吡唑并嘧啶JAK抑制剂化合物和方法.pdf

本发明提供式Ia的JAK激酶抑制剂、其对映异构体、非对映异构体或可药用盐，其中R1、R2、R7和Z在本申请中定义；提供药物组合物，所述药物组合物包括式Ia化合物和可药用载体、辅料或媒介物，和提供在患者中治疗响应JAK激酶活性抑制的疾病或病状或减轻所述疾病或病状的严重程度的方法。

1.式Ia化合物，其对映异构体、非对映异构体或可药用盐：其中：R为H；R为-OR、-NRR、-NRNR、-NR S(O)R或-NRS(O)R；R为H或C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、OR或NRR取代；R为H、C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被R取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被R取代；或者R和R与它们连接的氮一起形成任选被R取代的C-C杂环基；Z为-OR或-NRR；R为H或C-C烷基；R为H、C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被R取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被R取代；R为H、卤素、C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基或-O(C-C烷基)；R独立地为氧代、卤素、OR或NRR；R独立地为氧代、-CN、-CF、卤素、-C(O)C-C烷基、-C(O)OR、-C(O)NRR、-(C-C烷基)NRR、-(C-C烷基)OR、-(C-C烷基)SR、-O[C(R)]O-、任选被氧代或F取代的C-C烷基、任选被氧代或F取代的-(C-C烷基)(C-C环烷基)、任选被卤素、氧代、C-C烷基或C(O)C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂环基、任选被卤素或C-C烷基或-O(C-C烷基)取代的-(C-C烷基)C芳基或任选被卤素或C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂芳基；R独立地为氧代、卤素、OR或NRR；R独立地为氧代、-CN、-CF、卤素、-O[C(R)]O-、-C(O)C-C烷基、-C(O)OR、-C(O)NRR、-(C-C烷基)NRR、-(C-C烷基)OR、任选被氧代或F取代的C-C烷基、任选被卤素、氧代、C-C烷基或C(O)C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂环基、任选被卤素或C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂芳基、任选被C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基、C-C环烷基、-CF、卤素、-CN、-OR或-NRR取代的-(C-C烷基)苯基或任选被氧代、-NRR、C-C烷基或F取代的-(C-C烷基)C-C环烷基；R为H或C-C烷基；R为氧代、卤素、C-C烷基、-C(O)C-C烷基、-C(O)OR、C芳基、C-C环烷基、C-C杂芳基或C-C杂环基；其中所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被C-C烷基、-(C-C烷基)OR、氧代、卤素或NRR取代；R和R独立地为H、-CF、-CHF、-CHF、C-C烷基、C芳基、C-C环烷基或C-C杂环基；其中所述烷基、芳基和环烷基任选被C-C烷基、-(C-C烷基)OR、氧代、卤素、NRR或C-C杂环基取代；或者R和R与它们连接的原子一起形成任选被氧代、F、C-C烷基、-C(O)C-C烷基或-C(O)OR取代的C-C杂环基；和R和R独立地为H、C-C烷基、C-C环烷基或苯基，其中所述烷基，环烷基和苯基任选被卤素、CH、OH、NH、C(O)O(C-C烷基)或C(O)NH(C-C烷基)取代。 2.权利要求1的化合物，其选自式I，或其对映异构体、非对映异构体或可药用盐：其中：R为H；R为-OR或-NRR；R为H或C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、OR或NRR取代；R为H、C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、OR或NRR取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：氧代、-CN、-CF、卤素、-C(O)C-C烷基、-C(O)OR、-C(O)NRR、-(C-C烷基)NRR、-(C-C烷基)OR、-O[C(R)]O-，任选被氧代或F取代的C-C烷基，任选被卤素、氧代、C-C烷基或C(O)C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂环基，或者任选被卤素或C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂芳基；或者R和R与它们连接的氮一起形成任选被氧代、F、C-C烷基、-C(O)C-C烷基或-C(O)OR取代的C-C杂环基；Z为-OR或-NRR；R为H或C-C烷基；R为H、C-C烷基、C-C烯基、C-C炔基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、OR或NRR取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：氧代、-CN、-CF、卤素、-O[C(R)]O-、-C(O)C-C烷基、-C(O)OR、-C(O)NRR、-(C-C烷基)NRR、-(C-C烷基)OR，任选被氧代或F取代的C-C烷基，任选被卤素、氧代、C-C烷基或C(O)C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂环基，任选被卤素或C-C烷基取代的-(C-C烷基)C-C杂芳基，任选被C-C烷基、-CF、卤素、-CN、-OR或-NRR取代的-(C-C烷基)苯基，或者任选被氧代、-NRR、C-C烷基或F取代的-(C-C烷基)C-C环烷基；R和R独立地为H、-CF、-CHF、-CHF、C-C烷基、C芳基、C-C环烷基或C-C杂环基；其中所述烷基、芳基和环烷基任选被C-C烷基、-(C-C烷基)OR、氧代、卤素、NRR或C-C杂环基取代；或者R和R与它们连接的原子一起形成任选被氧代、F、C-C烷基、-C(O)C-C烷基或-C(O)OR取代的C-C杂环基；和R和R独立地为H、C-C烷基、C-C环烷基或苯基，其中所述烷基，环烷基和苯基任选被卤素、CH、OH、NH、C(O)O(C-C烷基)或C(O)NH(C-C烷基)取代。 3.权利要求1-2的化合物，其中R为-NHR。 4.权利要求1-3的化合物，其中R为-NH。 5.权利要求1和3的化合物，其中R为C-C烷基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基任选被R取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被R取代。 6.权利要求1的化合物，其中R和R与它们连接的氮一起形成任选被R取代的C-C杂环基。 7.权利要求1的化合物，其中R为-NHS(O)R。 8.权利要求1和7的化合物，其中R为任选被R取代的-(C-C芳基)。 9.权利要求1-8的化合物，其中Z为-NHR。 10.权利要求1和3-9的化合物，其中R为C-C烷基、-(C-C烷基)(C-C杂环基)、-(C-C烷基)(C-C环烷基)、-(C-C烷基)(C-C杂芳基)、-(C-C烷基)(C-C芳基)，其中所述烷基任选被R取代，并且所述芳基，环烷基、杂芳基和杂环基任选被R取代。 11.权利要求1的化合物，其中R为H；R为-NRS(O)R；R为H；和R为任选被1-3个取代基取代的苯基，所述取代基选自C-C烷基、-CF和卤素；Z为-NRR；R为H；和R为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，并且其中R任选被1-3个取代基取代，所述取代基选自氧代、卤素和C-C烷基。 12.权利要求1的化合物，其中R为H；R为-NRR；R为H；R为H；R为被苯基并且进一步任选被甲基取代的吡唑基，并且其中所述苯基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基选自甲基、卤素、甲氧基、氰基、三氟甲基、羟基和三氟甲氧基。 13.一种药物组合物，其包含权利要求1-12中任一项的化合物和可药用载体、辅料或媒介物。 14.一种治疗在患者中响应JAK激酶活性抑制的疾病或病状或减轻所述疾病或病状的严重程度的方法，包括给予所述患者治疗有效量的权利要求1-12的化合物。 15.权利要求1-12的化合物，其用于治疗。

技术领域

吡唑并嘧啶化合物，JAK激酶抑制剂，以及含有这些化合物的组合物和 使用方法，包括但不限于体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞。

背景技术

细胞因子途径调介导宽范围的生物功能，所述生物功能包括炎症和免疫 的多个方面。Janus激酶(JAK)(包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)是与I型 和II型细胞因子受体有关的胞质蛋白激酶，其调节细胞因子信号转导。细胞 因子与同族受体的衔接激发了与JAK相关受体的活化，并且这导致JAK-介 导的信号传导子及转录激活子(STAT)蛋白的酪氨酸磷酸化，并最终导致特定 基因组的转录激活(Schindler et al.，2007，J Biol.Chem.282：20059-63)。JAK1、 JAK2和TYK2表现出宽的基因表达模式，而JAK3的表达限于白细胞。细胞 因子受体通常发挥异源二聚体的功能，并因此导致不止一种类型的JAK激酶 通常与细胞因子受体复合物相关。已经在多种情况下通过遗传研究确定了与 不同细胞因子受体复合物相关的具体JAK，并且通过其它实验证据，得到证 实。

JAK1最初是在对于新颖的激酶的筛选中鉴定出的(Wilks A.F.，1989，Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.86：1603-1607)。遗传和生物化学研究显示，JAK1在功 能上和生理上与I型干扰素(例如，IFNα)、II型干扰素(例如，IFNγ)、IL-2和 IL-6细胞因子受体复合物相关(Kisseleva等，2002，gene 285：1-24；Levy等， 2005，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.3：651-662；O’Shea等，2002，Cell，109(suppl.)： S121-S131)。JAK1敲除的小鼠由于LIF受体信号传导缺陷在围产期死亡 (Kisseleva等，2002，gene 285：1-24；O’Shea等，2002，Cell，109(suppl.)： S121-S131)。对来源于JAK1敲除的小鼠的组织的表征表明了该激酶在IFN、 IL-10、IL-2/IL-4和IL-6途径中的关键作用。靶向IL-6途径的人源化的单克 隆抗体(Tocilizumab)最近已由European Commission批准用于治疗中等至严重 类风湿性关节炎(Scheinecker等，2009，Nat.Rev.Drug Discov.8：273-274)。

骨髓增生障碍(Myeloproliferative disorders，MPD)起源于造血干细胞，并 主要表现为基本上正常的骨髓系细胞的计数升高。可在Philadelphia染色体 阳性(Ph+)和Philadelphia染色体阴性(Ph-)之间进行主要区分。Ph+MPD导致 慢性髓细胞性白血病，并由bcr-abl融合蛋白驱动，该bcr-abl融合蛋白致使 造血细胞增殖。Ph-MPD可进一步通过相关的变化细分为三种不同的障碍， 即真性红细胞增多(polycythemia vera，PV)、特发性血小板增多症(essential  thrombocythemia，ET)和特发性骨髓纤维变性(idiopathic myelofibrosis，IMF)。 Dameshek，W.，Blood 6(4)：372-375(1951)。罹患PV的患者遭受高计数的红细 胞，而罹患ET的患者具有高水平的循环血小板。如果不予治疗，两种障碍 均可导致危及生命的血栓形成事件。罹患IMF的患者遭受骨髓的纤维变性， 随后造血作用(hematopoiesis)移至脾和肝中。这主要导致脾肿大，接着在该疾 病的后期导致贫血，这是因为造血作用变得不能达到预期效果。尽管在某些 情况下这些患者可通过同种异体的骨髓移植来治愈，但是这些患者具有不良 预后。对于Ph-MPD疾病，没有已知的治愈方法。

酪氨酸激酶JAK2中的激活突变与PV、ET、IMF及其它疾病相关。事 实上，所有罹患PV的患者以及约50％罹患ET和IMF的患者中潜伏着该突 变。Morgan，K.J.和Gilliland，D.G.，Ann.Rev.Med.59：213-222(2008)。所述突变 是指在成熟人JAK2蛋白617位的缬氨酸替换为苯丙氨酸(V617F)。JAK2中 的其它突变(通常见于外显子12，称作外显子12突变)也具有激活作用，并能 够导致MPD。此外，T875N突变与巨核母细胞白血病相关。最后，在急性白 血病中鉴定了JAK2融合蛋白。

V617F突变起激活JAK2的作用，其导致MPD。在未突变形式中，JAK2 与细胞因子受体(即，EPO-R，TPO-R等)关联，并仅当受体自身通过同源的 细胞因子配体的刺激而激活时被激活。然后，造血作用作为整体通过配体的 存在而受调节。例如，细胞因子红细胞生成素(EPO)刺激造血祖细胞，从而 形成红细胞。因此，将JAK2激活与EPO分开的突变导致红细胞水平升高。 依此类推，血小板生成素(TPO)通过与TPO-R结合来调节血小板生长，其接 着也通过JAK2传导信号。因此，异常的JAK2激活还可导致血小板水平升 高。

需要抑制JAK2的化合物，其对于罹患JAK2致使的骨髓增生障碍以及 响应JAK2抑制的其它疾病的患者是有益的。上述疾病包括其中JAK2是通 过突变或扩增而激活的疾病，以及其中JAK2激活是致癌级联(oncogenic  cascade)一部分的疾病。多种肿瘤细胞系和肿瘤样品具有高水平的磷酸化 STAT3，其为JAK2的靶基因。

JAK3排他性地与γ细胞因子受体共同链(gamma common cytokine  receptor chain)相关，后者存在于IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21细胞 因子受体复合物中。JAK3对于淋巴细胞发育和增殖是至关重要的，且JAK3 中的突变导致严重的联合免疫缺陷(SCID)(O’Shea et al.，2002，Cell， 109(suppl.)：S121-S131)。基于JAK3和JAK3介导途径在调节淋巴细胞中的作 用，已经就免疫抑制的适应症(例如，移植排斥和类风湿性关节炎)靶向了 JAK3和JAK3介导途径(Baslund等，2005，Arthritis & Rheumatism 52：2686-2692；Changelian et al.，2003，Science 302：875-878)。

TYK2与I型干扰素(例如，IFNα)、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23细胞因 子受体复合物相关(Kisseleva等，2002，gene 285：1-24；Watford，W.T.& O’Shea， J.J.，2006，Immunity 25：695-697)。与此一致，来源于TYK2缺陷人类的原代细 胞具有缺陷的I型干扰素、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23信号传导。靶向IL-12 和IL-23细胞因子的共享的p40亚基的全长人单克隆抗体(Utsekinumab)最近 由European Commission批准用于治疗中等至严重斑块状银屑病(Kruege等， 2007，N.Engl.J.Med.356：580-92；Reich等，2009，Nat.Rev.Drug Discov. 8：355-356)。此外，正在对靶向IL-12和IL-13途径的抗体进行临床试验，用 于治疗克罗恩病(Mannon等，2004，N.Engl.J.Med.351：2069-79)。

发明内容

一个实施方案包括式I化合物其对映异构体、非对映异构体或可药用盐：

其中，R1、R2、R7和Z在本申请中定义。

一个实施方案包括式I化合物、其对映异构体、非对映异构体或可药用 盐：

其中R1、R2和Z在本申请中定义。

另一个实施方案包括药物组合物，其包括式Ia化合物和可药用载体、辅 料或媒介物。

另一个实施方案包括药物组合物，其包括式I化合物和可药用载体、辅 料或媒介物。

另一个实施方案包括在患者中治疗或减少疾病或病状的严重程度的方 法，所述疾病或病状响应JAK激酶活性的抑制，包括向所述患者给予治疗有 效量的式Ia化合物。

另一个实施方案包括在患者中治疗或减少疾病或病状的严重程度的方 法，所述疾病或病状响应JAK2激酶活性的抑制，所述方法包括向所述患者 给予治疗有效量的式I化合物。

另一个实施方案包括用于治疗疾病或病症的试剂盒，所述疾病或病症响 应JAK激酶的抑制。所述试剂盒包括第一药物组合物以及使用说明书，所述 第一药物组合物包含式I化合物。在另一个实施方案中，所述试剂盒包括第 一药物组合物以及使用说明书，所述第一药物组合物包含式Ia化合物。

具体实施方案

现详细说明的某些实施方案，其实例示于所附结构和化学式中。虽然本 发明是用所列举的实施方案描述的，但本发明旨在涵盖可包括在如权利要求 所定义的本发明范围内的所有变化、修改和等价形式。本领域技术人员会认 识到与本申请描述的那些方法和物质类似或等价的多种方法和物质，这些方 法和物质可用于本发明的实践中。

术语″烷基″是指饱和直链或支链单价烃基，其中所述烷基可任选地被一 个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述烷基是一至 十八个碳原子(C1-C18)的烷基。在一个实例中，所述烷基是C0-C6、C0-C5、C0-C3、 C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C5、C1-C4或C1-C3烷基。烷基的实例包括 甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、 2-丙基(i-Pr，异丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2CH2CH2CH3)、 2-甲基-1-丙基(i-Bu，异丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，仲丁基， -CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，叔丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基， -CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、 2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基 -1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2- 戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3- 甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3- 二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1- 庚基和1-辛基。

术语″烯基″是指具有至少一个不饱和位点即碳碳双键的直链或支链单价 烃基，其中所述烯基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代， 并包括具有“顺式”和“反式”取向(或者″E″和″Z″取向)的基团。在一个实例中， 所述烯基具有二至十八个碳原子(C2-C18)。在另一个实例中，所述烯基为 C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3烯基。实例包括但不限于乙烯基(ethenyl 或vinyl)(-CH＝CH2)、丙-1-烯基(-CH＝CHCH3)、丙-2-烯基(-CH2CH＝CH2)、2- 甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基、2-甲基-1，3- 丁二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、己-1，3-二烯基。

术语″炔基″是指具有至少一个不饱和位点即碳碳三键的直链或支链单价 烃基，其中所述炔基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。 在一个实例中，所述炔基为二至十八个碳原子(C2-C18)的炔基。在其它实例中， 所述炔基为C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C3炔基。实例包括但不限于 乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH3)、丙-2-炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)、丁 -1-炔基、丁-2-炔基和丁-3-炔基。

″环烃基(cycloalkyl)″是指非芳族饱和或部分不饱和的烃环，其中所述环 烃基可任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。在一个实例中， 所述环烃基具有3至12个碳原子(C3-C12)。在其它实例中，所述环烃基为 C3-C8、C3-C10或C5-C10环烃基。在其它实例中，所述环烃基为单环，其为 C3-C8、C3-C6或C5-C6。在另一个实例中，所述环烃基为二环，其为C7-C12。 在另一个实例中，所述环烷基为螺系统，其为C5-C12。单环环烃基的实例包 括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、 环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚 基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一碳烷基和环十二碳烷基。具有7至12 个环原子的二环环烃基的示例性排列包括但不限于[4，4]、[4，5]、[5，5]、[5，6] 或[6，6]环系统。示例性桥接二环环烃基包括但不限于二环[2.2.1]庚基、二环 [2.2.2]辛基和二环[3.2.2]壬基。螺环烃基的实例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、 螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷和螺[4.5]癸烷。

″芳基″指环状芳族烃基，任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立 地取代。在一个实例中，所述芳基具有6至20个碳原子(C6-C20)。在另一个 实例中，所述芳基是C6-C10芳基。在另一个实例中，所述芳基是C6-C9芳基。 在另一个实例中，所述芳基是C6芳基。芳基包括含芳族环与非芳族环或部分 饱和的环稠合的二环基团。二环芳基可经由芳族、非芳族或部分饱和环相连， 例如如下所示：

示例性的芳基包括但不限于，苯基、萘基、蒽基、茚基、茚满基、1，2- 二氢萘基和1，2，3，4-四氢萘基。在一个实施中，芳基包括苯基。

“卤素”指F、Cl、Br或I。

“杂环基(heterocyclyl)”指饱和的环基团、部分不饱和的环基团(即，在环 内具有一个或多个双键和/或叁键)或芳族(杂芳基)环基团，其中至少一个环原 子是独立地选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子为C。所述杂环基可 任选地被一个或多个下文所述的取代基取代。在一实施方案中，杂环基包括 具有1至9个碳环成原子(C1-C9)的单环或二环，其余环原子为选自N、O、S 和P的杂原子。在其它实例中，杂环基包括具有C1-C5、C3-C5、C3-C9或C4-C5的单环或二环，其余环原子为选自N、O、S和P的杂原子。在另一个实施 方案中，杂环基包括单环3-、4-、5-、6-和7-元环，含有一个或多个独立选 自N、O和S的杂原子，其余环原子为碳。在另一个实施方案中，杂环基包 括单环5-、6-和7-元环，含有一个或多个独立选自N、O、S和P的杂原子。 二环系统的实例包括但不限于[3，5]、[4，5]、[5，5]、[3，6]、[4，6]、[5，6]或[6，6] 系统。在另一实施方案中，杂环基包括具有[2.2.1]、[2.2.2]、[3.2.2]或[4.1.0] 排列并具有1至3个选自N、O、S和P的杂原子的桥接环系统。在另一实施 方案中，杂环基包括具有1至3个选自N、O、S和P的杂原子的螺环系统。 所述杂环基可为碳联的基团或杂原子联的基团。“杂环基”包括与环烷基稠合 的杂环基。″杂环基″也包括与芳基或杂芳基稠合的杂环基。杂环基的额外实 例包括2，3-二氢苯并呋喃基、八氢苯并呋喃基、1，3-二氢异苯并呋喃、色满基、 异色满基、硫色满基、异硫色满基、2，3-二氢苯并[b]噻吩、2，3-二氢苯并[b] 噻吩1，1-二氧化物、1，3-二氢苯并[c]噻吩、1，3-二氢苯并[c]噻吩2，2-二氧化 物、异二氢吲哚基、二氢吲哚基和2，3-二氢-1H-吡唑并[2，3-b]吡啶。

示例性的杂环基团包括但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、硫杂环丙烷基、 氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1，2-二硫杂环丁烷基、1，3- 二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、硫杂氧杂环己基 (thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)、 氧杂环庚烷基(oxepanyl)、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧杂基(oxazepinyl)、二 氮杂基(diazepinyl)、硫杂基(thiazepinyl)、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二 氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻吩基、1，1-二氧化物、四氢噻 吩基1-氧化物、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡 咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1，3-二氧 杂环戊基、吡唑啉基、吡唑烷基、二硫杂环己烷基、二硫杂环戊烷基、吡唑 烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基 和氮杂二环[2.2.2]己基。环原子被氧代(＝O)部分取代的杂环基的实例为嘧啶 酮基(pyrimidinonyl)和1，1-二氧代-硫吗啉基。本申请中的杂环基任选地被一个 或多个本申请所述的取代基独立地取代。杂环描述在Paquette，Leo A.； ″Principles of Modem Heterocyclic Chemistry″(W.A.Benjamin，New York， 1968)(特别是第1、3、4、6、7和9章)；″The Chemistry of Heterocyclic Compounds， A series of Monographs″(John Wiley & Sons，New York，1950 to present)(特别是 第13、14、16、19和28卷)；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566中。

术语″杂芳基″是指芳族碳环基，其中至少一个环原子是独立地选自氮、 氧和硫的杂原子，其它环原子为碳。杂芳基可任选地被一个或多个本申请所 述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述杂芳基包含1至9个碳环原子 (C1-C9)。在其它实例中，所述杂芳基是C1-C5、C3-C5或C4-C5杂芳基。在一 个实施方案中，示例性的杂芳基包括单环芳族5、6和7元环，其包含一个或 多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。在另一个实施方案中，示例性的杂芳 基包括具有高至9个原子的稠合环系统，其中至少一个芳族环包含一个或多 个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。“杂芳基”包括稠合于芳基、环烷基或杂 环基的杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于，吡啶基、咪唑基、咪唑并吡啶 基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑 基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯 并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪 基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、 呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、 喹喔啉基、二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。

