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1、10申请公布号CN104159616A43申请公布日20141119CN104159616A21申请号201380012576322申请日2013030700329/1220120308CHA61K49/00200601A61C8/0020060171申请人托门医学股份公司地址瑞士格伦兴72发明人马蒂亚斯施纳贝尔劳赫洛伦茨迈内尔法尔科施洛蒂希拉尔夫维瓦74专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人郑斌彭鲲鹏54发明名称在牙科应用中用于诊断炎性组织的口香糖57摘要本文件提出了用于在使用者的口中特别是在下颌骨、上颌骨、植入物或牙齿中或其附近鉴定炎性组织之存在的诊断性口香糖，其包含基材。
2、或者包埋和/或附着至所述基材的颗粒3；元件1，57例如可释放调味分子，其附着至所述基材和/或所述颗粒以产生可直接由使用者检测的所述口香糖的变化；其中所述元件1，57在直接或间接接触标志物4后产生所述变化，所述标志物4应答于细菌介质而由炎性组织释放，例如蛋白水解酶。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014090486PCT国际申请的申请数据PCT/EP2013/0545692013030787PCT国际申请的公布数据WO2013/131993EN2013091251INTCL权利要求书2页说明书14页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书14页。
3、附图2页10申请公布号CN104159616ACN104159616A1/2页21用于在使用者的口中特别是在下颌骨、上颌骨、植入物或牙齿中或其附近鉴定炎性组织之存在的诊断性口香糖，其包含基材或者包埋和/或附着至所述基材的颗粒3；元件1，57，其附着至所述基材和/或所述颗粒以产生可直接由使用者检测的所述口香糖的变化；其中所述元件1，57在直接或间接接触标志物4后产生所述变化，所述标志物4应答于细菌介质而由炎性组织释放。2根据权利要求1所述的口香糖，其中诱导所述变化的所述标志物4为由炎性组织优选由巨噬细胞释放的蛋白水解酶。3根据权利要求1或2所述的口香糖，其中诱导所述变化的所述标志物4为基质金属蛋。
4、白酶MMP，特别是活化的基质金属蛋白酶AMMP，优选地选自基质金属蛋白酶8MMP8、活化的基质金属蛋白酶8AMMP8、基质金属蛋白酶2MMP2、活化的基质金属蛋白酶2AMMP2、基质金属蛋白酶9MMP9、活化的基质金属蛋白酶9AMMP9或其组合。4根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中所述元件1，57为分子或分子装配物，其在直接或间接接触所述标志物4后发生可被所述使用者裸眼察觉的颜色变化，并且其包埋或附着至所述基材3或颗粒3，所述颗粒3包埋和/或附着至所述基材。5根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中所述元件1，57为可释放的、优选可共价释放的调味分子1，5，其附着至所述基材3或颗粒3。
5、，所述颗粒3包埋和/或附着至所述基材。6根据权利要求5所述的口香糖，其中所述调味分子1通过可在直接或间接接触所述标志物4时切割的分子链2附着至所述基材或颗粒3，所述颗粒3包埋和/或附着至所述基材。7根据权利要求6所述的口香糖，其中所述分子链2为多肽链，其优选地具有215个氨基酸，最优选地具有37个氨基酸，所述多肽链直接或间接地通过锚定元件附着至所述基材3或颗粒3，所述颗粒3包埋和/或附着至所述基材，其中所述分子链2优选地选自序列SEQID1至SEQID23，或者其接头部分与选自SEQID24至SEQID44的序列之一的组合。8根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中所述调味分子1，5释放后触。
6、发所述使用者的味觉系统，优选地通过刺激甜味和/或苦味触发。9根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中所述调味分子1，5为多肽链，其优选地具有215个氨基酸，最优选地具有37个氨基酸，所述多肽链直接或间接地通过锚定元件附着至所述基材3，并且其中所述调味分子1，5优选地为具有选自SEQID24至SEQID44的序列之一的多肽链。10根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中当在所述使用者唾液中达到最小标志物浓度时，触发所述在直接或间接接触所述标志物4后的变化，其中所述标志物4优选地为基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋白酶8MMP8或活化的基质金属蛋白酶8AMMP8，并且其中用于产生可直接由所述使用。
