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1、(10)申请公布号 CN 101953246 A (43)申请公布日 2011.01.26 CN 101953246 A *CN101953246A* (21)申请号 201010532213.0 (22)申请日 2010.11.05 A01C 1/02(2006.01) (71)申请人 黑龙江八一农垦大学 地址 163319 黑龙江省大庆市高新技术产业 开发区 301 国道东 (72)发明人 孙跃春 毛培胜 樊奋成 黄顶 (74)专利代理机构 大庆市远东专利商标事务所 23202 代理人 马洪发 (54) 发明名称 马蔺种子室内发芽率检验方法 (57) 摘要 本发明的马蔺种子室内发芽率检验方。
2、法属于 种子检验的方法， 是通过下列步骤实现的 ： 将直 径为 12cm 培养皿进行清洗和灭菌， 然后用直径 11.5cm 五层无菌滤纸铺于培养皿底部 ； 将马蔺种 子于 0.2% 甲基托布津溶液按质量比 1:6 9， 充 分混合消毒 3 分钟、 然后用无菌水清洗 5 8 次， 每次 2 3 分钟 ； 培养皿用 0.2% 甲基托布津溶液 将滤纸充分润湿， 吸足药液后， 沥去多余药液， 放 入 50 粒种子、 将胚根伸出部位朝上、 均匀排布于 培养皿上， 将培养皿盖上并包上两层铝箔纸， 放入 光照培养箱， 白天 1250LX 光照 30， 6 8 小时， 晚间黑暗20， 1618小时， 第28天。
3、可统计种子 发芽率， 结束发芽实验。 本发明的马蔺种子室内发 芽率检验方法， 根据马蔺种子的特性， 提供适宜的 萌发条件， 从而保证种子发芽能力得到表现， 具有 操作简单、 准确率高， 达 98% 以上， 时间短 （28d 完 成） 的优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 CN 101953246 A1/1 页 2 1. 马蔺种子室内发芽率检验方法， 是通过下列步骤实现的 ： a、 发芽床的准备 ： 将直径为12cm培养皿进行清洗和灭菌， 然后用直径11.5cm五层无菌 滤纸铺于培养皿底部 ； b、 种子。
4、灭菌 ： 将马蔺种子与0.2%甲基托布津溶液按质量比1:69， 充分混合消毒3分 钟、 然后用无菌水清洗 5 8 次， 每次 2 3 分钟 ； c、 种子萌发和检验 ： 培养皿用 0.2% 甲基托布津溶液将滤纸充分润湿， 吸足药液后， 沥去多余药液， 放入 50 粒种子、 将胚根伸出部位朝上、 均匀排布于培养皿上， 将培养皿盖 上并包上两层铝箔纸， 放入光照培养箱内， 白天 1250LX 光照 30 6 8 小时， 晚间黑暗 20 16 18 小时， 第 28 天可统计种子发芽率， 结束发芽实验。 2. 如权利要求 1 所述的马蔺种子室内发芽率检验方法， 其特征在于在 c 步骤种子发芽 检验中。
5、用 0.2% 甲基托布津对种子提供水分和持续灭菌。 权 利 要 求 书 CN 101953246 A1/3 页 3 马蔺种子室内发芽率检验方法 技术领域 0001 本发明属于种子检验的方法， 特别是涉及到一种马蔺种子室内发芽率检验方法。 背景技术 0002 马蔺， 别名马莲， 马兰花， 是鸢尾科鸢尾属多年生草本植物。广泛分布于我国北方 及西部地区。 马蔺抗逆性强， 尤其耐盐碱， 是盐化草甸的建群种， 由于其根系发达， 抗旱能力 强， 叶片返青早、 绿期长、 花色淡雅， 使其非常适合于我国北方和西部地区的城市绿化、 水土 保持以及盐碱地改良， 城市绿化可广泛用于开放绿地、 我国北方和西部地区的城。
6、市绿化、 水 土种子品质检验中发现， 马蔺种子在实验室发芽困难， 常规发芽试验检测的结果差异大， 重 复率低， 检测时间长， 不能满足要求， 而实验室也没有相应的检验技术， 给马蔺的应用带来 很多障碍。因此， 迫切需要一种能准确检测马蔺发芽能力的室内检验方法。 发明内容 0003 本发明旨在于克服现有技术的不足， 提供了一种马蔺种子室内发芽率检验方法。 0004 申请人研究发现， 马蔺种子萌发有不同于一般种子的特点 ： 主要是对光的要求， 另 外极易发霉。常规种子检验将种子萌发条件分为需光种子和需暗种子， 或者给予光照或者 给予黑暗， 而马蔺种子对光的要求是需散射光而忌强光， 必须将摆好种子的。
