一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法.pdf

本发明涉及一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法，该药物组合物由猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液组成；进一步该药物组合物增加了由木棉花、密蒙花和佩兰三个组分制成的混合提取液，制备的药物组合物对类风湿性关节炎、退行性骨关节炎、强直性脊柱炎、坐骨神经痛、腰椎间盘突出等骨疾病效果显著提高；并且提高了对痛风的治疗效果，无毒副作用；此外，提供的注射剂具有很高的稳定性，作用效果显著。

1.  一种治疗骨疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物主要由下列重量份的组分组成：
猪四肢骨提取液  30-70    甜瓜子提取液  15-25。

2.  如权利要求1所述的治疗骨疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括重量份数为10-20份的混合提取液；所述混合提取液由下列重量份的组分制成：
木棉花  20-30    密蒙花  5-10    佩兰  30-50。

3.  如权利要求2所述的治疗骨疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由下列重量份的组分制备而成：
猪四肢骨提取液  50    甜瓜子提取液  30
木棉花  25    密蒙花  7.5    佩兰  40。

4.  由权利要求1-3任一所述的治疗骨疾病的药物组合物和辅料组成的注射剂，其特征在于，所述注射剂包括药物组合物、附加剂和注射用水。

5.  如权利要求4所述的注射剂，其特征在于，所述药物组合物的重量份数为45-115份，所述注射用水重量份数为100-200份；所述附加剂包括重量份数为2.5-7.5份的缓冲剂、1-2.5份的pH调节剂、0.2份的枸橼酸钠和1-3份的甲壳糖；所述缓冲剂为磷酸-磷酸氢二钠，所述pH调节剂为碳酸氢钠、碳酸钠或醋酸钠。

6.  如权利要求5所述的注射剂，其特征在于，所述附加剂还包括重量 份数为0.5-1.5份的丙二醇硬脂酸酯和0.2份的麦芽糖醇。

7.  一种权利要求1所述的治疗骨疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：
1)猪四肢骨提取液的制备：

1.  1破碎：将原料猪四肢骨洗净，至无肉眼可见异物，破碎；

1.  2提取：将破碎后的猪四肢骨投入提取罐，加入纯化水，热压提取两次，每次加入纯化水的量为原料重量的2倍，每次1h，控制压力为0.11-0.12MPa，温度为121-125℃，制得提取液；

1.  3浓缩：将提取液通过物料泵打入沉降罐内，降温至20℃-30℃，静置，静置至出油，将去油后的提取液在单效浓缩器内浓缩，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；浓缩至原料重量的60％-70％，制得浓缩液；

1.  4酸沉：将浓缩液转移至搪瓷罐中，冷却至室温；用体积比为1∶1的纯化水与36-38％盐酸配置的酸溶液调pH值，边加酸溶液边搅拌，每次加完酸溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值为2.0-3.0，再加热至100℃保温45分钟，冷却降温至0-5℃静置12h-24h，制得酸沉液；

1.  5碱沉：酸沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液打入搪瓷罐中，用20％氢氧化钠溶液调pH值，边加氢氧化钠溶液边搅拌，每次加完氢氧化钠溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值至8.9-9.1，加热100℃保温45分钟，冷却降温，0-5℃静置12h-24h，制得碱沉液；

1.  6醇沉：碱沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤液全部打入搪瓷罐后搅拌15min，用体积比为1∶1的纯化水与36-38％盐酸配置的酸溶液调pH至6.5-7.0，每 次加完酸溶液需搅拌15min，测pH值；调完pH值的药液用单效浓缩器浓缩至原料量的25％-30％，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；浓缩后药液转移至沉降罐中，冷却至60-70℃，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌，加入95％乙醇，使醇含量达到70％，降温至0-5℃，静置12h-24h，制得醇沉液；加入乙醇量计算公式：


1.  7回收乙醇：醇沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；过滤后的药液转移至单效浓缩器内，常压回收乙醇，温度控制在60℃-70℃，回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束；药液重量控制在原料重量的24％±2％；

1.  8超滤：将回收乙醇后的药液超滤，超滤条件：分子量10K超滤柱，用前用不高于40℃注射水冲洗PH值5.0-7.0，排出的水电导率达到≤1.3μs/cm，用后每根柱子为1kg的0.4％碱液封，工作压力不高于0.1Mpa，超滤结束后，用单效浓缩器浓缩，浓缩液控制在原料重量的20％-24％，将浓缩液混合均匀制得猪四肢骨提取液，-10℃以下冷冻存放；
2)甜瓜子提取液的制备：

2.  1煎煮：将粉碎后的甜瓜子投入提取罐中，加入纯化水，煎煮三次，三次的加水量分别为甜瓜子重量的8倍、8倍、6倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，浓缩至甜瓜子量的1/3，浓缩时真空度控制在-0.05至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃，制得浓缩液；

2.  2一次醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到72％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0-5℃静置48小时；一次醇沉加入乙醇量计算公式：


2.  3一次水沉：将一次醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子重量的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得一次水沉物料；

2.  4二次醇沉：将一次水沉物料缓化后，缓化时间控制在12-24小时，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4h，滤液转移至单效浓缩器浓缩，将滤液浓缩至原体积的2/5，浓缩时真空度控制在-0.05至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；将浓缩液转移至沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到86％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，开启冷盐水进出阀门，0-5℃静置48小时，制得二次醇沉液；二次醇沉加入乙醇量计算公式：


2.  5二次水沉：将二次醇沉液用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃，回收乙醇至药液无醇味，当单效 浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子的1/8，计量浓缩液的体积，加入等体积的注射用水，混合均匀后，将料液微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得二次水沉液；

2.  6分装：将二次水沉液缓化后，缓化时间控制在12-24h，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4小时，过滤后将过滤液搅拌20min，制得甜瓜子提取液；
3)将猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液，按5∶3的比例混合均匀，在配液罐内搅拌20min，加热100℃保温15min，冷却至室温，-20℃以下冻实48小时至60小时，制得骨瓜提取液；
4)骨瓜提取液超滤、分装：将冻实的骨瓜提取液取出，室温缓化，超滤，分子量5K超滤柱，用前用不高于40℃注射用水冲洗PH值5.0-7.0，冲洗水电导率≤1.3μs/cm，，工作压力不高于0.1Mpa，收集超滤液，将超滤液搅拌均匀在配液罐内搅拌20min，分装经0.5％氢氧化钠溶液处理的不锈钢桶中，检验合格后办理入库，制得药物组合物；
优选地，所述制备方法还包括制备混合提取液的方法，所述方法步骤如下：

3.  1煎煮：称取处方量的木棉花、密蒙花和佩兰三味药投入提取罐中，加入纯化水，浸泡1.5h；然后加水煎煮三次，三次的加水量分别为三味药总重的10倍、8倍、5倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，制得煎煮液；

