优先权
本申请要求2008年10月30日提交的美国临时申请61/109,801的权益， 将其全部内容并入本申请作为参考。
技术领域
本发明涉及用于抑制PBK活性的化合物、其制备方法以及含有所述化 合物作为活性成分的药物组合物。
背景技术
之前的研究揭示PDZ结合激酶(PBK)是一种与双特异性促分裂原活化 蛋白激酶激酶(MAPKK)家族有关的丝氨酸/苏氨酸激酶(Abe Y，et al.，J Biol Chem.275：21525-21531，2000，Gaudet S，et al.，Proc Naftl Acad Sci.97： 5167-5172，2000，和Matsumoto S，et al.，Biochem Biophys Res Commun.325： 997-1004，2004)。PBK也被指出牵涉有丝分裂，这一点通过其在高度增殖性 精母细胞中的重要作用得到证明(Gaudet S，et al.，Proc Naftl Acad Sci.97： 5167-5172，2000和Fujibuchi T，et al.，Dev Growth Differ.47：637-44，2005)。事 实上，在睾丸中观察到PBK的大量表达，而在其它正常器官中几乎没有检 测到PBK表达(Park JH，et al.，Cancer Res.66：9186-95，2006)。PBK调节细胞 周期进展。据此，在临床乳腺癌样品(Park JH，et al.，Cancer Res.66：9186-95， 2006)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)(Simons-Evelyn M，et al.，Blood Cells Mol Dis.27：825-829，2001)和各种血液学恶性肿瘤(Nandi A，et al.， Blood Cells Mol Dis.32：240-5，2004)中检测到PBK的显著过表达。
对睾丸进行的免疫组织化学分析揭示PBK蛋白表达在生精小管的外区 周围，此处发生精生殖细胞(sperm germ cell)的重复有丝分裂和随后发生减数 分裂(Fujibuchi T，et al.，Dev Growth Differ.47：637-44，2005)。具体而言，在 前期和中期，在乳腺癌细胞内的凝聚染色体的周围检测到PBK的亚细胞定 位(Park JH，et al.，Cancer Res.66：9186-95，2006)。此外，用基因特异性siRNA 击倒PBK表达引起胞质分裂的功能障碍，并且随后导致癌细胞的凋亡(Park JH，et al.，Cancer Res.66：9186-95，2006)。这些表明在睾丸细胞和癌细胞中 PBK对有丝分裂起重要的作用。
综上所述，PBK特异性抑制剂可用作适用于宽癌症谱的药物。由于下 述原因，PBK是癌症治疗的优异靶标：i)几乎在所有正常器官中没有表达(除 了睾丸)；ii)在临床癌症样品中常常过表达；iii)与针对细胞有丝分裂的基本 机能相关的丝氨酸/苏氨酸激酶。
本发明人致力于开发有效的PBK抑制剂，并且已经发现7-羟基-苯并咪 唑-4-基-甲酮衍生物可选择性抑制PBK的活性。
发明内容
因此，本发明的一个目标为提供具有抗PBK的高抑制活性的PBK抑制 剂。
本发明的另一个目标为提供制备所述抑制剂的方法。
本发明的又一个目标为提供包含所述化合物、其药用盐、水合物、溶剂 化物或异构体的药物组合物。
根据本发明的一个方面，本发明提供了式(I)的化合物及其药用盐、水合 物、溶剂化物或者异构体：
其中
X为苯基、噻吩-2-基、呋喃-2-基、环丙基、环戊基、苯基C1-C6烷基、 噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基、环戊基C1-C6烷基或者二环[2.2.1]庚-2-基；
所述苯基、噻吩-2-基、呋喃-2-基、环丙基、环戊基、苯基C1-C6烷基、 噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基或者环戊基 C1-C6烷基任选被1-3个各自独立选自基团A的取代基取代；
L为-NH-或者单键；
M选自C3-C10环烷基或者3-10元饱和杂环基；
所述C3-C10环烷基和3-8元饱和杂环基任选被1-3个各自独立选自基团 A的取代基取代；
其中基团A包括羟基、氧代、硝基、氰基、氨基、C1-C6烷基氨基、C3-C10环烷基氨基、酰胺基团、卤素、氨磺酰基、三氟甲基、对甲苯磺酰基氨基、 C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰 基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰基氨基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、 磷酰基、羰基、羧基和3-8元饱和杂环基；并且
a为0-5的整数。
具体实施方案
定义
在本发明中，“烷基”是指不含有任何杂原子或者不饱和碳-碳键的直链 或者支链烃基。“C1-C6烷基”是指具有1-6个碳原子的烷基。“C1-C4烷基”是 指具有1-4个碳原子的烷基。
“C1-C6烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、2-甲基 -1-丙基、2-甲基-2-丙基(叔丁基(1，1-二甲基-乙基)、1-丁基、2-丁基、1-戊基、 2-戊基、3-戊基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2- 丁基、2，2-二甲基-1-丙基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-1-戊基、3-甲基 -1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2- 甲基-3-戊基、3-甲基-3-戊基、2，3-二甲基-1-丁基、3，3-二甲基-1-丁基、2，2- 二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、3，3-二甲基-2-丁基和2，3-二甲基-2-丁基。
在本发明中，“苯基C1-C6烷基、噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基或者环戊基C1-C6烷基”是指与苯基、噻吩-2-基、呋 喃-2-基、环丙基或者环戊基基团连接的C1-C6烷基。在一种实施方案中，苯 基C1-C6烷基、噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基或者环戊基C1-C6烷基任选被1-3个各自独立选自上面提及的基团A的 取代基取代。所述取代可发生在所述基团的苯基、噻吩-2-基、呋喃-2-基、 环丙基或者环戊基部分上，或者发生在所述基团的C1-C6烷基部分上，或者 可同时发生在所述基团的两个部分上。
“苯基C1-C6烷基、噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基 C1-C6烷基或者环戊基C1-C6烷基”的实例包括但不限于苯基甲基、苯基乙基、 苯基-1-丙基、苯基-2-丙基、苯基-正丁基、苯基-仲丁基、苯基-叔丁基、苯 基-(2-乙基)丁基、噻吩-2-基甲基、噻吩-2-基乙基、噻吩-2-基-丙-1-基、噻吩 -2-基-丙-2-基、噻吩-2-基-正丁基、噻吩-2-基-仲丁基、噻吩-2-基-叔丁基、噻 吩-2-基-(2-乙基)丁基、呋喃-2-基甲基、呋喃-2-基乙基、呋喃-2-基-丙-1-基、 呋喃-2-基-丙-2-基、呋喃-2-基-正丁基、呋喃-2-基-仲丁基、呋喃-2-基-叔丁基、 呋喃-2-基-(2-乙基)丁基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丙基-丙-1-基、环丙 基-丙-2-基、环丙基-正丁基、环丙基-仲丁基、环丙基-叔丁基、环丙基-(2- 乙基)丁基、环戊基甲基、环戊基乙基、环戊基-丙-1-基、环戊基-丙-2-基、 环戊基-正丁基、环戊基-仲丁基、环戊基-叔丁基和环戊基-(2-乙基)丁基。
在本发明中，“烯基”是指含有一个或多个不饱和碳-碳键且不含有任何 杂原子的直链或者支链烃基。“C2-C6烯基”是指具有2-6个碳原子的烯基。
“C2-C6烯基”的实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、3-丙烯 基、2-甲基-丙-1-烯-1-基(2-甲基-1-丙烯基)、2-甲基-丙-1-烯-3-基(2-甲基-2- 丙烯基)、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、丁-1-烯-3-基、丁-2-烯-1-基、丁-2- 烯-2-基、戊-1-烯-1-基、戊-1-烯-2-基、戊-1-烯-3-基、戊-1-烯-4-基、戊-1-烯 -5-基、戊-2-烯-1-基、戊-2-烯-2-基、戊-2-烯-3-基(1-乙基-1-丙烯基)、戊-2- 烯-4-基、戊-2-烯-5-基、2-甲基-丁-1-烯-1-基、2-甲基-丁-1-烯-2-基、2-甲基- 丁-1-烯-3-基、2-甲基-丁-1-烯-4-基、2-甲基-丁-2-烯-1-基、2-甲基-丁-2-烯-3- 基、2-甲基-丁-2-烯-4-基、3-甲基-丁-1-烯-1-基、3-甲基-丁-1-烯-2-基、3-甲 基-丁-1-烯-3-基、3-甲基-丁-1-烯-4-基、2，2-二甲基-丙-1-烯-1-基、2，2-二甲基 -丙-1-烯-2-基、己-1-烯-1-基、己-1-烯-2-基、己-1-烯-3-基、己-1-烯-4-基、己 -1-烯-5-基、己-1-烯-6-基、己-2-烯-1-基、己-2-烯-2-基、己-2-烯-3-基、己-2- 烯-4-基、己-2-烯-5-基、己-2-烯-6-基、己-3-烯-1-基、己-3-烯-2-基、己-3-烯 -3-基、2-甲基-戊-1-烯-1-基、2-甲基-戊-1-烯-3-基、2-甲基-戊-1-烯-4-基、2- 甲基-戊-1-烯-5-基、2-甲基-戊-2-烯-1-基、2-甲基-戊-2-烯-3-基、2-甲基-戊-2- 烯-4-基、2-甲基-戊-2-烯-5-基、3-甲基-戊-1-烯-1-基、3-甲基-戊-1-烯-2-基、 3-甲基-戊-1-烯-3-基、3-甲基-戊-1-烯-4-基、3-甲基-戊-1-烯-5-基、3-甲基-戊 -2-烯-1-基、3-甲基-戊-2-烯-2-基、3-甲基-戊-2-烯-4-基、3-甲基-戊-2-烯-5-基、 4-甲基-戊-1-烯-1-基、4-甲基-戊-1-烯-2-基、4-甲基-戊-1-烯-3-基、4-甲基-戊 -1-烯-4-基、4-甲基-戊-1-烯-5-基、4-甲基-戊-2-烯-1-基、4-甲基-戊-2-烯-2-基、 4-甲基-戊-2-烯-3-基、4-甲基-戊-2-烯-4-基、4-甲基-戊-2-烯-5-基、2，3-二甲基 -丁-1-烯-1-基、2，3-二甲基-丁-1-烯-3-基、2，3-二甲基-丁-1-烯-4-基、2，3-二甲 基-丁-2-烯-1-基、3，3-二甲基-丁-1-烯-1-基、3，3-二甲基-丁-1-烯-2-基、3，3-二 甲基-丁-1-烯-4-基、2-乙基-丁-1-烯-1-基、2-乙基-丁-1-烯-3-基、2-乙基-丁-1- 烯-4-基、3-乙基-丁-1-烯-1-基、3-乙基-丁-1-烯-2-基、3-乙基-丁-1-烯-3-基、 3-乙基-丁-1-烯-4-基、2-乙基-丁-2-烯-1-基、2-乙基-丁-2-烯-3-基和2-乙基-丁 -2-烯-4-基。
在本发明中，“炔基”是指含有至少一个碳-碳叁键且不含有任何杂原子 的直链或者支链烃基。“C2-C6炔基”是指具有2-6个碳原子的炔基。
“C2-C6炔基”的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、3-丙炔 基、2-甲基-丙-1-炔-1-基、2-甲基-丙-1-炔-3-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-2-基、 丁-1-炔-3-基、丁-2-炔-1-基、丁-2-炔-2-基、戊-1-炔-1-基、戊-1-炔-2-基、戊 -1-炔-3-基、戊-1-炔-4-基、戊-1-炔-5-基、戊-2-炔-1-基、戊-2-炔-2-基、戊-2- 炔-3-基、戊-2-炔-4-基、戊-2-炔-5-基、2-甲基-丁-1-炔-1-基、2-甲基-丁-1-炔 -2-基、2-甲基-丁-1-炔-3-基、2-甲基-丁-1-炔-4-基、2-甲基-丁-2-炔-1-基、2- 甲基-丁-2-炔-3-基、2-甲基-丁-2-炔-4-基、3-甲基-丁-1-炔-1-基、3-甲基-丁-1- 炔-2-基、3-甲基-丁-1-炔-3-基、3-甲基-丁-1-炔-4-基、2，2-二甲基-丙-1-炔-1- 基、2，2-二甲基-丙-1-炔-2-基、己-1-炔-1-基、己-1-炔-2-基、己-1-炔-3-基、己 -1-炔-4-基、己-1-炔-5-基、己-1-炔-6-基、己-2-炔-1-基、己-2-炔-2-基、己-2- 炔-3-基、己-2-炔-4-基、己-2-炔-5-基、己-2-炔-6-基、己-3-炔-1-基、己-3-炔 -2-基、己-3-炔-3-基、2-甲基-戊-1-炔-1-基、2-甲基-戊-1-炔-3-基、2-甲基-戊 -1-炔-4-基、2-甲基-戊-1-炔-5-基、2-甲基-戊-2-炔-1-基、2-甲基-戊-2-炔-3-基、 2-甲基-戊-2-炔-4-基、2-甲基-戊-2-炔-5-基、3-甲基-戊-1-炔-1-基、3-甲基-戊 -1-炔-2-基、3-甲基-戊-1-炔-3-基、3-甲基-戊-1-炔-4-基、3-甲基-戊-1-炔-5-基、 3-甲基-戊-2-炔-1-基、3-甲基-戊-2-炔-2-基、3-甲基-戊-2-炔-4-基、3-甲基-戊 -2-炔-5-基、4-甲基-戊-1-炔-1-基、4-甲基-戊-1-炔-2-基、4-甲基-戊-1-炔-3-基、 4-甲基-戊-1-炔-4-基、4-甲基-戊-1-炔-5-基、4-甲基-戊-2-炔-1-基、4-甲基-戊 -2-炔-2-基、4-甲基-戊-2-炔-3-基、4-甲基-戊-2-炔-4-基、4-甲基-戊-2-炔-5-基、 2，3-二甲基-丁-1-炔-1-基、2，3-二甲基-丁-1-炔-3-基、2，3-二甲基-丁-1-炔-4-基、 2，3-二甲基-丁-2-炔-1-基、3，3-二甲基-丁-1-炔-1-基、3，3-二甲基-丁-1-炔-2-基、 3，3-二甲基-丁-1-炔-4-基、2-乙基-丁-1-炔-1-基、2-乙基-丁-1-炔-3-基、2-乙基 -丁-1-炔-4-基、3-乙基-丁-1-炔-1-基、3-乙基-丁-1-炔-2-基、3-乙基-丁-1-炔-3- 基、3-乙基-丁-1-炔-4-基、2-乙基-丁-2-炔-1-基、2-乙基-丁-2-炔-3-基和2-乙 基-丁-2-炔-4-基。
