一种喜树碱类药物脂质体组合物及其制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102961335 B (45)授权公告日 2014.07.23 CN 102961335 B (21)申请号 201210519662.0 (22)申请日 2012.12.06 A61K 9/127(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61K 47/48(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (73)专利权人 深圳海王药业有限公司 地址 518054 广东省深圳市南山区高新技术 北区朗山二路海王工业城 (72)发明人 杨经安 王志国 崔婧 李宁 王丽丽 (74)专利代理机构 深圳市百瑞专利商标事务所 ( 普通合伙 ) 。

2、44240 代理人 杨大庆 CN 1537534 A,2004.10.20, CN 1537534 A,2004.10.20, CN 102397254 A,2012.04.04, CN 1895223 A,2007.01.17, WO 2006052767 A2,2006.05.18, 黄毅 . 羟基喜树碱脂质体的研制及动物药代 动力学研究 .中国优秀硕士学位论文全文数据 库 医药卫生科技辑 .2005,( 第 01 期 ), (54) 发明名称 一种喜树碱类药物脂质体组合物及其制备方 法 (57) 摘要 一种喜树碱类药物脂质体组合物， 由下述重 量配比原料及辅料组成 ： 喜树碱类药物 52。

3、5 份、 磷脂 40100 份、 胆固醇 650 份、 维生素 E18 份、 氨基化合物10100份。 所述的喜树碱类药物脂质 体组合物的制备方法， 采用复乳化法和反相蒸发 法制备。氨基化合物水溶液对喜树碱类药物有增 溶作用， 通过分子间或离子键作用能够形成一种 水溶性复合物。复合物对生理 pH 稳定、 有较高的 溶液浓度， 将其包裹在脂质体内腔， 即可增加药物 的传递量， 也避免了内酯环型喜树碱类药物在体 内因 pH 和血浆蛋白的影响而大量开环泄露的问 题。 复合物稳定的被包裹在脂质体内， 通过脂质体 的靶向作用到达肿瘤部位， 然后在肿瘤细胞的酸 性条件下药物能够以内酯环形式发挥药效， 具有。

4、 增加药效和降低毒性的优点。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 耿锟锟 权利要求书 2 页 说明书 8 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书8页 附图3页 (10)授权公告号 CN 102961335 B CN 102961335 B 1/2 页 2 1. 一种喜树碱类药物脂质体组合物， 其特征在于 ： 由下述重量配比原料药及辅料组 成 ： 喜树碱类药物 525 份、 磷脂 40100 份、 胆固醇 650 份、 维生素 E 18 份、 氨基化合物 10100 份 ； 其中喜树碱类药物与氨基化合物形成脂质体水相的水溶液。

5、， 喜树碱类药物的分 子数与氨基化合物中单个氨基化合物分子的胺基个数比例为 1:11:10 ； 所述的喜树碱类药物为喜树碱、 10- 羟基喜树碱、 7- 乙基 -10- 羟基喜树碱、 伊立替康、 拓扑替康、 勒托替康中的至少一种 ； 所述的磷脂为大豆磷脂、 蛋黄卵磷脂、 氢化大豆磷脂中的至少一种 ； 所述的氨基化合物为葡甲胺、 赖氨酸中的至少一种。 2. 如权利要求 1 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 采用复乳化法， 包括 以下步骤 ： （1） 将磷脂、 胆固醇和维生素 E 共溶于有机溶剂中形成有机相， 有机溶剂选自氯仿、 二 氯甲烷、 乙醇或乙醚中的一种或两种的混合溶剂 ； （2。

6、） 在饱和的氨基化合物水溶液中， 按喜树碱类药物的分子数与氨基化合物中单个氨 基化合物分子的胺基个数为 1:11:10 的比例加入喜树碱类药物， 于 25100搅拌至澄 清， 冷至室温后作为水相 ； （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 1:120:1 混合， 800014000 转 / 分高速搅拌 15 分钟制得 W/O 初乳 ； （4） 快速将初乳倾入 1100 倍体积的纯化水， 以 10005000 转 / 分的转速搅拌 1030 分 钟二次乳化 ； （5） 减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； （6） 将混悬液用高压匀质机在 30120MPa 下。

