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1、(10)申请公布号 CN 103073413 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103073413 A *CN103073413A* (21)申请号 201210330508.9 (22)申请日 2012.09.07 C07C 51/42(2006.01) C07C 51/47(2006.01) C07C 51/48(2006.01) C07C 65/05(2006.01) C07C 65/19(2006.01) (71)申请人 福建省亚热带植物研究所 地址 361012 福建省厦门市嘉禾路 780 号 (72)发明人 林清洪 林光荣 李金雨 (74)专利代理机构 厦门市首创。
2、君合专利事务所 有限公司 35204 代理人 张松亭 (54) 发明名称 一种银杏酸的提取方法 (57) 摘要 本发明公开了一种银杏酸的提取方法， 其包 括如下步骤 ：（1） 银杏外种皮干燥、 粉碎 ；（2） 按 体积比 1 2-5 的比例加入体积分数为 60-80 的乙醇加热回流浸提， 重复浸提 3 次， 合并粗提取 物， 粗提取物分 3 次用旋转浓缩仪浓缩至膏状， 合 并膏状物 ；（3） 膏状物用2-5倍体积的蒸馏水稀释 后， 加 0.6-0.8 体积乙醚， 醚层加质量分数为 5 Na2CO3， 萃取， 弃去 Na2CO3层， 醚层再用质量分数为 5 NaOH 萃取 ； 取 NaOH 层 。
3、；（4） NaOH 层加入体积 分数为20HCl酸化后， 再用乙醚分次萃取， 合并 乙醚层， 浓缩回收乙醚得红褐色物质即为银杏酸。 本发明的方法快速， 简便， 且纯度高。纯度可以达 到 85% 以上。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103073413 A CN 103073413 A *CN103073413A* 1/1 页 2 1. 一种银杏酸的提取方法， 包括如下步骤 ： （1） 银杏外种皮干燥、 粉碎 ； （2） 按体积比。
4、 1 ： 2-5 的比例加入体积分数为 60-80的乙醇加热回流浸提， 重复浸提 3 次， 合并粗提取物， 粗提取物分 3 次用旋转浓缩仪浓缩至膏状， 合并膏状物 ； （3） 膏状物用2-5倍体积的蒸馏水稀释后， 加0.6-0.8体积乙醚， 醚层加质量分数为5 的 Na2CO3溶液萃取， 弃去 Na2CO3层， 醚层再用质量分数为 5 NaOH 溶液萃取 ； 取 NaOH 层 ； （4） NaOH 层加入体积分数为 20 HC1 酸化后， 再用乙醚分次萃取， 合并乙醚层， 浓缩回 收乙醚得红褐色物质即为银杏酸。 2.如权利要求1所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 所述的。
5、外种皮过 40 目筛。 3. 如权利要求 1 所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 步骤 （3）中的 5的 Na2CO3溶液体积为乙醚体积的 0.5-2 倍。 4.如权利要求1所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 步骤 （3） 中的5的NaOH 溶液体积为乙醚体积的 0.5-2 倍。 5.如权利要求1所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 步骤 （4） 中， 酸化后PH值 为 2-5。 6. 如权利要求 1 所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 还包括如下的步骤 ：（5） 纯化 ： 步骤 （4） 分离获得的红褐色银杏酸用石油醚溶解， 加样于硅胶柱上， 先用少量石油。
