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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410497889.9 (22)申请日 2014.09.25 A61K 38/08(2006.01) A61K 9/19(2006.01) A61K 47/24(2006.01) A61K 47/28(2006.01) A61K 47/26(2006.01) A61K 47/22(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 深圳翰宇药业股份有限公司 地址 518057 广东省深圳市南山区高新技术 工业园中区翰宇生物医药园办公大楼 四层 (72)发明人 徐春莲 刘建 马亚平 袁建成 (74)专利代理机构 。
2、北京万慧达知识产权代理有 限公司 11111 代理人 张金芝 杨颖 (54) 发明名称 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其 制备方法 (57) 摘要 本发明属于药物合成技术领域， 具体涉及一 种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方 法。 本发明的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其按重量份计算， 包括以下组分 ： 卡非佐米， 5 20 份 ； 抗氧化剂， 0.1 1 份 ； pH 值调节剂， 1 5 份 ； 磷脂类， 40 100 份 ； 胆固醇， 5 20 份 ； 冻 干保护剂， 5 25 份。本发明的制备方法包括步 骤 ： 1) 制备多室脂质体混悬液 ； 2) 制备单室脂质 体 ；。
3、 3) 制备卡非佐米脂质体冻干粉。本发明得到 的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后 pH 值 和粒径变化均稳定、 包封率保持稳定， 冻干后水复 溶性较好， 水复溶后的粒径均匀， 颗粒呈球形或类 球形， 外观圆整均匀。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书18页 CN 105497871 A 2016.04.20 CN 105497871 A 1/2 页 2 1. 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于按重量份计算， 包括以下组 分 ： 卡非佐米， 5 20 份， 优选 5 15， 更优选 5 10 份 ； 抗氧化剂。
4、， 0.1 1 份， 优选 0.1 0.8 份， 更优选 0.1 0.5 份 ； pH 值调节剂， 1 5 份， 优选 1 4 份， 更优选 1 3 份 ； 磷脂类， 40 100 份， 优选 50 80 份， 更优选 50 60 份 ； 胆固醇， 5 20 份， 优选 5 15 份， 更优选 5 10 份 ； 冻干保护剂， 5 25 份， 优选 5 20 份， 更优选 10 15 份。 2. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述组合物还包括有机溶剂和缓冲溶液。 3. 根据权利要求 2 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述有机溶。
5、剂为氯仿或无水乙醚 ； 所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。 4. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述磷脂类的纯度在 98以上。 5. 根据权利要求 4 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述磷脂类为胆碱磷脂、 溶血磷脂、 乙醇胺磷脂。 6. 根据权利要求 5 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述磷脂类选自蛋黄卵磷脂、 氢化蛋黄卵磷脂、 氢化大豆卵磷脂、 1， 2- 二油酰基卵磷 脂、 二棕榈酸磷脂酰胆碱、 二硬脂酰磷脂酰胆碱、 二癸酰基卵磷脂、 二月桂酰基卵磷脂、 二肉 豆蔻酰基卵磷脂、 1- 肉豆蔻酰基 -2。
6、- 棕榈酰基卵磷脂、 1- 肉豆蔻酰基 -2- 硬脂酰基卵磷脂 中的一种或几种 ； 优先的选自蛋黄卵磷脂、 氢化蛋黄卵磷脂、 二硬脂酰磷脂酰胆碱、 二肉豆蔻酰基卵磷 脂、 1- 肉豆蔻酰基 -2- 硬脂酰基卵磷脂中的一种或几种 ； 最优先的选自氢化蛋黄卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或两种。 7. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 磷脂类、 胆固醇和抗氧化剂组成脂质体， 卡非佐米与所述脂质体的重量之比为 1:2 1:20。 8. 根据权利要求 1 或 7 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 其中所述磷脂类与胆固醇的重量之比为 2:1。
7、 20:1。 9. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述抗氧化剂选自维生素 E 和维生素 C 中的一种或两种。 10. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述的 pH 调节剂选自柠檬酸、 醋酸、 盐酸、 稀盐酸或氢氧化纳中的一种或几种， 优选选 自柠檬酸或氢氧化纳。 11. 根据权利要求 1 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于 ： 所述冻干保护剂选自乳糖、 甘露醇、 山梨醇、 海藻糖、 蔗糖和葡聚糖的两种或两种以上， 优选海藻糖和乳糖的混合物。 12. 根据权利要求 11 所述的卡非佐米药物的脂质。