在本发明中，“烷氧基”是指通过-OR表示的基团，其中R为烷基。
“C1-C6烷氧基”是指具有1-6个碳原子的烷氧基。“C1-C4烷氧基”是指具 有1-4个碳原子的烷氧基。
“C1-C6烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙基氧基、2- 丙基氧基、2-甲基-1-丙基氧基、2-甲基-2-丙基氧基、1-丁基氧基和2-丁基氧 基。
在本发明中，“C1-C6烷基羰基”是指R-C＝O-，其中R为C1-C6烷基。“C1-C4烷基羰基”是指R-C＝O-，其中R为C1-C4烷基。
“C1-C6烷基羰基”的实例包括但不限于甲基羰基(即乙酰基)、乙基羰基、 丙基羰基、异丙基羰基、正丁基羰基、仲丁基羰基、叔丁基羰基和2-乙基丁 基羰基。
在本发明中，“C1-C6烷氧基羰基”是指与C1-C6烷氧基连接的羰基。“C1-C4烷氧基羰基”是指与C1-C4烷氧基连接的羰基。
“C1-C6烷氧基羰基”的实例包括但不限于甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙 氧基羰基和叔丁氧基羰基。
在本发明中，“环烷基”是指饱和碳环系统。“C3-C10环烷基”是指3-10元 环烷基。
“C3-C10环烷基”的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、 环庚烷基、环辛烷基和金刚烷基。例如，3-8元环烷基也包括在“C3-C10环烷 基”中。
在本发明中，“氨基”是指通过-NH2表示的基团，其中氢各自任选被取代 基取代。
在本发明中，“C1-C6烷基氨基”是指与C1-C6烷基连接的氨基。
“C1-C6烷基氨基”的实例包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、 异丙基氨基、正丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基和2-乙基丁基氨基。
在本发明中，“C1-C6烷基羰基氨基”是指R-C＝O-NH-，其中R为C1-C6烷基。“C1-C4烷基羰基氨基”是指R-C＝O-NH-，其中R为C1-C4烷基。
“C1-C6烷基羰基氨基”的实例包括但不限于甲基羰基氨基(即乙酰基氨 基)、乙基羰基氨基、1-丙基羰基氨基、2-丙基羰基氨基、正丁基羰基氨基、 仲丁基羰基氨基、叔丁基羰基氨基和2-乙基丁基羰基氨基。
在本发明中，“C3-C10环烷基氨基”是指R-NH-，其中R为C3-C10环烷基。
“C3-C10环烷基氨基”的实例包括但不限于环丙基氨基、环丁基氨基、环 戊基氨基、环己基氨基、环庚烷基氨基和环辛烷基氨基。
在本发明中，“磺酰基”是指通过-SO2-表示的基团。
在本发明中，“C1-C6烷基磺酰基”是指R-SO2-，其中R为C1-C6烷基。 “C1-C4烷基磺酰基”是指R-SO2-，其中R为C1-C4烷基。
“C1-C6烷基磺酰基”的实例包括但不限于甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙 基磺酰基、异丙基磺酰基、正丁基磺酰基、仲丁基磺酰基、叔丁基磺酰基和 2-乙基丁基磺酰基。
在本发明中，“C1-C6烷基磺酰基氨基”是指R-SO2-NH-，其中R为“C1-C6烷基”。“C1-C4烷基磺酰基氨基”是指R-SO2-NH-，其中R为“C1-C4烷基”。
“C1-C6烷基磺酰基氨基”的实例包括但不限于甲基磺酰基氨基、乙基磺 酰基氨基、丙基磺酰基氨基、异丙基磺酰基氨基、正丁基磺酰基氨基、仲丁 基磺酰基氨基、叔丁基磺酰基氨基和2-乙基丁基磺酰基氨基。
在本发明中，“饱和杂环基”是指在环系中具有一个或者多个杂原子的饱 和杂环基团。“3-8元饱和杂环基”是指其中环含有3-8个原子的饱和杂环基。
“3-8元饱和杂环基”的实例包括但不限于氮丙啶基、氮杂环丁烷基、吡 咯烷基、咪唑烷基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环庚烷基和吗啉基。
将盐定义为由酸和碱的中和反应形成的产物。盐为由阳离子(正电荷离 子)和阴离子(负电荷离子)组成的离子化合物，因此该产物为电中性的。这些 组成离子可为无机的和有机的。
水合物为在无机化学和有机化学中使用的术语，其表示物质含有水。溶 剂化物是指在溶液中通过与溶剂分子复合形成的分子。
异构体为具有相同分子式但具有不同结构式的化合物。更具体而言，异 构体包括化合物的几何异构体、旋光异构体、立体异构体、互变异构体以及 它们的混合物。
本发明提供式(I)表示的化合物：
其中
X为苯基、噻吩-2-基、呋喃-2-基、环丙基、环戊基、苯基C1-C6烷基、 噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基、环戊基C1-C6烷基或者二环[2.2.1]庚-2-基；
所述苯基、噻吩-2-基、呋喃-2-基、环丙基、环戊基、苯基C1-C6烷基、 噻吩-2-基C1-C6烷基、呋喃-2-基C1-C6烷基、环丙基C1-C6烷基或者环戊基 C1-C6烷基任选被1-3个各自独立选自基团A的取代基取代；
L为-NH-或者单键；
M选自C3-C10环烷基或者3-8元饱和杂环基；
所述C3-C10环烷基和3-8元饱和杂环基任选被1-3个各自独立选自基团 A的取代基取代；
其中基团A包括羟基、氧代、硝基、氰基、氨基、C1-C6烷基氨基、C3-C10环烷基氨基、酰胺基团、卤素、氨磺酰基、三氟甲基、对甲苯磺酰基氨基、 C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰 基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰基氨基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、 磷酰基、羰基、羧基和3-8元饱和杂环基；并且
a为0-5的整数。
优选的化合物包括选自以下的那些化合物：在下表1中列出的实施例5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、35、36、 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59和60；以及前述化合物的药用盐、前药、水合物 和溶剂化物。
表1
本发明的式(I)的化合物可为衍生自无机酸或者有机酸的药用盐形式，且 衍生自无机酸或者有机酸的药用盐的代表性实例包括通过加入无机酸或者 有机酸得到的盐，所述无机酸为诸如盐酸、氢溴酸、磷酸或者磺酸，所述有 机酸为诸如乙酸、三氟乙酸、枸橼酸、甲酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲 酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸或者苹果酸、甲磺酸或者对甲苯磺 酸，所述盐将本发明的范围不限于式(I)的化合物。所述酸可通过常规方法制 备，且本身不是可药用的其它酸包括草酸可用于制备盐。
作为选择，本发明的式(I)化合物也可为衍生自无机碱或者有机碱的药用 盐的形式，其包括通过加入无机碱或者有机碱得到的盐。例如，碱金属氢氧 化物包括氢氧化钠或者氢氧化钾，或者碱土金属氢氧化物包括氢氧化钙、氢 氧化镁、氢氧化铝或者氢氧化铵可用于制备化合物的无机盐。此外，也可使 用有机碱(包括三乙胺或者二异丙基乙胺)制备所述化合物的有机盐。
优选的本发明式(I)化合物可如方案(I)中制备。
方案(I)
其中，p-TSA为对甲苯磺酸，HATU为2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1- 基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐[2-(1H-7-Azabenzotriazol-1- yl)-1，1，3，3-tetramethyl uronium hexafluorophosphate Methanaminium]，DIPEA 为N，N-二异丙基乙胺，EDC为1-[3-(二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，HOBt 为1-羟基苯并三唑，X、a和M具有与前述定义相同的含义。
在对甲苯磺酸的存在下使苯胺A与必要的腈反应得到脒B。将脒B用 次氯酸钠氯化并使用碳酸氢钠环化，从而形成苯并咪唑C。将中间体C用氢 氧化钠皂化得到甲氧基酸D，将其与各种胺在HATU的存在下反应得到酰胺 F。将酰胺F用三溴化硼处理得到式(I)的化合物。将中间体C用三溴化硼处 理得到羟基酸E，使用EDC和HOBt使羟基酸E与各种胺反应得到式(I)的 化合物。
因此，本发明提供制备本发明化合物的方法，其包括下面的步骤：
在酸的存在下，使羧基烷基取代的苯胺衍生物与腈接触，形成中间体脒；
环化中间体脒，形成含有羧基烷基的苯并咪唑衍生物；
皂化所述苯并咪唑衍生物的羧基烷基，形成羧酸；以及
使所得的苯并咪唑衍生物的羧酸与胺衍生物接触，得到本发明化合物。
本申请所用术语“接触”是指使至少两种不同物质接触使得它们能反应 的过程。然而，应理解的是，所得的反应产物可直接由加入的试剂之间的反 应制备，或者由来自一种或多种所加入试剂的中间体(其可在反应混合物中 制得)制备。
方案(II)
在铜和碘化亚铜的存在下将化合物T与必须的胺反应，接着脱保护得到 化合物U(方案II)。
本发明式(I)的化合物的盐、水合物、溶剂化物和异构体可使用任意的已 知方法制备。本发明的式(I)的化合物或者其盐、水合物、溶剂化物或异构体 可通过抑制PBK活性而用于治疗PBK依赖性疾病诸如癌症，本发明化合物 具有通常为0.0001至100的范围内，例如0.001至50，优选0.001至10，更 优选0.001至5的IC50值(μM)。
因此，本发明包括药物组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的式 (I)的化合物、其盐、其水合物、其溶剂化物或者其异构体以及药用载体；因 此，本发明的药物组合物对PBK依赖性疾病发挥优越的预防和治疗作用。
药物制剂可根据任一常规方法制备。在制备制剂中，优选将活性成分与 载体混合或者将活性成分用载体稀释，或者将活性成分包封在载体、囊体或 者其它容器中。当载体用作稀释剂时，其可为固体、半固体或者液体物质， 其作为活性成分的媒介物、赋形剂或者介质。因此，所述制剂可为片剂、丸 剂、散剂、囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂、软明胶 胶囊和硬明胶胶囊、无菌注射用溶液剂、无菌包装散剂等形式。
适当的载体、赋形剂和稀释剂的实例为乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、 甘露醇、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水 和矿物油。所述制剂可额外地包括填充剂、抗乳化剂、防腐剂等。可配制本 发明的组合物，从而在通过使用本领域熟知的任意方法将它们给予哺乳动物 之后提供活性成分的快速、持久或者延缓释放。
本发明的药物组合物可经由各种途径给药，所述途径包括口服给药、经 皮给药、皮下给药、静脉内给药和肌内给药。
除了上述之外，本发明组合物可包括其它药物活性成分，只要它们不抑 制本发明化合物的体内功能。例如，本发明组合物可进一步含有通常用于治 疗癌症的化学治疗剂。
本申请披露的化合物可用于治疗或者预防PBK依赖性疾病，包括癌症。 已经证明，PBK是治疗癌症的潜在靶标，所述癌症为例如乳腺癌(本申请说 明书的实施例73)、膀胱癌(WO2006/085684)和小细胞肺癌(WO2007/013665)。 因此，所靶向癌症的实例包括但不限于乳腺癌、膀胱癌和小细胞肺癌。例如， 本发明提供在受试者中治疗或预防PBK依赖性疾病(包括癌症)的方法，所述 方法通过向所述受试者给予本申请披露的化合物。在一种优选的实施方案 中，可对受试者给予药物组合物形式的所述化合物，所述药物组合物包含本 发明的化合物以及药用或者生理学可接受载体。本发明的药物组合物可经由 各种途径给药，所述途径包括口服给药、经皮给药、皮下给药、静脉内给药 和肌内给药，从而治疗受试者的PBK依赖性疾病(包括癌症)。
在另一种实施方案中，本发明也提供本发明化合物在制备用于治疗PBK 依赖性疾病(包括癌症)的药物组合物中的用途。例如，本发明涉及本发明化 合物在制备用于治疗PBK依赖性疾病(包括癌症)的药物组合物中的用途。此 外，本发明还提供本发明化合物，其用于治疗PBK依赖性疾病(包括癌症)。
作为选择，本发明还提供制备用于治疗PBK依赖性疾病(包括癌症)的药 物组合物的方法或工艺，其中所述方法或工艺包括将作为活性成分的本发明 化合物与药用或者生理学可接受载体配制的步骤。
在另一种实施方案中，本发明也提供制备用于治疗PBK依赖性疾病(包 括癌症)的药物组合物的方法或工艺，其中所述方法或工艺包括将活性成分 与药用或者生理学可接受载体混合的步骤，其中所述活性成分为本发明化合 物。
给药的剂量和方法根据患者的体重、年龄和症状进行改变；然而，本领 域的技术人员可对它们进行适当的选择。
例如，尽管调节其活性的本发明化合物的剂量依赖于症状，但是当口服 给药至正常成人(体重60kg)时，剂量通常为每日约0.1mg至约100mg，优 选每日约1.0mg至约50mg，且更优选每日约1.0mg至约20mg。
当以注射形式对正常成人(体重60kg)肠胃外给予化合物时，虽然根据 患者、靶器官、症状和给药方法存在一些差异，但是可方便地静脉内注射每 日约0.01mg至约30mg的剂量，优选地每日约0.1至约20mg，且更优选 地每日约0.1至约10mg。在其它动物的情况下，适当的剂量可通过转换成 60kg体重来进行常规计算。
实施例
下述实施例意在进一步示例说明本发明而不是限制其范围。
实施例1
步骤1：4-甲氧基-3-(噻吩-2-甲脒基)苯甲酸甲酯的合成
