用于低出生体重儿的营养组合物.pdf

本发明提供了极低出生体重儿用营养组合物，所述组合物包含26.5至38g/l的低变应原性水解乳清蛋白来源(其具有8至20的水解程度)、37至46g/l的脂肪来源(其中20％至50％为中链甘油三酯并具有6至12的n6∶n3比值)，以及50至100g/l的糖类来源，所述组合物含有3.2至4.0克蛋白质/100千卡。

1.出生体重低于1500g的婴儿用营养组合物，其包含26至38g/l的低变应原性水解乳清蛋白来源、37至46g/l的脂肪来源和50至100g/l的糖类来源，所述组合物含有3.2至4.0克蛋白质/100千卡，所述低变应原性水解乳清蛋白来源具有8至20的水解程度，所述脂肪来源中20％至50％为中链甘油三酯并具有6至12的n6∶n3比值。 2.权利要求1的组合物，其中水解程度为9至16。 3.权利要求1或2的组合物，其中乳清蛋白来源是甜乳清或乳清蛋白分离物，所述甜乳清中已经去除了酪蛋白-糖-巨肽。 4.权利要求3的组合物，其另外包含占蛋白质0.1wt％至2wt％的游离精氨酸和/或占蛋白质0.1wt％至3wt％的游离组氨酸。 5.权利要求1或2的组合物，其包含3.4至3.7克蛋白质/100千卡。 6.权利要求1或2的组合物，其中脂肪来源包含25％至45％的中链甘油三酯。 7.权利要求1或2的组合物，其中脂肪来源包含5％至20％的结构化脂质，其中所述结构化脂质中Sn2位置上包含的至少50％棕榈酸残基是酯化的。 8.低变应原性水解乳清蛋白来源在制备用于促进出生体重低于1500g的婴儿生长的营养组合物或药物中的用途，所述促进出生体重低于1500g的婴儿的生长表示帮助出生体重低于1500g的婴儿达到与子宫内相同胎龄胎儿所显示的相当的生长速率，其中对应于3.2至4.0克蛋白质/100千卡的蛋白质含量，所述低变应原性水解乳清蛋白具有8至20的水解程度。 9.权利要求8的用途，其中所述水解程度为9至16。 10.权利要求8或9的用途，其中所述乳清蛋白来源是甜乳清或乳清蛋白分离物，所述甜乳清中已经去除了酪蛋白糖-巨肽。 11.权利要求10的用途，其中所述组合物另外包含占蛋白质0.1wt％至2wt％的游离精氨酸和/或占蛋白质0.1wt％至3wt％的游离组氨酸。 12.权利要求8或9的用途，其中所述营养组合物的蛋白质含量为3.4至3.7克/100千卡。

发明领域

本发明涉及用于极低出生体重的早产儿的营养组合物，和用于满足这类婴儿营养需求的方法。 

发明背景 

母乳是对所有婴儿推荐的。然而，在一些情况下(尤其是在早产儿的情况下)，母乳喂养可能由于医学原因而是不足的或不成功的或不建议的，或甚至是不可能的。已开发了针对这些情形的婴儿配方。 

早产儿是在怀孕37足周之前出生的婴儿。这类婴儿一般表现出功能不成熟，提前程度越大，功能不成熟越显著。这种不成熟以多种方式证实。例如，早产儿很可能具有不成熟的胃肠道，尤其是关于吸收营养的能力，以及肠屏障功能的发育和有效性。 

已经提出多种技术来促进早产儿的肠屏障功能或胃肠健康。例如在US6132710中，对早产儿施用纯化的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌株，以防止由感染和炎症引起的对粘膜组织的伤害，特别是通过鼻胃施用以防止胃肠组织伤害和降低新生儿坏死性小肠结肠炎的风险。 

另外，早产儿也可患有一些氨基酸(如苯丙氨酸)代谢受限，如果蛋白质摄入超出降解能力，则这可导致严重的氨基酸失衡。另一方面，必需氨基酸的可用性可能是蛋白质合成的限制因素，因而是生长的限制因素。事实上，在早产儿中，对于足月儿而言并非必需的一些氨基酸如酪氨酸和半胱氨酸可能成为必需的。 