6、醚 洗涤， 再用石油醚 ： 乙醚 ： 甲酸体积比为 89 ： 1l ： 1 的混合液洗脱， 收集银杏酸组分， 浓缩至 干， 得纯化的银杏酸同系物。 7. 如权利要求 3 所述的一种银杏酸的提取方法， 其特征在于 ： 所述的硅胶柱为内径为 32mm400mm 的玻璃柱， 湿法装柱硅胶 100g。 权 利 要 求 书 CN 103073413 A 2 1/3 页 3 一种银杏酸的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及一种银杏酸的提取方法。 背景技术 0002 银杏 (Ginkgo biloba L) 系银杏科植物， 为我国特有珍贵树种， 是地球残存的最 古老的孑遗植物之被称为活化石， 也叫白果树。
7、， 被列为国家一级保护树种。福建省尤溪、 顺昌、 德化、 政和等地有大片天然林， 其中尤溪县古银杏群落全省面积最大， 据考证， 尤溪县 古银杏群树龄已达 700 多年， 银杏酸 (Ginkgolic Acids， 简称 Gas) 是银杏中除了黄酮和内 酯外的另一具有重要生理活性的组分， 存在于银杏的叶、 果和外种皮中， 以外种皮中含量最 高。银杏酸为水扬酸的 6 一烷基或 6 一烯基衍生物， 其苯环六位上的侧链碳原子数可从 13 至 19， 侧链双键数可从 0 至 3， 为 5 种同系物所组成的混物。研究表明， 银杏酸具有抗菌、 抗 炎、 抗肿胀等作用。近年来福建省长汀、 宁化等地人工栽培几千。
8、公顷， 开发银杏果仁制剂的 同时， 把新鲜外种皮弃于山沟或河里， 不仅毒死鱼类， 且气味难闻， 造成严重的环境污染， 浪 费了银杏资源。 0003 杨小明等 （银杏酸抑菌效果的初步研究， 中药材， 2002,25（9） ： 651-653） 从银杏的 外种皮中提取银杏酸， 直接把银杏粗提取物进行柱层析分离、 纯化， 但由于杂质多， 柱效不 佳。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种简单、 高效的银杏酸的提取方法， 以解决现有技术中 存在的上述问题。 0005 本发明提供的技术方案如下 ： 0006 一种银杏酸的提取方法， 包括如下步骤 ： 0007 （1） 银杏外种皮干燥、 粉碎 ； 。
9、0008 （2） 按体积比 1 ： 2-5 的比例加入体积分数为 60-80的乙醇加热回流浸提， 重复浸 提 3 次， 合并粗提取物， 粗提取物分 3 次用旋转浓缩仪浓缩至膏状， 合并膏状物 ； 0009 （3） 膏状物用 2-5 倍体积的蒸馏水稀释后， 加 0.6-0.8 体积乙醚， 醚层加体积的质 量分数为 5 Na2CO3， 萃取， 弃去 Na2CO3层， 醚层再加体积的质量分数为 5 NaOH 萃取 ； 取 NaOH 层 ； 0010 （4） NaOH层加入体积分数为20HC1体积酸化后， 再用体积乙醚分次萃取， 合并乙 醚层， 浓缩回收乙醚得红褐色物质即为银杏酸。 0011 在本发明。
10、的较佳实施例中， 步骤 （1） 所述的外种皮过 40 目筛。 0012 在本发明的较佳实施例中， 步骤 （3） 中的 5的 Na2CO3 溶液体积为乙醚体积的 0.5-2 倍。 0013 在本发明的较佳实施例中， 步骤 （3） 中的5的NaOH溶液体积为乙醚体积的0.5-2 倍。 说 明 书 CN 103073413 A 3 2/3 页 4 0014 在本发明的较佳实施例中， 步骤 （4） 中， 酸化后 PH 值为 2-5。 0015 在本发明的较佳实施例中， 本发明方法还包括如下的步骤 ： 0016 （5） 纯化 ： 步骤 （4） 分离获得的红褐色银杏酸用石油醚溶解， 加样于硅胶柱上， 先 。