7、均质 3 次， 冷至室温， 按重量比相对于 100 份均质混悬液加入 215 份冻干保护剂 ； （7） 超滤除菌， 灌装， 冷冻干燥后得到喜树碱类药物脂质体组合物成品。 3. 如权利要求 1 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 采用反相蒸发法， 包 括以下步骤 ： （1） 将磷脂、 胆固醇及维生素 E 溶于有机溶剂中形成有机相， 有机溶剂选自氯仿、 二氯 甲烷、 乙醇或乙醚中的一种或两者的混合溶剂 ； （2） 在饱和的氨基化合物水溶液中， 按喜树碱类药物的分子数与氨基化合物中单个氨 基化合物分子的胺基个数为 1:11:10 的比例加入喜树碱类药物， 于 25100C 搅拌至澄清， 冷至。

8、室温后作为水相 ； （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 1:18:1 以 5005000 转 / 分搅拌 110 分钟混合搅拌乳化 ； （4） 乳液转至旋转蒸发仪， 水浴温度为 3560C、 压力为 -0.06-0.02MPa， 蒸发有机溶 剂， 乳液先变成胶团状， 继续旋转胶团溶解即形成带乳光的脂质体混悬液 ； （5） 混悬液用高压匀质机在 30120MPa 下匀化 3 次， 冷至室温， 按重量比相对于 100 份 均质混悬液加入 215 份冻干保护剂 ； （6） 超滤除菌， 灌装， 冷冻干燥后得到喜树碱类药物脂质体组合物成品。 4. 如权利要求 2 或 3。

9、 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 其中所述的冻 干保护剂选自甘露醇、 山梨醇、 海藻糖、 蔗糖、 葡萄糖、 乳糖、 果糖、 右旋糖苷、 聚乙二醇和 PVP 权 利 要 求 书 CN 102961335 B 2 2/2 页 3 中的至少一种。 权 利 要 求 书 CN 102961335 B 3 1/8 页 4 一种喜树碱类药物脂质体组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及喜树碱类药物领域， 尤其涉及喜树碱类药物脂质体组合物及其制造方 法。 背景技术 0002 喜树碱是从我国特有的珙桐科植物喜树中提取的生物碱， 喜树碱及其衍生物能选 择性抑制拓扑异构酶干扰 DNA 的复制和。

10、转录， 从而达到杀伤细胞的作用。喜树碱类药物 的优点是抗癌谱广、 无交叉耐药， 对原发性肝癌、 胃癌、 头颈部表皮癌、 慢性粒细胞白血病、 直肠癌和膀胱癌等多种恶性肿瘤均有效。基于以上特点， 喜树碱类药物被看作是继紫杉醇 后在世界范围具有显著影响力的植物抗癌药。 0003 从分子结构看， 喜树碱类药物的母体结构由处于同一平面的 A、 B、 C、 D、 E 五环构 成， 其中 AB 环为喹啉环， C 环为吡咯环， D 环为吡啶环， E 环为羟基内酯环。羟基内酯环是该 类药物的抗癌活性中心， 但其结构不稳定， 对热、 光、 碱等敏感， 在 pH7 或以上时大部分的内 酯结构开环变成羟基羧酸盐， 活。

