《筛选方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《筛选方法.pdf（57页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104040337A43申请公布日20140910CN104040337A21申请号201280054505522申请日20120921201190390620110922AUG01N33/50200601G01N33/68200601C12N15/1220060171申请人迈德维特科学有限公司地址澳大利亚南澳大利亚72发明人康滕菲利普施瓦茨安格尔弗朗西斯科洛佩斯74专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人郑斌卢蓓54发明名称筛选方法57摘要本发明提供筛选神经精神病发作或倾向于发作之哺乳动物的方法。更特别地，本发明提供通过筛选蛋白1433之功能性水平的降低来筛。
2、选精神分裂症发作或倾向于发作之哺乳动物的方法。在一个相关的方面中，本发明还提供了通过筛选蛋白1433功能性水平的变化来监测经诊断患有神经精神病如精神分裂症之患者的装置/手段。本发明可能在例如评价预防性或治疗性处理方案的效力或者另外监测可能发生于患者的生理或代谢变化之影响的情形下有用。本发明的方法在广泛的应用中有用，包括尤其是，提供了鉴定易感于神经精神病症如以一种或更多种精神分裂症症状为特征的病症发作的哺乳动物的装置/手段，因此使得能够实施预防性或者早期治疗性干预以努力减少或者防止病症的发作。本发明还提供了确认诊断的装置/手段，否则其将仅仅基于阳性和阴性症状的评估。30优先权数据85PCT国际申。
3、请进入国家阶段日2014050686PCT国际申请的申请数据PCT/AU2012/0011412012092187PCT国际申请的公布数据WO2013/040650EN2013032851INTCL权利要求书2页说明书31页序列表5页附图18页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书31页序列表5页附图18页10申请公布号CN104040337ACN104040337A1/2页21一种筛选发作或倾向于发作神经精神病症之哺乳动物的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平以及将蛋白1433功能性水平的降低相对于对照水平相关联，其中与。
4、对照水平相比所述蛋白1433水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。2一种在经诊断患有神经精神病症发作的哺乳动物中监测所述病症进展的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平以及将蛋白1433功能性水平的改变相对于之前针对该哺乳动物所获得的水平相关联，其中与之前针对该哺乳动物所获得的水平相比蛋白1433水平相等或较低是不良预后的指示，而与之前针对该哺乳动物所获得的水平相比蛋白1433水平较高是改善预后的指示。3根据权利要求1或者2的方法，其中所述神经精神病症以一种或者更多种精神分裂症的症状为特征。4根据权利要求3的方法，其中所述病症为精神分裂症、分裂型人。
5、格障碍、精神病、两极性障碍、躁狂抑郁症、情感障碍、精神分裂症样疾病、分裂情感障碍、精神病性抑郁症、孤独症、药物引起的精神病、谵妄、酒精戒断综合征或者痴呆引起的精神病。5根据权利要求14任一项的方法，其中作为测试对象的哺乳动物已经呈现一种或者更多种阳性或阴性症状或思维障碍。6根据权利要求15任一项的方法，其中所述蛋白1433的功能性水平为蛋白1433功能的水平。7根据权利要求15任一项的方法，其中所述蛋白1433的功能性水平为蛋白1433的绝对水平。8根据权利要求15任一项的方法，其中所述蛋白1433的功能性水平通过选自下述的方法确定I筛选蛋白1433翻译产物的水平；II筛选蛋白1433RNA的。
6、水平；III筛选与蛋白1433基因相关之染色质蛋白的变化；IV筛选蛋白1433DNA甲基化的变化；以及V筛选蛋白1433与DISC1形成复合体之能力的变化。9根据权利要求8的方法，其中所述RNA为MRNA。10根据权利要求8的方法，其中所述甲基化变化为超甲基化。11根据权利要求8的方法，其中所述蛋白1433/DISC1复合体为蛋白1433和75KDADISC1同工型间的复合体。12根据权利要求111任一项的方法，其中所述哺乳动物为人。13根据权利要求112任一项的方法，其中所述生物样品为脑脊液、外周血或者成体来源神经干细胞。14根据权利要求13的方法，其中所述成体来源神经干细胞分离自牙髓、毛囊。
