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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610020138.7 (22)申请日 2014.01.02 201410000841.2 2014.01.02 A61K 36/8984(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (71)申请人 青岛华之草医药科技有限公司 地址 266000 山东省青岛市黄岛区峨眉山路 396 号青岛光谷软件园 1.5 区 (72)发明人 刘成侠 张靖 (54) 发明名称 一种中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮 的药物中的应用 (57) 摘要 本发明公开了一种中药组合物在制备治疗系 统性红斑狼疮的药物中的应用， 涉及中医药技术 领。
2、域。该中药组合物以青蒿、 牡丹皮、 淫羊藿、 石 斛、 牛膝、 莲子心、 鸡血藤、 陈皮、 丹参、 金银花、 赤 芍、 茯苓、 半夏、 党参、 车前子、 玄参为原料制得。 本 发明中的中药组合物减轻系统性红斑狼疮患者的 痛苦， 该治疗药物具有显著的调节 T 细胞亚群活 性， 其疗效显著、 安全可靠， 具有广阔的临床应用 前景。 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 CN 105521302 A 2016.04.27 CN 105521302 A 1.一种中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的。
3、应用， 其特征在于所述中药 组合物由如下重量份的原料制得： 青蒿10份、 牡丹皮5份、 淫羊藿6份、 石斛3份、 牛膝10份、 莲 子心10份、 鸡血藤3份、 陈皮3份、 丹参10份、 金银花8份、 赤芍6份、 茯苓10份、 半夏10份、 党参 10份、 车前子12份、 玄参9份。 2.如权利要求1所述中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用， 其特征 在于： 所述中药组合物由如下步骤制得： 按重量份称取中药材原料碎成粗粉， 按照粗粉总重 量的49倍加入体积浓度为40%95%的乙醇溶液， 回流提取三次， 回流时间为25h， 滤过， 滤液回收乙醇， 冷却过滤， 用水洗涤， 干燥后即得中药。
4、浸膏； 在该中药浸膏基础上制备得到 临床上常用中药药物剂型。 3.如权利要求1所述中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用， 其特征 在于： 所述的中药组合物为散剂、 水剂、 片剂或胶囊剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105521302 A 2 一种中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用 0001 本申请是申请人王雪雁提出的发明专利申请 （发明名称为： 一种治疗系统性红斑 狼疮的中药组合物， 申请号为： 2014100008412， 申请日为： 2014年1月2日） 的分案申请。 技术领域 0002 本发明属于医药技术领域， 涉及一种中药组合物在制备治疗系统性。
5、红斑狼疮的药 物中的应用。 背景技术 0003 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus； SLE)是一种弥漫性、 全身性自 身免疫病， 主要累及皮肤粘膜、 骨骼肌肉、 肾脏及中枢神经系统， 同时还可能累及肺、 心脏、 血液等多个器官和系统， 表现出多种临床表现， 其病因及发病机理尚不明确， 系统性红斑狼 疮患者血清中可检测到多种自身抗体和免疫学异常， 淋巴细胞功能异常及多种细胞因子分 泌失衡在该病的发生发展中起重要作用， 有研究证实系统性红斑狼疮病人外周血中CD3+ CD4+T细胞下降， CD3+CD8+T上升， IL-10水平上调， 其中IL-10作为Th类。