7、者检测的所述口香糖之变化的所述唾液中最小标志物浓度大于1NG/ML，优选大于5NG/ML，更优选大于8NG/ML。权利要求书CN104159616A2/2页311根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中当在所述使用者唾液中达到最小标志物浓度时，触发所述在直接或间接接触所述标志物4后的变化，其中所述标志物4优选地为基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋白酶8MMP8或活化的基质金属蛋白酶8AMMP8，并且其中用于产生可直接由所述使用者检测的所述口香糖之变化的唾液中所述最小标志物浓度在1至6000NG/ML的范围内，将优选地在5至4000NG/ML的范围，并且最优选地在8至2000NG/ML的范围。1。
8、2根据权利要求10或11所述的口香糖，其中用于检测牙周炎的最小标志物浓度比用于检测种植体周围炎的最小标志物浓度小10倍，优选小100倍并且更优选小500倍，其中甚至更优选的是，基于此临界浓度差异来区分牙周炎和种植体周围炎中可直接由所述使用者检测的所述口香糖之变化的产生。13根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中所述元件1，57附着至颗粒，所述颗粒具有5至300、优选20至250的大小，其中所述颗粒优选基于共聚合物、共聚合物混合物或共聚合物掺合物，共聚合物优选地选自聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚砜、聚醚砜、聚醚、聚醚酮、聚醚醚酮、聚四氟乙烯、聚偏氟。
9、乙烯、聚酯、聚羟基烷酸酯、聚氨酯、聚酰亚胺、聚醚酰亚胺、聚丁二烯、聚乙烯醇缩丁醛、聚酐、聚氨基酸、聚有机硅氧烷、纤维素、几丁质或者其混合物或掺合物，所述共聚合物优选地具有三维基质，其优选地由于交联过程形成，其中所述三维基质可基于羧基、氨基、巯基或其组合，并且其中优选地将所述元件1，57或互联的锚定元件通过偶联技术附着至所述颗粒，所述偶联技术优选地选自以下偶联技术使用肽偶联进行的酰胺形成；二硫化物偶联；酯形成，优选地使用碳二亚胺活化的酯化；尿烷形成；脲形成；异硫脲形成，优选地通过与二异氰酸酯或二异硫氰酸酯反应；醚形成，优选地通过与含有环氧基团的分子、特别是双环氧化合物反应，或与活化的卤代烷基衍生。
10、物反应；与二醛反应，之后进行还原氨化；迈克尔型加成反应，优选地如通过丙烯酸化的反应参与物与巯基修饰的反应参与物进行的反应；点击化学偶联方案，优选地通过CUI促进的叠氮化物炔32环加成。14根据前述权利要求中任一项所述的口香糖，其中炎性组织引起的口腔和/或黏膜改变诱导所述变化，特别是至少一种以下炎性状态牙龈炎、黏膜炎、牙周炎、种植体周围炎或其组合。15根据前述权利要求中任一项所述的口香糖用于在使用者的口中特别是在下颌骨、上颌骨、植入物或牙齿中或其附近检测炎性组织的用途。权利要求书CN104159616A1/14页4在牙科应用中用于诊断炎性组织的口香糖技术领域0001本发明涉及在牙科应用中用于诊断。
11、炎性组织的装置DEVICE，特别是口香糖CHEWINGGUM。现有技术0002一次近期共识会议得出这样的结论约1240的经植入的牙发生种植体周围炎PERIIMPLANTITIS。这使得种植体周围炎在如今植入物IMPLANT可靠性和性能的提升中成为真正的威胁。0003可论证的是，大多数从业者遵从的用于诊断植入物周围感染和种植体周围炎感染性植入物周围并发症的最晚期的技术状态为探诊出血BLEEDINGONPROBING，BOP。基础的假设是，探诊出血指示炎症和晚期组织退化，并且因此许多在植入物情形下被视为指示种植体周围炎。这个观点太过简单。已经证明了只有重复观察到不存在出血具有高阴性预测值98；即，。