7、培养皿用铝箔 纸包裹严实， 放在有光照条件的培养箱中， 培养效果最好。 0005 马蔺种子的适宜萌发温度应为 20 30变温， 白天配合光照 30 6 8 小时， 晚 间黑暗 20 16 18 小时。马蔺种子直接裸露在光照条件下种子萌发能力受到抑制， 但在 完全黑暗条件下种子发芽情况也不好。具有忌强光喜散射光的特点， 培养皿需用铝箔纸包 裹严实， 放在有光照条件的培养箱中培养效果最好。 0006 马蔺有厚实的种皮包裹， 另外胚乳是构成种子的主要成分， 种子发芽速度较慢， 在 无土壤条件下， 种子极易发霉， 处理好发霉问题是保证种子发芽成功的关键， 因此， 对种子 进行认真消毒， 用 0.2% 。
8、甲基托布津水溶液做为培养液是控制发霉的关键。 0007 据此， 本发明的马蔺种子室内发芽率检验方法， 是通过下列方法实现的 ： a、 发芽床的准备 ： 将直径为12cm培养皿进行清洗和灭菌， 然后用直径11.5cm五层无菌 滤纸铺于培养皿底部 ； b、 种子灭菌 ： 将马蔺种子于0.2%甲基托布津溶液按质量比1:69， 充分混合消毒3分 钟、 然后用无菌水清洗 5 8 次， 每次 2 3 分钟 ； c、 种子萌发和检验 ： 培养皿用 0.2% 甲基托布津溶液将滤纸充分润湿， 吸足药液后， 沥 去多余药液， 放入 50 粒种子、 将胚根伸出部位朝上、 均匀排布于培养皿上， 将培养皿盖上并 包上两。
9、层铝箔纸， 放入光照培养箱， 白天 1250LX 光照 30 6 8 小时， 晚间黑暗 20 16 18 小时， 第 28 天可统计种子发芽率， 结束发芽实验。 0008 如果在发芽过程中， 不能保持无菌环境， 需用 0.2% 甲基托布津代替蒸馏水对种子 提供水分和持续灭菌。 说 明 书 CN 101953246 A2/3 页 4 0009 采用上述的光照和灭菌处理， 结合五层滤纸保证水分， 是保证马蔺发芽的关键， 也 是本发明的特点。 0010 本发明的马蔺种子室内发芽率检验方法， 根据马蔺种子的特性， 提供适宜的萌发 条件， 从而保证种子发芽能力得到表现， 具有操作简单、 准确率高， 达 。
10、98% 以上， 时间短 （28d 完成） 的优点。 具体实施方式 0011 本发明的马蔺种子室内发芽率检验方法， 是通地下列步骤实现的 ： 发芽床准备。培养皿采用直径 12cm， 进行彻底清洗和灭菌， 然后用直径 11.5cm 无菌滤 纸五层铺于培养皿底部， 将种子发芽床铺五层滤纸， 因发芽期间种子需水量较多且需特殊 光照处理， 因此需用五层滤纸 ； 种子灭菌。0.2% 甲基托布津溶液按质量比 1:8， 充分混合消毒 3 分钟， 然后用无菌水清 洗 7 次， 每次 2-3 分钟。发芽过程中如果不能保证无菌环境， 需用 0.2% 甲基托布津代替蒸 馏水对种子提供水分和持续灭菌 ； 每个培养皿用 。
11、0.2% 甲基托布津溶液将滤纸充分润湿， 吸足药液后， 沥去多余药液， 放 入 50 粒种子， 将胚根伸出部位朝上， 均匀排布， 摆好种子后将培养皿盖上， 包上铝箔纸， 放 入光照培养箱， 将培养条件设置为白天 1250LX 光照 30 8 小时， 晚间黑暗 20 16 小时， 每 七天检查一下水分和发芽情况， 发现霉变种子及时去除并做好记录， 第 28 天可统计种子发 芽情况， 结束发芽实验。为是提高检测准确率， 每个批次种子进行上述重复检验至少四次。 0012 下面对马蔺种子的生活力及发芽有关的因素进行实验， 结果如下 ： 1、 马蔺种子的生活力测定 种子生活力是种子发芽的潜在能力和种胚所。