在一些实施方案中，所述杂环基或杂芳基是C-联的(C-attached)。通过举 例而非限制，碳联的杂环基包括以下键合排列：在吡啶的2、3、4、5或6 位，在哒嗪的3、4、5或6位，在嘧啶的2、4、5或6位，在吡嗪的2、3、 5或6位，在呋喃、四氢呋喃、噻吩(thiofuran)、噻吩(thiophene)、吡咯或四氢 吡咯的2、3、4或5位，在噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，在异噁唑、吡 唑或异噻唑的3、4或5位，在氮丙啶的2或3位，在氮杂环丁烷的2、3或 4位，在喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或在异喹啉的1、3、4、5、6、7 或8位。(2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基)。

在一些实施方案中，所述杂环基或杂芳基是N-联的(N-attached)。通过举 例而非限制，氮联的杂环或杂芳基包括以下键合排列：在氮丙啶、氮杂环丁 烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑 啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、 1H-吲唑的1位，在异吲哚或异二氢吲哚的2位，在吗啉的4位，和在咔唑或 β-咔啉的9位。

术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性处置和预防性措施，其 中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理学变化或障碍如癌的发展或扩散。 出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于减轻症状、减小 病变程度、稳定(即不是恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和 疾病状态以及好转(部分好转或完全好转)，无论这些结果是可检测的还是不 可检测的。“治疗(treating)”还可表示与未接受治疗的预期存活相比延长的存 活。需要治疗的对象包括已经患有病症或障碍的对象以及易患所述病症或障 碍(例如，通过遗传突变)的对象或所述病症或障碍应该被预防的对象。

术语“治疗有效量”表示(i)治疗或预防本申请描述的具体疾病、病症或障 碍的本发明化合物的量，(ii)削弱、改善或消除本申请描述的具体疾病、病症 或障碍的一种或多种症状的本发明化合物的量，或(iii)预防或延迟本申请描述 的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在 一个实施方案中，治疗有效量为足以减少或改善障碍的症状的量，所述障碍 响应JAK2激酶的调解。在癌症的情况中，治疗有效量的药物可降低癌细胞 的数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞渗 入周围器官中；抑制(即，在一定程度上减慢并优选停止)肿瘤转移；在一定 程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与癌症相关的一种或多种症 状。如果药物可预防癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞，其可能是细胞生 长抑制性的(cytostatic)和/或细胞毒性的。对于癌症治疗而言，例如，可通过 评价疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量功效。在一个实施方案 中，治疗有效量为足以减少或改善障碍的症状的量，所述障碍响应JAK1 TYK2或JAK3激酶的调解。在免疫性障碍的情况下，治疗有效量为足以减 少或改善变应性障碍、自身免疫性疾病和/或炎症性疾病的症状或急性炎症性 反应(例如，哮喘)的症状的量。在一些实施方案中，治疗有效量为足以显著 减少B-细胞活性或数目的本申请所述化学实体的量。

术语“抑制”表明生物活性或生物过程基线活性的显著降低。“AK激酶活 性的抑制”是指作为对本申请所述至少一种化学实体的存在的应答，JAK1、 JAK2、JAK3或TYK2激酶活性相对于在缺少至少一种化学实体的情况下 JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激酶活性的降低。JAK激酶活性的抑制也指在 针对JAK激酶活性的生物化学测定例如本申请所述测定中，JAK激酶活性的 可观察抑制。

术语“生物利用度(bioavailability)”指给予患者给定量的药的系统利用度 (即，血/血浆水平)。生物利用度是绝对的术语(absolute term)，表明药物从给 予的剂量形式抵达一般循环(general circulation)的时间(速率)和总量(程度)的 测量值。

术语″癌症(cancer)″和″癌的(cancerous)″是指或描述哺乳动物中特征典型 为未调节的细胞生长的生理学情况。″肿瘤″包含一种或多种癌细胞。癌症的 实例包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤以及淋巴或淋 巴样恶性肿瘤。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞 癌)，肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(″NSCLC″)、肺腺癌(adenocarcinoma  of the lung)和肺鳞状细胞癌(squamous carcinoma of the lung)，腹膜癌，肝细胞 癌，胃癌(gastric or stomach cancer)，包括胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤， 子宫颈癌，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，膀胱癌，肝细胞瘤(hepatoma)，乳癌 (breast cancer)，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液 腺癌，肾癌或肾脏癌，前列腺癌，外阴癌(vulval cancer)，甲状腺癌，肝脏癌 (hepatic carcinoma)，肛门癌，阴茎癌以及头/和颈癌。

″化学治疗药物″是可用于治疗癌症的化合物。化学治疗药物的实例包括 Erlotinib(Genentech，Inc./OSI Pharm.)、曲妥珠单抗 (Trastuzumab)(Genentech，Inc.)；贝伐单抗 (bevacizumab)(Genentech，Inc.)；利妥昔单抗 (Rituximab)(Genentech，Inc./Biogen Idec，Inc.)，硼替佐米 (Bortezomib)(Millennium Pharm.)、氟维司群(AstraZeneca)、Sutent(SU11248，Pfizer)、来曲唑(Novartis)、甲磺 酸伊马替尼(Novartis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、奥沙利铂 (Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲酰四氢叶酸(Leucovorin)、雷帕霉 素(Sirolimus，Wyeth)、拉帕替尼(Lapatinib)(GSK572016，Glaxo  Smith Kline)、Lonafarnib(SCH 66336)、索拉非尼(Sorafenib，BAY43-9006，Bayer  Labs)和Gefitinib(AstraZeneca)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)； 烷化剂如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺；磺酸烷基酯(alkyl  sulfonate)如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶如benzodopa、 卡波醌、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺(ethylenimine)和甲基氨基吖啶 (methylamelamine)，包括六甲密胺、三亚胺嗪(triethylenemelamine)、三亚乙基 磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙基硫化磷酰胺 (triethylenethiophosphoramide)和trimethylomelamine；番荔枝内酯 (acetogenin)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱 (包括合成性类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin； CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新 (bizelesin)合成性类似物)；缩酚酸肽类(cryptophycin)(特别是缩酚酸肽1和缩 酚酸肽8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成性类似物KW-2189 和CB1-TM1)；eleutherobin；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥 如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(氯phosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、 双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide  hydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼 尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)； 硝基脲如卡莫司汀、氯脲菌素(氯zotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫斯汀 和雷莫司汀；抗生素如烯二炔(enediyne)；抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin) 尤其是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994) 33：183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；二膦酸盐 (bisphosphonate)如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新 抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生 色团(enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin、放线菌素(actinomycin)、 authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、 carabicin、去甲柔红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素 (chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地拖比 星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、 (多柔比星)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2- 吡咯啉子基-多柔比星和去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星、伊 达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸 (mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉 素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素 (quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星 (streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁 (zinostatin)、佐柔比星；抗代谢物如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似 物如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤 类似物如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤 (thioguanine)；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6- 氮鸟苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷 (dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)、氟尿苷 (floxuridine)；雄激素如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone  propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)； 抗肾上腺素(anti-adrenal)如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲 洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂(folic acid replenisher)如亚叶酸(frolinic acid)； 醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰 丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil； 比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺 (demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)； 埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲 (hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid) 如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托 蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)； 蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸 (podophyllinic acid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHS  Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃 (sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚 胺醌(triaziquone)；2，2’，2”-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(trichothecene)(尤其是 T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和anguidine)；乌拉坦；长春地辛；达卡 巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二 溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷 (arabinoside)(″Ara-C″)；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷例如(紫杉醇； Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、 ABRAXANETM(Cremophor-free)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂 (albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel)(American  Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Illinois)和(doxetaxel； -Poulenc Rorer，Antony，France)；chloranbucil；(吉西他滨)； 6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春碱；依托 泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；(长春瑞滨)； 诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊达曲杀(edatrexate)；柔红霉素； 氨基喋呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶 抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(二氟methylornithine)(DMFO)；类视黄醇 (retinoid)如视黄酸(retinoic acid)；卡培他滨(capecitabine)；以及上述任何物质 的可药用盐、酸和衍生物。

以下物质也包括在″化学治疗药物″的定义中：(i)用于调节或抑制激素对 肿瘤的作用的抗激素药物，如抗雌激素药物(anti-estrogen)和选择性雌激素受 体调节剂(selective estrogen receptor modulator，SERM)，包括例如他莫昔芬(包 括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、 曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone) 和(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香酶(调节肾上 腺中雌激素产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、(醋 酸甲地孕酮(megestrol acetate))、(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、 formestanie、法倔唑(fadrozole)、(伏氯唑(vorozole))、(来 曲唑；Novartis)和(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗 雄激素药物(anti-androgen)，如氟他胺、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺 (bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他滨 (troxacitabine)(1，3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂； (v)脂激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖中所涉及的 信号转导途径中的基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf和H-Ras； (vii)核酶如VEGF抑制剂(例如)；和viii)疫苗如基因治疗疫苗， 例如和rIL-2；拓 扑异构酶1抑制剂如rmRH；(ix)抗血管生成 药物；以及(x)上述任何物质的可药用盐、酸和衍生物。

额外的化学治疗药物包括治疗性抗体例如阿仑珠单抗 (alemtuzumab)(Campath)，西妥昔单抗(cetuximab)(Imclone)， panitumumab(Amgen)，培妥珠单抗(pertuzumab)(2C4，Genentech)，托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar，Corixia)和抗体药物结合 物：奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin)(Wyeth)。作为与 本发明的化合物联用的具有治疗潜力的人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗 (apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、莫比伐珠 单抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)、西利珠 单抗(cedelizumab)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、 cidtuzumab、达克珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗 (efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗 (felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、奥吉妥珠单抗(gemtuzumab  ozogamicin)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉贝珠单抗 (labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单 抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗 (natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、 ocrelizumab、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单 抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、pectuzumab、培克珠单抗(pexelizumab)、 ralivizumab、雷珠单抗(ranibizumab)、瑞利珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗 (reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、 西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、 他珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利珠单抗(talizumab)、特非 珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、西莫 白介素(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗 (urtoxazumab)、ustekinumab、维西珠单抗(visilizumab)和抗白细胞介素 -12(ABT-874/J695，Wyeth Research and Abbott Laboratories)，其为排他性地为 人序列的重组的、全长IgG1λ抗体，经遗传修饰识别白细胞介素-12p40蛋白 质。

本申请使用的术语″前药″是指与母体药物相比对患者具有较小效力或对 肿瘤细胞具有较小细胞毒性并能够经酶或水解激活或转化为更具活性的母体 形式的本发明化合物的前体或衍生物形式。参见例如Wilman，″Prodrugs in  Cancer Chemotherapy″Biochemical Society Transactions，14，pp.375-382，615th Meeting Belfast(1986)以及Stella et al.，″Prodrugs：A Chemical Approach to  Targeted Drug Delivery，″Directed Drug Delivery，Borchardt et al.，(ed.)，pp. 247-267，Humana Press(1985)。本发明的前药包括但不限于含磷酸酯的前药、 含硫代磷酸酯的前药、含硫酸酯的前药、含肽的前药、D-氨基酸修饰的前药、 糖基化的前药、含β-内酰胺的前药、含任选取代的苯氧基乙酰胺的前药，或 者含任选取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿嘧啶前药，这 些前药可转化为更具活性的无细胞毒性的药物。可衍生为用于本发明的前药 形式的细胞毒性药物的实例包括但不限于上述那些化学治疗药物。

″脂质体″是由一种或多种脂类、磷脂和/或表面活性剂组成的小囊泡，其 可用于将药物(如本发明化合物和任选的化学治疗药物)递送至哺乳动物。与 生物膜的脂排列类似，脂质体的组分通常以双层形式排列。

术语″包装说明书(package insert)″是指通常包括在治疗产品的市售包装 中的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或告诫事项 的信息，这些信息涉及上述治疗产品的使用。

术语″手性″是指具有镜像配偶体(mirror image partner)不可重叠性质的分 子，而术语″非手性″是指可与其镜像配偶体重叠的分子。

术语″立体异构体″是指具有相同化学组成，但原子或基团空间中的排列 不同的化合物。

″非对映异构体″是指具有两个或更多手性中心并且其分子不互为镜像的 立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质 和反应性。非对映异构体的混合物可通过高拆分分析操作如电泳和色谱来分 离。

″对映异构体″是指互为不可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。

本申请使用的立体化学定义和常规通常按照S.P.Parker，Ed.， McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company， New York以及Eliel，E.and Wilen，S.，″Stereochemistry of Organic Compounds″， John Wiley & Sons，Inc.，New York，1994。多种有机化合物以光学活性形式存 在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述有光学活性的化合物 时，使用前缀D和L或者R和S来表示分子围绕其一个或多个手性中心的绝 对构型。前缀d和l或者(+)和(-)用于指定平面偏振光由化合物引起的旋转的 符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。 对于给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构 体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，所述异构体的混合物 通常称作对映异构混合物。对映异构体的50∶50混合物称为外消旋混合物或 外消旋体，当化学反应或方法中没有立体选择性或立体专一性时可出现这种 情况。术语″外消旋混合物″和″外消旋体″是指两种对映异构体物质的等摩尔 混合物，其没有光学活性。

本申请使用的短语″可药用盐″是指式I化合物的可药用有机或无机盐。 示例性盐包括但不限于硫酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴 酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳 酸盐、水杨酸盐、酸式枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐(tannate)、泛 酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆 酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖精酸盐(saccharate)、 甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺 酸盐、扑酸盐(即1，1’-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。可药用盐可涉及另一 种分子如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包合物(inclusion)。抗 衡离子可以是稳定母体化合物电荷的任何有机或无机部分。此外，可药用盐 可在其结构中具有多于一个带电原子。多个带电原子为可药用盐的部分的情 况可具有多个抗衡离子。因此，可药用盐可具有一个或多个带电原子和/或一 个或多个抗衡离子。

″溶剂化物″是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的结合或络合。形 成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、 乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语″水合物″是指当溶剂分子是水时的复合物。

术语“保护基”或“Pg”是指通常用于在化合物上的其它官能团发生反应时 阻止或保护具体官能团的取代基。例如，″氨基保护基″为与氨基相连的阻止 或保护化合物中氨基官能团的取代基。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟 乙酰基、酰酞亚氨基(phthalimido)、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBZ) 和9-芴基亚甲氧基羰基(Fmoc)。类似地，″羟基保护基″是指阻止或保护羟基 官能团的羟基的取代基。合适的保护基包括乙酰基、三烷基甲硅烷基、二烷 基苯基甲硅烷基、苯甲酰基、苄基、苄基氧基甲基、甲基、甲氧基甲基、三 芳基甲基和四氢吡喃基。″羧基保护基″是指阻止或保护羧基官能团的羧基的 取代基。常见的羧基保护基包括CH2CH2SO2Ph、氰基乙基、2-(三甲基甲硅烷 基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基 苯基磺酰基)乙基、2-(二苯基膦基)-乙基、硝基乙基等。针对保护基的一般描 述及它们的使用，参见T.W.Greene and P.Wuts，Protective Groups in Organic  Synthesis，Third Ed.，John Wiley & Sons，New York，1999；and P.Kocienski， Protecting Groups，Third Ed.，Verlag，2003.

术语“患者”包括人患者和动物患者。术语“动物”包括伴侣动物 (companion animals)(例如，狗、猫和马)、食源动物(food-source animals)、动 物园动物、海生动物、鸟和其它类似的动物物种。

短语″可药用的″表示所述物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/ 或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。

除非另有说明，术语″本发明化合物(compound of this invention)″和″本发 明化合物(compounds of the present invention)″包括式I和Ia化合物及其立体异 构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、盐(例如可药用盐)、多晶型物和前 药。除非另有说明，本申请中描述的结构还意为包括仅因存在一个或多个富 含放射性同位素(isotopically enriched)的原子而存在差异的化合物。例如，其 中一个或多个氢原子由氘或氚原子替换，或者一个或多个碳原子由富含13C- 或14C的碳原子替换的式I和Ia，和式Ia-11的化合物落在本发明的保护范围 内。

吡唑并嘧啶JAK抑制剂化合物

一个实施方案提供式Ia化合物及其药物制剂，其用于治疗疾病、病症和 /或障碍，所述疾病、病症和/或障碍响应JAK激酶的抑制。

一个实施方案提供式I化合物及其药物制剂，其用于治疗疾病、病症和/ 或障碍，所述疾病、病症和/或障碍响应JAK激酶的抑制。

另一个实施方案包括式Ia化合物、其对映异构体、非对映异构体或可药 用盐：

其中：

R1为H；

R2为-OR4、-NR3R4、-NR3N12R4、-NR3S(O)R4或-NR3S(O)2R4；

R3为H或C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，其中所述烷基、烯基和 炔基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代；

R4为H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环 基)、-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷 基)(C6-C10芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被R8取代，并且所述芳基、 环烷基、杂芳基和杂环基任选被R9取代；或者

R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被R13取代的C1-C9杂环基；

Z为-OR6或-NR5R6；

R5为H或C1-C3烷基；

R6为H、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂 环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C8环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷 基)(C6-C9芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被R10取代，并且所述芳基、 环烷基、杂芳基和杂环基任选被R11取代；

R7为H、卤素、C1-C3烷基、C2-C3烯基、C2-C3炔基或-O(C1-C3烷基)；

R8独立地为氧代、F、ORa或NRaRb；

R9独立地为氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、 -C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、-(C0-C5烷基)SRa、 -O[C(Ra)2]1-3O-、任选被氧代或F取代的C1-C3烷基、任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被卤素、C1-C3烷基或-O(C1-C3烷基)取代的-(C0-C5烷基)C6芳基或任选被卤素或C1-C3烷基 取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基；

R10独立地为氧代、F、ORa或NRaRb；

R11独立地为氧代、-CN、-CF3、卤素、-O[C(Ra)2]1-3O-、-C(O)C1-C6烷基、 -C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被氧代 或F取代的C1-C6烷基、任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取 代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷 基)C1-C9杂芳基、任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代 的-(C0-C5烷基)苯基或任选被氧代、-NRcRd、C1-C3烷基或F取代的-(C0-C5烷 基)C3-C6环烷基；

R12为H或C1-C3烷基；

R13为氧代、卤素、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、C6芳基、 C3-C6环烷基、C1-C5杂芳基或C4-C5杂环基；其中所述芳基、环烷基、杂芳 基和杂环基任选被C1-C4烷基、-(C0-C3烷基)ORc、氧代、卤素或NRcRd取代；

Ra和Rb独立地为H、-CF3、-CHF2、-CH2F、C1-C6烷基、C6芳基、C3-C6 环烷基或C4-C5杂环基；其中所述烷基、芳基和环烷基任选被C1-C4烷基、 -(C0-C3烷基)ORc、氧代、卤素、NRcRd或C4-C5杂环基取代；或者

Ra和Rb与它们连接的原子一起形成任选被氧代、F、C1-C3烷基、 -C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C1-C5杂环基；和

Rc和Rd独立地为H、C1-C3烷基、C3-C6环烷基或苯基，其中所述烷基、 环烷基和苯基任选被卤素、CH3、OH、NH2、C(O)O(C1-C6烷基)或C(O)NH(C1-C6烷基)取代。

另一个实施方案包括式I化合物，其对映异构体、非对映异构体或可药 用盐：

其中：

R1为H；

R2为-OR4或-NR3R4；

R3为H或C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，其中所述烷基、烯基和 炔基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代；

R4为H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环 基)、-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷 基)(C6-C9芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：

氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、-O[C(Ra)2]1-3O-，

任选被氧代或F取代的C1-C3烷基，

任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基，或

任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基；

R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被氧代、F、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C1-C5杂环基；

R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被氧代、F、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C1-C5杂环基；

Z为-OR6或-NR5R6；

R5为H或C1-C3烷基；

R6为H、C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂 环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C8环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷 基)(C6-C9芳基)，其中所述烷基、烯基和炔基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：

氧代、-CN、-CF3、卤素、-O[C(Ra)2]1-3O-、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、 -C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

任选被氧代或F取代的C1-C6烷基，

任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基，

任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基，

任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代的-(C0-C5烷 基)苯基，或者

任选被氧代、-NRcRd、C1-C3烷基或F取代的-(C0-C5烷基)C3-C6环烷基；

Ra和Rb独立地为H、-CF3、-CHF2、-CH2F、C1-C6烷基、C6芳基、C3-C6环烷基或C4-C5杂环基；其中所述烷基、芳基和环烷基任选被C1-C4烷基、 (C0-C3烷基)ORc、氧代、卤素、NRcRd或C4-C5杂环基取代；或者

Ra和Rb与它们连接的原子一起形成任选被氧代、F、C1-C3烷基、 -C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C1-C5杂环基；和

Rc和Rd独立地为H、C1-C3烷基、C3-C6环烷基或苯基，其中所述烷基、 环烷基和苯基任选被卤素、CH3、OH或NH2、C(O)O(C1-C6烷基)或 C(O)NH(C1-C6烷基)取代。

在一个实施方案中，R2为-NR3R4、-NR3N12R4、-NR3S(O)R4或-NR3S(O)2R4。 在另一个实施方案中，R2为-NR3R4、-NR3N12R4或-NR3S(O)2R4。在另一个实 施方案中，R2为-NR3S(O)2R4。在另一个实施方案中，R2为-NR3N12R4。在一 个实施方案中，R2为-NR3R4。在一个实施方案中，R2为-NHR4。

在式I的一个实施方案中，R2为-NR3R4。

在式I的一个实施方案中，R2为-NHR4。

在式I的一个实施方案中，R2为-OR4。

在式I的一个实施方案中，R2为-NR3R4，以及R3为H或任选被OH取 代的C1-C4烷基。

在式I的一个实施方案中，R4为H或任选被OH取代的C1-C4烷基。

在式I的一个实施方案中，R4为H、甲基、乙基、异丙基或-CH2CH2OH。

在式I的一个实施方案中，R2为-NR3R4，以及R3和R4为H。

在式I的一个实施方案中，R4为C1-C6烷基、-(C0-C3烷基)苯基、(C0-C3烷基)(C3-C5杂环基)、-(C0-C3烷基)(C6-C7环烷基)、-(C0-C3烷基)(C3-C5杂芳基)， 其中所述烷基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代，并且所述苯基、环烷基、 杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：

任选被F取代的C1-C3烷基，

-O[C(Ra)2]1-3O-、-CF3、-OCF3、-OCHF2、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、 -C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C6烷基取代的-(C0-C3烷基)C3-C5杂环基，或者

任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C3烷基)C3-C5杂芳基。

在一个实施方案中，R4为C1-C6烷基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷基)(C6-C10芳基)， 其中所述烷基任选被R8取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选 被R9取代。

在另一个实施方案中，R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被R13取代 的C1-C5杂环基。

在式I的一个实施方案中，R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被氧代、 F、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C4-C5杂环基。

