的比对。

图4SS显示抗体8.10.3-Ser的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：44的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4TT显示抗体8.10.3-Ser的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：90的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4UU显示抗体8.10.3-CG4的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：60的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的 比对。

图4VV显示抗体8.10.3-CG4的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：94的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

图4WW显示抗体9.14.4G1的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ IDNO：28的残基23-130)与种系VkO12，Jk3序列(SEQ ID NO：103)的比对。

图4XX显示抗体9.14.4G1的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ IDNO：102的残基20-135)与种系VH3-11，DH7-27，JH4b序列(SEQ ID NO：116)的比对。

图4YY显示抗体8.10.3FG1的轻链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：32的残基21-129)与种系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO：114)的比对。

图4ZZ显示抗体8.10.3FG1的重链可变区的预期氨基酸序列(SEQ ID NO：98的残基20-141)与种系VH3-48，DH1-26，JH4b序列(SEQ ID NO：113)的比对。

发明详述

定义及一般技术

除非在此另有定义，本发明所使用的科学及技术术语具有本领域普通技术人员所共同理解的含义。此外，除非是上下文所需，否则单数术语可包含复数型且复数术语可包含单数型。一般来说，在此所使用与细胞及组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学及蛋白质与核酸化学及杂交相关的命名和技术皆为本领域所熟知且常用于本领域中。

除非另有指定，否则本发明的方法及技术一般按照本领域中所熟知的常规方法进行，并如本专利说明书中所引用的和讨论的各种一般及比较特定的文献中所述。请见如Sambrook等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，2d ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)与Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates(1992)及Harlow与Lane Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1990)，其是以引用的方式并入本文中。酶反应与纯化技术是依厂商说明书进行，以如本领域中通用方法或在此所述方法完成。在此所述的与分析化学、合成有机化学及医药与药物化学相关的命名法和实验方法及技术是所熟知且常用于本领域的。化学合成、化学分析、药物制备、调配及递送与患者治疗采用标准技术。

除非另外指定，下列名词具有下列意义：

术语″多肽″包括天然或人工蛋白质、蛋白质片段及蛋白质序列的多肽类似物。多肽可为单体或聚合物。

术语″分离的蛋白质″、″分离的多肽″或″分离的抗体″是指这样的蛋白质、多肽或抗体，其依其起源或衍生来源具有下列一至四种状况：(1)不伴有在自然状态中会伴随其的天然相关组分，(2)不含其它源自相同物种的蛋白质，(3)是由源自不同物种的细胞所表达，或(4)不会天然产生。因此，化学合成或于与其自然产生的细胞不同的细胞系统中所合成的多肽为自其天然相关组分中″分离″的。蛋白质也可通过分离(使用本领域中所熟知的蛋白质纯化技术)使其实质上不含天然相伴随的组分。

分离的抗体实例包括已经使用M-CSF进行亲和纯化的抗M-CSF抗体、于由杂交瘤或其它细胞系体外合成的抗M-CSF抗体及源自转基因小鼠的人类抗M-CSF抗体。

当至少约60-75％的样本显示为单一种类多肽时，蛋白质或多肽为″实质上纯的″、″实质上同质的″或″实质上纯化的″。该多肽或蛋白质可为单体或多聚体。实质上纯的多肽或蛋白质典型地包含约50％、60％、70％、80％或90％W/W的蛋白质样品，更常为约95％且优选为99％以上纯的。蛋白质纯度或同质性可通过许多本领域中所熟知的方法显示，如蛋白质样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，再以本领域中所熟知的染色剂将凝胶染色以便显现单一多肽带。为某些目的，使用HPLC或其它本领域普通 技术人员所熟知的纯化方法可得较高的分辨率。

在此所用的术语″多肽片段″意指具有氨基末端及/或羧基末端缺失的多肽，但其保留的氨基酸序列与自然产生序列中相应位置相同。在某些实施方案中，片段长度至少为5、6、8或10个氨基酸。于其它实施方案中，片段长度至少为14、至少20、至少50或至少为70、80、90、100、150或200个氨基酸。

在此所用的术语″多肽类似物″意指包括含有实质上与部分氨基酸序列相同的片段的多肽且其至少具有一种下列特性：(1)于适当结合条件下与M-CSF特异性结合，(2)抑制M-CSF能力。

典型地，多肽类似物相对于自然产生的序列包含保守性氨基酸替代(或插入或缺失)。类似物长度典型为至少20或25个氨基酸，优选为至少50、60、70、80、90、100、150或200个氨基酸或者更长，且经常可以与全长多肽一样长。

于某些实施方案中，抗体或其抗原结合部分的氨基酸替代为：(1)降低对蛋白水解的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的结合亲和力，或(4)可赋予或修饰此种类似物其它理化或机能特性。类似物可以包括正常产生的肽序列以外的各种突变蛋白序列。如可于正常产生的序列中产生单个或多个氨基酸替代(优选为保守性氨基酸替代)，优选于形成分子间接触的结构域以外的多肽部分。

保守性氨基酸替代应不实质上改变亲本序列的结构特征，如取代氨基酸不应改变组成免疫球蛋白结合结构域的反平行β-折叠(于亲本序列中所产生)或中断构成亲本序列特征的其它二级结构形式。通常，甘氨酸及脯氨酸类似物不会用于反平行β-折叠中。本领域认可的多肽二级与三级结构的实例描述于Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton编辑，W.H.Freeman and Company，New York (1984))；Introduction to Protein Structure(C.Branden及J.Tooze编辑，Garland Publishing，New York，N.Y.(1991))；及Thornton 等人，Nature 354：105(1991)，各文以引用的方式并入本文中。

非肽类似物常用于医药工业作为与模板肽具有类似特性的药物。 这些非肽化合物类型称为″肽模拟物(peptide mimetics)″或″peptidomimetics″Fauchere，J.Adv.Drug Res.15：29(1986)；Veber及Freidinger，TINS 392页(1985)；及Evans等人，J.Med.Chem.30：1229(1987)，其是以引用的方式并入本文中。此种化合物通常是借助计算机化分子模建而开发。结构上类似治疗可用的肽的肽模拟物可用于产生等同疗效或预防作用。通常peptidomimetic结构上类似于范例多肽(即具有所需的生化特性或医药活性的多肽)，如人类抗体，但具有一个或多个任选通过本领域所熟知的方法由选自下列的键取代的肽键：--CH2NH--、--CH2S--、--CH2-CH2--、--CH＝CH--(顺式及反式)、--COCH2--、--CH(OH)CH2--及-CH2SO--。以相同类型的D-氨基酸(如以D-赖氨酸代替L-赖氨酸)系统地替代共有序列中一个或多个氨基酸也可用于产生更稳定的肽。此外，包含共有序列或实质上与共有序列变异相同的限制性肽可通过本领域中已知的方法产生(Rizo及Gierasch，Ann.Rev.Biochem.61：387(1992)，以引用的方式并入本文中)；如通过添加内半胱氨酸残基能形成环化肽的分子内二硫桥。

″抗体″意指完整抗体或可与完整抗体竞争特异性结合的抗原结合部分。一般请见Fundamental Immunology，第7章(Paul，W.编辑，第2版.Raven Press，N.Y.(1989))(以引用的方式将其针对所有目的的全部内容并入本文中)。抗原结合部分可通过DNA重组技术或通过酶促或化学裂解完整的抗体来制备。在某些实施方案中，抗原结合部分包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb及互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、二体(diabody)与至少包含足以赋予该多肽特异性抗原结合的抗体部分的多肽。

由N-末端至C-末端，成熟的轻链及重链可变区都包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4区。将氨基酸分配至各区是依照Kabat的定义，Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.(1987及1991))，Chothia及Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)或Chothia等人，Nature 342：878-883(1989)。

在此所用的以数字提及的抗体是与由相同数字的杂交瘤所获得的单克隆抗体相同。如单克隆抗体3.8.3与由杂交瘤3.8.3所获得的抗体相同。

在此所用的Fd片段意指由VH及CH1结构域所组成的抗体片段；Fv片段是由抗体的单臂的VL与VH结构域组成；而dAb片段(Ward等人，Nature 341：544-546(1989))是由VH结构域组成。

于某些实施方案中，抗体为单链抗体(scFv)，其中的VL及VH结构域通过能使其形成单一蛋白链的合成接头配对而形成单价分子(Bird等人，Science 242：423-426(1988)及Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883(1988)。于某些实施方案中，抗体为二体(即二价抗体)，其中的VH及VL结构域于单一多肽链上表达，但其所使用的接头过短无法供相同链上该两个结构域间的配对，从而迫使所述结构域与另一链的互补结构域配对并产生二个抗原结合部位(请见如Holliger P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)及Poljak R.J.等人，Structure 2：1121-1123(1994))。在某些实施方案中，一个或多个源自本发明抗体的CDR可共价或非共价并入一分子中形成可与M-CSF特异性结合的免疫粘附素(immunoadhesin)。在此类实施方案中，CDR(s)可合并为较大多肽链的一部分，其可共价连接至另一多肽链或其可为非共价性并入。

在具有一个或多个结合位点的实施方案中，结合位点可彼此相同或不同。

在此所用的术语″人类抗体″意指任何抗体，其中的可变区及恒定区序列为人类序列。该术语包含具有源自人类基因的序列的抗体，但其已经被改变，如以减少可能的免疫原性、增加亲和力、排除可能引起不希望的折叠的半胱氨酸等。该术语包含在非人类细胞中重组产生的抗体，其可能带来非典型人类细胞的蛋白质糖基化作用。这些抗体可通过下述各种方法制备。

在此所用的术语″嵌合抗体″意指抗体包括源自两个或多个不同抗体的区域。在一个实施方案中，一个或多个CDR是源自人类抗M-CSF抗 体。于另一实施方案中，所有CDR皆源自人类抗M-CSF抗体。于另一实施方案中，源自一个以上人类抗M-CSF抗体的CDR组合于嵌合抗体中。例如，嵌合抗体可包括源自第一人类抗M-CSF抗体轻链的CDR1、源自第二人类抗M-CSF抗体轻链的CDR2及源自第三人类抗M-CSF抗体轻链的CDR3与源自一个或多个其它抗M-CSF抗体重链的CDR。此外，构架区可源自一种如下的抗M-CSF抗体，一个或多个CDR取自该抗体或取自一种或多种不同人类抗体。

抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可容易地由本领域普通技术人员依照本专利说明书的指导来制备。优选片段或类似物的氨基末端与羧基末端存在于接近功能性结构域的边缘。结构性与功能性结构域可通过比较核苷酸及/或氨基酸序列数据与公共或专利序列数据库来鉴别。优选采用计算机化比较方法来鉴别出现于其它已知结构及/或功能的蛋白质中的序列基序或预期的蛋白质构象结构域。已知鉴别可折叠成为已知三维结构的蛋白质序列的方法。请见Bowie等人，Science 253：164(1991)。

在此所用的术语″表面胞质共振(surface plasmon resonance)″意指一种光学现象，其可以通过检测生物感应基质内蛋白质浓度变化分析实时生物特异性交互作用，如使用BIACORETM系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden and Piscataway，N.J.)。进一步描述请见Jonsson U.等人，Ann.Biol.Clin.51：19-26(1993)；Jonsson U.等人，Biotechniques 11：620-627(1991)；Jonsson B.等人，J.Mol.Recognit.8：125-131(1995)；及Johnsson B.等人，Anal.Biochem.198：268-277(1991)。

″KD″一词意指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。

″表位″一词包含任何可与免疫球蛋白或T-细胞受体特异性结合或与分子互相作用的蛋白质决定簇。表位决定簇通常由化学活性的表面分子组(如氨基酸或糖类侧链等分子)构成且通常具有特异的三维结构特征以及特异的电荷特征。表位可为″线性″或″构象的(conformational)″。于线性表位中，所有蛋白质与相互作用分子(如 抗体)间的相互作用的位点是沿着该蛋白质一级氨基酸序列线性地发生。于构象表位中，相互作用的位点是穿过蛋白质上互相分离的氨基酸残基。当解离常数≤1mM，优选为≤100nM且最优选为≤10nM时，可称抗体能与抗原特异性结合。于某些实施方案中，KD为1pM至500pM。于其它实施方案中，KD是介于500pM至1μM间。于其它实施方案中，KD是介于1μM至100nM间。于其它实施方案中，KD是介于100mM至10nM。一旦测定出抗原上所需的表位，即可使用如本发明中所述的技术产生该表位的抗体。或者，于发现表位期间，抗体产生及表征可说明所需的表位的信息。接着由该信息可竞争性筛选与相同表位结合的抗体。一种可达到此目的的方法为进行交叉竞争性研究以寻找互相竞争性结合的抗体，如竞争与抗原结合的抗体。一种根据交叉竞争性进行″binning″抗体的高通量方法描述于国际专利申请号WO 03/48731。

在此所用的20种常见氨基酸及其缩写遵循惯例使用。请见Immunology-A Synthesis(第2版，E.S.Golub及D.R.Gren，Eds.，Sinauer Associates，Sunderland，Mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。

″多核苷酸″一词在此是指长度至少为10个碱基的核苷酸聚合物形式，无论是核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的经修饰形式。该术语包含单链及双链形式。

在此所用的″分离的多核苷酸″一词意指基因组、cDNA或合成来源或其某些组合的多核苷酸，根据起源或衍生来源，该″分离的多核苷酸″包含有下列一至三项特征：(1)与该″分离的多核苷酸″天然一起发现的全部或部分多核苷酸无关，(2)可操作地连接至在天然不会连接在一起的多核苷酸，或(3)天然情况下不会成为较大序列的一部分。

在此所用的″寡核苷酸″一词包含自然产生，及经修饰的核苷酸，其通过自然产生及非自然产生的寡核苷酸键连接在一起。寡核苷酸为多核苷酸的子集，其通常包括200个碱基或更少的长度。优选寡核苷酸长度为10至60个碱基且最优选长度为为12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个碱基。寡核苷酸通常为单链，如引物及探针；但寡核苷 酸也可为双链(如用于构建基因突变子)。本发明的寡核苷酸可为有义或反义寡核苷酸。

在此所用的″自然产生的核苷酸″一词包含脱氧核糖核苷酸及核糖核苷酸。在此所用的″经修饰核苷酸″包含具有经修饰或取代糖基等的核苷酸。在此所用的″寡核苷酸键″意指包含寡核苷酸键，如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、phosphoroanilothioate、phoshoraniladate、phosphoroamidate等。请见如LaPlanche等人，Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Stec等人，J.Am.Chem.Soc.106：6077(1984)；Stein等人，Nucl.Acids Res.16：3209(1988)；Zon等人，Anti-Cancer Drug  Design 6：539(1991)；Zon等人，Oligonucleotides and Analogues：APractical Approach，87-108页(F.Eckstein，Ed.，Oxford University Press，Oxford England(1991))；美国专利第5,151,510号；Uhlmann 及Peyman，Chemical Reviews 90：543(1990)，其公开内容以引用的方式并入本文中。若需要时寡核苷酸可包含标记以供检测。

″可操作地连接″的序列既包含邻近目的基因的表达控制序列还包含以反式或远距离来控制目的基因的表达控制序列。在此所用的″表达控制序列″一词意指实现其所连接的编码序列表达和加工所必需的多核苷酸序列。表达控制序列包含适当的转录起始、终止、启动子及增强子序列；有效的RNA加工信号(如剪接及多腺核苷酸化信号)；可稳定细胞质mRNA的序列、可提高翻译效率的序列(即Kozak共有序列)、可增加蛋白质稳定性的序列，且当需要时可包含能增加蛋白质分泌的序列。此种控制序列的性质依宿主生物而不同；于原核生物中，此种控制序列通常包含启动子、核糖体结合位点及转录终止序列；于真核生物中，此种控制序列通常包含启动子及转录终止序列。″控制序列″一词意欲包含至少所有表达及加工所必须的组分，且亦可包含其它的有益组分，如前导序列及融合配偶体序列。

在此所用的″载体″一词意指可运送与其连接的另一核酸的核酸分子。于某些实施方案中，载体为质粒，即另外DNA片段可连接至其中的 环状双链DNA环。于某些实施方案中，载体为病毒性载体，其中另外的DNA片段可连接至病毒基因组中。于某些实施方案中，载体可在其所导入的宿主细胞中进行自我复制(如具有细菌性复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。于其它实施方案中，载体(如非游离型哺乳动物载体)于导入宿主细胞后可整合入宿主细胞基因组，并因此可与宿主基因组一起复制。此外，某些载体可指导其操作性所连结的基因的表达。此种载体在此称为″重组表达载体″(或简称为″表达载体″)。

在此所用的″重组宿主细胞″(或简称″宿主细胞″)一词意指一已导入重组表达载体的细胞。应了解″重组宿主细胞″及″宿主细胞″不仅指特定的受试细胞，且亦指该细胞的子代。由于突变或环境影响，因此某些修饰可能发生在子代，事实上此种子代可能不会与亲代细胞完全相同，但仍包含于在此所用的″宿主细胞″一词范围内。

在此所用的″选择性杂交″一词意指进行可检测地且特异性结合。本发明的多核苷酸、寡核苷酸及片段可于杂交并洗涤条件下与核酸链进行选择性杂交，所述条件尽量减少大量的与非特异核酸的可检测结合。″高严格性″或″高度严格的″条件可用于达成本领域中已知且在在此讨论的选择性杂交条件。一″高严格性″或″高严格的″条件实例为将多核苷酸与另一种多核苷酸温育(其中的一种多核苷酸可附着于固体表面(如膜))于杂交缓冲液6X SSPE或SSC、50％甲酰胺(formamide)、5X Denhardt′s试剂、0.5％ SDS、100μg/ml变性片段化的鲑精DNA中，杂交温度为42℃，12-16小时，随后再于55℃、使用1X SSC、0.5％ SDS的洗涤缓冲液两次洗涤。亦见于Sambrook等人，前述，9.50-9.55页。

″序列相同性百分比″在描述核酸序列时，意指比较及比对第一连续序列与第二连续序列时其最大相同残基百分比。序列相同性比较的长度可大于至少约9个核苷酸，通常至少约18个核苷酸，更通常为至少约24个核苷酸，典型地至少约28个核苷酸，更典型地为至少约32个核苷酸，且优选为至少约36、48或更多个核苷酸。有一些本领域中已知的不同算法可用于测量核苷酸序列相同性。如多核苷酸序列的比对可使用FASTA、Gap或Bestfit，其为Wisconsin Package version 10.0 的程序，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，Wisconsin。

包含如FASTA2及FASTA 3的FASTA程序可提供查询及检索序列间最佳重叠区的比对及序列相同性(Pearson，Methods Enzymol.183：63-98(1990)；Pearson，Methods Mol.Biol.132：185-219(2000)；Pearson，Methods Enzymol.266：227-258(1996)；Pearson，J.Mol.Biol.276：71-84(1998)；以引用的方式并入本文中)。除非另外指定，否则使用特定程序或算法的缺省参数。例如，测定核酸序列间的序列相同性可使用FASTA及其缺省参数(字大小为6及供作评比基础的NOPAM系数)或使用Gap及其缺省参数(如GCG第6.1版所提供的)，其以引用的方式并入本文中。

除非另外指定，当提及一核苷酸序列时包含其补序列。因此，当提及具有特定序列核酸时应了解其是包含其互补链，及其互补性序列。″序列相同性百分比″一词意指一种比例，其表示为相同残基数与所比较的残基数的百分比。

当提及核酸或其片段时，″实质上类似″或″实质上序列类似″等词意指当将具有适当核苷酸插入或缺失的核酸或片段与另一核酸(或其互补链)进行最佳化比对时，其核苷酸序列相同性为至少约85％，优选为至少约90％，且更优选为至少约95％、96％、97％、98％或99％核苷酸碱基，以上可以任何所熟知的上述序列相同性算法(如FASTA、BLAST或Gap)来测量。

