克菌丹和抑霉唑的复配组合物及其应用.pdf

本发明涉及一种与环境兼容性好，高效、低毒、低残留的克菌丹和抑霉唑的复配组合物及其应用，尤其用于防治苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病的应用研究。复配组合物中克菌丹和抑霉唑两种有效成分的重量比为1:2～16:1。它可应用于防治果树重要病害，尤其是在苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病的防治方面表现突出。

1.  克菌丹和抑霉唑的复配组合物，其特征在于：有效成分包括克菌丹和抑霉唑，两者重量比为1:2～16:1。

2.  按照权利要求1所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物，其特征在于：克菌丹和抑霉唑的重量比为2:1～16:1。

3.  按照权利要求1所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物，其特征在于：克菌丹和抑霉唑的重量比为4:1。

4.  权利要求1-3任一所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物，其特征在于：有效成分克菌丹和抑霉唑的总重量占复配组合物的40％。

5.  权利要求1-3任一所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物的应用，其特征在于：所述复配组合物用于防治果树重要病害。

6.  根据权利要求5所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物的应用，其特征在于：所述复配组合物用于防治苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病。

7.  权利要求1-3任一所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物的使用方法，其特征在于，将克菌丹和抑霉唑的复配组合物800-1000倍稀释，用于防治果树重要病害。

