《更昔洛韦的药物组合物及其在生物医药中的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《更昔洛韦的药物组合物及其在生物医药中的应用.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610335083.9 (22)申请日 2016.05.19 (71)申请人 王昌荣 地址 325300 浙江省温州市文成县大峃镇 富洋村 (72)发明人 王昌荣 (51)Int.Cl. C07J 71/00(2006.01) A61K 31/58(2006.01) A61K 31/522(2006.01) A61P 13/08(2006.01) (54)发明名称 更昔洛韦的药物组合物及其在生物医药中 的应用 (57)摘要 本发明公开了更昔洛韦的药物组合物及其 在生物医药中。
2、的应用， 本发明提供的更昔洛韦的 药物组合物中含有更昔洛韦和一种结构新颖的 天然产物化合物()， 更昔洛韦、 化合物()单独 作用时， 可以治疗前列腺增生； 更昔洛韦和化合 物()联合作用时， 对前列腺增生的治疗效果进 一步提高， 可以开发成治疗前列腺增生的药物， 与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著 的进步。 权利要求书1页 说明书6页 CN 105906685 A 2016.08.31 CN 105906685 A 1.一种具有下述结构式的化合物()， 2.一种更昔洛韦的药物组合物， 其特征在于： 包括更昔洛韦、 如权利要求1所述的化合 物()和药学上可以接受的载体， 制备成需要的剂型。
3、。 3.根据权利要求2所述的更昔洛韦的药物组合物， 其特征在于： 药学上可以接受的载体 包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体 或润滑剂。 4.根据权利要求2所述的更昔洛韦的药物组合物， 其特征在于： 所述剂型包括片剂、 胶 囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 5.权利要求1所述的化合物()的制备方法， 其特征在于， 包含以下操作步骤： (a)将丝 瓜络粉碎， 用8595乙醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味， 依次。
4、用石油醚、 乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂， 先用35乙醇洗脱8个柱体积， 再用90乙醇洗脱 12个柱体积， 收集90洗脱液， 减压浓缩得90乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中90乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为120:1、 60:1、 30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分； (d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为40:1、 30:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的。
5、反相硅胶分离， 用体积百分浓度为85的甲醇水溶液等度洗脱， 收集1418个柱体积洗 脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物()。 6.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)用90乙醇热回 流提取， 合并提取液。 7.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。 8.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取， 得到二氯甲烷萃取物。 9.权利要求1所述的化合物()在制备治疗前列腺增生的药物中的应用。 10.权利要求24任一所述的更昔洛韦的药物组合物在制备治疗前。
6、列腺增生的药物中 的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105906685 A 2 更昔洛韦的药物组合物及其在生物医药中的应用 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 涉及更昔洛韦的新用途， 具体涉及更昔洛韦的药物组 合物及其在生物医药中的应用。 背景技术 0002 更昔洛韦临床用于预防及治疗免疫功能缺陷病人的巨细胞病毒感染， 如艾滋病患 者， 接受化疗的肿瘤患者， 使用免疫抑制剂的器官移植病人。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种更昔洛韦的药物组合物， 该药物组合物中含有更昔洛 韦和一种结构新颖的天然产物， 更昔洛韦和该天然产物可以协同治疗前列腺增生。 0004 本发明。
7、的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 0005 一种具有下述结构式的化合物()， 0006 0007 一种更昔洛韦的药物组合物， 包括更昔洛韦、 如权利要求1所述的化合物()和药 学上可以接受的载体， 制备成需要的剂型。 0008 进一步地， 药学上可以接受的载体包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体或润滑剂。 0009 进一步地， 所述剂型包括片剂、 胶囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 0010 上述化合物()的。