当形容多肽时，″实质上相同″一词意指二个肽序列，当进行最佳化比对时(如以GAP或BESTFIT程序、依程序所提供使用的缺省ga pweights)，共同拥有至少70％、75％或80％序列相同性，优选为至少90％或95％序列相同性，且更优选为至少97％、98％或99％的序列相同性。于某些实施方案中，不同的残基位置因保守性氨基酸替换而不同。″保守性氨基酸替换″意指其中的氨基酸残基以另一具有类似化学特性(如电荷或疏水性)的侧链R基的氨基酸残基所替换。保守性氨基酸替换通常并不会实质上改变蛋白质的功能特性。在二个或多个氨基酸序列因保守性替换而互异的情况下，其序列相同性可向上调整以修正替换的保 守性本质。可进行该调整的方法为本领域普通技术人员所熟知。请见如Pearson，Methods Mol.Biol.243：307-31(1994)。具有类似化学特性的侧链的氨基酸组的实例包含：1)脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸及异亮氨酸；2)脂族-羟基侧链：丝氨酸及苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺及谷氨酰胺；4)芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸及组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸及谷氨酸；及7)含硫的侧链：半胱氨酸及甲硫氨酸。保守性氨基酸替换组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸及天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守性置换为PAM250对数相似矩阵(log-likelihood matrix)中任何具有正值的改变，其描述于Gonnet等人，Science 256：1443-45(1992)，其以引用的方式并入本文中。″适度保守性″置换为PAM250对数相似矩阵中任何具有非负值的改变。

多肽的序列相同性典型是使用序列分析软件来测量。蛋白质分析软件使用测量不同替换、缺失及其它修饰(包含保守性氨基酸替换)的相同性来匹配序列。例如包含如″Gap″及″Bestfit″等程序的GCG可采用程序特定的缺省参数来测定紧密相关的多肽间的序列同源性或序列相同性，如测定源自不同种生物的同源多肽或野生型蛋白质及其突变蛋白间的相同性。请见如GCG 6.1版。比较多肽序列亦可使用FASTA并采用缺省的或建议的参数，请见GCG 6.1版(University of Wisconsin WI)。FASTA(如FASTA2及FASTA3)提供查询及检索序列间的最佳重叠区的比对及序列相同性百分比(Pearson，Methods Enzymol.183：63-98(1990)；Pearson，Methods Mol.Biol.132：185-219(2000))。当比较本发明序列与包含大量源自各种生物的序列的数据库时，另一优选算法为计算机程序BLAST，特别是blastp或tblastn，其使用该程序所提供的缺省参数。请见如Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410(1990)；Altschul等人，Nucleic Acids Res.25：3389-402(1997)。

比较多肽序列同源性所需的长度通常至少约16个氨基酸残基，通 常为至少约20个残基，更常为至少约24个残基，典型为至少约28个残基，且优选为多于约35个残基。当检索包含大量源自各种生物的序列的数据库时，最好比较氨基酸序列。

在此所用的″标记″或″标记的″是指将另一分子掺入抗体中。于一实施方案中，标记为一种可检测的标记，如掺入放射标记的氨基酸或附着至生物素化部分的多肽，其可通过标记的抗生物素蛋白(如包含荧光标记或酶促活性的链霉抗生物素蛋白，其可由光学或比色法检测)进行检测。于另一实施方案中，标记或标记可具治疗性，如药物缀合物(drug conjugate)或毒素。标记多肽及糖蛋白的各种方法在本领域中已知且可运用。多肽的标记实例包含(但不限于)下列：放射性同位素或放射性核素(如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111I n、125I、131I、荧光标记(如FITC、罗丹明(rhodamine)、镧系元素磷光体(lanthanide phosphors))、酶促标记(如辣根过氧化酶(horseradish peroxida e)、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标记、生物素化基团、可由二级报告子(如亮氨酸拉链成对序列，二抗的结合位点、金属结合结构域、表位标签)识别的预先测定的多肽表位、磁性剂(如钆螯合物)、毒素，如百日咳毒素、紫杉醇、细胞松弛素B(cytochalasin B)、短杆菌肽D(gramicidin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、吐根碱(emetine)、丝裂霉素(mitomycin)、鬼臼亚乙苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、长春花新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、道诺红霉素(daunorubicin)、dihydroxy anthracindione、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-脱氢睪酮、糖皮质激素、普罗卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)及嘌呤霉素(puromycin)与其类似物或同源物。于某些实施方案中，标记通过不同长度的间隔臂附着以降低可能的空间障碍。

纵观本说明书及权利要求，应了解″包含(comprise)″等词或如″包含(comprises)″或″包含(comprising)″等变形意味着包含指定的整体或整体群但不排除任何其它整体或整体群。

人类抗M-CSF抗体及其特性 

于一实施方案中，本发明提供人源化抗M-CSF抗体。于另一实施方案中，本发明提供人类抗M-CSF抗体。于某些实施方案中，人类抗M-CSF抗体的制备是通过免疫非人类转基因动物(如啮齿类动物)，其基因组包括人类免疫球蛋白基因以便啮齿类动物可产生人类抗体。

本发明抗M-CSF抗体可包括人类κ或人类λ轻链或由此衍生的氨基酸序列。于某些包括κ轻链的实施方案中，轻链可变区(VL)是部分由人类VkO12、VkL2、VkL5、VkA27或VkB3基因及Jk1、Jk2、Jk3或Jk4基因所编码。于本发明特定实施方案中，轻链可变区是由VkO12/JK3、VkL2/JK3、VkL5/JK3、VkL 5/JK4、VkA27/JK4或VkB3/JK1基因编码。

于某些实施方案中，M-CSF抗体的VL相对于种系氨基酸序列包括一个或多个氨基酸替换。于某些实施方案中，抗M-CSF抗体的VL包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸替换(相对于种系氨基酸序列)。于某些具体实施方案中，一个或多个源自种系的替换位于轻链的CDR区。于某些具体实施方案中，相对于种系的氨基酸替换位于一个或多个与位于下列抗体中任一个或多个VL中的相对于种系的替换相同的位置上：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1。如抗M-CSF抗体的VL可包含一个或多个相对于种系的发现于抗体88的VL中的氨基酸替换，和相对于种系的见于抗体252的VL中的一个或多个其它氨基酸替换，其中抗体252使用与抗体88相同的VK基因。于某些具体实施方案中，其氨基酸改变位于参考抗体的一个或多个相同位置，但涉及不同于参考抗体的突变。

于某些具体实施方案中，相对于种系的氨基酸改变于一个或多个与抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、 9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的任一VL上的相同位置产生，但所述改变可能反映了在相对于参考抗体中的氨基酸位置上的保守性氨基酸替换基。如，若于这些抗体之一中的特定位置已相对种系发生改变且为谷氨酸，则可于该位置替代天冬氨酸。同样地，若相对于种系的氨基酸替换为丝氨酸，可于该位置以苏氨酸取代丝氨酸。保守性氨基酸替换先前已有叙述。

于某些具体实施方案中，人类抗M-CSF抗体的轻链包括与抗体252(SEQ ID NO：4)、88(SEQ ID NO：8)、100(SEQ ID NO：12)、3.8.3(SEQ ID NO：16)、2.7.3(SEQ ID NO：20)、1.120.1(SEQ ID NO：24)、9.14.4I(SEQ ID NO：28)、8.10.3F(SEQ I D NO：32)、9.7.2IF(SEQ ID NO：36)、9.14.4(SEQ ID NO：28)、8.10.3(SEQ ID NO：44)、9.7.2(SEQ ID NO：48)、9.7.2C-Ser(SEQ ID NO：52)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO：56)、8.10.3C-Ser(SEQ ID NO：60)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO：60)、9.7.2-CG2(SEQ ID NO：52)、9.7.2-CG4(SEQ ID NO：52)、9.14.4-CG2(SEQ ID NO：56)、9.14.4-CG4(SEQ ID NO：56)、9.14.4-Ser(SEQ ID NO：28)、9.7.2-Ser(SEQ ID NO：48)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO：44)、8.10.3-CG4(SEQ ID NO：60)8.10.3FG1(SEQ ID NO：32)或9.14.4G1(SEQ ID NO：28)的VL的氨基酸序列相同的氨基酸序列，或者具有多达1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守性氨基酸替换及/或总数多达3个的非-保守性氨基酸替换的该氨基酸序列。于某些具体实施方案中，轻链包括任何一种上述抗体的CDR1起点至CDR3末端的氨基酸序列。

于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体的轻链至少包括种系或在此所述的抗体序列的轻链CDR1、CDR2或CDR3。于另一具体实施方案中，该轻链可包括独立地选自抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG 2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、 8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的CDR1、CDR2或CDR3区，或者各具有少于4个或少于3个保守性氨基酸替换及/或总计3个或更少非-保守性氨基酸替换的CDR区。于其它具体实施方案中，抗M-CSF抗体的轻链包括轻链CDR1、CDR2或CDR3，其各独立地选自具有包括选自SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的VL区氨基酸序列，或者由选自SEQ ID NOS：3、7、11、27、31、35、43或47的编码VL区的核酸分子编码的轻链可变区的抗体的CDR1、CDR2及CDR3区。抗M-CSF抗体的轻链可包括抗体的CDR1、CDR2及CDR3区，该抗体包括选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2I F、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Se r、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Se r、8.10.3-CG 2、9.7.2-CG 2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的VL区或SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列。

于某些具体实施方案中，轻链包括抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2I F、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG 2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的CDR1、CDR2及CDR3区，或者各自具有少于4个或少于3个保守性氨基酸替换及/或总数为3个或更少的非-保守性氨基酸替换的该CDR区。

关于重链，于某些具体实施方案中，重链可变区氨基酸序列是由人类VH3-11、VH3-23、VH3-7、VH1-18、VH3-33、VH 3-48基因及JH4、JH6、JH4b或JH6b基因部分编码。于本发明特定具体实施方案中，重链可变区是由VH3-11/DH7-27/JH6、VH3-7/DH6-13/JH4、VH3-23/DH1-26/JH4、VH3-11/DH7-27/JH4、VH3-33/DH1-26/JH4、VH1-18/DH4-23/JH4、VH3-11/DH7-27/JH4b、VH3-48/DH1-26/JH4b、VH3-11/DH6-13/JH6b、VH3-11/DH7-27/JH4b、VH3-48/DH1-6/JH4b或VH3-11/DH6-13/JH6b基因编码。于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体的VH包含一个或多个相对于 种系氨基酸序列的氨基酸替换、缺失或插入(添加)。于某些具体实施方案中，重链的可变区包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个相对于种系氨基酸序列的突变。于某些具体实施方案中，该突变为相对于种系氨基酸序列的非-保守性替换。于某些具体实施方案中，突变位于重链的CDR区。于某些具体实施方案中，氨基酸改变于一个或多个与源自任一个或多个抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2I F、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的VH的种系的突变相同的位置上产生。于其它具体实施方案中，氨基酸改变是位于一个或多个参考抗体的相同位置，但包含不同的突变。

于某些具体实施方案中，重链包括抗体252(SEQ ID NO：2)、88(SEQ ID NO：6)、100(SEQ ID NO：10)、3.8.3(SEQ ID NO：14)、2.7.3(SEQ ID NO：18)、1.120.1(SEQ.ID NO：22)、9.14.4I(SEQ ID NO：26)、8.10.3F(SEQ ID NO：30)、9.7.2IF(SEQ ID NO：34)、9.14.4(SEQ ID NO：38)、8.10.3(SEQ ID NO：30)、9.7.2(SEQ ID NO：46)、9.7.2C-Ser(SEQ ID NO：50)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO：54)、8.10.3C-Ser(SEQ ID NO：58)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO：62)、9.7.2-CG2(SEQ ID NO：66)、9.7.2-CG4(SEQ ID NO：70)、9.14.4-CG2(SEQ ID NO：74)、9.14.4-CG4(SEQ ID NO：78)、9.14.4-Ser(SEQ ID NO：82)、9.7.2-Ser(SEQ ID NO：86)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO：90)8.10.3-CG4(SEQ ID NO：94)、8.10.3FG1(SEQ ID NO：98)或9.14.4G1(SEQ ID NO：102)的可变区(VH)的氨基酸序列，或者具有多达1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守性氨基酸替换及/或总共3个的非-保守性氨基酸替换的该氨基酸序列。于某些具体实施方案中，该重链包括任一前述抗体中自CDR1起点至CDR 3末端的氨基酸序列。

于某些具体实施方案中，该重链包括抗体252、88、100、3.8.3、 2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Se r、9.14.4C-Se r、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG 2、9.14.4-CG4、9.14.4-Se r、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的重键CDR1、CDR2及CDR 3区，或者各具有少于8个，少于6个，少于4个或少于3个保守性氨基酸替换及/或总共3个或更少的非-保守性氨基酸替换的该CDR区。

于某些具体实施方案中，重链如前所述包括了在此所述的抗体序列的种系或抗体CDR 3，且亦可包括种系序列的CDR1及CDR2区，或者可包括抗体序列的CDR1及CDR2区，其各自独立地选自包括选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1抗体的重链的抗体。于另一具体实施方案中，重链包括在此所述的抗体序列的CDR 3，且亦可包括CDR1及CDR2区，其各自独立地选自重链可变区的CDR1及CDR2区，该重链可变区包括选自SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的VH区氨基酸序列，或者其可由选自SEQ ID NOS：1、5、9、25、29、33、37、45、97或101的编码VH区的核酸序列编码。于另一具体实施方案中，该抗体包括如上所述的轻链及如上所述的重链。

一种可产生的氨基酸替换类型为将一个或多个抗体中的半胱氨酸(其可能为化学活性的)改变为另一种残基，如(不限于)丙氨酸或丝氨酸。于一具体实施方案中，存在非典型半胱氨酸的替换。该替换可位于可变区的构架区或抗体恒定区中。于另一具体实施方案中，该半胱氨酸是位于抗体的非典型(non-canonical)区。

另一种可产生的氨基酸替换类型为移除抗体中任何可能的蛋白质水解位点，特别是位于抗体中可变区的CDR或构架区或恒定区中的。替 换半胱氨酸残基及移除蛋白质水解位点可减少抗体产物中任何异质性的风险并从而增强其同质性。另一类的氨基酸替换是移除可能形成脱胺作用位点的天冬酰胺-甘氨酸对，其是通过改变该残基的一或二个残基同时改变来完成。

于某些具体实施方案中，本发明抗M-CSF抗体重链的C-末端赖氨酸并不存在(Lewis D.A.等人，Anal.Chem，66(5)：585-95(1994))。于本发明多个具体实施方案中，抗M-CSF抗体的重链及轻链任选包含信号序列。

一方面，本发明涉及抑制人类抗-M-CSF单克隆抗体及制备该抗体的改造的细胞系。表1列举编码下列单克隆抗体的重链及轻链的可变区的核酸及相对应的预期的氨基酸序列的序列识别码(SEQ ID NOS)：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3及9.7.2。另外的变异抗体9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG48.10.3FG1或9.14.4G1可通过本领域普通技术人员所知方法来制备。

表1

抗M-CSF抗体的种类及亚类

抗M-CSF抗体的种类及亚类可通过任何本领域中已知的方法测定。通常，抗体的种类及亚类可使用对特定抗体的种类及亚类具特异性的抗体进行测定。此种抗体已商品化。种类及亚类可通过ELISA或Western 印迹法(Western Blot)以及其它技术来测定。或者，种类及亚类可如下进行测定：对所有或部分的抗体重链及/或轻链的恒定区进行测序，比较其氨基酸序列与已知的各种免疫球蛋白的种类及亚类的氨基酸序列，并确定抗体的种类及亚类。

于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体为单克隆抗体。抗M-CSF抗体可为IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。于优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体为IgG且为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类。于另一优选具体实施方案中，该抗体为亚类IgG2或IgG4。于另一优选具体实施方案中，该抗体为亚类IgG1。

物种及分子选择性

于本发明另一方面中，抗M-CSF抗体同时显示出物种及分子选择性。于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体可与人类、cynomologus猴及小鼠M-CSF结合。遵照说明书的教导，可使用本领域中所熟知的方法测定抗M-CSF抗体的物种选择性。例如可使用Western印迹法、FACS、ELISA、RIA、细胞增殖试验或M-CSF受体结合分析测定物种选择性。于一优选具体实施方案中，可使用细胞增殖试验或ELISA测定物种选择性。

于另一具体实施方案中，抗M-CSF抗体对M-CSF具有比其对GM-/G-CSF选择性至少大100倍的选择性。于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体并不会与除M-CSF外的任何其它蛋白质显示任何适宜的特异性结合。可依照说明书指示使用本领域中所熟知方法测定抗M-CSF抗体对M-CSF的选择性。例如可使用Western印迹法、FACS、ELISA或RIA测定选择性。

确认由抗M-CSF抗体识别的M-CSF表位

本发明提供一种人类抗M-CSF单克隆抗体，其可与M-CSF结合并与同一表位竞争、交叉竞争及/或结合，及/或以与下列抗体相同的KD与M-CSF结合，(a)选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、 9.14.4-CG4、9.14.4-Se r、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的抗体；(b)抗体，其包括具有SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的氨基酸序列的重链可变区，(c)抗体，其包括具有SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列的轻链可变区；(d)抗体，其包括(b)中定义的重链可变区及(c)中定义的轻链可变区。

可通过使用本领域中已知的方法测定抗体是否可与相同表位进行结合、竞争结合、交叉竞争结合，或具有与一抗M-CSF抗体相同的KD。于一具体实施方案中，可使本发明的抗M-CSF抗体于饱和条件下与M-CSF结合，然后测量受试抗体与M-CSF结合的能力。若受试抗体与抗M-CSF抗体可于同一时间与M-CSF结合，则受试抗体与所述的抗M-CSF抗体结合不同表位。然而，若受试抗体不能同时与M-CSF结合，则受试抗体结合相同表位、重叠表位或位于人类抗M-CSF抗体所结合的表位邻近的表位。此实验可使用ELISA、RIA或FACS来进行。于一优选具体实施方案中，实验是使用BIACORETM进行。

抗M-CSF抗体对M-CSF的结合亲和力

于本发明某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体以高亲和力与M-CSF结合。于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体与M-CSF结合的KD为1x10-7M或以下。于其它优选具体实施方案中，抗体与M-CSF结合的KD为1x10-8M、1x10-9M、1x10-10M、1x10-11M、1x10-12M或以下。于某些具体实施方案中，KD为1pM至500pM。于其它具体实施方案中，KD为500pM至1μM。于其它具体实施方案中，KD为1μM至100nM。于其它具体实施方案中，KD为100mM至10nM。于一优选具体实施方案中，抗体以与选自下列的抗体实质相同的KD与M-CSF结合：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2I F、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1。于另 -优选具体实施方案中，抗体以与包括选自下列抗体的轻链CDR2和/或重链CDR3的抗体实质上相同的KD与M-CSF结合：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1。于另一优选具体实施方案中，抗体以与一种抗体实质上相同的KD与M-CSF结合，后者抗体包括具有SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的氨基酸序列的重链可变区，或者该抗体包括具有SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列的轻链可变区。于另一优选具体实施方案中，抗体以与一种抗体实质上相同的KD与M-CSF结合，后者抗体包括具有SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的VL区氨基酸序列的轻链可变区的CDR2，且任选包括其CDR1及/或CDR3，或者该抗体包括具有SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的VH区氨基酸序列的重链可变区的CDR 3，且任选包括其CDR1及/或CDR2。

于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体具有低解离速率。于某些具体实施方案中，抗M-CSF抗体的koff为2.0x10-4s-1或更低。于其它优选具体实施方案中，抗体以2.0x10-5或者2.0x10-6s-1或更低的Koff与M-CSF结合。于某些具体实施方案中，koff实质上与在此所述的抗体相同，如选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的抗体。于某些具体实施方案中，抗体以与一种抗体实质上相同的koff与M-CSF结合，后一抗体包括(a)选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、 8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的抗体的重链的CDR 3，及任选包括其CDR1及/或CDR2；或(b)选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的抗体轻链的CDR2，及任选包括其CDR1及/或CDR3。于某些具体实施方案中，抗体以与一种抗体实质上相同的koff与M-CSF结合，后一抗体包括具有SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的氨基酸序列的重链可变区；或者该抗体包括具有SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列的轻链可变区。于另一优选具体实施方案中，抗体以实质上与一种抗体相同的koff与M-CSF结合，后一抗体包括具有SEQ ID NO：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列的轻链可变区的CDR2，并任选包括其CDR1及/或CDR3；或者该抗体包括具有SEQ ID NO：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的氨基酸序列的重链可变区的CDR3，并任选包括其CDR1及/或CDR2。