6、细胞因子的代表在 SLE发病机制中倍受关注。 白介素是一大类非均一的调节细胞生长、 分化、 介导信号传递的 多肽类， IL-10在系统性红斑狼疮研究中较受关注。 IL-10是一个多效性细胞因子， 具有免疫 刺激和免疫抑制双重作用， 其免疫刺激作用主要是提高B细胞的存活率， 促进B细胞的增殖、 MHC-类抗原表达以及抗体的分泌。 有研究表明IL-10可以刺激系统性红斑狼疮患者PBMCs 产生抗dsDNA抗体， 系统性红斑狼疮患者无论在活动期还是缓解期， 其体内IL-l0水平始终 高于正常人。 0004 系统性红斑狼疮目前尚无根治办法， 很多患者需要长期甚至终身治疗。 西医治系 统性红斑狼疮多采用。
7、激素的疗法， 激素治系统性红斑狼疮具有卓著的疗效， 但激素具有相 当大的副作用， 长期大量的使用激素不利于患者的身心健康， 不仅如此， 激素的减停极有可 能导致病情加重。 中医治系统性红斑狼疮多采用中药调剂的办法， 中药调剂治系统性红斑 狼疮虽具有卓著疗效， 但疗效仅停留在缓解症状侧面上， 很难从根本上对系统性红斑狼疮 进行治疗， 中医治系统性红斑狼疮是一个长期的过程， 一般坚持治疗半年后才看到疗效。 因 此， 目前系统性红斑狼疮的治疗方法都存在一定局限性。 寻找一种新的有效药物来治疗系 统性红斑狼疮患者有非常重要的意义。 发明内容 0005 为了弥补现有技术的不足， 减轻系统性红斑狼疮患者的。
8、痛苦， 本发明提供了一种 治疗系统性红斑狼疮的中药组合物其疗效显著、 安全可靠， 具有广阔的临床应用前景。 0006 本发明的技术方案为： 一种治疗系统性红斑狼疮的中药组合物， 该中药组合物由下列重量份的原料制成： 青 蒿10-12份、 丹皮5-8份、 淫羊藿6-9份、 石斛3-5份、 怀牛膝10-12份、 莲心10-12份、 鸡血藤3-5 份、 陈皮3-5份、 丹参10-12份、 金银花8-10份、 赤芍6-9份、 茯苓10-12份、 半夏10-12份、 党参 说 明 书 1/6 页 3 CN 105521302 A 3 10-12份、 车前子12-15份、 玄参9-12份。 0007 上述。
9、所述的中药组合物中， 还可以含有甘草5-8份和女贞子12-15份。 该两种中药 可以进一步增强本发明上述中药组合物的治疗效果。 0008 本发明还请求保护上述中药组合物在制备治疗系统性红斑狼疮药物中的用途。 本 发明药效实施例7显示， 在T淋巴细胞亚群分析试验中， 与SLE模型组相比， 本发明能使SLE样 小鼠下降的CD3+CD4+T细胞上升， 使上升的CD3+CD8+T下降， 纠正T细胞亚群的失衡状态； 在 血清IL-10、 抗ds-DNA抗体含量测定试验中， 与SLE模型组相比， 本发明能显著降低SLE小鼠 血清IL-10和抗ds-DNA抗体水平的升高， 其中中药组合物中剂量组与正常对照组。
10、无显著性 差异， 说明本发明的药物对于SLE小鼠治疗效果显著； 在尿微量白蛋白的测定试验中， SLE模 型组白蛋白含量明显升高， 反映SLE小鼠肾脏有损伤， 本发明能显著降低SLE小鼠尿液中白 蛋白的含量， 中药组合物低、 中剂量组效果尤为显著， 优于阳性药， 并且中药组合物低、 中剂 量组与正常对照组无显著性差异， 表明本发明的药物对于SLE小鼠肾脏损伤具有突出的治 疗效果。 0009 为了更好地表达本发明的中药组合物， 本发明的中药组合物可以制备成临床上常 用的剂型。 比如， 粉状制剂、 散剂、 丸剂、 丹剂、 膏剂、 颗粒剂、 口服液、 糖浆、 片剂、 胶囊剂等制 剂， 所述药物制剂均可。