8、体冻干组合物， 其特征在于 ： 权 利 要 求 书 CN 105497871 A 2 2/2 页 3 包裹药物的脂质体包括药物、 脂质类、 胆固醇和抗氧化剂， 其重量是冻干保护剂的 2 28.2 倍。 13. 一种制备如权利要求 1 12 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法， 其 特征在于包括以下步骤 ： 1) 制备多室脂质体混悬液 按薄膜分散法将药物包裹于脂质体形成薄膜， 倒入水相， 振摇后形成 O/W 乳状多室脂 质体混悬液 ； 2) 制备单室脂质体 将步骤 1) 制备的多室脂质体混悬液经过高压均质法或通过细胞粉碎机制备成粒径 100 300nm 的单室脂质体， 用 pH 调节剂将。
9、 pH 值调为 3.0 6.5， 优选 3.8 6.5， 最优选 4.0 5.0 ； 3) 制备卡非佐米脂质体冻干粉 将步骤 2) 制备的单室脂质体加入冻干保护剂， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 14. 根据权利要求 13 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法， 其特征在于 ： 其中步骤 3) 中， 冻干保护剂以溶于磷酸盐缓冲液的形式加入。 15. 根据权利要求 13 所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法， 其特征在 于 ： 其中步骤 3) 采用以下冻干工艺 ： 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥。
10、， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保持 6h。 16. 根据权利要求 13 所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法， 其特征在 于 ： 其中步骤 2) 中， 高压均质的控制参数为温度 5 35， 压力 20 80MPa， 循环次数为 5 15 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 5 35， 功率 100 400W， 超声时间为 1 10 分钟。 17. 根据权利要求 13 所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法， 其特征在 于 ： 其中步骤 1) 薄膜形成如下 ： 首先通过在 30 45的温度下用旋转蒸发器减压旋。
11、蒸除净有机溶剂， 用氮气吹干或 继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶剂除尽。 18. 权利要求 1-12 所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物在制备用于治疗多发性 骨髓瘤的药物中的用途。 权 利 要 求 书 CN 105497871 A 3 1/18 页 4 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及药物合成技术领域， 具体涉及一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物 及其制备方法。 背景技术 0002 多发性骨髓瘤是发生在血浆细胞中的血癌， 它通常生长在骨髓、 大多数的骨骼海 绵软组织内， 血细胞由骨髓生产。 根据美国癌症协会预测， 2012年将有21700人被。
12、诊断出患 有多发性骨髓瘤， 10710 将死于这种疾病。 0003 美国食品和药物管理局 7 月 20 日批准 Kyprolis( 卡非佐米， 又称 Carfi lzomib) 用 于此前至少经过两个优先疗法包括万珂(硼替佐米)和免疫调节剂治疗的多发性骨髓瘤患 者的治疗。通过对 266 例事先接受了硼替佐米和沙利度胺治疗的多发性骨髓瘤复发患者进 行的临床研究， 对 Kyprolis 的安全性和有效性进行了评估。在超过 30的参加研究者中 观察到的最常见副作用有疲劳、 低血细胞计数和血小板水平、 气短、 腹泻、 发烧。 观察到的与 Kyprolis 有关的严重副作用包括心脏衰竭和呼吸急促。 00。
13、04 卡非佐米化学名称为 ： 0005 N-(2S)-2-(morpholin-4-ylacetyl)amino-4-phenylbutanoyl-L-leucyl-N -(2S)-4-methyl-1-(2R)-2-methyloxiran-2-yl-1-oxopentan-2-yl-L-phenylalani namide， 分子式 ： C40H57N5O7， 分子量 ： 719.9， 结构式如下 ： 0006 0007 卡非佐米是一种四肽基环氧骨架蛋白酶体抑制剂不可逆地结合至 20S 蛋白酶体 含苏氨酸N-端活性部位， 蛋白水解的核心颗粒26S蛋白酶体。 Carfi lzomib在体外实。
14、体瘤和 血液系统肿瘤细胞有抗增殖和诱导凋亡活性。在动物中， carfi lzomib 抑制在血液和组织中 蛋白酶体活性并在多发性骨髓瘤、 血液和实体瘤模型中延迟肿瘤生长。 0008 卡非佐米几乎不溶于水， 极微溶于酸性条件， 不易做成液体制剂长期存放， 大大的 限制了在临床中的应用， 冻干制剂是较理想的剂型。目前上市的 Kyprolis 是由 60mg 卡非 佐米、 3000mg 磺丁基醚 - 环糊精和 57.7mg 柠檬酸组成的无菌注射粉针剂， 虽然磺丁基 醚 - 环糊精形成的包合物在一定程度上提高了药物的溶解性， 但药物在溶液中非常不 稳定， 在室温 (15-30 ) 最多只能稳定 4 小。