抗M-CSF抗体对M-CSF的结合亲和力及解离速率可由本领域中已知的方法来测定。结合亲和力可由竞争性ELISAs、RLAs、表面胞质共振(如使用BIACORETM技术)来测量。解离速率可由表面胞质共振来测量。优选地，结合亲和力及解离速率可由表面胞质共振测量。更优选地，结合亲和力及解离速率可使用BIACORETM技术来测量。实施例VI中举例说明了通过BIACORETM技术测定抗M-CSF单克隆抗体的亲和力常数的方法。抗M-CSF抗体抑制M-CSF活性

M-CSF与c-fms结合的抑制

于另一具体实施方案中，本发明提供一种抗M-CSF抗体，其可抑制M-CSF与c-fms受体结合并阻断或防止c-fms的活化作用。于另一优选具体实施方案中，M-CSF属于人类。于另一优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体为人类抗体。IC50可经由ELISA、RIA及基于细胞的分析如细胞增殖试验、全血单核细胞形状变化分析或受体结合抑制分析进行测量。于一具体实施方案中，抗体或其部分抑制细胞增殖，通过细胞增殖试验测量的IC50为不超过8.0x10-7M，优选为不超过3x10-7M，或者优选为不超过8x10-8M。于另一具体实施方案中，由单核细胞形状变化分析测量的IC50不超过2x10-6M，优选为不超过9.0x10-7M，或者更优选为不超过9x10-8M。于另一优选具体实施方案中，由受体结合分析测量的IC50不超过2x10-6M，优选为不超过8.0x10-7M，或者更优选为不超过7.0x10-8M。实施例III、IV及V举例了不同类型的分析。

另一方面，与无抗体的细胞增殖相比，本发明的抗M-CSF抗体抑制单核细胞/巨噬细胞响应M-CSF的增殖达至少20％，优选为40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、80％、85％、90％、95％或100％。制备抗体及可产生抗体的细胞系的方法

免疫

于某些具体实施方案中，人类抗体如下制备：用M-CSF抗原对非人类动物进行免疫，其基因组中包括某些或完整的人类免疫球蛋白重链及轻链基因座。于一优选具体实施方案中，非人类动物为XENOMOUSETM动物(Abgenix Inc.，Fremont，CA)。另一种可利用的非-人类动物为Medarex制备的转基因小鼠(Medarex公司，Princeton，NJ)。

XENOMOUSETM为改造的小鼠品系，其包括大片段的人类免疫球蛋白重链及轻链基因座且小鼠抗体产生缺陷。请见如Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)及美国专利号5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598、6,130,364、6,162,963及6,150,584。亦见于WO 91/10741、WO94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、 WO 98/50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560及WO 00/037504中。

另一方面，本发明提供一种由非-人类、非-小鼠动物制备抗M-CSF抗体的方法，其是以M-CSF抗原对包括人类免疫球蛋白基因座的非-人类转基因动物进行免疫。可使用上述引用的文件中的方法制造此种动物。叙述于这些文件中的方法可如美国专利5,994,619所述的方法加以修改。美国专利5,994,619描述了新颖的源自猪及牛的培养内细胞团(CICM)细胞及细胞系，及已插入异源DNA的转基因CICM细胞的制备方法。CICM转基因细胞可用于制造克隆的转基因胚胎、胎儿及后代。′619专利中亦描述制造转基因动物的方法，其可传递异源DNA至其子代。于优选具体实施方案中，非-人类动物为大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马。

XENOMOUSETM小鼠可产生完整人类抗体的类成人所有组成成分(adult-like human repertoire)并可产生抗原特异性人类抗体。于某些具体实施方案中，XENOMOUSETM小鼠通过导入兆碱基大小的人类重链基因座及κ轻链基因座的种系表形酵母人工染色体(YAC)片段后可包含近80％的人类抗体V基因所有组成成分。于其它具体实施方案中，XENOMOUSETM小鼠进一步包含近乎所有λ轻链基因座。请见Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)，Green和Jakobovits，J.Exp.Med.188：483-495(1998)及WO 98/24893，其公开内容以引用的方式并入本文中。

于某些具体实施方案中，包括人类免疫球蛋白基因的非-人类动物为具有人类免疫球蛋白″微小基因座(minilocus)″的动物。于微小基因座研究中，藉由内含源自Ig基因座的单独基因来模拟外源性Ig基因座。依此，可将一种或多种VH基因、一种或多种DH基因、一种或多种JH基因、mu恒定区及第二恒定区(优选为γ恒定区)形成用以插入动物体中的构建体。该研究特别描述于美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,591,669、5,612,205、5,721,367、5,789,215及5,643,763，其以引用的方式并入本文中。

另一方面，本发明提供一种制备人源化抗M-CSF抗体的方法。于某些具体实施方案中，非-人类动物于可允许抗体产生的条件下，如下所述用M-CSF抗原免疫。从动物分离产生抗体的细胞，与骨髓瘤融合以产生杂交瘤，并分离出可编码目的抗M-CSF抗体的重链及轻链的核酸。随后使用本领域普通技术人员已知及如下进一步所述的技术改造这些核酸以降低非-人类序列含量，即，将抗体人源化以减少人体中的免疫反应。

于某些具体实施方案中，M-CSF抗原为分离及/或纯化的M-CSF。于优选具体实施方案中，M-CSF抗原为人类M-CSF。于某些具体实施方案中，M-CSF抗原为M-CSF的片段。于某些具体实施方案中，M-CSF片段为M-CSF的细胞外结构域。于某些具体实施方案中，M-CSF片段包括至少一种M-CSF的表位。于其它具体实施方案中，M-CSF抗原为一种细胞，其可于表面表达或过表达M-CSF或其免疫原性片段。于某些具体实施方案中，M-CSF抗原为一种M-CSF融合蛋白。M-CSF可使用已知技术由天然来源纯化。重组M-CSF是商业可获得的。

动物的免疫可由本领域中已知的任何方法进行。请见如Harlow和Lane，Antibody：ALaboratory Manual，New York：Cold Spring HarborPress，1990。免疫非-人类动物(如小鼠、大鼠、绵羊、山羊、猪、牛及马)的方法于本领域中所熟知。请见如前述的Harlow和Lane，及美国专利5,994,619号。于一优选具体实施方案中，M-CSF抗原是与佐剂一同给药以促进免疫应答。示范性佐剂包含弗氏(Freund′s)完全或不完全佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。此种佐剂可通过将多肽隔离于局部沉积中以保护多肽免于快速消失，或者其可包含能刺激宿主分泌对巨噬细胞有趋化性的因子及其它免疫系统组分的物质。优选地，若给予多肽时，免疫方案中可包含给予一或多次多肽，延续至数周以上的时间。实施例I例示一种可于XENOMOUSETM小鼠中制备抗M-CSF单克隆抗体的方法。

抗体及抗体产生细胞系的制备

以M-CSF抗原对动物进行免疫后，可由动物获得抗体及/或抗体产 生细胞。于某些具体实施方案中，包含抗M-CSF抗体的血清是通过放血或处死动物由动物获得。血清可以其取自动物时的原样直接使用，可由血清获得免疫球蛋白部分，或者可由血清纯化出抗M-CSF抗体。

于某些具体实施方案中，产生抗体的无限增殖化细胞系是由免疫动物所分离的细胞所制造。免疫后，处死动物并将淋巴结及/或脾脏B细胞永生化。永生化细胞的方法包含(但不限于)以致癌基因对其进行转染、以致癌基因病毒对其进行感染、于可选择永生化细胞的条件下进行培养、以致癌性或致突变化合物处理、将其与已永生化的细胞(如骨髓瘤细胞)融合以及失活肿瘤抑制基因。请见如前述Harlow和Lane。若采用与骨髓瘤细胞融合的方法，骨髓瘤细胞优选为不分泌免疫球蛋白多肽(非-分泌性细胞系)的。永生化细胞是使用M-CSF、其部分或表达M-CSF的细胞来进行筛选。于一优选具体实施方案中，最初的筛选是使用酶联免疫分析法(ELISA)或放射免疫分析法进行。ELISA筛选的实例见于WO 00/37504，以引用的方式并入本文中。

将可产生抗M-CSF抗体的细胞(如杂交瘤)加以选择、克隆并进一步筛选其所需的特性，包含强劲生长力、高抗体产量及所需的抗体特性，如下进一步讨论的。杂交瘤可于同系的(syngeneic)动物、缺乏免疫系统的动物(如裸鼠)的体内或于体外细胞培养中来进行扩展。选择、克隆及扩展杂交瘤的方法为本领域普通技术人员所熟知。

于一优选具体实施方案中，该免疫动物为非-人类动物，其可表达人类免疫球蛋白基因且脾脏B细胞可与源自该非-人类动物相同物种的骨髓瘤细胞系融合。于一优选具体实施方案中，该免疫动物是XENOMOUSETM动物且该骨髓瘤细胞系为一种非-分泌性小鼠骨髓瘤。于一优选具体实施方案中，骨髓瘤细胞株为P3-X63-AG8-653。请见实施例I。

因此于一具体实施方案中，本发明提供制备能产生针对M-CSF的人类单克隆抗体或其片段的细胞系的方法，其包括：(a)以M-CSF、M-CSF部分或可表达M-CSF的细胞或组织对在此所述的非-人类转基因动物进行免疫；(b)使转基因动物产生对M-CSF的免疫应答；(c)由转基因动物分离B淋巴细胞；(d)永生化B淋巴细胞；(e)产生永生化B淋巴细胞的单 独单克隆细胞群；及(f)筛选永生化的B淋巴细胞以确认针对M-CSF的抗体。

另一方面，本发明提供可产生人类抗M-CSF抗体的杂交瘤。于一优选具体实施方案中，该杂交瘤为如上述的鼠杂交瘤。于其它具体实施方案中，该杂交瘤可于非-人类，非-小鼠物种中制备，如大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马。于另一具体实施方案中，该杂交瘤为人类杂交瘤。

于另一优选具体实施方案中，转基因动物以M-CSF进行免疫，初级细胞(如脾脏或外周血细胞)由免疫转基因动物分离出并确认能产生特异于目的抗原的单独细胞。将源自各独立细胞的聚腺苷酸化mRNA分离并进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)，使用有义引物，其与可变区序列退火，如可识别大部分或全部人类重链与轻链可变区基因的FR1区的简并引物，及反义引物，其可与恒定区或接合区序列退火。随后将重链与轻链可变区的cDNA克隆并表达于任何适当宿主细胞中(如骨髓瘤细胞)，所表达的嵌合抗体拥有分别的免疫球蛋白恒定区，如重链及κ或λ恒定区。请见Babcook，J.S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93：7843-48，1996，其以引用的方式并入本文中。然后以在此所述方法确任并分离抗M-CSF抗体。

于另一具体实施方案中，噬菌体展示技术可用于提供包含具有对M-CSF不同亲和力的抗体的所有组成成分的文库。为制备该所有组成成分，不需将源自免疫动物的B细胞永生化。反之，初级B细胞可直接做为DNA来源。得自B细胞(如源自脾脏)的cDNA混合物可用于制备表达文库，如转染至大肠杆菌(E.coli)的噬菌体展示文库。测试所产生细胞对M-CSF的免疫活性。可自该文库鉴别出高亲和力人类抗体的技术描述于Griffiths等人，EMBO J，13：3245-3260(1994)；Nissim等人，出处同上，692-698页及Griffiths等人，出处同上，12：725-734。最后，自该文库中确认出可产生对抗原产生所需的结合亲和力的克隆，并将可编码负责该结合的产物的DNA回收及用于标准重组表达操作。噬菌体展示文库亦可使用先前操作的核苷酸序列来构建并以类似方式进行筛选。可编码重链及轻链的cDNA通常是独立提供或连接形成Fv类似 物以产生噬菌体文库。

随后于噬菌体文库中筛选对M-CSF具有最高亲和力的抗体并由适当克隆收集遗传物质。更多轮的筛选可增加所分离原始抗体的亲和力。

另一方面，本发明提供可产生人类抗M-CSF抗体的杂交瘤。于一优选具体实施方案中，该杂交瘤为如上所述的小鼠杂交瘤。于其它具体实施方案中，该杂交瘤可于非-人类、非-小鼠物种(如大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马)中产生。于另一具体实施方案中，该杂交瘤为人类杂交瘤。

制作抗体的核酸、载体、宿主细胞及重组方法

核酸

本发明亦包含编码抗M-CSF抗体的核酸分子。于某些具体实施方案中，由不同核酸分子编码抗M-CSF免疫球蛋白的重链及轻链。于其它具体实施方案中，同一核酸分子编码抗M-CSF免疫球蛋白的重链及轻链。于一具体实施方案中，核酸编码本发明的M-CSF抗体。

于某些具体实施方案中，编码轻链的可变区的核酸分子包括人类VKL 5、O 12、L2、B 3、A27基因及JK1、JK2、JK3或JK4基因。

于某些具体实施方案中，编码轻链的核酸分子编码在种系氨基酸序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个突变的氨基酸序列。于某些具体实施方案中，核酸分子所包括的核苷酸序列编码与种系序列相比包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非-保守性氨基酸替换及/或1、2或3非-保守性替换的VL氨基酸序列。替换可位于CDR区、构架区，或于恒定区中。

于某些具体实施方案中，核酸分子编码与种系序列相比包括一个或多个变异的VL氨基酸序列，其与见于抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1之一的VL中的变异相同。

于某些具体实施方案中，与种系序列相比，核酸分子编码至少三种见于抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4、8.10.3或9.7.2之一的VL中的氨基酸突变。

于某些具体实施方案中，该核酸分子包括一种核苷酸序列，其可编码单克隆抗体252(SEQ ID NO：4)、88(SEQ ID NO：8)、100(SEQ ID NO：12)、3.8.3(SEQ ID NO：16)、2.7.3(SEQ ID NO：20)、1.120.1(SEQ ID NO：24)、9.14.4I(SEQ ID NO：28)、8.10.3F(SEQ ID NO：32)、9.7.2IF(SEQ ID NO：36)、9.14.4(SEQ ID NO：28)、8.10.3(SEQ ID NO：44)、9.7.2(SEQ ID NO：48)、9.7.2C-Ser(SEQ ID NO：52)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO：56)、8.10.3C-Ser(SEQ ID NO：60)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO：60)、9.7.2-CG2(SEQ ID NO：52)、9.7.2-CG4(SEQ ID NO：52)、9.14.4-CG2(SEQ ID NO：56)、9.14.4-CG4(SEQ ID NO：56)、9.14.4-Ser(SEQ ID NO：28)、9.7.2-Ser(SEQ ID NO：48)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO：44)、8.10.3-CG4(SEQ ID NO：60)、8.10.3FG1(SEQ ID NO：32)或9.14.4G1(SEQ ID NO：28)的VL氨基酸序列或其部分。于某些具体实施方案中，该部分至少包括CDR2区。于某些具体实施方案中，核酸可编码该抗体的轻链CDR的氨基酸序列。于某些具体实施方案中，该部分为包括CDR1-CDR3的连续部分。

于某些具体实施方案中的核酸分子包括一种核苷酸序列，其可编码SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60之一的轻链氨基酸序列。于某些优选具体实施方案中，核酸分子包括SEQ ID NOS：3、7、11、27、31、35、43或47的轻链核苷酸序列或其部分。

某些具体实施方案中，核酸分子所编码的VL氨基酸序列与下列序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%相同:显示于图4的VL氨基酸序列或抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、 9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1中任一种抗体的VL氨基酸序列，或任一SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列。本发明核酸分子包含核酸，其可于高度严格条件(如上所述)与下列核酸序列杂交：编码SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的轻链氨基酸序列的核酸序列或具有SEQ ID NOS：3、7、11、27、31、35、43或47的轻链核酸序列的核酸序列。

于另一具体实施方案中，该核酸编码选自下列抗体的全长轻链：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1或编码包括SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的氨基酸序列的轻链及轻链恒定区，或者包括突变的轻链。此外，该核酸可包括SEQ ID NOS：3、7、11、27、31、35、43或47的轻链核苷酸序列及编码轻链恒定区的核苷酸序列，或编码包括突变的轻链的核酸分子。

于另一优选具体实施方案中，该核酸分子编码重链的可变区(VH)，其包括人类VH 1-18、3-33、3-11、3-23、3-48或3-7基因序列或由其所衍生的序列。于不同具体实施方案中，核酸分子包括人类VH 1-18基因、DH4-23基因及人类JH4基因；人类VH3-33基因、人类DH1-26基因及人类JH4基因；人类VH3-11基因、人类DH7-27基因及人类JH4基因；人类VH3-11基因、人类DH7-27基因及人类JH6基因；人类VH3-23基因、人类DH1-26基因及人类JH4基因；人类VH3-7基因、人类DH6-13基因及人类JH4基因；人类VH3-11基因、人类DH7-27基因及人类JH4b基因；人类VH3-48基因、人类DH1-26基因5及人类JH4b基因；人类VH3-11基因、人类DH6-13基因及人类JH6b基因或源自该人类基因的序列。

于某些具体实施方案中，与人类V、D或J基因的种系氨基酸序列比 较，该核酸分子所编码的氨基酸序列包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18个突变。于某些具体实施方案中，该突变位于VH区。于某些具体实施方案中，该突变位于CDR区。

于某些具体实施方案中，相较于种系序列，该核酸分子编码一个或多个氨基酸突变，其与见于单克隆抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Se r、8.10.3C-Se r、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Se r、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的VH的氨基酸突变相同。于某些具体实施方案中，相较于种系序列，该核酸编码至少三个氨基酸突变，其与见于上列单克隆抗体中的至少三个氨基酸突变相同。

于某些具体实施方案中，核酸分子包括核苷酸序列，其可编码下列抗体中至少部分的VH氨基酸序列：252(SEQ ID NO：2)、88(SEQ ID NO：6)、100(SEQ ID NO：10)、3.8.3(SEQ ID NO：14)、2.7.3(SEQ ID NO：18)、1.120.1(SEQ ID NO：22)、9.14.4I(SEQ ID NO：26)、8.10.3F(SEQ ID NO：30)、9.7.2IF(SEQ ID NO：34)、9.14.4(SEQ ID NO：38)、8.10.3(SEQ ID NO：30)、9.7.2(SEQ ID NO：46)、9.7.2C-Ser(SEQ ID NO：50)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO：54)、8.10.3C-Ser(SEQ ID NO：58)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO：62)、9.7.2-CG2(SEQ ID NO：66)、9.7.2-CG4(SEQ ID NO：70)、9.14.4-CG2(SEQ ID NO：74)、9.14.4-CG4(SEQ ID NO：78)、9.14.4-Ser(SEQ ID NO：82)、9.7.2-Ser(SEQ ID NO：86)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO：90)、8.10.3-CG4(SEQ ID NO：94)8.10.3FG1(SEQ ID NO：98)或9.14.4G1(SEQ ID NO：102)，或者该序列具有保守性氨基酸突变及/或总计3个或更少的非保守性氨基酸替换。于不同具体实施方案中，该序列编码一个或多个CDR区，优选为CDR3区、全部3个CDR区、包含CDR1-CDR3的连续部分或整个VH区。

于某些具体实施方案中，核酸分子包括重链核苷酸序列，其编码SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、 58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102之一的氨基酸序列。于某些优选具体实施方案中，核酸分子至少包括SEQ ID NO：1、5、9、25、29、33、37、45、97或101的重链核苷酸序列的一部分。于某些具体实施方案中，该部分编码VH区、CDR3区、全部3个CDR区或包含CDR1-CDR3的连续区。