将对甲苯磺酸一水合物(42g，110mmol)在120℃加热，一旦固体完全熔 化，就将其置于高真空且保持1小时以除去水。将真空释放，加入苯胺(20g， 55mmol)和噻吩-2-甲腈(24g，110mmol)，并将反应混合物在160℃加热4小 时。将反应混合物冷却至室温，接着加入饱和NaHCO3水溶液(250mL)和乙 酸乙酯(250mL)。分离各层，将水层用乙酸乙酯(100mL)萃取，并将合并的 有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗残留物经柱色谱法纯化得到16g 粗制脒中间体。将粗制中间体溶解在乙酸乙酯(350mL)中并加入HCl(2.0M 在乙醚中，55mL，110mmol)。将所得的沉淀物过滤得到预期产物(16g，42％ 的收率)，其为灰白色固体：ESI MS m/z 291[C14H14N3O2S+H]+。
步骤2：7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
向由步骤1得到的产物(16g，49mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中加入 5％NaOCl水溶液(75mL，55mmol)并将反应混合物在室温搅拌2小时。接着， 加入饱和NaHCO3水溶液(150mL)和甲醇(150mL)并将所得的反应混合物在 60℃加热2天。将反应混合物冷却至室温并浓缩以除去甲醇。将反应混合物 使用6N HCl酸化至pH 4，过滤所得的沉淀物并干燥得到预期产物(8g，57％ 的收率)，其为棕色固体：1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.86(d，J＝8.5Hz，1H)， 7.71-7.68(m，1H)，7.48-7.45(m，1H)，7.17-7.14(m，1H)，7.73(d，J＝8.5Hz，1H)， 4.16(m，3H)，3.98(m，3H)；ESI MS m/z 289[C14H12N2O3S+H]+。
步骤3：7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
向由步骤2得到的产物(4.2g，14mmol)在乙醇(30mL)和水(15mL)中的 溶液中加入6N NaOH(55mL)并将反应混合物在90℃加热2小时。将反应混 合物冷却并浓缩至干。将粗制残留物溶解在水(30ml)中，使用6N HCl酸化 至pH 4。将所得的沉淀物过滤，干燥得到预期产物(2.2g，58％的收率)，其为 棕色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.25(d，J＝3.0Hz，1H)，7.77(d，J＝8.0 Hz，1H)，7.73-7.68(m，1H)，7.22-7.18(m，1H)，6.82(d，J＝8.5Hz，1H)，3.97(m， 3H)；ESI MS m/z 275[C13H10N2O3S+H]+。
步骤4：7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
向由步骤3得到的产物(2.5g，9.1mmol)在二氯乙烷(100mL)中的溶液中 加入BBr3(23g，91mmol)并将反应混合物在90℃加热2天。将反应混合物冷 却并倒入至冰上。将所得的固体过滤得到预期产物(0.45g，19％的收率)，其 为棕色固体。将滤液使用6N HCl酸化至pH4，并将所得的沉淀物过滤得到 第二批预期产物(ALB 128328，1.6g，88％的收率)，其为棕色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.93-7.90(m，1H)，7.75(d，J＝8.5Hz，1H)， 7.62-7.58(m，1H)，7.19-7.14(m，1H)，6.65(d，J＝8.1Hz，1H)；ESI MS m/z 261 [C12H8N2O3S+H]+。
实施例2
步骤1：3-(环丙烷甲脒基)-4-甲氧基苯甲酸甲酯盐酸盐的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(10 g，55mmol)与环丙烷甲腈(7.4g，110mmol)反应得到预期产物(16g粗品)，其 为黑色固体：ESI MS m/z 249[C13H16N2O3+H]+。
步骤2：2-环丙基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤2中阐述的方法，使3-(环丙烷甲脒基)-4-甲氧基苯 甲酸甲酯盐酸盐(15g，50mmol)与NaOCl水溶液反应，接着与饱和NaHCO3水溶液反应，得到预期产物(12g粗品)，其为棕色固体：ESI MSm/z247 [C13H14N2O3+H]+。
步骤3：2-环丙基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤3中阐述的方法，使2-环丙基-7-甲氧基-1H-苯并[d] 咪唑-4-羧酸甲酯(2.0g，8.0mmol)与氢氧化钠反应，得到预期产物(1.7g粗 品)，其为黑色固体：ESI MS m/z 233[C12H12N2O3+H]+。
步骤4：2-环丙基-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤4中阐述的方法，使2-环丙基-7-甲氧基-1H-苯并[d] 咪唑-4-羧酸(1.5g，6.1mmol)与三溴化硼反应，得到预期产物(1.2g粗品)，其 为黑色固体：ESI MS m/z 219[C11H10N2O3+H]+。
实施例3
步骤1：3-(环戊烷甲脒基)-4-甲氧基苯甲酸甲酯盐酸盐的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯 (5.0g，27mmol)与环戊烷甲腈(5.2g，55mmol)反应，得到预期产物(7.7g粗 品)，其为棕色固体：ESI MS m/z 277[C15H20N2O3+H]+。
步骤2：2-环戊基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤2中阐述的方法，使3-(环戊烷甲脒基)-4-甲氧基苯 甲酸甲酯盐酸盐(5.6g，18mmol)与NaOCl水溶液反应，接着与饱和NaHCO3水溶液反应，得到预期产物(4.9g粗品)，其为黑色固体：ESI MS m/z 275 [C15H18N2O3+H]+。
步骤3：2-环戊基-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤4中阐述的方法，使2-环戊基-7-甲氧基-1H-苯并[d] 咪唑-4-羧酸甲酯(1.1g，4.0mmol)与三溴化硼反应，得到预期产物(0.92g粗 品)，其为黑色固体：ESI MS m/z 247[C13H14N2O3+H]+。
实施例4
步骤1：3-苯甲脒基-4-甲氧基苯甲酸甲酯盐酸盐的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯 (5.0g，27mmol)与苯腈(5.7g，55mmol)反应，得到预期产物(7.8g粗品)，其 为黑色固体：ESI MS m/z 285[C16H16N2O3+H]+。
步骤2：7-甲氧基-2-苯基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-苯甲脒基-4-甲氧基苯甲酸 甲酯盐酸盐(2.0g，8.0mmol)与NaOCl水溶液反应，接着与饱和NaHCO3水 溶液反应，得到预期产物(1.7g粗品)，其为灰白色固体：ESI MS m/z 283 [C16H14N2O3+H]+。
步骤3：7-羟基-2-苯基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤4中阐述的方法，使7-甲氧基-2-苯基-1H-苯并[d] 咪唑-4-羧酸甲酯(4.0g，12mmol)与三溴化硼反应，得到预期产物(2.1g粗品)， 其为黑色固体：ESI MSm/z255[C14H10N2O3+H]+。
一般操作A-如在方案(1)中所述的式(I-II)化合物的合成：
向羟基酸E(1.0当量)在THF(5-10mL)中的溶液中加入EDC(1.2当量)、 HOBt(1.1当量)和胺(1.2当量)，并将反应混合物在室温搅拌16小时或在50-70 ℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用水(25mL)洗涤。分 离各层，有机层经Na2SO4干燥，浓缩，并经制备性HPLC纯化(C18硅胶， 10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。在一些实例中，将预期产物溶解在三氟乙 酸(2mL)中并在室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩并经离子交换柱洗脱(使 用甲醇和7N甲醇在氨中的溶液)得到预期产物。
实施例5
2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-4-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的4-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol) 反应，得到预期产物(21mg，27％的收率)，其为浅棕黄色固体：1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ9.67(bs，1H)，7.57(d，J＝8.0Hz，1H)，6.58(d，J＝8.0Hz，1H)， 3.25-3.22(m，2H)，2.98-2.96(m，2H)，2.48-2.46(m，2H)，2.16(bs，1H)， 1.68-1.58(m，3H)，1.18-1.06(m，6H)；ESI MSm/z315[C17H22N4O2+H]+；HPLC 98.6％(AUC)，tR＝6.38分钟
实施例6
2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-3-基-甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反 应，得到预期产物(12mg，15％的收率)，其为浅灰色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，6.57(d，J＝8.0Hz，1H)，3.51-3.49(m，2H)， 3.14(d，J＝12.5Hz，1H)，2.94(bs，1H)，2.75-2.73(m，1H)，2.19-2.17(m，1H)， 1.90-1.88(m，2H)，1.71-1.68(m，2H)，1.54-1.49(m，1H)，1.35(bs，1H)， 1.15-1.13(m，4H)；ESI MSm/z315[C17H22N4O2+H]+；HPLC 99.7％(AUC)， tR＝5.98分钟
实施例7
2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的2-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反 应，得到预期产物(13mg，17％的收率)，其为浅灰色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，6.56(d，J＝8.0Hz，1H)，3.39-3.38(m，2H)， 3.22(d，J＝12Hz，1H)，3.08(d，J＝12Hz，1H)，2.69-2.68(m，1H)，2.66-2.63(m， 1H)，2.55-2.50(m，1H)，2.18-2.15(m，1H)，1.99-1.97(m，2H)，1.92-1.89(m，1H)， 1.82-1.80(m，1H)，1.62-1.59(m，1H)，1.32-1.34(m，1H)，1.13(bs，4H)；ESI MS m/z315[C17H22N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.78分钟
实施例8
2-环丙基-4-羟基-N-(1-甲基哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的1-甲基哌啶-3-胺(43mg，0.38mmol)反应，得到预期产 物(21mg，32％的收率)，其为棕黄色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ .12.7(bs，1H)，10.5(bs，1H)，9.97(bs，1H)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H)，6.61(d，J＝8.0 Hz，1H)，4.06(bs，1H)，3.32(bs，2H)，2.40-2.34(m，1H)，2.22-2.11(m，2H)， 1.75(bs，1H)，1.65(bs，1H)，1.55(bs，1H)，1.44(bs，1H)，1.14-1.10(m，4H)；ESI MSm/z315[C17H22N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝7.12分钟
实施例9
(S)-2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.38mmol)反应，得到预期 产物(28mg，37％的收率)，其为棕黄色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)12.7(bs，1H)，9.82(bs，1H)，7.58(d，J＝8.5Hz，1H)，6.61(d，J＝8.5Hz，1H)， 3.93-3.91(m，1H)，3.17(bs，1H)，3.03-3.00(m，1H)，2.77(m，1H)，2.64(bs，1H)， 2.16(bs，1H)，1.87(bs，1H)，1.73-1.70(m，1H)，1.50-1.45(m，2H)，1.11-1.10(m， 4H)；ESI MSm/z301[C16H20N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.63分钟