12、牙齿和周围组织是健康的，而存在出血不是预后的阳性预测6；即，对于预测牙齿和周围组织的疾病状态是无用的。0004可获得新的测试，允许床旁检测POINTOFCARE，POC评估胶原酶表达，包含例如MMP8的系统。已经建立了在沟液SULCUSFLUID内检测到的MMP8预测区分健康对象与具有炎性组织的患者，即，已经证明了MMP8的高预后力。而且，在成功的医疗干预后MMP8水平回到正常，允许在治疗已经开始后两周内以及在植入物炎症的特定情况下治疗成功的监测。0005从沟液测量MMP8水平的床旁检测或者说POC技术是复杂的。将由牙科医生从目的部位采集之沟液浸透的测试条转移至复杂的装置中，在所述装置中促进E。
13、LISA样反应以产生对MMP8活性的读出READOUT，本质上是复杂、昂贵且难于操作的系统。0006存在非常多的科学文章涉及金属蛋白酶活性作为口中组织炎症程度之函数的存在和水平。参考例如TSCHESCHE，JOURNALOFPROTEINCHEMISTRY17641，1998，549551；POZO等的JOURNALOFPERIODONTALRESEARCH403，2005，199207；KAHRMARAN等的DISEASEMARKERS，306，2011，299305以及BARNETT等的JOURNALOFPERIODONTOLOGY，795，2008，819826。0007WOA2007/。
14、133721提供了减轻对象中牙周疾病之体征或症状的方法，其通过向对象施用含有天然化合物的组合物，所述化合物抑制基质金属蛋白酶活性和白细胞介素1活性。发明内容0008因此本发明的一个目的在于提供在牙科领域中用于检测炎性组织的新方法。0009该目的和其他目的通过要求保护的主题达到。0010特别地，本发明尤其涉及用于在使用者的口中特别是在下颌骨、上颌骨、植入物或牙齿中或其附近鉴定炎性组织之存在的诊断性口香糖。根据本发明，该口香糖包说明书CN104159616A2/14页5含至少一种基材BASEMATERIAL或者包埋和/或附着至所述基材的颗粒；至少一种元件ELEMENT，例如分子，其用于产生可直接由。
15、使用者检测的所述口香糖之变化即，无需另外的分析工具等，如此基本通过使用5种感官中的至少一种检测，5种感官即看视觉OPHTHALMOCEPTION、听听觉AUDIOCEPTION、尝味觉GUSTAOCEPTION、闻嗅觉OLFACOCEPTION和触触觉TACTIOCEPTION或其组合。根据本发明，所述元件在直接或间接接触标志物后产生变化，所述标志物应答于细菌介质而由炎性组织释放。0011这样的口香糖医药用途是已知的。例如，DE3700180提供了与常规口香糖作用不同的口香糖，其允许像海绵一样带有使用者的唾液使得在取出所述口香糖后，其可例如对于使用者的DNA进行分析。其还提出在所述口香糖中具有。
16、着色指示剂。然而用于分析目的和用于实际诊断的所述口香糖需要从使用者的口中取出。US2011/0081673也涉及用于诊断目的的口香糖，在该案件中为糖尿病的情形。这里所述的口香糖提供酶例如辣根过氧化物酶，并且根据使用者唾液中葡萄糖的存在所述口香糖改变颜色，且在取出所述口香糖之后，其可与颜色图表进行比较来确定糖尿病的风险。WO01/14875也涉及口香糖，此处用来检测使用者唾液中的PH值。将相应的PH敏感性物质分散在胶基中，其作为PH的函数改变颜色。然而这些应用都没有涉及在口中检测炎性组织或建议这样的用途。相反地，本文提出的系统允许患者自监测。本提案PROPOSAL中的链条CHAIN如下响应于组织。
17、退化，I例如以强烈苦味形式的变化由本系统释放，II该苦味可由患者报告。III基于此报告，可作出诊断，以及IV如果适当的话可引导早期治疗。0012如上所指出的，种植体周围炎在如今植入物可靠性和性能的提升中是真正的威胁。本提案通过利用人的感觉特别例如尝/味觉系统来解决该挑战，从而监督结缔组织退化，其在牙龈炎/黏膜炎和牙周炎PERIODONTITIS也称作脓溢、PARODONTITIS或PARADONTITIS/种植体周围炎间标记了边界线也参见图1。该完全新且易于使用的诊断性工具鉴定并区分有种植体周围炎发展风险的对象，为医疗风险评估的机会打开了一个新的窗口，并因此可能在早期干预。该早期检测允许优先的。
18、、成功的、不复杂且良好耐受的治疗。本文遵循的策略是破坏性的，将目前的床旁检测POC；即从业者的办公室诊断转换为自监测，允许在临床不明显的疾病阶段咨询其牙科医生，且在其中相对适度的治疗干涉足以防止植入物和周围组织的进一步破坏，并且相比之下在稍后阶段需要更彻底的干涉也参见图1。0013因此通过获得数位贡献者的先进技术能力开发了完全新的诊断平台。0014植入物周围感染的病程及其最严重形式种植体周围炎从微生物挑战MICROBIALCHALLENGE和生物薄膜BIOLM形成开始。所述微生物挑战触发响应于细菌介质例如脂多糖LPS；革兰氏细菌细胞壁的组分的防御性宿主应答释放细胞因子和其他信号，导致巨噬细胞的。