7、或者鼻窝。15功能性蛋白1433缺陷的非人哺乳动物，其中编码蛋白1433的基因已经缺失。权利要求书CN104040337A2/2页316根据权利要求15的哺乳动物，其中所述哺乳动物为小鼠。17筛选模拟蛋白1433功能或者1433/DISC1复合体形成或者以其他方式改善精神分裂症表型症状之物质的方法，所述方法包括向权利要求15或者16的非人哺乳动物施用推定的调节性物质和筛选表达改变的表型。18根据权利要求17的方法，其中所述表达改变的表型为使用下面任一种或更多种来评估的行为I运动功能测试；II物体识别测试；III高架十字杆测试；IVPPI测试；V逃脱水迷宫测试。权利要求书CN104040337A。
8、1/31页4筛选方法技术领域0001本发明提供筛选神经精神病NEUROPSYCHIATRICDISORDER发作或者倾向于发作之哺乳动物的方法。更特别的，本发明提供通过筛选蛋白1433之功能性水平的降低筛选精神分裂症SCHIZOPHRENIA发作或者倾向于发作之哺乳动物的方法。在相关的方面中，本发明还提供了通过筛选蛋白1433功能性水平的变化监测经诊断患有神经精神病如精神分裂症患者的手段/装置MEANS。本发明可能在例如评价预防性或者治疗性处理方案的效力或者另外监测可能发生于患者的生理或代谢变化之影响的情形下有用。本发明的方法在广泛的应用中有用，包括尤其是，提供了鉴定易感于神经精神病症如以一种。
9、或更多种精神分裂症症状为特征的病症发作的哺乳动物的手段/装置，因此使得预防性或者早期治疗性干预能够实施以努力减少或者防止病症的发作。本发明还提供了确认诊断的手段/装置，否则其将仅仅基于阳性和阴性症状的评估。0002在相关的方面中，本发明还提供了动物模型，其可用于筛选或者评价在治疗神经精神病症中有用的物质，等等。背景技术0003本说明书中通过作者提到的出版物之详细书目在本说明书结尾按字母顺序集中。0004本说明书中对任何现有技术的参考不是也不应该作为对所述现有技术形成在澳大利亚公知常识之部分的承认或者任何形式的暗示。0005精神分裂症是对于人类已知的最能致残和情绪上最有破坏性的疾病之一。不幸地是。
10、，因为长久以来一直对精神分裂症存在误解，所以使得其受到相对小的关注且其受害者受到不应有的污蔑。事实上，精神分裂症是非常普遍的病症。其对两种性别的影响是相当的并且侵袭了全世界约1的人群。另外的23具有分裂型人格障碍SCHIZOTYPALPERSONALITYDISORDER，其为所述疾病的温和形式。因为其流行性和严重性，已经对精神分裂症进行了广泛的研究以努力开发出用于诊断该疾病更好的标准。0006精神分裂症的特征是一系列独特和可预测的症状。将最普遍与疾病相关的所述症状称为阳性症状，其表示非常异常行为的存在。所述异常行为包括思维障碍THOUGHTDISORDER难以跟上讲话或者从一个主题跳到另一个。
11、而没有逻辑联系、妄想DELUSION迫害、罪行、夸大或者被外部控制的错误信念和幻觉HALLUCINATION视觉的或者听觉的。思维障碍是清晰且有逻辑的进行思考之能力的降低。其经常表现为无联系和无意义的语言，这致使患有精神分裂症的人不能参与交谈，使得其与家庭、朋友和社会疏远。妄想在患有精神分裂症的个体中间非常普遍。受影响的人可能相信其被阴谋地对待了称为“偏执型妄想PARANOIDDELUSION”。“播散BROADCASTING”描述了妄想的一种，其中患有所述疾病的个体相信其他人可以听见他的想法。幻觉可以是听到、看到或者甚至感觉到的。其最经常的是仅被受折磨的人以声音的形式听到。所述声音可以描述所。
12、述人的行为、警告他有危险或者告诉他做什么。有时个体可以听到许多声音进行交谈。比上述“阳性症状”和“思维障碍”更不明显但是同样严重的是缺陷或者阴性症状，其代表正常行为的不存说明书CN104040337A2/31页5在。所述行为包括淡漠或者迟钝的情感AFFECT即缺少情绪表达、冷漠、社会戒断和缺乏自知力INSIGHT。0007精神分裂症的发作通常发生在青春期或者成年早期，虽然已知在老人中出现。发作可以伴随急性症状是快速的在几周内产生，或者其可以是缓慢的在几个月或几年形成。虽然精神分裂症可以在生命中的任何点影响任何人，然而在遗传上易患该病的人群中其在一定程度上更普遍，一般在青春期晚期或者成年早期发生。