11、性显著降低， 副作用增加。通常， 喜树碱类药物还呈现出快 速分布消除的药动学特征， 半衰期只有几分钟或几十分钟， 需要反复给药或延长疗程。 上述 问题的存在一定程度上影响了喜树碱类药物的临床使用。 0004 采用脂质体技术解决喜树碱类药物的上述问题的研究已有较多的文献和专利， 因 为脂质体在改善喜树碱类药物的药动学特征和肿瘤靶向性方面具有潜在优势， 而且在制剂 的安全性和稳定性方面比乳剂、 纳米粒等纳米给药系统更好。目前， 已有的专利大多关注 的是保护喜树碱类药物的内酯环， 如中国专利 （申请号 ： 200310112772.6） 喜树碱、 羟基 喜树碱脂质组合物及其制备方法 ， 该发明涉及的。

12、为抗癌药喜树碱、 羟基喜树碱脂质组合物 及其制备方法。喜树碱、 羟基喜树碱脂质组合物优点在于既可解决主药水不溶性， 同时， 又 可保护主药化学结构中活性功能团 内酯不使开环而影响疗效。又如中国专利 （申请号 ： 200410084647.3） 10- 羟基喜树碱长循环脂质体及其冻干制剂 ， 该发明属药物制剂领域， 涉及 10- 羟基喜树碱长循环脂质体， 长循环脂质体的冻干制剂及其制备方法。该发明公开 了该制剂的可工业化实施的方法， 用卵磷脂、 大豆磷脂或氢化卵磷脂和 PEG 修饰的脂质为 膜材， 用胆固醇作稳定剂， 用海藻糖或蔗糖作冻干保护剂， 用乙醇和二氯甲烷作溶剂。该发 明 10- 羟基喜。

13、树碱长循环脂质体制剂具有良好抗癌作用， 其毒性小、 病人耐受性好、 水溶性 及稳定性提高、 相对成本较低。 0005 上述两个专利文献中， 采用的技术是将喜树碱类药物镶嵌在磷脂双分子层中制备 成脂质体。由于喜树碱类药物水难溶脂难溶且在通常的溶剂中溶解度有限， 因此上述技术 制备的脂质体的载药量较小， 难以达到临床要求的剂量。 事实上， 喜树碱类药物的开环与闭 环是可逆的， 当 pH 5 时喜树碱类药物主要是以闭环形式存在 ； 细胞内的 pH 在 5 左右， 细 胞内有条件将开环的喜树碱类药物转化成闭环的活性形式。 因为开环的喜树碱类药物水溶 性好， 可以制成较高的浓度， 所以将药物包载在脂质体。

14、内水相可以提高喜树碱类药物的载 药量， 然后通过脂质体的靶向作用在肿瘤部位转化成内酯获得更强的药效。 但是， 另一个值 说 明 书 CN 102961335 B 4 2/8 页 5 得注意的问题是， 我们必须保证脂质体内的药物能够稳定的被包裹在脂质体中， 在到达肿 瘤部位前不会将药物泄漏。研究表明， 喜树碱类药物开环后的羟基羧酸盐与血浆蛋白的结 合能力非常强， 导致喜树碱类药物脂质体产生突释 Influence of serum and albumins from different species on stability of camptothecin-loaded micelles （ 。

15、Journal of Controlled Release,Volume104,Issue2,18May2005,Pages313321 ） 和 羟基喜树碱脂 质体的制备及质量评价研究 （ 药学与临床研究 2008 年第 4 期 4 页 274-277 页） ， 药物 很快被清除， 往往难以到达肿瘤部位发挥药效。 目前， 提高喜树碱类药物在脂质体中的载药 量并保证药物在脂质体中的稳定是领域内研究的重点。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种具有高效稳定特征的喜树碱类抗癌药物的脂质体组合 物， 可直接用生理盐水或葡萄糖溶液分散供静脉给药。 0007 进一步说， 本发明提供的高效稳定的喜树碱。