19、大量渗入。这些能够释放多种蛋白水解酶，包括MMP。在测试的许多其他MMP中，MMP8也称为II型胶原酶已经证明了引人注目的预后力，用于通过增强的袋POCKET形成、连接丧失、骨再吸收、牙龈退缩、增加的牙/齿植入物移动以及最终的牙/齿植入物丧失预测临床进展。MMP8破坏致密组织胶原网络，从而允许有效的渗入作为细菌移除的先决条件，换言之，MMP8活性直接与牙龈结缔组织破坏的第一和临床完全可逆阶段相联系也参见图1，自上面的第二个和第三个框。与其他炎性齿疾病相比，在植入物周围感染中的MMP8大幅上调。例如，把从健康部位吸出之沟液中的说明书CN104159616A3/14页6MMP8水平任意设为1U袋深。
20、33MM；牙龈指数GI为06，所述MMP8水平在中等慢性牙周炎中升至80U袋深56MM；GI16，对于严重慢性牙周炎升至78U袋深59MM；GI20。相反地，相比健康植入物袋深24MM；GI10，在患有种植体周围炎的患者中MMP8被上调至大于950U袋深50MM；GI20。因此，MMP8是用于在达到更严重的疾病状态例如种植体周围炎很早之前检测植入物周围感染之超敏感的预后生物标志物。在本提案中处理的挑战将使得患者能够使用所述系统在图1中概念呈现自监测MMP8活性并且功能性如图2概述。0015因此根据本发明一个优选的实施方案，诱导变化的标志物为由炎性组织优选由巨噬细胞释放或上调的蛋白水解酶。001。
21、6根据另一个优选的实施方案诱导变化的标志物最优选为基质金属蛋白酶MATRIXMETALLOPROTEINASE，MMP，其优选地被活化。优选地，基质金属蛋白酶8MMP8、活化的基质金属蛋白酶8AMMP8、基质金属蛋白酶2MMP2、活化的基质金属蛋白酶2AMMP2、基质金属蛋白酶9MMP9、活化的基质金属蛋白酶9AMMP9或其组合是触发所述口香糖使用者可察觉之变化的目的标志物。0017味觉系统主要具有四种识别甜、酸、咸和苦的原味亚感觉模式。对苦味提供了最大敏感性，且可使用欧洲药典中概述的方法校准苦味来控制患者间变化性。在患者间更难以校准甜味，但是甜味也用作一种策略，尽管对于甜觉察的个体校准有着潜。
22、在挑战。人舌头为品尝甜味和苦味提供了有吸引力的敏感性范围，覆盖了5个数量级。硫酸奎宁苦在低至00004MM被感觉到，甚至与如今我们可得的最先进的分析检测器相当。人工甜味剂糖精可在低至002MM被一般人识别。在本申请的情形下，重要的是某些短肽通常可在低至005至6MM被感知，并且此见解通过为所述系统设计在切割后产生苦味的肽序列而被利用。通过此策略，可避免调味物质的偶联，这是因为经切割的肽序列本身介导受影响患者对苦感觉的识别。0018总之，特别地MMP8系统1蛋白酶敏感性系统提供了牙科医生早期检测并持续监督植入物周围疾病的必要力。所述MMP8敏感性系统识别早期结缔组织损伤。所述系统提供完全新的、对。
23、于牙科医生和患者来说易于使用的工具用于早期监测与患者口腔健康直接相关的植入物周围疾病。0019所提出的系统旨在广泛的应用，包括遵循本文对植入物周围感染概述的原理来检测口腔和黏膜改变。0020因此所述系统完全将植入物周围感染的监测从包含复杂机械的评估转换至使用使用者之人舌头或人眼作为灵敏检测器的自监测。替代了将监测口腔健康状态限制于拜访牙科医生，本方法支持频繁的自监测使得在有阳性信号的情况下，对象可拜访牙科医生的办公室以得到彻底的诊断。通过所述系统也参见图2的模式，临床不明显的口腔疾病组织变得及早检测。主要的创新方面如下0021利用人味觉感觉/味觉系统来监测炎性或其他疾病是完全新的。0022没有。
24、描述过提供用于监测植入物周围疾病最早体征之可察觉响应的结缔组织损伤检测齿植入物系统。0023具有诊断性特征的口香糖是已知的，但不是响应于用于口腔疾病发展预后之经活化酶上调的那些。说明书CN104159616A4/14页70024从已知序列选择MMP8敏感系统，其提供在植入物周围疾病中相对于其他蛋白酶优先检测MMP8的必要性能。0025如本文确定的植入物周围疾病与MMP8上升的相关性控制通过数据集在文献中可得的信息，从而提供用于精调谐我们系统的敏感性和选择性并使其适于植入物周围区的目标疾病状态的可靠基础。0026利用现代偶联技术来直接用肽序列修饰塑性球形系统表面或胶。0027一旦附着至肽序列，偶。