8、制备方法， 包含以下操作步骤： (a)将丝瓜络粉碎， 用8595乙 醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味， 依次用石油醚、 乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂， 先用35乙醇洗脱8个柱体积， 再用90乙醇洗脱12个柱体积， 收集90洗 脱液， 减压浓缩得90乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中90乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离， 依次用体积比为120:1、 60:1、 30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d) 说明书 1/6 页 3 CN 105906685 A 3。
9、 步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为40:1、 30:1和10:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体 积百分浓度为85的甲醇水溶液等度洗脱， 收集1418个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩 得到化合物()。 0011 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)用90乙醇热回流提取， 合并提取 液。 0012 进一步地， 化合物()的制备方法中， 所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。 0013 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取， 得到二氯甲烷萃取物。
10、。 0014 上述化合物()在制备治疗前列腺增生的药物中的应用。 0015 上述更昔洛韦的药物组合物在制备治疗前列腺增生的药物中的应用。 0016 本发明的优点： 本发明提供的更昔洛韦的药物组合物中含有更昔洛韦和一种结构 新颖的天然产物， 更昔洛韦和该天然产物单独作用时， 对前列腺增生具有治疗作用； 二者联 合作用时， 对前列腺增生的治疗效果进一步提高， 可以开发成治疗前列腺增生的药物。 具体实施方式 0017 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明保护范 围。 0018 实施例1： 化合物()分离制备及结构确证 0019 分离方法： (a)将丝瓜络(2kg)粉碎，。
11、 用90乙醇热回流提取(15L3次)， 合并提取 液， 浓缩至无醇味(3L)， 依次用石油醚(3L3次)、 乙酸乙酯(3L3次)和水饱和的正丁醇 (3L3次)萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂， 先用35乙醇洗脱8个柱体积， 再用90乙醇洗脱 12个柱体积， 收集90洗脱液， 减压浓缩得90乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中90乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为120:1(11个柱体积)、 60:1(9个柱体积)、 30:1(9 个柱体积)和15:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到。
12、4个组分； (d)步骤(c)中组分 3用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为40:1(6个柱体积)、 30:1(8个柱体积)和10:1(6个 柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为85的甲醇水溶液等度洗脱， 收集1418个柱体积洗 脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物()(HPLC归一化纯度大于98)。 0020 结构确证： HR-ESI-MS显示M+Na+为m/z533.2214， 结合核磁特征可得分子式为 C29H34O8， 不饱和度为13。 核磁共振氢谱数据 H(ppm， DMSO-d6， 600MHz)。
13、： H-1(6.74， d， J 10.0)， H-2(6.08， d， J9.9)， H-5(2.20， s)， H-9(2.61， s)， H-11(4.15， d， J5.4)， H-12 (5.03， s)， H-15(3.89， s)， H-16 (1.97， dd， J13.6， 11.2)， H-16 (2.26， dd， J13.9， 6.6)， H-17(2.85， dd， J11.0， 6.6)， H-18(0.74， s)， H-19(1.51， s)， H-21(7.06， s)， H-22(6.02， br， s)， H-23(7.25， br， s)， H-28(1。
14、.49， s)， H-29(1.46， s)， H-30(1.32， s)， H-2 (2.21， m， 2H)， H-3 (1.04， t， J7.6)； 核磁共振碳谱数据 C(ppm， DMSO-d6， 150MHz)： 150.8(CH， 1-C)， 127.3 (CH， 2-C)， 203.2(C， 3-C)， 47.7(C， 4-C)， 59.4(CH， 5-C)， 187.2(C， 6-C)， 205.1(C， 7-C)， 34.5 (C， 8-C)， 42.7(CH， 9-C)， 40.1(C， 10-C)， 72.4(CH， 11-C)， 82.3(CH， 12-C)， 44.。