16、类药物脂质体组合物是通过将喜树碱 类药物分散到氨基化合物溶液中， 两者通过分子间或离子键作用形成水溶性的药物复合 物， 然后将该药物复合物溶液包裹在脂质体内腔。 该药物复合物可以形成较高的溶液浓度， 相比其难溶性的内酯环形式而言在单位脂质体制剂中被包载的药量可增加 12 倍， 具有较 高的传递剂量。因为喜树碱类药物的内酯环在生理 pH 下容易开环， 且开环产物与血浆蛋白 具有很强的亲和性， 所以内酯环型的喜树碱类药物被包载在脂质体中应用到体内时开环平 衡被破坏导致泄漏严重。本发明的脂质体内腔包裹的药物 - 氨基复合物不易穿过脂质体的 磷脂双分子层、 对生理 pH 稳定、 药物复合物的解离平衡在。

17、体内能够保持稳定。因此本发明 的脂质体在体内时具有稳定不易泄漏的特点， 从而保证了脂质体将高剂量的药物靶向传递 至肿瘤部位， 然后在肿瘤细胞的酸性条件下药物能够转变成内酯环活性形式发挥药效。通 过以上所述的技术手段， 本发明的脂质体不仅具有体内高效稳定的特点， 另外还可以降低 抗癌药物的毒副作用， 具有良好的临床价值。 0008 本发明的另一目的是提供了制备上述高效稳定喜树碱类药物脂质体的制备方法。 通过采用复乳化法或反相蒸发法生产脂质体， 可以实现几升至上百升的规模化工业生产。 0009 本发明的目的通过以下技术方案实现 ： 0010 一种喜树碱类药物脂质体组合物， 由下述重量配比原料及辅料。

18、组成 ： 喜树碱类药 物 525 份、 磷脂 40100 份、 胆固醇 650 份、 维生素 E18 份、 氨基化合物 10100 份。 0011 所述的喜树碱类药物为同类的喜树碱、 10- 羟基喜树碱、 7- 乙基 -10- 羟基喜树碱 的至少一种， 或同类的伊立替康、 拓扑替康、 勒托替康中的至少一种。 0012 所述的磷脂为大豆磷脂、 蛋黄卵磷脂、 氢化大豆磷脂中的至少一种。 0013 所述的氨基化合物为葡甲胺、 甘氨酸、 丙氨酸、 丝氨酸、 精氨酸、 赖氨酸、 壳聚糖、 水 溶性壳聚糖衍生物、 聚乙烯亚胺及其衍生物、 PAMAM 及其衍生物中的至少一种。 0014 所述的氨基化合物为葡。

19、甲胺、 赖氨酸中的至少一种。 0015 所述的任一喜树碱类药物脂质体组合物， 其特征在于 ： 所述的脂质体水相为喜树 碱类药物与氨基化合物形成的水溶液 ； 喜树碱类药物的分子数与氨基化合物中单个氨基化 合物分子的胺基个数比例为 1:11:10。 0016 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 采用复乳化法， 包括以下步骤 ： 说 明 书 CN 102961335 B 5 3/8 页 6 0017 （1） 将磷脂、 胆固醇和维生素 E 共溶于有机溶剂， 如氯仿、 二氯甲烷、 乙醇或乙醚中 的一种或两种的混合溶剂中形成有机相， ； 0018 （2） 在饱和的氨基化合物水溶液中， 按喜树碱类药。

20、物的分子数与氨基化合物中单 个氨基化合物分子的胺基个数为 1:11:10 的比例加入喜树碱类药物， 于 25100搅拌至 澄清， 冷至室温后作为水相 ； 0019 （3）将步骤 （1）和步骤 （2）的溶液按有机相和水相体积比为 1:120:1 混合， 800014000 转 / 分高速搅拌 15 分钟制得 W/O 初乳 ； 0020 （4）快速将初乳倾入 1100 倍体积的纯化水， 以 10005000 转 / 分的转速搅拌 1030 分钟二次乳化 ； 0021 （5） 减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； 0022 （6） 将混悬液用高压匀质机在 30120MPa 下均质 3 次， 。