25、联的调味物质可降低其苦味道的潜力。该风险可通过在苦味分子上选择不同偶联位点、通过选择不同苦味分子以及通过设计苦味肽序列已知其诱导苦味而降低。0028因此相应地，根据另一个优选的实施方案，元件可在一方面为分子或分子装配物ASSEMBLY，其在直接或间接接触标志物后发生可被使用者裸眼察觉的颜色变化，并且其包埋或附着至基材或者颗粒，所述颗粒包埋和/或附着至所述基材。0029在另一方面所述元件可为可释放的、优选可共价释放的调味分子，其附着至基材或颗粒，所述颗粒包埋和/或附着至所述基材。0030调味分子可以通过氢键结合或通过可在直接或间接与标志物接触时切割分子链可释放地附着至基材或颗粒，所述颗粒包埋和/。
26、或附着至所述基材。释放例如可能通过由标志物本身的分子链裂解，然而还可能通过以下机制例如所述标志物团聚或附着至接头或附近的另一个元件，诱导构象变化等，相应地降低所述调味分子与支持物的结合常数并释放所述分子以产生相应的味道感觉。0031分子链可例如为多肽链或糖链或者其组合。在多肽链的情况下，优选地由215个，更优选地由37个氨基酸构成，并且优选地接头分子直接或间接地通过锚定元件附着至基材或颗粒，所述颗粒包埋和/或附着至所述基材。0032用作可在直接或间接与标志物接触时切割分子链以附着例如苦味分子例如奎宁、咖啡因、可可碱、柚苷、三氯蔗糖SUCRALOSE或纽甜NEOTAME的可能接头序列由以下系统给。
27、出，其中MMP8系统的切割位点由斜线指明0033GLYPROGLNGLY/ILEALAGLYGLNSEQID1；0034GLYASNGLNGLY/ILEALAGLYGLNSEQID2；0035GLYLEUGLNGLY/ILEALAGLYGLNSEQID3；0036GLYPROASPGLY/ILEALAGLYGLNSEQID4；0037GLYPROLEUGLY/ILEALAGLYGLNSEQID5；0038GLYPROGLNGLU/ILEALAGLYGLNSEQID6；0039GLYPROGLNPHE/ILEALAGLYGLNSEQID7；0040GLYPROGLNARG/ILEALAGLYGL。
28、NSEQID8；0041GLYPROGLNGLY/LEUALAGLYGLNSEQID9；0042GLYPROGLNGLY/TYRALAGLYGLNSEQID10；0043GLYPROGLNGLY/ILEPHEGLYGLNSEQID11；0044GLYPROGLNGLY/ILEGLUGLYGLNSEQID12；0045ALASERGLNLYSARGPROSERGLNARGHISGLYSERLYSTYR/LEUALATHRALASERSEQID13；说明书CN104159616A5/14页80046ALASERGLNLYSARGPROGLNARGSERLYSTYR/LEUALATHRALASERS。
29、EQID14；0047ACPROLEUGLY2巯基4甲基戊酰基LEUGLYOETSEQID15；0048ACPROLEUGLYSLEULEUGLYOC2H5SEQID16；0049ACPROLEUGLYSCH2CHCH3CH2CH3SEQID17；0050ACPROLEUGLYLEULEUGIYOC2H5SEQID18；0051DNPPROLEUGLYILEALAGLYGLNDARGOHSEQID19；0052LYSPROLEUGLYLEULYSDNPALAARGNH2SEQID20；0053GLYPROHYP5GLYPROLYSGLYPROGLNGLY/LEUARGGLYGLNLYSDNPG。
30、LYVALARGGLYPROHYP5NH2SEQID21；0054GLYPROHYP5GLYPROSERGLYALAGLUGLYPROLYSGLYPROGLNGLY/LEUARGGLYGLNLYSDNPGLYVALARGGLYPROHYP5NH2SEQID22；0055GLYPROHYP4GLYPROLYSGLYPROGLNGLY/LEUARGGLYGLNLYSDNPGLYVALARGGLYLEUHYPGLYGLNARGGLYGLUARGGLYPROHYP4NH2SEQID230056调味分子释放后优选地通过刺激甜味和/或苦味优选地触发使用者的味觉系统。0057调味分子与接头一起可为肽本身，所。
31、以例如以下系统的组合之一，其中如果释放斜线的右边部分，则提供味觉0058GLYTHRPROGLYPROGLNGLY/ILEALAGLYGLNARGSEQID24；0059GLYTHRALAGLYPROPRO/GLYTHRPROGLYPROGLNGLYSEQID25；0060一般而言，下面的苦味序列可与上面提到的接头肽仅取其斜线的左边部分组合0061/ILEALAMETGLULYSSEQID26；0062/LEULEUGLYALAILELEUSEQID27；0063/ILEALAGLYILEPHEPROSEQID28；0064/ILEALAPHEPROSEQID29；0065/ILEALAGLY。