13、第一次精神病情节RSTPSYCHOTICEPISODE。作为都无该疾病父母之后代发展成精神分裂症的可能性为1。作为父母之一患有该疾病之后代发展成精神分裂症的可能性大约为13。作为父母二者都患有该疾病之后代发展成精神分裂症的可能性大约为35。这表明了遗传联系的存在。0008患有精神分裂症人中有四分之三在16和25岁间发展成疾病。发作在30岁后不普遍且在40岁后很少。在1625岁年龄组中，精神分裂症影响更多的男性，而不是女性。在2530岁组中，在女性中的事件多于男性。0009通常，任何疾病的研究需要有用于诊断的良好标准。事实上，诊断应该最终基于病因，即基于疾病是由遗传缺陷、病毒或细菌感染、毒素还是。
14、胁迫所导致。不幸地是，大多数精神疾病的病因是未知的，因此这些病症仍然根据下面受影响的4种主要精神力MENTALFACULTY进行分类0010I思维和认知障碍0011II情绪障碍0012III社会行为障碍；以及0013IV学习、记忆和智力障碍。0014因此，由于对所述病症的生物学原因知之甚少，所以仍然需要阐明导致并发展所述疾病的机制。00151433蛋白构成了高度保守的调节分子家族，其在整个发育过程中和在成体组织中大量表达。这些蛋白质包括7种不同同工型、，其结合多种功能不同的信号分子以控制细胞周期调节、增殖、迁移、分化和凋亡BERGETALNATREVNEUROSCI2003；49752762；。
15、FUETALANNUREVPHARMACOLTOXICOL2000；40617647；TOYOOKAETALNATGENET2003JUL；343274285；AITKENA，SEMINCANCERBIOL2006；163162172；ROSNERETALAMINOACIDS2006；301105109。0016至今，蛋白1433家族分子在精神分裂症中的作用如果有的话依然是难以描述的。尽管到目前为止尚未得出结论，一些研究已经关注于鉴定与倾向于发展成神经精神病症如精神分裂症相关的单核苷酸多态性。研究旨在调查蛋白1433同工型水平的变化，不考虑那些分子是否突变，已经趋向聚焦于和同工型水平的变化，虽。
16、然至今还没有任何其为神经精神病症发作之可靠标记物的结论性证据。关于蛋白质1433其他同工型如和，WONG等人2005发现在精神分裂症和两极性障碍BIPOLARDISORDER中的表达水平无变化。MIDDLETON等人2005进行的更加深入并陈述这些特别的同工型似乎不直接与发展成精神分裂症的遗传风险相关，且没有标记物提供了与精神分裂症强烈的关系。0017然而，与所述发现相反，在作为本发明先导的工作中，已经确定了蛋白1433功能性水平的降低与神经精神病例如以一种或者更多种精神分裂症症状为特征的病症说明书CN104040337A3/31页6发作或者倾向于发作相关。更进一步，还已经确定1433/DIS。
17、C1复合体形成水平的降低具有类似的诊断作用。这些发现目前已经促进了方法的设计从而常规地和准确地筛选个体来确认神经精神病发作或者倾向于发作。发明内容0018下面整个说明书和权利要求，除非上下文另有要求，词“包括”和变化如“包含”和“含有”将理解为指包含所陈述的整体或步骤或者整体或步骤的组，但是并不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。0019如本文所使用，术语“来源于”用来表示特定的整体或者整体的组已源自特定的物类，但是并不一定直接从所述特定的来源获得。而且，如本文使用的没有数词限定的表述包括复数，除非上下文清楚地另有规定。0020除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明归属的领域。
18、之普通技术人员之一所通常理解的具有同样的意义。0021本领域技术人员会意识到除了那些特别描述的，本文描述的本发明可进行变化和修改。应了解本文描述的本发明包括所有所述的变化和修改。本发明还包括所有这样的步骤、特征、在本说明书中个别地或全体地提到或者表明的组合物和化合物，以及任何和所有任何两种或多种所述步骤或特征的组合。0022本说明书含有使用程序PATENTIN35版准备的核苷酸序列信息，本文在书目后呈现所述信息。每条核苷酸序列在序列表中通过数字指示符NUMERICINDICATOR来识别，随后为序列标识SEQUENCEIDENTIER例如1、2等。序列的长度、类型DNA、RNA等和每条核苷酸序。