3.  2萃取：将煎煮液加入到萃取罐内，按1∶1煎煮液量加入乙酸乙酯，萃取三次，分离出水层，浓缩，制得浓缩液；

3.  3醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0-5℃静置48小时；醇沉加入乙醇量计算公式：


3.  4水沉：将醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃回收乙醇至无醇味，并浓缩至三味药总重的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤后将过滤液搅拌20min，制得混合提取液。

8.  一种权利要求6所述的注射剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)制备药物组合物；
2)取注射用水，将缓冲剂溶于注射用水内，加入1/2量的药物组合物，搅拌均匀，再加入枸橼酸钠和甲壳糖，继续搅拌；再加入1/2量的药物组合物、丙二醇硬脂酸酯和麦芽糖醇，不断搅拌，使完全溶解；
3)加入pH调节剂，搅拌20min；
4)经0.22μm微孔滤膜过滤，121℃灭菌35min，制成注射剂。

9.  如权利要求3所述的治疗骨疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在制备类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、坐骨神经痛或痛风的药物中的应用。

10.  由权利要求1所述的治疗骨疾病的药物组合物和辅料组成的粉针剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
a.将骨瓜提取液在30-40℃进行缓化，得缓化后的骨瓜提取液；
b.浓配：将缓化后的骨瓜提取液投入至浓配罐2中，预滤后用已经处理好的截流分子量为5000道尔顿进口膜片将注射用骨瓜提取液超滤至稀配罐2中；将称取好的右旋糖酐-40投入到浓配罐1内，加注射用水溶解，制成30％的溶液，加入溶液体积0.5‰的活性炭，加热至100℃保温15分钟，小循环10分钟以上；将右旋糖酐-40溶液过滤脱碳后打入稀配罐2中；
c.稀配：右旋糖酐-40溶液过滤完成之后，向稀配罐2补加注射用水，稀配的药液用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～6.8；
d.灌装：稀配液经0.22μm筒式除菌过滤器过滤至缓冲罐，交予灌装；
e.冻干：冷冻控制：设定导热油温度为-45℃～-50℃，达到温度后持续120～240分钟；
后箱预冷：设定后箱温度为-50℃；
预抽真空：设定干燥箱预抽真空度为0.15mbar；
f.升华干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-13℃，持续时间840分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-5℃，持续时间180分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为0℃，持续时间180分钟；
g.解析干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为5℃，持续时间120分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar导热油温度为10℃，持续时间120分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为20℃，持续时间120分钟；制得粉针剂。

一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法
技术领域
本发明属于中药领域，特别涉及一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法。
背景技术
骨疾病是临床常见病，主要包括类风湿性关节炎、退行性骨关节炎、强直性脊柱炎、腰椎间盘突出、痛风和骨质疏松等，这些常见的骨疾病长期困扰着患者，不易治愈，易复发，给患者带来极大的痛苦。
骨瓜提取物是猪四肢骨和甜瓜的干燥成熟种子经分别提取后制成的药物，主要含有以下成分：多肽类骨代谢因子、甜瓜籽提取物、多种游离氨基酸，以及有机钙、无机钙、磷离子、无机盐及微量元素；本品由于含多种骨代谢的活性肽类，因此，具有调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防治骨质疏松，具有抗炎和镇痛作用，常被用于治疗类风湿性关节炎等骨疾病；但该骨瓜提取物对痛风的疗效不显著。
其次，目前骨瓜提取物的制备方法都是采用常规的提取、水沉、酸碱沉淀等工艺，不能将猪四肢骨和甜瓜子中的有效成分充分地提取出来。
此外，由骨瓜提取物制备的注射剂存在着稳定性差、有效成分溶解不好等问题，限制了骨瓜提取物注射剂的应用。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法，该药物组合物对类风湿性关节炎、退行性骨关节炎、强直性脊柱炎、腰椎间盘突出、坐骨神经痛或痛风等骨疾病具有显著的疗效；同时通过对药物组合物制备方法的改进，能够将各成分的活性成分充分提取出来，间接地提高了药物组合物的疗效。
本发明具体技术方案如下：
本发明提供一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物主要由下列重量份的组分组成：
猪四肢骨提取液  30-70    甜瓜子提取液  15-25。
进一步的改进，药物组合物还包括重量份数为10-20份的混合提取液；该混合提取液由下列重量份的组分制成：
木棉花  20-30    密蒙花  5-10    佩兰  30-50。
本发明在原有猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液的基础上，增加了木棉花、密蒙花和佩兰三个组分，制备的药物组合物对类风湿性关节炎、退行性骨关节炎、强直性脊柱炎、坐骨神经痛、腰椎间盘突出等骨疾病效果显著提高；并且提高了对痛风的治疗效果，无毒副作用。
优选地，该药物组合物由下列重量份的组分制备而成：
猪四肢骨提取液  50    甜瓜子提取液  30
木棉花  25    密蒙花  7.5    佩兰  40。
本发明另一方面提供了由治疗骨疾病的药物组合物和辅料组成的注射剂，该注射剂包括药物组合物、附加剂和注射用水。
优选地，药物组合物的重量份数为45-115份，注射用水重量份数为100-200份；附加剂包括重量份数为2.5-7.5份的缓冲剂、1-2.5份的pH调节剂、0.2份的枸橼酸钠和1-3份的甲壳糖；缓冲剂为磷酸-磷酸氢二钠，pH调节剂为碳酸氢钠、碳酸钠或醋酸钠。
本发明选择枸橼酸钠和甲壳糖的混合物，可有效防止注射剂变质，提供注射剂的稳定性。
进一步优选，附加剂还包括重量份数为0.5-1.5份的丙二醇硬脂酸酯和0.2份的麦芽糖醇。其中丙二醇硬脂酸酯和麦芽糖醇的混合可提高药物组合物的溶解性，使药物组合物的溶解更完全，充分发挥药物组合物的疗效，同时该混合物还起到抑制微生物生长的作用。
本发明另一方面还提供了药物组合物的制备方法，该方法步骤如下：
1)猪四肢骨提取液的制备：
1.1破碎：将原料猪四肢骨洗净，至无肉眼可见异物，破碎；
1.2提取：将破碎后的猪四肢骨投入提取罐，加入纯化水，热压提取两次，每次加入纯化水的量为原料重量的2倍，每次1h，控制压力为0.11-0.12MPa，温度为121℃-125℃，制得提取液；
1.3浓缩：将提取液通过物料泵打入沉降罐内，降温至20℃-30℃，静置，静置至出油，将去油后的提取液在单效浓缩器内浓缩，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；浓缩至原料重量的60％-70％，制得浓缩液；
1.4酸沉：将浓缩液转移至搪瓷罐中，冷却至室温；用体积比为1∶1的纯化水与36-38％盐酸配置的酸溶液调pH值，边加酸溶液边搅拌，每次加完酸溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值为2.0-3.0，再加热至100℃保温45分钟，冷却降温至0-5℃静置12h-24h， 制得酸沉液；
1.5碱沉：酸沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液打入搪瓷罐中，用20％氢氧化钠溶液调pH值，边加氢氧化钠溶液边搅拌，每次加完氢氧化钠溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值至8.9-9.1，加热100℃保温45分钟，冷却降温，0-5℃静置12h-24h，制得碱沉液；
1.6醇沉：碱沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤液全部打入搪瓷罐后搅拌15min，用体积比为1∶1的纯化水与36-38％盐酸配置的酸溶液调pH至6.5-7.0，每次加完酸溶液需搅拌15min，测pH值；调完pH值的药液用单效浓缩器浓缩至原料量的25％-30％，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；浓缩后药液转移至沉降罐中，冷却至60-70℃，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌，加入95％乙醇，使醇含量达到70％，降温至0-5℃，静置12h-24h，制得醇沉液；加入乙醇量计算公式：