32、ILESEQID30；0066/ILEPHEPHEPROSEQID31；0067/ILEPHEILEPHESEQID32；0068/ILEPHEVALLEUSEQID33；0069/ILEPHETRPILESEQID34；0070/ILEPHETRPTYRSEQID35；0071/TYRILEPHEPROLAUVALSEQID36；0072/ILETRPGLYGLNSEQID37；0073/ILETRPILEPHESEQID38；0074/ILETRPGLYPROSEQID39；0075/ILEALAGLYGLNILETYRPROILESEQID40；0076/ILESERPROPROPROG。
33、LYSEQID41；0077/ILEALAGLYGLNVALVALVALSEQID42；0078/GLYPROPHEPROVALILESEQID43；说明书CN104159616A6/14页90079/PHEALALEUPROGLUTYRLEULYSSEQID44；0080/LEUILETYRPROILESEQID45；0081可仅在切割位点之前使用乙基化或乙酰化来降低苦味。例如0082OETGLYPROLEUGLY/SEQID46；0083CH3OCGLYPROLEUGLY/SEQID47。0084一般而言，TYR、ILE、TYR、PHE、PRO、LEU、VAL的组合以及TYR、ILE、TY。
34、R、PHE、PRO、LEU、VAL的组合可用于苦味部分序列。根据另一个优选的实施方案，当在使用者唾液中达到最小标志物浓度时，触发与所述标志物直接或间接接触后的变化。优选地，当在使用者唾液中达到最小基质金属蛋白酶标志物浓度时，触发与所述标志物直接或间接接触后的变化，特别是基质金属蛋白酶8MMP8或活化的基质金属蛋白酶8AMMP8，用于产生可直接由使用者检测的口香糖之变化的所述唾液中最小标志物浓度大于1NG/ML，优选大于5NG/ML，更优选大于8NG/ML。0085当在使用者唾液中达到最小标志物浓度时，优选触发与所述标志物直接或间接接触后的变化，其中优选地标志物为基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋。
35、白酶8MMP8或活化的基质金属蛋白酶8AMMP8，并且其中用于产生可直接由使用者检测的口香糖之变化的所述唾液中最小标志物浓度在1至6000NG/ML的范围内，优选地在5至4000NG/ML的范围内，最优选地在8至2000NG/ML的范围内。0086用于检测牙周炎的最小标志物浓度比用于检测种植体周围炎的最小标志物浓度小10倍，优选小100倍并且更优选小500倍，其中甚至更优选的是，基于此临界浓度差异区分牙周炎和种植体周围炎中可直接由所述使用者检测的所述口香糖之变化的产生。0087元件可附着至颗粒，所述颗粒具有5至300M、优选20至250M的大小，其中所述颗粒优选基于聚合物或共聚物或共聚合物混合。
36、物或共聚合物掺合物BLEND，优选基于选自聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯的聚合物或共聚物，也可能选自聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚砜、聚醚砜、聚醚、聚醚酮、聚醚醚酮、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯POLYVINYLIDENEFLUORIDE、聚酯、聚羟基烷酸酯POLYHYDROXYALKANOATE、聚氨酯、聚酰亚胺、聚醚酰亚胺、聚丁二烯、聚乙烯醇缩丁醛、聚酐、聚氨基酸、聚有机硅氧烷、纤维素、几丁质或者其混合物或掺合物。系统可形成三维基质，例如由于交联过程。所述三维基质可基于羧基、氨基、巯基THIOLGROUP或其组合。优选使用具有三维羧基基质的聚甲基丙烯酸甲酯。0088优选地，将元件或互。
37、联的锚定元件通过常规偶联技术附着至颗粒，优选地通过二硫化物偶联、通过酯化的溴化合物与叠氮化钠进行或通过经二羧酸、二异氰酸酯或双环氧化合物DIEPOXIDE的偶联。可通过以下方法将所述元件或互联的锚定元件附着至颗粒使用肽偶联方法的酰胺形成、二硫化物偶联、使用如碳二亚胺活化之酯化的酯形成、通过与二异氰酸酯或二异硫氰酸酯反应产生的尿烷、脲或异硫脲形成、通过与含有环氧基团的分子如双环氧化合物或活化的卤代烷基衍生物反应的醚形成、与二醛反应后进行还原氨化、迈克尔型加成反应MICHAELTYPEADDITIONREACTION如例如通过丙烯酸化的反应参与物REACTIONPARTNER与巯基修饰的反应参与物。