12、具有的生命力。测定方法参考 牧草种子 检验规程 中 “生活力的生物化学 ( 四唑 ) 测定” 法进行。随机数取 100 粒种子， 4 个重复， 解除种子休眠 （参照文献 ： Sun Y. C.（孙跃春） , Zhang Y. J., Wang K. and Qiu X. J. NaOH scarification and stratification improve germination of Iris lactea var. chinensis seed. Hortscience 2006,41(3) ： 773-774） ， 用20下蒸馏水预湿24h， 然后靠 近胚将种子纵切， 使胚暴露。
13、， 用1%的四唑溶液在30黑暗条件下染色24h， 然后在立体解剖 镜下进行观察鉴定， 以胚完全染色的为具有生活力的种子。取三个不同采收年度的种子分 别检测。结果 ： 2006 年采收种子 2007 年采收种子 2009 年 （当年） 采收种子 生活力 （%）62.35%65.23%87.75% 2、 光照对马蔺种子发芽的影响 采用直径12cm培养皿， 进行彻底清洗和灭菌， 然后用直径11.5cm无菌滤纸五层铺于培 养皿底部 （五层滤纸可保持较多水分， 保证七天以上不用打开培养皿补充水分） 。将种子与 0.2% 甲基托布津溶液按质量比 1:8， 充分混合消毒 3 分钟。每个培养皿用 0.2% 甲。
14、基托布 津溶液将滤纸充分润湿， 吸足药液后， 沥去多余药液即可 ； 放入 50 粒种子， 将胚根伸出部位 朝上， 均匀分开， 摆好种子后将培养皿盖上， 分别放入 a 连续黑暗、 b 连续 1 250 勒克司 (Lx) 光照、 c 用一层铝箔纸将培养皿包严， 在白天设置温度为 30时， 给以 1 250 勒克司 (Lx) 光 照 8h， 夜间设置黑暗， 温度 20， 16h。各批次种子发芽情况如下 ： 说 明 书 CN 101953246 A3/3 页 5 种子萌发受光调节， 通过光强和光波长来确定其在土壤中的位置。马蔺适宜生长在贫 瘠、 轻度盐碱化的土壤环境， 种子萌发速度较慢， 种胚较小， 。
15、但胚乳中营养贮存较丰富， 因此 在长期适应环境的过程中逐渐选择了在土壤中一定深度进行萌发， 通过光确认在土壤中的 位置， 土壤中能提供较土壤表面更稳定的水热条件， 当在土中埋的太深， 种子没有足够的能 量长出地面， 种子离地面太近， 湿度变化太大， 不能满足萌发过程中的水分， 因此， 在土中太 深或太浅都不适宜萌发， 而种子确定其在土壤中的位置， 光起着极其重要的作用。 从上面数 据看出， 光照抑制马蔺种子萌发， 但完全黑暗也有一定抑制， 用铝铝箔纸包严， 模仿种子在 地面下几厘米的情况， 发芽效果最好， 准确率达 98% 以上。 0013 3、 发芽过程中的灭菌与发芽率的关系 （蒸馏水、 无。
16、菌水与 0.2% 甲基托布津溶液比 较） ： 2009 年批次种子灭菌后， 分别采用蒸馏水、 无菌水、 0.2% 甲基托布津溶液为培养皿中种 子提供水分， 统计培养 28d 发芽率， 霉变率。 蒸馏水 无菌水 0.2% 甲基托布津溶液 发芽率 12.35% 16.64% 86.75% 准确率 14.07% 18.96% 98.86% 霉变率 73.4%65.8%0.56% 0014 试验中， 发芽多次失败的原因是霉菌污染， 腐烂、 发霉导致试验失败，（参考文献 ： 王永春， 孙群， 丁自勉等促进马蔺种子萌发的前处理方法探讨 ( 简报 )， 草地学报， 2009， 17 （2） ： 264 26。
17、6） 有相似经历， 经咨询相关植物种子病害的专家， 后又经过多次试验， 最后确 定 0.2% 甲基托布津溶液代替水做为培养液， 可保证种子不被或极少 （少于 1%） 被霉菌感染， 从而保证发芽的正常时行， 准确率达 98.86%。 0015 4、 种子摆放位置与发芽率 ： 2009 年批次种子灭菌后， 分别采用胚根伸出部位朝下 （贴在滤纸上） 、 胚根伸出部位朝上、 和随机摆放， 统计培养 28d 发芽率。 胚根伸出部位朝下胚根伸出部位朝上随机摆放 发芽率20.54%87.22%58.52% 准确率 （与生活力相比）23.41%99.40%66.69% 0016 试验中发现， 当胚根伸出， 遇到滤纸时， 往往就会阻止胚根的进一步伸长， 影响发 芽结果， 而将胚根伸出位置向上摆放时， 有最好的发芽结果， 准确率达 99.40%。 说 明 书 。