8.  根据权利要求7所述的克菌丹和抑霉唑的复配组合物的使用方法，其特征在于，克菌丹和抑霉唑的复配组合物中，有效成分克菌丹和抑霉唑的总重量占复配组合物的40％。

克菌丹和抑霉唑的复配组合物及其应用
技术领域
本发明属于杀菌组合物农药技术领域，具体涉及一种克菌丹、抑霉唑复配后的组合物及其作为杀菌剂的用途。
背景技术
苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病是果树主产区严重发生的重要病害之一。在可预见的未来，化学杀菌剂仍是防治果树病害的主要手段，但长期大量化学农药不合理导致了防治成本增大、果品残留超标、环境污染、抗药性发生发展等问题，据我院系统抗药性测定结果表明，部分轮纹病菌已对戊唑醇、多菌灵、苯醚甲环唑等常用杀菌剂产生了低水平抗药性。其中，合理田间桶混化学农药是解决当前农药不科学合理使用的重要途径。
作为保护性杀菌剂的克菌丹，其作用机理主要是主要通过抑制α-酮戊二酸脱氢酶系活性和阻碍丙酮酸脱羧作用。因其作用位点多，常用于防治葡萄、苹果、草莓、梨、番茄、黄瓜、辣椒等多种作物的病害，还未检索到作物致病菌对其产生抗药性。抑霉唑是一种内吸性广谱杀菌剂，对侵袭水果、蔬菜和观赏植物的许多真菌病害都有防效，尤其对果蔬中常见的青霉病、绿霉病防效极佳，已被农业部推荐为绿色农业优先使用的杀菌剂之一。其作用机理是通过影响细胞膜的渗透性、生理功能和脂类合成代谢，从而破坏病菌的细胞膜，同时抑制病菌孢子的形成。抑霉唑为新推广的新型杀菌剂，选择 多位点的克菌丹与其进行复配，不仅可防止病原菌对其产生抗药性，而且可减少田间制剂的使用量。
为了有效防控苹果、葡萄重要病害，减少化学杀菌剂的田间用量，我们将克菌丹与抑霉唑进行复配，经室内外试验，筛选出了复配杀菌剂的最佳配比，增效显著，有利于实现减少环境污染、控制致病菌抗性发生发展的目的。
发明内容
本发明为了有效防控苹果、葡萄重要病害，减少化学杀菌剂的田间用量，提供一种克菌丹和抑霉唑的复配组合物，并提供了该复配组合物作为农业领域中的应用，尤其是用于防治苹果轮纹病等重要病害。
本发明提供了防治苹果轮纹病等重要病害的克菌丹和抑霉唑复配组合物，
克菌丹和抑霉唑的复配组合物，其特殊之处在于：有效成分包括克菌丹和抑霉唑，两者重量比为1:2～16:1。
较优的，上述克菌丹和抑霉唑的重量比为2:1～16:1。
较优的，上述克菌丹和抑霉唑的重量比为4:1。复配组合物中克菌丹：抑霉唑重量比为1:2、1:1时相加作用，重量比为2:1、4:1、8:1、16:1具有增效作用，其中4:1的增效作用最为显著，增效系数为2.34，为最佳复配比例。
较优的，上述有效成分克菌丹和抑霉唑的总重量占复配组合物的40％。
本发明还提供上述复配组合物用于防治果树重要病害的用途。
较优的，上述复配组合物用于防治苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病。
本发明还提供上述克菌丹和抑霉唑的复配组合物的使用方法，其特殊之处在于，将克菌丹和抑霉唑的复配组合物800-1000倍稀释，用于防治果树重要病害。
上述克菌丹和抑霉唑的复配组合物中，有效成分克菌丹和抑霉唑的总重量占复配组合物的40％。
本发明具有以下几个优势：
1、具有增效作用。室内毒力测定结果表明，克菌丹、抑霉唑对苹果轮纹病菌两者在2:1至16:1范围内呈现增效作用，其中以4:1的增效作用最为显著，增效系数达2.34。
2、最佳配比田间桶混防效突出，且减少了制剂用量。制成的有效成分含量为40％的克菌丹和抑霉唑的复配组合物800-1000倍在田间防治苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病的药效试验中表现突出，优于或相当于单剂、对照药剂的防治效果。同时，大幅减少制剂用量，同直接按照标签浓度桶混相比，复配组合物800倍、1000倍分别减少制剂用量40％、52％。
3、高安全性。克菌丹、抑霉唑对人畜毒性低，制得的复配组合物低于市场单剂有效成分的含量，对作物、环境和鲜果食用者更为安全。
4、降低了致病菌抗药性产生的风险。如优势2所述，复配组合物克菌丹和抑霉唑的用量明显低于市销单剂产品，且田间使用时制剂用量明显减少，这可大幅降低苹果轮纹病菌等致病菌对这两种杀菌剂的选择压力。此外，克菌丹、抑霉唑作用机理不同，桶混使用更不易使致病菌产生抗药性。
具体实施方式
本发明用以下具体实例进行详细说明，但绝非对本发明的限制。所有配比中百分比均为重量百分比。
一、室内毒力测定与复配比例筛选
1.1 供试药剂
92％克菌丹原药，山东科大创业生物有限公司产品；
98％抑霉唑原药，以色列马克西姆化学公司产品。
1.2 供试菌株
试验靶标为苹果轮纹病(Botryosphaeria dothidea)病菌菌株样本自田间病果上分离获得，单孢培养纯化得到的第一代菌株，4℃冰箱内保存备用。
1.3 仪器设备
仪器设备主要有电子天平、超净工作台、生物培养箱、培养皿、移液器等。
1.4 实验方法
采用FAO推荐的菌体生长速率法(Mycelium growth rate test)。
1.4.1 药剂复配
表1 克菌丹和抑霉唑复配比例

表2 复配药剂稀释浓度梯度

1.4.2 含药平板的制备
按照1.4.1设定的药剂浓度梯度，将药剂加入定量溶化的PDA培养基中，制成含药平板，以不含药平板为空白对照，每浓度重复3次。
1.4.3 接菌培养
用直径0.6㎝打孔器沿培养好的菌落边缘打取菌盘，用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上，置于25℃条件下恒温培养6天。
1.4.4 结果调查
以直尺交叉测量法测量菌落扩展直径，与不施药对照菌盘扩展直径相比，计算出药剂对菌丝生长的抑制率。

1.5 统计分析
根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析，计算各药剂毒力回归方程、相关系数(r)和EC₅₀。
进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法计算复配组合物的增效系数(SR)，评价复配组合物的联合作用类型。根据增效系数(SR)来评价药剂复配的增效作用，即SR<0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用，SR>1.5为增效作用。增效系数(SR)按式(1)、(2)计算：
X1=PA+PBPA/A+PB/B×100---(1)]]>
式中：
X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；
P_A----复配组合物中A的百分含量，单位为百分率(％)；
P_B----复配组合物中B的百分含量，单位为百分率(％)；
A----A的EC₅₀值，单位为mg/L；
B----B的EC₅₀值，单位为mg/L。
SR=X1X2×100---(2)]]>
式中：
SR----复配组合物的增效系数；
X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；
X₂----复配组合物EC₅₀实测值，单位为mg/L。
1.6 结果分析
室内最佳复配比例实验结果表明，克菌丹、抑霉唑两者1:2、1:1具有相加作用，2:1、4:1、8:1、16:1具有增效作用，其中4:1的增效作用最为显著，增效系数为2.34，为最佳复配比例。
表3 克菌丹和抑霉唑抑制苹果轮纹病菌最佳复配比例筛选