于某些具体实施方案中，核酸分子编码VH氨基酸序列，其与显示于图4中的VH氨基酸序列或与SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102中任何一种VH氨基酸序列至少有70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同。本发明核酸分子包含在高度严格条件下(如前所述)可与下列核苷酸序列进行杂交的核酸：编码SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的重链氨基酸序列的核苷酸序列，或为具有SEQ ID NOS：1、5、9、25、29、33、37、45、97或101的核苷酸序列。

于另一具体实施方案中，该核酸编码选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的抗体的完整重链，或具有SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的氨基酸序列的重链及重链的恒定区，或包括突变的重链。此外，该核酸可包括SEQ ID NOS：1、5、9、25、29、33、37、45、97或101的重链核苷酸序列及编码轻链恒定区的核苷酸序列或编码包括突变的重链的核酸分子。

编码抗M-CSF抗体的重链或完整轻链的核酸分子或其部分可由任何能产生此种抗体的来源分离。于各种具体实施方案中，核酸分子是由以M-CSF免疫的动物所分离的B细胞分离或由源自此种表达抗M-CSF 抗体的B细胞的无限增殖化细胞所分离。分离编码抗体的mRNA的方法于本领域中所熟知。请见如Sambrook等人。mRNA可用于产生cDNA以用于聚合酶链反应(PCR)或抗体基因的cDNA克隆。于一优选具体实施方案中，该核酸分子分离自杂交瘤，该杂交瘤具有来自非-人类转基因动物的产生人类免疫球蛋白的细胞作为其融合配偶体之一。于一优选具体实施方案中，可产生人类免疫球蛋白的细胞由XENOMOUSETM动物分离。于另一具体实施方案中，可产生人类免疫球蛋白的细胞是源自如上述的非-人类、非-小鼠转基因动物。于另一具体实施方案中，核酸是分离自非-人类、非-转基因动物。也可采用分离自非-人类、非-转基因动物的核酸分子，用于例如人源化抗体。

于某些具体实施方案中，编码本发明抗M-CSF抗体重链的核酸可以包括编码本发明VH区的核苷酸序列，其符合读框的与得自任何来源的编码重链恒定区的核苷酸序列相连接。同样地，编码本发明抗M-CSF抗体轻链的核酸分子可以包括编码本发明VL区的核苷酸序列，其符合读框的与得自任何来源的编码轻链恒定区的核苷酸序列连接。

于本发明更进一步的方面，编码重链(VH)及轻链(VL)可变区的核酸分子转化为全长的抗体基因。于一具体实施方案中，编码VH或VL区的核酸分子通过插入表达载体转化为全长抗体基因，其中该表达载体已可分别编码重链(CH)或轻链(CL)的恒定区，以便VH部分可操作连接至载体中的CH部分，而VL部分可操作连接至载体中的CL部分。于另一具体实施方案中，可编码VH及/或VL区的核酸分子能通过连接转化为全长抗体基因，如使用标准分子生物技术连接编码VH及/或VL区的核酸分子及编码CH及/或CL区的核酸分子。人类重链及轻链免疫球蛋白恒定区基因的核酸序列已为本领域中所知。请见如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publ.No.91-3242，1991。编码全长重链及/或轻链的核酸分子接着可导入细胞中进行表达并分离抗M-CSF抗体。

该核酸分子可用于重组表达大量的抗M-CSF抗体。该核酸分子亦可用于制备嵌合抗体、双特异性抗体、单链抗体、免疫粘附素、二体、 突变的抗体及抗体衍生物，请见以下进一步叙述。若核酸分子是源自非人类、非转基因动物，该核酸分子可用于进行抗体人源化，其亦如下所述。

于另一具体实施方案中，本发明核酸分子可做为特异抗体序列的探针或PCR引物。例如，该核酸可于诊断方法中做为探针或做为PCR引物以扩增可使用的DNA区，特别是，用以分离编码抗M-CSF抗体的可变区的另外核酸分子。于某些具体实施方案中，该核酸分子为寡核苷酸。于某些具体实施方案中，寡核苷酸来自目的抗体的重链与轻链的高度可变区。于某些具体实施方案中，寡核苷酸编码下列抗体的一个或多个CDR的全部或部分：抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3或1.120.1或其在此所述的变体。

载体

本发明提供包括核酸分子的载体，该核酸分子可编码本发明的抗M-CSF抗体的重链或其抗原结合部分。本发明亦提供包括核酸分子的载体，该核酸分子可编码该抗体的轻链或其抗原结合部分。本发明还提供包括核酸分子的载体，该核酸分子可编码融合蛋白、经修饰抗体、抗体片段及其探针。

于某些具体实施方案中，本发明抗M-CSF抗体或其抗原结合部分通过将编码部分或全长轻链及重链的DNA(如前述方法取得)插入至表达载体中以便该基因可操作地连接至必需的表达控制序列(如转录及翻译控制序列)而表达。表达载体包含质体、反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、植物病毒如花椰菜花叶病毒、烟草花叶病毒、粘粒、YACs、EBV衍生的游离基因等。该抗体基因可连接至载体以便载体内的转录及翻译控制序列提供其所需的调节抗体基因转录及翻译的功能。所选择的表达载体及表达控制序列应能与所采用的表达宿主细胞相容。该抗体轻链基因及抗体重链基因可插入不同的载体中。于一优选具体实施方案中，两种基因可以插入同一表达载体中。该抗体基因可通过标准方法(如连接抗体基因片段及载体上的互补限制性部位，或者若无限制性部位则采平端连接反应)插入表达载体中。

一种便利的载体为编码功能性的完整人类CH或CL免疫球蛋白序列的载体，并具有适当改造的限制位点以便任何VH或VL序列可容易地插入及表达，如前所述。于此种载体中，剪接通常发生于插入的J区中剪接供体部位以及为于人类C区前的剪接受体部位之间，且亦发生在人类CH外显子中所产生的剪接区。聚腺苷酸化作用及转录终止发生于编码区下游的天然染色体部位。重组表达载体亦可编码一种信号肽，其可促进抗体链由宿主细胞分泌。该抗体链基因可克隆入载体中以便信号肽可符合读框地连接至该免疫球蛋白链的氨基端。信号肽可为免疫球蛋白信号肽或异源的信号肽(即源自非-免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。

除抗体链基因外，本发明的重组表达载体携带可控制宿主细胞中抗体链基因表达的调节序列。本领域普通技术人员应了解表达载体的设计(包含选择调节序列)应依据如下因素：选择用以转化的宿主细胞、所需的蛋白质表达水平等。对哺乳动物宿主细胞表达而言，优选的调节序列包含可指挥哺乳动物细胞中高水平蛋白质表达的病毒性元件，如来自反转录病毒LTRs、巨细胞病毒(CMV)(如CMV启动子/增强子)、猿病毒40(SV40)(如SV40启动子/增强子)、腺病毒(如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))、多形瘤及强哺乳动物启动子(如天然免疫球蛋白及肌动蛋白启动子)的启动子及/或增强子。有关病毒调节元件及其序列的进一步描述，请见如美国专利号5,168,062、美国专利号4,510,245及美国专利号4,968,615。可于植物中表达抗体的方法，包含启动子及载体的描述，以及植物的转化已为本领域所知。请见如美国专利第6,517,529号，其以引用的方式并入本文中。可于细菌细胞或真菌细胞(如酵母细胞)中表达多肽的方法亦于本领域中所熟知。

除抗体链基因及调节序列外，本发明的重组表达载体可带有另外的序列，如能调节宿主细胞中载体复制的序列(如复制起点)及可选择的标记基因。可选择的标记基因可帮助选择已导入载体的宿主细胞(请见如美国专利号4,399,216、4,634,665及5,179,017)。如典型的选择性标记基因会对导入载体的宿主细胞赋予对药物(如G418、潮霉素或氨甲蝶呤)的抗性。优选的选择性标记基因包含二氢叶酸还原酶(DHFR) 基因(用于具有氨甲蝶呤选择性/放大作用的dhfr-宿主细胞)、新霉素抗性基因(用于G418选择)及谷氨酸合成酶基因。

重组生产蛋白质的非-杂交瘤宿主细胞及方法

编码抗M-CSF抗体的核酸分子及包括这些核酸分子的载体可用来转移感染适当的哺乳动物、植物、细菌或酵母宿主细胞。转化可藉任何已知方法将多核苷酸导入至宿主细胞中。将异源多核苷酸导入哺乳动物细胞中的方法于本领域中所熟知，且其包含葡聚醣-介导的转染、磷酸钙沉淀、polybrene-介导的转染、原生质体融合、电穿孔法、将多核苷酸封装于脂质体中及直接显微注射DNA至核中。此外，核酸分子可通过病毒载体导入至哺乳动物细胞种。转化细胞的方法于本领域中所熟知。请见如美国专利号4,399,216、4,912,040、4,740,461及4,959,455(这些专利是以引用的方式并入本文中)。转化植物细胞的方法于本领域中所熟知，包含如土壤杆菌属(Agrobacterium)-介导的转化、biolistic转化、直接注射、电穿孔法及病毒转化。转化细菌及酵母细胞的方法也是本领域中所熟知。

可用于表达宿主的哺乳动物细胞系于本领域中所熟知，且包含许多来自美国典型培养物保藏中心((American Type Culture Collection)ATCC)的无限增殖细胞系。这些包含，特别是，中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人类肝细胞癌细胞(如Hep G2)、A549细胞及许多其它的细胞系。特别优选细胞系的选择是根据测定那一种细胞系具有高表达水平。其它可使用的细胞系为昆虫细胞系，如Sf9细胞。如下产生抗体，将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞后，培养宿主细胞一段时间使其足以在宿主细胞中表达抗体，或者优选地，抗体可分泌至宿主细胞所生长的培养基中。抗体可使用标准蛋白质纯化方法由培养基中回收。植物宿主细胞包含如烟草属(Nicotiana)、鼠耳芥属(Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麦、马铃薯等。细菌性宿主细胞包含大肠杆菌(E.coli)及链霉菌属种(streptomyces species)。酵母宿主细胞包含粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、啤 酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)及巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)。

此外，源自制备细胞系的本发明抗体(或其它所属部分)的表达可使用许多已知技术来提高。如谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)为一种于某些条件下常见的加强表达的方法。有关GS系统全部或部分讨论于欧洲专利号0 216 846、0 256 055及0 323 997与欧洲专利申请89303964.4。

由不同细胞系或转基因动物表达的抗体可能会具有彼此不同的糖基化。然而，所有由在此所提供的核酸分子所编码的抗体或包括在此所提供的氨基酸序列皆为本发明的部分，无论抗体的糖基化状态或模式或修饰。

转基因动物及植物

本发明的抗M-CSF抗体也可以通过如下方式转基因产生：产生目的免疫球蛋白重链及轻链序列的转基因哺乳动物或植物并由此制备可恢复的抗体。涉及哺乳动物的转基因产生，抗M-CSF抗体可在山羊奶、牛奶或其它哺乳动物的乳汁中产生及回收。请见如美国专利号5,827,690、5,756,687、5,750,172及5,741,957。于某些具体实施方案中，如上所述，用M-CSF或其免疫原性部分对包括人类免疫球蛋白基因座的非人类转基因动物进行免疫。于植物、酵母或真菌/藻类中制备抗体的方法描述于如美国专利号6,046,037及5,959,177中。

于某些具体实施方案中，非-人类转基因动物或植物的制备是通过标准转基因技术导入一种或多种编码本发明抗M-CSF抗体的核酸分子至动物或植物中。请见Hogan及美国专利号6,417,429，如前所述。用于制造转基因动物的转基因细胞可为胚胎干细胞或体细胞细胞。转基因的非-人类生物可为嵌合、非嵌合杂合子及非嵌合型纯合子。请见如Hogan等人，Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual 2ed.，Cold Spring Harbor Press(1999)；Jackson等人，Mouse Genetics and Transgenics：A Practical Approach，Oxford Univers ity Pres s(2000)；及Pinkert，Transgenic Animal  Technology：A Laboratory Handbook，Academic Press(1999)。于某些具体实施方案中，转基因的非-人类动物含有被靶向的分裂处(targeted disruption)并由编码目的重链及/或轻链的靶向构建体来置换。于一优选具体实施方案中，转基因动物包括并表达编码可与M-CSF优选为人类M-CSF特异性结合的重链及轻链的核酸分子。于某些具体实施方案中，转基因动物包括编码经修饰的抗体(如单链抗体、嵌合抗体或人源化抗体)的核酸分子。抗M-CSF抗体可于任何转基因动物中制造。于一优选具体实施方案中，非-人类动物为小鼠、大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马。非-人类转基因动物于血液、乳汁、尿液、唾液、泪液、粘液及其它体液中表达该编码的多肽。

噬菌体展示文库

本发明提供一种制备抗M-CSF抗体或其抗原结合部分的方法，其包括如下步骤：在噬菌体上合成人类抗体文库，筛选含有M-CSF或其部分的文库，分离可与M-CSF结合的噬菌体，并由该噬菌体取得抗体。例如，一种制备抗体文库用于噬菌体展示技术的方法包括如下步骤：以M-CSF或其抗原部分免疫包括人类免疫球蛋白基因座的非-人类动物以便引起免疫应答，由经免疫的动物提取可产生抗体的细胞；由该提取的细胞分离RNA，将RNA反转录以产生cDNA，使用引物扩增cDNA，并将cDNA插入噬菌体展示载体以便抗体可于噬菌体上表达。本发明的重组抗M-CSF抗体可以此方式获得。

本发明的重组抗M-CSF人类抗体可通过筛选重组的组合抗体文库来分离。该抗体文库优选为scFv噬菌体展示文库，其是使用由B细胞所分离的mRNA所制备的人类VL及VH cDNA所产生。可制备及筛选此种文库的方法为本领域中已知。已有可供产生噬菌体展示文库的商品化试剂盒(如Pharmacia Recombinant Phage Antibody System，目录号27-9400-01；及Stratagene SurfZApTM噬菌体展示试剂盒，目录号240612)。亦有其它可用于产生及筛选抗体展示文库的方法及试剂(请见于如美国专利号5,223,409、PCT公开号WO 92/18619、WO 91/17271、WO 92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、WO 92/01047、WO 92/09690、 Fuchs等人，Bio/Technology 9：1370-1372(1991)；Hay等人，Hum.Antibod.Hybridomas 3：81-85(1992)；Huse等人，science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Griffiths等人，EMBO J.12：725-734(1993)；Hawkins等人，j.Mol.Biol.226：889-896(1992)；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Gram等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：3576-3580(1992)；Garrad等人，Bio/Technology 9：1373-1377(1991)；Hoogenboom等人，Nuc.Acid Res.19：4133-4137(1991)；及Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：7978-7982(1991)。

于一具体实施方案中，为分离具有所需特性的人类抗M-CSF抗体，首先采用在此所述的人类抗M-CSF抗体来选择对M-CSF具有类似结合活性的人类重链及轻链序列，其使用描述于PCT公开号WO 93/06213中的表位印记(imprinting)法。运用于此方法中的抗体文库优选为scFv文库，其制备及筛选描述于PCT公开号WO 92/01047，McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；及Griffiths等人，EMBO J.12：725-734(1993)。scFv抗体文库优选使用人类M-CSF做为抗原来筛选。

一旦选定最初的人类VL与VH区，即可进行″混合及匹配″试验，其中不同对的最初选择的VL及VH部分经过M-CSF结合的筛选以选出优选的VL/VH配对组合。此外，为进一步改善抗体品质，优选的VL/VH对的VL及VH部分可随意突变，优选在VH及/或VL的CDR 3区内，其方法类似体内体细胞突变过程，其导致自然免疫反应过程中抗体的亲和力成熟。这种体外亲和力成熟可通过使用分别互补于VH CDR3或VLCDR3的PCR引物扩增VH及VL区来达成，其中该引物的某些位置已经掺入四种核苷酸碱基的随机混合物以便所产生的编码VH及VL部分的PCR产物可将随机突变导入VH及/或VL CDR3区。这些随机突变的VH及VL部分可再次进行与M-CSF结合筛选。

由重组免疫球蛋白展示文库筛选及分离本发明抗M-CSF抗体之后，由展示包装(如由噬菌体基因组)回收编码选定抗体的核酸，并通过标 准重组DNA技术亚克隆入其它表达载体。若需要时，该核酸可进一步如下所述加以操作以产生其它本发明抗体形式。为表达由筛选组合文库所分离的重组人类抗体，如上所述将编码抗体的DNA克隆入重组表达载体并导入哺乳动物宿主细胞中。

类别转换

本发明另一方面提供一种方法，用于将抗M-CSF抗体的种类或亚类转变为另一种种类或亚类。于某些具体实施方案中，使用本领域中所熟知的方法来分离编码VL或VH但不包含任何编码CL或CH的核酸序列的核酸分子。接着将该核酸分子可操作地连接至编码所需的免疫球蛋白种类或亚类的CL或CH的核酸序列。其可由使用包括CL或CH链的载体或核酸分子来达成，如前所述。如原本为IgM的抗M-CSF抗体可转换种类成为IgG。此外，类别转换可用于将IgG亚类转变为另一种，如由IgG1转变为IgG2。另一制备包括所需同种型的本发明抗体的方法包括以下步骤：分离编码抗M-CSF抗体的重链的核酸及编码抗M-CSF抗体的轻链的核酸，分离编码VH区的序列，连接VH序列至编码所需的同种型的重链恒定区的序列，于细胞中表达轻链基因及重链构建体，并收集所需同种型的抗M-CSF抗体。

于某些具体实施方案中，位于本发明抗M-CSF抗体重链位置228(根据欧洲编号惯例(EU-numbering convention))的丝氨酸被换成脯氨酸。因此，IgG4的Fc区中的CPSC亚序列变为CPPC，其是IgG1中的亚序列(Aalberse，R.C.及Schuurman，J.，Immunology，105：9-19(2002))。如位于SEQ ID NO：46的残基243(其相当于欧洲编号惯例中的残基228)的丝氨酸可变为脯氨酸。同样地，位于SEQ ID NO：38的残基242(其相当于欧洲编号惯例中的残基228)的丝氨酸可变为脯氨酸。于某些具体实施方案中，IgG4抗体的框架区可回复突变成为种系构架序列。某些具体实施方案同时包括构架区的回复-突变及Fc区的丝氨酸变为脯氨酸。请见如表1中的SEQ ID NO：54(抗体9.14.4C-Ser)及SEQ ID NO：58(抗体8.10.3C-Ser)。

去免疫化抗体(Deimmunized Antibody)

另一制备具有减低免疫原性抗体的方法为抗体去免疫化。于本发明另一方面中，抗体可使用描述于如PCT公开WO 98/52976及WO 00/34317号中(其全文是以引用的方式并入本文中)的技术来进行去免疫化。突变的抗体

于另一具体实施方案中，核酸分子、载体及宿主细胞可用于制备突变的抗M-CSF抗体。该抗体可于重链及/或轻链的可变区产生突变，如改变抗体的结合特性。如突变可于一个或多个CDR区中产生以增加或减少抗体对M-CSF的KD，以增加或减少koff，或者改变抗体的结合特异性。定点突变技术于本领域中所熟知。请见如Sambrook等人及Ausubel等人，如上述。于一优选具体实施方案中，突变是发生在位于抗M-CSF抗体的可变区的氨基酸残基上，其相较于种系而言已知被改变。于另一具体实施方案中，一个或多个突变是发生在位于可变区的CDR区或构架区，或于单克隆抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1的恒定区中的氨基酸残基，其相比于种系而言已知被改变。于另一具体实施方案中，一个或多个突变发生在与种系相比已知被改变的氨基酸残基，位于选自SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的重链氨基酸序列的可变区的CDR区或构架区，或者其重链核苷酸序列出现于SEQ ID NOS：1、5、9、25、29、33、37、45、97或101中的可变区的CDR区或构架区。于另一具体实施方案中，一个或多个突变发生于与种系相比已知被改变的氨基酸残基，位于选自SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60的轻链氨基酸序列的可变区的CDR区或构架区或出现于SEQ ID NOS：3、7、11、27、31、35、43或47的轻链核苷酸序列的可变区的CDR区或构架区。