在式I的一个实施方案中，R4为苯基、-(CH2)苯基、-(CH2CH2)苯基、 -CH(CH3)苯基、-C(CH3)2苯基、-(C0-C3烷基)C4-C5杂环基或-(C0-C3烷基)C3-C5杂芳基，其中所述苯基任选被1或2个取代基取代取代，所述取代基独立地 选自甲基、乙基、异丙基、F、Cl、-OCH2O-、-OCH2CH2O-、-OCH2CH2CH2O-、 -OCH2CH2NH2、-OCH2CH2NMe2、-OCH2(C4-C5杂环基)、-OH、-OCH3、 -OCH2CH3、-CF3、-OCF3和-OCHF2，所述杂环基选自四氢吡喃基、四氢呋喃 基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基和哌啶基，所述杂环基任选被卤素、甲基或 C(O)O(叔丁基)取代，所述杂芳基选自吡唑基、咪唑基、呋喃基和噻吩基，并 且所述杂芳基任选被卤素或甲基取代。

在一个实施方案中，R4为任选被R9取代的-(C0-C5烷基)(C6-C10芳基)。在 一个实例中，R4为任选被(C1-C3烷基)或卤素取代的-(C0-C5烷基)(C6-C10芳基)， 并且所述芳基为苯基、萘基、茚基、茚满基、1，2-二氢萘基和1，2，3，4-四氢萘 基。在另一个实例中，R4选自：

其中所述波浪线表示本发明化合物中R4的连接点。

在一个实施方案中，R4为苯基、-(CH2)苯基、-(CH2CH2)苯基、-CH(CH3) 苯基、-CH(CH2CH3)苯基、-(R)-CH(CH3)苯基、-(S)-CH(CH3)苯基、 -(R)-CH(CH2CH3)苯基、-(S)-CH(CH2CH3)苯基或-C(CH3)2苯基，其中所述苯基 任选被R9取代。在一个实例中，所述苯基任选被1或2个R9取代，其中R9独立地选自甲基、乙基、异丙基、环丙基、F、Cl、-OCH2O-、-OCH2CH2O-、 -OCH2CH2CH2O-、-OCH2CH2NH2、-OCH2CH2NMe2、-O(CH2)1-3(C4-C5杂环基)、 C3-C5杂芳基、任选被C1-C3烷基或卤素取代的-(CH2)0-3C3-C5杂环基、-OH、 -OCH3、-OCH2CH3、-SH、-SCH3、-SCH2CH3、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、-CN、 -CF3、-OCF3、-OCHF2和C(O)O(C1-C3烷基)。在另一个实例中，R4选自：

其中所述波浪线表示R4的连接点。

在另一个实施方案中，R4为-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环基)或-(C0-C5烷 基)(C1-C9杂芳基)，其中所述杂芳基和杂环基任选被R9取代。在一个实例中， R4为吡啶基、-(CH2)吡啶基、-(CH2CH2)吡啶基、-CH(CH3)吡啶基、嘧啶基、 -(CH2)嘧啶基、咪唑基、-(CH2)咪唑基、吡唑基、-(CH2)吡唑基、四氢吡喃基、 四氢呋喃基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基或哌啶基，所述R4任选被R9代。 在一个实例中，R9为甲基、乙基、异丙基、F、Cl、-NH2、-NMe2、-OCH3、 -OH、-OCH2CH3、-CF3、-OCF3-OCHF2、C(O)O(叔丁基)或苯基。在另一个 实例中，R4选自：

其中所述波浪线表示R4的连接点。

在式I的一个实施方案中，R4为C4-C5杂环基或-(CH2)C4-C5杂环基，其 中所述杂环基为四氢吡喃基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基或吗 啉基，这些基团任选被甲基或C(O)O(叔丁基)取代。

在式I的一个实施方案中，R3和R4与它们连接的氮一起形成吡咯烷基、 哌嗪基、哌啶基或吗啉基，这些基团任选被甲基取代。

在一个实施方案中，R3和R4与它们连接的氮一起形成任选被R13取代的 氮杂环丁烷基。在另一个实施方案中，R3和R4与它们连接的氮一起形成任 选被苯基取代的氮杂环丁烷基。

在式I的一个实施方案中，R42吡啶基或-(CH2)吡啶基，其中所述吡啶基 任选被甲基、F或Cl取代。

在一个实施方案中，R4为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、 -(CH2)环丙基、-(CH2)环丁基、-(CH2)环戊基、-(CH2)环己基、-(CH2)环庚基、 茚满基或四氢萘基，并且所述R4独立任选地被R9取代。在一个实例中，R9为F、氧代、甲基或CH2NH2。

在式I的一个实施方案中，R4为环己基、环庚基、-(CH2)环己基或-(CH2) 环庚基，并且所述环己基和环庚基独立任选地被氧代、甲基或CH2NH2取代。

在一个实施方案中，Z为-NR5R6。在一个实施方案中，Z为-NR5R6，以 及R5为H。在一个实施方案中，Z为-NR5R6，R5为H和R6为H。

在式I的一个实施方案中，Z为-NR5R6。

在式I的一个实施方案中，Z为-OR6。

在式I的一个实施方案中，Z为-NR5R6，以及R5为H。

在一个实施方案中，R6为C1-C10烷基、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C8环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷基)(C6-C9芳基)， 其中所述烷基任选被R10取代，并且其中芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任 选被R11取代。

在式I的一个实施方案中，R6为C1-C8烷基、-(C0-C3烷基)(C3-C5杂环基)、 -(C0-C3烷基)(C3-C8环烷基)、-(C0-C3烷基)(C3-C5杂芳基)或-(C0-C1烷基)(苯基)， 其中所述烷基任选被氧代、F、ORa或NRaRb取代，并且所述苯基、环烷基、 杂芳基和杂环基任选被以下基团取代：

氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

任选被氧代或F取代的C1-C6烷基，

任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C2烷基)C3-C5杂环基，

任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C2烷基)C3-C5杂芳基，

任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代的-(C0-C2烷 基)苯基，或者

任选被氧代、-NRcRd、C1-C3烷基或F取代的-(C0-C2烷基)C6-C8环烷基。

在一个实施方案中，R6为C1-C8烷基，其任选被R10取代。在一个实施 方案中，R6为甲基、乙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、3，3-二甲基 丁-1-基、戊-3-基、辛基、-C(CH2)2CH2OH、-CH2CH2OH或-CH2CH2OCH3。

在式I的一个实施方案中，R6为C1-C8烷基，其任选被氧代、F、ORa或 NRaRb取代。

在式I的一个实施方案中，R6为甲基、乙基、异丙基、正丁基、仲丁基、 叔丁基、3，3-二甲基丁-1-基、戊-3-基、辛基、-C(CH2)2CH2OH、-CH2CH2OH 或-CH2CH2OCH3。

在一个实施方案中，R6为C3-C5杂环基或-(CH2)C3-C5杂环基，其任选被 R11取代。在另一个实施方案中，R6为C3-C5杂环基或-(CH2)C3-C5杂环基， 其任选被R11取代，其中所述杂环基为四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌嗪基、 哌啶基、吗啉基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、 吡啶基，并且其中所述R11独立地为氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷 基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被 氧代或F取代的C1-C6烷基、任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷 基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基、任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代的-(C0-C5烷基)苯基或任选被氧代、-NRcRd、C1-C3烷基或F取代的-(C0-C5烷基)C3-C6环烷基。在一个实例中，R6为C3-C5杂芳基，其任选被1-4个R11 取代。在另一个实例中，R6为C3-C5杂芳基，其中所述杂芳基取代有苯基， 所述苯基任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代，并且 其中所述杂芳基任选被1-2个R11进一步取代，所述R11独立地选自卤素、-CF3或任选被氧代或F取代的C1-C6烷基。

在式I的一个实施方案中，R6为C3-C5杂环基或-(CH2)C3-C5杂环基，其 中所述杂环基为四氢呋喃基、哌嗪基、哌啶基或吗啉基，并且所述杂环基任 选被甲基、乙基或C(O)O叔丁基取代。

在式I的一个实施方案中，R6为-(C0-C2烷基)C3-C8环烷基，其中所述环 烷基任选被C1-C6烷基、C(O)OCH3、C(O)OH、OH、CN、C(O)环己基、 C(O)(C4-C5杂环基)或任选被NH2取代的-CH2环己基取代，并且其中所述杂 环基选自哌嗪基、哌啶基或吗啉基，并且所述杂环基任选被甲基或CH2NH2取代。

在一个实施方案中，R6为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、 环辛基、-(CH2)环己基、-(CH2CH2)环己基、-(CH2)环庚基、二环[2.2.1]庚基或 -(CH2)二环[2.2.1]庚基，并且其中R6任选被1-3个取代基取代，所述取代基 选自氧代、卤素、C1-C6烷基、C(O)OCH3、C(O)OH、OH、CN、C(O)环己基、 C(O)(C4-C5杂环基)和任选被NH2取代的-CH2环己基，并且其中所述杂环基 选自哌嗪基、哌啶基或吗啉基，并且所述杂环基任选被甲基或CH2NH2取代。

在式I的一个实施方案中，R6为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环 庚基、环辛基、-(CH2)环己基、-(CH2CH2)环己基、-(CH2)环庚基、二环[2.2.1] 庚基或-(CH2)二环[2.2.1]庚基，并且其中R6任选被C1-C6烷基、C(O)OCH3、 C(O)OH、OH、CN、C(O)环己基、C(O)(C4-C5杂环基)或任选被NH2取代的 -CH2环己基中的1-3个取代，并且其中所述杂环基选自哌嗪基、哌啶基或吗 啉基，并且所述杂环基任选被甲基或CH2NH2取代。

在一个实施方案中，R6为C3-C5杂芳基或-(CH2)C3-C5杂芳基，并且其中 R6任选被R11取代。

在式I的一个实施方案中，R6为C3-C5杂芳基或-(CH2)C3-C5杂芳基，并 且其中R6任选被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氧代、-CN、-CF3、 卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被氧代或F取代的C1-C6烷基、任选被卤素、氧代、C1-C3烷 基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C2烷基)C4-C5杂环基、任选被卤素或C1-C3 烷基取代的-(C0-C2烷基)C3-C5杂芳基、任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、 -ORa或-NRaRb取代的-(C0-C2烷基)苯基和任选被氧代、C1-C3烷基或F取代的 -(C0-C2烷基)C6-C7环烷基。

在一个实施方案中，R6为异噁唑基、噁唑基、异噻唑基、噻唑基、咪唑 基、吡唑基或吡啶基，并且其中R6任选被1-3个取代基取代，所述取代基选 自-CF3、卤素、任选被氧代或F取代的C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)ORa，任选被 甲基、乙基、异丙基、-CF3、-CN、ORa、Cl、F、Br或I取代的苯基和任选 被甲基、乙基、异丙基、-CF3、-CN、ORa、Cl、F、Br或I取代的吡啶基。

在式I的一个实施方案中，R6为吡唑基或吡啶基，并且其中R6任选被 1-3个取代基取代，所述取代基选自任选被氧代或F取代的C1-C6烷基、卤素 和苯基，并且其中所述苯基任选被甲基、乙基、异丙基、-CF3、-CN、ORa、 Cl或F取代。

在式I的一个实施方案中，R6为苯基或-CH2苯基，并且其中所述苯基任 选被F、Cl、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-O苯基、-C(O)NH2、-C(O)OH、-C(O)OCH3、 环己基、甲基、乙基或异丙基取代。

在一个实施方案中，R7为卤素。在一个实施方案中，R7为Cl。在一个实 施方案中，R7为H。

在一个实施方案中，R8独立地为氧代、卤素、ORa或NRaRb。在一个实 施方案中，R8独立地为卤素。在一个实施方案中，R8为F。

在一个实施方案中，R9独立地为-CF3、卤素、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、-(C0-C5烷基)SRa、-O[C(Ra)2]1-3O-、任选被氧代或F取代的C1-C3烷基、任选被氧代或F取代的-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、任选被卤素、氧 代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被卤 素或C1-C3烷基或-O(C1-C3烷基)取代的-(C0-C5烷基)C6芳基或任选被卤素或 C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基。在一个实施方案中，R9独立地 为Cl、F、-CF3、-CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-O(CH2)2O-、-O(CH2)3O-、 -OCHF2、-OCF3，-N(CH3)2、-NH2、吗啉基、吡咯烷基、吡唑基、-OCH2(吡唑 基)、N-甲基-哌啶基或-O(CH2)2(吗啉基)。

在一个实施方案中，R10独立地为氧代、卤素、ORa或NRaRb。在一个实 施方案中，R10独立地为卤素。在一个实施方案中，R10为F。

在一个实施方案中，R11独立地为氧代、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、 -C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被氧代 或F取代的C1-C6烷基、任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取 代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被卤素或C1-C3烷基取代的-(C0-C5烷 基)C1-C9杂芳基、任选被C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C3-C6环烷基、 -CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代的-(C0-C5烷基)苯基或任选被氧代、 -NRcRd、C1-C3烷基或F取代的-(C0-C5烷基)C3-C6环烷基。在一个实施方案中， R11独立地为Cl、F、-CF3、-CH3、-CH2CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、2- 甲基-5-氯苯基、2，5-二氯苯基、2，5-二氟苯基、2，5-二甲基苯基、偕-二氟、偕 -二甲基、2-羟基乙基、2-甲氧基乙基、3，5-二甲基苯基、3，5-二氯苯基、3，5- 二氟苯基、2，4-二氟苯基、2-氯-5-甲基苯基、2-甲基苯基、2-三氟甲基苯基、 2-氯苯基、2-氟苯基、3-甲基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-氰基苯基、2-碘 苯基、2-溴苯基、苯基、吡啶基、-C(O)OCH3、-CH2(4-氨基环己-1-基)、2-氯 -6-碘苯基、2，6-二氯苯基、2，6-二甲基苯基、2，6-二溴苯基、2-氯-6-甲基苯基、 2-氯-6-氟苯基、2-溴-6-氟苯基、2-溴-6-甲基苯基、2-氟-6-甲基苯基、2-氯-6- 三氟甲基苯基、2-硫基甲基苯基、2-乙基苯基、2-乙炔基-6-甲基苯基、2-乙炔 基-6-氟苯基、2-氯-5-氰基苯基、2-甲氧基苯基、2-环丙基苯基、2-甲氧基-6- 甲基苯基2-乙炔基苯基、2-氯-4-氰基苯基、2-异丙基苯基或2-三氟甲氧基苯 基.

在式I的一个实施方案中，R6为：

-(C0-C1烷基)(C6-C8环烷基)，其任选被氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa或被 氧代或F取代的C1-C6烷基任选取代，

-(C0-C2烷基)C4-C5杂环基，其任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代，

-(C0-C2烷基)C3-C5杂芳基，其任选被卤素、C1-C3烷基或苯基取代，其中 所述苯基任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代，

-(C0-C2烷基)苯基，其任选被卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代，或者

-(C0-C2烷基)C6-C7环烷基，其任选被氧代、C1-C3烷基或F取代；和

R4为H或-(C0-C3烷基)苯基，其中所述苯基任选被以下基团取代：

任选被F取代的C1-C3烷基，

-OCH2O-、-OCH2CH2O-、-OCH2CH2CH2O-、-CF3、-OCF3、-OCHF2、卤 素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

-(C0-C3烷基)C4-C4杂环基，其任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代，或者

-(C0-C3烷基)C3-C5杂芳基，其任选被卤素或C1-C3烷基取代。

在另一个实施方案中，R6为环己基，其任选被1或2个取代基取代，所 述取代基独立地选自甲基、乙基、戊基、C(O)OCH3、C(O)OH、OH、CN、 C(O)环己基和C(O)(C4-C5杂环基)，其中所述杂环基为哌嗪基、哌啶基或吗啉 基，其任选被甲基、CH2NH2或任选被NH2取代的CH2环己基取代；和R4为-(CH2)苯基，其中所述苯基任选被1或2个取代基取代，所述取代基独立 地选自甲基、F、Cl、-OCH2O-、-OCH2CH2O-、-OCH2CH2CH2O-、 -OCH2CH2NMe2、-OCH2(C4-C5杂环基)、-OH、-CF3、-OCF3、-OCH3、-OCH2CH3、 -OCHF2、-(C0-C1烷基)C4-C5杂环基，和-(C0-C1烷基)C4-C5杂芳基，其中所述 杂环基选自吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基或哌啶基并且任选被甲基取代，其中 所述杂芳基选自吡唑基、咪唑基、呋喃基和噻吩基，并且任选被甲基取代。 在该实施方案的一个实例中，R2为-NR3R4，并且R1和R3为H。

在式I的一个实施方案中，R6为-(C0-C1烷基)(C6-C7环烷基)，其中所述 环烷基任选被以下基团取代：

氧代、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

任选被氧代或F取代的C1-C6烷基，

任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代的-(C0-C2烷基)C4-C5杂环基，

-(C0-C2烷基)C3-C5杂芳基，其任选被卤素或C1-C3烷基取代，

-(C0-C2烷基)苯基，其任选被卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代，或者

-(C0-C2烷基)C6-C7环烷基，其任选被氧代、C1-C3烷基或F取代；和

R4为-(C0-C2烷基)吡啶基，其中所述吡啶基任选被以下基团取代：

-OCH2O-、-OCH2CH2O-、-OCH2CH2CH2O-、-CF3、-OCF3、-OCHF2、卤 素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa，

C1-C3烷基，其任选被F取代，

-(C0-C3烷基)C4-C4杂环基，其任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代，或者

-(C0-C3烷基)C3-C5杂芳基，其任选被卤素或C1-C3烷基取代。

在式I的一个实施方案中，R6为环己基，其任选被1或2个取代基取代， 所述取代基独立地选自甲基、乙基、戊基、C(O)OCH3、C(O)OH、OH、CN、 C(O)环己基、C(O)(C4-C5杂环基)，其中所述杂环基为哌嗪基、哌啶基或吗啉 基，其任选被甲基、CH2NH2或任选被NH2取代的CH2环己基取代；以及R4为吡啶基或-(CH2)吡啶基，其中所述吡啶基任选被甲基、F或Cl取代。在该 实施方案的另一个实例中，R2为-NR3R4，并且R1和R3为H。

在一个实施方案中，R6为任选被R10取代的C1-C4烷基、C3-C5杂环基、 C3-C5杂芳基或C3-C7环烷基，其中所述杂环基、杂芳基和环烷基任选被R11取代；并且R4为H、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、 -(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷基)(C6-C10芳基)，其中所述烷基任选 被R8取代，并且所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被R9取代。

在式I的一个实施方案中，R1为H；R2为-NR3R4；R3为H；和R6为C3-C5杂芳基，其任选被一个或多个取代基取代，所述取代基选自：

氧代、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基，

C1-C6烷基，其任选被氧代或F取代，

-(C0-C2烷基)C4-C5杂环基，其任选被卤素、氧代、C1-C3烷基或C(O)C1-C3烷基取代，

-(C0-C2烷基)C3-C5杂芳基，其任选被卤素或C1-C3烷基取代，

-(C0-C2烷基)苯基，其任选被C1-C3烷基、-CF3、卤素、-CN、-ORa或-NRaRb取代，和

-(C0-C2烷基)C6-C7环烷基，其任选被氧代、C1-C3烷基或F取代。并且在 该实施方案的一个实例中，R4为H。

在式I的一个实施方案中，当R4为-(C0-C5烷基)(C1-C5杂环基)、-(C0-C5烷基)(C3-C6环烷基)、-(C0-C5烷基)(C1-C9杂芳基)、-(C0-C5烷基)(C6-C9芳基) 时，则所述芳基，环烷基，杂芳基和杂环基任选被1-3个取代基取代，所述 取代基独立地选自氧代、任选被1-3个独立选自氧代和F的取代基取代的 C1-C3烷基、-CN、-CF3、卤素、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、 -(C0-C5烷基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被1-3个独立选自卤素、氧代、 C1-C3烷基和C(O)C1-C3烷基的取代基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选 被1-3个独立选自卤素和C1-C3烷基的取代基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳 基、-OCH2O-、-OCH2CH2O-、-OCH2CH2CH2O-和-OCH2(C4-C5杂环基)。当 R4为烷基、烯基或炔基时，则所述烷基、烯基和炔基任选被1-3个独立选自 氧代、F、ORa和NRaRb的取代基取代。

在式I的一个实施方案中，当R3和R4与它们连接的氮一起形成C1-C5杂环基时，则所述杂环基任选被1-3个独立选自氧代、F、C1-C3烷基、 -C(O)C1-C6烷基和-C(O)ORa的取代基取代。

在式I的一个实施方案中，当R6为C6芳基、C3-C8环烷基、C3-C5杂芳 基和C3-C5杂环基时，则所述芳基、环烷基、杂芳基和杂环基任选被1-3个 取代基取代，所述取代基独立选自氧代、任选被1-3个独立选自氧代和F的 取代基取代的C1-C6烷基、-CN、-CF3、卤素、-OCH2O-、-OCH2CH2O-、 -OCH2CH2CH2O-、-C(O)C1-C6烷基、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-(C0-C5烷 基)NRaRb、-(C0-C5烷基)ORa、任选被1-3个独立选自卤素、氧代、C1-C3烷基 和C(O)C1-C3烷基的取代基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂环基、任选被1-3个 独立选自卤素和C1-C3烷基的取代基取代的-(C0-C5烷基)C1-C9杂芳基、任选 被1-3个独立选自卤素、-CN、-CF3、-ORa和-NRaRb的取代基取代的-(C0-C5烷基)苯基和任选被1-3个独立选自氧代、C1-C3烷基和F的取代基取代的 -(C0-C5烷基)C3-C6环烷基。当R6为烷基、烯基或炔基时，则烷基、烯基和炔 基任选被1-3个独立选自氧代、F、ORa和NRaRb的取代基取代。

在式I的一个实施方案中，当Ra和Rb为C1-C6烷基、C6芳基、C3-C6环 烷基或C4-C5杂环基时，则所述烷基、芳基、环烷基和杂环基任选被1-3个 独立选自C1-C4烷基、(C0-C3烷基)ORc、氧代、卤素、NRcRd和C4-C5杂环基 的取代基取代。当Ra和Rb与它们连接的原子一起形成C1-C5杂环基时，则所 述杂环基任选被1-3个独立选自氧代、F、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基和 -C(O)ORa的取代基取代。

在式I的一个实施方案中，当Rc和Rd为C1-C3烷基、C3-C6环烷基或苯 基时，则所述烷基、环烷基和苯基任选被1-3个独立选自卤素、CH3、OH、 NH2、C(O)O(C1-C6烷基)和C(O)NH(C1-C6烷基)的取代基取代。

在一个实施方案中，Ra和Rb独立地为H、-CF3、-CHF2、-CH2F、C1-C6烷基、苯基、C3-C6环烷基或C4-C5杂环基；其中所述烷基、芳基和环烷基任 选被C1-C4烷基、-(C0-C3烷基)ORc、氧代、卤素、NRcRd或C4-C5杂环基取代。 在一个实施方案中，Ra和Rb与它们连接的原子一起形成任选被氧代、F、C1-C3烷基、-C(O)C1-C6烷基或-C(O)ORa取代的C1-C5杂环基。在一个实施方案中， Ra和Rb独立地为H或C1-C3烷基。