11、按照本领域技术人员所熟知的中药制剂制备方法制备得到。 优选地， 本发明中药组合物按照常规制备工艺制备成散剂、 水剂、 片剂或胶囊剂。 0010 本发明还提供了一种上述所述中药组合物的制备方法， 其主要包含下述步骤： 取 处方量上述中药材碎成粗粉， 按照粗粉总重量的4-9倍加入体积浓度为40%-95%的乙醇溶 液， 回流提取三次， 回流时间为2-5h， 滤过， 滤液回收乙醇， 冷却过滤， 用水洗涤， 干燥后即得 中药浸膏； 本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到临床上常用中药药物剂型， 如 片剂、 胶囊剂等。 0011 本发明中药组合物在治疗系统性红斑狼疮方面， 与现有技术相比具有如下优势：。
12、 1) 与当前治疗的化学治疗药物相比， 本发明中药组合物为天然纯中药制剂， 不良反应 和副作用显著降低， 且本发明中药组合物作用全面， 药物治疗效果更佳， 并提高了患者的生 活质量。 0012 2) 本发明中药组合物中含有多种药物组分， 作用靶点众多， 药理实验显示其与现 有的系统性红斑狼疮治疗药物在治疗方面具有显著的协同作用， 并且可以大幅度减少系统 性红斑狼疮并发症， 提高病人的用药依从性。 具体实施方式 0013 以下通过具体实施例进一步描述本发明， 但本领域技术人员应该知晓， 所述实施 例并不以任何方式限制本发明。 0014 一)制剂实施例部分 实施例1 本发明中药组合物及制备工艺 中。
13、药组分的重量份： 青蒿10份、 丹皮5份、 淫羊藿6份、 石斛3份、 怀牛膝10份、 莲心10份、 鸡血藤3份、 陈皮3份、 丹参10份、 金银花8份、 赤芍6份、 茯苓10份、 半夏10份、 党参10份、 车前 子12份、 玄参9份。 0015 取处方量上述中药材碎成粗粉， 按照粗粉总重量的4-9倍加入体积浓度为40%-95% 说 明 书 2/6 页 4 CN 105521302 A 4 的乙醇溶液， 回流提取三次， 回流时间为2-5h， 滤过， 滤液回收乙醇， 冷却过滤， 用水洗涤， 干 燥后即得中药浸膏； 本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到临床上常用中药药物 剂型， 如片剂、 胶。
14、囊剂等。 0016 实施例2 本发明中药组合物及制备工艺 中药组分的重量份： 青蒿12份、 丹皮8份、 淫羊藿9份、 石斛5份、 怀牛膝12份、 莲心12份、 鸡血藤5份、 陈皮5份、 丹参12份、 金银花10份、 赤芍9份、 茯苓12份、 半夏12份、 党参12份、 车前 子15份、 玄参12份。 0017 制备工艺同实施例1。 0018 实施例3 本发明中药组合物及制备工艺 中药组分的重量份： 青蒿11份、 丹皮7份、 淫羊藿7份、 石斛4份、 怀牛膝11份、 莲心11份、 鸡血藤4份、 陈皮4份、 丹参11份、 金银花9份、 赤芍8份、 茯苓11份、 半夏11份、 党参11份、 车前 子。
15、13份、 玄参10份。 0019 制备工艺同实施例1。 0020 实施例4 本发明中药组合物及制备工艺 中药组分的重量份： 青蒿10份、 丹皮5份、 淫羊藿6份、 石斛3份、 怀牛膝10份、 莲心10份、 鸡血藤3份、 陈皮3份、 丹参10份、 金银花8份、 赤芍6份、 茯苓10份、 半夏10份、 党参10份、 车前 子12份、 玄参9份、 甘草5份、 女贞子13份。 0021 制备工艺同实施例1。 0022 实施例5 本发明中药组合物及制备工艺 中药组分的重量份： 青蒿12份、 丹皮8份、 淫羊藿9份、 石斛5份、 怀牛膝12份、 莲心12份、 鸡血藤5份、 陈皮5份、 丹参12份、 金银花。
16、10份、 赤芍9份、 茯苓12份、 半夏12份、 党参12份、 车前 子15份、 玄参12份、 甘草8份、 女贞子12份。 0023 制备工艺同实施例1。 0024 实施例6 本发明中药组合物及制备工艺 中药组分的重量份： 青蒿11份、 丹皮7份、 淫羊藿7份、 石斛4份、 怀牛膝11份、 莲心11份、 鸡血藤4份、 陈皮4份、 丹参11份、 金银花9份、 赤芍8份、 茯苓11份、 半夏11份、 党参11份、 车前 子13份、 玄参10份、 甘草6份、 女贞子15份。 0025 制备工艺同实施例1。 0026 （二） 药效实施例部分 实施例7 中药组合物注射剂对系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠。