于一具体实施方案中，构架区已经突变以便所产生的构架区具有 对应的种系基因的氨基酸序列。突变可于构架区或恒定区产生以增加抗M-CSF抗体的半衰期。请见如PCT公开WO 00/09560，其以引用的方式并入本文中。于构架区或恒定区产生的突变亦可用以改变抗体的免疫原性，以提供共价或非-共价结合另一分子的位点，或改变如补体结合的特性、FcR结合及抗体-依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)。根据本发明，单一抗体可于任何一个或多个CDRs或可变区或恒定区的构架区产生突变。

于某些具体实施方案中，相较于突变前的抗M-CSF抗体，在突变的抗M-CSF抗体的VH或VL区中有由1至8个(包含其间任何数字)的氨基酸突变。上述任何突变可于一个或多个CDR区中产生。而且，任一突变都可为保守性氨基酸替换。于某些具体实施方案中，其恒定区含有不超过5、4、3、2或1个氨基酸变化。

经修饰的抗体 

于另一具体实施方案中，可产生融合抗体或免疫粘附素，其包括连接至另一多肽的本发明抗M-CSF抗体的全部或部分。于一优选具体实施方案中，仅有抗M-CSF抗体的可变区连接多肽。于另一优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体的VH区连接第一多肽，而抗M-CSF抗体的VL区连接第二多肽，第二多肽与第一多肽以某种方式关联以致VH及VL区能彼此互相作用以形成抗体结合部位。于另一优选具体实施方案中，VH区通过接头与VL区分离以便VH及VL区可彼此互相作用(请见下面有关单链抗体的部分)。VH-接头-VL抗体再连接至目的多肽。融合抗体可用以将多肽指引向表达M-CSF的细胞或组织。该多肽可为一种治疗剂，如毒素、生长因子或其它调节蛋白质，或者其可为诊断剂，如易于观察的酶，如辣根过氧化物酶。此外，产生融合抗体，其中二个(或多个)单链抗体可互相连接。这对于希望于单一多肽链上创造二价或多价抗体，或者希望创造双特异性抗体非常有用。

为产生单链抗体(scFv)，VH-及VL-编码DNA片段可操作地连接至另一编码弹性接头的片段(如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)，使得VH及VL序列可表达成为连续的单链蛋白质，且该VL及VH区以弹性接头连结。请 见如Bird等人，Science 242：423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883(1988)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)。单链抗体可为单价(若仅使用单一VH及VL)、二价(若使用二种VH及VL)或多价(若使用多于二种VH及VL)。可产生能与M-CSF及另一分子特异性结合的双特异性或多价抗体。

于其它具体实施方案中，其它经修饰抗体可使用抗M-CSF抗体-编码核酸分子来制备。例如″κ抗体(Kappa bodies)″(I11等人，Protein Eng.10：949-57(1997))、″微型抗体(Minibodies)″(Martin等人，EMBO J.13：5303-9(1994))、″二体″(Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993))或″Janusins″(Traunecker 等人，EMBO J.10：3655-3659(1991)及Traunecker等人，Int.J.Cancer(Suppl.)7：51-52(1992))可依照说明书教导使用标准分子生物技术来制备。

双特异性抗体或抗原结合片段可由包括杂交瘤的融合或Fab′片段的连接等多种方法来制备。请见如Songsivilai及Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)、Kostelny等人，J.Immunol.148：1547-1553(1992)。另外，双特异性抗体可形成为″二体″或″Janusins″。于某些具体实施方案中，双特异性抗体可与二种不同M-CSF表位结合。于某些具体实施方案中，双特异性抗体具有第一重链及第一轻链，其来自单克隆抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3或9.7.2，以及另外的抗体重链及轻链。于某些具体实施方案中，另外的轻链及重链也来自上述单克隆抗体之一，但不同于第一重链及轻链。

于某些具体实施方案中，上述经修饰抗体的制备可使用下列各物：来自在此所提供的人类抗-M-CSF单克隆抗体、该单克隆抗体的氨基酸序列或由编码该单克隆抗体的核酸序列所编码的重链或轻链的一个或多个可变区或CDR区。

经衍生及标记的抗体

本发明抗M-CSF抗体或其抗原结合部分可经衍生或连接至另一分 子(如另一肽或蛋白质)。通常，抗体或其部分经衍生以使该衍生或标记不会不利影响M-CSF结合。因此，本发明的抗体与抗体部分欲包含在此所述的完整及经修饰形式的人类抗M-CSF抗体。例如本发明的抗体抗体部分可功能性地连接(通过化学结合、基因融合、非共价键结合等)至一个或多个其它分子实体，如另一抗体(如双特异性抗体或二体)、检测剂、细胞毒性剂、药剂及/或可介导结合抗体或抗体部分与另一分子(如链霉抗生物素蛋白核心区或聚组氨酸标志)的蛋白质或肽。

一种衍生的抗体是交叉结合二个或多个抗体(各为同类或不同类，如产生双特异性抗体)而制备。适当交叉接头包含异双功能(heterobifunctional)的，具有二个以适当间隔子(如间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)分隔的不同反应基团，或为同种双功能(homobifunctional)(如琥珀酰亚胺基辛二酸酯)的。此种接头可得自Pierce化学公司，Rockford，I11。

另一种衍生抗体为标记抗体。本发明的抗体或抗原结合部分可衍生运用的检测剂包含荧光化合物，包含荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红素、镧系元素磷光体等。抗体亦能以用于检测的酶标记，如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。当抗体以可检测的酶标记时，其通过添加额外的试剂来检测，所述的试剂被酶利用产生可识别的反应产物。例如存在辣根过氧化物酶试剂时，添加过氧化氢及二氨基联苯胺能产生可检测的有色反应产物。抗体亦可以生物素标记，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合进行检测。抗体亦可由能以二级报告子(如亮氨酸拉链对序列、二抗的结合部位、金属结合区、表位标志)识别的预先测定的多肽表位标记。于某些具体实施方案中，标记可通过不同长度的间隔臂附着以减少可能的空间障碍。

抗M-CSF抗体亦可以放射标记氨基酸标记。放射标记的抗M-CSF抗体可用于诊断及治疗目的。例如放射标记的抗M-CSF抗体可通过x-射线或其它诊断技术来检测能表达M-CSF的肿瘤。另外，放射标记的抗M-CSF抗体可治疗性地作为癌性细胞或肿瘤的毒素。标记多肽实例包含(不限 于)下列放射性同位素或放射核素-3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、 125I及131I。

抗M-CSF抗体亦可用化学基团例如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基或碳水化合物基团来衍生。这些基团可用于改善抗体的生物特性，如增加血清半衰期或增强组织结合。

药物组合物及试剂盒

本发明还涉及包括人类抗M-CSF拮抗剂抗体的组合物，其用于有需要治疗的受试者来治疗类风湿性关节炎、骨质疏松症或动脉硬化。于某些具体实施方案中，治疗的受试者为人类。于其它具体实施方案中，受试者为兽医受试者。可以本发明拮抗剂抗M-CSF抗体治疗的过度增殖性病症(其中单核细胞发挥重要作用)可涉及任何组织或器官并包含(但不限于)脑癌、肺癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰脏癌、乳腺癌、头癌、颈癌、肝癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠、食道癌、妇科癌症、鼻咽癌或甲状腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病或多发性骨髓瘤。特别地，本发明的人类拮抗剂抗M-CSF抗体可用于治疗或预防乳癌、前列腺癌、结肠癌及肺癌。

本发明亦包含用于治疗选自由下列病况的组合物：哺乳动物(包含人类)的关节炎、牛皮癣性关节炎、Reiter′s综合征、痛风、创伤性关节炎、风疹关节炎与急性滑膜炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、痛风性关节炎及其它关节炎病况、脓毒症、脓毒性休克、内毒素休克、革兰氏阴性菌脓毒症、中毒性休克综合征、阿尔茨海默氏症(Alzheimer′sdisease)、中风、神经创伤、哮喘、成人呼吸道窘迫综合征、脑型疟、慢性肺炎性疾病、硅肺、肺部类肉瘤病、骨质再吸收疾病、骨质疏松症、再狭窄、心脏及肾脏再灌注伤害、血栓形成、肾小球肾炎(glomerularonephritis)、糖尿病、移植物与宿主的反应、同种异体移植物排斥、炎性肠病、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、肌肉变性、湿疹、接触性皮炎、牛皮癣、晒伤或结膜炎性休克(conjunctivitis shock)；该组合物包括治疗有效量的本发明人类抗M-CSF单克隆抗体及药物可接受载体。

治疗可包含给予一或多种本发明的拮抗剂抗M-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其可单独或与药物可接受载体共同给药。在此所用的″药物可接受载体″意指任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延缓剂及其生理相容类似物。某些药学可接受载体实例为水、生理盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等以及其混合物。在许多情况下，优选为组合物中包含等渗剂，如糖类、多醇类如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。另外的药物可接受物质实例为湿润剂或少量助剂，如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其可增加抗体的保存期或效力。

本发明抗M-CSF抗体及包括这些抗体的组合物可与一种或多种其它治疗剂、诊断剂或预防剂组合给药。另外的治疗剂包含其它抗瘤、抗-肿瘤、抗-血管增生或化学治疗剂。此种附加的药剂可包含于相同组合物中或分别给药。于某些具体实施方案中，一种或多种的本发明抑制性抗M-CSF抗体可做为疫苗或疫苗的佐剂。

本发明组合物可为多种形式，例如液体、半固体及固体剂型，如液体溶液(如可注射及灌注溶液)、分散液或悬浮液、片剂、丸剂、粉剂、脂质体及栓剂。优选形式取决于预期的给药方式及治疗用途。典型的优选组合物为可注射或灌注溶液形式，如类似运用于人类被动免疫的组合物。优选给药方式为非经肠胃给药(如静脉、皮下、腹腔、肌肉)。于一优选具体实施方案中，抗体是以静脉灌注或注射给药。于另一优选具体实施方案中，该抗体可肌肉注射或皮下注射给药。于另一具体实施方案中，本发明包含一种以可特异性结合M-CSF的抗体或其抗原结合部分治疗需治疗的受试者的方法，其步骤包括：(a)给予有效量的编码重链或其抗原结合部分的分离核酸分子、编码轻链或其抗原结合部分的分离核酸分子，或同时给予编码轻链及重链或其抗原结合部分的核酸分子；及(b)表达该核酸分子。

治疗性组合物典型地需为无菌且于制造及贮存条件下稳定。组合物可调配为溶液、微乳化溶液、分散液、脂质体或其它适于高药物浓度的指定结构。无菌可注射溶液的制备可通过混合含需要量抗M-CSF 抗体的合适溶剂与视需要的一种上列成分或上列成分的组合，然后无菌过滤。一般地，分散剂的制备是通过将活性化合物并入包含基础分散介质及必需的上列其它成分的无菌载体中。至于可供制备无菌可注射溶液的无菌粉剂，优选制备方法为真空干燥及冷冻干燥处理预先无菌过滤的溶液以产生包括活性成分及任何附加所需成分的粉末。可通过如使用包衣(如卵磷脂)、于分散液中维持所需颗粒大小及使用表面活性剂维持溶液的适当流动性。延长的可注射组合物的吸收可通过于组合物中包含可延缓吸收的药剂(如单硬脂酸盐类及明胶)而达成。

本发明抗体可通过多种本领域中已知的方法给药，虽然对许多治疗用途而言，优选给药途径/方法为皮下注射、肌肉注射或静脉灌注。本领域普通技术人员应了解给药途径及/或方式取决于所需的结果。

于某些具体实施方案中，该抗体组合物的活性化合物可与能防止抗体快速释放的载体一起制备，如控制释放制剂，包含植入物、经皮贴片及微胶囊递送系统。可使用生物可分解、生物兼容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、polyglycolic acid、胶原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。许多可制备此种制剂的方法都已申请专利或普遍为本领域普通技术人员所熟知。请见如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems(J.R.Robinson编辑，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978)。

于某些具体实施方案中，本发明抗M-CSF抗体可口服给药，例如与惰性稀释剂或可吸收的食用载体合用。该化合物(及视需要的其它成分)亦可封入硬胶囊或软明胶胶囊中，压缩为片剂或直接掺入受试者饮食中。对治疗性的口服给药，抗M-CSF抗体可与赋形剂并用，并以可食片剂、口腔片、含片、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、薄片等形式运用。除了非经肠胃给予本发明化合物外，该化合物可能需要以能预防其失活的物质包衣或与可预防其失活的物质共同给予。

另外的活性化合物亦可并入组合物中。于某些具体实施方案中，本发明抗M-CSF抗体可与一种或多种另外的治疗剂共同调配及/或共同给药。这些药剂包含可与其它靶结合的抗体、抗癌剂、抗肿瘤剂、化 学治疗剂、抑制M-CSF的肽类似物、能与M-CSF结合的可溶性c-fms、一种或多种抑制M-CSF的化学剂、抗炎剂、抗-凝血剂、降血压药剂(即血管紧张肽-转化酶(ACE)抑制剂)。此种组合疗法可需要较低剂量的抗M-CSF抗体以及共同给予的药剂，从而避免与各种单一药物疗法相关的可能的毒性或并发症。

本发明的抑制性抗M-CSF抗体及包括该抗体的组合物亦可与其它治疗方案组合施用，特别是与放射疗法并用治疗癌症。本发明化合物亦可与抗癌剂并用(如endostatin及制管张素(angiostatin))或细胞毒性药物(如阿霉素)、道诺霉素、顺铂、鬼臼亚乙苷、紫杉醇、taxotere及生物碱(如长春花新碱、法呢基转移酶抑制剂、VEGF抑制剂)及抗代谢剂(如氨甲喋呤)。

本发明化合物亦可与抗病毒剂(如Viracept、AZT、阿昔洛韦(aciclovir)及泛昔洛韦(famciclovir)与抗脓毒症化合物(如Valant)并用。

本发明组合物可包含″治疗有效量″或″预防有效量″的本发明抗体或其抗原结合部分。″治疗有效量″意指，以剂量及所需时间而言，可有效达到所需的治疗效果的量。抗体或抗体部分的治疗有效量可依各种因素而不同，如个体的疾病状态、年龄、性别及体重，以及抗体或抗体部分诱发个体所需反应的能力。治疗有效量也是指该剂量时任何抗体或抗体部分的毒性或有害作用低于其有益治疗作用。″预防有效量″意指，以剂量及所需时间而言，可有效达到所需的预防作用的量。典型地，由于预防性剂量是用于染病前或患病早期的受试者，预防有效量将小于治疗有效量。

可调整剂量方案以提供最佳所需反应(如治疗或预防反应)。例如可给予单一巨大剂量、可于一段时间内给予数次分割剂量或该剂量可视治疗状态的迫切需要而成比例地减少或增加。将非经肠胃组合物调配成为单位剂型特别有利，其可易于给药且剂量统一。在此所用的单位剂型意指物理上离散的单位，其适合用作欲治疗的哺乳动物受试者的单位剂型；各单位包含预先定量的活性化合物，其加上所需的医药 载体、经计算可产生所需疗效。本发明剂量形式的规格直接取决于(a)抗M-CSF抗体或部分的独特特性及欲达成的特定治疗或预防作用，及(b)在组合此种抗体的技艺中对个体治疗敏感性的内在限制因素。

本发明抗体或抗体部分的治疗或预防有效量的示范性非-限制性范围为0.025至50mg/kg，优选为0.1至50mg/kg，更优选为0.1-25、0.1至10或0.1至3mg/kg。应注意的是剂量值可随所需减轻的病况类型及严重性而变化。应进一步了解对任何特定受试者而言，特定的剂量方案应于一段时间后依个体需要及给药者或监督给予组合物者的专业判断来加以调整，且在此所示的剂量范围仅为示范性的且并非意欲限制本申请专利组合物的范围或运用。

本发明另一方面提供试剂盒，其包括本发明抗M-CSF抗体或其抗原结合部分或包括此种抗体或部分的组合物。除抗体或组合物外，试剂盒可包含诊断剂或治疗剂。试剂盒亦可包含使用于诊断或治疗法的指示。于一优选具体实施方案中，该试剂盒包含了抗体或包括该抗体的组合物及可用于下述方法中的诊断剂。于另一优选具体实施方案中，该试剂盒包含抗体或包含其的组合物及一种或多种可用于下述方法中的治疗剂。本发明一个实施方案为试剂盒，其包括容器、对患有炎症的人类给予抗M-CSF抗体的指示或测量生物样本中的CD14+CD16+单核细胞数量的指示及抗M-CSF抗体。

本发明还涉及抑制哺乳动物中异常细胞生长的组合物，其包括一定量的本发明抗体以及一定量的化学治疗剂，其中所述的化合物、盐类、溶剂化物或前药及化学治疗剂的量可一起有效抑制异常细胞的生长。许多化学治疗剂为本领域中已知。于某些具体实施方案中，该化学治疗剂选自由下列各物组成的组：有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢剂、嵌入(intercalating)抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素、如抗雄激素及抗-血管发生剂。

抗-血管发生剂，如MMP-2(间质金属蛋白酶2)抑制剂、MMP-9(间质金属蛋白酶-9)抑制剂及COX-II(环氧化酶II)抑制剂皆可与本发明抗 M-CSF抗体结合。可用的COX-II抑制剂实例包含CELEBREXTM(塞来考昔(celecoxib))、伐地考昔(valdecoxib)及罗非考昔(rofecoxib)。可用的间质金属蛋白酶抑制剂实例描述于WO 96/33172(1996年10月24日公开)、WO 96/27583(1996年3月7日公开)、欧洲专利申请号97304971.1(1997年7月8日申请)、欧洲专利申请号99308617.2(1999年10月29申请)、WO 98/07697(1998年2月26日公开)、WO 98/03516(1998年1月29日公开)、WO 98/34918(1998年8月13日公开)、WO98/34915(1998年8月13日公开)、WO 98/33768(1998年8月6日公开)、WO 98/30566(1998年7月16日公开)、欧洲专利申请606,046(1994年7月13日公开)、欧洲专利公开931,788(1999年7月28日公开)、WO90/05719(1990年5月31日公开)、WO 99/52910(1999年10月21日公开)、WO 99/52889(1999年10月21日公开)、WO 99/29667(1999年6月17日公开)、PCT国际专利申请(PCT International Application)号PCT/IB98/01113(1998年7月21日申请)、欧洲专利申请号99302232.1(1999年3月25日申请)、英国专利申请号9912961.1(1999年6月3日申请)、美国临时申请案号60/148,464(1999年8月12日申请)、美国专利号5,863,949(1999年1月26日颁予)、美国专利号5,861,510(1999年1月19日颁予)及欧洲专利公开780,386(1997年6月25日公开)，其全部内容皆以引用的方式并入本文中。优选的MMP抑制剂为不会呈现关节疼痛者。优选的为可选择性抑制MMP-2及/或MMP-9，相对于其它基质金属蛋白酶(即MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12及MMP-13)的。用于本发明中的某些特定MMP抑制剂实例为AG-3340、RO 32-3555、RS 13-0830，化合物列举如下：3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(1-羟基氨甲酰基-环戊基)-氨基]-丙酸、3-外-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]-8-氧杂-二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺、(2R，3R)1-[4-(2-氯-4-氟-苄氧基)-苯磺酰]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羟基酰胺、4-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]四氢-吡喃-4-羧酸羟基酰胺、3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(1-羟基氨甲酰基-环丁基)-氨基]-丙酸、4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰氨基]-四氢- 吡喃-4-羧酸羟基酰胺、(R)3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰氨基]-四氢-吡喃-3-羧酸羟基酰胺、(2R，3R)1-[4-(4-氟-2-甲基-苄氧基)-苯磺酰]-3-羟基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羟基酰胺、3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(1-羟基氨甲酰基-1-甲基-乙基)-氨基]-丙酸、3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(4-羟基氨甲酰基-四氢-吡喃-4-基)-氨基]-丙酸、3-外-3-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰氨基]-8-氧杂-二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺、3-内-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰胺基]-8-氧杂-二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸羟基酰胺及(R)3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]-四氢-呋喃-3-羧酸羟基酰胺；及该化合物药学上可接受盐类及溶剂化物。