15、时， 这就要求最好在低温下输液， 而现实条件不 说 明 书 CN 105497871 A 4 2/18 页 5 能完全保证药品的安全性。另外， 由于该处方包括磺丁基 - 环糊精， 对于长期连续用药 的患者来说， 由于大量的磺丁基 - 环糊精进入人体血液， 存在安全性隐患。该无菌注射 粉针剂的 pH 值为 3.5， 先用 29ml 无菌注射用水溶解， 取给药剂量再用 50ml 5葡萄糖注射 液稀释后 2 至 10 分钟完成静脉输液， 由于输液的 pH 值偏低， 输液速度偏快， 不仅给患者带 来刺激疼痛感， 更会引起血管痉挛和静脉炎。因此需要一种新型卡非佐米药物。 发明内容 0009 为了解决以上。
16、问题， 本发明引入了脂质体技术， 脂质体是由磷脂和胆固醇构成的 具有双分子层的微型泡囊体， 药物可包封于类脂质双分子层内， 具有增加药物溶解性、 降低 药物毒性、 提高药物稳定性、 提高药物靶向性和生物利用度等优点。 0010 本发明的目的在于提供一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法， 将 药物包裹于脂质体并冷冻干燥， 得到的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后 pH 值和粒 径变化均稳定、 包封率保持稳定， 在 88以上， 冻干后水复溶性较好， 水复溶后的粒径均匀， 冻干前后粒径均在100300nm范围内， 呈球形或类球形， 外观圆整均匀， 用5葡萄糖溶液 稀释后稳定性和安全性更好 。
17、0011 具体而言， 本发明提供的一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物， 其特征在于按 重量份计算， 包括以下组分 ： 0012 卡非佐米， 5 20 份， 优选 5 15， 更优选 5 10 份 ； 0013 抗氧化剂， 0.1 1 份， 优选 0.1 0.8 份， 更优选 0.1 0.5 份 ； 0014 pH 值调节剂， 1 5 份， 优选 1 4 份， 更优选 1 3 份 ； 0015 磷脂类， 40 100 份， 优选 50 80 份， 更优选 50 60 份 ； 0016 胆固醇， 5 20 份， 优选 5 15 份， 更优选 5 10 份 ； 0017 冻干保护剂， 5 25 份，。
18、 优选 5 20 份， 更优选 10 15 份。 0018 所述组合物还包括有机溶剂和缓冲溶液。所述有机溶剂为氯仿或无水乙醚 ； 所述 缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。 0019 所述磷脂类选自高纯度蛋黄卵磷脂、 高纯度氢化蛋黄卵磷脂、 高纯度氢化大豆卵 磷脂 (HSPC)、 1， 2- 二油酰基卵磷脂 (DOPC)、 二棕榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC)、 二硬脂酰磷脂 酰胆碱 (DSPC)、 二癸酰基卵磷脂 (DDPC)、 二月桂酰基卵磷脂 (DLPC)、 二肉豆蔻酰基卵磷脂 (DMPC)、 1- 肉豆蔻酰基 -2- 棕榈酰基卵磷脂 (MPPC)、 1- 肉豆蔻酰基 -2- 硬脂酰基卵磷脂 (MSPC。
19、) 中的一种或几种 ； 优先的选自高纯度蛋黄卵磷脂、 高纯度氢化蛋黄卵磷脂、 二硬脂 酰磷脂酰胆碱 (DSPC)、 二肉豆蔻酰基卵磷脂 (DMPC)、 1- 肉豆蔻酰基 -2- 硬脂酰基卵磷脂 (MSPC) 中的一种或几种 ； 最优先的选自高纯度氢化蛋黄卵磷脂和 ) 和二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC) 中的一种或两种。 0020 此外， 在本发明的组合物中， 磷脂的纯度直接影响脂质体的稳定性， 不同磷脂水合 后会产生不同形态， 胆碱磷脂最易形成脂质体， 而溶血磷脂、 乙醇胺磷脂等易形成胶束及锥 形分子， 磷脂中非胆碱磷脂的含量过高， 会使脂质体膜不稳定及出现脂质体、 胶束等多相混 合物。 因此。
20、为了提高药物的包封率和脂质体的稳定性， 上述磷脂类的纯度均在98以上， 本 申请所述的高纯度指纯度在 98以上。 0021 脂溶性药物主要分散到脂质体膜上， 药物的比例越高， 则包封率会较高， 但同时载 说 明 书 CN 105497871 A 5 3/18 页 6 药量会降低。为了达到较高的包封率和合适的载药量， 本发明选择卡非佐米与所述脂质体 的重量之比为 1:2 1:20， 脂质体重量包括磷脂类、 胆固醇和抗氧化剂。 0022 磷脂化学性质活泼， 常温下暴露在空气中容易被氧化变质， 加入一定比例的胆固 醇溶液能起到稳定脂质体化学性质， 改善脂质体分子结构， 使脂质体被氧化速率显著降低， 。
21、同时起到改善脂质体膜的通透性及流动性， 但当胆固醇比例过大时， 组成的脂质体的磷脂 的量太少， 一方面脂质体微囊膜形成困难， 另一方面所形成的脂质体膜也会变的不牢固， 过 高胆固醇使得脂质体膜亲水性太强， 膜容易破坏， 包含物将容易渗漏出来， 同时脂质体的粒 径会随胆固醇的含量增加而先增加后减小， 为了解决以上问题， 本发明选择磷脂类与胆固 醇的重量之比为 2:1 20:1。 0023 所述抗氧化剂选自维生素 E 和维生素 C 中的一种或两种。脂质体在制备过程中容 易氧化， 加入一定的抗氧化剂对脂质体起到保护的作用， 提高脂质体的稳定性， 提高了包封 率， 相应的减少了渗透率。 0024 所述。
22、的 pH 调节剂选自柠檬酸、 醋酸、 盐酸、 稀盐酸或氢氧化钠中的一种或几种， 优 先的选自柠檬酸或氢氧化钠。 0025 所述冻干保护剂选自乳糖、 甘露醇、 山梨醇、 海藻糖、 蔗糖和葡聚糖的两种或两种 以上， 优选海藻糖和乳糖的混合物。脂质体混悬液冻干前后粒径很难把握， 冻干复溶性差， 粒径很容易变大， 外观容易塌陷， 为了保证脂质体冻干后具有好的复溶性， 粒径与冻干前变 化不大， 外观成疏松块状或粉末状， 本发明采用至少两种冻干保护剂， 包裹药物的脂质体 ( 包括药物、 脂质类、 胆固醇和抗氧化剂 ) 的重量是冻干保护剂的 2 28.2 倍。 0026 本发明还提供了一种制备所述的卡非佐米。