医学科学中近来的进展已经使得甚至更早产的婴儿具有存活的机会。现在，可能存活的最小出生体重被认为在500至600g。这类婴儿面临着与 他们的低体重和不成熟程度均相关的特殊问题。 

如果这些极低出生体重儿在子宫中停留了正常的人妊娠周期，则除了达到正常的生理发育外，他们同时会在大小上快速生长。期望对这类婴儿提供合适的营养，以帮助他们达到与他们在子宫中会达到的类似的生长速率。然而，下述需要选择蛋白质的质和量，所述需要是避免通过对不成熟的代谢和排泄功能超负荷而使其能力受损，所述蛋白质的质和量在用于极低出生体重儿的婴儿配方设计中相当重要。 

发明概述 

本发明提供了用于极低出生体重儿的营养组合物，其包含26到38g/l的低变应原性水解乳清蛋白来源(其具有8至20的水解程度)、37至46g/l的脂肪来源(其中20％至50％为中链甘油三酯并具有6至12的n6∶n3比值)，以及50至100g/l的糖类来源，所述组合物含有每100千卡3.2至4.0克的蛋白质。 

本发明涵盖下述用量的低变应原性水解乳清蛋白来源(其具有8至20的水解程度)在制备营养组合物或药物中的用途，所述用量对应于每100千卡3.2至4.0克蛋白质的蛋白质含量，所述营养组合物或药物用于促进极低出生体重儿的生长。 

本发明涵盖通过对婴儿施用治疗量的营养组合物以促进有需要的极低出生体重儿生长的方法，所述营养组合物以对应于每100千卡3.2至4.0克蛋白质的蛋白质含量的量包含低变应原性水解乳清蛋白来源(其具有8至20的水解程度)。 

发明详述 

在本说明书中，以下术语具有以下含义： 

“极低出生体重儿”或“VLBW婴儿”表示出生体重低于1500g的婴儿。 

“水解程度”(DH)表示与通过Adler-Nissen等人在″Determination of the Degree of Hydrolysis of Food Protein Hydrolysates byTrinitrobenzenesulfonic acid″(J.Agric.Food Chem.，1979，第27卷，n°6，1256-1262页)中所述的TNBS方法测量的总氮相比，游离α-氨基氮形式的氮的百分比。其为蛋白质被水解程度的度量。 

“促进VLBW婴儿的生长”表示帮助VLBW婴儿达到与子宫内相同胎龄胎儿所显示的相当的生长速率。 

除非另有说明，所有关于百分比是指以重量计的百分比。 

以克每升为单位的特定养分含量是指将被消耗的营养组合物。在粉末状制品的情况下，这是指根据说明制备的粉末。 

本发明的营养组合物包含具有8至20、更优选9至16DH的低变应原性水解乳清蛋白来源。尤其优选的水解程度为14。乳清蛋白可以以本领域已知的任何合适方式水解，例如欧洲专利第322,589号中所描述的方式，所述专利的内容并入本文作为参考。如果用作原料的乳清级分基本不合乳糖，则发现在水解和随后的热加工中蛋白质经受少得多的赖氨酸阻断(lysine blockage)。这使得赖氨酸阻断的程度能够从占总赖氨酸的约15wt％减少至占赖氨酸的少于约10wt％；例如约7wt％的酪氨酸阻断，这极大地改善了蛋白质来源的营养品质。 

乳清蛋白的来源可以是酸乳清、甜乳清、乳清蛋白分离物或其混合物。然而优选蛋白质来源以乳清蛋白分离物或改性的甜乳清为基础。甜乳清是是容易获得的乳酪制造副产物，并通常用于以牛乳为基础的婴儿配方的制造中。然而，甜乳清包含不受欢迎地富含苏氨酸并缺乏色氨酸的一种成分，其称作酪蛋白糖-巨肽(caseinoglyco-macropeptide，CGMP)。从甜乳清中去除CGMP以产生具有接近人乳的苏氨酸含量的蛋白质。然后可以对该改性的甜乳清补充其以低含量含有的氨基酸(主要为组氨酸和精氨酸)。用于从甜乳清中去除CGMP的方法描述于EP 880902中。 