1.7回收乙醇：醇沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；过滤后的药液转移至单效浓缩器内，常压回收乙醇，温度控制在60℃-70℃，回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束；药液重量控制在原料重量的24％±2％；
1.8超滤：将回收乙醇后的药液超滤，超滤条件：分子量10K超滤柱，用前用不高于40℃注射水冲洗PH值5.0-7.0，排出的水电导率达到≤1.3μs/cm，用后每根柱子为1kg的0.4％碱液封，工作压力不高于0.1Mpa，超滤结束后，用单效浓缩器浓缩，浓缩液控制在原料重量的20％-24％，将浓缩液混合均匀制得猪四肢骨提取液，-10℃以下冷冻存放；
2)甜瓜子提取液的制备：
2.1煎煮：将粉碎后的甜瓜子投入提取罐中，加入纯化水，煎煮三次，三次的加水量分别为甜瓜子重量的8倍、8倍、6倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，浓缩至甜瓜子量的1/3，浓缩时真空度控制在-0.05至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃，制得浓缩液；
2.2一次醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到72％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0-5℃静置48小时；一次醇 沉加入乙醇量计算公式：

2.3一次水沉：将一次醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子重量的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得一次水沉物料；
2.4二次醇沉：将一次水沉物料缓化后，缓化时间控制在12-24小时，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4h，滤液转移至单效浓缩器浓缩，将滤液浓缩至原体积的2/5，浓缩时真空度控制在-0.05至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；将浓缩液转移至沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到86％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，开启冷盐水进出阀门，0-5℃静置48小时，制得二次醇沉液；二次醇沉加入乙醇量计算公式：

2.5二次水沉：将二次醇沉液用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃，回收乙醇至药液无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子的1/8，计量浓缩液的体积，加入等体积的注射用水，混合均匀后，将料液微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得二次水沉液；
2.6分装：将二次水沉液缓化后，缓化时间控制在12-24h，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4小时，过滤后将过滤液搅拌20min，制得甜瓜子提取液；
3)将猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液，按5∶3的比例混合均匀，在配液罐内搅拌20min，加热100℃保温15min，冷却至室温，-20℃以下冻实48小时至60小时，制得骨瓜提取液；
4)骨瓜提取液超滤、分装：将冻实的骨瓜提取液取出，室温缓化，超滤，分子量5K超滤柱，用前用不高于40℃注射用水冲洗PH值5.0-7.0，冲洗水电导率≤1.3μs/cm，，工作压力不高于0.1Mpa，收集超滤液，将超滤液搅拌均匀在配液罐内搅拌20min，分装经0.5％氢氧化钠溶液处理的不锈钢桶中，检验合格后办理入库，制得药物组合物。
有益效果：本发明在制备猪四肢骨提取液时，通过对酸沉和碱沉步骤中的pH进行调节，得到当酸沉调节pH值为2.0-3.0，优选调节pH值为2.0-2.2，碱沉调节pH值为8.9-9.1，可显著降低猪四肢骨提取液中的高分子量物质，完全除去酸性蛋白和碱性蛋白，酸碱性温和，提高提取液中牛血清白蛋白的含量，同时条件温和不会破坏提取液中其他成分的含量；在制备甜瓜子提取液时，通过两次醇沉和两次水沉，并且在两次醇沉过程中，对加入乙醇的量严格控制，有效地提高了甜瓜子提取液中活性成分的含量，降低了高分子量物质的含量，该制备方法简单，适合工业化生产。
进一步的改进，药物组合物的制备方法还包括制备混合提取液的方法，该方法步骤如下：
3.1煎煮：称取处方量的木棉花、密蒙花和佩兰三味药投入提取罐中，加入纯化水，浸泡1.5h；然后加水煎煮三次，三次的加水量分别为三味药总重的10倍、8倍、5倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，制得煎煮液；
3.2萃取：将煎煮液加入到萃取罐内，按1∶1煎煮液量加入乙酸乙酯，萃取三次，分离出水层，浓缩，制得浓缩液；
3.3醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0-5℃静置48小时；醇沉加入乙醇量计算公式：