实施例10
2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.38mmol)反应，得 到预期产物(27mg，两个步骤的收率为36％)，其为棕黄色固体：1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ9.75(d，J＝6Hz，1H)，7.59(d，J＝8.5Hz，1H)，6.61(d，J＝8.5 Hz，1H)，3.96(bs，1H)，2.99-2.97(m，2H)，2.70-2.66(m，2H)，2.16(bs，1H)， 1.88-1.86(m，2H)，1.42-1.40(m，2H)，1.13-1.04(m，4H)；ESI MSm/z301 [C16H20N4O2+H]+；HPLC 95.8％(AUC)，tR＝6.21分钟
实施例11
2-环丙基-4-羟基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.38mmol)反应，得 到预期产物(16mg，21％的收率)，其为棕黄色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，6.60(d，J＝8.0Hz，1H)，4.12-4.08(m，1H)， 3.31-3.28(m，1H)，3.04-3.00(m，1H)，2.79-2.73(m，1H)，2.20-2.10(m，2H)， 1.94-1.91(m，1H)，1.76-1.65(m，1H)，1.17-1.14(m，4H)；ESI MSm/z301 [C16H20N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.63分钟
实施例12
2-环丙基-4-羟基-N-(吡咯烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与外消旋的3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.38mmol)反应， 得到预期产物(19mg，27％的收率)，其为棕黄色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，6.57(d，J＝8.0Hz，1H)，4.56-4.51(m，1H)， 3.36-3.32(m，1H)，3.26-3.20(m，1H)，3.14-3.09(m，1H)，3.03-3.00(m，1H)， 2.32-2.25(m，1H)，2.19-2.14(m，1H)，1.97-1.93(m，1H)，1.14-1.10(m，4H)；ESI MSm/z287[C15H18N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.40分钟
实施例13
N-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环丙基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.38mmol)反 应，得到预期产物(22mg，31％的收率)，其为棕黄色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.66(d，J＝8.5Hz，1H)，6.56(d，J＝8.5Hz，1H)，4.00-3.85(m，4H)， 3.69-3.67(m，2H)，3.17-3.14(m，1H)，2.18-2.14(m，1H)，1.13-1.08(m，4H)；ESI MSm/z287[C15H18N4O2+H]+；HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.15分钟
实施例14
2-环戊基-4-羟基-N-(哌啶-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺的合成
按照一般操作A，使2-环戊基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(62mg， 0.25mmol)与外消旋的2-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反 应，得到预期产物(33mg，39％的收率)，其为棕色固体：1H NMR(300MHz， CD3OD)δ7.69(d，J＝9.0Hz，1H)，6.59(d，J＝9.0Hz，1H)，3.54-3.52(m，2H)， 3.39-3.34(m，1H)，3.16-3.11(m，1H)，2.99-2.93(m，1H)，2.74(bs，1H)， 2.19-2.15(m，2H)，2.09-1.81(m，6H)，1.78-1.69(m，3H)，1.52-1.32(m，3H)；ESI MSm/z343[C19H26N4O2+H]+；HPLC 98.6％(AUC)，tR＝1.51分钟
实施例15
2-环戊基-4-羟基-N-(哌啶-3-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环戊基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(62mg， 0.25mmol)与外消旋的3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反 应，得到预期产物(35mg，41％的收率)，其为灰白色固体：1H NMR(300MHz， CD3OD)δ7.69(d，J＝9.0Hz，1H)，6.59(d，J＝9.0Hz，1H)，3.43-3.41(m，2H)， 3.30-3.25(m，1H)，3.16-3.12(m，1H)，2.72-2.59(m，2H)，2.18-2.15(m，2H)， 2.03-1.75(m，11H)，1.39-1.34(m，1H)；ESI MSm/z343[C19H26N4O2+H]+； HPLC 99.2％(AUC)，tR＝1.49分钟
实施例16
(S)-2-环戊基-4-羟基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使2-环戊基-4-羟基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg， 0.25mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.38mmol)反应，得到预期 产物(22mg，27％的收率)，其为棕色固体：1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.69(d， J＝8.0Hz，1H)，6.61(d，J＝8.0Hz，1H)，4.09(bs，1H)，3.39-3.30(m，2H)，2.99(bs， 1H)，2.72-2.76(m，2H)，2.19-2.14(m，3H)，2.03-1.99(m，2H)，1.91-1.88(m，3H)， 1.78-1.67(m，4H)；ESI MS m/z329[C18H24N4O2+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝1.48分钟
实施例17
(S)-4-羟基-2-苯基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使4-羟基-2-苯基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(55mg，0.25 mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(75mg，0.38mmol)反应，得到预期产物 (10mg，12％的收率)，其为黄绿色固体：1H NMR(500MHz，CD3OD)δ 8.20-8.18(m，2H)，7.78(d，J＝8.5Hz，1H)，7.56-7.51(m，3H)，6.68(d，J＝8.5Hz， 1H)，4.16(bs，1H)，3.39-3.35(m，1H)，3.05(bs，1H)，2.87-2.82(m，2H)， 2.20-2.19(m，1H)，2.00(bs，1H)，1.80-1.76(m，2H)；ESI MS m/z 337 [C19H20N4O2+H]+；HPLC 95.7％(AUC)，tR＝8.78分钟
实施例18
4-羟基-2-苯基-N-(哌啶-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使4-羟基-2-苯基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(62mg，0.25 mmol)与外消旋的2-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反应， 得到预期产物(20mg，23％的收率)，其为棕色固体：1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δ9.77(bs，1H)，8.32-8.30(m，2H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.58-7.51(m， 3H)，6.71(d，J＝8.5Hz，1H)，3.17-3.10(m，2H)，2.96-2.94(m，1H)，2.56-2.42(m， 3H)，1.90-1.87(m，1H)，1.81-1.77(m，1H)，1.69-1.65(m，1H)，1.46-1.44(m， 1H)，1.27-1.24(m，1H)；ESI MS m/z 351[C20H22N4O2+H]+；HPLC 99.0％(AUC)， tR＝7.74分钟
实施例19
4-羟基-2-苯基-N-(哌啶-3-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-7-甲酰胺
按照一般操作A，使4-羟基-2-苯基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(62mg，0.25 mmol)与3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.38mmol)反应，得到预期 产物(20mg，23％的收率)，其为棕色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 9.99(bs，1H)，8.40-8.38(m，2H)，7.70(d，J＝8.5Hz，2H)，7.57-7.52(m，3H)，6.72(d， J＝8.5Hz，1H)，3.43-3.41(m，2H)，3.11-3.08(m，1H)，2.64(bs，1H)， 1.78-1.71(m，2H)，1.57(bs，1H)，1.69-1.65(m，1H)，1.46-1.44(m，1H)， 1.27-1.24(m，1H)；ESI MS m/z 351[C20H22N4O2+H]+；HPLC 99.1(AUC)， tR＝8.99分钟
实施例20
7-羟基-N-(4-羟基环己基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
向4-羟基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15g，0.57mmol)在 DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(0.26g，0.68mmol)、DIPEA(0.30mL，1.7 mmol)和反式-4-氨基环己醇(0.13g，1.1mmol)。将反应混合物在50℃加热16 小时。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，浓缩，并经制备性HPLC纯化(C18 硅胶，10-90％乙腈/水，含0.05％TFA)。得到预期产物，其为三氟乙酸盐， 将其经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N甲醇在氨中的溶液)，得到预期产物 (13mg，32％)，其为灰白色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ10.19-10.17(m， 1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.79-7.75(m，1H)，7.64-7.61(m，1H)，7.22-7.19(m，1H)， 6.71-6.67(m，1H)，4.02-3.97(m，1H)，3.77-3.71(m，1H)，2.19-2.08(m，4H)， 1.55-1.50(m，4H)；ESI MS m/z 358[C18H19N3O3S+H]+；HPLC 98.8％(AUC)， tR＝11.84分钟
实施例21
(7-羟基-2-[噻吩-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-4-基)(哌嗪-1-基)甲酮
向4-羟基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.20g，0.76mmol)在 DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(0.34g，0.92mmol)、DIPEA(0.39mL， 2.3 mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.17g，0.92mmol)。将反应混合物在50℃加热 16小时。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，浓缩，并经制备性HPLC纯 化(C18硅胶，10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。将中间体溶解于二氯甲烷中， 并用2N HCl在乙醚中的溶液处理，将反应混合物在室温搅拌6小时。将反 应混合物浓缩，并将残留物经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N甲醇在氨中 的溶液)，得到预期产物(13mg，32％)，其为灰白色固体：1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δ8.01(bs，1H)，7.70(d，J＝5.0，Hz，1H)，7.20(dd，J＝5.0，4.0Hz，1H)， 7.00(d，J＝8.0，Hz，1H)，6.56-6.57(m，1H)，3.70-3.05(m，8H)；ESI MS m/z 329 [C16H16N4O2S+H]+；HPLC 95.5％(AUC)，tR＝8.79分钟