如果使用改性的甜乳清或乳清蛋白分离物作为蛋白质来源，则优选补充占蛋白质0.1wt％到2wt％游离精氨酸和/或占蛋白质0.1wt％到3wt％的游离组氨酸。 

下文给出用于本发明营养组合物的合适氨基酸谱的一个实例： 

氨基酸(g/100g蛋白质)       用量 

异亮氨酸                   5.1 

亮氨酸                     12.1 

赖氨酸                     9.1 

甲硫氨酸                   2.2 

胱氨酸                     2.6 

苯丙氨酸                   3.7 

酪氨酸                     3.1 

苏氨酸                     5.6 

色氨酸                     2.1 

缬氨酸                     5.2 

精氨酸                     3.5 

组氨酸                     3.6 

丙氨酸                     5.0 

天冬氨酸                   11.0 

谷氨酸                     15.8 

甘氨酸                     2.2 

脯氨酸                     4.6 

丝氨酸                     4.8 

本发明的营养组合物含有3.2到4.0克/100千卡的低变应原性水解乳清蛋白、更优选3.4到3.7g/100千卡的低变应原性水解乳清蛋白。尤其优选的蛋白质含量为3.6g/100千卡。 

本发明的营养组合物含有37到46g/l的脂肪来源，其中20％到50％为中链甘油三酯。优选脂肪含量为39到43g/l。优选MCT含量在25％至45％间。组成脂肪来源的脂质可以是任何合适的脂肪或脂肪混合物。植物脂肪是尤其合适的；例如大豆油、棕榈油、椰子油、红花油、葵花籽油、玉米油、菜籽油等。分馏的椰子油是MCT的合适来源。 

然而，人乳脂肪和这些植物来源的甘油三酯之间的一个主要差异是大部分植物来源的甘油三酯在Sn2位置上具有不饱和脂肪酸残基，而人乳甘油三酯中Sn2位置上最常见的残基是饱和脂肪棕榈酸的残基。已经显示来自Sn2位置的脂肪酸残基被更好地吸收，并且这对早产儿的棕榈酸吸收尤其重要。因此，优选在脂肪来源中包含从5％至20％的饱和脂质，其中甘油三酯已经进行了酶性的或其他的再酯化，从而棕榈酸残基大部分存在于Sn2位置上。合适的结构化(structured)脂质的一个实例是由LipidNutrition(Loders Croklaan的子公司)以商品名Betapol 出售的结构化脂质。优选脂肪来源中至少40％、更优选45％至55％的棕榈酸残基在Sn2位置上。 

本发明组合物中使用的脂肪来源的n6∶n3比值为6至12，更优选为7至10。尤其优选n6∶n3比值为9∶1。如果期望的话，可以对脂肪混合物补充多达脂肪来源总量3％的长链多不饱和脂肪酸，优选分离自真菌和藻类生物质的长链多不饱和脂肪酸，如Martek Inc分别以商品名Arasco 和Dhasco 出售的花生四烯酸和二十二碳六烯酸。优选花生四烯酸和二十二碳六烯酸的比例为约2∶1。 

营养组合物含有50至100g/l、优选70至90g/l的糖类来源。可以使用任何合适的糖类，例如乳糖、玉米糖浆固体、麦芽糖糊精及其混合物。乳糖和麦芽糖糊精的混合物是优选的，优选在20％乳糖∶80％麦芽糖糊精至60％乳糖∶40％麦芽糖糊精的范围内。尤其优选的混合物为40％乳糖∶60％麦芽糖糊精。 

合适的维生素和无机物可以以满足适当准则的量包含在营养组合物中，尤其注意钠、钾、氯、钙、磷、铁、硒、锌、维生素A和维生素E的含量。例如，组合物每100千卡可含有50至70mg钠(优选55至65mg)、120至150mg钾(优选130至140mg)、80至110mg氯(优选90至100mg)、130至170mg钙(优选140至160mg)、80至105mg磷(优选85至95mg)、1.6至2.5mg铁(优选1.7至2.0mg)、2.0至6.0μg硒(优选3.0至5.0μg)、1.1至1.6mg锌(优选1.4至1.6mg)、800至1200IU维 生素A(优选900至1100IU)，以及3至9IU维生素E(优选5至7IU)。 

