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1、(10)申请公布号 CN 102423320 A (43)申请公布日 2012.04.25 CN 102423320 A *CN102423320A* (21)申请号 201110430983.9 (22)申请日 2011.12.21 A61K 35/413(2006.01) (71)申请人 武汉健民大鹏药业有限公司 地址 430014 湖北省武汉市汉口沿江大道 152 号 (72)发明人 李幼鹤 蔡红娇 罗张龙 (74)专利代理机构 武汉科皓知识产权代理事务 所 ( 特殊普通合伙 ) 42222 代理人 汪俊锋 (54) 发明名称 一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法 (57) 摘要 本发明涉。
2、及一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁 的方法。调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至 37% （g/ml） ； 牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理， 然 后按每 10000ml 牛胆汁接种 100500ml 菌液的比 例， 将大肠杆菌、 变形杆菌或肠球菌的单一菌液或 其组合菌液接种到牛胆汁中， 进行发酵处理 ； 发 酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。本方 法可以大大提高了生产效率， 满足大规模的工业 化生产要求。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 1 页 CN 102423325 A1/1 页 2 1. 一种利用牛。
3、胆汁制备发酵牛胆汁的方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： 1） 调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至 37%（g/ml） ； 2） 牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理， 然后按每 10000ml 牛胆汁接种 100500ml 菌 液的比例， 将大肠杆菌、 变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中， 进行 发酵处理 ； 3） 发酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 灭菌过程中， 升温至 105-110灭菌 15 分 钟。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 牛胆汁接种菌液后， 在 37 -45发酵 48-72 小时。 4。
4、. 根据权利要求 1 或 2 所述的方法， 其特征在于， 对发酵液进行灭活处理中， 调节蒸汽 量升温至 105-110， 温度维持 15 分钟。 权 利 要 求 书 CN 102423320 A CN 102423325 A1/2 页 3 一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法 技术领域 0001 本发明属于制药技术领域， 涉及一种中药原料药的中间体的制造方法， 尤其 涉及一种利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的方法。 背景技术 0002 牛胆结石即牛黄， 是珍贵的中药材。 它具有清心、 豁痰、 开窍、 凉肝、 息风、 解毒等功 效。上世纪 70 年代初， 武汉同济医科大学附属同济医院肝胆外科蔡红娇医师在对。
5、人类胆 结石形成的原因和机理进行研究， 并获得成功的基础上， 进一步用此原理进行牛胆囊胆汁 内培育牛胆结石的研究， 取得了成功并于 1989 年申报了 “一种人工体外制作牛胆结石的方 法” 的发明专利 （申请号 89100505.6） 。利用该方法制作的牛胆结石， 限于当时的条件， 其制 成的牛胆结石的胆红素、 胆酸等含量较低。 0003 2000 年， 由武汉大鹏药业有限公司组织科研人员在 ZL89100505.6 发明专利的基 础上， 根据 1990 年版 中国药典 要求， 研制了一种新的在牛体外制备牛胆结石的方法。该 方法既适应规模化生产要求， 生产出的产品能满足新的 中国药典 要求。并。
6、于 2001 年申 报了专利 （申请号01133550.5） 。 该方法是在牛胆汁加入一定量的大肠杆菌、 肠球菌、 变形杆 菌的单一菌液或其组合菌液， 对牛胆汁进行细菌发酵处理。再利用发酵牛胆汁和澄清饱和 钙盐溶液制取有效成份的沉淀物， 然后根据药用要求加入适量的胆红素、 胆酸、 去氧胆酸和 无机盐后， 制作复合胆红素钙。再利用复合胆红素钙和发酵牛胆汁在体外培育牛胆结石。 0004 发酵牛胆汁为复合胆红素钙的主要组成成份， 现有技术中， 常规的生产方法是先 调节牛胆汁中的牛磺酸含量， 使其达到药用要求。然后将大肠杆菌、 肠球菌、 变形杆菌的单 一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中， 对牛胆汁进行细。