23、药物的脂质体冻干组合物的方法， 其特 征在于包括以下步骤 ： 0027 1) 制备多室脂质体混悬液 0028 按薄膜分散法将药物包裹于脂质体形成薄膜， 倒入水相 ( 如缓冲溶液 )， 振摇后形 成 O/W 乳状多室脂质体混悬液 ； 0029 2) 制备单室脂质体 0030 将步骤 1) 制备的多室脂质体混悬液经过高压均质法或通过细胞粉碎机制备成粒 径 100 300nm 的单室脂质体， 用 pH 调节剂将 pH 值调为 3.0 6.5， 优选 3.8 6.5， 最优 选 4.0 5.0 ； 0031 3) 制备卡非佐米脂质体冻干粉 0032 将步骤 2) 制备的单室脂质体加入冻干保护剂， 冷冻。
24、干燥制成卡非佐米脂质体冻 干粉。 0033 其中步骤 1) 薄膜形成如下 ： 0034 首先通过在 30 45的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂， 用氮气吹 干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶剂除尽。 0035 其中步骤2)中， 高压均质的控制参数为温度535， 压力2080MPa， 循环次数 为 5 15 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 5 35， 功率 100 400W， 超声时间为 1 10 分钟。 0036 其中步骤 3) 中， 冻干保护剂以溶于磷酸盐缓冲液的形式加入。 0037 此外， 冻干工艺直接影响脂质体冻干品的质量好坏， 不适合的冻干工艺使得出的 说 明 书 C。
25、N 105497871 A 6 4/18 页 7 样品外观容易塌陷、 不规则， 复溶性差， 粒径大， 为了得出最佳的脂质体冻干样品， 本发明的 步骤 3) 采用以下冻干工艺 ： 0038 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 0039 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 0040 第三阶段， 10保持 2h， 25保持 6h。 0041 具体而言， 本发明提供的一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的制备方法如 下 ： 0042 称取磷脂类和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚溶解完全， 加入。
26、卡非佐 米原料粉末溶解完全， 在 30 45的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂， 在瓶内 壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶剂除尽， 加入 含有抗氧化剂的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 55 80水浴振摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用 pH 调节剂将乳液混悬 液 pH 值调为 3.0 6.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 振摇1040分钟溶解完 全， 分装于小瓶， 。
27、冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度 5 35， 压力 20 80MPa， 循环次数为 5 15 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 5 35， 功 率 100 400W， 超声时间为 1 10 分钟。 0043 本发明引入了脂质体技术， 提供了一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制 备方法， 将药物包裹于脂质体并冷冻干燥， 得到的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后 pH 值和粒径变化均稳定、 包封率保持稳定， 在 88以上， 冻干后水复溶性较好， 水复溶后的 粒径均匀， 冻干前后粒径均在100300nm范围内， 颗粒呈球形或类球形， 外观圆整均匀， 用 5葡萄糖溶液稀。
28、释后稳定性和安全性更好。 具体实施方式 0044 下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明， 旨在用于说明本发明而非限定本 发明。应当指出， 对于本领域技术人员而言， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以对本发 明进行若干改进和修饰， 这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。 0045 实施例一 ( 药物 30-100mg)1000 个剂量单位 0046 1. 处方 0047 卡非佐米60g 维生素 E2.25g 柠檬酸15g 高纯度氢化蛋黄卵磷脂375g 胆固醇60g 说 明 书 CN 105497871 A 7 5/18 页 8 海藻糖45g 乳糖45g 磷酸盐缓冲溶液5000ml 。