营养组合物还可含有每100千卡以下量的核苷酸：UMP 1.0-4.0mg、CMP 1.5-5.5mg、AMP 0.3-1.5mg和GMP 0.1-0.5mg。 

营养组合物可以以任何合适的方式制备。例如，可以通过将水解的乳清蛋白、糖类来源和脂肪来源以合适的比例混合在一起来制备营养组合物。如果使用乳化剂的话，可以在此时包含。可以在此时添加维生素和无机物，但是通常在之后添加以避免热降解。任何亲脂的维生素、乳化剂等等可在混合之前溶解于脂肪来源中。然后可混合进水(优选已经进行了反渗透的水)形成液体混合物。水的温度适宜地为约50℃至约80℃，以帮助成分的分散。可使用市售液化剂形成液体混合物。然后(例如在两个阶段)匀化液体混合物。 

然后通过将液体混合物热处理(例如将液体混合物迅速地加热至约80℃至约150℃范围内的温度下持续约5秒至约5分钟)以减少细菌接种量。这可以通过注入蒸汽、高压灭菌器或通过热交换仪(例如平板热交换仪)进行。 

然后可例如通过瞬时冷却(flash cooling)将液体混合物冷却至约60℃至约85℃。然后可将液体混合物再次匀化，例如在两个阶段中再次匀化，第一阶段约10Mpa至约30MPa，第二阶段约2MPa至约10Mpa。然后可将匀化的混合物进一步冷却，以添加任何热敏感成分，例如维生素和无机物。此时方便调节匀化混合物的pH和固体含量。 

如果期望生产粉末状营养组合物，则将匀化的混合物转移至合适的干燥设备如喷雾干燥器或冷冻干燥器中并转化为粉末。粉末应当具有少于约5wt％的水分含量。 

如果期望生产液体组合物，则优选如下将匀化的混合物无菌罐装入合适的容器中：将匀化的混合物预加热(例如到约75到85℃)，然后将蒸汽注射进匀化的混合物中以将温度升高至约140至160℃；例如约150℃。然后可通过例如瞬时冷却将匀化的混合物冷却至约75至85℃的温度。然后可再次匀化混合物，进一步冷却至约室温并罐装入容器中。用于进行该性 质的无菌罐装的合适设备可商业获得。液体组合物可以是即食型组合物(其具有约10wt％至约14wt％的固体含量)的形式或是浓缩物(其通常具有约20wt％至约26wt％的固体含量)的形式。 

另一方面，本发明提供了通过对有需要的VLBW婴儿施用治疗量的营养组合物以促进该婴儿生长的方法，所述营养组合物以对应于每100千卡从3.2至4.0克蛋白质的蛋白质含量的量包含低变应原性水解乳清蛋白来源(其具有8至20的水解程度)。 

早产儿的蛋白质需求并不完全明确。美国儿科学会(The AmericanAcademy of Pediatrics)推荐了2.9至3.3g/100千卡的蛋白质摄入[AAPCON，2003]，而欧洲儿科胃肠病学和营养协会(The European Societyof Paediatric Gastroenterology and Nutrition)推荐了2.2-3.1g/100千卡的摄入[ESPGAN-CON，1987a]。但是，推荐的膳食蛋白质摄入(RDPI)涉及≥26周妊娠和≥800g的婴儿，而不涉及其需求可能更大的更不成熟或更小的婴儿。RDPI还以正常生长的需要为基础，但是没有对婴儿达到其在子宫内会达到的相当生长速率做出规定，这在这些婴儿中可能是关键性的考虑因素。事实上，在这些高风险的VLBW婴儿中，RDPI可系统性地低于“真正”的蛋白质需要。 

待施用的营养组合物的量将根据婴儿的成熟或生长状态而变化，但是(假定其为婴儿唯一的营养来源)其可按需要喂养，或如果婴儿不能够自已控制摄入的话根据VLBW婴儿护理领域的健康护理专家的预期喂养。 