21、冷至室温， 加入与占脂质体 溶液质量百分比为 215% 的冻干保护剂 ； 0023 （7） 超滤除菌， 灌装， 冷冻干燥后得到喜树碱类药物脂质体组合物成品。 0024 其中所述的步骤 （6） 的冻干保护剂选自甘露醇、 山梨醇、 海藻糖、 蔗糖、 葡萄糖、 乳 糖、 果糖、 右旋糖苷、 聚乙二醇和 PVP 中的至少一种。 0025 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 采用反相蒸发法， 包括以下步 骤 ： 0026 （ （1） 将磷脂、 胆固醇及维生素 E 溶于有机溶剂， 如氯仿、 二氯甲烷、 乙醇或乙醚中 的一种或两者的混合溶剂中形成有机相 ； 0027 （2） 在饱和的氨基化合物水溶液。

22、中， 按喜树碱类药物的分子数与氨基化合物中单 个氨基化合物分子的胺基个数为1:11:10的比例加入喜树碱类药物， 于25100C搅拌至 澄清， 冷至室温后作为水相 ； 0028 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 1:18:1 以 5005000 转 / 分搅拌 110 分钟混合搅拌乳化 ； 0029 （4） 乳液转至旋转蒸发仪， 水浴温度为 3560 C、 压力为 -0.06-0.02MPa， 蒸发有 机溶剂， 乳液先变成胶团状， 继续旋转胶团溶解即形成带乳光的脂质体混悬液 ； 0030 （5） 混悬液用高压匀质机在 30120MPa 下匀化 3 次， 冷至。

23、室温， 加入与占脂质体溶 液质量百分比为 215% 的冻干保护剂 ； 0031 （6） 超滤除菌， 灌装， 冷冻干燥后得到喜树碱类药物脂质体组合物成品。 0032 所述的喜树碱类药物脂质体组合物的制备方法， 其中所述的步骤 （6） 的冻干保护 剂选自甘露醇、 山梨醇、 海藻糖、 蔗糖、 葡萄糖、 乳糖、 果糖、 右旋糖苷、 聚乙二醇和 PVP 中的 至少一种。 附图说明 0033 图 1 为采用复乳化法制备喜树碱类药物脂质体组合物的流程图。 0034 图 2 为采用反相蒸发法制备喜树碱类药物脂质体组合物的流程图。 0035 图3是本发明制备的脂质体与按普通薄膜分散法制备的10-羟基喜树碱脂质体。

24、分 别在 pH7.4 的 PBS 和含 0.5% 人源血浆的 pH7.4PBS 中的释放曲线图。 0036 图 4 本发明制备的脂质体与市售制剂、 薄膜法脂质体的大鼠体内血药浓度 - 时间 说 明 书 CN 102961335 B 6 4/8 页 7 曲线对比图。 具体实施方式 0037 实施例 1、 采用复乳化法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0038 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用复乳化法， 包括以下步骤 ： 0039 （1） 大豆磷脂 56g、 胆固醇 8g 和维生素 E2.8g 共溶于适量二氯甲烷溶剂中， 作为有 机相 ； 0040 （2） 25mL 饱和葡甲胺溶液中加入 10- 。

25、羟基喜树碱 5g， 于 50搅拌至澄清， 冷至室 温作为水相 ； 0041 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 2:1 混合， 8000 转 / 分 高速搅拌 1 分钟制得 W/O 初乳 ； 0042 （4） 快速将 W/O 初乳倾入 450ml 注射用水二次乳化， 以 5000 转 / 分的转速搅拌 10 分钟 ； 0043 （5） 在旋转蒸发仪上， 以 35恒温减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； 0044 （6） 将混悬液用高压匀质机在 75MPa 下均质 3 次， 冷至室温， 加入葡萄糖 15g 溶解 在混悬液中， 加入注射用水调整体积为 50。