在一个实施方案中，Rc和Rd独立地为H、C1-C3烷基、C3-C6环烷基或苯 基，其中所述烷基、环烷基和苯基任选被卤素、CH3、OH、NH2、C(O)O(C1-C6烷基)或C(O)NH(C1-C6烷基)取代。在一个实施方案中，Rc和Rd独立地为H 或C1-C3烷基。

在一个实施方案中，R7为H；R2为-NR3S(O)2R4；R3为H；和R4为任选 被1-3个R9取代的苯基。在一个实施方案中，R2为-NR3S(O)2R4；R3为H； R4为任选被1-3个选自C1-C3烷基、-CF3和卤素的取代基取代的苯基；Z为 -NR5R6；R5为H；和R6为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环 辛基，并且其中R6任选被1-3个选自氧代、卤素和C1-C6烷基的取代基取代。

在一个实施方案中，R7为H；R2为-NR3R4；R3为H；R5为H；R6为任 选被甲基取代和被苯基取代的吡唑基，其中所述苯基任选被甲基、卤素、甲 氧基、氰基、三氟甲基、羟基或三氟甲氧基中的一个或两个取代。

在一个实施方案中，式I化合物抑制JAK2激酶活性的选择性是抑制 JAK1、JAK3和TyK-2各自活性的至少10倍或更高。

在一个实施方案中，本发明化合物抑制JAK3激酶活性的选择性是抑制 JAK2激酶活性的至少5倍或更高。在另一个实施方案中，本发明化合物抑 制JAK3激酶活性的选择性是抑制JAK2激酶活性的至少10倍或更高。

本发明化合物可包含不对称或手性中心，因此，可按不同立体异构形式 存在。包括本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于：非对映异构 体、对映异构体和阻转异构体及其混合物如外消旋混合物意欲构成本发明的 一部分。此外，本发明包括所有的几何异构体和位置异构体(positional isomer)。 例如，如果本发明化合物包含双键或稠环，则顺式和反式形式，以及混合物 均包括在本发明的保护范围内。单一位置异构体和位置异构体的混合物，例 如，由嘧啶和吡唑环的N-氧化导致，或由本发明化合物的E和Z形式(例如， 肟部分)所导致的，也均包括在本发明的保护范围内。

在本申请所显示的结构中，当未指定任何具体手性分子的立体化学时， 则本发明化合物涵盖并包括了所有的立体异构体。当立体化学通过代表具体 构型的实心楔或虚线所指定时，则如此指定并限定了该立体异构体。

本发明化合物可以按未溶剂化或以经可药用的溶剂(如水、乙醇等)溶剂 化的形式存在，且如权利要求限定的本发明意欲包括溶剂化和未溶剂化的形 式。

在一实施方案中，本发明化合物可以按不同的互变异构形式存在，且所 有上述形式均包括在如权利要求所定义的本发明的保护范围内。术语″互变异 构体″或″互变异构形式″是指可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的不 同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称为质子迁 移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移进行的互相转化，如酮 -烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体(valence tautomer)包括通过一 些成键电子的重组进行的互相转化。

本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其与本申请中记载的其它化 合物相同，但一个或多个原子由具有与通常见于自然界的原子具有不同的原 子量或原子质量数的原子所替代。任何特定的具体原子或元素的所有同位素 均涵盖在本发明的保护范围内。可结合到本发明化合物中的示例性同位素包 括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、 14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。某些 同位素标记的本发明化合物(例如，用3H和14C标记的)可用于化合物和/或底 物组织分布测定(tissue distribution assay)。氚(即3H)和碳14(即14C)同位素可 因其易于制备和检测而加以使用。此外，用较重的同位素(如氘，即2H)取代 可，得到由于较高的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量要强降低)的 某些治疗上的益处，因此在某些情况下是优选的。发射正电子的同位素如15O、 13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描术(PET)研究以检查底物对受体的 占据(occupance)。同位素标记的本发明化合物通常可按照与本申请下述在方 案和/或实施例中公开的那些方法的类似方法，通过用同位素标记的试剂替换 非同位素标记的试剂来制备。

吡唑并嘧啶JAK抑制剂化合物的合成

式I化合物可通过本申请所述的合成路线来合成。在一些实施方案中， 除了本申请所描述的方法之外，或考虑到本申请所描述的方法，可使用本领 域公知的方法。起始物质通常从商业性来源(如Aldrich Chemicals(Milwaukee， Wis.))是可获得的，或可使用本领域技术人员公知的方法容易地制备(例如， 通过一般描述于Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis， v.1-19，Wiley，N.Y.(1967-1999 ed.)，Beilsteins Handbuch der organischen Chemie， 4，Aufl.ed.Springer-Verlag，Berlin，包括增补(也可从Beilstein在线数据库获 得))或Comprehensive Heterocyclic Chemistry，Editors Katrizky和Rees， Pergamon Press，1984中的方法制备)。

式I化合物可单独地制备，或作为包含至少2个本发明化合物，例如5 至1000个本发明化合物，或10至100个本发明化合物的化合物库制备。本 发明的化合物库可通过组合的“分裂并混合(split and mix)”方法或通过使用溶 液相或固相化学的多重并行合成法，通过本领域技术人员已知的操作来制备。 因此，根据本发明的另一个方面，其提供了包含至少2个本发明化合物及其 对映异构体、非对映异构体或可药用盐的化合物库。

就说明的目的，在下文描述的反应方案1提供了合成本发明化合物以及 关键中间体的路线。对于单独反应步骤更详细的描述，参见下面的实施例部 分。本领域技术人员应理解，可使用其它合成路线来合成本发明化合物。尽 管具体的起始物质和试剂描述于方案中，并在下文进行讨论，可容易地用其 它起始物质和试剂替换以提供多种衍生物和/或反应条件。此外，由下文所述 的方法制备的多种化合物可根据本公开使用本领域技术人员公知的常规化学 手段进行进一步修饰。

本发明化合物可使用本申请说明的一般方法由商购起始物质来制备。

反应方案1

可如反应方案1中所示合成式1化合物。例如，商购化合物3-氨基吡唑 和1，3-二甲基尿嘧啶可在乙醇钠溶液中一起反应，得到化合物2a，可通过用 稀酸处理将化合物2a从钠盐转化成2b。可在DMF中用N-碘代琥珀酰亚胺 (NIS)对化合物2b碘化，得到化合物3。在碱性条件下(例如三乙胺(TEA))用 一氧化碳和钯催化剂对化合物3进行羰基化，得到甲基酯化合物4，可在氢 氧化锂水溶液中对化合物4水解，得到化合物5。在三氯氧化磷和二异丙基 乙基胺(DIPEA)的混合物中加热化合物5，生成二氯代化合物6，其是用于化 合物1a、1b和1c最终合成的共同中间体。因此，化合物6可与伯胺或仲胺 在温和条件下反应，得到酰胺化合物7，然后在更苛性的条件下与仲胺或烷 氧化物反应，分别得到化合物1c和1b。可选择地，化合物6可在碱性条件 下与醇反应，得到式8的酯，然后式8的酯进一步与伯胺或仲胺反应，得到 式1a化合物。

反应方案2

可如方案2所示合成本发明化合物。例如，在羰基二咪唑(CDI)和氯化镁 存在下，商购苯甲酸可与3-乙氧基-3-氧代丙酸钾反应，得到β-酮-酯9(其中R 为烷基例如乙基)。化合物9可与1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(N，N-二甲基 甲酰胺DMA)一起加热，得到化合物10。在乙醇中用肼使化合物10环化， 得到吡唑化合物11。在碱例如碳酸铯存在下，用烷基卤化物对化合物11进 行烷基化，得到区域异构体12a和12b(其中R11’为任选取代的烷基)的混合物。 水解乙基酯，然后用二苯基磷酰基叠氮化物(dppa)和叔丁醇进行库尔修斯重 排，得到叔丁氧羰基氨基保护的氨基-吡唑，用HCl将所述叔丁氧羰基氨基保 护的氨基-吡唑脱保护，得到氨基-吡唑化合物13a和13b。可使用硅胶色谱法 分离区域异构体13a和13b。在三乙胺存在下，用5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰氯(化合物6)分别对每种区域异构体进行酰化，然后微波辅助氨化，得到 式1d和1e化合物。

反应方案3

合成本发明化合物的可选择方法在反应方案3中说明。用氢化钠和各种 α-溴酮14将二(叔丁氧羰基)胺烷基化，生成化合物15。化合物15可与N，N- 二甲基甲酰胺DMA一起加热，得到化合物16。在乙醇中用肼使化合物16 环化，得到吡唑化合物17。在三乙胺存在下，用化合物6分别酰化每种区域 异构体，然后用烷基卤化物对所述吡唑进行烷基化，得到化合物18a和18b(其 中R11’为任选取代的烷基)。微波辅助氨化，得到式1d和1e化合物。

反应方案4

反应方案4说明了式1f化合物的合成。使商购苯胺经受重氮化反应和氯 化锡介导的还原反应，得到化合物19。在乙醇盐酸中，使化合物19与3-氨 基丙烯基腈缩合，生成氨基-吡唑化合物20。在三乙胺存在下，与化合物6 酰化，然后微波辅助氨化，得到式1f化合物。

反应方案5

合成式1化合物的可选择方法描述于反应方案5中。用α-溴酮对邻苯二 甲酰亚氨基钾进行烷基化，生成化合物21。与N，N-二甲基甲酰胺DMA缩合， 得到化合物22。式22化合物可与N-甲基肼环化，得到烷基化的吡唑23。在 三乙胺存在下，化合物23与化合物6酰化，然后与取代的胺发生微波辅助氨 化，得到式1d化合物。

反应方案6

式1g化合物可如方案6所示合成。伯磺酰胺与5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶中 间体7由碱例如碳酸铯介导，在极性非质子溶剂例如1，2-二甲氧基乙烷中进 行加成，得到式1g化合物。

反应方案7

可如方案7所示合成式1f化合物。在钯介导的条件下，在配体例如 Xantphos的存在下，使氨基取代的R4与5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶中间体8偶联， 得到化合物24。碱性条件下酯水解，得到酸25。可通过向酸25的酰氯中加 入胺，发生酰胺形成反应，得到式1f化合物。

反应方案8

可如方案8所示合成式1i化合物。对芳基酮酯9(其中R为烷基例如乙基) 进行溴化，得到溴化物26。用硫代乙酰胺对溴化物26进行烷基化，然后在 热条件下脱水成环，得到噻唑27。在碱性条件下，酯27水解，然后使用二 苯基磷酰基叠氮化物进行库尔修斯重排，用醇例如叔丁醇捕集后，得到氨基 甲酸酯28。在酸性条件下除去氨基甲酸酯28，得到5-氨基噻唑29，其在经 酰氯6偶联时，得到酰胺30。微波辅助氨化氯化物30，得到式1i化合物。

反应方案9

可如方案9所示合成式1j化合物。芳基酮酯9(其中R为烷基例如乙基) 与1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺缩合，得到氨基酯31，其在用羟基胺处理并 加热时，得到异噁唑32。在酸性条件下水解酯32，然后进行库尔修斯重排， 用醇例如叔丁醇捕集后，得到氨基甲酸酯。在酸性条件下除去氨基甲酸酯33， 得到4-氨基异噁唑34，其在经酰氯6偶联时，得到酰胺35。微波辅助氨化 氯化物35，得到式1j化合物。

反应方案10

可根据方案10合成式1k化合物。用N-氯代琥珀酰亚胺氯化芳基肟36， 得到α-氯苯甲醛肟37。用叔胺碱例如三乙胺处理α-氯苯甲醛肟37，形成苯 甲腈N-氧化物，所述苯甲腈N-氧化物参与用3-吡咯烷-1-基-丙烯酸酯进行的 偶极环化加成，得到异噁唑38(其中R为烷基例如乙基)。在酸性条件下水解 酯38，然后使用二苯基磷酰基叠氮化物进行库尔修斯重排，用醇例如叔丁醇 捕集后，得到氨基甲酸酯39。在酸性条件下除去所述氨基甲酸酯39，得到 4-氨基异噁唑40，其在经酰氯6偶联时，得到酰胺41。微波辅助氨化氯化物 41，得到式1k化合物。

反应方案11

可根据方案11合成式11化合物。芳基肼42与2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙 酯的加成，得到5-氨基-1-芳基吡唑43。在酸性条件下水解酯43，然后对所 得酸进行脱羧，得到5-氨基-1-芳基吡唑44，其在经酰氯6偶联时，得到酰胺 45。微波辅助氨化氯化物45，得到式11化合物。

在制备本发明化合物中，可能必需对中间体的远位官能团(例如，伯胺或 叔胺)加以保护。对于上述保护的需要可根据所述远位官能团的性质以及制备 方法的条件而变动。合适的氨基保护基团(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、 叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBZ)和9-芴基亚甲氧基羰基(Fmoc)。本 领域技术人员可容易地确定对于上述保护的需要。针对保护基的一般描述及 其用途，参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，New York，1991。

本发明的化合物可从容易获得的起始物质使用本申请说明的一般方法 加以制备。

分离方法

在各示例的方案中，将反应产物彼此分离和/或与原料分离可能是有利 的。通过本领域常见技术将每个步骤或多个步骤的期望产物分离和/或纯化 (下文称为分离)至期望的同质程度(degree of homogeneity)。通常所述分离涉及 多相萃取、用溶剂或溶剂混合物结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可涉及 任何数目的方法，包括例如反相和正相色谱法；尺寸排阻(size exclusion)色谱 法；离子交换色谱法；高压、中压和低压液相色谱方法和装置；小规模分析 性色谱；模拟移动床(SMB)和制备性薄层或厚层色谱法；以及小规模薄层法 和快速色谱法技术。

另一类分离方法涉及用试剂处理混合物，选择所述试剂以通过使产物发 生反应等而与期望的产物、未反应的原料结合或使得期望的产物、未反应的 原料能够以其它方式分离。所述试剂包括吸附剂(adsorbent)或吸收剂 (absorbent)，如活性炭、分子筛、离子交换媒介物等。可供选择地，所述试 剂可以是酸(在碱性物质的情况下)，碱(在酸性物质的情况下)，结合试剂如抗 体、结合蛋白，选择性螯合剂如冠醚，液/液离子交换试剂(liquid/liquid ion  extraction reagent，LIX)等。

对适当的分离方法的选择取决于所涉及的物质的性质。例如，沸点和分 子量(在蒸馏和升华中)、存在或不存在极性官能团(在色谱中)、物质在酸性和 碱性媒介物中的稳定性(在多相萃取中)等。本领域技术人员应该使用最有可 能实现所期望分离的技术。

可通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱和/或分级结晶，基于 非对映异构体的物理化学差异，将非对映异构体的混合物分离为其单独的非 对映异构体。对映异构体可如下分离：通过使对映异构体的混合物与适当的 光学活性化合物(例如手性辅料，如手性醇或Mosher酰氯(Mosher’s acid  chloride))反应，将对映异构体的混合物转化为非对映异构体的混合物，分离 非对映异构体，然后将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映 异构体。此外，一些本发明化合物可能是阻转异构体(例如取代的联芳化合物 (biaryl))并被视为是本发明的部分。对映异构体也可使用手性HPLC柱来分 离。

单一的立体异构体，例如基本上不含其立体异构体的对映异构体，可如 下，得到：通过诸如形成非对映异构体那样的方法，使用光学活性拆分试剂 来拆分外消旋混合物(Eliel，E.and Wilen，S.“Stereochemistry of Organic  Compounds，”John Wiley & Sons，Inc.，New York，1994；Lochmuller，C.H.，J. Chromatogr.，113(3)：283-302(1975))。本发明的手性化合物的外消旋混合物可 通过任何合适的方法来分离和拆析，所述方法包括(1)与手性化合物形成离子 性非对映异构的盐，然后通过分级结晶或其它方法来分离；(2)与手性衍生试 剂形成非对映异构的化合物，分离所述非对映异构体，然后转化为纯的立体 异构体；以及(3)在手性条件下对基本上纯的或富集的立体异构体进行直接分 离。参见“Drug Stereochemistry，Analytical Methods and Pharmacology，”Irving W. Wainer，Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York(1993)。

非对映异构的盐可如下形成：使对映异构体纯的手性碱如马钱子碱 (brucine)、奎宁、麻黄碱、番木鳖碱(strychnine)、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他 命(amphetamine))等与带有酸性官能团(如羧酸和磺酸)的不对称化合物反应。 可通过分级结晶或离子色谱法来促使非对映异构的盐分离。对于分离氨基化 合物的光学异构体而言，手性羧酸或磺酸如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳 酸的加入可引起非对映异构的盐的形成。

可供选择地，使待拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应，形 成一对非对映异构体(Eliel.E.and Wilen，S.“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley & Sons，Inc.，New York，1994，p.322)。非对映异构的 化合物可如下形成：使不对称的化合物与对映异构体纯的手性衍生试剂如薄 荷基衍生物反应，接着分离非对映异构体，然后水解，得到纯的或富集的对 映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯，如在碱的 存在下制备薄荷基酯例如(-)氯甲酸薄荷基酯，Mosher酯，或乙酸α-甲氧基 -α-(三氟甲基)苯基酯(Jacob III.J.Org.Chem.47：4165(1982))，然后就两种阻转 异构的对映异构体或非对映异构体的存在而分析NMR光谱。阻转异构化合 物的稳定非对映异构体可通过正相和反相色谱按照分离阻转异构的萘基-异 喹啉的方法(WO 96/15111)来分离和拆析。通过方法(3)，两种对映异构体的外 消旋混合物可通过使用手性固定相的色谱来分离(“Chiral Liquid  Chromatography”W.J.Lough，Ed.，Chapman and Hall，New York(1989)； Okamoto，J.Chromatogr.，513：375-378(1990))。富集的或纯化的对映异构体可 通过用于辨别带有不对称碳原子的其它手性分子的方法(如旋光性或圆二色 性(circular dichroism))来辨别。

本发明化合物的位置异构体，例如E和Z形式，及其合成的中间体，可 通过表征方法如NMR和分析性HPLC来观察。对于一些化合物，当其相互 转化的能垒足够高时，可分离其E和Z异构体，例如通过制备性HPLC。

生物学评价

之前的研究显示人JAK2的分离的激酶域在体外激酶测定中磷酸化肽底 物(Saltzman等，Biochem.Biophys.Res.Commun.246：627-633(2004))。将人 JAK2的催化活性的激酶域从经重组杆状病毒表达载体感染的SF9昆虫细胞 的提取物纯化，所述表达载体编码人JAK2激酶域(氨基酸残基D812-G1132， 根据GenBank序列登录号NP_004963.1)。JAK2激酶域的活性可通过多种直 接和间接方法测定，包括对来源于人JAK3蛋白质的肽底物的磷酸化进行定 量(Saltzman等，Biochem.Biophys.Res.Commun.246：627-633(2004))。在体外 通过使用Caliper LabChip技术(参见实施例)监视来源于JAK3的肽的磷酸化 来测定JAK2激酶域的活性。

吡唑并嘧啶化合物的给药

另一个实施方案包括在患者中治疗响应JAK2激酶活性抑制的疾病或病 状或减轻响应JAK2激酶活性抑制的疾病或病状的严重程度方法。所述方法 包括给予患者治疗有效量的本发明化合物的步骤。

另一个实施方案包括在患者中治疗响应JAK3激酶活性抑制的疾病或病 状或减轻响应JAK3激酶活性抑制的疾病或病状的严重程度方法。所述方法 包括给予患者治疗有效量的本发明化合物的步骤。

在一个实施方案中，将治疗有效量的本发明化合物给予患者，从而治疗 响应JAK2激酶活性抑制的疾病或病状或减轻响应JAK2激酶活性抑制的疾 病或病状的严重程度，并且所述化合物抑制JAK2激酶活性的选择性是抑制 JAK1、JAK3和Tyk-2中每一种的活性的选择性的10倍或更高。

在一个实施方案中，所述疾病或病状为癌症(cancer)、中风(stroke)、糖尿 病(diabetes)、肝大(hepatomegaly)、心血管疾病(cardiovascular disease)、多发 性硬化(multiple sclerosis)、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、囊性纤维化病 (cystic fibrosis)、病毒疾病(viral disease)、自身免疫性疾病(autoimmune  diseases)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、再狭窄(restenosis)、银屑病(psoriasis)、 变应性疾病(allergic disorders)、炎症(inflammation)、神经疾病(neurological  disorders)、激素相关疾病(a hormone-related disease)、与器官移植相关的病状 (conditions associated with organ transplantation)、免疫缺陷疾病 (immunodeficiency disorders)、破坏性骨疾病(destructive bone disorders)、增殖 性疾病(proliferative disorders)、感染性疾病(infectious diseases)、与细胞死亡相 关的病状(conditions associated with cell death)、凝血酶诱导的血小板凝集 (thrombin-induced platelet aggregation)、肝脏疾病(liver disease)、涉及T细胞激 活的病理性免疫病状(pathologic immune conditions involving T cell activation)、 CNS疾病或骨髓增生障碍。

在一个实施方案中，所述疾病或病状为癌症。

在一个实施方案中，所述疾病为骨髓增生性疾病。

在一个实施方案中，所述骨髓增生性疾病为真性红细胞增多polycythemia  vera，特发性血小板增多症essential thrombocytosis，骨髓纤维变性 myelofibrosis或慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia)(CML).