本发明将通过以下的实施例进一步阐述。 

实施例1 

本发明营养组合物的一个实例如下： 

热量密度(千卡/100ml)                80 

蛋白质g/100千卡                     3.6 

蛋白质                              低变应原性水解乳清蛋白 

                                    DH14 

                                   (占蛋白质)1.4％的游离精氨酸 

                                   (占蛋白质)1.9％的游离组氨酸 

脂肪g/100千卡                      5.2 

其中： 

MCT                                40％ 

酯交换(interesterified)的棕榈油    11％(Sn2位置56％为棕榈酸) 

ARA                                0.6％ 

DHA                                0.3％ 

n6∶n3                             8.2∶1 

ARA∶DHA                           2∶1 

糖类g/100千卡                      9.9 

乳糖/麦芽糖糊精                    40/60 

电解质&无机物每100千卡 

Na(mg)                             64 

K(mg)                              136 

Cl(mg)                             95 

Ca(mg)                             150 

P(mg)                              88 

Ca/P                               1.7 

Mg(mg)                             10 

Mn(μg)                            7.0 

维生素&微量元素每100千卡 

A(IU)                              1000 

D(IU)                              150 

E(IU)                              6.0 

K1(μg)                        8.0 

C(mg)                          30 

B1(mg)                         0.2 

B2(mg)                         0.3 

烟酸(mg)                       4.0 

B6(mg)                         0.2 

叶酸(μg)                      70 

泛酸(mg)                       1.4 

B12(μg)                       0.25 

生物素(μg)                    5.0 

胆碱(mg)                       15 

肌醇(mg)                       6.5 

牛磺酸(mg)                     8.0 

肉碱(mg)                       2.0 

Fe(mg)                         1.8 

I(μg)                         35 

Cu(mg)                         0.15 

Zn(mg)                         1.5 

Se(μg)                        4.0 

核苷酸每100千卡 

UMP(mg)                        3.0 

CMP(mg)                        4.6 

AMP(mg)                        0.5 

GMP(mg)                        0.3 

实施例2 

该实施例将本发明的营养组合物(其被用作一组早产儿的唯一的营养 来源)和对照营养组合物对蛋白质利用、代谢状态和生长的效应进行比较。配方的组成在下表中给出： 

表1.研究的配方的组成(/100千卡)＊

配方主要在蛋白质含量(3.0v 3.6g/100k cal)方面有所差异。其他差异在糖类(10.5v 9.9g)、电解质(见上文)、维生素A(350v 500IU)和铁(1.5mgv 0)含量上出现。 

该研究是前瞻性的、双盲的、随机化的，并且实际上每个婴儿用两种配方交换喂养。配方喂养的顺序以平衡的随机模式预先确定。被随机化至顺序A的婴儿首先被喂给实验蛋白质配方，然后喂给对照蛋白质配方。被随机化至顺序B的婴儿被首先喂给对照蛋白质配方，然后喂给实验蛋白质配方。 

婴儿招募自两个中心：the Special Care Baby Unit，Royal VictoriaInfirmary，Newcastle upon Tyne，UK和Service Universitaire deNeonatologie Liege，Liege，Belgium。该研究由各地的当地伦理委员会(Ethics Committee)批准。从父母/监护人获得了书面的知情同意书。 

早产儿(≤1500g，妊娠≤32周)被认为在该研究中是适宜的。使用在母体内的日期(maternal date)和子宫内超声确定妊娠期。只招收临床稳定并已经建立了完全肠摄入(≥130mls/kg/d)的婴儿。需要氧治疗的婴儿被认为是适宜的，但是如果应达到第一营养平衡时需要氧治疗的婴儿则被去除。该研究中不招收接受利尿药或类固醇的婴儿。 

当适宜的婴儿被确定时，联系负责的医师。然后联系监护人、解释该研究并提供书面的大纲。获得书面的知情同意书后招收婴儿。 

然后获得基线人体测量并进行生物化学检查，并将婴儿随机化至两个研究顺序之一。 

在第一平衡期间，通常用连续的鼻饲灌输喂养婴儿。在第二平衡期间，通常通过推注灌输(bolus infusion)或按需口服喂养婴儿。 

各顺序被设计为持续一周。当肠内摄入≥135mls/kg/d的第一研究配方进行≥48小时时，进行人体测量，取血样并开始第一平衡。在第一平衡结束时，重复人体测量并获得第二血样。然后喂给第二研究配方并重复该过程。完成第二平衡时，该研究结束。 