38、进行的反应或者通过已知的点击化学CLICKCHEMISTRY偶联方案如CUI促进的叠氮化物炔32环加成。炎性组织引起的口腔和/或黏膜改变通常诱导变化，特别为至少一种以下的炎性状态牙龈炎、说明书CN104159616A7/14页10黏膜炎、牙周炎、种植体周围炎或其组合。0089此外，本发明涉及如上概述的口香糖用于在使用者的口中特别是在下颌骨、上颌骨、植入物或牙齿中或其附近检测炎性组织的用途。0090本发明的另一些实施方案在从属权利要求中规定。附图说明0091在下文参考附图描述了本发明一些优选的实施方案，其是为了说明本发明目前一些优选实施方案的目的，并且不是为了限制本发明的目的。在附图中，0092。
39、图1示意性地示出在本申请中用于早期诊断植入物周围感染发展之风险因子所遵循的诊断方法，其中系统框5正在检测指示结缔组织退化的基质金属蛋白酶MMP调节，如在牙龈炎/黏膜炎和牙周炎/种植体周围炎的边界线上所示；如今一旦临床体征出现框4其中病程可能不可逆且可流行持久并发症的阶段，通常就可识别并发症；如今，可在牙科医生的办公室使用床旁检测系统进行单一评估，所述床旁检测系统优先测量来自受影响植入物附近采集之沟液样品的MMP8，其中自然地，这些单一评估提供有限的信息；所提出的系统设计为允许基于需要、自监测，因此向患者提供连续的监测，并且基于此牙科医生可早期诊断并发症；0093图2在A中示出功能性如何与MMP。
40、8蛋白酶敏感性肽序列中间部分相联系，所述序列位于锚ANCHOR左和调味物质右之间；在B中示出所述序列如何与颗粒或另一表面连接，在本申请中称为“系统”；当与特定水平下的MMP8接触后，切割所述肽序列且松开的调味物质触发被患者识别的强烈味道；在C中示出所述系统如何配制入口香糖；在咀嚼期间，所述对于结缔组织损伤的自监测启动，所述结缔组织损伤是发生植入物周围感染的预后因素；所述口香糖提供全口特征FULLMOUTHPROLE；清楚的是，当被活化时，牙科医生必须进行彻底的诊断以鉴定如患者品尝到的阳性信号的根本原因；以及0094图3示出不同的实施方案，其中在A和B中示出第一实施方案，其中切割附着至基底SUB。
41、STRATE或锚的接头序列最初A调味物质附着其上来释放所述调味物质B，在C和D中示出第二实施方案，其中附着至基底或锚的接头序列最初C调味物质通过非共价键合附着，例如配位键构象变化使得释放所述调味物质D，并且在E和F中示出第三实施方案，其中物质通过接头附着至基底E且示出在接触触发分子后的颜色变化。0095优选实施方案的描述0096图3示出可释放调味物质1之附着AD或在与存在于唾液中的MMP特别是MMP8相互作用后易于改变颜色之着色剂的附着的不同可能性。0097在如图3A举例说明的第一实施方案中，调味物质分子或复合物1经由接头元件2附着在基底3上，所述基底3可例如为口香糖的颗粒或基材，所述接头元件。
42、2通常为短并可切割的多肽链。所述调味物质分子1本身可为多肽或蛋白质，且其可仅为所述接头元件2的延伸。当存在于唾液中的标志物4与所述接头元件2接触后，后者因蛋白水解作用而被切割，将所述调味物质释放成游离状态5，诱导味觉参见图3B。0098如图3C和D举例说明，存在于唾液中的触发物/标志物4之间的相互作用不一定是MMP触发物和接头元件之间蛋白水解作用情况下的直接相互作用，其也可为间接相互说明书CN104159616A108/14页11作用，例如这样的情况MMP触发物在接头元件附近与基底附着或形成复合物，诱导一些变化例如氢键结构的变化，从而释放调味分子或调味复合物5至周围的唾液中。在此情况下，通常在。
43、所述接头元件2和所述调味物质1之间不存在化学键，然而也可能所述MMP触发物附着且本身触发设置在所述基底3上的蛋白水解系统或者所述接头元件2造成蛋白水解切割以释放所述调味物质。0099图3E和F示出当MMP触发物不诱导调味物质释放而诱导颜色变化的情形。为此，当所述MMP触发物4与相应的着色剂物质6接触后，后者转化为第二个不同的颜色状态7，产生对使用者可察觉的视觉信号和指示提供唾液中足够水平的MMP触发物。如图3E和F举例说明的，颜色变化不仅可能发生在着色剂6保持固定于口香糖的情形下，也可能在接触所述MMP触发物后，释放所述着色剂6，造成在唾液中或口组织中对使用者可察觉的颜色变化。0100实验部分。