26、0mL ； 0045 （7） 超滤除菌， 滤液按 2mL/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0046 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径为 160nm， 包封率为 87%。 0047 实施例 2、 采用复乳化法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0048 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用复乳化法， 包括以下步骤 ： 0049 （1） 氢化大豆磷脂 72g、 胆固醇 33g 和维生素 E1.0g 共溶于适量二氯甲烷溶剂中， 作为有机相 ； 0050 （2） 在 50mL 饱和葡甲胺水溶液中加入 。

27、10- 羟基喜树碱 9.0g， 于 50搅拌至澄清， 冷至室温作为水相 ； 0051 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 10:1 混合， 14000 转 / 分高速搅拌 1 分钟制得 W/O 初乳 ； 0052 （4） 快速将 W/O 初乳倾入 4L 注射用水二次乳化， 以 5000 转 / 分的转速搅拌 30 分 钟 ； 0053 （5） 在旋转蒸发仪上， 以 60恒温减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； 0054 （6） 将混悬液用高压匀质机在 75MPa 下均质 3 次， 冷至室温， 加入甘露醇 255g 溶解 在混悬液中， 加注射用水调节体积。

28、至 5L ； 0055 （7） 超滤除菌， 滤液按 2mL/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0056 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径为 85nm， 包封率为 95%。 0057 实施例 3、 采用复乳化法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0058 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用复乳化法， 包括以下步骤 ： 说 明 书 CN 102961335 B 7 5/8 页 8 0059 （1） 蛋黄卵磷脂 48g、 胆固醇 15g 和维生素 E2.5g 共溶于适量二氯甲烷溶剂中， 作 为有机相。

29、 ； 0060 （2） 在 20mL 饱和葡甲胺水溶液中加入伊立替康 5g， 于 50搅拌至澄清， 冷至室温 作为水相 ； 0061 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 5:1 混合， 8000 转 / 分 高速搅拌 1 分钟制得 W/O 初乳 ； 0062 （4） 快速将 W/O 初乳倾入 450mL 注射用水二次乳化， 以 5000 转 / 分的转速搅拌 10 分钟 ； 0063 （5） 在旋转蒸发仪上， 以 35恒温减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； 0064 （6） 将混悬液用高压匀质机在 75MPa 下均质 3 次， 冷至室温， 加入葡萄糖。

30、 50g 溶解 在混悬液中 , 加注射用水调节体积至 500mL ； 0065 （7） 超滤除菌， 滤液按 2ml/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0066 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径为 175nm， 包封率为 85%。 0067 实施例 4、 采用复乳化法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0068 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用复乳化法， 包括以下步骤 ： 0069 （1） 大豆磷脂 60g、 胆固醇 10g 和维生素 E6g 共溶于适量二氯甲烷溶剂中， 作为有 机相 ； 00。

31、70 （2） 在 10mL 饱和赖氨酸水溶液中加入 10- 羟基喜树碱 10g， 于 60搅拌至澄清， 冷 至室温作为水相 ； 0071 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 10:1 混合， 8000 转 / 分高速搅拌 1 分钟制得 W/O 初乳 ； 0072 （4） 快速将 W/O 初乳倾入 450mL 注射用水二次乳化， 以 5000 转 / 分的转速搅拌 10 分钟 ； 0073 （5） 在旋转蒸发仪上， 以 35恒温减压蒸发除去有机溶剂， 形成脂质体混悬液 ； 0074 （6） 将混悬液用高压匀质机在 75MPa 下均质 3 次， 冷至室温， 加入甘。

32、露醇 30g 溶解 在混悬液中， 加入注射用水调节体积至 500mL ； 0075 （7） 超滤除菌， 滤液按 2ml/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0076 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径为 205nm， 包封率为 82%。 0077 实施例 5、 采用反相蒸发法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0078 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用反相蒸发法， 包括以下步骤 ： 0079 （1） 将氢化大豆磷脂 75g、 胆固醇 20g 及维生素 E1.5g 溶于适量二氯甲烷溶剂中形 成有机。