3.4水沉：将醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃-70℃回收乙醇至无醇味，并浓缩至三味药总重的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤后将过滤液搅拌20min，制得混合提取液。
有益效果：本发明在制备混合提取液过程中，采用萃取、醇沉和水沉步骤，并且在醇沉过程中，严格控制乙醇的加入量，其有效成分的量显著提高，降低了高分子量物质的存在，使制备的药物组合物能够更好地发挥药效。
本发明另一方面还提供了注射剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
1)制备药物组合物；
2)取注射用水，将缓冲剂溶于注射用水内，加入1/2量的药物组合物，搅拌均匀，再加入枸橼酸钠和甲壳糖，继续搅拌；再加入1/2量的药物组合物、丙二醇硬脂酸酯和麦芽糖醇，不断搅拌，使完全溶解；
3)加入pH调节剂，搅拌20min；
4)经0.22μm微孔滤膜过滤，121℃灭菌35min，制成注射剂。
另一方面，本发明提供的药物组合物用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、坐骨神经痛或痛风等骨疾病。
本发明进一步提供治疗骨疾病的药物组合物和辅料组成的粉针剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
a.将骨瓜提取液在30-40℃进行缓化，得缓化后的骨瓜提取液；
b.浓配：将缓化后的骨瓜提取液投入至浓配罐2中，预滤后用已经处理好的截流分子量为5000道尔顿进口膜片将注射用骨瓜提取液超滤至稀配罐2中；将称取好的右旋糖酐-40投入到浓配罐1内，加注射用水溶解，制成30％的溶液，加入溶液体积0.5‰的活性炭，加热至100℃保温15分钟，小循环10分钟以上；将右旋糖酐-40溶液过滤脱碳后打入稀配罐2中；
c.稀配：右旋糖酐-40溶液过滤完成之后，向稀配罐2补加注射用水，稀配的药液用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～6.8；
d.灌装：稀配液经0.22μm筒式除菌过滤器过滤至缓冲罐，交予灌装；
e.冻干：冷冻控制：设定导热油温度为-45℃～-50℃，达到温度后持续120～240分钟；
后箱预冷：设定后箱温度为-50℃；
预抽真空：设定干燥箱预抽真空度为0.15mbar；
f.升华干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-13℃，持续时间 840分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-5℃，持续时间180分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为0℃，持续时间180分钟；
g.解析干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为5℃，持续时间120分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar导热油温度为10℃，持续时间120分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为20℃，持续时间120分钟；制得粉针剂。
本发明所提供的治疗骨疾病的药物组合物对类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、坐骨神经痛和痛风等骨疾病均具有很好的治疗效果，并且没有溶血、过敏反应、血管刺激性等副作用；并且所用原料药能够实现各中药原料药的相辅相成，协同发挥疗效的目的；制成注射剂后，能够充分发挥药物组合物的疗效，在注射剂内加入枸橼酸钠、甲壳糖丙二醇硬脂酸酯和麦芽糖醇，不但提高了注射剂的稳定性，同时进一步提高了药物组合物的溶解性，使其充分地发挥药效；另一方面本发明提供的制备方法能够显著地提高活性成分的含量，降低高分子量物质的含量，并且制备方法简单，适合工业化生产。
具体实施方式
实施例1
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量数的组分组成：
猪四肢骨提取液  30    甜瓜子提取液  15
制备方法：
1)猪四肢骨提取液的制备：
1.1破碎：将原料猪四肢骨洗净，至无肉眼可见异物，破碎；
1.2提取：将破碎后的猪四肢骨投入提取罐，加入纯化水，热压提取两次，每次加入纯化水的量为原料重量的2倍，每次1h，控制压力为0.12MPa，温度为121℃，制得提取液；
1.3浓缩：将提取液通过物料泵打入沉降罐内，降温至30℃，静置， 静置至出油，将去油后的提取液在单效浓缩器内浓缩，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa，温度控制在80℃；浓缩至原料重量的60％-70％，制得浓缩液；
1.4酸沉：将浓缩液转移至搪瓷罐中，冷却至室温；用体积比为1∶1的纯化水与36-38％盐酸配置的酸溶液调pH值，边加酸溶液边搅拌，每次加完酸溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值为2.2，再加热至100℃保温45分钟，冷却降温至5℃静置12h，制得酸沉液；
1.5碱沉：酸沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液打入搪瓷罐中，用20％氢氧化钠溶液调pH值，边加氢氧化钠溶液边搅拌，每次加完氢氧化钠溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值至8.9，加热100℃保温45分钟，冷却降温，5℃静置12h，制得碱沉液；
1.6醇沉：碱沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤液全部打入搪瓷罐后搅拌15min，用体积比为1∶1的纯化水与37％盐酸配置的酸溶液调pH至7.0，每次加完酸溶液需搅拌15min，测pH值；调完pH值的药液用单效浓缩器浓缩至原料量的30％，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa，温度控制在80℃；浓缩后药液转移至沉降罐中，冷却至60-70℃，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌，加入95％乙醇，使醇含量达到70％，降温至5℃，静置24h，制得醇沉液；加入乙醇量计算公式：

1.7回收乙醇：醇沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；过滤后的药液转移至单效浓缩器内，常压回收乙醇，温度控制在70℃，回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束；药液重量控制在原料重量的24％±2％；
1.8超滤：将回收乙醇后的药液超滤，超滤条件：分子量10K超滤柱，用前用不高于40℃注射水冲洗PH值7.0，排出的水电导率达到≤1.3μs/cm，用后每根柱子为1kg的0.4％碱液封，工作压力不高于0.1Mpa，超滤结束后，用单效浓缩器浓缩，浓缩液控制在原料重量的 20％-24％，将浓缩液混合均匀制得猪四肢骨提取液，-10℃以下冷冻存放；
2)甜瓜子提取液的制备：
2.1煎煮：将粉碎后的甜瓜子投入提取罐中，加入纯化水，煎煮三次，三次的加水量分别为甜瓜子重量的8倍、8倍、6倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，浓缩至甜瓜子量的1/3，浓缩时真空度控制在-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃，制得浓缩液；
2.2一次醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到72％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0-5℃静置48小时；一次醇沉加入乙醇量计算公式：

2.3一次水沉：将一次醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在70℃回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子重量的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得一次水沉物料；
2.4二次醇沉：将一次水沉物料缓化后，缓化时间控制在12-24小时，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4h，滤液转移至单效浓缩器浓缩，将滤液浓缩至原体积的2/5，浓缩时真空度控制在-0.05至-0.06Mpa，温度控制在70℃-80℃；将浓缩液转移至沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到86％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，开启冷盐水进出阀门，5℃静置48小时，制得二次醇沉液；二次醇沉加入乙醇量计算公式：

2.5二次水沉：将二次醇沉液用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在70℃，回收乙醇至药液无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子的1/8，计量浓缩液的体积，加入等体积的注射用水，混合均匀后，将料液微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得二次水沉液；
2.6分装：将二次水沉液缓化后，缓化时间控制在24h，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在4小时，过滤后将过滤液搅拌20min，制得甜瓜子提取液；
3)将猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液，混合均匀，在配液罐内搅拌20min，加热100℃保温15min，冷却至室温，-20℃以下冻实48小时至60小时，制得骨瓜提取液；
4)骨瓜提取液超滤、分装：将冻实的骨瓜提取液取出，室温缓化，超滤，分子量5K超滤柱，用前用不高于40℃注射用水冲洗PH值7.0，冲洗水电导率≤1.3μs/cm，，工作压力不高于0.1Mpa，收集超滤液，将超滤液搅拌均匀在配液罐内搅拌20min，分装经0.5％氢氧化钠溶液处理的不锈钢桶中，检验合格后办理入库，制得药物组合物。
实施例2
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量数的组分组成：
猪四肢骨提取液  60    甜瓜子提取液  22.5
制备方法：按实施例1的方法制备。
实施例3
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量数的组分组成：
猪四肢骨提取液  50    甜瓜子提取液  30
制备方法：按实施例1的方法制备。
实施例4
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量份的组分制备而成：
猪四肢骨提取液  50    甜瓜子提取液  30
木棉花  25    密蒙花  7.5    佩兰  40
制备方法：
1)猪四肢骨提取液的制备：
1.1破碎：将原料猪四肢骨洗净，至无肉眼可见异物，破碎；
1.2提取：将破碎后的猪四肢骨投入提取罐，加入纯化水，热压提取两次，每次加入纯化水的量为原料重量的2倍，每次1h，控制压力为0.11Pa，温度为121℃，制得提取液；
1.3浓缩：将提取液通过物料泵打入沉降罐内，降温至20℃，静置，静置至出油，将去油后的提取液在单效浓缩器内浓缩，浓缩时真空度控制在-0.06Mpa，温度控制在70℃；浓缩至原料重量的60％，制得浓缩液；
1.4酸沉：将浓缩液转移至搪瓷罐中，冷却至室温；用体积比为1∶1的纯化水与38％盐酸配置的酸溶液调pH值，边加酸溶液边搅拌，每次加完酸溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值为2.0，再加热至100℃保温45分钟，冷却降温至0℃静置24h，制得酸沉液；
1.5碱沉：酸沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液打入搪瓷罐中，用20％氢氧化钠溶液调pH值，边加氢氧化钠溶液边搅拌，每次加完氢氧化钠溶液在搪瓷罐内搅拌15分钟后，测量pH值；调pH值至9.1，加热100℃保温45分钟，冷却降温，0℃静置24h，制得碱沉液；
1.6醇沉：碱沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤液全部打入搪瓷罐后搅拌15min，用体积比为1∶1的纯化水与38％盐酸配置的酸溶液调pH至6.5，每次加完酸溶液需搅拌15min，测pH值；调完pH值的药液用单效浓缩器浓缩至原料量的25％，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa，温度控制在70℃；浓缩后药液转移至沉降罐中，冷却至60℃，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌，加入95％乙醇，使醇含量达到70％，降温 至0℃，静置12h，制得醇沉液；加入乙醇量计算公式：