19、列的来源生物分别以数字指示域、和提供的信息表明。说明书中提到的核苷酸序列通过指示符SEQIDNO来确定，然后为序列标识例如SEQIDNO1、SEQIDNO2等。说明书中提到的序列标识与序列表中的数字指示域提供的信息相关联，所述数字指示域后跟着序列标识例如1、2等。就是说，说明书中详述的SEQIDNO1与序列表中指明的1序列相关联。0023本发明的一个方面涉及筛选神经精神病症发作或者倾向于发作之哺乳动物的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与对照水平相比所述蛋白1433水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。0024本发明的另一个方面提供筛选神。
20、经精神病症发作或者倾向于发作之人的方法，所述方法包括在来源于所述人之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与对照水平相比所述蛋白1433水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。0025因此在另一方面中提供筛选以一种或更多种精神分裂症症状为特征的病症的发作或者倾向于发作之人的方法，所述方法包括在来源于所述人之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与对照水平相比所述蛋白1433水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。0026在另一方面中提供筛选精神分裂症的发作或者倾向于发作之人的方法，所述方法包括在来源于所述人之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与对照水平相比所述蛋白。
21、1433水平较低是精神分裂症发作或倾向于发作的指示。说明书CN104040337A4/31页70027因此，本发明提供在呈现一种或者更多种阳性或阴性症状或思维障碍之人中诊断神经精神病症发作的方法，所述方法包括在来自所述人之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与对照水平相比所述蛋白1433水平较低是所述病症发作的指示。0028本发明的另一个方面涉及筛选神经精神病症发作或者倾向于发作之哺乳动物的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定编码蛋白1433基因的表达水平，其中与对照水平相比所述表达水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。0029本发明的另一个方面涉及筛选神经精神。
22、病症发作或者倾向于发作之哺乳动物的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433/DISC1复合体形成的水平，其中与对照水平相比所述复合体形成水平较低是所述病症发作或者倾向于发作的指示。0030本发明的另一个方面涉及监测在经诊断患有神经精神病症发作的哺乳动物中所述病症进展的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与之前从所述哺乳动物获得的水平相比所述蛋白1433水平相等或较低是不良预后的指示，而与之前从所述哺乳动物获得的水平相比蛋白1433水平较高是改善预后的指示。0031本发明的另一个方面涉及监测已确定神经精神病症倾向于发作之患。
23、者的方法，所述方法包括在来源于所述哺乳动物之生物样品中确定蛋白1433的功能性水平，其中与之前从所述哺乳动物获得的水平相比所述蛋白1433水平相等或较低是改善预后的指示。0032本发明的另一个方面涉及功能性蛋白1433缺陷的非人哺乳动物，其中已检测了编码蛋白1433的基因。0033本发明的另一个方面涉及筛选模拟蛋白1433功能FUNCTIONALITY或者1433/DISC1复合体形成或者以其他方式改善精神分裂症表型症状之物质的方法，所述方法包括向1433敲除之非人动物施用推定的调节性物质和针对改变的表型进行筛选。附图说明0034图11433缺陷小鼠证明异常认知和行为特性。A在旷场试验OPEN。
24、ELDTEST中，1433062/小鼠空心柱；N11比1433062/同窝幼畜LITTERMATE实心柱；N11在530周龄时具有更多的探索行为。B在高架十字迷宫ELEVATEDPLUSMAZE中，1433062/小鼠空心柱；N12比1433062/小鼠实心柱；N12在开放臂花费更长时间。C在十字迷宫逃脱任务测试中，1433062/小鼠空心圆；N12比1433062/小鼠封闭方形；N12具有更低的空间学习16天和记忆M1和M2能力。D相比1433062/小鼠实心柱；N11，1433062/小鼠空心柱；N11具有减少的PPI，具有在70DB基准线上2、4、8和16DB的前脉冲PP和100毫秒MS。