包括本发明人类抗-M-CSF单克隆抗体的化合物可与信号转导抑制剂一起使用，如可抑制EGF-R(表皮生长因子受体)反应的药剂，如EGF-R抗体、EGF抗体及EGF-R抑制剂分子；VEGF(血管内皮生长因子)抑制剂，如可抑制VEGF的VEGF受体及分子；及erbB2受体抑制剂，如有机分子或可与erbB 2受体结合的抗体，如HERCEPTINTM(Genentech，Inc.)。EGF-R抑制剂描述于如WO 95/19970中(1995年7月27日公开)、WO98/14451(1998年4月9日公开)、WO 98/02434(1998年1月22日公开)及美国专利号5,747,498(1998年5月5日颁予)，且此种物质可如在此所述运用于本发明。EGFR-抑制剂包含(但不限于)单克隆抗体C225及抗-EGFR 22Mab(ImClone systems Incorporated)、ABX-EGF(Abgenix/Cell Genesys)、EMD-7200(Merck KgaA)、EMD-5590(Merck KgaA)、MDX-447/H-477(Medarex Inc.和Merck KgaA)及化合物ZD-1834、ZD-1838及ZD-1839(AstraZeneca)、PKI-166(Novartis)、PKI-166/CGP-75166(Novartis)、PTK 787(Novartis)、CP 701(Cephalon、leflunomide(Pharmacia/(Sugen))、CI-1033(Warner Lambert Parke Davis)、CI-1033/PD 183，805(Warner Lambert Parke Davis)、CL-387，785(Wyeth-Ayerst)、BBR-1611(Boehringer Mannheim GmbH/Roche)、Naamidine A(Bristol Myers Squibb)、RC-3940-II(Pharmacia)、BIBX-1382(Boehringer Ingelheim)、 OLX-103(Merck&Co.)、VRCTC-310(Ventech Research)、EGF融合毒素(Seragen Inc.)、DAB-389(Seragen/Lilgand)、ZM-252808(Imperial Cancer Research Fund)、RG-50864(INSERM)、LFM-A12(Parker Hughes Cancer Center)、WHI-P97(Parker Hughes Cancer Center)、GW-282974(Glaxo)、KT-8391(Kyowa Hakko)及EGF-R疫苗(York Medical/Centro de Immunologia Molecular(CIM))。这些及其它EGF-R-抑制剂可用于本发明中。

VEGF抑制剂，例如SU-5416及SU-6668(Sugen Inc.)、AVASTINTM(Genentech)、SH-268(Schering)及NX-1838(NeXstar)亦可与本发明化合物组合。VEGF抑制剂描述于如WO 99/24440(1999年5月20日公开)、PCT国际专利申请案号PCT/IB99/00797(1999年5月3日申请)、WO 95/21613(1995年8月17日公开)、WO 99/61422(1999年12月2日公开)、美国专利号5,834,504(1998年11月10日颁予)、WO 98/50356(1998年11月12日公开)、美国专利号5,883,113(1999年3月16日颁予)、美国专利号5,886,020(1999年3月23日颁予)、美国专利号5,792,783(1998年8月11日颁予)、WO 99/10349(1999年3月4日公开)、WO 97/32856(1997年9月12日公开)、WO 97/22596(1997年6月26日公开)、WO 98/54093(1998年12月3日公开)、WO 98/O 2438(1998年1月22日公开)、WO 99/16755(1999年4月8日公开)及WO 98/02437(1998年1月22日公开)，其全文以引用的方式并入本文中。其它某些用于本发明的特异VEGF抑制剂实例为IM862(Cytran Inc.)；Genentech，Inc.的抗-VEGF单克隆抗体；以及angiozyme，一种来自Ribozyme and Chiron公司的合成核酶。这些及其它VEGF抑制剂可如在此所述运用于本发明。ErbB2受体抑制剂，如GW-282974(Glaxo Wellcome plc)及单克隆抗体AR-209(Aronex制药公司)及2B-1(Chiron)，可进一步与本发明化合物并用，如那些描述于WO 98/02434(1998年1月22日公开)、WO99/35146(1999年7月15日公开)、WO 99/35132(1999年7月15日公开)、WO 98/02437(1998年1月22日公开)、WO 97/13760(1997年4月17日公开)、WO 95/19970(1995年7月27日公开)、美国专利号5,587,458(1996 年12月24日颁予)及美国专利号5,877,305(1999年3月2日颁予)，其全部内容以引用的方式并入本文中。用于本发明的ErbB2受体抑制剂也描述于美国专利号6,465,449(2002年10月15日颁予)及美国专利号6,284,764(2001年9月4日颁予)中，两者全文内容皆以引用的方式并入本文中。ErbB2受体抑制剂化合物及物质(描述于上述PCT申请案、美国专利与美国临时申请案中)，以及其它可抑制erbB2受体的化合物与物质，可依本发明所述与本发明化合物并用。

抗生存(anti-survival)剂包含抗IGF-IR抗体及抗整合素剂，如抗整合素抗体。

抗炎剂可与本发明抗M-CSF抗体并用。对治疗类风湿性关节炎而言，本发明人类抗M-CSF抗体可与下列药剂并用：如TNF-α抑制剂，如TNF药物(如REMICADETM、CDP-870及HUMIRATM)及TNF受体免疫球蛋白分子(如ENBRELTM、IL-1抑制剂、受体拮抗剂或可溶性IL-lra(如Kineret或ICE抑制剂)、COX-2抑制剂(如塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔及依托考昔(etoricoxib))、金属蛋白酶抑制剂(优选为MMP-13选择性抑制剂)、p2X7抑制剂、α2δ配体(如NEUROTINTM及PREGABALINTM)、低剂量氨甲蝶呤、leflunomide、hydroxychloroquine、d-青霉胺(d-penicillamine)、金诺芬(auranofin)或非经肠或口服金(parenteral or oral gold)。本发明化合物亦可与现存可治疗骨关节炎的治疗剂组合使用。可组合使用的适当药剂包含标准非类固醇抗炎剂(以下称为NSAID′s)如炎痛喜康(piroxicam)、双氯酚酸钠(diclofenac)、丙酸如萘普生(naproxen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、苯氧苯丙酸(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)及布洛芬(ibuprofen)、芬那美特(fenamates)(如甲灭酸(mefenamic acid))、吲哚美辛(indomethacin)、苏林大(sulindac)、apazone、吡唑啉酮类(pyrazolones)(如苯基保泰松(phenylbutazone))、水杨酸盐(如阿司匹林(aspirin))、COX-2抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、罗非考昔及依托考昔，止痛剂及关节内治疗剂，如类固醇及透明质酸如hyalgan及欣维可(synvisc)。

抗凝剂可与本发明抗M-CSF抗体并用。抗凝剂实例包含(但不限于)warfarin(COUMADINTM)、肝素及enoxaparin(LOVENOXTM)。

本发明人类抗M-CSF抗体亦可与心血管药剂，如钙通道阻断剂、降血脂制剂，如抑制素(statins)、fibrates、β-阻断剂(β-blockers)、Ace抑制剂、血管紧张肽-2受体拮抗剂及血小板聚集抑制剂组合使用。本发明化合物亦可与CNS药物并用，如抗抑郁剂(如舍曲林(sertraline))、抗帕金森氏症(Parkinsonian)药(如司立吉林(deprenyl)、L-多巴(dopa)、REQUIpTM、MIRAPEXTM、MAOB抑制剂，如司来吉兰(selegine)及雷沙吉兰(rasagillne)、comP抑制剂(如答是美(Tasmar))、A-2抑制剂、多巴胺(dopamine)再吸收抑制剂、NMDA拮抗剂、尼古丁激动剂、多巴胺激动剂及神经元氧化氮合酶抑制剂)及抗阿尔茨海默症药物，如donepezil、tacrine、α2δ配体(如NEUROTINTM和PREGABALITM)抑制剂、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或metryfonate。

本发明人类抗M-CS F抗体亦可与骨质疏松症药物并用，如roloxifene、屈洛昔芬(droloxifene)、拉索昔芬(lasofoxifene)或fosomax及免疫抑制剂，如FK-506与雷帕霉素(rapamycin)。使用诊断方法

另一方面，本发明可提供诊断方法。抗M-CSF抗体可用于检测体外或体内生物样本的M-CSF。于一具体实施方案中，本发明提供一种可诊断有需要的受试者体内表达M-CSF的肿瘤的存在或其位置的方法，其步骤包括将抗体注射至受试者，定位抗体结合处测定受试者中的M-CSF表达，比较受试者与正常参考对象或标准的表达并诊断肿瘤的存在或位置。

抗M-CSF抗体可用于常见的免疫分析法，包含(但不限于)ELISA、RIA、FACS、组织免疫组化、Western印迹法或免疫沉淀法。本发明抗M-CSF抗体可用于检测源自人类的M-CSF。于另一具体实施方案中，抗M-CSF抗体可用于检测源自灵长类(如cynomologus猴、恒河猴、黑猩猩或猿)的M-CSF。本发明提供一种可检测生物样本中M-CSF的方法，其包 括将生物样本与本发明抗M-CSF抗体接触并检测已结合的抗体。于一具体实施方案中，抗M-CSF抗体可直接以可检测的标记来标记。于另一具体实施方案中，抗M-CSF抗体(第一抗体)并未标记而第二抗体或可与抗M-CSF抗体结合的其它分子是标记的。如为本领域普通技术人员所熟知，第二抗体是选择可与第一抗体的特定物种及种类特异性结合者。如，若抗M-CSF抗体为人类IgG，那么二抗可为抗人类IgG。其它可结合抗体的分子包含(但不限于)蛋白质A及蛋白质G，二者皆已商品化，如源自Pierce Chemical Co。

抗体或二抗的适当标记已公开于上，并包含不同酶、辅基、荧光物质、发光物质及放射性物质。适当的酶的实例包含辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；适当辅基复合物实例包含链霉抗生物素蛋白/生物素及抗生物素蛋白/生物素；适当荧光物质实例包含伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红素；发光物实例包含鲁米诺(luminol)；适当放射性物实例包含125I、131I、35S或3H。

于其它具体实施方案中，M-CSF可于生物样本中通过竞争性免疫分析法、利用以可检测物质标记的M-CSF标准及未标记的抗M-CSF抗体进行分析。于此分析中，将生物样本、已标记的M-CSF标准与抗M-CSF抗体组合，并测定标记的M-CSF标准与未标记抗体结合的量。生物样本中的M-CSF的量为标记的M-CSF标准与抗M-CSF抗体结合的量成反比。

可使用上述免疫分析法以用于多种目的。如抗M-CSF抗体可用于检测细胞培养物中的细胞内或细胞表面上或分泌至组织培养基的M-CSF。抗M-CSF抗体可用于测定细胞表面上或分泌至组织培养基中的M-CSF含量，其中该培养基已使用不同化合物处理。本方法可用以鉴别可用来抑制或活化M-CSF表达或分泌的化合物。依照该方法，将一种细胞样本以测试化合物处理一段时间而另一样本则未经处理。若欲测定总M-CSF水平，将细胞裂解并使用上述一种免疫测定法来测量M-CSF总水平。比较经处理与未处理细胞中M-CSF总水平以测定受试化合物的效果。

有一种可测量M-CSF总水平的免疫分析法是ELISA或Western印迹 法。若欲测量细胞表面的M-CSF水平，细胞不裂解，并可使用上述免疫分析法的一种来测量细胞表面的M-CSF水平。一种可测定细胞表面M-CSF水平的免疫分析法包含步骤：以可检测标记(如生物素或125I)来标记细胞表面蛋白质，以抗M-CSF抗体免疫沉淀M-CSF，随后再检测标记的M-CSF。另一种测定M-CSF定位的免疫分析法(如细胞表面水平)可为免疫组织化学法。如ELISA、RIA、Western印迹法、免疫组织化学、整合膜蛋白质的细胞表面标记及免疫沉淀等方法为本领域中所熟知。请见如Harlow和Lane，如前。此外，免疫分析法可将规模放大以用于高通量筛选，以便测试大量抑制或活化M-CSF的化合物。

另一可测量分泌的M-CSF水平的免疫分析法实例为抗原捕捉分析、ELISA、免疫组织染色分析、Western印迹法及使用本发明抗体的类似方法。若欲测量所分泌的M-CSF，可分析细胞培养基或体液(如血清、尿液或滑液)中分泌的M-CSF及/或将细胞裂解以释出已制造但尚未分泌的M-CSF。可测定分泌的M-CSF水平的免疫分析法包含步骤：以可检测的标记(如生物素或125I)将所分泌的蛋白质加以标记，以抗M-CSF抗体免疫沉淀M-CSF并接着检测标记的M-CSF。另一可测定分泌的M-CSF水平的免疫分析法包含步骤(a)预先将抗M-CSF抗体与微量滴定板表面结合；(b)添加包含分泌M-CSF的组织培养细胞培养基或体液至微量滴定板的孔中与抗M-CSF抗体结合；(c)添加可检测抗M-CSF抗体的抗体，如以地高辛配基(digoxigenin)标记的抗M-CSF，其可与M-CSF的表位结合，但此表位与步骤(a)的抗M-CSF抗体所结合的不同；(d)添加抗体至地高辛配基缀合过氧化物酶；及(e)添加过氧化物酶底物，其可产生一种有色反应产物，其可被定量以测定组织培养细胞培养基或体液样本中分泌的M-CSF水平。如ELISA、RIA、Western印迹法、免疫组织化学及抗原捕捉分析等方法是于本领域中所熟知。请见如Harlow和Lane，如前。此外，为了测试大量抑制或活化M-CSF的化合物，免疫分析法可扩大规模以供高通量筛选。

本发明抗M-CSF抗体亦可用于测定组织或起源于组织的细胞中的细胞表面M-CSF水平。于某些具体实施方案中，组织是源自患病组织。 于某些具体实施方案中，该组织可为肿瘤或其活检物。于本方法的某些具体实施方案中，可自患者切除组织或活检物。然后该组织或活检物可用于免疫分析法，以通过上述方法测定如总M-CSF总水平、细胞表面M-CSF水平或M-CSF的位置。

该方法可包括步骤：对需进行该诊断试验的病患给予可检测的标记的抗M-CSF抗体或包括该抗体的组合物并对病患进行成像分析以测定M-CSF表达组织的位置。成像分析是医学领域中所熟知的方法，且包含(但不限于)x-射线分析、核磁共振成像(MRI)或计算机断层(CE)。抗体可以任何适用于体内成像的物质标记，如造影剂(contrast agent)，如钡(其可用于x-射线分析)或镁造影剂，如钆螯合物，其可用于MRI或CE。其它标记物质包含(但不限于)放射性同位素，如99Tc。于另一具体实施方案中，抗M-CSF抗体将不标记，其通过给予第二抗体或其它可与抗M-CSF抗体结合的可检测分子来成像。于一具体实施方案中，活检物自患者获得以测定目的组织是否表达M-CSF。

本发明抗M-CSF抗体亦可用于测定体液(如血清、尿液或源自组织的滑液)中M-CSF所分泌的水平。于某些具体实施方案中，体液是源自患病组织。于某些具体实施方案中，体液是源自肿瘤或其活检物。于某些本方法的具体实施方案中，体液自病患分离。随后将体液运用于免疫分析法中以通过前述方法测定分泌的M-CSF水平。本发明的一具体实施方案为一种分析M-CSF拮抗剂活性的方法，其包括：对灵长类或人类受试者给予M-CSF拮抗剂并测量生物样本中CD14+CD16+单核细胞数量。

应用治疗方法 

于另一具体实施方案中，本发明提供一种方法，其可通过对需要的患者给予抗M-CSF抗体而抑制M-CSF活性。在此所述的任何类型抗体皆可做治疗用。于一优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体为人类嵌合的或人源化抗体。于另一优选具体实施方案中，M-CSF属于人类且患者为人类患者。或者，该患者可为表达可与抗M-CSF抗体交叉作用的M-CSF的哺乳动物。该抗体可对表达与抗体交叉作用的M-CSF的非-人类哺乳 动物(即灵长类)给药作为兽医用途或一种人类疾病的动物模型。此种动物模型可用于评估本发明抗体的疗效。

在此所述的″M-CSF活性有害的病症″意欲包含疾病及其它病症，其中罹患该病症的受试者中高水平M-CSF的存在显示或怀疑其为该病症的病理生理学的原因或为导致病症恶化的因素。此类病症可通过如分泌的及/或于细胞表面的M-CSF水平增加或患有该疾病的受试者受影响细胞或组织中c-fms的酪氨酸自身磷酸化反应增加而证实。可使用如上述的抗M-CSF抗体检测M-CSF的水平增加。

于一具体实施方案中，抗M-CSF抗体可给药患有c-fms表达肿瘤或分泌M-CSF和/或于细胞表面表达M-CSF的肿瘤的患者。优选地，该肿瘤所表达的c-fms或M-CSF的水平高于正常组织。肿瘤可为实体肿瘤或可为非-实体肿瘤，如淋巴瘤。于一优选具体实施方案中，可对患有表达c-fms的肿瘤、表达M-CSF的肿瘤或分泌M-CSF的癌性肿瘤的病患给予抗M-CSF抗体。另外，肿瘤可为癌性。于一优选具体实施方案中，肿瘤为肺癌、乳腺癌、前列腺癌或结肠癌。于另一优选具体实施方案中，对患者给予的抗M-CSF抗体造成M-CSF不再与c-fms受体结合。于一非常优选具体实施方案中，该方法导致肿瘤重量或体积不增加或减少。于另一具体实施方案中，该方法可导致肿瘤细胞上的c-fms不被M-CSF结合。于另一具体实施方案中，该方法可导致肿瘤细胞上的M-CSF不被c-fms结合。于另一具体实施方案中，该方法可导致肿瘤细胞分泌的M-CSF不被c-fms结合。于一优选具体实施方案中，该抗体选自252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2I F、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1，或包括其重链、轻链或抗原结合区。

于另一优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体可对表达不当的高水平M-CSF的患者给药。本领域中已知高水平M-CSF表达可导致多种常见癌症。于一具体实施方案中，该方法是涉及治疗癌症，如脑癌、鳞状细 胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头部癌症、颈部癌症、食道癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、肾脏癌、卵巢癌、妇科癌或甲状腺癌。可以如本发明方法的本发明化合物治疗的患者包含，如已诊断为患有肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头及颈部癌症、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌症、胃癌、结肠癌、乳腺癌、妇科肿瘤(如子宫肉瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌或阴户癌)、霍奇金氏症(Hodgkin′s disease)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症(如甲状腺癌、副甲状腺癌或肾上腺癌)、软组织的肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、实体肿瘤(除血液、骨髓或淋巴系统外的身体组织癌症，如肉瘤、癌或淋巴瘤)、重年期实体肿瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌(如肾细胞癌、肾盂癌)或中枢神经系统肿瘤(如原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或脑下垂体腺瘤)的患者。于一优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体可对患有乳腺癌、前列腺癌、肺癌或结肠癌的患者给药。于一更优选具体实施方案中，该方法可导致癌症停止异常地增殖，或者示增加或减少其重量或体积。

抗体可给药一次，但更优选为多次给药。如该抗体可自每日给药三次至每六个月或更久给药一次。给药时间表可为如每日三次、每日二次、每日一次、每二日一次、每三日一次、每周一次、每二周一次、每月一次、每二月一次、每三月一次及每六个月一次。抗体亦可经由微型泵持续给药。该抗体可口服、粘膜、颊内、鼻内、吸入、静脉、皮下、肌内、肠胃外、肿瘤内或局部给药途径进行给药。抗体可于肿瘤的部位或发炎的身体部分给药，投入至肿瘤或发炎的身体部分内或于远离肿瘤的位置或发炎的身体部分处给药。该抗体可给药一次、至少二次或至少给予一段时间直到病况经治疗、减轻或治愈。只要肿瘤存在，该抗体通常可持续给予，前提为该抗体导致肿瘤或癌症停止生长或减少重量或体积或直到发炎的身体部分治愈。抗体通常可以前述药物组合物的一部分来给予。抗体剂量范围通常为0.1-100mg/kg，优选为0.5-50mg/kg，更优选为1-20mg/kg，且更优选为1-10mg/kg。 抗体的血清浓度可通过任何本领域中已知的方法测量。