33、相 ； 0080 （2） 80mL 葡甲胺饱和溶液中加入 10- 羟基喜树碱 15g 于 50 C 搅拌至澄清 ； 0081 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相与水相体积比为 1:1 混合， 5000 转 / 分 搅拌 1 分混合搅拌乳化 ； 说 明 书 CN 102961335 B 8 6/8 页 9 0082 （4） 乳液转至旋转蒸发仪， 水浴温度为 60 C、 压力为 -0.06-0.02MPa， 蒸发有机 溶剂， 乳液先变成胶团状， 继续旋转胶团溶解即形成带乳光的脂质体混悬液 ； 0083 （5） 混悬液用高压匀质机在120MPa下匀化3次， 冷至室温， 加入冻干保。

34、护剂葡萄糖 15g， 加入注射用水调节体积至 500mL ； 0084 （6） 超滤除菌， 滤液按 2ml/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0085 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径约为 145nm， 包封率为 85%。 0086 实施例 6、 采用反相蒸发法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0087 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用反相蒸发法， 包括以下步骤 ： 0088 （1） 将蛋黄卵磷脂 100g、 胆固醇 50g 及维生素 E3g 溶于适量二氯甲烷溶剂中形成 有机相 ； 008。

35、9 （2） 20mL 赖氨酸饱和溶液中加入 10- 羟基喜树碱 10g 于 60 C 搅拌至澄清， 冷至 室温作为水相 ； 0090 （3） 将步骤 （1） 和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 8:1 以 2000 转 / 分搅 拌 1 分钟混合搅拌乳化 ； 0091 （4） 乳液转至旋转蒸发仪， 水浴温度为 60 C、 压力为 -0.06-0.02MPa， 蒸发有机 溶剂， 乳液先变成胶团状， 继续旋转胶团溶解即形成带乳光的脂质体混悬液 ； 0092 （5） 混悬液用高压匀质机在120MPa下匀化3次， 冷至室温， 加入冻干保护剂甘露醇 150g， 加注射用水调节体积至 1.5L 。

36、； 0093 （6） 超滤除菌， 滤液按 2ml/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0094 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径约为 120nm， 包封率为 87%。 0095 实施例 7、 采用反相蒸发法制备喜树碱类药物脂质体组合物 0096 （1） 将大豆磷脂 80g、 胆固醇 20g 及维生素 E4g 溶于二氯甲烷溶剂中形成有机相 ； 0097 （2） 30mL 赖氨酸饱和溶液中加入拓扑替康 15g 于 60 C 搅拌至澄清， 冷至室温作 为水相 ； 0098 （3） 将步骤 （1） 。

37、和步骤 （2） 的溶液按有机相和水相体积比为 5:1 以 5000 转 / 分搅 拌 1 分钟混合搅拌乳化 ； 0099 （4） 乳液转至旋转蒸发仪， 水浴温度为 60 C、 压力为 -0.06-0.02MPa， 蒸发有机 溶剂， 乳液先变成胶团状， 继续旋转胶团溶解即形成带乳光的脂质体混悬液 ； 0100 （5） 混悬液用高压匀质机在120MPa下匀化3次， 冷至室温， 加入冻干保护剂甘露醇 75g， 加注射用水调节体积至 1L ； 0101 （6） 超滤除菌， 滤液按 2ml/ 瓶在无菌条件下， 灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄 色疏松块状脂质体制剂。 0102 每瓶冻干脂质体用5mL。

38、注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径约为 130nm， 包封率为 90%。 0103 对比试验实施例 1 说 明 书 CN 102961335 B 9 7/8 页 10 0104 制备喜树碱类药物脂质体组合物， 采用普通膜分散法， 包括以下步骤 ： 0105 （1） 10- 羟基喜树碱 5g、 氢化大豆磷脂 150g、 胆固醇 10g 和维生素 E1.0g 共溶于适 量的二氯甲烷 - 乙醇 （5:1,v/v) 混合溶剂， 置旋转蒸发仪上 ; 0106 （2） 于 60 C 下， 压力为 -0.06-0.02MPa 旋干成膜， 再提高负压抽干残余的溶剂， 用 50。