17、的影响 1.试验材料 1.1实验动物及分组 8周龄系统性红斑狼疮 （SLE） MRL/lpr小鼠50只， 雌性， 由上海斯莱克实验动物有限公司 提供， 适应性饲养一周后， 按体重随机分为5组， 每组10只。 ICR小鼠10只， 雌性， 作为正常对 照组小鼠。 0027 正常对照组： 灌胃给予溶剂； SLE模型组： 灌胃给予溶剂； 泼尼松组： 灌胃给予5mg/kg； 中药组合物低剂量组： 灌胃给予本发明实施例1制备的药物0.5mg/kg； 说 明 书 3/6 页 5 CN 105521302 A 5 中药组合物中剂量组： 灌胃给予本发明实施例1制备的药物1mg/kg； 中药组合物高剂量组： 灌胃。
18、给予本发明实施例1制备的药物4mg/kg。 0028 所有试验组每天给药1次， 连续给药3周， 于给药结束时取血备用， 摘取脾脏。 0029 1.2 试剂 （1） IL-10、 抗ds-DNA抗体试剂盒购自上海柯丰生物试剂有限公司。 0030 （2） PBS： 称取下列试剂8.5g NaCl， 0.2g KCl， 2.85g Na2HPO412H2O， 0.27g KH2PO4， 用1L双蒸水定容， 以上试剂均是为市售分析纯。 0031 （3） 红细胞裂解液： 先配制0.83%NH4Cl， 再配制tris溶液(称取tris 20.594g溶于 500-700ml蒸馏水中， 再用1M HCl调p。
19、H 7.65至1L)， 把0.83%NH4Cl与tris 溶液按9:1比例混 合后即得。 0032 （4） 抗小鼠荧光标记单克隆抗体CD3 （FITC） ， 为Beckman Coulter公司产品。 0033 （5） 抗小鼠荧光标记单克隆抗体CD4 （PE） 、 CD8a （PE） ， Caltag laboratories产品。 0034 实验方法 2.1 T淋巴细胞亚群分析 脾细胞单细胞悬液的制备： 把小鼠的脾脏放入盛有冷PBS液的培养皿中清洗， 在玻璃匀 浆器中加入3mlPBS研磨， 再用200目不锈钢网过滤， 把脾匀浆液离心以转速1500rpm/min离 心7分钟， 弃上清液， 并加。
20、入红细胞裂解液2.5ml， 混匀， 静置2分钟后再加入PBS液2ml终止裂 解反应， 再以1500rpm/min离心7分钟， 弃去上清液， 用PBS洗三次后加入PBS， 在荧光显微镜 下计算细胞数。 以上的操作均需在冰上。 0035 用以上脾细胞单细胞悬液， 计细胞数后， 把细胞浓度调整为5106 cells/ml。 每 一组取其中一只小鼠脾细胞样本做亚群分析， 把已调整浓度的小鼠脾细胞样本加入流式细 胞分析专用管， 每只小鼠脾细胞样本制备两管， 每管加入样本100 l。 0036 在含有样品专用管的第一管加5lCD3 （FITC） 和3lCD4 （PE） ， 第二管加5l CD3 （FITC。
21、） 和3l CD8 （PE） 。 室温闭光孵育20min， 各管加入500 l 鞘液， 振荡混匀。 准备上机分 析。 0037 2.2 血清IL-10、 抗ds-DNA抗体含量测定 按试剂盒操作说明操作即可。 0038 2.3 尿微量白蛋白的测定： 实验试剂： 10% （v/v） 的冰醋酸溶液 （PH2.8） ； 0 .303mol/L甘氨酸-冰醋酸缓冲液 （PH3.0） ： 称取22.72g甘氨酸， 用10%冰醋酸溶液稀释成1000ml， 加NaN3100mg， 室温密封可稳 定1年； 溴酚蓝 （1.924mmol/L） 贮存液： 精确称取257.36mgBPB， 用无水乙醇溶至200ml，。