44、0101在第一步中，通过使用MMP8敏感系统的固相合成来合成肽序列，所述肽序列使用固相化学由I锚偶联至II敏感性肽序列偶联至III调味物质构成图2。0102合成所述系统的三个组分从CN末端I锚偶联至II敏感性肽序列偶联至III调味物质。0103合成了具有不同蛋白酶敏感性蛋白序列的30个系统作为平台，从其中可选择具有最佳MMP8敏感性的序列并调整对MMP8切割的敏感性。绝对MMP8敏感性与通常具有广泛的底物特异性的蛋白酶不同，使得将系统优化为优先认识到严格的MMP8排他性是不可能的报道MMP8。MMP8应答系统的一些交叉敏感性特别对于MMP1或MMP3必须耐受并对其进行测试。在概念上且在诊断上，。
45、该交叉敏感性是没问题的，因为通过将渗入居住于宿主组织中的细菌来伴随上调MMP1、MMP3和特别是MMP8，即，所有三种蛋白酶检测为同样的生理机制。然而，至少501的相对比例MMP8切割相对于MMP1或MMP8切割相对于MMP3为特异SPECICATION，如例如序列SEQID2、6和10的情况。选择相比MMP1水解更敏感的蛋白质序列及其相对比例。在内部INHOUSE自动固相肽合成SPPS平台上进行合成。合成C至N末端遵循已建立的方案，通过将一个氨基酸的羧基偶联至另一个氨基酸的氨基以及通过适当使用保护基团来避免不期望的反应。最后，如下所概述地将调味物质附着。由人志愿者测试偶联至所述调味物质的经切。
46、割肽序列片段的味道，并且这些测试的反馈有助于进一步修饰肽序列和调味物质以优化苦味。0104寡肽中的苦味与疏水性紧密相关。事实上，并且为了筛选目的，可通过测定肽的Q值肽平均疏水性的量度，Q1400CAL/MOL为可能苦味的阈值来进行。基于此方法，选择以下MMP8切割产物表明是否有苦味NAGASE，HFIELDS，GB1996HUMANMATRIXMETALLOPROTEINASESPECICITYSTUDIESUSINGCOLLAGENSEQUENCEBASEDSYNTHETICPEPTIDESBIOPOLYMERS，40，399416之表2的前5个序列序列15，其示出大约14001700CAL。
47、/MOL的Q并且例如第四序列示出苦味道。如果经切割的肽序列对于可靠识别足够苦，则所述调味物质的偶联有时不是必需的。0105序列15为从NAGASE选择的MMP8敏感性序列，基于Q值计算预测4为苦的并预测2为不苦的。通过用另一个异亮氨酸和/或亮氨酸在C末端修饰更改2产生预测的苦味，并已经在N和C末端分别存在亮氨酸的情形下对苦味优化。当将Q值和苦味联系时说明书CN104159616A119/14页12已经报道了不一致，因此感觉测试对确认基于Q的预测是重要的。通常，对于肽的感觉识别阈值为005至60MMOL/L，即，低于对奎宁的感觉约00004MMOL/L。还偶联奎宁和其他强味道物质并且作为使用如上。
48、给出的经切割产物之苦味道的替代方案。0106可当仍在固相上时进行奎宁用于味觉检测的苦和用于切割之简单测试的荧光，特别是当利用球形系统时或阿斯巴甜ASPARTAME人工甜味剂至“锚蛋白酶敏感性肽”序列N末端的偶联参见图2。可使用双功能接头来将奎宁偶联至所述锚蛋白酶敏感性蛋白序列的N末端。为避免在体内将所述接头从奎宁迅速切割，可安装水解或酶促较不敏感的连接。在第一种方法中，用奎宁的游离仲OH基团处理二异氰酸酯接头如六亚甲基二异氰酸酯形成尿烷键，随后经其保留的异氰酸酯基团将所述接头偶联至肽的N末端形成脲键。第二种方法在于奎宁双键与双环氧化合物例如1，4丁二醇二环氧甘油醚的反应，产生的醚连接的奎宁可随。
49、后通过N烷基化偶联至固相附着的蛋白质。阿斯巴甜或如果需要的话，N保护的阿斯巴甜可经其羧基通过常规肽合成偶联至肽的N末端。在将所述调味分子偶联至肽之后，可从固相切割所形成的缀合物，使用普通分析方法FTIR、NMR、MS纯化和表征。关于锚的策略在下面概述。0107口香糖中球形系统的配制0108为制备肽调味物质缀合物支持球，使用具有三维羧基基质的聚甲基丙烯酸甲酯PMMA载体颗粒直径17至30M。通过常规肽形成方案例如通过使用水溶性碳二亚胺来活化PMMA基质的羧基来将如上概述所合成的缀合物固定至PMMA球。在使用具有干扰官能团之缀合物的情况下，可如上所述使用二硫化物偶联方法。0109为了偶联肽来建立敏感性肽序列，使用以下方法0110手动偶联氨基酸使树脂在DMF中膨胀30分钟并移出后，添加1ML40哌啶/DMF并孵育3分钟。然后，在通过真空过滤移除后，添加1ML20哌啶/DMF并孵育10分钟。在移出后，用DMF洗涤树脂6次1ML，每次1分钟。将氨基酸5当量溶解于DMF中的41090L05MHOBT中，然后转移至N末端去保护的肽基树脂。将3181L8当量的DIC添加至反应混合物并轻轻地振荡1小时。通过真空过滤移除反应混合物后，用DMF洗涤树脂6次1ML，每次1分钟并用DCM洗涤6次1ML，每次1分钟。之后通过使用MMP切割肽。必须用MALDIMS检。