在一个实施方案中，所述癌症是乳癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、 睾丸癌、阴茎癌、生殖泌尿道癌、精原细胞瘤、食道癌、喉癌、胃(gastric) 癌、胃(stomach)癌、胃肠(gastrointestinal)癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、滤泡性 癌、黑素瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、肺鳞状 细胞癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、乳头状癌、膀胱癌、肝癌、胆道癌、 肾癌、骨癌、骨髓疾病(myeloid disorders)、淋巴疾病(lymphoid disorders)、毛 细胞(hairy cell)癌、口腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、唾液腺癌、咽癌、 小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肾(renal)癌、前列腺癌、外阴癌、甲状 腺癌、大肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、脑癌、中枢神经系统癌、腹膜癌、肝 细胞癌、头癌、颈癌、霍奇金病(Hodgkin’s)或白血病。

在一实施方案中，所述心血管疾病是再狭窄、心肥大(cardiomegaly)、动 脉粥样硬化、心肌梗死或充血性心力衰竭。

在一实施方案中，所述神经变性疾病(neurodegenerative disease)是阿尔茨 海默病、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病(Huntington’s disease) 和脑缺血，以及由创伤性损伤(traumatic injury)、谷氨酸神经毒性或缺氧造成 的神经变性疾病。

在一实施方案中，所述炎性疾病是类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮 炎或迟发超敏反应。

在一实施方案中，所述自身免疫性疾病是红斑狼疮或多发性硬化。

可通过任何适于待处置的疾病或病状的途径给予本发明化合物。合适的 途径包括口服途径、胃肠外途径(包括皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、皮内、 桥莫内和硬膜外途径)、经皮途径、直肠途径、经鼻途径、局部途径(包括口 腔和舌下途径)、阴道途径、腹膜内途径、肺内途径和鼻内途径。对于局部免 疫抑制处置，所述化合物可通过内伤给药(intralesional administration)给予，包 括灌注或者将移植物与抑制剂在移植之前相接触。应理解的是，优选的途径 可随着例如受体的情况而变动。当本发明化合物是经口给药时，其可与可药 用的肠胃外媒介物配制并且为可注射的单位剂量形式，如下文详述。

治疗人患者的剂量的范围可为约10mg至约1000mg的本发明化合物。通 常剂量可为约100mg至约300mg的本发明化合物。剂量可每日一次(QD)、 每日两次(BID)或更频繁地给药，取决于其药代动力学(pharmacokinetic)和药 效学(pharmacodynamic)性质，包括具体化合物的吸收、分布、代谢和排泄。 此外，毒性因素可影响剂量和给药方案(administration regimen)。当经口给药 时，丸剂、胶囊或片剂可每日摄入或较不频繁地摄入，持续特定时间。该方 案可重复进行数个治疗周期。

另一个实施方案包括在需要所述治疗的哺乳动物中治疗或预防癌症的 方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的式I-Ia化合物、 其立体异构体、互变异构体、前药或可药用盐。

另一个实施方案包括式I-Ia化合物、其立体异构体、互变异构体、前药 或可药用盐，用在治疗中。

另一个实施方案包括式I-Ia化合物、其立体异构体、互变异构体、前药 或可药用盐在制备用于治疗本申请所述的疾病(例如，癌症或炎性疾病)的药 物中的用途。

吡唑并嘧啶化合物的药物制剂

另一个实施方案包括药物组合物，其包括本发明化合物和可药用的载 体、辅料或媒介物。。

在一个实施方案中，所述药物组合物还包含选自下组的其它的治疗剂： 抗增殖剂、抗炎剂、免疫调节剂、神经营养因子(neurotropic factor)、治疗心 血管疾病的药物、治疗肝疾病的药物、抗病毒剂、治疗血液疾病的药物、治 疗糖尿病的药物或治疗免疫缺陷疾病的药物。

在一个实施方案中，本发明化合物以可检测地抑制JAK2激酶活性的量 与可药用的载体、辅料或媒介物存在于药物制剂中。

在一个实施方案中，本发明化合物以可检测地抑制JAK3激酶活性的量 与可药用的载体、辅料或媒介物存在于药物制剂中。

在一实施方案中，本发明化合物以可检测地抑制JAK2激酶活性，且对 JAK2激酶活性的抑制的选择性为对JAK1、JAK3和Tyk-2中每一种的活性的 抑制的选择性的至少10倍或更高的量存在于药物制剂中。

典型的制剂通过将本发明化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。 合适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员公知的，并且包括以下物质： 如碳水化合物、蜡、水溶性聚合物和/或可溶胀聚合物、亲水性物质或疏水性 物质、明胶、油、溶剂、水等。所用的具体的载体、稀释剂或赋形剂将取决 于应用本发明化合物的方式和目的。通常基于本领域技术人员认为给予哺乳 动物是安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。一般而言，安全溶剂为无毒性含水溶 剂如水和可在水中溶解或混溶的其它无毒性溶剂。合适的含水溶剂包括水、 乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG300)等及它们的混合物。所述 制剂还可包含以下物质中的一种或多种：缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润 湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加 工辅料、着色剂、增甜剂、芳香剂、矫味剂和提供药物(即本发明化合物或其 药物组合物)优质外观或辅助药物产品(即药品)制备的其它已知添加剂。

所述制剂可使用常规的溶解和混合操作进行制备。例如，将原料药物质 (即，本发明化合物或该化合物稳定化的形式，如与环糊精衍生物或其它已知 的络合剂(complexation agent)的复合物)在一种或多种上述赋形剂存在下溶于 合适的溶剂。通常将本发明化合物配制为药学计量形式以产生可容易地控制 的药物剂量形式，并使得患者能够顺应处方的方案。

用于施用的药物组合物(或制剂)可以多种方式包装，取决于用于给予该 药物的方法。通常，用于分配(distribution)的制品包括具有以合适形式的药物 制剂放置其中的容器。合适的容器对于本领域技术人员而言是公知的，且包 括如瓶(塑料的和玻璃的)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等材料。所述容器 还可包括防撬装置(tamper-proff assemblage)以防止对包装内容物的轻率接触。 此外，所述容器还可具有置于其表面的标签，其描述容器的内含物。所述标 签还可包含适当的警告。

可制备本发明化合物的药物制剂用于多种给药途径和类型。例如，具有 所期望纯度的本发明化合物可任选与可药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂 混合(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980)16th edition，Osol，A.Ed.)，呈 冻干制剂、研细粉末剂或含水溶液剂的形式。配制可如下进行：在环境温度、 在适当的pH及在所期望的纯度，与生理学上可接受的载体(即在所用剂量和 浓度时对受体是无毒性的载体)混合。所述制剂的pH主要取决于化合物的具 体用途和浓度，但范围可为约3至约8。在pH为5的乙酸盐缓冲液中的制剂 是合适的实施方案。

在一个实施方案种，用于药物组合物的本发明化合物优选是基本无菌 的。所述化合物通常作为固体组合物储藏，但冻干制剂或含水溶液剂也可以 接受。

本发明的药物组合物可以按与良好的医疗实践配制一致的方式，即，量、 浓度、方案(schedule)、病程(course)、媒介物和给药途径进行配制、给药(dose) 和给予(administer)。在此语境下要考虑的因素包括待治疗的具体疾病、待治 疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、疾病的原因、药物递送的位点、 给药方法、给药方案以及医师已知的其它因素。待给予的化合物的“治疗有效 量”应由上述考虑所决定，并为用于预防、减轻或治疗所述病症所需的最低量。 上述量优选为低于对宿主有毒的量。

作为一般性的建议，肠胃外给药的抑制剂的初始药学有效量的范围应为 每剂0.01至100mg/kg，即每日约0.1至20mg/kg的患者体重，通常所用化合 物的起始范围为0.3至15mg/kg/日。

可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所用剂量和浓度时对受体是 无毒性的，并且包括缓冲剂，如磷酸盐、枸橼酸盐和其它有机酸；抗氧化剂， 包括抗坏血酸和蛋氨酸(methionine)；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵； 六甲氯铵(hexamethonium chloride)；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇； 对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚； 间苯二酚(resorcinol)；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个 残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如 聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精 氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精； 螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子， 如钠离子；金属复合物(metal complex)(如Zn-蛋白质复合物(Zn-protein  complex))；和/或非离子型表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚 乙二醇(PEG)。还可将所述活性药物成分包埋在例如通过凝聚技术或通过界 面聚合而制备的微囊中，例如在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、 微乳、纳米粒和纳米囊)中或在巨乳液(macroemulsion)中分别为羟甲基纤维素 或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。所述技术披露在Remington’s  Pharmaceutical Sciences 16th edition，Osol，A.Ed.(1980)中。

可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有本发明化合物 的固态疏水性聚合物的半透性基质，所述基质以成形制品的形式(例如膜或微 囊)存在。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟基 乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(polyactide)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共 聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯基酯、可降解的乳酸-羟乙酸共聚物如 LUPRON DEPOTTM(由乳酸-羟乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微 球)和聚D-(-)-3-羟基丁酸。

用于体内给药的必需为无菌的，其可容易地通过无菌过滤膜过滤来完 成。

所述制剂包括适于本申请详述的给药途径的那些制剂。所述制剂可方便 地以单位剂量形式存在并可通过药学领域公知的任何方法来制备。技术和制 剂通常参见Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.，Easton， PA)。所述方法包括对活性成分与构成一种或多种辅料的载体进行混合的步 骤。所述制剂通常如下制备：对活性成分与液态载体或微细分散的固态载体 或这两种载体进行均匀和充分的混合，然后如果需要，对产品进行成形。

可将适于口服给药的本发明化合物的制剂制备成离散的单位，如各自含 有预定量的本发明化合物的丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。

压制片可如下制备：在合适的机器中对活性成分进行压制，所述活性成 分呈自由流动的形式，如粉末或颗粒，其任选混合有粘合剂、润滑剂、惰性 稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。模制片可如下制备：在合适的机器 中对用惰性液态稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制。可任选对 片剂进行包衣或压痕，并任选进行配制以提供活性成分从所述片剂中的缓慢 或控制释放。

可制备片剂、含片(troche)、锭剂、水性混悬剂或油性混悬剂、可分散粉 末剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂或软胶囊剂例如明胶胶囊、糖浆剂或酏剂以 供口服。意在用于口服的本发明化合物的制剂可根据药物组合物制备领域已 知的任何方法来制备，并且所述组合物可含有一种或多种物质，包括增甜剂、 矫味剂、着色剂和防腐剂，从而提供适口的制剂。含有活性成分及适于制备 片剂的无毒性可药用赋形剂的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性 稀释剂，如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂(granulating agent) 和崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；及润 滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可不包衣或可通过已知技术(包括微 囊化)来包衣以在胃肠道中延迟崩解和吸收，由此提供历时较长时间的持续作 用。例如，可使用延时物质，如单独的或与蜡在一起的单硬脂酸甘油酯或二 硬脂酸甘油酯。

对于眼或其它外部组织(例如口和皮肤)的感染，所述制剂优选作为局部 的软膏剂或乳膏给药，其包含例如，0.075至20％w/w的量的活性成分。当 配制为软膏剂时，活性成分可与石蜡或与水混溶的软膏基质一同使用。或者， 活性成分可配制为具有水包油乳膏基质的乳膏。

如果需要，所述乳膏基质的水相可包括多元醇即具有两个或多个羟基的 醇例如丙二醇，丁烷-1，3-二醇，甘露醇，山梨糖醇，甘油和聚乙二醇(包括 PEG 400)和它们的混合物。所述局部制剂可根据需要包括促进活性成分吸收 或渗透通过皮肤或其它感染区域的化合物。所述皮肤渗透促进剂的实例包括 二甲基亚砜和相关类似物。

本发明的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。虽然所述相可仅包 含乳化剂(也称作利泄剂(emulgent))，但是需要其包含至少一种乳化剂与脂肪 和/或油的混合物。优选地，包括与起稳定剂作用的亲脂乳剂一起的亲水乳剂。 还优选包含油和脂肪两者。含或不含稳定剂的乳剂一起构成所谓乳化蜡，且 所述蜡与油和脂肪一同构成所谓乳化软膏基底，其构成乳膏制剂的含油分散 相。适用于本发明制剂的利泄剂和乳剂稳定剂包括60、80、 十八醇十六醇化合物、苯甲醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。

本发明的水性混悬剂包含与适用于制造水性混悬剂的赋形剂混合的活 性物质。上述赋形剂包括助悬剂(如羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、聚维 酮(povidone)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷 酮(polyvinylpyrrolidone)、西黄蓍胶(gum tragacanth)和阿拉伯胶(gum acacia))和 分散剂或润湿剂(如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，烷基氧化物(例如环氧乙 烷，环氧丙烷)与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)，环氧乙烷与 长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七亚乙氧基十六醇 (heptadecaethyleneoxycetanol))、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯 的缩合产物(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯))。水混悬剂还可以含有一种或多 种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、 一种或多种矫味剂以及一种或多种增甜剂例如蔗糖或糖精。

本发明化合物的药物组合物可呈无菌注射剂如无菌注射用水性或油性 混悬剂的形式。所述混悬剂可根据本领域已知的方法使用上文提及的那些合 适的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌注射剂还可以是在肠胃外可接受 的无毒性稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂，如在1，3-丁二醇中 的溶液剂，或制备成冻干粉末剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、 林格溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常可 用作溶剂或助悬媒介物。出于此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括 合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同样可用于制备注射剂。

可与载体物质组合以制备单一剂量形式的活性成分量将基于所治疗的 宿主和具体的给药模式而变化。例如，意在用于口服给药于人类的定时释放 制剂(time-release formulation)可含有约1至1000mg活性物质及混合有适当和 适宜量的载体物质，所述载体物质可占总组合物的约5至约95％(重量∶重量)。 可制备所述药物组合物以提供可容易测量的给药量。例如，意在用于静脉内 输注的水性溶液剂在每毫升溶液中可含有约3至500μg活性成分，从而可出 现速率为约30mL/hr的合适输注体积。

适于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗 氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与所预期受体的血液等渗的溶质；及 水性和非水性无菌混悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。

适于局部给药至眼部的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮 于合适的载体(尤其是用于活性成分的含水溶剂)中。存在于所述制剂中的活 性成分的浓度优选为0.5至20％，有利地为0.5至10％，特别是约1.5％w/w。

适于在口中局部给药的制剂包括糖锭(lozenge)，其含有在矫味基质(通常 为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性成分；锭剂(pastille)，其含有在惰性 基质(如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分；及口腔清洗剂 (mouthwash)，其含有在合适液态载体中的活性成分。

适于直肠给药的制剂可表现为具有合适基底的锭剂，所述基底包含例如 可可脂或水杨酸盐/酯。

适于肺内或经鼻给药的制剂具有例如在0.1至500微米范围内的颗粒大 小(包括0.1至500微米范围内具有增加的微米数如0.5、1、30微米、35微 米等的颗粒大小)，其通过经鼻腔通道迅速吸入给药或经口吸入给药以抵达肺 泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适于气雾剂或干粉剂给 药的制剂可根据常规方法制备，且可与其它治疗药物(如下面详述的迄今为止 用于治疗或预防HIV感染的化合物)一同递送。

适于阴道给药的制剂可呈现为阴道栓剂(pessary)、棉塞(tampon)、乳膏剂、 凝胶剂、糊剂、泡沫或者喷雾剂制剂，其除了包含活性成分之外，还包含本 领域已知的合适载体。

所述制剂可包装在单位剂量容器或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶 中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，其在使用前仅需要加入无菌液态 载体例如水以供注射。现用现配的注射溶液剂和混悬剂(extemporaneous  injection solution and suspension)由前述无菌粉末剂、颗粒剂和片剂之类的来制 备。优选的单位剂量制剂是含有本申请上文所述的日剂量或单位日亚剂量 (unit daily sub-dose)或其适当分数的活性成分的那些制剂。

本发明进一步提供了兽医用组合物(veterinary composition)，其包含至少 一种如上所定义的活性成分和针对其的兽医用载体(veterinary composition)。 兽医用载体是可用于给予组合物目的的材料，并且可以是惰性或者在兽医领 域可接受的并且与活性成分相容的固体、液体或者气体材料。这些兽医学组 合物可通过肠胃外、口服或者通过任何其它所需的途径给予。

联合治疗

本发明化合物可与另一种化合物在药物组合物制剂或作为联合治疗的 给药方案中联合使用，其中所述另一种化合物具有抗过度增殖或化学治疗性 质，其可用于治疗响应JAK激酶抑制的疾病或病症，例如过度增殖性疾病(例 如，癌症)，或可用于治疗另一种本申请列举的疾病。所述药物组合物制剂或 给药方案的另一种化合物优选对联合治疗中的本发明化合物具有互补活性， 从而使得其不相互产生不利作用。上述分子适当地以就所期望的目的为有效 量存在于联合治疗中。

因此，另一个实施方案包括在患者中治疗响应JAK2激酶活性抑制的疾 病或病状或减轻响应JAK2激酶活性的抑制的疾病或病状严重程度的方法， 包括给予所述患者治疗有效量的本发明化合物，并且还包括给予另一种化学 治疗药物。

因此，另一个实施方案包括在患者中治疗响应JAK3激酶活性抑制的疾 病或病状或减轻响应JAK3激酶活性的抑制的疾病或病状严重程度的方法， 包括给予所述患者治疗有效量的本发明化合物，并且还包括给予另一种化学 治疗药物。

所述联合治疗可作为同时给药方案或顺序给药方案来进行。当顺序给药 时，所述联合使用可在两次或更多次给药中给予。联合使用的给药包括共同 给药(coadministration)，使用分别的制剂或单一的药物制剂，以及以任意顺序 的连续给药，其中优选地，存在两者(或所有)活性药物同时发挥其生物学活 性的一段时间。

上述任何同时服用的药物的合适剂量为现行使用的剂量，且可由于新鉴 定的药物与其它化学治疗药物或治疗的联合作用(协同作用)而降低。

所述联合疗法可提供“协同作用”并证明为“协同的”，即，当活性成分一 同使用时取得的效果高于分别使用所述化合物所得的效果之和。协同作用可 在下述情况下获得，即当所述活性成分为：(1)一同配制并给予或在联合的单 位剂量形式中递送；(2)作为分开的制剂交替(alternation)或平行递送；或(3) 通过其它给药方案。当在交替治疗中递送时，可在当顺序给予或递送化合物 (例如通过在分开的注射器中进行不同注射)时获得协同作用。一般而言，在 交替治疗中，每种活性成分的有效剂量被顺序给予，即连续(serially)给予的， 而在联合治疗中，两种或更多种有效成分的有效剂量是一同给予的。

吡唑并嘧啶化合物的代谢产物

另一个实施方案包括给予的本发明化合物的体内代谢产物。所述产物可 来源于所给予的化合物的例如氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、 脱酯化、酶裂解等。

代谢产物通常是通过下述方法鉴定的：制备本发明化合物的放射性标记 (例如14C或3H)的同位素，将其以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)肠胃 外给予动物(如大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人，允许足以让代谢发生的时间(通 常为约30秒至30小时)，并从尿、血或其它生物样品分离其转化产物。这些 产物可容易地分离，因为其是经标记的(其余的产物通过使用能够结合留存于 代谢物中的表位的抗体来分离)。代谢产物的结构通过常规方法确定，例如， 通过MS、LC/MS或NMR分析。一般而言，对于代谢产物的分析以与本领 域技术人员公知的常规药物代谢研究一样进行。转化产物只要其不见于体内， 即可用于诊断性测定以供确定本发明化合物的治疗性剂量。

制品

另一个实施方案提供了用于治疗响应JAK激酶抑制的疾病或病症的试 剂盒。所述试剂盒包含：

(a)第一药物组合物，其包含本发明化合物；和

(b)使用说明。

在另一实施方案中，所述试剂盒还包含：

(c)第二药物组合物，其包含化学治疗药物。

在一实施方案中，所述说明包含对于将所述第一和第二药物组合物向有 此需要的患者同时、顺序或分开给药的说明。

在一实施方案中，所述第一和第二药物组合物包含于分开的容器中。

在一实施方案中，所述第一和第二药物组合物包含于相同的容器中。

可用的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡包装等。所述容器可由 多种材料制成，如玻璃或塑料。所述容器包含本发明化合物或其制剂，其有 效地治疗病症，且可具有无菌入口(sterial access port)(例如，所述容器可为带 有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或者小瓶)。容器包含组合物， 所述组合物包含至少一种本发明化合物。标签或药品说明书(package insert) 指示，所述组合物是用于治疗所选的病症如癌症。在一实施方案中，所述标 签或药品说明书指示包含本发明化合物的组合物可用于治疗病症。此外，所 述标签或药品说明书可指示待治疗的患者是具有以活动过度(overactive)或不 规则(irregular)激酶活性为特征的病症的患者。所述标签或包装说明书还可指 示所述组合物可用于治疗其它疾病。

所述制品可包含(a)具有本发明化合物包含其中的第一容器；和(b)具有 第二药物制剂包含其中的第二容器，其中所述第二药物制剂包含化学治疗药 物。在本发明该实施方案中的制品还可包含包装说明书，指示所述第一和第 二化合物可用于治疗具有中风、血栓或血栓形成疾病风险的患者。可选择地 或另外，所述制品还可包含第二个(或第三个)容器，其包含可药用的缓冲液， 如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲的盐水、林格液和右旋糖溶液。其还可 包含其它从商业性或使用者角度需要的物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过 滤器、针头和注射器。

在一实施方案中，本发明化合物可用于调控JAK蛋白质激酶、酪氨酸激 酶、其它的丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶(dual specificity kinase)。 因此，其可用作用于开发新生物学测试、测定和探索新药物试剂的药物标准。

可对式I化合物就其调节JAK蛋白质激酶、酪氨酸激酶、其它的丝氨酸 /苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶在体外和体内的活性的能力进行测定。体 外测定包括生物化学和基于细胞的测定，其确定对酶活性的抑制。其它体外 测定对本发明化合物结合激酶的能力进行定量，且可通过在结合之前放射性 标记本发明化合物，分离本发明化合物/激酶复合物并确定结合的放射性标记 的量来测定，或通过运行其中将本发明化合物用放射性同位素标记的已知配 体孵育的竞争实验来测定。这些和其它有用的体外测定是本领域技术人员公 知的。

为了阐明本发明，本申请包括了下述实施例。然而，应理解的是，这些 实施例并非对本发明作出限定，而仅意为提出实施本发明的方法。本领域技 术人员会意识到可容易地将描述的化学反应用于制备本发明其它化合物，且 制备本发明其它化合物的方法落在本发明保护范围内。例如，对于本发明未 例示的化合物的合成可通过本领域技术人员显而易见的改变而成功进行，所 述改变为例如，通过适当地保护干扰基团，通过使用本领域已知非所描述的 那些之外的其它合适的试剂，和/或通过对反应条件进行常规改变。可选择地， 人们会意识到本申请所述的其它反应或本领域已知的反应具有用于制备本发 明其它化合物的用途。

生物学实施例

可通过以下方法测量JAK2经分离的激酶结构域的活性，所述方法为监 测源自体外人JAK3激酶(Saltzman et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun. 246：627-633(2004))的肽底物的磷酸化。使人JAK2激酶结构域表达为具有N- 末端His6标记，然后使用杆状病毒表达载体系统表达凝血酶断裂位点。将所 表达的激酶结构域根据序列登录号NP_004963.1的编号定义为氨基酸残基 D812-G1132。将重组DNA转移载体与BakPAK6非线性化的DNA(Clontech  Laboratories，Inc.，Mountain View，CA)共转染，使用标准方案使所得viral  stocks放大。在于ESF921介质中生长至细胞密度为2E6/mL的SF9细胞中产 生蛋白质(Expression Systems LLC，Woodland，CA)并且在Wave生物反应器中 以1 M.O.I.感染。感染后72小时收集细胞，先后通过Ni-NTA(Qiagen，Valencia， CA)柱色谱法和Sephacryl S-200(GE Healthcare，Piscataway，NJ)柱色谱法从经 感染的细胞的溶胞产物中纯化活性JAK2酶。