15、4(C， 13-C)， 说明书 2/6 页 4 CN 105906685 A 4 68.1(C， 14-C)， 56.2(CH， 15-C)， 31.1(CH2， 16-C)， 41.8(CH， 17-C)， 15.2(CH3， 18-C)， 25.8 (CH3， 19-C)， 121.7(C， 20-C)， 140.1(CH， 21-C)， 110.7(CH， 22-C)， 142.6(CH， 23-C)， 26.7 (CH3， 28-C)， 21.1(CH3， 29-C)， 22.3(CH3， 30-C)， 173.8(C， 1 -C)， 27.5(CH2， 2 -C)， 9.1(CH3，。
16、 3 -C)。 IR光谱表明该化合物含有羰基(1735cm-1)基团。 1H和13C-NMR谱表明， 该化合物含有一 个, -不饱和酮羰基 H6.74(1H， d， J10.0Hz， H-1)和6.08(1H， d， J9.9Hz， H-2)； C150.8(C-1)， 127.3(C-2)， 203.2(C-3)， 两个酮羰基 C187.2(C-6)和205.1(C-7)， 一个 环氧基团 H3.89(1H， s， H-15)； C68.1(C-14)和56.2(C-15)， 一个丙酰氧基侧链 H1.04 (3H， t， J7.6Hz， Me-3 )和2.21(2H， m， H-2 )； C。
17、173.8(C-1 )， 27.5(C-2 )和9.1(C-3 )， 以及一个 -取代呋喃环 H7.06(1H， s， H-21)， 6.02(1H， br， s， H-22)和7.25(1H， br， s， H- 23)； C121.7(C-20)， 140.1(C-21)， 110.7(C-22)和142.6(C-23)。 此外， 还含有五个甲基信 号 H0.74(3H， s， Me-18)， 1.51(3H， s， Me-19)， 1.49(3H， s， Me-28)， 1.46(3H， s， Me-29)和 1.32(3H， s， Me-30)。 上述数据表明该化合物为柠檬苦素类化合物。
18、。 1H-1HCOSY谱中H-1与H- 2的相关性， 以及HMBC谱中Me-19与C-1， H-1与C-3的相关性证实了 , -不饱和酮羰基结构。 HMBC谱中H-12与C-1 的相关性， 以及1H-1HCOSY谱中Me-3 与H-2 的相关性表明丙酰氧基位 于C-12位上。 HMBC谱中Me-18和Me-30与C-14， 以及H-15与C-16的相关性表明C-14和C-15之 间存在一个环氧基团。 通过核磁数据可知C-17位连有一个 -取代呋喃环； HMBC谱中， H-17与 C-20， C-21和C-22的相关性验证了上述推论。 ROESY谱中H-12与H-17， 以及H-17与H-16 。
19、的相 关性， 表明它们为 构型， 则丙酰氧基侧链为 构型； H-9与H-11， 以及H-9与Me-18很强的相关 性表明H-9、 H-11和Me-18为 构型。 综合氢谱、 碳谱、 HMBC谱和ROESY谱， 以及文献关于相关类 型核磁数据， 可基本确定该化合物如下所示， 立体构型进一步通过ECD试验确定， 理论值与 实验值基本一致。 0021 该化合物化学式及碳原子编号如下： 0022 0023 实施例2： 药理作用 0024 本实施例采用昆明种小鼠去势， 连续3周sc丙酸睾酮5mgkg-1d-1， 造前列腺增 生模型， 观察药物对前列腺增生的治疗作用。 0025 1、 材料与方法 0026。
20、 1.1动物 说明书 3/6 页 5 CN 105906685 A 5 0027 小鼠， 昆明种， 雄性， 2023g， 80只， 由河北省实验动物中心提供。 0028 1.2试剂与样品 0029 更昔洛韦购自中国药品生物制品检定所。 化合物()自制， 制备方法见实施例1。 戊 巴比妥钠， 中国医药集团上海化学试剂公司； 注射用青霉素钠， 华北制药股份有限公司； 丙 酸睾酮注射液， 上海通用药业股份有限公司； 癃闭舒胶囊， 石家庄科迪药业有限公司； 小鼠 睾酮(T)ELISA检测试剂盒， 北京科美东雅生物技术有限公司； 小鼠雌二醇(E2)ELISA检测试 剂盒， 北京科美东雅生物技术有限公司。。
21、 0030 1.3仪器 0031 FA(N)/JA(N)系列电子天平， 上海民桥精密仪器有限公司； TGL-16G高速冷冻离心 机， 上海安亭科学仪器厂； 电动匀浆机， 宁波新芝生物科技股份有限公司； Sn-895B型智能放 免测量仪： 上海原子核研究所四环仪器一厂。 0032 1.4小鼠分组及模型制备 0033 取体重2023g雄性小鼠80只， 随机取10只作为空白对照组， 做假手术处理； 其余 小鼠造前列腺增生模型， 小鼠称重后腹腔注射2戊巴比妥钠(30mgkg-1)麻醉， 常规消毒 皮肤， 于无菌条件下经阴囊摘除双侧睾丸， 残端处结扎， 缝合皮肤， 肌内注射青霉素20万u kg-1； 手。
22、术后第3天， 取去势成功、 状态良好的小鼠50只， 随机分为5组用于造前列腺增生模 型， 分别为模型对照组、 阳性对照组(癃闭舒胶囊混悬液450mgkg-1)和更昔洛韦组(80mg kg-1)、 化合物()组(80mgkg-1)、 更昔洛韦与化合物()组合物组 【40mgkg-1更昔洛韦+ 40mgkg-1化合物()】 ， 连续3周每日sc丙酸睾酮5mgkg-1(溶于大豆油)造模， 空白组注射 等量溶媒。 于造模型第1天， 模型对照组ig生理盐水； 阳性对照组ig癃闭舒胶囊混悬液 (450mgkg-1)； 更昔洛韦组、 化合物()组、 更昔洛韦与化合物()组合物组ig上述剂量的药 物， 给药体。