另一方面，抗M-CSF抗体可与其它治疗剂(如抗炎剂、抗凝血剂、可降低或减少血压剂、抗癌剂或分子)对患有过度增殖性病症(如癌或肿瘤)的患者共同给予。一方面，本发明涉及一种治疗哺乳动物过度增殖性病症的方法，其包括对该哺乳动物给予治疗有效量的本发明化合物并结合选自由(但不限于)下列各物组成的群的抗-肿瘤剂：有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗-代谢剂、嵌入剂、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗-激素、激酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、基因治疗剂及抗-雄激素物质。于一优选具体实施方案中，抗体可与抗癌药共同给药，如阿霉素或紫杉醇(taxol)。于另一优选具体实施方案中，抗体或组合治疗是与放射疗法，化学疗法、光动力疗法、手术或其它免疫疗法一起给予。于另一优选具体实施方案中，抗体可与另一抗体共同给药。如抗M-CSF抗体可与已知可抑制肿瘤或癌细胞增殖的抗体或其它药剂共同给药，如可抑制erbB2受体、EGF-R、CD20或VEGF的抗体或药剂。

共同给予抗体以及另外的治疗剂(组合疗法)包含给予一种包括抗M-CSF抗体及另外的治疗剂的药物组合物，以及给予二种或多种分开的药物组合物，一种包括抗M-CSF抗体而另一种包括另外的治疗剂。此外，虽然共同给药或组合疗法通常指抗体及另外的治疗剂于同一时间共同给药，但亦包含抗体及另外的治疗剂于不同时间给药的实例。例如抗体可每三天给药一次，而另外的治疗剂则每日给药一次。或者，该抗体可于以另外的治疗剂治疗该病症前或治疗后给予。同样地，抗M-CSF抗体的给予可于进行其它疗法(如放射疗法、化学疗法、光动力疗法、手术或其它免疫疗法)之前或之后给药。

抗体与一种或多种另外的治疗剂(组合疗法)可给予一次、二次或至少一段时间，直到病况已经治疗、减轻或治愈。优选地，组合疗法可多次给予。组合疗法可由每日给药三次至每六个月给药一次。给药时间表可为如每日三次、每日二次、每日一次、每二日一次、每三日一次、每周一次、每二周一次、每月一次、每二个月一次、每三个月 一次及每六个月一次或者其可由微型泵持续给药。组合疗法可借口服、粘膜、颊内、鼻内、吸入、静脉、皮下、肌内，肠胃外、肿瘤内或局部途径给予。

组合疗法可于距肿瘤部位较远的部位给予。只要该肿瘤存在，组合疗法通常可持续给予，前题为该抗体可导致肿瘤或癌症停止生长或重量或体积减少。

于另一具体实施方案中，抗M-CSF抗体是以放射标记、免疫毒素或毒素标记的，或为一种包括毒性肽的融合蛋白。抗M-CSF抗体或抗M-CSF抗体融合蛋白将放射标记、免疫毒素、毒素或毒性肽导入可表达M-CSF的细胞中。于一优选具体实施方案中，放射标记、免疫毒素、毒素或毒性肽于抗M-CSF抗体与M-CSF在靶细胞表面结合后方才内在化。

另一方面，抗M-CSF抗体可用于治疗非癌性状态，其中的高水平M-CSF及/或M-CSF是与非癌性状态或疾病有关。于一具体实施方案中，该方法包括步骤：对病患给予抗M-CSF抗体，该病患患有由高水平M-CSF及/或M-CSF水平或活性所引起或恶化的非癌性病理状态。于一更优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体可减缓非癌性病理状态的发展。于一更优选具体实施方案中，抗M-CSF抗体可停止或反转(至少部分)非癌性的病理状态。

基因疗法

本发明核酸分子可通过基因疗法对需要的患者给药。该疗法可用于体内或体外。于一优选具体实施方案中，对患者给予编码重链及轻链的核酸分子。于一更优选具体实施方案中，可给予核酸分子以便其能稳定地整合B细胞染色体中，因为这些细胞是专供产生抗体的。于一优选具体实施方案中，前体B细胞可经体外转染或感染并再-移植至需要的患者。于另一具体实施方案中，前体B细胞或其它细胞是于体内感染，其是使用已知可感染目的细胞类型的病毒。用于基因疗法的典型载体包含脂质体、质体及病毒性载体。示范性病毒载体为反转录病毒、腺病毒及腺相关病毒。于体内或体外感染后，抗体的表达水平可由接受治疗患者取得样本、使用任何本领域中已知或在此所述的免疫分析法监测。

于一优选具体实施方案中，基因疗法包括步骤：给予经分离的编码抗M-CSF抗体的重链或其抗原结合部分的核酸分子，以及表达该核酸分子。于另一具体实施方案中，基因疗法包括步骤：给予经分离的编码抗M-CSF抗体轻链或其抗原结合部分的核酸分子，以及表达该核酸分子。于一更优选方法中，基因疗法包括步骤：给予经分离的编码本发明抗M-CSF抗体的重链或其抗原结合部分的核酸分子及分离的编码轻链或其抗原结合部分的核酸分子，以及表达该核酸分子。基因疗法亦可包括步骤：给予另外的抗癌剂，如紫杉醇或阿霉素。

为使本发明被更好了解，提供下列实施例。这些实施例仅供说明的目的，不可理解为欲以任何方式限制本发明范围。

实施例I

产生抗M-CSF抗体的细胞系的产生

本发明抗体的制备、选择与分析如下所述：

免疫及产生杂交瘤

8至10周龄的XENOMOUSETM小鼠以腹腔或于其后脚垫以人类M-CSF(10μg/每剂/鼠)进行免疫。将该剂量于三至八周的期间内重复5至7次。于进行融合前4日，最后一次对小鼠注射含人类M-CSF的PBS。将取自免疫小鼠的脾脏及淋巴结淋巴细胞与非分泌性骨髓瘤P3-X63-Ag8.653细胞系融合，再将融合的细胞进行如前述的HAT选择(Galfre及Milstein，Methods Enzymol.73:3-46，1981)。可取得一组全部都分泌M-CSF特异性人类IgG2及IgG4抗体的杂交瘤。抗体亦可使用如Babcook，J.S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:7843-48，1996所述的XENOMAXTM技术产生。选择9种被改造来产生本发明抗体的细胞系供进一步研究并定名为252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4、8.10.3及9.7.2。该杂交瘤于2003年8月8日依布达佩斯条约(Budapest Treaty)保藏于美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）(ATCC)，10801 University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209。杂交瘤的保藏信息如下：

  分类命名   保藏编号   杂交瘤3.8.3(LN 15891)   PTA-5390   杂交瘤2.7.3(LN 15892)   PTA-5391   杂交瘤1.120.1(LN 15893)   PTA-5392   杂交瘤9.7.2(LN 15894)   PTA-5393   杂交瘤9.14.4(LN 15895)   PTA-5394   杂交瘤8.10.3(LN 15896)   PTA-5395   杂交瘤88-γ(UC 25489)   PTA-5396   杂交瘤88-κ(UC 25490)   PTA-5397   杂交瘤100-γ(UC 25491)   PTA-5398   杂交瘤100-κ(UC 25492)   PTA-5399   杂交瘤252-γ(UC 25493)   PTA-5400   杂交瘤252-κ(UC 25494)   PTA-5401

上述生物材料均于2003年8月8日保藏于美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）(ATCC)，10801 University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209。

实施例II

基因利用分析 

编码单克隆抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4、8.10.3及9.7.2的重链及轻链的DNA克隆自各自的杂交瘤细胞系且其DNA序列通过本领域普通技术人员已知的方法测定。此外，源自杂交瘤细胞系9.14.4、8.10.3及9.7.2的DNA于可变区的特定构架区进行突变及/或进行同种型-转换以分别获得如9.14.4I、8.10.3F及9.7.2IF。由抗体的核酸序列及预期的氨基酸序列，可测定各抗体链所使用基因的相同性(″VBASE″)。表2提出如本发明选定抗体的基因使用情况：

表2

重链及轻链基因使用状况

重链及轻链的特定残基的突变是通过设计引物依照厂商的操作指南使用QuickChange Site Directed Mutagenesis kit(Stratagene)来进行。突变由自动化测序加以确认，突变的插入段亚克隆入表达载体中。将表达载体转染至HEK293细胞以产生足够用以特性描述的抗体。

实施例III

M-CSF小鼠单核细胞细胞增殖分析

进行体外分析以测量在抗M-CSF抗体存在下的M-CSF-依赖性小鼠单核细胞细胞增殖，从而测定抗M-CSF抗体抑制程度。

取得小鼠单核细胞细胞、M-NFS-60细胞(得自美国典型培养物保藏中心(ATCC)(Manassas，VA))，并维持于RPMI-1640培养基中，培养基包含2mM L-谷氨酰胺(ATCC)、10％加热失活的胎牛血清(FBS)Invitrogen，Carlsbad，CA)、0.05mM 2-巯基乙醇(Sigma，St.Louis MO)(分析培养基)、以及15ng/ml人类M-CSF。将M-NSF-60细胞分开至5x104供次日使用或至2.5x104以供两日内使用。用于分析前，细胞以RPMI-1640冲洗三次，计数并使用分析培养基调整体积以产生2x105细胞/ml。所有条件皆一式三份地于96-孔经处理的组织培养板(Corning，Corning，NY)中进行。于各孔中加入50μl的经清洗细胞、体积25μl的100pM或1000pM M-CSF以及存在于醋酸盐缓冲液(140mM氯化钠、20mM醋酸钠及0.2mg/ml聚山梨醇酯80，pH 5.5)中，体积25μl的各种浓度的受试或对照抗体，使最终体积为100μl。单独测试本发明抗体及与人类M-CFS一起进行。平板于37℃的5％CO2中培养24小时。

于24小时后，每孔添加10μl的0.5μCi 3H-胸苷(Amersham Biosciences.Piscataway，NJ)并与细胞脉动3小时。为检测掺入的胸苷含量，将细胞采集至预先润湿的单滤(unifilter)GF/C滤板Packard，Meriden，CT)再以水冲洗10次。让平板干燥过夜。将底盖加至滤板上。然后，于每个孔中添加45μl的Microscint 20(Packard，Meriden，CT)。加上顶盖后，将平板置于液态闪烁计数仪(Trilux microbeta counter)(Wallac，Norton，OH)中进行计数。

这些实验显示本发明的抗M-CSF抗体可抑制对M-CSF响应的小鼠单核细胞的细胞增殖。另外，通过使用不同浓度抗体，测定出抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3及9.7.2抑制小鼠单核细胞细胞增殖的IC50(细胞增殖试验，表3a及表3b)。

表3a

表3b

实施例IV

人类全血单核细胞活化试验

在抗M-CsF抗体存在的情况下进行体外分析，测量M-CSF依赖性单核细胞形状变化以测定抗M-CSF抗体可否抑制全血中单核细胞活化及其对单核细胞形状变化的抑制程度。

于96孔组织培养板的单个孔中，混合6μl的1.7nM抗M-CSF及94μl的人类全血，使最终浓度成为102pM抗M-CSF抗体。该培养板于CO2组织培养培养箱中于37℃培养。然后，将平板由培养箱中移出。于各孔中加入100μl的固定液(含0.5％福尔马林的磷酸盐缓冲盐水(不含MgCl2或CaCl2))，将平板于室温下培育10分钟。将来自各孔的180μl各样本与1ml的红血球裂解缓冲液混合。将试管震荡2秒。接着将样本 于37℃的摇动水浴中培养5分钟以溶解红细胞，但让单核细胞维持完整。紧接着此培育后，于荧光-活化细胞扫瞄(FACS)机(BD Beckman FACS)判读样本并使用FACS Station软件3.4版进行数据分析。

这些实验显示，相较于对照样本，本发明抗M-CSF抗体可抑制单核细胞形状改变。使用单核细胞形状变化分析可测定抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3及9.7.2的IC50(人类全血单核细胞活化作用，表3a及表3b)。

实施例V

c-fms受体结合抑制分析

进行体外分析测量在抗M-CSF抗体存在的情况下与c-fms受体结合的M-CSF以测定抗M-CSF抗体是否可抑制M-CSF与c-fms受体结合及其抑制程度。

冲洗以人类c-fms转染的NIH-3T3细胞或M-NSF-60细胞，该细胞是维持于不含镁或钙的Dulbecco′s磷酸盐缓冲盐水中。将NIH-3T3细胞由5mM乙二胺四乙酸(EDTA)，pH 7.4从组织培养板中移出。将NIH-3T3细胞放回组织培养板中1-2分钟并轻敲烧瓶以松脱细胞。再将NIH-3T3细胞及M-NSF-60细胞移至50ml试管中并以反应缓冲液(lxRPMI(不含碳酸氢钠)，含50mM N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)，pH 7.4)冲洗二次。然后，将NI H-3T 3细胞再悬浮于反应缓冲液中，最终浓度为1.5x105细胞/ml。将M-NSF-60细胞再悬浮于反应缓冲液中，最终浓度为2.5x106细胞/ml。

进行分析时，于结合试管中混合9μl的无菌0.4M蔗糖溶液、10Oμl的125I-M-CSF(Amersham，IMQ7228v)，最终浓度为200pM的含50mMHEPES的RPMI-1640(pH 7.4)、0.2％牛血清白蛋白及100μl最终浓度为200nM的未标记M-CSF。随后于每个试管中加入50μl的浓度渐增的受试抗体。为测定抗体的非特异性结合，采用加入200nM M-CSF的样本。而对照组试管并未添加抗体。然后于每管内加入15,000个NIH-3T3细胞或250,000个M-NSF-60细胞。所有试管皆于室温中温育3小时并再以10,000rpm离心2分钟。将包含细胞沉淀的试管的尖端截出并使用 Packard Cobra II Gamma counter测定与细胞结合的M-CSF的量。由总结合减去非-特异性结合可测定特异性结合。所有分析是一式二份地进行。结合数据使用计算机程序Graph Pad Prism 2.01进行分析。

这些实验显示与对照样本比较，本发明抗M-CSF抗体可抑制M-CSF与c-fms受体结合。此外，通过使用不同浓度抗体，测定出下列各抗体抑制受体结合的IC50：抗体252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4I、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3及9.7.2(受体结合抑制试验，表3a及表3b)。

实施例VI

由BIACORETM测定抗-M-CSF单克隆抗体的亲和力常数(KD)

纯化的抗体的亲和力测量是使用BIACORETM3000仪器，依照厂商建议步骤、由表面胞质共振来进行。

对抗体3.8.3、2.7.3及1.120.1而言，该实验是利用BIACORETM3000仪器，于25℃、在包含0.0005％吐温(Tween)-20的Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水中进行。由沉降速度实验或使用得自氨基酸序列的理论消光系数于280nm测量样本波长可获知蛋白质浓度。以实验测量抗体与固定抗原的结合时，M-CSF可通过标准直接胺结合方法固定于B1芯片上。准备3.8.3、2.7.3及1.120.1的0.69μM抗体样本。将这些样本以3倍率连续稀释成为8.5nM或2.8nM，约为100倍的浓度范围。对各浓度而言，样本以一式两份注射4分钟，流速为5μl/min。监测解离2000秒。使用BIACORETM Biaevaluation软件将数据全面拟合(fit globally)成为一简单1∶1结合模式。在所有情况中，本方法用来获得koff值且发现此数据组非常相符于得自全面拟合的结合及解离数据。

对抗体252、88及100而言，该实验是于BIACORETM3000仪器，于25℃、在HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES、pH 7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.005％表面活性剂P20)中进行。为实验测量抗体与固定抗原的结合，M-CSF可通过标准直接胺结合方法固定于CM5 Research Grade Sensor芯片上。所准备的抗体252和100样本为12.5nM、抗体88样本为25.0nM。将这些样本以二倍率连续稀释至0.78nM，约成为15-30倍浓度范围。 将各浓度的样本一式二份地以随机顺序注射3分钟，流速为30μl/min。监测解离300秒。使用BIACORETM Biaevaluation软件将数据进行全面拟合成为简单1∶1结合模式。在所有情况中，本方法用来获得koff值且发现此数据组非常相符于得自全面拟合结合及解离数据。

表4显示抗体252，88，100，3.8.3，2.7.3及1.120.1的结果。

表4

    252   88   100   3.8.3   2.7.3   1.120.1   KD(M)   1.33x10-11   1.33x10-9   2.0x10-11   4.0x10-10   4.7x10-9   5.4x10-9   Koff(l/s)   1.03x10-6   7.3x10-5   1.7x10-5      

实施例VII

由8.10.3杂交瘤细胞制备8.10.3抗体

抗体8.10.3于3L射流旋转器(sparged spinners)制备。3L射流旋转烧瓶为一种玻璃器皿，其使用以磁性平台所控制的推动器来混合培养物。将旋转器连接至气体管线以供给5％ CO2及空气。首先将8.10.3杂交瘤细胞融解在T-25细胞培养瓶中。细胞逐渐扩增直到有足量细胞可供植入射流旋转器中。

以8.10.3杂交瘤细胞接种于二个3L的射流旋转烧瓶内，培养基为杂交瘤无血清培养基，两个射流烧瓶的其它细节见表5。所显示Ultra Low IgG血清(Gibco cat#16250-078)、L-谷氨酰胺(JRH Biosciencescat#59202-500M)、非-必须氨基酸(Gibco cat#11140-050)、蛋白胨(Difco cat#211693)、葡萄糖(由JT Baker自制储备物cat#1920-07)及抗-起泡C(Sigma cat.#A-8011)的浓度为其于培养基的最终浓度。平衡各反应器体积使用杂交瘤无血清培养基。

表5.于两个3L射流旋转器中培育杂交瘤8.10.3的条件。

  条件   旋转器1   旋转器2   接种密度(1x106细胞/ml)   0.16ml   0.16ml   杂交瘤无血清培养基(Gibco cat#12045-076   平衡   平衡   Ultra Low IgG血清(Gibco cat#16250-078)   5％   5％   L-谷氨酰胺(JRH Biosciences cat#59202-500M)   8mmol/L   8mmol/L   非-必须氨基酸(Gibco cat#11140-050)   1％   1％   蛋白胨(Difco cat#211693)   1g/L   1g/L   2M葡萄糖(由JT Baker自制材料cat#1920-07)   8g/L   8g/L   抗-起泡C(Sigma cat.#A-8011)   1ml/L   1ml/L

让培养物生长15天，当生存力低于20％时进行收集。生存力可通过台盼蓝(trypan blue)排除法以自动化细胞计数器(Cedex，Innovatis)测定。采集可由离心及随后的过滤完成。于7000 rpm离心15分钟后可获得澄清的上清液并随后以无菌0.22μm 4″OpticapMillipore滤膜(cat#KVSCO4HB3)过滤至10L无菌TC-Tech袋(cat#P/N12420 Bag Style CC-10-112420)。滤液随后于下列实施例中进行纯化。

实施例VIII

抗M-CSF抗体的纯化

首先如下预备蛋白质A柱(Amersham Pharmacia)，以3柱体积的8M尿素洗涤，再以20mM Tris(pH 8)平衡洗涤。来自实施例VII的最终滤出液与2％v/v的1M Tris pH 8.3及0.02％的NaN3混合，然后通过重力-滴落方式装入蛋白质A柱。装填完成后，以5柱体积的20mM Tris(pH 8)洗树脂，接着以5柱体积的洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸pH 3.0)冲洗。注意任何沉淀物，接着掺入10％v/v的1M Tris pH 8.3以洗脱抗体。被洗脱的蛋白质接着以100倍的洗脱物体积量的透析缓冲液(140mMNaCl/20mM醋酸钠pH 5.5)进行透析洗脱物。于透析后，该抗体以0.22μm滤膜进行无菌过滤并贮存直到进一步应用。

