蚯蚓复合多酶及其制备方法.pdf

一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含：多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。其制备方法以蚯蚓为材料，通过缓冲液低温保护匀浆，离心分离，洗涤，加硫酸铵沉淀分离，透析去除SO2-4，分子筛层析，超滤浓缩、低温真空干燥即得。纯化制备的复合多酶，在生物大分子分解、底物利用方面，具有高效、多功能的特点。本发明制备工艺方法成本低，复合多酶制剂活性高。可利用其中的全部酶或部分酶的功能，以达到相应的使用目的，应用广泛。

1、  一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含：多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。该复合多酶的制备工艺方法如下：
(1)将蚯蚓洗净，在摄氏5-15度，PH＝4-8的缓冲液中匀浆、搅拌，离心，弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度，保温2-4小时，冷却到5-15度，过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解，弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入Mg、Cu、Zn及保护剂，然后离心，弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液，离心收集沉淀；将上述沉淀溶解在缓冲液中，接着透析至无SO^2-₄。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥，即得。

2、  根椐权利要求1所述的从蚯蚓制备的复合多酶，其特征在于该复合多酶从蚯蚓制备，同时包含：多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶。

3、  根椐权利要求1所述的从蚯蚓制备的复合多酶制备方法，其特征在于步骤(4)上清液在搅拌下加入的保护剂为Mg、Cu、Zn。

蚯蚓复合多酶及其制备方法
技术领域
本发明提供一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含：多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。其制备包括蚯蚓处理、匀浆、离心分离、萃取、透析、分子筛层析等方法步骤。蚯蚓复合多酶可用于食品、饲料、化妆品、医药、生物制品、生物培养、动物养殖、生物工程等技术领域。
背景技术
现已公开的专利文献技术，还没有从蚯蚓制备的复合多酶。酶制剂在生物领域有广泛的用途，其来源、组成、目标、及制备工艺方法各有特点。蚯蚓复合多酶是从蚯蚓制备、富含多种酶类，特别是在生物大分子分解、底物综合利用方面，具有高效、多功能的特点。本发明提供的制备工艺方法成本低，复合多酶制剂活性高，应用广泛，具有重大的推广价值。
发明内容
本发明以蚯蚓，包括人工养殖、野生，鲜活或干制的蚯蚓，及其多酶体系为材料，制备、纯化成方便使用的复合多酶制剂，可利用其中的全部酶或部分酶的功能，以达到相应的使用目的。
该方法的制备步骤为：
(1)将蚯蚓洗净，在摄氏5-15度，PH＝4-8的缓冲液中匀浆、搅拌，离心，弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度，保温2-4小时，冷却到5-15度，过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解，弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂，然后离心，弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液，离心收集沉淀；将上述沉淀溶解在缓冲液中，接着透析至无SO^2-。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥，即得。
制备的复合多酶包含：多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。
具体实施方式
实施例一
(1)将鲜活蚯蚓洗净，在摄氏5-15度，PH＝4-8的缓冲液中匀浆、搅拌，离心，弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度，保温2-4小时，冷却到5-15度，过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解，弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂，然后离心，弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液，离心收集沉淀；将上述沉淀溶解在缓冲液中，接着透析至无SO^2-₄。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥，即得。
实施例二
(1)将风干的蚯蚓洗净，在摄氏10-15度浸泡4-6小时，在PH＝4-8的缓冲液中匀浆、搅拌，离心，弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度，保温2-4小时，冷却到5-15度，过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解，弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂，然后离心，弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液，离心收集沉淀；将上述沉淀溶解在缓冲液中，接着透析至无SO^2-₄。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥，即得。