22、 4冰 箱可稳定1年； 溴酚蓝 （0.231mmol/L） 显色剂： 取60mlBPB贮存液， 加入2.5mlTriton X-100， 用甘氨酸-冰醋酸缓冲液稀释至500ml， 室温密封可保存1年。 0039 标本的采集和检测： 于第20天将小鼠分别放于代谢笼中饲养， 收集隔夜12小时尿， 准确记录尿量。 叠氮钠处理后， 离心 （2000r/min） 10min， 量取储存的小鼠尿液2ml， 各加显色 剂1ml， 混匀 （防止产生气泡） ， 用紫外分光光度计于600nm下测定吸光度A。 吸光度A反映尿微 量白蛋白的含量大小， A值越小， 尿微量白蛋白含量越低。 0040 实验数据按照以下方法。
23、进行统计学处理： 采用SPSS10.0统计软件， 计算数据以均 数标准差 （xs） 表示， 多组资料比较采用方差分析， 组内比较采用t检验。 以p0.05为有 说 明 书 4/6 页 6 CN 105521302 A 6 统计学意义。 0041 实验结果 3.1 本发明对SLE小鼠T淋巴细胞亚群的影响 CD3+CD4+淋巴细胞是辅助性T细胞(Th)， CD3+CD8+淋巴细胞主要起抑制性调节作用， SLE小鼠模型组CD3+CD4+淋巴细胞水平比正常对照组的下降， SLE小鼠模型组CD3+CD8+淋巴 细胞水平比正常对照组的上升， 本发明能使SLE小鼠下降的CD3+CD4+T细胞上升， 使上升的。
24、 CD3+CD8+T下降， 其中中药组合物中剂量组效果较好， 这表明， 本发明的药物能够纠正SLE小 鼠T细胞亚群的失衡状态。 试验结果见表1。 0042 表1本发明对SLE小鼠T淋巴细胞亚群的影响 3.2 本发明对血清IL-10、 抗ds-DNA抗体含量的影响 与正常对照组比较， SLE模型小鼠的IL-10和抗ds-DNA抗体水平明显升高， 与SLE模型 组相比， 本发明能显著降低SLE小鼠血清IL-10和抗ds-DNA抗体水平， 其中中药组合物低、 中 剂量组效果尤为显著， 优于阳性药， 其中中药组合物中剂量组与正常对照组无显著性差异。 这表明， 本发明的药物对于SLE小鼠治疗效果显著。 。
25、试验结果见表2。 0043 表2 本发明对SLE小鼠血清IL-10、 抗ds-DNA抗体含量的影响 *与正常对照组相比， p0.05；*与正常对照组相比， p0.01； #与SLE模型组相比， p0.05；# #与SLE模型组相比， p0.01。 0044 3.3本发明对SLE小鼠尿微量白蛋白含量的影响 微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质， 正常对照组尿液中仅出现极少量白蛋白， SLE 模型组白蛋白含量明显升高， 反映SLE小鼠肾脏有损伤； 与模型组相比， 本发明能显著降低 SLE小鼠尿液中白蛋白的含量， 中药组合物低、 中剂量组效果尤为显著， 优于阳性药， 并且中 说 明 书 5/6 页 7。
26、 CN 105521302 A 7 药组合物低、 中剂量组与正常对照组无显著性差异。 这进一步表明， 本发明的药物对于SLE 小鼠肾脏损伤具有突出的治疗效果。 试验结果见表3。 0045表3 本发明对SLE小鼠尿微量白蛋白含量的影响 （ S） *与正常对照组相比， p0.05；*与正常对照组相比， p0.01； #与SLE模型组相比， p0.05；# #与SLE模型组相比， p0.01。 0046 在T淋巴细胞亚群分析试验中， 与SLE模型组相比， 本发明能使SLE样小鼠下降的 CD3+CD4+T细胞上升， 使上升的CD3+CD8+T下降， 纠正T细胞亚群的失衡状态； 在血清IL-10、 抗d。
27、s-DNA抗体含量测定试验中， 与SLE模型组相比， 本发明能显著降低SLE小鼠血清IL-10和 抗ds-DNA抗体水平的升高， 其中中药组合物中剂量组与正常对照组无显著性差异， 说明本 发明的药物对于SLE小鼠治疗效果显著； 在尿微量白蛋白的测定试验中， SLE模型组白蛋白 含量明显升高， 反映SLE小鼠肾脏有损伤， 本发明能显著降低SLE小鼠尿液中白蛋白的含量， 中药组合物低、 中剂量组效果尤为显著， 优于阳性药， 并且中药组合物低、 中剂量组与正常 对照组无显著性差异， 表明本发明的药物对于SLE小鼠肾脏损伤具有突出的治疗效果。 说 明 书 6/6 页 8 CN 105521302 A 8 。