一般操作B-如在方案(1)中所述的酰胺F的合成：
向7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸(1.0当量)在甲苯(5-15 mL)中的混悬液中加入亚硫酰氯(4.0当量)。在室温搅拌16小时后，将反应 混合物在70℃加热2小时。将反应混合物冷却，浓缩，并将残留物悬浮在 THF(10-20mL)中，接着加入吡啶(2.0当量)和相应的胺(2.0当量)并将反应混 合物在70℃加热16小时。将反应混合物浓缩，残留物用水(20mL)稀释并用 乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗 涤，浓缩，并经快速色谱法纯化(硅胶，0-15％甲醇/二氯甲烷)得到酰胺F。 在大多数实例中，分离这些中间体，其为粗产物并且无需深入表征或者进一 步纯化即可继续使用。
实施例22
3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]哌啶-1-羧酸叔 丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15 g，0.44mmol)与外消旋的3-氨基-1-boc-哌啶(0.18g，0.88mmol)反应，得到预 期产物(0.13g)，其为棕色固体：ESI MS m/z 443[C23H28N4O4S+H]+。
实施例23
4-{2-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]乙基}哌嗪-1- 羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.16 g，0.58mmol)与4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.27g，1.2mmol)反应，得 到预期产物(0.24g)，其为泡沫体：ESI MS m/z 486[C24H31N5O4S+H]+。
实施例24
(R)-3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]哌啶-1-羧酸 叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.13 g，0.46mmol)与(R)-3-氨基-1-boc-哌啶(0.18g，0.92mmol)反应，得到预期产物 (0.12g)，其为棕色固体：ESI MS m/z 457[C23H28N4O4S+H]+。
实施例25
(S)-3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]哌啶-1-羧酸 叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.13 g，0.46mmol)与(S)-3-氨基-1-boc-哌啶(0.18g，0.92mmol)反应，得到预期产物 (0.13g)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 457[C23H28N4O4S+H]+。
实施例26
3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基}哌啶-1- 羧酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.17 g，0.62mmol)与外消旋的3-氨基甲基-1-boc-哌啶(0.26g，1.2mmol)反应，得到 预期产物(0.23g)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 471[C24H30N4O4S+H]+。
实施例27
4-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]哌啶-1-羧酸叔 丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.16 g，0.58mmol)与4-氨基-1-boc-哌啶(0.23g，1.2mmol)反应，得到预期产物(0.20 g)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 457[C23H28N4O4S+H]+。
实施例28
7-甲氧基-N-(1-甲基哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.16 g，0.59mmol)与外消旋的1-甲基-哌啶-3-胺(0.14g，1.2mmol)反应，得到预期 产物(0.15g)，其为棕色玻璃状物：ESI MS m/z 371[C19H22N4O2S+H]+。
实施例29
4-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基}哌啶-1- 羧酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15 g，0.56mmol)与4-氨基甲基-1-boc-哌啶(0.24g，1.1mmol)反应，得到预期产物 (0.16g)，其为棕色泡沫体：ESI MS m/z 471[C24H30N4O4S+H]+。
实施例30
3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基}氮杂环丁 烷-1-羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15 g，0.56mmol)与1-boc-3(氨基甲基)氮杂环丁烷(0.20g，1.1mmol)反应，得到预 期产物(0.17g)，其为棕色泡沫体：ESI MS m/z 443[C22H26N4O4S+H]+。
实施例31
3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15 g，0.56mmol)与3-氨基-1-Boc-吡咯烷(0.21g，1.1mmol)反应，得到预期产物 (0.20g)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 443[C22H26N4O4S+H]+。
实施例32
2-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基}哌啶-1- 羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.16 g，0.58mmol)与外消旋的2-(氨基甲基)-1-N-boc-哌啶(0.25g，1.2mmol)反应， 得到预期产物(0.23g)，其为棕色泡沫体：ESI MS m/z 471[C24H30N4O4S+H]+。
实施例33
3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基}吡咯烷 -1-羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.16 g，0.58mmol)与3-(氨基甲基)-1-N-Boc-吡咯烷(0.24g，1.2mmol)反应，得到预 期产物(0.19g)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 457[C23H28N4O4S+H]+。
实施例34
4-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]环己基氨基甲酸 叔丁酯
按照一般操作B，使4-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸(0.15 g，0.55mmol)与1-Boc-氨基-1，4-环己基二胺(0.23g，1.1mmol)反应，得到预期 产物(92mg)，其为棕色油状物：ESI MS m/z 471[C24H30N4O4S+H]+。
一般操作C-如在方案(1)中所述的化合物的合成：
向酰胺F(1.0当量)在二氯乙烷(10-25mL)中的混悬液中加入三溴化硼 (6.0-10当量)并将反应混合物在80℃加热16小时。将反应混合物倒至冰上， 并将所得的混合物浓缩。将粗制残留物经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N 甲醇在氨水中的溶液)，其作为粗纯化。将粗制产物进一步经制备性HPLC 纯化(C18硅胶，10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。得到预期产物，其为三氟乙 酸盐，将其经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N甲醇在氨中的溶液)，得到预 期产物。
实施例35
7-羟基-N-(哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.13g)与三溴化硼反应，得到预期产物(34mg，23％ 的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.86-7.85(m，1H)， 7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63-7.61(m，1H)，7.22-7.19(m，1H)，6.66(d，J＝8.4Hz， 1H)，4.14-4.10(m，1H)，3.04-3.00(m，1H)，2.86-2.77(m，2H)，2.18-1.99(m，2H)， 1.79-1.72(m，2H)；ESI MS m/z 343[C17H18N4O2S+H]+；HPLC 99.2％(AUC)， tR＝9.73分钟
实施例36
7-羟基-N-[2-(哌嗪-1-基)乙基]-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使4-{2-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺基]乙基}哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.24g)与三溴化硼反应，得到预期产物(70 mg，32％的收率)，其为白色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.50(s，1H)， 8.08(d，J＝2.0Hz，1H)，7.77(d，J＝5.0Hz，1H)，7.69(d，J＝8.0Hz，1H)， 7.25-7.24(m，1H)，6.71(d，J＝8.0Hz，1H)，3.55-3.51(m，3H)，2.90-2.84(m，5H)， 2.56-2.50(m，3H)；ESI MS m/z 372[C18H21N5O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝8.74分钟
实施例37
(R)-7-羟基-N-(哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使(R)-3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.12g)与三溴化硼反应，得到预期产物(25mg， 16％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.88-7.87(m， 1H)，7.79-7.75(m，1H)，7.65-7.63(m，1H)，7.24-7.21(m，1H)，6.70-6.67(m，1H)， 4.17-4.14(m，1H)，3.08-3.00(m，1H)，2.89-2.78(m，2H)，2.24-1.98(m，2H)， 1.82-1.76(m，2H)；ESI MS m/z 343[C17H18N4O2S+H]+；HPLC 96.1％(AUC)， tR＝10.50分钟
实施例38
(S)-7-羟基-N-(哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，将(S)-3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.13g)与三溴化硼反应，得到预期产物(45mg， 29％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.88-7.87(m， 1H)，7.79-7.75(m，1H)，7.65-7.63(m，1H)，7.24-7.21(m，1H)，6.70-6.66(m，1H)， 4.17-4.14(m，1H)，3.08-3.00(m，1H)，2.89-2.78(m，2H)，2.24-1.98(m，2H)， 1.82-1.76(m，2H)；ESI MS m/z 343[C17H18N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.80分钟
实施例39