1.7回收乙醇：醇沉液静置结束后，用300目滤布经不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；过滤后的药液转移至单效浓缩器内，常压回收乙醇，温度控制在60℃，回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束；药液重量控制在原料重量的24％±2％；
1.8超滤：将回收乙醇后的药液超滤，超滤条件：分子量10K超滤柱，用前用不高于40℃注射水冲洗PH值5.0，排出的水电导率达到≤1.3μs/cm，用后每根柱子为1kg的0.4％碱液封，工作压力不高于0.1Mpa，超滤结束后，用单效浓缩器浓缩，浓缩液控制在原料重量的20％，将浓缩液混合均匀制得猪四肢骨提取液，-10℃以下冷冻存放；
2)甜瓜子提取液的制备：
2.1煎煮：将粉碎后的甜瓜子投入提取罐中，加入纯化水，煎煮三次，三次的加水量分别为甜瓜子重量的8倍、8倍、6倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，浓缩至甜瓜子量的1/3，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa，温度控制在70℃，制得浓缩液；
2.2一次醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到72％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温0℃静置48小时；一次醇沉加入乙醇量计算公式：

2.3一次水沉：将一次醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃回收乙醇至无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子重量的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得一次 水沉物料；
2.4二次醇沉：将一次水沉物料缓化后，缓化时间控制在12小时，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2-4h，滤液转移至单效浓缩器浓缩，将滤液浓缩至原体积的2/5，浓缩时真空度控制在-0.05Mpa，温度控制在70℃；将浓缩液转移至沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启沉降罐的搅拌桨，加入95％的乙醇，使药液的含醇量达到86％V/V；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，开启冷盐水进出阀门，0℃静置48小时，制得二次醇沉液；二次醇沉加入乙醇量计算公式：

2.5二次水沉：将二次醇沉液用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa；滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在60℃，回收乙醇至药液无醇味，当单效浓缩器收液桶出液口排出的液体常温下相对密度为1.0时，乙醇回收结束，并浓缩至甜瓜子的1/8，计量浓缩液的体积，加入等体积的注射用水，混合均匀后，将料液微沸30min，将料液送入速冻库冷冻，冻实，制得二次水沉液；
2.6分装：将二次水沉液缓化后，缓化时间控制在12h，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，过滤时间控制在2小时，过滤后将过滤液搅拌20min，制得甜瓜子提取液；
3)将猪四肢骨提取液和甜瓜子提取液，混合均匀，在配液罐内搅拌20min，加热100℃保温15min，冷却至室温，-20℃以下冻实48小时至60小时，制得骨瓜提取液；
4)骨瓜提取液超滤、分装：将冻实的骨瓜提取液取出，室温缓化，超滤，分子量5K超滤柱，用前用不高于40℃注射用水冲洗PH值5.0-7.0，冲洗水电导率≤1.3μs/cm，，工作压力不高于0.1Mpa，收集超滤液，将超滤液搅拌均匀在配液罐内搅拌20min，分装经0.5％氢氧化钠溶液处理的不锈钢桶中，检验合格后办理入库；
5)混合提取液的方法如下：
3.1煎煮：称取处方量的木棉花、密蒙花和佩兰三味药投入提取罐中，加入纯化水，浸泡1.5h；然后加水煎煮三次，三次的加水量分别为三味药总重的10倍、8倍、5倍，第一次煎煮1h，第二次、第三次分别煎煮50min；将三次煎煮液合并，制得煎煮液；
3.2萃取：将煎煮液加入到萃取罐内，按1∶1煎煮液量加入乙酸乙酯，萃取三次，分离出水层，浓缩，制得浓缩液；
3.3醇沉：将浓缩液真空吸入沉降罐中，按体积折算需要的乙醇量，单位为L，开启搅拌桨，加入95％的乙醇；所需乙醇全部加完继续搅拌20min，降温5℃静置48小时；醇沉加入乙醇量计算公式：

3.4水沉：将醇沉液经两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢板框过滤，过滤时压力不高于0.4Mpa，滤液转移至单效浓缩器，然后用常压、温度控制在70℃回收乙醇至无醇味，并浓缩至三味药总重的1/6，计量浓缩液的体积，按1∶1浓缩液加入纯化水，搅拌15分钟，用两层300目滤布、两层中性滤纸不锈钢箱式板框过滤，过滤后将过滤液搅拌20min，制得重量份数为15份的混合提取液；
6)将步骤4制得的骨瓜提取液和混合提取液混合均匀，制得药物组合物。
实施例5
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量份的组分制备而成：
猪四肢骨提取液  70    甜瓜子提取液  25
木棉花  30    密蒙花  10    佩兰  50
制备方法：按实施例4的方法制备。
实施例6
一种治疗骨疾病的药物组合物，该药物组合物由下列重量份的组分制备而成：
猪四肢骨提取液  40    甜瓜子提取液  17.5
木棉花  20    密蒙花  5    佩兰  30
制备方法：按实施例4的方法制备。
实施例7注射剂
实施例3所制备的药物组合物   10.6g(以多肽计)
辅料：5％氢氧化钠溶液       适量
      注射用水              适量
制备方法：将实施例3的药物组合物，加注射用水稀释，优选至90％处方量，用5％氢氧化钠溶液调节pH值，pH优选为6.5-7.0，补充注射用水至2000ml，灌装于安瓿中，121℃灭菌30分钟，即得注射剂。
实施例8注射剂
实施例4所制备的药物组合物   10g(以多肽计)
辅料：5％氢氧化钠溶液       适量
      注射用水              适量
制备方法：按实施例7的方法制备注射剂。
实施例9注射剂