29、0048 2. 制备工艺 0049 称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚溶解完 全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 40的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶 剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶 剂除尽， 加入含有维生素 E 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 70水浴振 摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用 pH 调节剂将乳 液混悬液 pH 值调为 4.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm。
30、， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 用磷酸盐缓冲液定容至 5000ml， 振摇30分钟溶解完全， 分装于1000个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 高压均质的控制参数为温度25， 压力60MPa， 循环次数为10次 ； 细胞粉碎机的控制参数为 温度 30， 功率 200W， 超声时间为 5 分钟。 0050 3. 冻干工艺 0051 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 00。
31、52 对比实施例一 0053 A 第一阶段冻干工艺对比 0054 1. 处方 0055 卡非佐米60g 维生素 E2.25g 柠檬酸15g 高纯度氢化蛋黄卵磷脂375g 胆固醇60g 海藻糖45g 乳糖45g 磷酸盐缓冲溶液5000ml 0056 2. 制备工艺 0057 称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚溶解完 说 明 书 CN 105497871 A 8 6/18 页 9 全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 40的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶 剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶 剂除尽， 加入。
32、含有维生素 E 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 70水浴振 摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用 pH 调节剂将乳 液混悬液 pH 值调为 4.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 用磷酸盐缓冲液定容至 5000ml， 振摇30分钟溶解完全， 分装于1000个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 高压均质的控制参数为温度25， 压力60MPa， 循环次数为10次 ； 细胞粉碎机的控制参数为 温度 30， 功率 。
33、200W， 超声时间为 5 分钟。 0058 3. 冻干工艺 0059 第一阶段， 慢速降温预冻， 2小时内从20降至-45， -45保持5h ； 第二阶段， 逐 级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保持 6h。 0060 对比实施例一 0061 B 第二阶段冻干工艺对比 0062 1. 处方 0063 卡非佐米60g 维生素 E2.25g 柠檬酸15g 高纯度氢化蛋黄卵磷脂375g 胆固醇60g 海藻糖45g 乳糖45g 磷酸盐缓冲溶液5000ml 0064 2. 制备工艺 0065 称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于。
34、梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚溶解完 全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 40的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶 剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机溶 剂除尽， 加入含有维生素 E 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 70水浴振 摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用 pH 调节剂将乳 液混悬液 pH 值调为 4.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 用磷酸盐缓。
35、冲液定容至 5000ml， 振摇30分钟溶解完全， 分装于1000个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 说 明 书 CN 105497871 A 9 7/18 页 10 高压均质的控制参数为温度25， 压力60MPa， 循环次数为10次 ； 细胞粉碎机的控制参数为 温度 30， 功率 200W， 超声时间为 5 分钟。 0066 3. 冻干工艺 0067 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 升温干燥， -3保持 22h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保持 6h。 0068 实施例二 0069 1. 处方 0070 卡。