之前的研究显示了人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2经分离的激酶结构域 在体外激酶测定中使肽底物磷酸化(Saltzman等，Biochem.Biophys.Res. Commun.246：627-633(2004))。人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2的催化活性 激酶结构域域是从经编码人JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激酶结构域(JAK1 氨基酸残基N852-D1154，根据GenBank序列登录号P23458的编号；JAK2 氨基酸残基D812-G1132，根据GenBank序列登录号NP_004963.1的编号； JAK3氨基酸残基S783-S1124，根据GenBank序列登录号P52333的编号，和； TYK2氨基酸残基N873-C1187，根据GenBank序列登录号P29597的编号) 的重组杆状病毒表达载体感染的SF9昆虫细胞提取物分离的。JAK1、JAK2、 JAK3或TYK2激酶结构域的活性可通过多种直接和间接方法测定，包括对 来源于人JAK3蛋白质的肽底物的磷酸化进行定量(Saltzman等，Biochem. Biophys.Res.Commun.246：627-633(2004))。JAK1、JAK2、JAK3或TYK2激 酶域的活性是在体外通过使用Caliper LabChip技术(参见实施例)监测JAK3 来源的肽的磷酸化来测定的。

实施例A

JAK2抑制测定方案

经分离的JAK2激酶域的活性是通过监测来源于JAK3的肽 (Val-Ala-Leu-Val-Asp-Gly-Tyr-Phe-Arg-Leu-Thr-Thr)的磷酸化使用Caliper  LabChip技术(Caliper Life Sciences，Hopkinton，MA)来测定的，所述肽在其N 端经5-羧基荧光素荧光标记。为了确定抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中 系列稀释，并添加至50μL激酶反应液中，所述反应液含0.2nM经纯化的JAK2 酶、100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、25μM ATP、 10mMmgCl2、4mM DTT，DMSO终浓度为2％。将反应液在22℃在384孔聚 丙烯微滴定板中孵育30分钟，然后通过添加25μL含EDTA的溶液(100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、150mM EDTA)来终止，使EDTA终浓度为 50mM。在终止激酶反应之后，使用Caliper LabChip 3000根据生产商的说明 来确定磷酸化产物部分，其为总肽底物的分数。然后使用Morrison的紧密结 合模型(Morrison tight binding model)来确定Ki值。Morrison，J.F.，Biochim. Biophys.Acta.185：269-296(1969)；William，J.W.和Morrison，J.F.，Meth. Enzymol.，63：437-467(1979)。

实施例B

JAK1和TYK2抑制测定方案

经分离的JAK1或TYK2激酶结构域的活性是通过监测来源于JAK3的 肽(Val-Ala-Leu-Val-Asp-Gly-Tyr-Phe-Arg-Leu-Thr-Thr)的磷酸化使用Caliper  LabChip技术(Caliper Life Sciences，Hopkinton，MA)来测定的，所述肽在其N 端经5-羧基荧光素荧光标记。为了确定抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中 系列稀释，并添加至50μL激酶反应液中，所述反应液含1.5nM JAK1、0.2nM 经纯化的JAK2酶或1nM经纯化的TYK2酶、100mM Hepes(pH 7.2)、 0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、25μM ATP、10mMmgCl2、4mM DTT，DMSO 终浓度为2％。将反应液在22℃在384孔聚丙烯微滴定板中孵育30分钟，然 后通过添加25μL含EDTA的溶液(100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、 150mM EDTA)来终止，使EDTA终浓度为50mM。在终止激酶反应之后，使 用Caliper LabChip 3000根据生产商的说明来确定磷酸化产物部分，其为总肽 底物的分数。然后使用Morrison的紧密结合模型(Morrison tight binding model) 来确定Ki值。Morrison，J.F.，Biochim.Biophys.Acta.185：269-296(1969)； William，J.W.和Morrison，J.F.，Meth.Enzymol.，63：437-467(1979)。

实施例C

JAK3抑制测定方案

经分离的JAK3激酶域的活性是通过监测来源于JAK3的肽 (Leu-Pro-Leu-Asp-Lys-Asp-Tyr-Tyr-Val-Val-Arg)的磷酸化使用Caliper LabChip 技术(Caliper Life Sciences，Hopkinton，MA)来测定的，所述肽在其N端经5- 羧基荧光素荧光标记。为了确定抑制常数(Ki)，将化合物在DMSO中系列稀 释，并添加至50μL激酶反应液中，所述反应液含5nM经纯化的JAK3酶、 100mM Hepes(pH 7.2)、0.015％Brij-35、1.5μM肽底物、5μM ATP、10mMmgCl2、 4mM DTT，DMSO终浓度为2％。将反应液在22℃在384孔聚丙烯微滴定板 中孵育30分钟，然后通过添加25μL含EDTA的溶液(100mM Hepes(pH 7.2)、 0.015％Brij-35、150mM EDTA)来终止，使EDTA终浓度为50mM。在终止激 酶反应之后，使用Caliper LabChip 3000根据生产商的说明来确定磷酸化产物 部分，其为总肽底物的分数。然后使用Morrison的紧密结合模型(Morrison tight  binding model)来确定Ki值。Morrison，J.F.，Biochim.Biophys.Acta. 185：269-296(1969)；William，J.W.和Morrison，J.F.，Meth.Enzymol.， 63：437-467(1979)。

实施例D

基于细胞的药理学测定

化合物的活性是通过基于细胞的测定法确定的，设计所述测定用于测量 Janus激酶依存性信号传导或增殖。将化合物在DMSO中系列稀释，并与Set-2 细胞(德意志微生物和细胞培养物保藏中心(German Collection of  Microorganisms and Cell Cultures，DSMZ)；Braunschweig，Germany)在96孔微 滴定板中在37℃在RPMI培养基中以最终细胞密度为每孔100,000个细胞和 最终DMSO浓度为0.57％一同孵育，所述细胞表达JAK2V617F突变蛋白。 然后在孵育细胞的裂解液中使用Meso Schale Discovery(MSD)技术 (Gaithersburg，Maryland)根据生产商的说明测定化合物介导的对STAT5磷酸 化的作用，并确定EC50值。或者，将经系列稀释的化合物添加至在RPMI培 养基(含有10％胎牛血清)中的384孔微滴定板中(Invitrogen Corp.；Carlsbad， CA)，在37℃孵育72小时，最终细胞密度为每孔2500个细胞，而最终DMSO 浓度为0.3％。然后根据制造商的说明(Promega；Madison，WI)使用 CellTiter-发光细胞活力测定确定细胞活力，确定EC50值。

化合物的活性是在基于细胞的测定中确定的，设计所述测定来测量 TYK2-依赖的信号传导。将化合物在DMSO中系列稀释并在96-孔微滴定板 中在RPMI介质中与NK92细胞(American Type Culture Collection(ATCC)； Manassas，VA)孵育，最终细胞密度为每孔100,000个细胞，并且最终DMSO 浓度为0.57％。然后向含有NK92细胞和化合物的所述微滴定板中以最终浓 度10ng/mL加入人重组IL-12(R&D systems；Minneapolis，MN)，将所述板在 37℃孵育1小时。然后使用Meso Scale Discovery(MSD)技术(Gaithersburg， Maryland)根据制造商的方案在所孵育细胞的溶胞产物中测量化合物介导的 对STAT4磷酸化的作用，并确定EC50值。

化合物的活性是在基于细胞的测定中确定的，设计所述测定来测量JAK1 或JAK2-依赖的信号传导。将化合物在DMSO中系列稀释并用TF-1细胞 (American Type Culture Collection(ATCC)；Manassas，VA)在384-孔微滴定板中 在不含有酚磺酞的OptiMEM介质、1％活性炭/右旋糖酐剥离的FBS、0.1mM NEAA、1mM丙酮酸钠(Invitrogen Corp.；Carlsbad，CA)中孵育，最终细胞密 度为每孔100,000个细胞，最终DMSO浓度为0.2％。然后向含有所述TF-1 细胞和化合物的微滴定板中加入人重组IL-6(R&D systems；Minneapolis，MN) 或EPO(Invitrogen Corp.；Carlsbad，CA)，最终浓度分别为30ng/mL或10 Units/mL，将所述板在37℃孵育30分钟。然后使用Meso Scale  Discovery(MSD)技术(Gaithersburg，Maryland)根据制造商的方案测量分别在 IL-6或EPO存在下孵育的细胞的溶胞产物中化合物介导的对STAT3或STAT5 磷酸化的作用，并确定EC50值。

制备实施例

在下述实施例中，除非另外指明，所有的温度以摄氏度表示。试剂从商 业供应商如Aldrich Chemical Company，Lancaster，TCI或Maybridge购得，并 除非另外指明，不经进一步纯化即使用。

下面列举的反应一般是在无水溶剂中在正压干燥氮气下(除非另外指明) 进行。

柱色谱是在具有硅胶柱的Combiflash系统(制造商：Teledyne Isco)上进行 的，通过常规的硅胶快速色谱法或在C-18柱上通过反相HPLC色谱法(用乙 腈/水(含有0.1％三氟乙酸(TFA)或0.1％甲酸)作为洗脱剂)。1H NMR谱是在以 400MHz或500MHz运行的Bruker仪器上记录的。1H NMR谱是使用三甲基 硅烷作为参照标准(0.00ppm)作为CDCl3或d6-DMSO溶液(报道为ppm)获得 的。当报道多重峰时，使用以下缩写：s(单峰)、d(二重峰)、t(三重峰)、m(多 重峰)、br(宽峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。当给出耦合常数时，以Hertz 数(Hz)报道。

实施例1

5-(3-氯苄基氨基)-N-环己基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-醇钠

将3-氨基吡唑(9.38g，0.11mM，1.0当量)、1，3-二甲基尿嘧啶(14.7g， 0.11mM，1.0当量)和21％乙醇钠/乙醇(170mL，5.0当量)的机械搅拌混合物加 热回流。数分钟内，形成重析出物。回流1小时后，通过薄层色谱法(tlc)(92∶8 的二氯甲烷∶MeOH)不能再检测出1，3-二甲基尿嘧啶。冷却反应混合物，过滤， 用冷乙醇洗涤并真空干燥，得到13.47g(95％)吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-醇钠。 LCMS(ESI)m+H＝136.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：8.0(d，1H)，7.43(d， 1H)，5.65(d，1H)，5.37(d，1H)。

吡唑并[1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮

将吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-醇钠(13.47g)溶于500mL乙酸和100mL水中，搅 拌15分钟，然后真空蒸干。将残余物悬浮在300mL 9∶1的二氯甲烷∶甲醇中， 真空过滤经过硅胶，除去乙酸钠。所述硅胶垫用再用700mL二氯甲烷∶甲醇 溶液洗涤。将合并的二氯甲烷∶甲醇溶液浓缩干燥。将固体产物悬浮在1∶1的 己烷∶二氯甲烷中，过滤，得到9.9g(85％)吡唑并[1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮。 LCMS(ESI)m+H＝136.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.1(可互换的宽单 峰，1H)，8.47(d，1H，J＝7.9)，7.75(d，1H，J＝1.9)，5.94(d，1H，J＝7.5)，5.81(d，1H， J＝1.7)。

3-碘吡唑并[1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮

将吡唑并[1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮(1.0g，7.4mM，1.0当量)和N-碘代琥珀酰亚 胺(1.67g，7.4mM，1.0当量)与20mL DMF合并并轻微温热。数分钟内形成重 析出物。将反应混合物在环境温度再搅拌1小时，然后在冰水浴上冷却并过 滤。收集的固体用20mL二氯甲烷洗涤并风干，得到1.66g(86％)3-碘吡唑并 [1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮。LCMS(ESI)m+H＝262.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δ：12.1(s，1H)，8.5(d，1H，J＝7.6)，7.84(s，1H)，6.01(d，1H，J＝7.1)。

5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯

将3-碘吡唑并[1，5-a]嘧啶-5(4H)-酮(1.5g，5.7mM，1.0当量)、醋酸钯(0.27g， 1.2mM，0.2当量)、三乙胺(2.3mL，17mM，3.0当量)和75mL甲醇的混合物搅 拌，真空脱气两次(用氮气间歇)，然后利用气球用一氧化碳封层。将反应混 合物加热至55℃，保持5小时。TLC(95∶5的二氯甲烷∶甲醇)表明反应结束。 将反应混合物用硅藻土过滤并真空浓缩。残余物用水重结晶并过滤，得到 0.81g(73％)5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯，通过HPLC检测 其为97.6％纯。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：11.0(br s，1H)，8.58(d，1H)， 8.19(s，1H)，6.19(d，1H)，3.80(s，3H)。

5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸

将5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯(0.75g 3.89mM，1.0当 量)、氢氧化锂(0.466g，19.4mM，5.0当量)和20mL水的溶液在环境温度搅拌3 小时。HPLC表明反应结束。加入乙酸(5mL)，通过真空过滤收集沉淀的固体， 得到0.65g(93％)5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ：12.5(br s，1H，)，11.3(br s，1H)，8.57(d，1H)，8.08(d，1H)，6.15(d， 1H)。

5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯

使5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(371mg，2.1mM，1.0当量)、 三氯氧化磷(20mL)和N，N-二异丙基乙基胺(1.2mL，6.9mM，3.3当量)的混合物 回流2小时。冷却反应混合物并减压浓缩。将残余物吸收在二氯甲烷中并浓 缩3次。残余物在水和二氯甲烷之间分配。二氯甲烷层用硫酸钠干燥，用硅 胶床真空过滤并浓缩，得到390mg(87％)5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯，其 为黄色固体，将其不经进一步纯化立即使用。

5-氯-N-环己基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

向粗制的5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(200mg，0.9mM，1.0当量)于 15mL二氯甲烷中的搅拌溶液中加入环己胺(400μL，4.0mM，4当量)。将反应 混合物搅拌15分钟，然后用0.4mL乙酸淬灭。减压浓缩反应混合物，残余 物在水和二氯甲烷之间分配。浓缩二氯甲烷相，粗制产物经硅胶快速色谱法 纯化(97∶3的二氯甲烷∶甲醇)，得到310mg(100％)5-氯-N-环己基吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝279.1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.66(s， 1H)，8.65(d，1H)，7.47(d(可互换的宽峰)1H)，6.93(d，1H)，4.08(m，1H)， 2.02(m，2H)，1.80(m，2H)，1.62(m，1H)，1，40(m，5H)。

5-(3-氯苄基氨基)-N-环己基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

将5-氯-N-环己基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺(28mg，0.09mM，1.0当量)、 3-氯苄基胺(28mg，0.18mM，2.0当量)、N，N-二异丙基乙基胺(26mg，0.18mM， 2.0当量)和2mL乙醇的溶液在120℃微波辐射10分钟。TLC(95∶5的二氯甲 烷∶甲醇)显示反应结束。冷却反应混合物，过滤收集结晶产物，用冷乙醇洗 涤并风干，得到29.7mg(77％)5-(3-氯苄基氨基)-N-环己基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝384.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：8.61(重叠 的二重峰和三重峰，2H)，8.06(s，1H)，7.60(d，1H)，7.4-7.25(m，4H)，6.49(d，1 H)，3.70(m，1H)，1.75-1.5(m，5H)，1.4-0.8(m，5H)。

实施例2

5-氨基-N-(1-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰 胺

5-氯-N-(1-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

将5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(150mg，0.69mM，1.0当量)、1-(3-氯苯 基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺(140mg，0.69mM，1.0当量，获自Enamine，Ltd， Cincinnati，OH Cat# EN300-02447)、N，N-二异丙基乙基胺(0.18mL，1.0mM，1.0 当量)和15mL二氯甲烷的溶液在环境温度搅拌3天。反应混合物在二氯甲烷 和水之间分配。用硫酸钠干燥二氯甲烷相，并真空用硅胶过滤。硅胶垫用95∶5 的二氯甲烷∶甲醇洗涤。浓缩合并的滤液，得到250mg(93％)5-氯-N-(1-(3-氯苯 基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺，HPLC检测纯度为 74％，并且不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝387.2，(两个氯同位素模 式)。

将74％纯的5-氯-N-(1-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧 啶-3-甲酰胺(55mg，0.14mM，1.0当量)和3mL浓氢氧化铵的混合物在微波反应 器中密封并在105℃加热30分钟。冷却反应混合物，过滤收集沉淀的产物， 得到25mg(48％)5-氨基-N-(1-(3-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺，在C-18上通过反相色谱法纯化(用乙腈/水(0至60梯度， 0.1％TFA)并冻干。LCMS(ESI)m+H＝368.3(一个氯同位素模式)，1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：9.94(s，1H)，8.66(d，1H)，8.20(s，1H)7.67(s，1H)，7.57(d，1 H)，7.49(dd，1H)，7.44(d，1H)，6.89(br s，1H)，6.40(重叠的二重峰和单峰，2H)， 2.26(s，3H)。

实施例3

N-异丙基-5-(吡啶-3-基甲氧基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

5-氯-N-异丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

将5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2.0g，10mM，1.0当量)、 30mL三氯氧化磷(300mM，30当量)和N，N-二异丙基乙基胺(8mL，40mM，4当 量)的混合物在搅拌下回流加热2小时。冷却反应混合物并真空浓缩。将棕色 油状物吸收在二氯甲烷中，加入异丙基胺(3mL，30mM，3当量)。将反应混合 物搅拌5分钟，然后在乙酸乙酯和水之间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸 钠干燥并用硅胶垫真空过滤。浓缩滤液并冷却，过滤收集结晶的产品，得到 2.31g(90％)5-氯-N-异丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI) m+H＝239.1(单氯化同位素模式)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.33(d，1H)， 8.60(s，1H)，7.47(d，1H)，7.36(d，1H)，4.09(m，1H)，1.20(d，6H)。

向吡啶-3-基甲醇(17.6mg，0.16mM，1.5当量)于0.8mL DMF中的脱气溶 液中加入六甲基二硅基氨基锂的1摩尔溶液(215μL，0.22mM，2.0当量)。将 该混合物搅拌10分钟，然后滴加至5-氯-N-异丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰 胺(25.7mg，0.11mM，1.0当量)于1mL DMF中的搅拌溶液中。反应混合物使用 反相HPLC纯化(5至30％乙腈/水，0.1％甲酸)，冻干产物，得到22.7mg(68％) N-异丙基-5-(吡啶-3-基甲氧基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI) m+H＝312.2，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.09(d，1H)，8.76(d，1H)， 8.59(dd，1H)，8.38(s，1H)，7.95(d，1H)，7.45(dd 2H)，6.81(d，1H)，5.61(s，1H)， 4.08(m，1H)，1.19(d，6H)。

实施例4

5-(3-氟苄基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯

5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯

将5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(151mg，0.84mM，1.0当量)、 三氯氧化磷(20mL)和N，N-二异丙基乙基胺(440μL，2.5mM，3.0当量)的混合物 回流加热2小时。将反应混合物过夜冷却至环境温度，然后减压浓缩。将残 余物溶于20mL甲醇中，搅拌30分钟并真空浓缩。残余物在乙酸乙酯和水之 间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，用硅胶垫过滤并浓缩，得到 160mg(90％)5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯LCMS(ESI)m+H＝212.2，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.34(d，1H)，8.68(s，1H)，7.42(d，1H)，3.83(s，3 H)。

将5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯(240mg，1.1mM，1.0当量)、3-氟苄 基胺(200μL，2.0mM，2.0当量)、30mL乙醇和400μL N，N-二异丙基乙基胺 (2.0mM，2当量)的溶液合并并回流加热4小时。浓缩混合物，过滤收集产物 并用冷乙醇洗涤，得到271mg(80％)5-(3-氟苄基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酸甲酯LCMS(ESI)m+H＝301.2，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：8.56(d， 1H)，8.41(m 1H)，8.17(s，1H)，7.35(m，3H)，7.08(td，1H)，6.44(d，1H)， 4.61(d，2H)，3.74(s，3H)。

根据上述方法制备表1中所示的实施例5-221

表1

实施例222

5-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶 -3-甲酰胺

3-(5-氯-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯

向5-氯-2-甲基苯甲酸(4.85g，28.4毫摩尔)于四氢呋喃(30mL)中的搅拌溶 液中加入N，N-羰基二咪唑(4.87g，30.0毫摩尔，1.06当量)。30分钟后，将反应 混合物加至乙基丙二酸钾(11.61g，68.22毫摩尔，2.40当量)和氯化镁(3.27g， 34.3毫摩尔，1.21当量)于四氢呋喃(50mL)中的悬浮液中。将所得悬浮液在 50℃加热。10小时后，反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用 硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到8.07g(118％)3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-3-氧代丙 酸乙酯，将其不经纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝241.2

2-(5-氯-2-甲基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯

将3-(5-氯-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(28.4毫摩尔)于1，1-二甲氧基 -N，N-二甲基甲胺(10.0mL，75.3毫摩尔，2.6当量)中的溶液在90℃加热。3小 时后，将反应混合物真空浓缩，通过硅胶快速柱色谱法纯化所得残余物(0至 80％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到2.87g(34％)2-(5-氯-2-甲基苯甲酰基)-3-(二甲 基氨基)丙烯酸甲酯。LCMS(ESI)m+H＝296.3。

5-(5-氯-2-甲基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

将2-(5-氯-2-甲基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯(2.87g，9.70毫摩 尔)和肼(0.50mL，16.0毫摩尔，1.6当量)于30mL乙醇中的溶液在70℃加热2 小时。然后蒸发溶剂和过量肼，得到2.57g(100％)5-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1H- 吡唑-4-甲酸乙酯，将其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝265.2。

3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-             5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-

吡唑-4-甲酸乙酯                            吡唑-4-甲酸乙酯

将5-(5-氯-2-甲基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(9.70毫摩尔)、碳酸铯(3.83g， 11.8毫摩尔，1.2当量)和碘甲烷(0.90mL，14.0毫摩尔，1.5当量)于N，N-二甲基 甲酰胺(35mL)中的溶液在40℃加热。7小时后，将反应混合物在乙酸乙酯 和水之间分配。有机部分用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。经硅胶快速色谱法纯 化粗制产物(0至40％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到2.18g(81％)区域异构体产物 3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯和5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲 基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯的1∶1混合物。LCMS(ESI)m+H＝279.2。

3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-              5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-

吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯                     吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯

将3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯和5-(5-氯-2-甲基苯 基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(区域异构体的1∶1混合物，2.179g，7.818毫摩 尔)和1.0M氢氧化钠水溶液(14mL，20毫摩尔，4当量)于乙醇(10mL)中的溶液 在50℃加热16小时。蒸发乙醇后，残余物用水稀释。将所得水溶液用1.0M 磷酸水溶液酸化至约pH 2。该溶液用二氯甲烷(3x)萃取。合并的有机萃取物 用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到1.936g(99％)相应的甲酸化合物，将其不 经进一步纯化立即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝251.1。

向中间体甲酸化合物于二噁烷(15mL)中的溶液中加入三乙胺(2.2mL， 15.8毫摩尔，4.1当量)和二苯基磷酰基叠氮化物(1.9mL，8.82毫摩尔，2.3当 量)。1小时后，将反应混合物加热至90℃，加入叔丁醇(15mL)。2小时后， 将反应混合物真空浓缩，所得残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用 饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱 法纯化粗制产物(0至50％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到1.64g(66％)区域异构体 产物的1∶1混合物。LCMS(ESI)m+H＝322.2。