25、EC的刺激间时间间隔。还显示了来自所有PP强度的数据平均值AVG。来自雄性和雌性小鼠的数据在所有图中汇集。误差柱以平均SEM呈现。，P005。0182利用小鼠天然地对新物体而非熟悉物体的探索偏好以测试识别记忆。中叶MEDIALLOBE中鼻周皮层的正确功能对于所述任务是关键的DEREETAL2006SUPRA；SIKETAL2003SUPRA；FORWOODETALHIPPOCAMPUS2005；153347355；WINTERSETALJNEUROSCI2005；251742434251。在样品阶段，小鼠花费同样的时间探索每个相同的物体1433062/，508212；1433062/49181。
26、2。当呈现熟悉的和新物体时，与对照相比，在整个测试期1433062/小鼠展现出显著受损的新事物识别。与在熟悉和新物体间偏好的缺乏相一致，1433062/小鼠具有减少的辨别指数探索新物体时间探索熟悉物体时间/探索新物体时间探索熟悉物体时间，表明其没能保留新信息1433062/，016670086S；1433062/，005690047S；P05。尤其，1433062/突变体还证明了在尝试的两个阶段中都有更长探索时间之物体识别测试中的极度活跃样品阶段，1433062/，273327S；1433062/，386241S；P005测试阶段，1433062/，245831S；1433062/，50774。
27、7S；P00001。0183广泛使用高架十字迷宫来测试啮齿类的焦虑行为KOMADAETAL2008SUPRA；WALFETAL2007SUPRA；LISTERRG，PSYCHOPHARMACOLOGYBERL1987；922180185。当放置于所述测试中时，1433062/小鼠还证明了相比野生型对照增加的活动。1433062/小鼠在5分钟的测试期中于交叉臂间有2523176的转移TRANSITION，而1433062/有1229121P00001。此外，相比1433062/小鼠31460S，P00001，1433062/小鼠显著地花费更多时间在开放臂中图1B1148115S，更经常的进入其中。
28、1433062/，460，6；1433062/，15517，P00001并更多的探头1433062/19615；1433062/，33424P00041，表明其具有更低水平的焦虑。0184使用十字迷宫逃脱任务检验空间工作记忆依赖性学习SUMMERSETAL2006SUPRA。海马和前额皮质间合适的信号发出是所述任务获得的先决条件。训练小鼠6天以识别十字迷宫含有淹没之逃脱平台的正确臂。在整个实验中，通过新的可视提示表示十字迷宫的每个臂。虽然一些1433062/小鼠学会识别正确臂，但是其显示出在整个获得期的过程中到达平台潜伏期的增加图11；25298808；P00001以及臂选择准确性显著的降低图。
29、1CIRR052；P00001。然后通过在获得后测试所述小鼠14天或者28天，随后在逃脱平台水迷宫中再测试其记忆正确交叉臂的能力分别为M1和M2。与学习阶段相比，1433062/小鼠没有显示出逃脱潜伏期的变化HR118，P0383，而1433062/证明了逃脱潜伏期显著的增加HR298，P00001。与海马依赖性记忆的功能紊乱相一致，突变体小鼠还在臂选择的准确性上有显著的降低图1CIRR0231；P00001。所有的识别缺陷不依赖于性别。0185感觉运动门控中的缺陷为神经精神病如精神分裂症和相关病症的内表型。在海马和其他脑区域的合适信号发出对于此过滤机制LTERINGMECHANISM是必不可。
30、少的。说明书CN104040337A2826/31页29为了确定1433突变体小鼠是否具有异常的感觉运动门控，评估声音惊吓反射的前脉冲抑制PPI。发现相比于1433062/小鼠，1433062/小鼠具有显著较低的PPI图1D基因型的主要效应F1，20589，P0025和惊吓图12F1，20587，P0023。前脉冲强度水平的增加引起在WT和突变体小鼠中PPI相似的增加图1D。总的来说，在突变体小鼠中惊吓幅度减少了而惊吓适应正常图12。01861433在海马神经元中表达以控制分层0187为了确定认知和行为缺陷是否起因于海马的神经发育缺陷，分析1433在神经元发育中的作用。海马神经元来源于沿着脑室。
31、区NEV神经上皮和邻近伞部NEF神经上皮的限制区NAKAHIRAETALJCOMPNEUROL2005；4833329340图2A。在145DPC，在中间区迁移海马神经元中检测到1433免疫染色，而并不在其神经上皮前体中图2BI。至P0，还在海马本部/海马角CA的锥体细胞中检测到1433免疫染色图2BIII。利用1433小鼠品系之基因陷阱载体中的GEO转基因，用B半乳糖苷酶染色监测1433内源表达。与免疫染色一致，鉴定到在迁移CA神经元中1433的转录水平表达。此外，检测到在CA和DG神经元中的表达进入成年晚期图2C。然而，意外地，出生后早期阶段之后，在脑的其他区域如小脑未检测到1433图13。
32、。通过从显微解剖的成体海马提取的蛋白质的蛋白质印迹确认了CA和DG神经元中的表达图2D。其还确认了蛋白质从1433062/小鼠的这些脑区域完全被去除。最后，体外10天DIV后，海马MAP2阳性神经元培养物也显示在细胞体和轴突/树突中1433的点状PUNCTATE免疫细胞染色图2E。0188由于1433在海马神经元中表达，我们接着检验了CA和DG神经元来确定是否其在成体和胚胎突变体中正确定位。1433062/小鼠的尼氏染色揭示了在海马成熟前首次明显的发育缺陷5/5在P0、4/4在P7、2/2在P28和2/2在P56；图3A和图14。特别地，除了锥体层的通常停留处，锥体神经元异位定位于辐射层和始层。
33、。在CA3亚区中，锥体神经元分裂成两层而不是单个细胞层。与1433062/同窝幼畜相比，齿状回神经元也在1433062/小鼠中呈弥散型包装。与尼氏染色一致，在THY1YEP小鼠中海马结构的分析也揭示了被破坏的分层图3B。0189然后考虑涉及异位定位的锥体细胞是否发育成成熟神经元。在所有的1433062/海马4/4幼兽中，异位细胞对于神经元标记物NEUN为阳性图3C。与自身定位在深分子层不同，神经元也在CA3的浅层中成熟。同时，所述数据推断海马体中误定位的细胞形成功能性锥体和颗粒神经元。此外，对来自胚胎、出生后早期和成体小鼠的海马体的TUNEL染色未显示基因型间明显的不同图15，表明1433的缺。
34、乏不影响神经元生存。01901433缺陷小鼠表现海马神经元迁移缺陷0191在145DPC，1433在中间区的表达和在P0浅层中成熟神经元的存在升高了异常分层可起因于错误迁移的可能性。为了可视化海马神经元迁移，通过向145DPC和165DPC的杂合1433062杂交怀孕母兽注射BRDU来完成出生日期确定BIRTHDATING。在P7收集1433062/和1433062/幼兽，在冠状切面中鉴定保留BRDU的细胞。用DAPI复染色切片以鉴定海马分开的层。使用每个基因型的5只小鼠从10M切片计数保留BRDU的细胞并定量每层中相对的百分比。两个注射时间点都显示在对照小鼠中几乎所说明书CN10404033。
35、7A2927/31页30有在脑室区于145DPC或165DPC生成的神经元迁移至CA的锥体层图4。然而，引入注目地，在1433062/小鼠锥体层的外面鉴定到保留BRDU细胞显著的百分比。神经元未能从其出生地迁移或者停在其正确的层，因此造成在1433062/海马中重复的锥体层。0192在1433062/缺陷小鼠锥体细胞中功能性破坏的苔藓纤维环路和异常突触末梢0193CA3锥体神经元和DG颗粒细胞间的联系通过精确的轴突导向和突触靶向达到。通过在P0、P7和P56海马用抗钙结合蛋白进行免疫组织化学染色评估错排的锥体神经元是否影响海马环路HIPPOCAMPALCIRCUIT的问题。在对照小鼠中，苔藓纤。
36、维发芽自颗粒细胞胞体并分支为下锥体苔藓纤维IPMF和上锥体苔藓纤维SPMF神经束跨越CA3的锥体层图5。在1433062/小鼠中，所述IPMF神经束沿着CA3锥体神经元的顶表面导向，然而，所述SPMF神经束在CA3神经元当中为错误路线。0194为确定DG颗粒细胞是否突触连接其CA靶细胞，使用抗突触泡蛋白以鉴定在对照动物CA3亚区的IPMF和SPMF二者中的前突触PRESYNAPSE。在1433062/小鼠中，错误路线的轴突也在锥体层形成异常突触图6。通过高尔基染色的突触结可视化进一步揭示了CA3中突触形成的明显差异。在对照动物中，顶端树突APICALDENDRITE近端区上的大棘突跟随着细径树。
37、突分支NECALIBREDENDRITICBRANCHES。在1433062/小鼠的锥体神经元中，树突树似乎具有相似数量的分支点但是具有来自所有检测小鼠近端和远端顶端树突二者上错误路线之苔藓纤维神经束的刺样膨大。0195为了鉴定1433协调神经元迁移和轴突寻找通路使用的分子通路，对来自P7小鼠全脑提取物进行免疫共沉淀实验。发现1433可以与针对DISC1C末端产生的抗体发生免疫共沉淀。反之亦然，还发现DISC1可以与识别1433的抗体免疫共沉淀图7。出人意料地，所述数据表明1433与DISC1的75KDA形式而非100KDA全长蛋白质特异地相互作用，表明DISC1功能在神经发育中以同工型特异方。
38、式。0196实施例20197合并的临床和实验证据表明精神分裂症和相关病症起因于多巴胺能和谷氨酸能神经递质通路中的互相连接缺陷。海马已被确定为该模型中的关键结构，因为海马锥体神经元整合了谷氨酸能和多巴胺能系统。为确定任一神经递质通路是否是1433/小鼠中神经精神病样行为缺陷的支撑，进行了特异性拮抗每个通路的精神药物诱导行为的研究图16。发现NMDA受体拮抗物MK801破坏了野生型对照而非1433/小鼠中的PPI。相反地，多巴胺释放物阿扑吗啡在1433/小鼠和野生型对照中对PPI具有相似的效应。这表明1433/小鼠的基线PPI缺陷由谷氨酸能通路中的缺陷造成。还在运动功能测试中使用另一个多巴胺释放物。
39、安非他明研究了超多巴胺能假说HYPERDOPAMINERGICHYPOTHESIS。发现与野生型对照相比，在1433/小鼠中发生增强效应即，时间减少以变得极度活跃且行进距离的增加，表明1433/小鼠基线极度活跃由多巴胺能通路中的缺陷造成图17。因此，1433/小鼠在多巴胺能和谷氨酸能神经递质通路中具有缺陷。考虑到所述药物在精神分裂症患者中引起相似效应的能力，所述发现对1433/小鼠作为精神分裂症和相关病症的模型提供了坚实的支持。0198实施例30199减少的树突分枝和棘突触是精神分裂症和相关病症的解剖学特点。使用免费的技说明书CN104040337A3028/31页31术如高尔基浸渍、锥体神经。
40、元的体外培养和生物射弹加标签，已经进行了海马颗粒和锥体神经元中树突棘数量和棘尺寸的分析图18。发现了海马中显著减少的棘，强烈支持了1433/小鼠作为精神分裂症和相关病症的稳健模型。0200本领域技术人员将了解本文描述的本发明对除了那些特别描述的，对变化和修改也适合。应了解本发明包括所有所述的变化和修改。本发明还包括所有的步骤、特征、本发明中个别地或者全体地提到或表明的组合物和化合物、以及任何和所有任何两种或者更多种所述步骤和特征的组合。0201表1用于1433同工型之定量RTPCR以及用于对小鼠进行基因分型的引物0202说明书CN104040337A3129/31页320203书目0204AI。
41、TKENA，SEMINCANCERBIOL2006；1631621720205ALONETAL，PROCNATLACADSCIUSA96，67456750，JUNE19990206BAXTERETALNEUROSCIENCE2002；10915140207BERGETALNATREVNEUROSCI2003；49752762说明书CN104040337A3230/31页330208BRADSHAWANDPORTEOUS20101231“DISC1BINDINGPROTEINSINNEURALDEVELOPMENT，0209SIGNALLINGANDSCHIZOPHRENIA”NEUROPHAR。
42、MACOLOGY0210BRCNNERANDLERNER1992PNASUSA89538130211CHRISTIANRBETAL1992JMOLBIOL2277117180212CLARKETAL2006，NATUREPROTOCOLS1235323640213COYLCETALBEHAVBRAINRES2009，19712102180214DCBRUINETALPHARMACOLBIOCHEMBEHAV2006；8512532600215DCREETALNEUROSCIBIOBEHAVREV2006；308120612240216DCVLINETAL1990SCIENCE249404406。
43、0217EICHLCRETAL，MEDRESREV1548149619950218ERBETAL1994PNASUSA9111422114260219FODORETAL，1991SCIENCE，VOL25149957677730220FORWOODETALHIPPOCAMPUS2005；1533473550221FRANCISETAL，CURROPINCHEMBIOL，242242819980222FUETALANNUREVPHARMACOLTOXICOL2000；406176470223GALLOPETAL1994JMEDICINALCHEMISTRY379123312510224GERME。
44、RETAL，GENOMERES1025826620000225GORDONETAL，ACCCHEMRES2914415419960226GORDONETAL，JMEDCHEM371233125119940227GORDONETAL，JMEDCHEM371385140119940228GUOETAL，NUCLEICACIDSRES225456546519940229GUTHRIDGEETALBLOOD2004；10338208270230HEIDETAL，GENOMERES698699419960231HOUGHTENETAL1991NATURE，35484880232HOUGHTENETAL1。
45、992BIOTECHNIQUES1334124210233JAYAWICKREMEETAL1994PNASUSA91161416180234KAECHETALNATPROTOC2006，15240624150235KAYETAL1993GENE12859650236KOMADAETALJVISEXP2008；220237LAMETAL1991NATURE35482840238LENSTRA1992JIMMUNMETHODS1521491570239LISTERRG，PSYCHOPHARMACOLOGYBERL1987；9221G01850240MASKOSANDSOUTHERN，NUCACID。
46、SRES20167984，19920241MASKOSANDSOUTHERN，NUCACIDSRES20167984，19920242MATTHEAKISETAL1994PNASUSA91902290260243MEDYNSKI1994BIO/TECHNOLOGY127097100244MIDDLETONETALNEUROPSYCHOPHARMACOLOGY2005；3059749830245MILLARETAL2000，HUMMOLGENET90141523说明书CN104040337A3331/31页340246MOOREETAL，BBA，1402239249，19880247NAKAHI。
47、RAETALJCOMPNEUROL2005；48333293400248NAKATAETAL2009PROCNATLACADSCIUSA106371587380249OHLMEYERETAL1993PNASUSA9010922109260250PEASEETAL，PROCNATLACADSCIUSA91115022502619940251ROSNERETALAMINOACIDS2006；3011051090252SALMONETAL1993PNASUSA9011708117120253SCHIFFETALEURJMEDGENET2010；5353033080254SCOTTANDSMITH19。
48、90SCIENCE2493863900255SIKETALBEHAVBRAINRES2003；1471249540256SMITHETAL，SCIENCE2581122112619920257SOA，MOLECULEDIVERS，3759419980258SUETALPROCNATLACADSCIUSA2011；1084155515600259SUMMERSETALPEDIATRRES2006；59166710260TAYLORETAL2003GENOMICS81167770261TIETZEETAL，CURRBIOL，236338119980262TOYOOKAETALNATGENET200。
49、3JUL；3432742850263TZIVIONANDAVRUCH2002，JBIOLCHEM2773061640264VANDENBUUSEETALINTJNEUROPSYCHOPHARMACOL2009；1210138313930265WALFETALNATPROTOC2007；223223280266WEDEMEYERETAL，CLINICALCHEMISTRY48913981405，20020267WEISSLEDERETAL，NATUREMEDICINE6351355，20000268WILSONANDCZARNIK，EDS，COMBINATORIALCHEMISTRYSYNTHESISANDAPPLICATIONJOHNWILEYSONS，NEWYORK19970269WINTERSETALJNEUROSCI2005；2517424342510270WONGETALSCHIZOPHRRES。