7-羟基-N-(哌啶-3-基甲基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.23g)与三溴化硼反应，得到预期产物(90mg， 41％的收率)，其为浅棕色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.62(s，1H)， 8.06-8.04(m，1H)，7.74(d，J＝4.8Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24-7.21(m， 1H)，6.66(d，J＝8.4Hz，1H)，3.29(t，J＝6.0Hz，2H)，3.17-3.10(m，1H)， 2.93-2.89(m，1H)，2.47-2.37(m，2H)，1.95-1.90(m，1H)，1.76-1.63(m，2H)， 1.49-1.20(m，2H)；ESI MS m/z 357[C18H20N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.41分钟
实施例40
7-羟基-N-(哌啶-4-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使4-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.2g)与三溴化硼反应，得到预期产物(85mg，42％ 的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.85-7.84(m，1H)， 7.76(d，J＝5.1Hz，1H)，7.62-7.60(m，1H)，7.21-7.19(m，1H)，6.66(d，J＝5.1Hz， 1H)，4.21-4.20(m，1H)，3.29-3.24(m，2H)，2.99-2.93(m，2H)，2.17-2.14(m，2H)， 1.80-1.74(m，2H)；ESI MS m/z 343[C17H18N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.07分钟
实施例41
7-羟基-N-(1-甲基哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使7-甲氧基-N-(1-甲基哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H- 苯并[d]咪唑-4-甲酰胺(0.15g)与三溴化硼反应，得到预期产物(75mg，36％的 收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.89-7.88(m，1H)， 7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.65-7.64(m，1H)，7.23-7.20(m，1H)，6.71(d，J＝8.4Hz， 1H)，4.26-4.24(m，1H)，3.01-2.98(m，1H)，2.67-2.65(m，1H)，2.38(s，5H)， 2.05-1.92(m，2H)，1.80-1.59(m，2H)；ESI MS m/z 357[C18H20N4O2S+H]+； HPLC 96.2％(AUC)，tR＝9.55分钟
实施例42
7-羟基-N-(哌啶-4-基甲基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使4-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.16g)与三溴化硼反应，得到预期产物(700 mg，35％的收率)，其为黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.85-7.84(m， 1H)，7.78-7.74(m，1H)，7.63-7.61(m，1H)，7.23-7.19(m，1H)，6.64-6.61(m，1H)， 3.49(d，J＝6.6Hz，2H)，2.88-2.79(m，2H)，2.07-2.03(m，2H)，1.94-1.93(m，1H)， 1.56-1.44(m，2H)；ESI MS m/z 357[C18H20N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.15分钟
实施例43
N-(氮杂环丁烷-3-基甲基)-7-羟基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺
按照一般操作C，使3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]甲基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.17g)与三溴化硼反应，得到预期产物 (43mg，24％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.84-7.83(m，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.62-7.59(m，1H)，7.22-7.19(m，1H)， 6.61(d，J＝8.4Hz，1H)，4.02-3.96(m，2H)，3.90-2.84(m，2H)，3.74(d，J＝6.3Hz， 2H)；ESI MS m/z 329[C16H16N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)，tR＝8.70分钟
实施例44
7-羟基-N-(吡咯烷-3-基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使3-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.20g)与三溴化硼反应，得到预期产物(0.12g， 63％的收率)，其为浅棕色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.09(s，1H)， 7.90(d，J＝8.4Hz，2H)，7.36-7.33(m，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，1H)，4.75-4.71(m， 1H)，3.69-3.64(m，2H)，3.54-3.48(m，2H)，2.54-2.50(m，1H)，2.35-2.30(m，1H)； ESI MS m/z 329[C16H16N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)，tR＝8.80分钟
实施例45
7-羟基-N-(哌啶-2-基甲基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，将2-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.23g)与三溴化硼反应，得到预期产物(90mg， 44％的收率)，其为黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.03-8.02(m，1H)， 7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，7.82-7.81(m，1H)，7.32-7.29(m，1H)，6.83(d，J＝8.4Hz， 1H)，3.78-3.75(m，2H)，3.44-3.36(m，2H)，3.06-3.02(m，1H)，2.14-2.10(m，1H)， 2.00-1.90(m，2H)，1.75-1.66(m，3H)；ESI MS m/z 357[C18H20N4O2S+H]+； HPLC＞99％(AUC)，tR＝9.49分钟
实施例46
7-羟基-N-(吡咯烷-3-基甲基)-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，将3-{[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]甲基}吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.19g)与三溴化硼反应，得到预期产物(79 mg，39％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.84-7.82(m， 1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61-7.59(m，1H)，7.21-7.18(m，1H)，6.61(d，J＝8.4 Hz，1H)，3.63-3.54(m，2H)，3.37-3.33(m，1H)，3.27-3.06(m，2H)，2.98-2.91(m， 1H)，2.66-2.61(m，1H)，2.24-2.18(m，1H)，1.86-1.79(m，1H)；ESI MS m/z 343 [C17H18N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)，tR＝8.91分钟
实施例47
N-(4-氨基环己基)-7-羟基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使4-[7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基]环己基氨基甲酸叔丁酯(92mg)与三溴化硼反应，得到预期产物(21mg， 两个步骤的收率为10％)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.85-7.84(m，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61-7.59(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)， 6.63(d，J＝8.4Hz，1H)，4.24-4.23(m，1H)，3.01-2.97(m，1H)，2.15-2.10(m，2H)， 2.03-1.78(m，6H)；ESI MS m/z 357[C18H20N4O2S+H]+；HPLC 95.6％(AUC)， tR＝9.22分钟
实施例48
2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-N-(哌啶-3-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺
按照一般操作C，使3-((2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪 唑-4-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(330mg粗品)与三溴化硼反应，得到 预期产物(71mg，45％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(500MHz，CD3OD) δ7.75-7.68(m，1H)，6.58(dd，1H，J＝4.0，8.2Hz)，3.47-3.36(m，2H)，3.27-3.20(m， 1H)，3.11-3.05(m，1H)，3.01-2.96(m，1H，次要的非对映异构体)，2.69-2.62(m， 1H)，2.57-2.51(m 1H)，2.43-2.37(m，1H)，2.25-2.19(m，1H，次要的非对映异构 体)，2.09-2.01(m，2H)，1.96-1.88(m，1H)，1.84-1.74(m，2H)，1.71-1.55(m，3H)， 1.53-1.16(m，5H)；ESI MS m/z 369[C21H28N4O2+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.75分钟
实施例49
2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑 -4-甲酰胺基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg粗品)与三溴化硼反应，得到预期产 物(72mg，43％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.69(dd，J＝3.6，8.1Hz，1H)，6.61(dd，J＝2.7，8.1Hz，1H)，4.12-4.01(m，1H)， 3.45-3.36(m，1H)，3.03-2.93(m，1H)，2.78-2.52(m，3H)，2.44-2.36(m，1H)， 2.25-1.16(m 13H)；ESI MS m/z 355[C20H26N4O2+H]+；HPLC＞99％(AUC)， tR＝9.55分钟(次要的非对映异构体)，9.74分钟(主要的非对映异构体)。
一般操作D-在方案(1)中所述的式(I-II)化合物的合成：
向酸(1.0当量)在DMF(5-10mL)中的溶液中加入HATU(1.2-1.5当量)、 DIPEA(3.0-5.0当量)和胺(1.5-2.0当量)，并将反应混合物在室温搅拌16小时 或者在50-70℃加热16小时。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL) 稀释并用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，浓缩， 并经制备性HPLC纯化(C18硅胶，10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。得到预期 产物，其为三氟乙酸盐，将其经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N甲醇在氨 中的溶液)得到预期产物。在一些实例中，将预期产物用TFA(1-2mL)处理1 小时，浓缩并经制备性HPLC纯化(C18硅胶，10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。 得到预期产物，其为三氟乙酸盐，将其经离子交换柱洗脱(使用甲醇和7N 甲醇在氨中的溶液)得到预期产物。
实施例50
(S)-3-(2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)哌啶-1-羧 酸叔丁酯