36、非佐米50g 维生素 E2g 柠檬酸15g 二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)275g 胆固醇50g 蔗糖35g 甘露醇40g 磷酸盐缓冲溶液5000ml 0071 2. 制备工艺 0072 称取二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC) 和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚 溶解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 38的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净 有机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有 机溶剂除尽， 加入含有维生素 E 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 60水 浴振摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水。
37、化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用柠檬酸将乳 液混悬液 pH 值调为 5.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的蔗糖和甘露醇溶液， 用磷酸盐缓冲液 定容至 5000ml， 振摇 35 分钟溶解完全， 分装于 1000 个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体 冻干粉。高压均质的控制参数为温度 30， 压力 50MPa， 循环次数为 12 次 ； 细胞粉碎机的控 制参数为温度 20， 功率 300W， 超声时间为 8 分钟。 0073 3. 冻干工艺 0074 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 2。
38、0降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 0075 对比实施例二 0076 药物 ： 脂质体重量比为 1:25 0077 1. 处方 说 明 书 CN 105497871 A 10 8/18 页 11 0078 卡非佐米50g 维生素 E2g 柠檬酸15g 二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)1250g 胆固醇50g 蔗糖35g 甘露醇40g 磷酸盐缓冲溶液5000ml 0079 2. 制备工艺 0080 称取二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC) 和胆固醇于梨形瓶中。
39、， 加适量氯仿或无水乙醚 溶解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 38的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净 有机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有 机溶剂除尽， 加入含有维生素 E 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 60水 浴振摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用柠檬酸将乳 液混悬液 pH 值调为 5.5， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的蔗糖和甘露醇溶液， 用磷酸盐缓冲液 定容。
40、至 5000ml， 振摇 35 分钟溶解完全， 分装于 1000 个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体 冻干粉。高压均质的控制参数为温度 30， 压力 50MPa， 循环次数为 12 次 ； 细胞粉碎机的控 制参数为温度 20， 功率 300W， 超声时间为 8 分钟。 0081 3. 冻干工艺 0082 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 0083 实施例三 0084 1. 处方 0085 卡非佐米70g。
41、 维生素 C5g 柠檬酸40g 高纯度氢化大豆卵磷脂 (HSPC)600g 说 明 书 CN 105497871 A 11 9/18 页 12 胆固醇150g 葡聚糖100g 海藻糖100g 磷酸盐缓冲溶液2500ml 0086 2. 制备工艺 0087 称取高纯度氢化大豆卵磷脂 (HSPC) 和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙 醚溶解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 45的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除 净有机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保 有机溶剂除尽， 加入含有维生素 C 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 。