7、菌发酵处理。 0005 在应用上述技术生产的实践中， 发现发酵前牛胆汁中一般含有杂菌， 对后面的发 酵有一定抑制作用。发酵完成时期发酵液内的营养成份已基本消耗完， 菌体会消耗发酵产 物产生废物， 降低产物的产量。 0006 发明内容 本发明是在 ZL01133550.5 发明专利的基础上， 提供一种新的利用牛胆汁制备发酵牛 胆汁的方法， 可以大大提高了生产效率， 满足大规模的工业化生产要求。 0007 本发明的技术方案如下 ： 1、 调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至 37%（g/ml） ， 使其达到药用要求 ； 2、 牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理， 然后按每 10000ml 牛胆汁接种 10。
8、0500ml 菌 液的比例， 将大肠杆菌、 变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中， 进行 发酵处理 ； 3、 发酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。 0008 发酵前的灭菌过程中， 将牛胆汁置于发酵罐， 开蒸汽， 升温至 105-110灭菌 15 分 钟后关蒸汽。开启冷却水降低温度， 待温度降至室温时打开接种口盖， 进行无菌处理后， 按 常规接种方法接种 15% 的大肠杆菌、 变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液到牛胆 说 明 书 CN 102423320 A CN 102423325 A2/2 页 4 汁中， 盖紧接种口盖。开启搅拌， 调节蒸汽量， 使料液温度稳定至 37。
9、 -45发酵。 0009 接种发酵前牛胆汁中含有杂菌， 对后面发酵菌种的生长繁殖有一定抑制作用。对 发酵前的牛胆汁进行灭菌处理可以有效杀灭牛胆汁和发酵罐中的杂菌， 发酵母液得到了纯 化， 使发酵菌种在其中有足够的营养而旺盛生长， 大大提高了生产效率。 0010 发酵48-72小时后， 开搅拌， 调节蒸汽量升温至105-110， 温度维持15分钟， 对发 酵液进行灭活， 开启冷却水降温， 待温度降到室温后停止降温。 0011 发酵完成后菌体会产出废物， 经过灭活处理后能防止菌体代谢的后期废物的产 出， 保证了产品质量。 附图说明 0012 图 1 利用牛胆汁制备发酵牛胆汁的工艺流程图 。 具体实。
10、施方式 0013 实施例 1 （1） 取出新鲜牛胆汁， 调节牛磺酸含量使其达到 3%（g/ml） ， 低温保存备用。 0014 （2） 将牛胆汁置于发酵罐中， 开启蒸汽使发酵罐内液温升至 105后灭菌 15 分钟 后关蒸汽。开启冷却水降低温度， 待温度降到室温时打开接种口盖， 进行无菌处理后， 按每 10000ml 牛胆汁接种 100ml 菌体溶液的比例， 将大肠杆菌和变形杆菌的组合菌液接种至牛 胆汁中， 盖紧接种口。开启搅拌， 调节蒸汽量， 使料液温度稳定至 42发酵。 0015 （3） 发酵 72 小时后， 开搅拌， 调节蒸汽量升温至 105， 温度维持 105， 对发 酵液进行灭菌 15。
11、 分钟， 开启冷却水降低温度， 待温度降到室温后停止降温。 0016 实施例 2 （1） 取出新鲜牛胆汁， 调节牛磺酸含量使其达到 5%（g/ml） ， 低温保存备用。 0017 （2） 将牛胆汁置于发酵罐中， 开启蒸汽使发酵罐内液温升至 108后灭菌 15 分钟 后关蒸汽。开启冷却水降低温度， 待温度降到室温时打开接种口盖， 进行无菌处理后， 按每 10000ml 牛胆汁接种 300ml 菌体溶液的比例， 将大肠杆菌接种至牛胆汁中， 盖紧接种口。开 启搅拌， 调节蒸汽量， 使料液温度稳定至 40发酵。 0018 （3） 发酵60小时后， 开搅拌， 调节蒸汽量升温至108， 温度维持108， 。
12、对发酵液 进行灭菌 15 分钟， 开启冷却水降低温度， 待温度降到室温后停止降温。 0019 实施例 3 （1） 取出新鲜牛胆汁， 调节牛磺酸含量使其达到 7%（g/ml） ， 低温保存备用。 0020 （2） 将牛胆汁置于发酵罐， 开启蒸汽使发酵罐内液温升至 110后灭菌 15 分钟后 关蒸汽。开启冷却水降低温度， 待温度降到室温时打开接种口盖， 进行无菌处理后， 按每 10000ml 牛胆汁接种 500ml 菌体溶液的比例， 将肠球菌接种至牛胆汁中， 盖紧接种口。开启 搅拌， 调节蒸汽量， 使料液温度稳定至 37发酵。 0021 （3） 发酵48小时后， 开搅拌， 调节蒸汽量升温至110， 温度维持110， 对发酵液 进行灭菌 15 分钟， 开启冷却水降低温度， 待温度降到室温后停止降温。 说 明 书 CN 102423320 A CN 102423325 A1/1 页 5 图 1 说 明 书 附 图 CN 102423320 A 。