按照一般操作D，使2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 (90mg，0.27mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(106mg，0.53mmol)反应， 得到预期产物(48mg，35％的收率)，其为黄棕色固体：1H NMR(500MHz， CD3OD)δ7.84(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.28(s，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)， 4.21(bs，1H)，3.86(bs，1H)，3.58-3.18m，2H)，2.14-2.03(m，2H)，1.89(bs，1H)， 1.59(bs，1H)，1.17(bs，1H)；ESI MS m/z 521[C22H25BrN4O4S]+；HPLC ＞99％(AUC)，tR＝15.30分钟
实施例51
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
将(S)-3-(2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)哌啶-1- 羧酸叔丁酯(35mg，0.067mmol)在CH2Cl2(1mL)和TFA(1mL)中的溶液在室 温搅拌1小时。将反应混合物浓缩，并经制备性HPLC纯化(C18硅胶，10-90％ 乙腈/水(含0.05％TFA))。得到预期产物，其为三氟乙酸盐，将其经离子交换 柱洗脱(使用甲醇和7N甲醇在氨中的溶液)得到预期产物(20mg，72％)，其为 黄色固体：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.61(s，1H)，11.00(s，1H)，9.57(d， J＝6.5Hz，1H)，8.75(bs，1H)，7.89(d，J＝4.0Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)， 7.41(d，J＝3.5Hz，1H)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H)，3.46(d，J＝8.5Hz，1H)，3.21(d， J＝12.5Hz，1H)，3.04-2.96(m，2H)，2.10(bs，1H)，2.03-2.00(m，2H)， 1.85-1.70(m，4H)，0.68(bs，1H)；ESI MS m/z 421[C17H17BrN4O2S]+；HPLC 98.34％(AUC)，tR＝8.17分钟
实施例52
2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-N-((S)-哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺
按照一般操作C，使(3S)-3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d] 咪唑-4-甲酰胺基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(230mg，粗品)与三溴化硼反应，得到预 期产物(103mg，两个步骤的收率为52％)，其为浅棕色固体：1H NMR(300 MHz，CD3OD)δ7.69(dd，J＝3.6，8.4Hz，1H)，6.60(dd，J＝2.7，8.4Hz，1H)， 4.12-4.02(m，1H)，3.46-3.35(m，1H)，3.03-2.93(m，1H)，2.78-2.60(m，3H)， 2.56-2.36(m，1H)，2.25-1.17(m，13H)；ESI MS m/z 355[C20H26N4O2+H]+； HPLC 99.0％(AUC)，tR＝9.35分钟(次要的非对映异构体)，9.49分钟(主要的非 对映异构体)。
实施例53
2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-N-(金刚烷-3-基氨基)-1H-苯并[d]咪唑-4- 甲酰胺
按照一般操作C，使3-{[2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪 唑-4-甲酰胺基]甲基}金刚烷-1-羧酸叔丁酯(140mg，粗品)与三溴化硼反应， 得到预期产物(57mg，两个步骤的收率为31％)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.66-7.62(m，1H)，6.57-6.53(m，1H)，3.45-3.35(m， 1H)，3.00-2.90(m，1H，次要的非对映异构体)，2.68-2.62(m，1H，主要的非对 映异构体)，2.56-2.52(m，1H，次要的非对映异构体)，2.43-2.18(m，7H)， 2.13-1.99(m 3H)，1.84-1.21(m，12H)；ESI MS m/z 421[C25H32N4O2+H]+；HPLC 96.6％(AUC)，tR＝10.45分钟。
实施例54
2-(噻吩-2-基)-7-羟基-N-(金刚烷-3-基氨基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使3-((2-噻吩-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺基)甲基)金刚烷-1-羧酸叔丁酯(110mg)与三溴化硼反应，得到预期产物(62 mg，两个步骤的收率为28％)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD) δ7.80(d，J＝3.9Hz，1H)，7.69(d，J＝8.4Hz，1H)，7.58(d，4.8Hz)，7.20-7.17(m， 1H)，6.59(d，1H，J＝8.4Hz)，2.38-2.11(m，8H)，1.86-1.63(m，6H)；ESI MS m/z 409[C22H24N4O2S+H]+；HPLC＞99％(AUC)，tR＝11.27分钟
实施例55
N-(3-氨基环己基)-2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰 胺
按照一般操作C，使3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑 -4-甲酰胺基)环己基氨基甲酸叔丁酯(120mg，粗品)与三溴化硼反应，得到预 期产物(66mg，40％的收率)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.72-7.67(m，1H)，6.58-6.55(m，1H)，4.57-4.48(m，1H，次要的非对映异构体)， 4.03-3.90(m，1H，主要的非对映异构体)，3.45-3.35(m，1H)，3.03-2.90(m，1H)， 2.66-2.52(m，1H)，2.44-2.32(m 2H，主要的非对映异构体)，2.22-1.14(m，15H)； ESI MS m/z 369[C21H28N4O2+H]+；HPLC＞99％(AUC)，tR＝9.40，9.53，9.58，9.81 分钟(非对映异构体的混合物)。
实施例56
N-{[(顺)-4-氨基环己基]甲基}-2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d] 咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作C，使(顺)-4-{[2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d] 咪唑-4-甲酰胺基]甲基}环己基氨基甲酸叔丁酯(220mg粗品)与三溴化硼反 应，得到预期产物(64mg，两个步骤的收率为53％)，其为浅黄色固体：1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.69(dd，J＝3.9，8.4Hz，1H)，6.59-6.54(m，1H)， 3.56-3.37(m，2H)，3.15-3.07(m，1H)，3.00-2.90(m，1H，次要的非对映异构体)， 2.74-2.66(m，1H，次要的非对映异构体)，2.55-2.51(m，1H，次要的非对映异 构体)，2.42-2.34(m，1H)，2.25-2.16(m，1H，次要的非对映异构体)， 2.06-1.98(m，1H)，1.80-1.20(m，14H)；ESI MS m/z 383[C22H30N4O2+H]+； HPLC 99.0％(AUC)，tR＝9.53，9.88，9.96分钟(非对映异构体的混合物)。
实施例57
(S)-7-羟基-2-(5-(哌嗪-1-基)噻吩-2-基)-N-(哌啶-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-4- 甲酰胺
将(S)-3-(2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)哌啶-1- 羧酸叔丁酯(0.12g，0.24mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.60mmol)、 CuI(5.7mg，0.030mmol)、Cu(2.0mg，0.030mmol)、K3PO4·H2O(160mg，0.72 mmol)在2-(二甲基氨基)乙醇(2mL)中的混合物在75℃搅拌18小时。将反应 混合物冷却，浓缩，溶解在CH3OH(3mL)中并过滤。将滤液经制备性HPLC 纯化(C18硅胶，10-90％乙腈/水(含0.05％TFA))。合并所需的馏分，浓缩并将 残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(1mL)中，在室温搅拌30分钟。将反应 混合物浓缩，并将残留物经离子交换柱(SCX-2)洗脱(使用甲醇和7N甲醇在 氨中的溶液)得到预期产物(7mg，14％的收率)，其为黄色固体：1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ8.20(d，J＝4.5Hz，1H)，7.50(d，J＝4.5Hz，1H)，7.14(d，J＝4.0Hz， 1H)，6.54(d，J＝3.5Hz，1H)，4.20-4.16(m，1H)，3.43(dd，J＝12.5，3.5Hz，1H)， 3.19-3.15(m，2H)，3.10-2.97(m，3H)，2.05-1.96(m，2H)，1.84-1.72(m，3H)， 1.19-1.16(m，1H)，1.13-1.08(m，1H)；ESI MS m/z 427[C21H26N6O2S+H]+HPLC 97.13％(AUC)，tR＝8.29分钟
实施例58
(R)-7-羟基-N-(哌啶-3-基甲基)-2-(噻吩-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺
按照一般操作D，使2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 (0.13mg，0.47mmol)与(S)-3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.93 mmol)反应，并用TFA处理中间体，得到预期产物(15mg，31％的收率)，其 为黄色固体：1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.75(d，8.5Hz，1H)，7.30(dd， J＝5.5，1.5Hz，1H)，7.02-7.01(m，1H)，6.98(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.70(d，J＝8.5 Hz，1H)，4.52(s，2H)，3.53-3.45(m，2H)，3.37(dd，J＝9.0，6.0Hz，1H)， 2.95-2.89(m，2H)，2.82(t，J＝12.0Hz，1H)，2.15-2.11(m，1H)，2.00-1.94(m，3H)， 1.78-1.74(m，1H)，1.44-1.36(m，2H)；ESI MS m/z 371[C19H22N4O2S+H]+ HPLC 95.5％(AUC)，tR＝7.17分钟。
实施例59
(S)-7-羟基-N-(哌啶-3-基)-2-(噻吩-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺
按照一般操作D，使2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 (0.17mg，0.62mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，1.3mm0l)反 应，并用TFA处理中间体，得到预期产物(25mg，68％的收率)，其为黄色固 体：1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.63(d，J＝8.5Hz，1H)，7.20(dd，J＝5.0，1.0Hz， 1H)，6.91(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.57(d，J＝8.5Hz，1H)，4.37(s，2H)， 4.15-4.11(m，1H)，3.37(dd，J＝10.5，3.5Hz，1H)，3.14-3.11(m，1H)，2.93-2.86(m， 2H)，2.04-2.01(m，1H)，1.94-1.91(m，1H)，1.74-1.65(m，2H).；ESI MS m/z 357 [C18H20N4O2S+H]+ HPLC 96.59％(AUC)，tR＝7.07分钟。
实施例60
(S)-7-羟基-N-(哌啶-3-基甲基)-2-(噻吩-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-甲 酰胺