11、用少量石油醚洗涤， 再用石油醚 ： 乙醚 ： 甲酸体积比为 89 ： 1l ： 1 的混合液洗脱， 收集银杏酸 组分， 浓缩至干， 得纯化的银杏酸同系物。 。 0017 在本发明的较佳实施例中， 所述的硅胶柱为内径为 32mm400mm 的玻璃柱， 湿法 装柱硅胶 100g。 0018 本发明采用乙醇、 乙醚、 5 Na2CO3、 5 NaOH 分别去除了杂质， 使得本发明的银杏 酸纯度高， 纯度可以达到 85% 以上。且本发明的方法快速， 简便。 附图说明 0019 图 1 为银杏酸标准品 HPLC 谱图 ； 0020 图 2 为本发明银杏外种皮中的银杏酸 HPLC 谱图。 具体实施方式 0。
12、021 实施例一银杏酸的提取分离 0022 称取干燥粉碎 （过 40 目筛） 的银杏外种皮 200g， 按 1 ： 3 的比例加入 600mL 体积分 数为 70乙醇加热回流浸提， 重复浸提 3 次， 合并粗提取物， 粗提取物分 3 次用旋转浓缩仪 浓缩至膏状， 合并膏状物， 用蒸馏水稀释至 500mL， 平均分在 4 个分液漏斗中， 每个漏斗中均 加 70mL 乙醚萃取， 醚层用质量分数为 5 Na2CO3， 萃取， 弃去 Na2CO3。层， 醚层再用质量分数 为 5 NaOH 萃取， NaOH 层用体积分数为 20 HC1 酸化后再用乙醚萃取， 合并乙醚层， 浓缩 回收乙醚得红褐色物质即为。
13、银杏酸。 0023 实施例二银杏酸的纯化 0024 分离获得的红褐色银杏酸用石油醚溶解加样于硅胶柱上 ( 硅胶 100g， 硅胶柱内径 为 32mm400mm 的玻璃柱， 湿法装柱 )， 先用少量石油醚洗涤， 再用 ( 石油醚 ) ： V( 乙醚 ) ： V( 甲酸 )(89 ： 1l ： 1) 洗脱， 收集银杏酸组分， 浓缩至干， 得纯化的银杏酸同系物。本研究采 用萃取分离去掉其中大部分杂质后， 再经柱层析纯化， 大大提高柱层析分离、 纯化效果。实 验测得银杏外种皮中银杏酸含量为 3.12， 纯度为 86.7， 回收率为 96.9， RSD 为 1.3 (n=5)。结果表明该方法获得的银杏酸。
14、快速、 简便且纯度高， 为下阶段开发环保型银杏酸植 物源杀菌剂所需高纯度活性成分银杏酸提供分离、 纯化的方法。 0025 实施例三银杏酸的定性鉴定 0026 银杏酸的定性鉴定方法 ： 银杏酸在 254nm 处显强蓝紫色荧光。于 254nm 处观察有 无荧光， 即可判断有无银杏酸。根据样品和标准品的 HPLC 峰的保留时间和 LC/MS 的母离子 / 子离子特征峰来定性鉴定各银杏酸的峰。 0027 银杏酸的定性鉴定结果 ： 银杏酸在 254nm 处显强蓝紫色荧光， TLC 的检测限可达 5g。本文用 TLC 薄板定性检测时， 在检测限点可观察到明显的蓝紫色荧光， 说明样品中有 银杏酸。 0028。
15、 采用 HPLC 对银杏酸标准品和样品进行测定， 以保留时间来判断样品中银杏酸同 系物组成情况， 银杏酸标准品和本发明提取的银杏酸样品的 HPLC 谱图分别见图 1 和图 2 ： 说 明 书 CN 103073413 A 4 3/3 页 5 样品峰的保留时间与标准品峰的保留时间相同， 且无杂峰出现， 说明样品纯度高， 和标准品 一样也含有 5 种银杏酸同系物。同时还作了 LC/MS 的母离子 / 子离子特征峰谱图， 样品谱 图的保留时间、 母离子/子离子特征峰与标准品完全一致， 由此可进一步鉴定样品即为5种 银杏酸同系物。 说 明 书 CN 103073413 A 5 1/2 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 103073413 A 6 2/2 页 7 图 2 说 明 书 附 图 CN 103073413 A 7 。