二、田间小区试验
根据室内复配比例筛选实验筛选出克菌丹:抑霉唑＝4:1为最佳配比，我们配制了40％的克菌丹·抑霉唑复配组合物。按照农业部农药检定所主编的《农药田间药效试验准则(二)》第13、121、181部分设计40％克菌丹和抑霉唑复配组合物对苹果轮纹病、苹果炭疽病、葡萄白腐病、葡萄炭疽病的田间药效试验。
2.1 供试药剂
10％抑霉唑水乳剂1000倍，陕西美邦农药有限公司产品；
50％克菌丹可湿性粉剂500倍，江苏龙灯化学有限公司产品；
40％克菌丹和抑霉唑800倍、1000倍、1200倍，烟台农科院配制。
2.2 对照药剂
430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍，拜耳作物科学(中国)有限公司产品。
2.3 小区设计
试验共设7个处理，每处理4个重复，共设28个小区，每小区4棵成株 树。各小区随机排列。施药器械采用工农26型高压机动喷雾器，以树冠内全部枝梢叶片均匀着药，滴水为止。
2.4 调查时间与方法
采收期每小区选中央2-3株，调查全部果实，记录总果数、病果数，以病果率计算防效。
2.5 药效计算方法


2.6 试验结果
田间药效试验结果表明，40％克菌丹·抑霉唑防治苹果轮纹病取得了良好的防效。800倍、1000倍防效分别为89.80％、89.62％，显著高于两单剂50％克菌丹可湿性粉剂500倍、10％抑霉唑水乳剂1000倍及对照药剂430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效，1200倍的防效与单剂10％抑霉唑水乳剂1000倍、430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效无显著性差异(表4)。
表4 40％克菌丹·抑霉唑复配组合物防治苹果轮纹病田间药效


40％克菌丹·抑霉唑复配组合物800-1200倍防治苹果炭疽病取得了良好的防治效果，800倍、1000倍的防效分别为85.78％、85.63％，与单剂10％抑霉唑水乳剂1000倍无显著性差异，但显著高于单剂50％克菌丹可湿性粉剂500倍、对照药剂430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效。40％克菌丹·抑霉唑复配组合物1200倍防效与对照药剂430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效无显著性差异，但显著高于单剂50％克菌丹可湿性粉剂500倍的防效。
表5 40％克菌丹·抑霉唑复配组合物防治苹果炭疽病田间药效


40％克菌丹·抑霉唑复配组合物800-1200倍防治葡萄白腐病的田间试验结果表明，800倍、1000倍防效与单剂50％克菌丹可湿性粉剂500倍、对照药剂430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效无显著性差异，但显著高于单剂10％抑霉唑水乳剂1000倍的防效。
表6 40％克菌丹·抑霉唑复配组合物防治葡萄白腐病田间药效

40％克菌丹·抑霉唑复配组合物800倍、1000倍防治葡萄炭疽病的防效分别为91.10％、89.82％，与单剂50％克菌丹可湿性粉剂500倍、10％抑霉唑水乳剂1000倍的防效无显著性差异，但显著高于对照药剂430g/L戊唑醇悬浮 剂4000倍的防效。复配组合物1200倍防效与对照药剂430g/L戊唑醇悬浮剂4000倍的防效无显著性差异。
表7 40％克菌丹·抑霉唑复配组合物防治葡萄炭疽病田间药效

三、安全性试验
复配组合物中克菌丹和抑霉唑含量小于市售产品的含量，因此其对人畜的毒性与作物的安全性是符合要求的。复配杀菌剂经认定机构毒性试验结果表明属于微毒类农药：
大鼠急性经口毒性LD50♂>5000mg/kg，♀>5000mg/kg；
大鼠急性经皮毒性LD50♂>20000mg/kg，♀>20000mg/kg。