3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-            5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-

吡唑-4-胺                                 吡唑-4-胺

向3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯和5-(5-氯 -2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸叔丁酯(区域异构体的1∶1混合物， 1.64g，5.09毫摩尔)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入氢氯酸溶液(10.0mL，40 毫摩尔，16当量，4.0M的1，4-二噁烷溶液)。16小时后，将反应混合物真空浓 缩。所得固体残余物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。含水部分 用二氯甲烷萃取不止一次，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩。纯化粗 制产物，经硅胶快速色谱法分离区域异构体(0至100％乙酸乙酯/二氯甲烷)， 得到：429.7mg 3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI) m+H＝222.1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.35(d，J＝1.8，1H)，7.24-7.17(m，2H)， 7.04(s，1H)，3.84(s，3H)，2.76(s，2H)，2.30(s，3H)和420.2mg 5-(5-氯-2-甲基苯 基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺.LCMS(ESI)m+H＝222.2；1H NMR(400MHz，CDCl3) δ：7.33(dd，J＝8.3，2.1，1H)，7.28(s，1H)，7.24-7.19(m，2H)，3.57(s，3H)，2.71(s， 2H)，2.15(s，3H)。

5-氯-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰胺

在室温，向3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(182.9mg，0.4826毫 摩尔，1.2当量)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲 酰氯(91.2mg，0.411毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.30mL，2.2毫摩尔，5.2当量)。 16小时后，将反应混合物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。有机 层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到143.1mg(87％)5-氯-N-(3-(5-氯-2-甲基苯 基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经纯化即进行 下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝401.0。

5-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶 -3-甲酰胺

使氨气鼓泡通过冰冷却的5-氯-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑 -4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺(143.1mg，0.3566毫摩尔)于3.0mL异丙醇中 的悬浮液，持续20分钟。将反应容器用盖子盖住并通过微波辐射在110℃ 加热30分钟。将反应混合物浓缩干燥。粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干， 得到76.4mg(56％)5-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑 并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝382.1；1H NMR(400 MHz，DMSO) δ9.34(s，1H)，8.63(d，J＝7.6，1H)，8.16(d，J＝9.6，2H)，7.41(m，3H)，6.37(d，J＝7.6， 1H)，3.89(s，3H)，2.26(s，3H)。

实施例223

5-氨基-N-(5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶 -3-甲酰胺

使用5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺并按照针对实施例222描 述的操作，得到标题化合物5-氨基-N-(5-(5-氯-2-甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4- 基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝382.1；1H NMR(400MHz， DMSO)δ9.16(s，1H)，8.61(d，J＝7.6，1H)，8.13(s，1H)，7.83(s，1H)，7.50(m 3H)， 6.35(d，J＝7.6，1H)，3.60(s，3H)，2.13(s，3H)。

实施例224

5-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并 [1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

将5-(5-氯-2-甲基苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.2286g，0.8636毫摩尔)、碳 酸铯(359.1mg，1.102毫摩尔，1.276当量)和1-溴-2-甲氧基乙烷于N，N-二甲基 甲酰胺(6mL)中的溶液在50 ℃加热。2.5小时后，反应混合物在乙酸乙酯和 水之间分配。用硫酸镁干燥有机层，过滤并浓缩，得到257.7mg(92％)3-(5- 氯-2-甲基苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯，将其不经纯化即进行 下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝323.2。

5-氨基-N-(3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并 [1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

使用3-(5-氯-2-甲基苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯并按照 针对实施例222描述的操作制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝426.2；1H NMR(400 MHz，DMSO)δ 9.34(s，1H)，8.63(d，J＝7.5，1H)，8.16(d，J＝1.6，2H)， 7.41(m，3H)，6.37(d，J＝7.6，1H)，4.31(t，J＝5.2，2H)，3.74(t，J＝5.2，2H)，3.27(s， 3H)，2.26(s，3H)。

实施例225

5-氨基-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰胺

2-(2，5-二甲基苯基)-2-氧代乙基亚氨基二甲酸二叔丁酯

在室温，向烘箱干燥的装有于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的亚氨基二甲 酸二叔丁酯(2.566g，11.81毫摩尔，1.10当量)的烧瓶中加入氢化钠(0.586g，14.6 毫摩尔，1.37当量，60％于矿物油中)。1.5小时后，在室温，将2-溴-1-(2，5-二 甲基苯基)乙酮(2.432g，10.71毫摩尔，1.00当量)加至反应混合物中。再反应1.5 小时后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用水和饱和氯化 钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化粗 制产物(0至40％乙酸乙酯/庚烷)，得到3.01g(77％)2-(2，5-二甲基苯基)-2-氧代 乙基亚氨基二甲酸二叔丁酯。LCMS(ESI)m+Na＝386.2。

1-(二甲基氨基)-3-(2，5-二甲基苯基)-3-氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二甲酸二 叔丁酯

将2-(2，5-二甲基苯基)-2-氧代乙基亚氨基二甲酸二叔丁酯(3.0076g， 8.2752毫摩尔，1当量)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(6.0mL，45毫摩尔，5.4 当量)的溶液在70℃加热17小时，然后在100℃加热24小时。蒸发过量 1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺后，通过硅胶快速柱色谱法纯化粗制产物(0至 50％乙酸乙酯/庚烷)，得到1.305g(38％)1-(二甲基氨基)-3-(2，5-二甲基苯基)-3- 氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二甲酸二叔丁酯。LCMS(ESI)m+H＝419.3。

3-(2，5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺

将1-(二甲基氨基)-3-(2，5-二甲基苯基)-3-氧代丙-1-烯-2-基亚氨基二甲酸 二叔丁酯(1.305g，3.118毫摩尔，1.0当量)和肼(0.20mL，6.4毫摩尔，2.0当量) 一起溶于乙醇(15mL)中。将反应混合物在70℃加热1小时，然后蒸干。将 固体残余物溶于二氯甲烷(8mL)和氢氯酸溶液(8.0mL，100毫摩尔，40当量，4.0 M于1，4-二噁烷)中，在室温搅拌3.5小时。蒸发溶剂和过量氯化氢，粗制产 物在饱和碳酸氢钠水溶液和二氯甲烷之间分配。水层用二氯甲烷萃取一次， 合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到605.4mg(104％)3-(2，5-二甲基 苯基)-1H-吡唑-4-胺，将其不经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI) m+H＝188.3。

5-氯-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲 酰胺

在室温，向5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(400.4mg，1.853毫摩尔，1.16 当量)于二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入3-(2，5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-胺 (300.0mg，1.602毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(0.70mL，5.0毫摩尔，3.1当量)。14 小时后，反应混合物在二氯甲烷和半饱和的碳酸氢钠水溶液之间分配。水层 用二氯甲烷萃取一次。合并的有机部分用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到5- 氯-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不 经纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝367.1。

向上述粗制物质于N，N-二甲基甲酰胺(12mL)中的溶液中加入碳酸铯 (0.890g，2.73毫摩尔，2.0当量)和碘甲烷(0.135mL，2.17毫摩尔，1.61当量)。然 后将反应混合物在40℃加热。5小时后，反应混合物在乙酸乙酯和水之间分 配。有机部分用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。 通过硅胶快速柱色谱法纯化粗制产物(20至90％乙酸乙酯/二氯甲烷)，得到 45.5mg(9％)5-氯-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝381.2。

5-氨基-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰胺

使氨气鼓泡通过冰冷却的5-氯-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4- 基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺(45.5mg，0.119毫摩尔)于乙醇(3.0mL)中的悬浮 液，保持20分钟。将反应容器用盖子盖住并通过微波辐射在100℃加热30 分钟。将反应混合物浓缩干燥，粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干，得到 4.0mg(9.3％)5-氨基-N-(3-(2，5-二甲基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝362.1；1H NMR(400 MHz，DMSO)δ9.47(s， 1H)，8.62(d，J＝7.5，1H)，8.16(d，J＝7.1，2H)，7.30(d，J＝8.2，1H)，7.19(d，J＝6.2， 2H)，6.36(d，J＝7.6，1H)，5.75(s，2H)，3.88(s，3H)，2.29(s，3H)，2.21(s，3H)。

实施例226

5-氨基-N-(1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶 -3-甲酰胺

(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐

向冰冷却的5-氯-2-甲基苯胺(1.4362g，10.143毫摩尔，1.00当量)于水 (10mL)中的悬浮液中加入浓盐酸(10mL)。在0℃，向该反应混合物中滴加亚 硝酸钠(0.791g，11.5毫摩尔，1.13当量)的水(5mL)溶液。2小时后，将反应混 合物缓慢加至冰冷却的二氯化锡二水合物(5.88g，25.8毫摩尔，2.55当量)于浓 盐酸(8mL)中的搅拌溶液中。根据需要加入水，从而在固体形成的同时维持搅 拌。将反应混合物在0℃保持45分钟。过滤白色固体并用乙醚(2x50mL)冲 洗。真空干燥固体，得到1.49g(76％)(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：10.08(s，3H)，7.98(s，1H)，7.13(d，1H)，6.97(s，1H)， 6.91(d，1H)，2.14(s，3H)。

1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺

向(5-氯-2-甲基苯基)肼盐酸盐(1.49g，7.72毫摩尔，1.00当量)于乙醇(8mL) 中的溶液中加入氢氯酸溶液(4.0mL，20毫摩尔，2当量，5 M水溶液)和3-氨基 丙烯基腈(0.664g，8.09毫摩尔，1.05当量)。将反应混合物在80℃搅拌16小 时，然后用饱和碳酸氢钠水溶液使pH为中性。所得溶液用二氯甲烷萃取两 次，合并的萃取物用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到1.41g(82％)1-(5-氯-2- 甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺，将其不经进一步纯化即用于下面的反应。 LCMS(ESI)m+H＝222.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：7.39(d，1H)，7.37(d， 1H)，7.25(s，1H)，5.22(s，1H)，5.00(s，2H)，2.04(重叠的单峰和单峰，6H)。

5-氨基-N-(1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶 -3-甲酰胺

使用1-(5-氯-2-甲基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-胺并按照针对实施例222描 述的操作制备标题化合物。LCMS(ESI)m+H＝382.1；1H NMR(400MHz， DMSO)δ9.73(s，1H)，8.63(d，J＝7.5，1H)，8.18(s，1H)，7.58-7.45(m，3H)，6.41(s， 1H)，6.37(d，J＝7.6，1H)，2.22(s，3H)，2.04(s，3H)。

实施例227

N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(环丙基甲基氨基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺

2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1，3-二酮

将2-溴-3’-氯苯乙酮(0.9271g，3.971毫摩尔，1.0当量)和邻苯二甲酰亚氨 基钾(0.8129g，4.389毫摩尔，1.1当量)于N，N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液在 50℃加热。1小时后，通过旋转蒸发除去溶剂。所得固体用乙酸乙酯研磨并 过滤。真空干燥收集的固体，得到1.19g(117％)2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基) 异二氢吲哚-1，3-二酮，将其不经纯化即进行下面的反应。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ：8.13(s，1H)，8.05(d，1H)，7.96(m，2H)，7.93(m，2H)，7.83(d，1H)， 7.65(t，1H)，5.29(s，2H)。

2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1，3-二酮

将2-(2-(3-氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1，3-二酮(782.2mg，2.610毫摩 尔，1当量)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(1.5mL，11毫摩尔，4.3当量)的搅 拌混合物在100℃加热18小时。通过旋转蒸发除去过量1，1-二甲氧基-N，N- 二甲基甲胺。通过硅胶快速柱色谱法纯化粗制产物(50至100％乙酸乙酯/庚 烷)，得到740mg(80％)2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异 二氢吲哚-1，3-二酮。LCMS(ESI)m+H＝355.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ： 7.90(双双峰，2H)，7.77(双双峰，2H)，7.57(s，1H)，7.44(d，1H)，7.37(重叠的二重 峰和单峰，2H)，7.31(t，1H)，3.00(s，6H)。

3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺

将2-(3-(3-氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1，3- 二酮(2.30g，6.48毫摩尔，1.0当量)和N-甲基肼(1.4mL，26毫摩尔，4.0当量)于 乙醇(50mL)中的溶液在80℃加热。2小时后，浓缩反应混合物，分离所得 区域异构体的粗制混合物并经硅胶快速色谱法纯化(0至80％乙酸乙酯/二氯 甲烷)，得到：715.0mg(53％)3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI) m+H＝208.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.78(s，1H)，7.63(d，1H)，7.33(t，1H)， 7.25(与CDCl3重叠，1H)，7.04(s，1H)，3.84(s，3H)，和274.6mg(20％)5-(3-氯苯 基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺。LCMS(ESI)m+H＝208.2；1H NMR(400MHz，CDCl3) δ：7.43(t，1H)，7.38(重叠的二重峰和单峰，2H)，7.27(d，1H)，7.23(s，1H)，3.76(s， 3H)。

N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(环丙基甲基氨基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺

在室温，向5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(0.166g，0.768毫摩尔)于二氯 甲烷(8mL)中的溶液中加入3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(73.6mg，0.354 毫摩尔)和三乙胺(0.20mL，1.4毫摩尔)。1小时后，反应混合物在二氯甲烷和 半饱和的碳酸氢钠水溶液之间分配。有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到5-氯 -N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺，将其不经 纯化即进行下面的反应。LCMS(ESI)m+H＝387.1。

将上面粗制的5-氯-N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酰胺、环丙基甲基胺(0.1mL，1.0毫摩尔)和N，N-二异丙基乙基胺 (0.20mL，1.1毫摩尔)于乙醇(5mL)中的溶液通过微波辐射在120℃加热。30 分钟后，将反应混合物浓缩干燥，所得粗制产物通过反相HPLC纯化并冻干， 得到95.7mg(64％)N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(环丙基甲基氨基) 吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。LCMS(ESI)m+H＝422.1；1H NMR(500MHz， DMSO)δ9.62(s，1H)，8.58(d，J＝7.6，1H)，8.20(s，1H)，8.14(s，2H)，7.75-7.59(m， 2H)，7.46(t，J＝7.8，1H)，7.42-7.34(m，1H)，6.41(d，J＝7.6，1H)，3.90(s，3H)，2.62 -2.54(m，2H)，0.76(s，1H)，0.38-0.24(m，2H)，-0.14(m，2H)。

实施例228

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[3-(2，5-二氯-苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4- 基]-酰胺

5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸

向5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸(10.0g，71.4毫摩尔)于乙醇(100mL)中的搅拌溶 液中加入乙醇钠(17.0g，245毫摩尔)，然后加入1，3-二甲基尿嘧啶(11.0g，78.6 毫摩尔)。然后将反应混合物在氩气气氛中回流搅拌过夜。将混合物倒入冰水 中，用浓HCl将所得溶液酸化至约pH 3-4。将悬浮液搅拌2小时，然后过滤， 得到中间体，将其不经进一步纯化即使用(10.0g，58％收率)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)：8.54(d，J＝9.2Hz，1H)，8.06(s，1H)，6.11(d，J＝7.2Hz，1H)。

5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯

在130℃和氩气气氛中，将5-氧代-4，5-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸 (9.5g，53.1毫摩尔)和二异丙基乙基胺(17.1g，132.6毫摩尔)于三氯氧化磷 (V)(250mL)中的悬浮液加热3.5小时。真空浓缩混合物并使其通过硅胶柱(二 氯甲烷洗脱)，得到5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯，其为固体(8.0g，70％收 率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.72(d，J＝7.2Hz，1H)，8.65(s，1H)，7.17(d， J＝7.6Hz，1H)。

2-溴-1-(2，5-二氯苯基)乙酮

向冰冷却的2’，5’-二氯苯乙酮(1.0g，5.0毫摩尔)于乙酸(10mL)中的溶液中 加入HBr(～1％)，然后加入溴(0.80g，5.0毫摩尔)于乙酸(3mL)中的溶液。将所 得混合物温热至室温并搅拌过夜。将混合物倒入冰水中，然后用饱和碳酸钠 水溶液中和。然后将饱和硫代硫酸钠水溶液加至混合物中。所得混合物用乙 酸乙酯萃取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并 浓缩。通过快速柱色谱法纯化，得到2-溴-1-(2，5-二氯苯基)乙酮，其为油状物 (0.70g，50％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：7.54(d，J＝2.4Hz，1 H)，7.43(m，1 H)，7.40(m，1H)，4.68(s，2H)。

2-(2-(2，5-二氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1，3-二酮

向冰冷却的2-溴-1-(2，5-二氯苯基)乙酮(0.10g，0.37毫摩尔)于N，N-二甲基 甲酰胺(8mL)中的溶液中加入邻苯二甲酰亚氨基钾(76mg，0.41毫摩尔)。将混 合物温热至室温，保持2小时。然后将所得混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃 取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用乙醚重结晶，得到2-(2-(2，5- 二氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1，3-二酮，其为白色固体。(110mg，88％收 率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.92-7.94(m，2H)，7.78-7.80(m，2H)，7.72(m， 1H)，7.45-7.46(m，2H)，5.08(s，2H)。

2-(3-(2，5-二氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1，3- 二酮

将2-(2-(2，5-二氯苯基)-2-氧代乙基)异二氢吲哚-1，3-二酮(0.10g，0.30毫摩 尔)于1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(8mL)中的溶液回流加热2小时。然后浓 缩所得混合物。通过快速柱色谱纯化，得到2-(3-(2，5-二氯苯基)-1-(二甲基氨 基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二氢吲哚-1，3-二酮，其为固体(0.90g，77％收率)。

3-(2，5-二氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺

向冰冷却的2-(3-(2，5-二氯苯基)-1-(二甲基氨基)-3-氧代丙-1-烯-2-基)异二 氢吲哚-1，3-二酮(0.050g，0.13毫摩尔)于乙醇(6mL)中的溶液中加入40％甲肼 水溶液(45mg，0.39毫摩尔)。然后将混合物回流加热3小时。然后浓缩反应混 合物并通过快速柱色谱法纯化，得到3-(2，5-二氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺， 其为固体(12mg，38％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：7.50(d，J＝3.6Hz，1H)， 7.38(d，J＝8.8Hz，1H)，7.28(m，1H)，7.06(s，1H)，3.86(s，3H)，2.98(s，2H)。

5-氯-N-(3-(2，5-二氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰 胺

向冰冷却的3-(2，5-二氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-胺(121mg，0.50毫摩尔) 和三乙胺(101mg，1.00毫摩尔)于二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入5-氯吡唑并 [1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(162mg，1.5毫摩尔)。将反应混合物温热至室温，保持3 小时。然后用饱和氯化钠水溶液洗涤混合物。收集的有机物用无水硫酸钠干 燥，过滤并浓缩。通过制备性HPLC纯化，得到5-氯-N-(3-(2，5-二氯苯基)-1- 甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺，其为固体(110mg，52％收率)。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6：9.34(d，J＝7.6Hz，1H)，9.21(s，1H)，8.69(s，1H)， 8.33(s，1H)，7.71(d，J＝9.2Hz，1H)，7.60(d，J＝9.2Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.36(d， J＝6.8Hz，1H)，3.93(s，3H)。

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[3-(2，5-二氯-苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4- 基]-酰胺

将5-氯-N-(3-(2，5-二氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3- 甲酰胺(110mg，0.26毫摩尔)于用氨饱和的乙醇(4mL)中的溶液通过微波辐射 在95℃加热30分钟。浓缩混合物。通过快速柱色谱法纯化，得到5-氨基- 吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[3-(2，5-二氯-苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基]-酰胺，其为 固体(80mg，77％收率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6：9.37(s，1H)，8.63(d， J＝7.6Hz，1H)，8.14-8.16(m，2H)，7.70(m，1H)，7.52-7.55(m，2H)，6.39(d， J＝8.0Hz，1H)，3.91(s，3H)。

实施例229

5-苯磺酰基氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸异丙基酰胺

将5-氯-N-异丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺(95.5mg，0.40毫摩尔，1.0当 量)、苯磺酰胺(62.0mg，0.40毫摩尔，1.0当量)和碳酸铯(312mg，0.96毫摩尔，2.4 当量)于1，2-二甲氧基乙烷(8mL)中的混合物加热至85℃，保持72小时。真 空除去溶剂，将所得残余物溶于水中。然后通过加入1M HCl水溶液将溶液 的pH调整至约5，用二氯甲烷(2x 30mL)萃取。真空浓缩有机萃取物，通过 硅胶快速柱色谱法纯化残余物(梯度：0至10％甲醇/二氯甲烷)，得到 57.0mg(40％)5-苯磺酰基氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸异丙基酰胺，其为固 体。LCMS(ESI)m+H＝360.3；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.2(s，1H)， 8.97(d，1H)，8.30(s，1H)，8.01(d，2H)，7.64(m，4H)，6.64(m，1H)，4.13(m，1H)， 1.21(d，6H)。

实施例230

5-(6-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(5-甲基-异噁唑 -3-基)-酰胺

5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

向5-氧代-4，5-二氢-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(根据Gavrin，L.K.et al， J.Org.Chem.2007，72，1043-1046制备)(3.00g，14.5毫摩尔，1当量)于三氯氧 化磷(30mL)中的悬浮液中加入二异丙基乙基胺(2.00mL，11.6毫摩尔，0.8当 量)。将混合物加热至90℃，保持4.5小时。冷却后，混合物用冰水小心淬 灭并用二氯甲烷萃取。有机萃取物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸 钠干燥，过滤并真空蒸发，得到固体。研磨(乙醚)，得到2.38g(73％)5-氯吡 唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯，其为固体。LCMS(ESI)m+H＝226.2(单卤化同位 素模式)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.63(d，1H)，8.56(s，1H)，6.99(d，1 H)，4.43(q，2H)，1.42(t，3H)。

5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

向20-mL微波小瓶中装入5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(1.28g，5.67 毫摩尔，1当量)、2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶(1.10g，6.81毫摩尔，1.2当量)、4，5- 二(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨(132mg，0.22毫摩尔，4mol％)、三(二亚苄基丙 酮)二钯(0)(104mg，0.11毫摩尔，2mol％)、叔丁醇钠(652mg，6.81毫摩尔，1.2 当量)和甲苯(12mL)。将所述小瓶密封并对内容物脱气，用氩气吹洗，然后在 微波反应器中在140℃加热20分钟。冷却后，混合物用乙酸乙酯稀释并用 垫过滤。滤液用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过 滤并真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化所得残余物(梯度：0至20％乙酸乙 酯/二氯甲烷)，得到344mg(17％)5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基)吡唑并[1，5-a] 嘧啶-3-甲酸乙酯，其为橙色固体。LCMS(ESI)m+H＝352.1；1H NMR(300MHz， DMSO-d6)δ：11.06(s，1H)，9.16(d，1H)，8.94(d，1H)，8.39(s，1H)， 8.10(t，1H)，7.57(d，1H)，7.05(d，1H)，4.31(q，2H)，1.40(t，3H)。