在第一平衡期间，每天测量所研究配方的第一平衡研究营养摄入，并维持在135-150mls/kg/d。在第二平衡期间，这不总是可能的，因为一些婴儿按需喂养。研究开始时、第一平衡结束时和第二平衡收集结束时测量体重、血清尿素、血清电解质、血pH和剩余碱。在各平衡结束时测量视黄醇结合蛋白(RBP)和血清运铁蛋白浓度。 

采血样在各上午进行，并且时间与各喂养周期(连续喂养)的结束点一致，或在喂养之前立刻进行。立即进行血气分析。也立即分离血浆。将一份等分式样发送至主实验室用于电解质、尿素氮、总蛋白质和白蛋白分析。第二份等分式样储存于-30℃并随后发送用于RBP和运铁蛋白分析。 

如前所述[Cooke，1988a]进行人体测量法。使用常规实验室方法分析电解质、尿素氮、总蛋白质和白蛋白。使用Tina-quant运铁蛋白试剂盒(RocheNo 1 931 628，瑞士)通过免疫比浊法测量运铁蛋白[Kreutzer，1976；Lievens，1994]。使用兔抗人视黄醇结合蛋白[Gulamali，1985]通过免疫比浊法测量RBP，其中N Protein Standard SL(人)被用作标度(Dade Behring，德国)。使用BM/Hitachi 917分析仪(Roche，瑞士)做出测定。 

如前所述[Cooke，1988a]进行养分平衡收集。在各次喂养之前和之后称重装配方的瓶；使用重量差异计算配方摄入。还将瓶充满；满瓶和空瓶之间的重量差异被用作喂养之间累积重量准确度的相互校验。收集置于婴儿周围的预先称重过的尿布上的排泄物(spillage)；使用清洁的和“污染的”尿布之间的重量差异计算损耗。 

在置于婴儿下面的Pyrex皿中收集尿与粪便(女孩)和粪便(男孩)。男孩的尿通过尿收集袋收集。在Samuel J Fomon Infant Nutrition Unit，University of Iowa，Iowa，USA和Service Universitaire de NeonatologieLiege，Liege，Belgium处分析尿、粪便和配方的养分含量。通过微量-Kjeldahl消化和随后的改进的微量扩散分析法[Fomon，1973]测定氮。 

通过原子吸收光谱测定法(Perkin-Elmer model 560)进行钙、镁、铁、铜和锌含量测量。通过Van de Kamer等人[Van de Kamer，1949]方法的改进方法测定脂肪，使用Leloir和Cardini[Leloir，1957]所述的磷钼酸盐(phosphomolybdate)方法测定磷。 

通过用重量差异除以配方的特定比重计算摄入体积。从喂给的体积和配方的内含物计算养分摄入。从粪便的重量和内含物计算粪便排泄，从尿的体积和内含物计算尿排泄。通过从摄入中减去粪便输出计算吸收，通过从吸收中减去尿排泄计算保留(retention)。 

在平衡收集期间，所研究婴儿的护理仅由负责研究婴儿的护士提供。这些护士经过早产儿护理和营养平衡收集的特殊培训。婴儿的整个护理处于负责医师的指导下。所有正规的护理操作应根据指示进行。 

样品尺寸测定涉及氮保留，并基于20mg/kg/d的标准差、30mg/kg/d的显著差异，power＝.80且α＝0.05。考虑到中心-至-中心差(centre-to-centre variation)，估计需要16个婴儿完成该研究。

在计划治疗的基础上使用ANOVA分析数据。结果被认为在p＜.05上是显著的。 

研究了十八个婴儿(女孩＝9，男孩＝9)。均值(±SD)出生体重和胎龄为1226±204g和29.5±1.5周。研究中没有婴儿接受补充供氧或药物。首先有九个婴儿被喂给实验配方，9个婴儿被喂给对照配方。 

在实验开始时，首先喂给实验配方和喂给对照配方的婴儿之间产后日龄(18±8＜25±9d；p＜.05)而非校正年龄(229±5v 229±6d)、体重(1473±262v 1470±197g)、头顶足跟长度(40±2.7v 40±1.7cm)或枕额周缘(29±2.2v 29±1.6cms)有所差异。 