制备方法：
1)按实施例1的方法制备药物组合物；
2)取注射用水，将磷酸-磷酸氢二钠溶于注射用水内，加入1/2量的药物组合物，搅拌均匀，再加入枸橼酸钠和甲壳糖，继续搅拌；再加入1/2量的药物组合物不断搅拌；
3)加入碳酸氢钠，搅拌20min；
4)经0.22μm微孔滤膜过滤，121℃灭菌35min，制成注射剂。
实施例10注射剂

制备方法：按实施例9的方法制备。
实施例11注射剂


制备方法：
1)按实施例3的方法制备药物组合物；
2)取注射用水，将磷酸-磷酸氢二钠溶于注射用水内，加入1/2量的药物组合物，搅拌均匀，再加入枸橼酸钠和甲壳糖，继续搅拌；再加入1/2量的药物组合物、丙二醇硬脂酸酯和麦芽糖醇，不断搅拌，使完全溶解；
3)加入醋酸钠和碳酸钠，搅拌20min；
4)经0.22μm微孔滤膜过滤，121℃灭菌35min，制成注射剂。
实施例12注射剂

制备方法：按实施例11的方法制备注射剂。
实施例13注射剂

制备方法：按实施例11的方法制备注射剂。
实施例14
本发明进一步提供治疗骨疾病的药物组合物和辅料组成的粉针剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
a.将骨瓜提取液在30-40℃进行缓化，得缓化后的骨瓜提取液；
b.浓配：将缓化后的骨瓜提取液投入至浓配罐2中，预滤后用已经处理好的截流分子量为5000道尔顿进口膜片将注射用骨瓜提取液超滤至稀配罐2中；将称取好的右旋糖酐-40投入到浓配罐1内，加注射用水溶解，制成30％的溶液，加入溶液体积0.5‰的活性炭，加热至100℃保温15分钟，小循环10分钟以上；将右旋糖酐-40溶液过滤脱碳后打入稀配罐2中；
c.稀配：右旋糖酐-40溶液过滤完成之后，向稀配罐2补加注射用水，稀配的药液用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～6.8；
d.灌装：稀配液经0.22μm筒式除菌过滤器过滤至缓冲罐，交予灌装；
e.冻干：冷冻控制：设定导热油温度为-45℃～-50℃，达到温度后持续120～240分钟；
后箱预冷：设定后箱温度为-50℃；
预抽真空：设定干燥箱预抽真空度为0.15mbar；
f.升华干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-13℃，持续时间840分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为-5℃，持续时间180分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为0℃，持续时间180分钟；
g.解析干燥：
a)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为5℃，持续时间120分钟；
b)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar导热油温度为10℃，持续时间120分钟；
c)设定干燥箱真空度为0.10～0.30mbar，导热油温度为20℃，持续时间120分钟；制得粉针剂。
对照实施例1注射剂

制备方法：按照实施例9的方法制备。
对照实施例2注射剂

制备方法：按照实施例9的方法制备。
对照实施例3注射剂

制备方法：按照实施例9的方法制备。
试验例1制备方法考察
1.1猪四肢骨制备方法中酸沉、碱沉步骤中pH变化对提取液中多肽类物质(以牛血清白蛋白计)含量的影响
测定方法：精密量取猪四肢骨提取液，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，找福林酚测定法测定；
酸沉调节pH值分别为1.9、2.0、2.1、2.2和2.5；碱沉调节pH值分别为8.8、8.9、9.0、9.1和9.3；其余制备步骤均与实施例1中的相同；测定每ml提取液中含牛血清白蛋白的量(mg)，检测结果见表1。
表1酸沉、碱沉步骤中pH变化对牛血清白蛋白含量的影响

从表中可看出，当酸沉调节pH为2.1时，碱沉调节pH为9.0时，每ml猪四肢骨提取液中含有牛血清白蛋白的量最高，当酸沉调节pH为2.0-2.1之间，碱沉调节pH为8.9-9.1之间时，每ml猪四肢骨提取液中含有牛血清白蛋白的量的均超过6.5mg，而当酸沉、碱沉过程中调节的pH值超出上述范围，每ml猪四肢骨提取液中含有牛血清白蛋白的量显著下降，表明在制备猪四肢骨提取液时，酸沉步骤和碱沉步骤中pH值的变化对提取液中牛血清白蛋白的量具有显著的影响。
试验例2稳定性试验
1.加速试验
为了考察本发明的附加剂枸橼酸钠和甲壳糖的混合及其重量配比对注射剂稳定性的影响，本发明将实施例9、对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3的注射剂，均在温度40℃±2℃的条件下放置6个月，在试验期间0个月、1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，按中国药典中的规定，检测注射剂的性状、pH值、可见异物及含牛血清白蛋白的标示量％，检测结果见表2；
表2注射剂的加速试验结果

从表中可看出本发明实施例9所提供的注射剂，经加速试验结果可知，放置6个月后，所述注射剂的性状、可见异物、pH值及含有牛血清白蛋白的量均未发生变化；而对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3的注射剂放置6个月后，性状发生改变，有可见异物，pH值和含有牛血清白蛋白的量均发生了变化；其中，对照实施例3的pH值降低了1.97，对照实施例2的pH降低了1.38，对照实施例1的pH值降低了0.69；对照实施例3含牛血清白蛋白的标示量下降了3.31％，对照实施例2含牛血清白蛋白的标示量下降了1.8％，对照实施例1的 含牛血清白蛋白的标示量下降了0.83％；同时对照实施例2和对照实施例3的注射剂放置2个月后，性质发生改变，有可见异物；从以上结果得出本发明实施例9的注射剂，在高温下放置6个月后，稳定性明显好于对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3；并且对照实施例1的注射剂的稳定性高于对照实施例2和对照实施例3；由此得出枸橼酸钠和甲壳糖同时存在，并且比例范围限制在枸橼酸钠∶甲壳糖＝0.2∶1-3(重量份)时，可显著提高注射剂的稳定性。
2.长期试验
取本发明将实施例9、对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3的注射剂在温度25℃±2℃，湿度为60％±10％的条件下放置24个月，在试验期间0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月和24个月末分别取样一次，按中国药典中的规定，检测注射剂的性状、pH值、可见异物及含牛血清白蛋白的标示量％，检测结果见表3；
表3注射剂的长期试验结果