42、20 分钟， 于 75 水浴振摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用柠檬酸将 乳液混悬液pH值调为4.0， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 振摇 40 分钟溶解完全， 分装于小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 高压均质的控制参数为温度15， 压力 30MPa， 循环次数为 15 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 15， 功率 250W， 超声时间为 5 分 钟。 0088 3. 冻干工艺 0089 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20。
43、降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 0090 对比实施例三 0091 磷脂 ： 胆固醇比为 30:1 0092 1. 处方 0093 卡非佐米70g 0094 维生素 C5g 柠檬酸40g 高纯度氢化大豆卵磷脂 (HSPC)600g 胆固醇20g 葡聚糖100g 海藻糖100g 说 明 书 CN 105497871 A 12 10/18 页 13 磷酸盐缓冲溶液2500ml 0095 2. 制备工艺 0096 称取高纯度氢化大豆卵磷脂 (HSPC) 和胆。
44、固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙 醚溶解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 45的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除 净有机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保 有机溶剂除尽， 加入含有维生素 C 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 75 水浴振摇 1 2 小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用柠檬酸将 乳液混悬液pH值调为4.0， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径在100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂， 振摇 40 分钟溶解。
45、完全， 分装于小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。 高压均质的控制参数为温度15， 压力 30MPa， 循环次数为 15 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 15， 功率 250W， 超声时间为 5 分 钟。 0097 3. 冻干工艺 0098 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 0099 实施例四 0100 1. 处方 0101 卡非佐米30g 维生素 C6g 柠檬酸4g 0102 氢氧化钠2g 二。
46、棕榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC)600g 胆固醇30g 山梨醇70g 乳糖80g 磷酸盐缓冲溶液2500ml 0103 2. 制备工艺 0104 称取二棕榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC) 和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚 溶解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 30 的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有 机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后， 用氮气吹干或继续负压旋蒸 10 分钟以确保有机 说 明 书 CN 105497871 A 13 11/18 页 14 溶剂除尽， 加入含有维生素 C 的磷酸盐缓冲溶液 (pH6.8)， 摇匀， 静置 20 分钟， 于 80水浴 振摇 1 2 。
47、小时洗膜， 直至薄膜完全水化得到 O/W 乳状多室脂质体混悬液， 用柠檬酸 / 氢氧 化钠将乳液混悬液 pH 值调为 3.8， 置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声， 控制粒径 在 100 300nm， 得到小单室脂质体， 加入溶于磷酸盐缓冲液的山梨醇和乳糖溶液， 振摇 10 分钟溶解完全， 分装于 1000 个小瓶， 冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控 制参数为温度 10， 压力 80MPa， 循环次数为 5 次 ； 细胞粉碎机的控制参数为温度 35， 功 率 400W， 超声时间为 10 分钟。 0105 3. 冻干工艺 0106 第一阶段， 快速降温预冻， 90 分钟内从 。
48、20降至 -45， -45保持 5h ； 第二阶段， 逐级升温干燥， -25保持 6h， -10保持 6h， -3保持 10h ； 第三阶段， 10保持 2h， 25保 持 6h。 0107 实施例五 0108 1. 处方 0109 卡非佐米80g 维生素 E4g 柠檬酸10g 氢氧化钠30g 0110 二月桂酰基卵磷脂 (DLPC)640g 胆固醇160g 海藻糖50g 甘露醇30g 磷酸盐缓冲溶液2500ml 0111 2. 制备工艺 0112 称取二月桂酰基卵磷脂 (DLPC) 和胆固醇于梨形瓶中， 加适量氯仿或无水乙醚溶 解完全， 加入卡非佐米原料粉末溶解完全， 在 35的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有 机溶剂， 在瓶内壁形成一层均匀的薄。