在18个婴儿中进行三十六次平衡。氮吸收和保留是摄入的线性函数。实验蛋白质配方的摄入(743±71＞604±35mg/kg/d，p＜.001)、吸收(624±84＞500±49，p＜.001)和保留(514±85＞426±45，p＜.001)大。配方之间未检测到吸收％(83±6v 84±6)或保留％(71±6v 70±6)的差异。 

剩余平衡结果示于表2中。实验配方的脂肪摄入相似但是粪便排泄更少，同时吸收更大(p＜.05)。尽管在配方之间镁和锌摄入中检测到微小差异，但是钙、磷、镁或锌平衡中无差异。然而，对照配方的铜摄入和吸收更大(p＜.05)。 

取血样时未检测到产后日龄的差异(实验和对照配方为33±10v 31±7d)。实验配方无婴儿产生尿毒症(尿素≥7.0mmol)或代谢性酸中毒(碱不足≥-8.0)[Schwartz，1979]，但是血清尿素更多(3.5±1.3＞2.1±0.8mmol，p＜.001)。配方之间未注意到血pH(7.38±.04v 7.37±.04)或碱过量(-1.2±1.7v-1.4±2.1mmol/L)的差异。 

实验配方未检测到肌酸酐(44±5v 46±12)、总蛋白质(44±3v 45±3g/L)、白蛋白(31±3v 31±3g/L)或运铁蛋白(20±3v 21±4)的差异，但是RBP更大(12.4±3.3＞11.0±2.6；p＜.05)。体重增加也更多(均值差异＝11±12g/d；p＜.05)，这是在男孩中比在女孩中更显著的效应。 

对于出生体重＜1000g的婴儿而言，蛋白质摄入的一致推荐是～3.0g/100千卡。然而，这些推荐假定生长的组织增量为～2.3g/kg/d。最近的数据提示组织需求更接近2.5g/kg/d。假定尿和皮肤中专性丧失的蛋白质[Snyderman，1969]是1.0g/kg/d和90％的分级吸收率，则需求可能更接近3.6g/100千卡。 

表2 

    配方   摄入   吸收   ％吸收   保留   ％保留   脂肪  (g/kg/d)   3.6g  3.0g   6.6±0.6  6.6±0.4   5.1±0.8  4.8±0.7＊   77±9  73±11＊       钙  (mg/kg/d)   3.6g  3.0g   181±17  181±12   85±32  82±36   46±17  45±19   83±32  81±35   46±14  45±19   磷  (mg/kg/d)   3.6g  3.0g   101±10  103±6   88±10  91±7.1   87±5.2  89±4.2   71±13  66±11   70±11  64±10   镁  (mg/kg/d)   3.6g  3.0g   12.6±1.2  11.1±0.8＊   6.0±2.1  5.3±1.7   48±15  48±15   5.6±2.0  5.0±1.8   45±12  45±15   锌  (mg/kg/d)   3.6g  3.0g   1819±175  1964±137＊   574±358  563±361   31±18  28±18   556±354  544±370   31±15  28±18   铜  (mg/kg/d)   3.6g  3.0g   166±16  205±18＊   43±49  83±41＊   25±29  40±19＊    

目前的推荐涉及正常生长的需求，但是在患病的不稳定早产儿中需要时间来建立RDPP。因此，婴儿产生营养缺乏，婴儿越不成熟该缺乏越大。在该研究中，研究开始时的平均蛋白质缺乏为-10g/kg，在这些高风险婴儿中需求进一步增加。 

在该研究中，蛋白质摄入从3.4增加到5.2g/kg/d时，吸收和保留同样增加。没有婴儿成为尿毒症的或发生了代谢性酸中毒，并且在实验配方和对照配方之间没有检测到酸-碱状态的差异。同时，生长更好提示了实验配方更好地满足了这些高风险婴儿的需要。 

该研究的发现是重要的。存在关于高水平膳食蛋白质摄入导致的可能 的不良作用的考虑。最近的推荐已经提出了4至4.5g/kg/d的上限。来自该研究的数据显示高达5.2g/kg/d的摄入不仅被良好耐受，而且伴随着更好的生长。