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1、10申请公布号CN104068013A43申请公布日20141001CN104068013A21申请号201410341051022申请日20140717A01N1/0220060171申请人赤峰市农牧科学研究院地址024031内蒙古自治区赤峰市松山区科研路2号农科院72发明人韩天龙王敏毛冉李清泉石岩王丽萍李志明74专利代理机构赤峰市专利事务所15103代理人刘峰54发明名称一种羊精液稀释保存液及其制作方法57摘要本发明公开了一种羊精液稀释保存液及其制作方法，它由如下原料制作而成柠檬酸钠1220G、果糖1825G、葡萄糖0306G、D半乳糖0205G、L赖氨酸1013G、新鲜卵黄离心上清液10。
2、20ML、亚硒酸钠2560MG、生育酚75180IU、灭菌双蒸水1000ML。本发明的三种糖类，可更好地为精子提供能量，延长精子存活时间。本发明的L赖氨酸，有助于减缓精子死亡，增加精子运动能力，提高精子活力。本发明中的亚硒酸钠和生育酚，具有较强的生物抗氧化功能，可以保护精子质膜不被过氧化物损伤，从而稳定精子结构和维持其功能。51INTCL权利要求书1页说明书4页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页10申请公布号CN104068013ACN104068013A1/1页21一种羊精液稀释保存液，其特征在于它由如下原料制作而成柠檬酸钠1220G、果。
3、糖1825G、葡萄糖0306G、D半乳糖0205G、L赖氨酸1013G、新鲜卵黄离心上清液1020ML、亚硒酸钠2560MG、生育酚75180IU、灭菌双蒸水1000ML。2根据权利要求1所述的配方的羊精液稀释保存液，其特征在于它由如下原料制作而成柠檬酸钠14G、果糖20G、葡萄糖055G、D半乳糖045G、L赖氨酸125G、新鲜卵黄离心上清液15ML、亚硒酸钠50MG、生育酚150IU、灭菌双蒸水1000ML。3根据权利要求1所述羊精液稀释保存液的制作方法，其特征在于它由如下步骤组成11、量取1000ML双蒸水，于110高压灭菌10MIN，获得灭菌双蒸水A；12、准确称取柠檬酸钠1220G，。
4、葡萄糖0306G，D半乳糖0205G，L赖氨酸1013G，分别加入到灭菌双蒸水A中，于5060水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解510MIN，然后于110高压灭菌10MIN，获得溶液B；13、无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行11稀释后，加入到灭菌的离心管中，于47500G离心10MIN，吸取上清液1020ML，于2030静置10MIN，获得卵黄离心上清液C；14、准确称取亚硒酸钠256MG，生育酚75180IU，分别加入到卵黄离心上清液C中，顺时针搅拌混匀，获得溶液D；15、取出溶液B，待其温度降到100以下时，准确称取果糖1825G，加入到溶液B中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液E；16、。
5、待溶液E温度降到3037时，将溶液D缓缓倒入，混匀即可。权利要求书CN104068013A1/4页3一种羊精液稀释保存液及其制作方法技术领域0001本发明属于动物繁殖技术领域，具体说涉及一种用于提高羊新鲜精液长途运输后品质及受精率的精液稀释保存液及其制作方法。背景技术0002羊人工授精采用的精液主要有两种，即新鲜精液和冷冻精液，前者常简称为鲜精，后者简称为冻精。为提高种公羊的利用率，便于精液的保存及运输，一些种羊场及家畜改良工作站常制作冻精，用于羊的配种工作。但生产冻精的设备昂贵，保存运输过程需要及时补充液氮，精液解冻技术要求较高，羊冻精的受精率较低等，针对羊冻精的这些缺点，很难普及应用到各养。
6、殖场和养殖户；因而使用冻精大大限制了羊同期发情及人工授精相关技术的推广应用。0003生产一线常常采用鲜精多用生理盐水进行稀释，这种方法仅可以满足现场采精，现场稀释，即时输精的生产需求。然而在优质种羊数量有限，精液需求区域面积较广的情况下，就需要把优质鲜精进行长途运输，保存时间需要达到6H以上，特殊情况下甚至需要保存48H至72H。因此，良好的羊鲜精稀释保存液成为提高人工输精受精率的关键因素。0004目前，市场上拥有大量的羊冻精稀释液及稀释保存液；鲜精稀释液及稀释保存液较少，其主要组份多为葡萄糖、柠檬酸钠、抗菌素，其精子活率，质膜完整率，顶体完整率不尽理想，且在48小时以后都有较大幅度的降低，见。
7、表1。发明内容0005本发明的目的在于提供一种羊精液稀释保存液及其制作方法，它可延长鲜精运输过程中精子存活时间，保持精子活力，提高精子顶体完整率，质膜完整率，提高受精率。0006本发明的技术方案如下0007一种羊精液稀释保存液，它由如下原料制作而成0008柠檬酸钠1220G、果糖1825G、葡萄糖0306G、D半乳糖0205G、L赖氨酸1013G、新鲜卵黄离心上清液1020ML、亚硒酸钠2560MG、生育酚75180IU、灭菌双蒸水1000ML。0009上述配方的进一步方案为柠檬酸钠14G、果糖20G、葡萄糖055G、D半乳糖045G、L赖氨酸125G、新鲜卵黄离心上清液15ML、亚硒酸钠50。