23、积均为20mLkg-1； 空白对照组灌服同体积的生理盐水； 每日给药1次， 连续给药3 周。 于末次给药后2h(禁食不禁水12h)， 小鼠称重后眼眶取血， 离心， 分离血清， 测血清中T， E2水平； 然后脱颈椎处死小鼠， 迅速取前列腺组织， 对各组小鼠前列腺腺体进行立体计量学 测定， 测定腺体的体密度。 0034 1.5血清中T的测定 0035 用小鼠TELISA检测试剂盒测定血清中T的含量： 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶 联免疫吸附试验(ELISA)， 往预先包被T抗体的包被微孔中， 依次加入标本、 对照品、 HRP标记 的检测抗体， 经过温育并彻底洗涤。 用底物TMB显色， TMB在过氧。
24、化物酶的催化下转化成蓝 色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的T呈正相关。 用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(A)， 计算样品浓度， 即得到小鼠血清中T的含量。 0036 1.6血清中E2的测定 0037 用小鼠E2ELISA检测试剂盒测定血清中雌二醇的含量： 试剂盒采用双抗体一步夹 心法酶联免疫吸附试验(ELISA)， 往预先包被E2抗体的包被微孔中， 依次加入标本、 对照品、 HRP标记的检测抗体， 经过温育并彻底洗涤。 用底物TMB显色， TMB在过氧化物酶的催化下转 化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的E2呈正相关。 用酶标 仪。
25、在450nm波长下测定A， 计算样品浓度， 即得到小鼠血清中E2的含量。 0038 1.7前列腺腺体的体密度测定 0039 采用通用立体计量学测定方法， 应用测试格点分析法， 计算腺体上的交叉点数与 说明书 4/6 页 6 CN 105906685 A 6 参照系中的交叉点数的百分比， 为该组织中腺体的体密度(Vv)。 0040 1.8统计学方法 0041实验数据采用SPSS13.0统计软件处理。 数据以表示， 计量资料组间比较采用单 因素方差分析。 P0.05有统计学意义。 0042 2、 实验结果 0043 2.1对小鼠前列腺增生模型血清T、 E2水平的影响 0044 与空白对照组比， 模。
26、型组小鼠血清中T水平显著升高(P0.01)， E2水平显著降低 (P0.01)， 说明造模成功。 和模型对照组相比， 更昔洛韦与化合物()组合物组及阳性对照 组小鼠血清中T水平显著降低、 E2水平显著升高(P0.01)； 与模型对照组比， 更昔洛韦组、 化合物()组小鼠血清中T水平降低、 E2水平升高(P0.05)。 结果见表1。 0045 2.2对前列腺增生模型小鼠前列腺腺体的体密度的影响 0046 与空白对照组比， 模型组前列腺腺体体密度显著升高(P0.01)， 说明造前列腺增 生模型成功。 与模型对照组比， 更昔洛韦组、 化合物()组小鼠前列腺腺体的体密度降低(P 0.05)； 和模型对。
27、照组相比， 更昔洛韦与化合物()组合物组、 阳性对照组小鼠前列腺腺体 的体密度显著降低(P0.01)。 结果见表1。 0047 表1对小鼠前列腺增生模型血清睾酮、 雌二醇水平及前列腺腺体密度的影响 0048 组别睾酮/nmolL-1雌二醇/nmolL-1Vv 空白对照组569.2457.369.321.82.60.2 模型对照组4491.2950.654.111.118.70.8 阳性对照组3232.2839.467.725.95.40.2 更昔洛韦组3653.2932.964.326.29.40.4 化合物()组3765.2944.968.634.99.70.3 更昔洛韦与化合物()组合物组。
28、2714.2982.893.836.05.20.4 0049 本实验采用小鼠去势后皮下注射丙酸睾酮成功建立前列腺增生模型， 小鼠去势 后， 前列腺迅速萎缩， 再给予外源性雄激素， 可造成动物体内性激素水平紊乱， 使前列腺发 生增生。 睾酮(T)是人体内主要的雄激素， 在5 -还原酶作用下变为双氢睾酮(DHT)， 前列腺 内的DHT浓度增加可导致腺体增生。 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)通过DHT的作用增加释 放， 促前列腺间质增生， 刺激前列腺上皮细胞生长的表皮细胞生长因子(EGF)与血浆中雄激 素的含量呈正相关， 导致前列腺的增生， 造成前列腺增生模型。 雌雄激素比例的变化是前列 腺增生。
29、的关键诱因， 血清中睾酮、 雌二醇水平对反应前列腺增生状况有重要意义。 前列腺湿 重及前列腺指数是反映前列腺增生程度最客观的指标之一， 前列腺组织形态是确定是否增 生的关键； 前列腺增生是慢性病， 长期的病理变化可能会累及相关脏器。 前列腺增生可能会 累及机体免疫功能， 胸腺的组织形态学变化及其淋巴细胞的个数可有效反应前列腺增生状 况。 0050 上述结果表明， 更昔洛韦、 化合物()单独作用时， 可以治疗前列腺增生； 更昔洛韦 和化合物()联合作用时， 对前列腺增生的治疗效果进一步提高， 可以开发成治疗前列腺增 生的药物。 0051 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明的保护 说明书 5/6 页 7 CN 105906685 A 7 范围。 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。 说明书 6/6 页 8 CN 105906685 A 8 。