从表中可看出本发明实施例9所提供的注射剂，经长期试验结果可知，放置24个月后，所述注射剂的性状、可见异物、pH值及含有牛血清白蛋白的量均未发生变化；而对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3的注射剂放置24个月后，性状发生改变，有可见异物，pH值和含有牛血清白蛋白的量均发生了变化。从以上结果得出本发明实施例9的注射剂，可长期放置，由此得出枸橼酸钠和甲壳糖同时存在，并且比例范围限制在枸橼酸钠∶甲壳糖＝0.2∶1-3(重量份)时，可显著提高注射剂的稳定性，并且延长注射剂的保质期。
试验例3安全性试验
3.1溶血试验
1.受试药物
给药1组：静脉滴注实施例11的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
给药2组：静脉滴注实施例12的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；实施例12
空白对照组：0.9％氯化钠注射剂。
2.受试动物
日本大耳白兔，体重3.0kg，雄性；
3.试验方法
2％兔红细胞混悬液的制备：取大耳白兔一只耳静脉采血约10ml，置洁净干燥内具玻璃珠的三角烧瓶中，并振摇除去纤维蛋白，加生理盐水摇匀，3000转/分钟离心10分钟，弃去上清液；沉淀的红细胞用生理盐水洗涤三次，至上清液不呈红色为止；将所得红细胞用生理盐水配制成2％红细胞混悬液，供试验用；
给药1组稀释液的制备：取实施例11注射剂4支，加生理盐水至5ml，取4ml加生理盐水至5ml，即得4mg/ml溶液；
给药2组稀释液的制备：取实施例12注射剂4支，加生理盐水至5ml，取4ml加生理盐水至5ml，即得4mg/ml溶液；
取清洁干燥试管7支；按表4配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，摇匀后于37℃恒温箱中放置30分钟，然后分别加入给药1组和给药2组稀释液，体积分别为0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml；第6管为生理盐水对照，第7管为蒸馏水对照，摇匀后置37℃恒温箱中，观察4小时内各试管溶液有无溶血及红细胞凝聚作用，判断标准见表5。
表4注射用骨瓜提取物(4mg/ml)溶血试验

表5溶血判断标准

4.试验结果
4小时内观察，1-6管溶液红细胞下沉，上层液体无色澄明，振摇后红细胞能完全分散，表明给药1组稀释液、给药2组稀释液及生理盐水无溶血和红细胞凝聚作用，7号管红色澄明，管底无红细胞残留表明全部溶血，结果见表6和表7。
表6实施例11注射剂(4mg/ml)溶血试验结果


表7实施例12注射剂(4mg/ml)溶血试验结果

注：“-”不溶血，也不发生凝聚；“+”凝聚；“++”部分溶血；“+++”完全溶血。
5.试验结论
实施例11和实施例12的注射剂对家兔红细胞无溶血与凝聚现象。
3.2血管刺激试验
1.受试药物
给药1组：静脉滴注实施例11的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
给药2组：静脉滴注实施例12的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
空白对照组：0.9％氯化钠注射剂。
2.受试动物
日本大耳白兔，体重3.0kg，雄性。
3.试验方法
给药1组稀释液的制备：取实施例11注射剂4支，加生理盐水至25ml，即得4mg/ml溶液；
给药2组稀释液的制备：取实施例12注射剂4支，加生理盐水至25ml，即得4mg/ml溶液；
取日本大耳白兔6只，体重2.5～2.8kg，雌雄兼用，从耳缘静脉注射给药组1稀释液3ml/kg和给药2组稀释液，空白对照组给等体积 的生理盐水一日一次，连续3日，于末次给药2小时后放血处死；取下兔耳在末次注射部位远心端0.5cm和注射部位近心端1.5cm一段标本，用10％甲醛溶液固定，进行组织切片检查。
4.试验结果
目检：家兔耳缘静脉注射给药1组和给药2组的稀释液和生理盐水后，局部组织肉眼观察未见红肿，渗出，坏死等刺激表现。
5.结论
实施例11和实施例12的注射剂(4mg/ml)对家兔血管无刺激作用。
3.3过敏性试验
1.受试药物
给药1组：静脉滴注实施例11的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
给药2组：静脉滴注实施例12的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
阳性对照液：牛血清白蛋白；临用前用生理盐水配制成10mg/ml；
空白对照药：0.9％氯化钠注射剂。
2.受试动物
豚鼠，雌雄兼用。
3.实验方法
给药1组稀释液的制备：取实施例11注射剂1支，加生理盐水至5ml，取4ml加生理盐水至5ml，即得4mg/ml溶液；
给药2组稀释液的制备：取实施例12注射剂1支，加生理盐水至5ml，取4ml加生理盐水至5ml，即得4mg/ml溶液；
取体重250-350g豚鼠24只，雌雄兼用，随机分为4组，每组6只；第一组腹腔注射给药1组稀释液0.5ml/只；第二组腹腔注射给药2组稀释液0.5ml/只；第三组腹腔注射生理盐水0.5ml/只作为阴性对照；第四组腹腔注射10mg/ml牛血清白蛋白0.5ml/只作为阳性对照；以上腹腔注射均为隔日注射，一共进行3次；在首次致敏后第14天和第21天，每组分别取3只豚鼠耳静脉注射各组药液1ml/只进行攻击，观察注射后15分钟内豚鼠是否有抓鼻、喷嚏、竖毛、抽搐等过敏症状；按表8评分标准进行评分。
表8豚鼠过敏反应评分标准

注：反应分值2分以上(包括2分)，则认为受试药物过敏反应不合格。
4.试验结果
给药1组、给药2组和阴性对照组在连续3次腹腔注射和两次攻击后未发生抓鼻、喷嚏、抽搐等过敏反应；阳性对照组豚鼠在经连续3次腹腔注射后，两次攻击5分钟内开始出现呼吸困难、抽搐、死亡，结果见表9和表10；
表9给药1组和给药2组注射剂(4mg/ml)第一次静脉攻击的过敏反应试验结果

表10给药1组和给药2组注射剂4mg/ml)第二次静脉攻击的过敏反应试验结果

5.结论
实施例11和实施例12的注射剂对豚鼠未产生无过敏反应。
3.4局部刺激试验
1.受试药物
给药1组：静脉滴注实施例11的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
给药2组：静脉滴注实施例12的注射剂，25mg/支，加入250ml生理盐水中；
阳性对照液：牛血清白蛋白；临用前用生理盐水配制成10mg/ml；
空白对照药：0.9％氯化钠注射剂。
2.受试动物
日本大耳白家兔，雌雄兼用，体重2.6-2.9kg。
3.试验方法
给药1组稀释液的制备：取实施例11注射剂1支，加生理盐水至4ml，即得12.5mg/ml溶液；
给药2组稀释液的制备：取实施例12注射剂1支，加生理盐水至4ml，即得12.5mg/ml溶液；
取日本大耳白家兔6只，随机分为三组，每组2只；给药1组和给药2组分别在其左、右腿股四头肌各注入供试液1ml，空白对照组给等量0.9％氯化钠注射剂，注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，按表11评分标准进行评分；试验结果见表12。
表11家兔股四头肌刺激反应评分标准