39、0mL 注射用水洗脱脂质膜， 保温进行水合， 充分水合即得到脂质体混悬液 ； 0107 （3） 将混悬液用高压匀质机在 75MPa 下匀化 3 次， 冷至室温， 加入葡萄糖 12.5g 溶 解在脂质体溶液中 ； 0108 （4） 超滤除菌， 滤液按 2mL/ 瓶在无菌条件下灌封于西林瓶， 冷冻干燥， 即得浅黄色 疏松块状脂质体制剂。 0109 每瓶冻干脂质体用5mL注射用水复溶， 手振摇10余次， 可快速分散成脂质体溶液， 平均粒径约为 240nm， 包封率为 57%。 0110 试验方法 ： 分别取一定量的按本发明制备的和按普通薄膜分散法制备的 10- 羟基 喜树碱脂质体冻干粉末加到透析袋中。

40、， 扎紧袋口 ； 然后按中国药典 2010 版转篮法， 将装药 透析袋装入转篮， 分别以 900mL pH7.4 的 PBS 和添加了 0.5% 人源血浆的 pH7.4PBS 作溶出 介质模拟考察脂质体制剂在体内的释放行为。 结果见附图3， 其中实线表示按本发明方法制 备的脂质体冻干粉的释放曲线， 虚线则表示按普通薄膜分散法制备的脂质体冻干粉的释放 曲线。对比研究表明， 按本发明方法制备的脂质稳定性良好， 不易泄漏， 而按普通的薄膜分 散法制备的 10- 羟基喜树碱脂质体较容易泄漏， 不利于药效的发挥。 0111 对比试验实施例 2 0112 本发明方法脂质体与市售制剂、 薄膜法脂质体的大鼠体。

41、内血药浓度 - 时间曲线对 比分析 0113 试验方法 ： 将体重为 22020g 的 SOD 雄性大鼠随机分成三组， 按 10mg/kg 剂量尾 静脉注射分别给予 10- 羟基喜树碱的本发明法脂质体、 10- 羟基喜树碱的市售制剂 （拓喜， 武汉李时珍药业有限公司） 和 10- 羟基喜树碱的薄膜法自制脂质体三种受试制剂， 分别在 0.083、 0.25、 0.5、 0.75、 1.5、 2.5、 4、 6、 8、 12h 等时间点眼静脉丛取血 200L（每个时间点 6 只大鼠， n=6） ， 离心取上层血浆， HPLC 法分析血浆中的 10- 羟基喜树碱的浓度， 绘制血浆药 物浓度 - 时间。

42、曲线。以二房室模型拟合血药浓度时间曲线， 计算主要药动学参数。 0114 表 1 三种制剂的主要药动学参数 （n=6） 0115 说 明 书 CN 102961335 B 10 8/8 页 11 0116 如附图 4 本发明制备的脂质体与市售制剂、 薄膜法脂质体的大鼠体内血药浓 度-时间曲线对比图， 及表1三种制剂的主要药动学参数 （n=6） ； 结果可知， 本发明脂质体制 剂的 AUC 较市售制剂提高了约 5 倍， MRT 提高了约 6 倍， 其消除速率相比降低了约 5 倍。与 薄膜法自制脂质体相比， 本发明制备的脂质体 AUC 和 MRT 提高了 2-3 倍， 消除速率降低了约 2 倍。综上， 本发明所述配方和制备方法得到的脂质体组合物制剂具有长效循环作用。 说 明 书 CN 102961335 B 11 1/3 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 102961335 B 12 2/3 页 13 图 2 说 明 书 附 图 CN 102961335 B 13 3/3 页 14 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102961335 B 14 。