按照一般操作D，使2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸 (0.13mg，0.47mmol)与(R)-3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.93 mmol)反应，并用TFA处理中间体，得到预期产物(12mg，28％的收率)，其 为黄色固体：1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.75(d，J＝8.5Hz，1H)，7.30(dd， J＝5.5，1.5Hz，1H)，7.02-7.01(m，1H)，6.98(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.70(d，J＝5.0 Hz，1H)，4.50(s，2H)，3.51-3.48(m，2H)，3.37(dd，J＝13.0，7.0Hz，1H)， 2.92-2.89(m，2H)，2.80(t，J＝12.0Hz，1H)，2.16-2.10(m，1H)，2.00-1.95(m，3H)， 1.80-1.72(m，1H)，1.44-1.39(m，2H)；ESI MS m/z 371[C19H22N4O2S+H]+ HPLC 96.8％(AUC)，tR＝6.93分钟。
实施例61
步骤1：3-(5-溴噻吩-2-甲脒基)-4-甲氧基苯甲酸甲酯盐酸盐的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯 (1.5g，7.9mmol)与5-溴噻吩-2-甲腈(3.0g，16mmol)反应，得到预期产物(1.6g， 54％的收率)，其为暗棕色固体：ESI MS m/z 368[C14H13BrN2O3S+H]+。
步骤2：2-(5-溴噻吩-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤2中阐述的方法，将3-(5-溴噻吩-2-甲脒基)-4-甲氧 基苯甲酸甲酯盐酸盐(1.7g，4.2mmol)与5％NaOCl水溶液和饱和NaHCO3水 溶液反应，得到预期产物(0.45g，30％的收率)，其为棕色固体：ESI MS m/z 369 [C14H11BrN2O3S+H]+。
步骤3：2-(5-溴噻吩-2-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤4中阐述的方法，使2-(5-溴噻吩-2-基)-7-甲氧基 -1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯(0.40g，1.1mmol)与三溴化硼(1.5g，6.6mmol)反 应，得到预期产物(0.34g，92％的收率)，其为浅棕色固体：ESI MS m/z 340 [C12H7BrN2O3S+H]+。
实施例62
步骤1：4-甲氧基-3-(2-(噻吩-2-基)乙脒基)苯甲酸甲酯盐酸盐的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯 (2.2g，12mmol)与2-(噻吩-2-基)乙腈(3.0g，24mmol)反应，得到预期产物(3.2 g，78％的收率)，其为黄棕色固体：ESI MS m/z 305[C15H16N2O3S+H]+。
步骤2：7-甲氧基-2-(噻吩-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤2中阐述的方法，使4-甲氧基-3-(2-(噻吩-2-基)乙 脒基)苯甲酸甲酯盐酸盐(3.1g，10mmol)与5％NaOCl水溶液和饱和NaHCO3水溶液反应，得到预期产物(1.1g，30％的收率)，其为棕色固体：ESI MS m/z 303[C15H14N2O3S+H]+。
步骤3：7-羟基-2-(噻吩-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤4中阐述的方法，使7-甲氧基-2-(噻吩-2-基甲 基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯(0.91g，3.0mmol)与三溴化硼(4.5g，18mmol) 反应，得到预期产物(0.63g，73％的收率)，其为浅棕色固体：ESI MS m/z 275 [C13H10N2O3S+H]+。
实施例63
步骤1：3-(二环[2.2.1]庚烷-2-甲脒基)-4-甲氧基苯甲酸甲酯的合成
按照在实施例1步骤1中阐述的方法，使3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯 (7.5g，41mmol)与降莰烷-2-甲腈(10g，82mmol)反应得到产物(11g，90％)，其 为白色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.29-8.20(m，1H)，7.99-7.96(m， 1H)，7.33-7.28(m，1H)，3.88(s，3H)，3.84(s，3H)，2.70-2.62(m，1H)，1.87-1.17(m， 8H)；ESI MS m/z 303[C17H22N2O3+H]+。
步骤2：2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯的 合成
按照在实施例1步骤2中阐述的方法，使3-(二环[2.2.1]庚烷-2-甲脒基)-4- 甲氧基苯甲酸甲酯(11g，37mmol)与NaOCl(33mL，10-13％，44mmol)反应， 并经色谱法纯化(己烷/乙酸乙酯)得到产物(3.9g，36％)，其为泡沫体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.05(s，1H，互变异构体1)，11.97(s，1H，互变异 构体2)，7.73(dd，1H，J＝1.2，8.7Hz)，6.78(dd，1H，J＝2.4，8.7Hz)，4.00(s，3H，互 变异构体1)，3.98(s，3H，互变异构体2)，3.90(s，3H，互变异构体1)，3.89(s，3H， 互变异构体2)，3.47-3.41(m，1H，互变异构体1)，3.11-3.06(m，1H，互变异构 体2)，2.70-2.66(m，1H，互变异构体1)，2.38-2.18(m，2H)，2.08-2.00(m，1H，互 变异构体1)，1.91-1.80(m，1H，互变异构体2)，1.68-1.24(m，5H)，1.11-0.98(m， 1H)；ESI MS m/z 301[C17H20N2O3+H]+。
步骤3：2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸的合成
按照在实施例1步骤3中阐述的操作，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧 基-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸甲酯(3.9g，13mmol)与氢氧化钠(30mL，3M)反应 得到粗制产物(3.6g)，其为白色固体：ESI MS m/z287[C16H18N2O3+H]+。
实施例64
3-{[2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基]甲基} 哌啶-1-羰酸叔丁酯
按照一般操作D，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(125mg，0.43mmol)与3-(氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(138mg，0.65 mmol)反应，得到预期产物(338mg，粗品)，其为油状物：ESI MS m/z 483 [C27H38N4O4+H]+。
实施例65
3-((2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)甲基) 金刚烷-1-羰酸叔丁酯
按照一般操作D，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(125mg，0.43mmol)与3-氨基金刚烷羧酸叔丁酯(176mg，0.65mmol)反 应得到预期产物(145mg粗品)，其为油状物：ESI MS m/z 535 [C31H42N4O4+H]+。
实施例66
(3S)-3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)哌 啶-1-羰酸叔丁酯
按照一般操作D，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(150mg，0.54mmol)与(S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(160mg，0.81mmol) 反应得到预期产物(237mg粗品)，其为油状物：ESI MS m/z 467 [C26H36N4O4+H]+。
实施例67
(顺)-4-((2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)甲 基)环己基氨基甲酸叔丁酯
按照一般操作D，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(90mg，0.31mmol)与(1s，4s)-4-(氨基甲基)环己基氨基甲酸叔丁酯(71mg， 0.31mmol)反应得到预期产物(237mg粗品)，其为油状物：ESI MS m/z 497 [C28H40N4O4+H]+。
实施例68
3-((2-噻吩-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)甲基)金刚烷-1- 羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使7-甲氧基-2-(噻吩-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-羧酸(0.15 g，0.55mmol)与3-氨基金刚烷羧酸叔丁酯(0.22g，0.82mmol)反应，得到预期 产物(118mg粗品)，其为白色固体：ESI MS m/z 523[C28H34N4O4S+H]+。
实施例69
3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)哌啶-1- 羰酸叔丁酯
按照一般操作B，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(150mg，0.55mmol)与3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.22g，1.1mmol)反应， 得到预期产物(219mg粗品)，其为泡沫体：ESI MS m/z 469[C26H36N4O4+H]+。
实施例70
3-(2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酰胺基)环己基 氨基甲酸叔丁酯
按照一般操作B，使2-(二环[2.2.1]庚-2-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-4- 羧酸(150mg，0.55mmol)与3-氨基环己基氨基甲酸叔丁酯(0.24g，1.1mmol)， 得到预期产物(126mg粗品)，其为玻璃状物：ESI MS m/z483 [C27H38N4O4+H]+。
实施例71
激酶测定
使用异氰酸酯荧光素标记的(FITC标记的)组蛋白H3肽作为底物，在存 在或者不存在化合物下测定PBK活性。FITC标记的组蛋白H3肽磷酰化的 程度通过基于固定化金属离子亲和的荧光极化(IMAP)技术使用IMAP FP进 行性结合系统(Molecular Devices Corporation)来测量(Sportsman JR，et al.， Assay Drug Dev.Technol.2：205-14，2004)。将测试化合物以12.5mM的浓度 溶解在DMSO中，然后连续稀释至测定中的DMSO浓度为1％。将经连续 稀释后的化合物、0.8ng/μL PBK(Carna Biosciences)和100nM FITC标记的 组蛋白H3肽在反应缓冲液(20mM HEPES，0.01％吐温-20，0.3mM MgCl2，2 mM二硫苏糖醇，50μM ATP，pH 7.4)中在室温反应1小时。通过加入3倍测 定体积的进行性结合溶液来终止反应。在室温温育0.5小时后，通过Wallac EnVision 2103多标记读数器(PerkinElmer)测量荧光极化。使用SigmaPlot， 10.0版本(Systat Software，Inc.)通过非线性四参数拟合计算IC50值。
本发明典型化合物的IC50值示于下表2中：
表2
实施例72
Western印迹分析
为了评价PBK在几种细胞系中的表达状态，使用从那些细胞中收集的 粗制细胞溶胞产物进行Western印迹分析。使用抗PBK抗体(克隆31，BD Biosciences)使表达可视化。乳腺癌细胞系T47D和BT-549显著地表达PBK， 但膀胱癌细胞系和HT-1197未显示PBK的表达。
实施例73
基于细胞的测定
针对靶标特异性细胞毒性，使用T47D、BT-549细胞评价抑制PBK的 活性候选抑制剂，HT-1197细胞用作阴性对照。将100μL细胞混悬液接种 在96孔微量滴定板(ViewPlate-96FTC，PerkinElmer)上。T47D、BT-549和 HT-1197的最初细胞浓度分别为3,000个细胞/孔、2,000个细胞/孔和2,500 个细胞/孔。在暴露于抑制剂之后72小时时用细胞计数试剂盒8(DOJINDO) 测定细胞生长。IC50用作抑制剂抗增殖活性的指示物，并通过连续稀释法(0、 1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50和100μM)计算。如前所述计算精确的 IC50值。
本发明的典型化合物的IC50值示于下面表3中：
表3
在表中“＞100”表示超过100μm
工业适用性
本发明提供了具有PBK抑制作用的新的7-羟基-苯并咪唑-4-基-甲酮衍 生物化合物。本发明的化合物可用于抑制PBK的药物组合物。所述药物组 合物适于治疗或者预防癌症。