注：各组反应级的最高与最低之差大于2时，应重试；4块股四头肌反应级之和小于10时，给药组的局部刺激试验符合规定。
表12注射用骨瓜提取物局部刺激试验结果

4.结论
在本试验条件下，实施例11和实施例12的注射剂(12.5mg/ml)对家兔股四头肌的刺激试验，2只家兔4块股四头肌反应级之和小于10，所以认为实施例11和实施例12的注射剂(12.5mg/ml)的局部刺激试验规定。
试验例4临床试验
4.1治疗类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的疗效
1.试验病例
收治133例患者均符合类风湿性关节炎和强直性脊柱炎诊断标准，其中类风湿性关节炎患者60例，强直性脊柱炎患者70例，年龄35-60岁，病程1个月-8年。
2.分组及给药
将60例类风湿性关节炎患者随机分成治疗1组23例，治疗2组23例，对照组17例；将73例强直性脊柱炎患者随机分成治疗1组28例，治疗2组27例，对照组18例；治疗1组均静脉滴注本发明实施例7所述的注射剂，一次15ml(加入250ml 0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；治疗2组均静脉滴注本发明实施例8所述的注射剂，一次15ml(加入250ml 0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；对照组均静脉滴注布洛芬注射剂，一次400mg(加入100ml0.9％氯化钠注射剂稀释)，每日1次，20日为一疗程。
3.诊断标准
类风湿性关节炎的诊断标准：
(1)症状：关节肿胀或小关节对称性肿痛、晨僵；
(2)体征：受累关节肿胀压痛，活动功能受限或畸形，或强直；
(3)实验室检查：RF阳性，ESR多增快；
(4)X线检查：重点受累关节具有典型的类风湿关节炎X线表现。
强直性脊柱炎的诊断标准：
(1)脊柱晨僵、关节疼痛，肿胀；
(2)实验室检查：血清白蛋白减少，血清免疫球蛋白lgG、lgA和lgM增加，血清补体C3和C4增加；
(3)骶骼关节X线表现。
4.疗效评定标准
痊愈：症状全部消失，主要实验指标正常；
显效：主要症状明显好转，主要实验指标明显好转；
好转：主要症状有所好转，主要实验指标有所好转；
无效：治疗前后没有变化。
5.治疗分析
将患者临床资料经整理分析，将治疗1组、治疗2组与对照组在痊愈、显效、有效和无效四个标准中进行比较，通过t检验来验证治疗组和对照组之间的差异。
6.结果
治疗1组、治疗2组和对照组的患者均给药2个疗程，三组对类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的治疗效果比较分别见表13和表14；
表13三组对类风湿性关节炎治疗效果比较

与对照组比较，P^a＜0.01，与治疗1组比较P^b＜0.05。
表14三组对强直性脊柱炎治疗效果比较

与对照组比较，P^a＜0.01，与治疗1组比较，P^b＜0.05。
7.结论
与对照组比较，本发明提供的注射剂对类风湿性关节炎和强直性脊柱炎具有显著的疗效；治疗1组与治疗2组比较，对类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的治疗效果存在差异；表明木棉花、密蒙花和佩兰的加入可提高实施例7的注射剂对类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的疗效。
4.2治疗坐骨神经痛的疗效
1.试验病例
收治68例患者均坐骨神经痛诊断标准，年龄30-60岁，病程2个月-4年。
2.分组及给药
将68例坐骨神经痛患者随机分成治疗1组24例，治疗2组28例，对照组16例；治疗1组静脉滴注本发明实施例7所述的注射剂，一次15ml(加入250ml 0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；治疗2组静脉滴注本发明实施例8所述的注射剂，一次15ml(加入250ml0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；对照组静脉滴注麝香注射剂(成分：由人工麝香、郁金、广藿香、石菖蒲、冰片、薄荷脑组成)，一次15ml(加入250ml 0.9％氯化钠注射剂稀释)，每日1次，20日为一疗程。
3.疗效评定标准
痊愈：疼痛全部消失；
显效：疼痛明显好转；
好转：疼痛有所好转；
无效：治疗前后没有变化。
4.治疗分析
将患者临床资料经整理分析，将治疗1组、治疗2组与对照组在痊愈、显效、有效和无效四个标准中进行比较，通过t检验来验证治疗组和对照组之间的差异。
5.结果
治疗1组、治疗2组和对照组的患者均给药2个疗程，三组对坐 骨神经痛的治疗效果比较分别见表15；
表15三组对坐骨神经痛治疗效果比较

与对照组比较，P^a＜0.05，P^b＜0.01；与治疗1组比较P^c＜0.01。
6.结论
与对照组比较，本发明提供的注射剂对坐骨神经痛具有显著的疗效；治疗1组与治疗2组比较，对坐骨神经痛的治疗效果存在显著差异；本发明实施例8的注射剂对坐骨神经痛的疗效明显好于实施例7的注射剂；表明木棉花、密蒙花和佩兰的加入可显著提高实施例7的注射剂对坐骨神经痛的疗效。
4.3治疗痛风的疗效
收治痛风患者共82例，年龄均在20-60岁之间，排除妊娠和哺乳期患者。
2.分组及给药
将75例痛风患者随机分成治疗1组28例，治疗2组30例，对照组17例；治疗1组静脉滴注本发明实施例7所述的注射剂，一次15ml(加入250ml 0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；治疗2组静脉滴注本发明实施例8所述的注射剂，一次15ml(加入250ml0.9％氯化钠注射剂)，每日1次，20日为一疗程；对照组静脉滴注安痛定注射剂，每日1次，7日为一疗程。
3.检查
临床表现：下肢红肿热痛，不能着地，活动不便；
实验室检查：血尿酸650-800μmol/L。
4.疗效评定标准
痊愈：治疗后病症全部消失，达到临床治愈标准，血尿酸恢复正常；
显效：治疗后病情体征明显改善，血尿酸含量降低2/3以上；
有效：治疗后病情体征有所改善，血尿酸含量降低不到2/3；
无效：治疗前后无变化。
5.治疗分析
将患者临床资料经整理分析，将治疗组与对照组在痊愈、显效、有效和无效四个标准中进行比较，通过t检验来验证治疗组和对照组之间的差异。
6.结果
治疗1组、治疗2组和对照组的患者均给药2个疗程，三组对痛风的治疗效果比较见表16；
表16三组对痛风治疗效果比较

与对照组比较，P^a＜0.05，P^b＜0.01；与治疗1组比较P^c＜0.01。
7.结论
与对照组比较，本发明提供的注射剂对痛风具有显著的疗效；治疗1组与治疗2组比较，对痛风的治疗效果存在差异；本发明实施例8的注射剂对痛风的疗效明显好于实施例7的注射剂；表明木棉花、密蒙花和佩兰的加入可显著提高实施例7的注射剂对痛风的疗效。