8、MG、生育酚150IU、灭菌双蒸水1000ML。0010本发明所述羊精液稀释保存液其制作方法由如下步骤组成001111、量取1000ML双蒸水，于110高压灭菌10MIN，获得灭菌双蒸水A；001212、准确称取柠檬酸钠1220G，葡萄糖0306G，D半乳糖0205G，L赖氨酸1013G，分别加入到灭菌双蒸水A中，于5060水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解510MIN，然后于110高压灭菌10MIN，获得溶液B；001313、无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行11稀释后，加入到灭菌的离心说明书CN104068013A2/4页4管中，于47500G离心10MIN，吸取上清液1020ML，于20。
9、30静置10MIN，获得卵黄离心上清液C；001414、准确称取亚硒酸钠256MG，生育酚75180IU，分别加入到卵黄离心上清液C中，顺时针搅拌混匀，获得溶液D；001515、取出溶液B，待其温度降到100以下时，准确称取果糖1825G，加入到溶液B中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液E；001616、待溶液E温度降到3037时，将溶液D缓缓倒入，混匀即可。0017本发明的优点在于本发明配方使精子活率、质膜完整率、顶体完整率都比现有的精液稀释液配方有提高，在三天内随时间延长提高幅度加大。见表1。00181、本发明的羊精液稀释保存液采用的三种糖类，是模拟精浆中的糖类成分含量进行配比组合添加的，可。
10、以更好地为精子提供能量，延长精子存活时间。00192、本羊精液稀释保存液中的L赖氨酸，补充了稀释后精液L赖氨酸含量的降低，有助于减缓精子死亡，增加精子运动能力，提高精子活力。00203、本羊精液稀释保存液中的亚硒酸钠和生育酚，具有较强的生物抗氧化功能，可以保护精子质膜不被过氧化物损伤，从而稳定精子结构和维持其功能。00214、本羊精液稀释保存液均是无菌配制，且不添加任何抗生素，可以在避免滥用抗生素的基础上减少疫病感染和传播。00225、本羊精液稀释保存液成本低廉，制作方法简单。0023本发明的精液稀释保存液与现有稀释液保存液进行常规对比试验，结果如表10024表1本发明配方与现有的精液稀释保存。
11、液效果对比表00250026由表1可以看到，本发明的24H精子活率、质膜完整率、顶体完整率都比现有的精液稀释保存液有提高，48H上述三项指标分别比现有精液稀释保存液提高23、24、23；72H上述三项指标均比现有的精液稀释保存液提高一倍以上，说明本发明精液稀释保存液保存羊鲜精液3天效果很好。附图说明0027图1是本发明工艺流程图。具体实施方式说明书CN104068013A3/4页50028由图1可以看到本发明的稀释保存液的工艺过程，下面结合本发明的方法实施例作进一步说明。0029实施例10030柠檬酸钠14G；果糖20G；葡萄糖055G；D半乳糖045G；L赖氨酸125G；新鲜卵黄离心上清液1。
12、5ML；亚硒酸钠50MG；生育酚150IU；灭菌双蒸水1000ML。0031实施例20032柠檬酸钠12G；果糖18G；葡萄糖035G；D半乳糖025G；L赖氨酸10G；新鲜卵黄离心上清液12ML；亚硒酸钠30MG；生育酚80IU；灭菌双蒸水1000ML。0033实施例30034柠檬酸钠20G；果糖25G；葡萄糖06G；D半乳糖05G；L赖氨酸13G；新鲜卵黄离心上清液20ML；亚硒酸钠60MG；生育酚180IU；灭菌双蒸水1000ML。0035三个实施例所述柠檬酸钠为柠檬酸钠二水合物，其分子式为C6H5NA3O72H2O。0036结合图1可以看到实施例1具体制作方法为0037先制作双蒸水，量。
13、取1000ML双蒸水，于110高压灭菌10MIN，获得灭菌双蒸水A。准确称取柠檬酸钠14G，葡萄糖055G，D半乳糖045G，L赖氨酸125G，分别加入到灭菌双蒸水A中，于5060水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解510MIN，然后于110高压灭菌10MIN，获得溶液B。无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行11稀释后，加入到灭菌的离心管中，于47500G离心10MIN，吸取上清液15ML，于2030静置10MIN，获得卵黄离心上清液C。准确称取亚硒酸钠50MG，生育酚150IU，分别加入到卵黄离心上清液C中，顺时针搅拌混匀，获得溶液D。取出溶液B，待其温度降到100以下时，准确称取果糖20G，加。
14、入到溶液B中，并进行顺时针搅拌溶解，获得溶液E。待溶液E温度降到3037时，将溶液D缓缓倒入，混匀即获得羊精液稀释保存液。0038用本实施例中的羊精液稀释保存液，对健康杜泊种公羊新鲜精液进行3倍稀释后，于4保存72H后，检测其精液品质，结果精子活率为075，顶体完整率为068，质膜完整率为072。0039上述所用药品及生产厂家如下表0040表2药品生产厂家0041说明书CN104068013A4/4页60042本发明提供的一种优质羊精液稀释保存液，突破了诸多关键性技术，采用复合糖类、重要氨基酸和抗氧化因子作为配方中的主要成分，是模拟精浆成分配比而成。可以更好地为精子提供能量、渗透压和温和的生存环境，可以保护精子质膜不被过氧化物损伤，从而稳定精子结构和维持其功能。有助于减缓精子死亡，延长精子存活时间，增加精子运动能力，提高精子活力。本发明不添加任何抗生素，可以在避免滥用抗生素的基础上减少疫病感染和传播减少耐药性。同时，本发明为无菌配制，成本低廉，制作方法简单，可以批量生产并推广应用。本发明可以大大促进人工授精相关技术的推广，提高劳动生产率和经济效益，具有广泛的社会效益和开发价值。说明书CN104068013A1/1页7图1说明书附图CN104068013A。