5-(6-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸

将5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(344mg， 0.98毫摩尔，1.0当量)、2M氢氧化钠水溶液(1.50mL，3.0当量)和乙醇(15mL) 的混合物回流加热5小时。冷却后，过滤收集析出物，用乙醇洗涤并风干。 将所得固体悬浮在1.25M HCl/甲醇(16mL)中，然后真空浓缩。研磨(乙醚)残 余物，得到355mg(定量收率)5-(6-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧 啶-3-甲酸，将其不经进一步纯化即使用。LCMS(ESI)m+H＝324.2；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：11.03(s，1H)，9.01(d，1H)，8.95(d，1H)， 8.35(s，1H)，8.10-8.02(m，1H)，7.54(d，1H)，7.16(d，1H)。

5-(6-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(5-甲基-异噁唑 -3-基)-酰胺

在0℃，将二异丙基乙基胺(101mg，0.78毫摩尔，0.8当量)加至5-(6-三氟 甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(0.98毫摩尔，1.0当量)于三氯 氧化磷(6mL)中的悬浮液中。然后将混合物加热至90℃，保持20小时。冷 却后，真空除去溶剂，将残余物用二氯甲烷共沸，然后浓缩，得到粗制酰氯， 其为固体。将该固体物质的一半(推测为0.49毫摩尔)直接用在下一步中。

将酰氯(0.49毫摩尔，1.0当量)和5-氨基-3，4-二甲基-1，2-异噁唑(66.0mg， 0.59毫摩尔，1.2当量)于吡啶(4mL)中的混合物加热至60℃，保持90分钟。 冷却后，真空除去溶剂，研磨(水)分离的残余物并再次研磨(甲醇)，真空干燥 所得固体，得到56.3mg(28％)5-(6-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-吡唑并[1，5-a]嘧 啶-3-甲酸(5-甲基-异噁唑-3-基)-酰胺。LCMS(ESI)m+H＝418.1；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：11.12(s，1H)，10.04(s，1H)，9.04(d，1H)，8.50(s，1H)， 8.41(d，1H)，8.02(t，1H)，7.58(d，1H)，7.30(d，1H)，2.19(s，3H)，1.88(s， 3H)。

实施例231

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺

3-氧代-3-邻甲苯基-丙酸乙酯

在环境温度，向氢化钠(60％分散于矿物油中，7.20g，180毫摩尔，3.6当量) 于甲苯(300mL)中的悬浮液中缓慢加入碳酸二乙酯(23.6g，200毫摩尔，4.0当 量)。搅拌15分钟后，加入2-甲基苯乙酮(6.70g，50.0毫摩尔，1.0当量)，将所 得混合物回流加热18小时，然后历时10分钟滴加冰醋酸(15mL)，接着小心 加入冰冷却的水(150mL)。所得混合物用乙酸乙酯萃取，合并的有机萃取物用 硫酸镁干燥并真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(梯度：0-5％乙酸 乙酯/戊烷)，得到7.94g(77％)3-氧代-3-邻甲苯基-丙酸乙酯，其为油状物(酮/ 烯醇互变异构体的4∶1混合物)。1H NMR(酮互变异构体)(400MHz，CDCl3)δ： 7.66(s，1H)，7.41(s，1H)，7.30-7.25(m，2H)，4.22-4.15(m，2H)， 3.96-3.94(m，2H)，2.55(s，3H)，1.28-1.22(m，3H)。

2-溴-3-氧代-3-邻甲苯基-丙酸乙酯

在环境温度，将溴(1.65g，10.3毫摩尔，1.03当量)滴加至3-氧代-3-邻甲苯 基-丙酸乙酯(2.06g，10.0毫摩尔，1.0当量)于1，4-二噁烷(25mL)中的搅拌溶液 中。将混合物搅拌1小时，然后用叔丁基甲基醚(50mL)稀释。所得溶液依次 用水、碳酸钾水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤。收集的有机物用硫酸镁干燥， 过滤并真空浓缩，得到2.74g(96％)2-溴-3-氧代-3-邻甲苯基-丙酸乙酯，其为 深棕色残余物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.66(d，1H)，7.46-7.37(m，1H)， 7.28(m，2H)，5.62(s，1H)，4.29-4.22(q，2H)，2.52(s，3H)，1.28-1.19(t，3 H)。

2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸乙酯

将2-溴-3-氧代-3-邻甲苯基-丙酸乙酯(2.74g，9.60毫摩尔，1.0当量)和硫代 乙酰胺(0.76g，10.1毫摩尔，1.05当量)于乙醇(30mL)中的搅拌混合物回流加热 4小时。过滤冷却的混合物并真空浓缩。残余物在乙酸乙酯和水之间分配， 分离有机相，然后用饱和氯化钠水溶液洗涤。收集的有机物用硫酸镁干燥， 过滤并真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化所得残余物(梯度：0-20％乙酸乙 酯/戊烷)，得到0.84g(34％)2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸乙酯，其为油状物。 LCMS(ESI)m+H＝261.9；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.31-7.18(m，4H)， 4.16(q，2H)，2.76(s，3H)，2.18(s，3H)，1.14(t，3H)。

2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸

将2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸乙酯(0.84g，3.20毫摩尔，1.0当量)和氢 氧化钾(0.36g，6.40毫摩尔，2.0当量)于50％甲醇水溶液(10mL)中的混合物加 热至50℃，保持5小时。浓缩混合物，残余物用水稀释并通过加入6N HCl 溶液酸化至约pH 1。所得溶液用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的萃取物用硫酸镁 干燥，过滤并真空浓缩，得到0.61g(81％)2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸， 其为固体。LCMS(ESI)m+H＝234.0；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ： 7.32-7.17(m，4H)，2.75(s，3H)，2.17(s，3H)。

(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-氨基甲酸叔丁酯

将2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-甲酸(300mg，1.29毫摩尔，1.0当量)、二苯 基磷酰基叠氮化物(DPPA)(354mg，1.29毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(130mg， 1.29毫摩尔，1.0当量)于叔丁醇(10mL)中的混合物加热至85℃，保持4小时。 冷却后，混合物用水稀释并用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有机萃取物用硫酸 镁干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(梯度：2-25％乙 酸乙酯/戊烷)，得到352mg(90％)(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-氨基甲酸叔丁 酯，其为油状物。LCMS(ESI)m+H＝305.1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ： 7.33-7.24(m，4H)，6.58(s，1H)，2.64(s，3H)，2.24(s，3H)，1.48(s，9H)。

2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基胺

在环境温度，将(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-氨基甲酸叔丁酯(340mg， 1.12毫摩尔，1.0当量)于二氯甲烷(10mL)中的溶液用三氟乙酸(0.7mL，9.00毫 摩尔，8.0当量)处理24小时。真空浓缩混合物，将所得残余物溶于二氯甲烷 中，依次用10％碳酸钾水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤。收集的有机物用硫 酸镁干燥并过滤。使滤液通过SCX-2柱(用二氯甲烷、二氯甲烷/甲 醇(1∶1)和2M氨的甲醇溶液洗脱)，得到62.0mg(27％)2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑 -5-基胺，其为棕色残余物。LCMS(ESI)m+H＝205.0；1H NMR(400MHz，CDCl- 3)δ：7.33-7.18(m，4H)，3.54-3.45(br，2H)，2.58(s，3H)，2.29(s，3H)。

5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺

向冰冷却的2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基胺(55.0mg，0.27毫摩尔，1.0当 量)和二异丙基乙基胺(52.0mg，0.41毫摩尔，1.5当量)于二氯甲烷(10mL)中的 溶液中加入5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(58.0mg，0.27毫摩尔，1.0当量)于 二氯甲烷(5mL)中的溶液。将反应混合物温热至环境温度并搅拌过夜。混合物 用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶 快速柱色谱法纯化(梯度：0-3％甲醇/二氯甲烷)，得到74.0mg(73％)5-氯-吡唑并 [1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺，其为固体。LCMS(ESI) m+H＝384.0(单氯化同位素模式)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：9.73(s，1H)， 8.70(s，1H)，8.63(d，1H)，7.44-7.30(m，4H)，6.93(d，1H)，2.72(s，3H)， 2.31(s，3H)。

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺

将5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺 (74.0mg，0.19毫摩尔，1.0当量)和2M氨的丙-2-醇溶液(3mL)的混合物密封在 微波反应器中并在120℃加热1小时。真空除去溶剂，通过硅胶快速柱色谱 法纯化所得残余物(梯度：0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到11.0mg(16％)5-氨基-吡唑 并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(2-甲基-4-邻甲苯基-噻唑-5-基)-酰胺。LCMS(ESI) m+H＝365.1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：10.35(s，1H)，8.66(d，1H)， 8.23(s，1H)，7.47-7.37(m，4H)，6.38(d，1H)，2.61(s，3H)，2.20(s，3H)。

实施例232

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰 胺

3-二甲基氨基-2-(2-三氟甲基-苯甲酰基)-丙烯酸乙酯

将3-氧代-3-(2-三氟甲基-苯基)-丙酸乙酯(按照与实施例231所述相似的 操作制备)(3.14g，12.1毫摩尔，1.0当量)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺 (5.60mL，42.2毫摩尔，3.5当量)于N，N-二甲基甲酰胺中的溶液回流加热5小 时。冷却后，将混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机相，依次用水(4x) 和饱和氯化钠水溶液洗涤。收集的有机物用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩， 得到3.20g(83％)3-二甲基氨基-2-(2-三氟甲基-苯甲酰基)-丙烯酸乙酯，其为橙 色蜡状固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.86(s，1H)，7.67-7.64(m，1H)， 7.51-7.41(m，2H)，7.35(d，1H)，3.81(q，2H)，3.42-3.17(m，3H)，3.11-2.93(m，3 H)，0.78-0.69(t，3H)。

5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-甲酸乙酯

将3-二甲基氨基-2-(2-三氟甲基-苯甲酰基)-丙烯酸乙酯(3.10g，9.80毫摩 尔，1.0当量)和羟基胺盐酸盐(683mg，9.80毫摩尔，1.0当量)于甲醇(25mL)中的 混合物回流加热90分钟。冷却后，将混合物在水和乙酸乙酯之间分配并分离。 水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物用饱和氯化钠水溶液洗涤，用无水 硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。经硅胶快速柱色谱纯化(梯度：0-30％乙酸乙酯 /环己烷)，得到1.43g(51％)5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-甲酸乙酯。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.38(s，1H)，7.69(d，1H)，7.61-7.47(m，2H)，7.27(d， 1H)，3.93(br，2H)，0.87(br，3H)。

[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-氨基甲酸叔丁酯

将5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-甲酸乙酯(1.43g，5.01毫摩尔，1.0当量)、 6M HCl水溶液(34mL)和乙酸(20mL)的混合物回流加热5.5小时。冷却后，混 合物在水和乙酸乙酯之间分配并分离。有机相依次用水和饱和氯化钠水溶液 洗涤，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到745mg(58％)粗制的5-(2-三氟甲 基-苯基)-异噁唑-4-甲酸，将其不经纯化即使用。

将5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-甲酸(745mg，2.90毫摩尔，1.0当量)和亚 硫酰氯(8mL)的混合物回流加热3小时。将混合物冷却至室温并真空浓缩。将 残余物溶于丙酮(8mL)中，用冰浴冷却并加入叠氮化钠(339mg，5.20毫摩尔， 1.8当量)。将混合物在该温度搅拌1小时，然后在环境温度搅拌1小时。反 应混合物用乙酸乙酯稀释，所得溶液依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。收 集的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物溶于叔丁醇 (8mL)中，回流加热16小时。真空浓缩反应混合物。通过硅胶快速柱色谱法 纯化(梯度：0-20％乙酸乙酯/环己烷)，得到345mg(36％)[5-(2-三氟甲基-苯基)- 异噁唑-4-基]-氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.89(s，1H)， 7.88-7.84(m，1H)，7.72-7.66(m，2H)，7.54-7.49(m，1H)，5.98(s，1H)，1.48(s，9 H)。

5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰胺

将[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-氨基甲酸叔丁酯(345mg，1.05毫摩 尔，1.0当量)、4M HCl的二噁烷溶液(2mL)于1，4-二噁烷(3mL)中的混合物在 40℃加热20小时。真空浓缩混合物，得到残余物，将所述残余物溶于二氯 甲烷(12mL)中，用二异丙基乙基胺(271mg，2.10毫摩尔，2.0当量)处理。用冰 浴冷却混合物，滴加5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(1.05毫摩尔，1.0当量) 于二氯甲烷(6mL)中的溶液。将所得混合物在环境温度搅拌18小时。溶液依 次用1M HCl水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤。收集的有机物用无水 硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。研磨(甲醇)残余物，分离的固体用甲醇和乙 醚洗涤，然后真空干燥，得到367mg(86％)5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2- 三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰胺。LCMS(ESI)m+H＝408.0(mono Cl)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.50(s，1H)，9.35(d，1H)，9.22(s，1H)，8.71(s，1 H)，8.03(d，1H)，7.97-7.82(m，3H)，7.38(d，1H)。

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰 胺

将5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰 胺(200mg，0.49毫摩尔，1.0当量)和2M氨的丙-2-醇溶液(4mL)的混合物密封在 微波反应器中并在120℃加热40分钟。真空除去溶剂，通过硅胶快速柱色 谱法纯化所得残余物(梯度：0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到58.6mg(31％)5-氨基- 吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[5-(2-三氟甲基-苯基)-异噁唑-4-基]-酰胺。LCMS(ESI) m+H＝389.1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.60(s，1H)，9.07(s，1H)， 8.63(d，1H)，8.18(s，1H)，7.99(d，1H)，7.95-7.77(m，3H)，7.70-6.60(br，2H)， 6.39(d，1H)。

实施例233

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰胺

2-甲基-苯甲醛肟

邻甲苯甲醛(5.00g，41.6毫摩尔，1.0当量)、羟基胺盐酸盐(3.18g，45.8毫 摩尔，1.1当量)和吡啶(3.29g，41.6毫摩尔，1.0当量)于乙醇(100mL)中的混合物 在环境温度搅拌2小时。通过加入1M HCl水溶液将混合物的pH调整至约1。 所得溶液用二氯甲烷萃取。收集的有机萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真 空浓缩，得到油状物(6.30g)，将其直接用于下一步骤中。LCMS(ESI) m+H+MeOH＝168.0；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.42(s，1H)，7.70-7.63(d，1 H)，7.29-7.16(m，3H)，2.43(s，3H)。

N-羟基-2-甲基苯亚氨甲基氯

在环境温度，将N-氯代琥珀酰亚胺(2.22g，16.6毫摩尔，1.0当量)加至2- 甲基-苯甲醛肟(2.25g，16.6毫摩尔，1.0当量)于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的 搅拌溶液中。继续搅拌2小时，并淬灭反应(冰水)。所得混合物用乙酸乙酯 萃取。合并的有机萃取物依次用水(6x)和饱和氯化钠水溶液(2x)洗涤。然后用 无水硫酸钠干燥有机物，过滤并真空浓缩，得到2.07g(74％)N-羟基-2-甲基苯 亚氨甲基氯，其为绿色油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.14(s，1H)， 7.48-7.44(m，1H)，7.37-7.20(m，3H)，2.43(s，3H)。

3-邻甲苯基-异噁唑-4-甲酸乙酯

历时15分钟，向N-羟基-2-甲基苯亚氨甲基氯(2.07g，12.2毫摩尔，1.0当 量)于乙醚(15mL)中的搅拌溶液中加入3-吡咯烷-1-基-丙烯酸乙酯(根据美国 专利4,187,099中描述的操作制备)(2.06g，12.2毫摩尔，1.0当量)和三乙胺 (1.48g，12.2毫摩尔，1.0当量)于乙醚(30mL)中的溶液。将所得混合物在环境温 度搅拌16小时，在水和乙醚之间分配并分离。水相用乙醚(2x)萃取，合并的 乙醚萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯 化(梯度：0至20％乙酸乙酯/环己烷)，得到1.32g(47％)3-邻甲苯基-异噁唑-4- 甲酸乙酯。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：9.02(s，1H)，7.39-7.34(m，1H)， 7.32-7.24(m，3H)，4.19(q，2H)，2.23(s，3H)，1.17(t，3H)。

(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-氨基甲酸叔丁酯

将3-邻甲苯基-异噁唑-4-甲酸乙酯(1.32g，5.71毫摩尔，1.0当量)、6M HCl 水溶液(40mL)和乙酸(24mL)的溶液回流加热5小时。冷却后，混合物在水和 乙酸乙酯之间分配并分离。有机相依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。收集 的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到930mg(80％)粗制的3- 邻甲苯基-异噁唑-4-甲酸，将其不经纯化即使用。

将3-邻甲苯基-异噁唑-4-甲酸(930mg，4.58毫摩尔，1.0当量)、二苯基磷酰 基叠氮化物(1.26g，4.58毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(463mg，4.58毫摩尔，1.0当 量)于叔丁醇(40mL)中的混合物加热至85℃，保持16小时。真空浓缩混合物， 将残余物吸收在乙酸乙酯中并依次用1M HCl水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、 水和饱和氯化钠水溶液洗涤。收集的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空 浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余物(梯度：0至15％乙酸乙酯/环己烷)， 得到943mg(75％)(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI) m+H＝275.0；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.92(s，1H)，7.47-7.29(m，4H)， 5.87(s，1H)，2.29(s，3H)，1.48(s，9H)。

5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰胺

将(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.82毫摩尔，1.0当 量)、4M HCl的二噁烷溶液(4mL)于1，4-二噁烷(5mL)中的混合物在环境温度 搅拌22小时，并在40℃搅拌1小时。真空浓缩混合物，得到残余物，将所 述残余物溶于二氯甲烷(15mL)中并用二异丙基乙基胺(523mg，4.05毫摩尔， 2.2当量)处理。用冰浴冷却混合物并滴加5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯 (1.82毫摩尔，1.0当量)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。加入后，将反应混合物 温热至室温。65小时后，反应溶液依次用1M HCl水溶液、饱和碳酸氢钠水 溶液水和饱和氯化钠水溶液洗涤。有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓 缩。研磨(甲醇)残余物，得到444mg(70％)5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3- 邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰胺。LCMS(ESI)m+H＝354.2(单Cl)；1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：9.47(s，1H)，9.36(d，1H)，9.11(s，1H)，8.72(s，1H)， 7.53-7.40(m，4H)，7.37(d，1H)，2.31(s，3H)。

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰胺

将5-氯-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰胺(200mg， 0.57毫摩尔，1.0当量)和2M氨于丙-2-醇中(3mL)的混合物密封在小瓶中在65 ℃加热18小时，然后在微波反应器中在100℃加热30分钟。冷却后，过 滤分离所得析出物。固体依次用丙-2-醇和乙醚洗涤，在55℃真空干燥，得 到153mg(80％)5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸(3-邻甲苯基-异噁唑-4-基)-酰 胺，其为固体。LCMS(ESI)m+H＝335.1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ： 9.51(s，1H)，9.34(s，1H)，8.65(d，1H)，8.21(s，1H)，7.58-7.44(m，4H)，7.01(br，1 H)，6.39(d，1H)，2.27(s，3H)。

实施例234

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[2-(3-三氟甲基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-酰 胺

5-氨基-1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

向2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(0.81g，4.8毫摩尔)于乙醇(50mL)中的溶液 中加入3-(三氟甲基)苯基肼(0.85g，4.8毫摩尔)。氮气气氛中，使所得反应混 合物回流24小时。将混合物冷却至室温并减压浓缩，得到0.94g(收率：66％)， 将其不经进一步纯化即使用。MS(ESI)m/z：300.3

1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-5-胺

将5-氨基-1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.9g，3毫摩尔)于用 HCl饱和的二噁烷(20mL)中的溶液在密封管中加热至150℃，保持5小时。 然后冷却反应混合物并真空浓缩。残余物用水稀释，水溶液用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所得残余物通 过快速柱色谱法纯化(5∶1乙酸乙酯/石油醚)，得到产物(430mg，63％)。MS(ESI) m/z：228.1

5-氯-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺

向1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-5-胺(200mg，0.88毫摩尔)于二氯甲烷 (30mL)中的搅拌溶液中加入5-氯吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰氯(215mg，1.0毫摩 尔)和二异丙基乙基胺(130mg，1.0毫摩尔)。将混合物加热至50℃，过夜。冷 却至室温后，浓缩混合物，得到粗制的5-氯-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡 唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺(210mg，收率为58％)，将其不经进一步 纯化即用于下一步骤。MS(ESI)m/z：407.2

5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[2-(3-三氟甲基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-酰 胺

将5-氯-N-(1-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰 胺(210mg，0.52毫摩尔)于用氨饱和的乙醇(20mL)中的溶液在密封管中加热至 100℃，过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂，所得残余物通过制备性HPLC 纯化，得到5-氨基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酸[2-(3-三氟甲基-苯基)-2H-吡唑-3- 基]-酰胺(8mg，收率：4％)。1H NMR(DMSO，400MHz)：δ9.94(s，1H)，8.62(d， J＝7.6Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.49-7.69(m，8H)，6.53(s，1H)，6.37(d，J＝7.6Hz，1 H).MS(ESI)m/z：388.1

根据上面的方法制备表2所示的实施例235-452。

表2

对实施例1-452的化合物抑制JAK激酶活性的能力进行测试。发现实施 例1-452的化合物在JAK激酶活性测定(例如，参见实施例A-C)中具有小于 约1μM的Ki。因此，本发明化合物用作JAK激酶抑制剂。

对于在上面测定(实施例A-C)中进行测试的本发明一些化合物，下面的 表3显示了酶活性数据(Ki)。

表3

  实施例   JAK1   JAK2i   JAK3   TYK2i   240   0.036μM   0.0032μM   0.0951μM   0.0624μM   231   0.0152μM   0.0018μM   0.0124μM   0.0438μM   225   0.0029μM   0.0003μM   0.0029μM   0.0073μM   226   0.0074μM   0.0005μM   0.0157μM   0.0328μM   248   0.0028μM   0.0001μM   0.0017μM   0.0041μM   250   0.0284μM   0.0020μM   0.0556μM   0.0361μM   277   0.0176μM   0.0009μM   0.0254μM   0.0435μM   343   0.0299μM   0.0042μM   0.0286μM   0.0976μM   297   0.0466μM   0.0016μM   0.0397μM   0.152μM   299   0.0287μM   0.0008μM   0.0145μM   0.0509μM

对于在上面细胞测定(实施例D)中进行测试的本发明化合物，下面的表4 显示了一些细胞药理活性数据(EC50)。

表4

尽管是以一定的具体程度描述和阐明了本发明，但是应理解的是，本申 请的公开内容仅为示例性的，且本领域技术人员可诉诸各部分之间的组合和 排列的多种变化而不违背本发明的精神和权利要求所限定的保护范围。

本申请参考2008年10月31日提交的美国临时专利申请61/110,497，为 了所有目的，将美国临时专利申请61/110,497整体并入本申请作为参考。