    实施例IX

猴子处理及单核细胞计数

每剂量组采用一只雄性与一只雌性cynomolgus猴，于约5分钟的时间以静脉注射给予载体或抗体8.10.3(如实施例VII及VIII中所述制备)，剂量分别为0、0.1、1或5mg/kg，体积为3.79mL/kg。于给药后24及72小时及每周(共3周)采集供临床实验分析的血液样本。单核细胞计数是使用Abbott Diagnostics Inc.Cell Dyn系统(Abbott Park，Illinois)通过光散射测定。

观察到所有剂量中单核细胞总数(图1A及1B)的剂量-相关性减少(～25％至85％)。于第2周时0.1及1mg/kg的单核细胞计数似乎回升至接近对照组，而5mg/kg的单核细胞计数于第3周时仍减少。

CD14+CD16+单核细胞亚型分析

将灵长类全血抽入含有肝素钠的Vacutainer管中。将0.2ml的各血液样本加入含10ml红血球裂解缓冲液(Sigma)的15ml圆椎形聚丙烯离心试管中，并于37℃水浴中温育15分钟。接着将该管于Sorvall RT7离心机以1,200rpm离心5分钟。吸出上清液，将沉淀再悬浮于10ml的4℃FACS缓冲溶液中(Hanks′平衡盐溶液/2％FBS/0.02％叠氮化钠)，并将管再次以1,200rpm离心5分钟。吸出上清液并将沉淀再悬浮于由下列各物所组成的抗体混合物中：80μl 4℃ FACS缓冲液、10μl FITC缀合的抗人类CD14单克隆抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)、0.5μl Cy5-PE-缀合的抗人类CD16单克隆抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)及10μlPE缀合的抗人类CD89单克隆抗体(BD Biosciences，San Diego，CA)。细胞悬浮液于冰上温育20分钟，之后加入4℃的10ml FACS缓冲液并将细胞如前述方式离心。吸出上清液，并将细胞沉淀再悬浮于400μl FACS缓冲溶液中并于FACSCaliber流式细胞分析仪(BD Biosciences，San Jose，CA)分析细胞。每样本收集30,000个细胞的数据。

通过前角(forward angle)光散射及直角(orthogonal)光散射组合来鉴别单核细胞群。进一步分析单核细胞门控(gate)细胞的CD14及CD16表达。可观察到二种明显不同的单核细胞群，一种可表达高水平的CD14及很少或无CD16表达(CD14++CD16-)，而另一种可表达较低水 平的CD14及高水平的CD16(CD14+CD16+)，类似前述的人类外围血中的二种单核细胞亚型(Ziegler-Heitbrock H.W.，Immunology Today 17：424-428(1996))。对受测的各灵长类而言，于以8.10.3注射后第1、3、7、14及21天各次抽血后进行测定CD14+CD16+亚型中的单核细胞百分比。

一般来说，以8.10.3处理可导致CD14+CD16+单核细胞百分比下降(请见图2A及2B)。未接受8.10.3抗体的猴子显示相对稳定的CD14+CD16+单核细胞水平。CD14+CD16+单核细胞被称为″前炎症性″，因其可产生较高水平的TNF-α及其它炎症性细胞因子(Frankenberger，M.T.等人，Blood 87：373-377(1996))。亦有报导显示单核细胞由常见的CD14++CD16-表型分化为前炎症性表型是取决于M-CSF(Saleh M.N.等人，Blood 85：2910-2917(1995))。

实施例X

猴子处理及单核细胞计数

每剂量组三只雄cynomolgus猴于约5分钟的时间内以静脉内给予载体(20mM醋酸钠，pH 5.5，140mM NaCl)、纯化抗体8.10.3F或纯化抗体9.14.4I，其剂量为0、1或5mg/kg，体积为3.79mL/kg。猴子年龄为4至9岁而体重为6至10kg。于2、4、8、15、23及29日采集供临床实验分析的血液样本。单核细胞计数使用Abbott Diagnostics Inc.Cell Dyn系统(Abbott Park，Illinois)通过光散射测定。

观察到与测试前的单核细胞水平(图3A及3B)相比，在抗体8.10.3F及抗体9.14.4I所有剂量(请见如图3A及3B中的第4、8、15及23日)的总单核细胞百分比改变皆减少。

所有于本说明书所引用的公开及专利公开是以引用的方式并入本文中，其方式犹如各单独公开或专利公开是特别且单独指明以引用的方式并入本文中。为供清楚了解的目的，前述本发明通过说明及实施例的方式进行了一定程度的描述，但对熟谙本领域的一般技术人员而言，很明显的可按照本发明的指导而做出某些改变及修饰而不偏离所附申请权利要求的精神或范围。

序列

关键词：

信号肽：下划线小写

CDRs 1，2，3：下划线大写

可变区：大写 

恒定区：小写 

与种系相比的突变用黑体

SEQ ID NO：1

252重链[γ链]核苷酸序列 

atggagttggggctgtgctggattttccttgttgctattataaaagggtgtccagtgtCAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTTCATACATTAGTGGTA

GTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCAT

CTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCT

GAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATCACTGTGCGAGAGCCCTGGGTGG

GATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtcca

ccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctg 

gtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttccc 

agctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagac 

ctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagt 

gcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatga 

tctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtac 

gtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtca 

gcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctccca 

gcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatccc 

gggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtgga 

gtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcc 

tctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct 

ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

SEQ ID NO：2

252重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwiflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIR 

QAPGKGLEWISYISGSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAE

DTAVYHCARALGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfp 

epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcp 

appvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsv 

ltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：3

252轻链[κ链]核苷酸序列 

atgagggtccctgctcaggctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGAT

GACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACC

ATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTA A ATTGGTATC 

AGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACATCCA

GTTTGCAAAGTGGGGTCCCATTCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGA

CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAAC

TTATTACTGTCAACAGAGTTACAGTGTCCCATTCACTTTCGGCCCTGGG

ACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagc 

agttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggt 

ggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctc 

agcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcc 

tgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：4

252轻链[κ链]蛋白质序列 

mrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLNWYQQK 

PGKAPKLLIYATSSLQSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQS

YSVPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgns 

qesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：5

88重链[γ链]核苷酸序列 

atggaatttgggctgtgctgggttttccttgttggctattttagaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAA

GATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACC

ATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGC

CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTCCGGGTATAGCA

GCAGCTGGTAGGGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCC

TCAGCTtccaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggc 

cctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcg 

tgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttc 

ggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaat 

gttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagg 

acaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtcca 

gttcaactggttacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacg 

ttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaac 

aaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacacc 

ctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcg 

acatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccg 

acggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccg 

tgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 

SEQ ID NO：6

88重链[γ链]蛋白质序列 

mefglcwvflvailegvqcEVQLVES

GGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWV

RQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSL

RAEDTAVYYCAPGIAAAGRAYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgcl 

vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv 

ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfns 

SEQ ID NO：7

88轻链[κ链]核苷酸序列 

atgagggtccctgctcagctcctggggctcctggctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCCAGAT

GACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACC

ATCACTTGCCGGCCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAATTGGTATC

AGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCA

GTTTGCAAAGTGGGGTCCCATTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGA

CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAAC

TTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGG

ACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagc 

agttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggt 

ggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctc 

agcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcc 

tgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：8

88轻链[κ链]蛋白质序列 

mrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQDISSYLNWYQQK 

PGKAPKLLIYAASSLQSGVPLRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQS

YSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgns 

qesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：9

100重链[γ链]核苷酸序列 

atggagtttgggctccgctggatttttcttgtggctattttaaaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGTTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGCTATTAGTGGTC

GTGGTGGTAGGACATACTTCGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCA

TCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCC

TGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTTCTGTGCGGTAGAAGGCTATA

GTGGGCGCTACGGATTTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTAGTCAC

CGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgag 

agcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctct 

gaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgcc 

ctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaca 

gttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccc 

caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga 

ccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagca 

gttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtg 

caaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaacc 

acaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc 

ttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctccca 

tgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtc 

ttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 

SEQ ID NO：10

100重链[γ链]蛋白质序列 

mefglrwiflvailkgvqcEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVR 

QAPGKGLEWVSAISGRGGRTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRA

EDTAVYFCAVEGYSGRYGFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaal 

gclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkc 

cvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf 

nstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgf 

ypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg 

k

SEQ ID NO：11

100轻链[κ链]核苷酸序列 

atggaagccccagctcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccactgggaGAAATAGTGATG

ACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACC

CTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACC

AGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAC

CAGGGCCAGTGGTATCCCAGACAGGATCAGTGGCAGTGGGTCTGGAAC

AGAGTTCACTCTCATCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTT

TATTACTGTCAGCAGTCTAATAACTGGCCATTCACTTTCGGCCCTGGGA

CCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagca 

gttgaaatctggaactgctagcgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtg 

gataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctca 

gcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcct 

gagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：12

100轻链[κ链]蛋白质序列 

meapaqllfllllwlpdttgEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQ 

KPGQAPRLLIYGASTRASGIPDRISGSGSGTEFTLIISSLQSEDFAVYYCQQS

NNWPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn 

sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：14

3.83重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWFSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpa 

ppvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvlt 

vvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavew 

esngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：16

3.8.3轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwfpgsrcDIQMTQSPSSVSASVGDRVTISCR ASQDISGWLAWY 

QQKPGKAPKLLISATSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC

QQTNSFPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalq

sgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：18

2.7.3重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvallrgcqcQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWV 

RQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

RAEDTAVYYCARGYRVYFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgcl 

vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygp 

pcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfns 

tyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfy 

psdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQIDNO：20

2.7.3轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwfpgsrcDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWY 

QRKPGKAPKLQIYAASSLESGVPSRFNGSGSGTDFTLSISSLQPEDFATYYC

QQTNSFPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnal

qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：22

1.120.1重链[γ链]蛋白质序列 

mewtwsflflvaaatgahsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWV 

RQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQDRVTMTTDTSTTTAYMELRS

LRSDDTAVYYCARRAYGANFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaa 

lgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverk 

ccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpree 

qfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvk 

gfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslsls 

pgk

SEQ ID NO：24

1.120.1轻链[κ链]蛋白质序列 

mvlqtqvfislllwisgaygDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSILFFSNNKNYL

AWYRQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA

VYYCQQYYSSPWTFGQGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnfypreakvq 

wkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 

SEQ ID NO：25

9.14.4I重链[γ链]核苷酸序列 

atggagtttgggctgagctggggttttccttgttgctattataaaaggtgtCCAGTGTCAGGTGCAGCTG

GTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTC

TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCTGGA

TCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTA

GTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCA

CCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACA

GCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAA

CTGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtcc

accaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcct 

ggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcc 

cagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccaga 

cctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgag 

tgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatg 

atctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggta 

cgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtc 

agcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctccc 

agcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcc 

cgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtgg 

agtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttc 

ctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggc 

tctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

SEQ ID NO：26

9.14.4I重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpa 

ppvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvlt 

vvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavew 

esngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：27

9.14.4，9.14.4I，9.14.4-Ser和9.14.4-G1轻链[κ链]核苷酸序列

atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgTGACATCC

AGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTCGGAGACAGAGT

CACCATCACTTGCCGGCCAAGTCAGATCATTAGCAGTTTATTAAATTGG

TATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCATGCTGCA

TCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG

GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGTAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGC

AACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCT

GGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctga 

tgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtgga 

aggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctaca 

gcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca 

gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：28

9.14.4，9.14.4I，9.14.4-Ser和9.14.4-G1轻链[κ链]蛋白质序列

mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQIISSLLNWYQ 

QKPGKAPKLLIHAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ

QSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs

gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：37

9.14.4重链[γ链]核苷酸序列 

atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaagggtgtCCAGTGTCAGGTGCAGCTG

GTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTC

TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCCTGGA

TCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTA

GTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCA

CCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACA

GCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAA

CTGGGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtcc

accaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcct 

ggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcc 

cagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaaga 

cctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtccccca 

tgcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctca 

tgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactgg 

tacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtgg 

tcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctc 

ccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccat 

cccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgt 

ggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttc 

ttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgag 

gctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

SEQ ID NO：38

9.14.4重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpa 

peflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvl 

tvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：54

9.14.4C-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCA ASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpa 

peflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvl 

tvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：56

9.14.4C-Ser，9.14.4-CG2和9.14.4-CG4轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRPSQIISSLLNWYQ 

QKPGK APKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ

QSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs 

gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：74

9.14.4-CG2重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpa 

ppvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvlt 

vvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavew 

esngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：78

9.14.4-CG4重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscpa 

peflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvsvl 

tvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQIDNO：82

9.14.4-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpe 

pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpa 

peflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvl 

tvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO.101

9.14.4G1重链[γ链]核苷酸序列 

atggagtttgggctgagctgggtttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtCAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTATATGAGCTGGATCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTA

GTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCAT

CTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCT

GAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCTAACTGG

GGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTtccaccaag

ggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaa 

ggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctg 

tcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacat 

ctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcaca 

catgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacacc 

ctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaa 

ctggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccg 

tgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaag 

ccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcc 

cccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcg 

ccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggct 

ccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgc 

atgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatag

SEQ ID NO 102

9.14.4G1重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARGLTGDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfp 

epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcpp 

cpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrv 

vsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdia 

vewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：29

8.10.3和8.10.3F重链[γ链]核苷酸序列

atggagtgggggctgtgctgggttttccttgttgctattttagaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTTTAGTATGACCTGGGTCC

GCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTA

GAAGTAGTACCATATCCTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCA

TCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCC

TGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCTCTTCT

AGCGGGAGCTACCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC

CGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgag 

agcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctct 

gaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgcc 

ctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaca 

gttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccc 

caaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga 

ccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagca 

gtcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtg 

caaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaacc 

acaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggc 

ttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctccca 

tgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtc 

ttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 

SEQ ID NO：30

8.10.3和8.10.3F重链[γ链]蛋白质序列

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalg 

clvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkcc 

vecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfn 

stfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfy 

psdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：3l

8.10.3FG1和8.10.3F轻链[κ链]核苷酸序列

atggaaaccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccaccggaGAATTTGTGTTG

ACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCC

TCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTTACTTAGCCTGGTA

CCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCC

AGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGG

ACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG

TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGG

GACCAAGGTGGAGATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatga 

gcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag 

gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcc 

tcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcaggg 

cctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：32

8.10.3FG1和8.10.3F轻链[κ链]蛋白质序列

metpaqllfllllwlpdttgEFVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQ 

KPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQ

YGSSPLT

FGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsg

nsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：43

8.10.3和8.10.3-Ser轻链[κ链]核苷酸序列 

atggaaaccccagcgcagcttctcttcctcctgctactctggctcccagataccaccggaGAATTTGTGTTG

ACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGG GGAAAGAGCCACCC

TCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTTACTTAGCCTGGTA

CCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCC

AGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGG

ACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGTAG

TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGG

GACCAAGGTGGAGATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatga 

gcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag 

gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcc 

tcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcaggg 

cctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：44

8.10.3和8.10.3-Ser轻链[κ链]蛋白质序列 

metpaq1lfllllwlpdttgEFVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQ 

KPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFVVYYCQQ

YGSSPLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsg

nsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：58

8.10.3C-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalg 

clvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskyg 

ppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf 

nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgf 

ypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：60

8.10.3-CG2，8.10.3-CG4和8.10.3C-Ser轻链[κ链]蛋白质序列 

metpaqllfllllwlpdttgEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQ 

KPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQ

YGSSpLTFGGGTKVEIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsg

nsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：62

8.10.3-CG2重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalg 

clvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkcc 

vecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfn 

stfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：90

8.10.3-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalg 

clvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskyg 

ppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf 

nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgf 

ypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：94

8.10.3-CG4重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYIS SRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD 

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalg 

clvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskyg 

ppcpscpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqf 

nstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgf 

ypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：97

8.10.3FG1重链核苷酸序列

atgggagttggggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtGAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTTTAGTATGACCTGGGTCC

GCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTA

GAAGTAGTACCATATCCTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCA

TCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCC

TGAGAGACGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCTCTTCT

AGCGGGAGCTACCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC

CGTCTCCTCAGCCtccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctggg 

ggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccc 

tgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgc 

cctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaa 

agttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagt 

cttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtg 

agccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgc 

gggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaa 

ggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcag 

ccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcc 

tggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagac 

cacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagca 

ggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccg 

ggtaaatag

SEQ ID NO：98

8.10.3FG1重链[γ链]蛋白质序列 

melglcwvflvailegvqcEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMTWV 

RQAPGKGLEWVSYISSRSSTISYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRD

EDTAVYYCARDPLLAGATFFDYWGQGTLVTVSSAstkgpsvfplapsskstsggtaal 

gclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepk 

scdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpr 

eeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclv 

kgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslsls 

pgk

SEQ ID NO：33

9.7.2IF重链[γ链]核苷酸序列 

atggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtcAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTA

GTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCAT

CTCCAGGGACAACGCCAAGAATTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCT

GAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCGTATAGGAGG

TATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtcca

ccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctg 

gtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttccc 

agctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagac 

ctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagt 

gcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatga 

tctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtac 

gtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtca 

gcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctccca 

gcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatccc 

gggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtgga 

gtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcc 

tctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggct 

ctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

SEQ ID NO：34

9.7.2IF重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyf 

pepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppc 

pappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvs 

vltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiav 

ewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：35

9.7.2IF轻链[κ链]核苷酸序列 

atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggctccgaggtgccagatgtGACATCC

AGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT

CACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTAATTTGG

TATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACA

TCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG

GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGC

AACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCT

GGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctga 

tgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtgga 

aggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctaca 

gcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca 

gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：36

9.7.2IF轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQ 

QRPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ

QSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs 

gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：45

9.7.2重链[γ链]核苷酸序列 

atgggagtttgggctgagctgggttttccttgttgctattataaaaggtgtccagtgtcAGGTGCAGCTGGTG

GAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCC

TGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCC

GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTA

GTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCAT

CTCCAGGGACAACGCCAAGAATTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCT

GAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCGTATAGGAGG

TATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTtcca

ccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctctagaagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctg 

gtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttccc 

agctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagac 

ctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccat 

gcccatcatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcat 

gatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggt 

acgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggt 

cagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctc 

ccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccat 

cccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgt 

ggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttc 

ttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgag 

gctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

SEQIDNO：46

9.7.2重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyf 

pepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpsc 

papeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvv 

svltvlnqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdia 

vewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQIDNO：47

9.7.2和9.7.2-Ser轻链[κ链]核苷酸序列 

atggacatgagggtccccgctcagctcctggggctcctgctactctggttccgaggtaccagatgtGACATCC

AGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT

CACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCGGCTTTTTAATTTGG

TATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTACA

TCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATTAAGGTTCAGTGGCAGTGAATCTG

GGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGC

AACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCT

GGGACCAAAGTGGATATCAAACGAactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctga 

tgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtgga 

aggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctaca 

gcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca 

gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt

SEQ ID NO：48

9.7.2和9.7.2-Ser轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwlraarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQ 

QRPGKAPKLLIYATSSLQSGVPLRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ

QSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs 

gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：50

9.7.2C-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCAIRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfp 

epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcp 

apeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvs 

vltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiav 

ewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：52

9.7.2C-Ser，9.7.2-CG2和9.7.2-CG4轻链[κ链]蛋白质序列 

mdmrvpaqllgllllwlrgarcDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISGFLIWYQ 

QKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ

QSYSTPFTFGPGTKVDIKRtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqs 

gnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

SEQ ID NO：66

9.7.2-CG2重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCAIRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfp 

epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcp 

appvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsv 

ltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiave 

wesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：70

9.7.2-CG4重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfp 

epvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcpscp 

apeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvs 

vltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiav 

ewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 

SEQ ID NO：86

9.7.2-Ser重链[γ链]蛋白质序列 

mefglswvflvaiikgvqcQVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWI 

RQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRA

EDTAVYYCARRIGGMDVWGQGTTVTVSSAstkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyf 

pepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppc 

papeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvv 

svltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdia 

vewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk