硫酸卷曲霉素粉针剂制备工艺及含量测定方法及应用.pdf

一种硫酸卷曲霉素粉针剂的制备方法，称取处方量的硫酸卷曲霉素，进行无菌分装，分装条件确定为温度应控制在20～24℃，相对湿度30～55%。本发明的粉针稳定性高，无辅料，制剂更安全，同时工艺简单，适合大生产要求，硫酸卷曲霉素粉针剂静脉滴注特别适合用于治疗肺结核及耐药性结核杆菌感染。

1.  一种硫酸卷曲霉素粉针剂的制备方法，其特征在于：称取处方量的硫酸卷曲霉素，进行无菌分装，分装条件确定为温度应控制在20～24℃，相对湿度30～55%。

2.  一种如权利要求1所述硫酸卷曲霉素粉针剂的含量测定方法，其特征在于：所用仪器：高效液相色谱仪由日本岛津SPD-10Avp型紫外检测器、LC-10ATvp型泵及浙江大学N2010色谱工作站组成，色谱柱：Diamonsil ODS柱(250 mm~4．6mm，5 m)；试药：硫酸对照品卷曲霉素对照品、硫酸卷曲霉素注射液(自制)；注射用硫酸卷曲霉素（自制）；色谱纯甲醇、乙腈；冰醋酸，己烷磺酸钠。色谱及检测条件，流动相：0.0161 mol／L己烷磺酸钠一甲醇一乙腈一冰醋酸(60：25：25：2)；流速1.0ml·min；检测波长：254nm；进样量：20μl。在上述色谱条件下，理论板数按卷曲霉素峰计算不低于1000。卷曲霉素I峰和卷曲霉素Ⅱ峰的分离度>1.5；
a、pH 值对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响，用pH 值分别为3.50、4.30、4.76、5.54、6.35、6.80、8.10的枸橼酸缓冲液配制药物溶液，置于100℃ 的恒温水中，在不同的时间点进行取样，加水稀释成60μgml 的溶液，取20μl注入液相色谱仪，测定卷曲霉素的含量；
b、温度对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响，用pH 值为6.3的枸橼酸缓冲液配制药物溶液，制备样品。分别置于30℃ 、40℃ 、50℃ 、60℃和70℃的恒温水浴中。于不同时间点取样。加水稀释成60μgml的溶液，取20μl注人液相色谱仪，测定卷曲霉素的含量。

3.  如权利要求1所述硫酸卷曲霉素粉针剂静脉滴注用于治疗肺结核及耐药性结核杆菌感染。

硫酸卷曲霉素粉针剂制备工艺及含量测定方法及应用
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是硫酸卷曲霉素粉针剂及其含量的测定方法和应用。
技术背景：
硫酸卷曲霉素是卷曲链霉菌的代谢产物，它是一种碱性水溶性多肽类抗生素药物，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用，其作用机理是通过抑制结核杆菌的生长、阻碍细菌蛋白质的合成，而达到抗结核作用，临床主要用于治疗肺结核及耐药性结核杆菌感染，特别对空洞型肺结核闭合速度快、副作用小、毒性低，是控制耐药性结核病较有效的抗生素，在其临床疗效的确切性和用药的安全性，被认为是21世纪替代链霉素的首选药物。1990、1995及2000年均列入《中国药典》。卷曲霉素与链霉素类药物呈现单向交叉耐药特性，肌内注射后局部容易出现硬结、疼痛等毒副作用，限制了其在临床上的推广应用，解决这一问题已成为急需。
发明内容：
为了克服现有技术的不足，本发明提出一种可避免了注射部位的硬结、疼痛，减少了患者痛苦，患者易于接受的硫酸卷曲霉素粉针剂及其含量的测定方法和应用。硫酸卷曲霉素粉针剂的制备方法是：称取处方量的硫酸卷曲霉素，进行无菌分装，分装条件确定为温度应控制在20～24℃，相对湿度30～55%。
所述硫酸卷曲霉素粉针剂的含量测定方法，所用仪器：高效液相色谱仪由日本岛津SPD-10Avp型紫外检测器、LC-10ATvp型泵及浙江大学N2010色谱工作站组成，色谱柱：Diamonsil ODS柱(250 mm~4．6mm，5 m)；试药：硫酸对照品卷曲霉素对照品、硫酸卷曲霉素注射液(自制)；注射用硫酸卷曲霉素(自制)；色谱纯甲醇、乙腈；冰醋酸，己烷磺酸钠。色谱及检测条件，流动相：0.0161 mol／L己烷磺酸钠一甲醇一乙腈一冰醋酸(60：25：25：2)；流速1.0ml·min；检测波长：254nm；进样量：20μl。在上述色谱条件下，理论板数按卷曲霉素峰计算不低于1000。卷曲霉素I峰和卷曲霉素Ⅱ峰的分离度大于1.5；
a、pH 值对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响，用pH 值分别为3.50、4.30、4.76、5.54、6.35、6.80、8.10的枸橼酸缓冲液配制药物溶液，置于100℃ 的恒温水中，在不同的时间点进行取样，加水稀释成60μg·ml 的溶液，取20μl注入液相色谱仪，测定卷曲霉素的含量；
b、温度对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响，用pH 值为6.3的枸橼酸缓冲液配制药物溶液，制备样品。分别置于30℃ 、40℃ 、50℃ 、60℃和70℃的恒温水浴中。于不同时间点取样。加水稀释成60μg·ml的溶液，取20μl注人液相色谱仪，测定卷曲霉素的含量。
硫酸卷曲霉素粉针剂静脉滴注用于治疗肺结核及耐药性结核杆菌感染。本发明涉及的粉针稳定性高、无辅料、制剂更安全、工艺简单，适合大批量生产要求；静脉滴注卷曲霉素可避免患者注射部位的硬结、疼痛，减少了患者痛苦，患者易于接受；临床研究在毒理实验的基础上，使用静滴硫酸卷曲霉素联合其它结核药物治疗复治肺结核痰菌阴转率达83.33%, 肌注组痰菌阴转率为80.82%，表明硫酸卷曲霉素静脉滴注治疗复治菌阳肺结核效果肯定，与肌内注射应用同样有效，是治疗结核病的更好选择。
具体实施方式：
本发明的一个最佳实施例，称取硫酸卷曲霉素75g，温度应控制在22℃，相对湿度45%，无菌分装成100支。制水、洗瓶灭菌干燥、胶塞灭菌干燥、无菌分装、压盖、包装。本发明为无菌分装产品，物料流动性的好坏，直接影响产品的装量差异，而物料的干湿程度又直接影响产品的流动性，因此，为保证产品的质量，在分装产品时，将本品的分装条件确定为温度应控制在20～24℃，相对湿度30～55%。
a、pH 值对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响，注射用硫酸卷曲霉素与硫酸卷曲注射液在不同pH值和温度下稳定性的比较。
材料与方法
仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪由日本岛津SPD-10Avp型紫外检测器、LC-10ATvp型泵及浙江大学N2010色谱工作站组成：色谱柱：Diamonsil ODS柱(250 mm~4．6mm，5 m)。
试药：硫酸对照品卷曲霉素对照品、硫酸卷曲霉素注射液(自制)；注射用硫酸卷曲霉素；色谱纯甲醇、乙腈；冰醋酸，己烷磺酸钠。
色谱及检测条件
流动相：0.0161 mol／L己烷磺酸钠一甲醇一乙腈一冰醋酸(60：25：25：2)；流速1.0ml·min；检测波长：254nm；进样量：20μl。在上述色谱条件下，理论板数按卷曲霉素I峰计算不低于1000。卷曲霉素I峰和卷曲霉素Ⅱ峰的分离度大于1.5。
pH 值对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响
用pH 值分别为3.50、4.30、4.76、5.54、6.35、6.80、8.10的枸橼酸缓冲液配制药物溶液。置于100℃ 的恒温水浴中。在不同的时间点进行取样，加水稀释成60μg·ml 的溶液。取20μl注入液相色谱仪，测定卷曲霉素I的含量。实验结果如下：
样品不同PH 值的考察

b、温度对硫酸卷曲霉素注射液降解反应的影响用pH 值为6.3的枸橼酸缓冲液配制药物溶液，制备样品。分别置于30℃ 、40℃ 、50℃ 、60℃和70℃的恒温水浴中。于不同时间点取样，加水稀释成60μg·ml的溶液，取20μl 注人液相色谱仪，测定。实验结果如下：
样品在不同温度下的含量变化

结论：通过比较硫酸卷曲霉素注射液和注射用硫酸卷曲霉素在不同pH和温度条件下的比较，可知硫酸卷随霉素注射液的降解受pH值和温度影响较大。原因分析(1)卷曲霉素分子中所含氨基较多，碱性较强。使得酰氨键很容易发生断裂，并且酰氨键的数目较多。故发生断裂的位点也较多；(2)该化合物为一大环多肽结构，且取代基较多。大环类物质本身就不很稳定。环上连接了较多的取代基，使分子内很“拥挤”，导致大环更不稳定；(3)结构中含有多个氨基和羰基，一定条件下，氨基可能会与羰基发生亲核反应；(4)分子中含有亚胺结构，容易发生水解，导致主药含量下降。
本发明的另一实施例，称取硫酸卷曲霉素100g，温度应控制在22℃，相对湿度45%，无菌分装成100支。制水、洗瓶灭菌干燥、胶塞灭菌干燥、无菌分装、压盖、包装。
临床应用有效性总结：
高三友选复治菌阳肺结核病例，按2：l比例随机分入静滴组和肌注组，采用含卷曲霉素、异烟肼、利福平、吡嗪酰胺及己胺丁醇等药物方案分别进行治疗。卷曲霉素为一传统的抗菌药物，临床通过肌肉注射治疗复治菌阳结核病效果肯定，而且对链霉素、卡那霉素耐药的患者有效，但是通过静脉途径使用的报道较罕见。它主要是抑制结核杆菌的生长而具有抗结核作用，因而面市以来一直作为结核病人治疗的备选药物，通过肌肉注射途径使用。近年来．由于结核耐药的频繁发生，尤其是链霉素耐药率的提高，越来越受到人们的重视，同时，肌肉注射卷曲霉素后局部容易出现硬结、疼痛等不良反应，病人耐受性差，限制了使用。因此，静脉滴注卷曲霉素制剂已成为人们关注的热点。结果：卷曲霉素静滴组强化期末与满疗程结束时痰结核菌阴转率分别为70.5%，83.33％，卷曲霉素肌注组强化期末与满疗程结束时痰菌阴转率为69.6%，80.82％(P>O.05)。不良反应发生率分别为21.8％和47.1％，有显著性差异(P<0.01)。结论：硫酸卷曲霉素静脉滴注治疗复治菌阳肺结核效果不低于肌肉注射，降低了不良反应。
王鲲把病例随机分为2组：治疗组50例，男27例，女23例。年龄27～72岁，平均54.2岁。病程15d一2年，平均2.5个月。对照组50例，男29例，女2l例，年龄19—76岁，平均55.1岁，病程7d～21个月，平均2.3个月。两组患者的性别、年龄、病程差异无统计学意义，具有可比性。治疗方法两组均采用H 0.4；R0.45；Z1.5；1次／d顿服。强化期3个月治疗加入生理盐水及卷曲霉素0.75g／d，一次静脉滴注；对照组加入SM0.75g／d，一次肌肉注射。治疗期间每月复查肝、肾功能，胸片及痰抗酸杆菌检查各1次。3个月后观察患者临床症状及抗酸杆菌阴转情况，副反应及肝、肾功能结果。治疗组总有效率92%，对照组总有效率90%。两组比较，临床治疗效果接近，无显著性差异两组患者治愈后随诊1年观察，治疗组无复发；对照组复发2例。
宋年丰总结了治疗复治菌阳肺结核123例，无肝、肾、心及糖尿病疾患。123例中，观察组64例，男52例，女12例；对照组59例，男48例，女11例。本文病例在治疗前均有不同程度的咳嗽、咳痰；其中，伴有发热者29例，咯血者14例。治疗方案：观察组2CPM，HRZ/4HRE；对照组2SM，HRZ/4HRE。用法：CPM 0.175肌注或静脉1次/d，SM 0.175肌肉注射1次/d，H 0.13空腹1次/d，R 0.16空腹1次/d，Z 1.15 1次/d。治疗前均做常规痰涂片3次，尿常规、肝功能、胸片检查。在治疗过程中每月连续查痰3次，直至阴性为止。胸片3个月复查1次，血尿常规定期检测，肝功能每月检查1次。2组用药后差异显著(P<0.001)。观察组与对照组临床症状明显改善率第1、2、3个月分别为79%、96%、100%及67%、83%、89%。治疗2个月后，病灶吸收好转率分别为82%及66%。
赵淑媛应用卷曲霉素静脉滴注联合其他4种对结核菌敏感的药物组成新的化疗方案，对耐多药肺结核病人进行治疗，避免肌注造成局部硬结。观察前对患者全部进行常规检查，包括肝功能(丙氨酸转氨酶、总胆红素)、肾功能(尿素氨、肌肝等)、电解质(K⁺、Na⁺、CI^-、Ca⁺⁺)及血、尿常规无异常、非孕妇、无精神病、无癫痛病史。治疗方案及用药剂量方案采用3个月强化期治疗后，改用9个月继续期治疗的方案。剂量：左氧氟沙星0.4g/d；吡嗪酰胺1.5g/d；结核清0.6g/d；丙硫异烟胺800mg/d；1次/d服用，卷曲霉索750-l00mg/d；1次/d静脉滴注，剂量可根据患者的体重、年龄而定，体重<50kg，年龄>65岁，用750mg/d，其余用1000mg/d。观察项目有①治疗前与治疗中每月痰涂片查抗酸杆菌3次；②治疗前与治疗中每月复查胸全片1次，了解病灶吸收及空洞变化；③治疗前与治疗中每月复查血、尿常规，肝、肾功能及电解质；详细记录做好对比。疗效判定标准按1982年全国结核病防治会议中修订的疗效考核标准判定，以结核杆菌阴转为主要指标，结合胸部X线，一般按痰菌、病变、空洞分项判定疗效。结果：通过本方案对268例耐多药结核患者的3个月强化期治疗和9个月继续期治疗，98例空洞满疗程闭合37例，闭合率37.75 %。结论：全程贯彻直接监督化疗原则，选用对结核菌敏感的药物合理组合，疗效是可靠的，值得推广。