一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用.pdf

一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用，属于兽用抗体制备领域，它包括杨树皮类脂0.3～0.5％(重量百分比)，鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒高免卵黄抗体，中和效价不低于1：128，泊罗沙姆1880.1～0.2％(重量百分比)，硫柳汞0.01％(重量百分比)。本发明抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好的有点，同时还具有产生免疫力时间早：注射鹅体后1小时即可产生坚强免疫力，比常规抗体提前2小时左右；保存运输方便：无需特殊冷藏设备，0～8℃保存12个月，常温6个月；应激性小，吸收良好。在紧急预防与治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎方面具有显著的效果。

1.  一种雏鹅病毒性肝炎抗体，其特征在于它包括杨树皮类脂0.1～0.3％(重量百分比)，鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒高免卵黄抗体，中和效价不低于1：128，泊罗沙姆1880.1～0.2％(重量百分比)，硫柳汞0.01％(重量百分比)。

2.  权利要求1所述的一种雏鹅病毒性肝炎抗体的制备方法，其特征在于所述抗体的制备方法，步骤如下：
(1)制备卵黄抗体，按照不低于1：4的体积比例混合卵黄抗体和无菌生理盐水，进行匀浆；
(2)在步骤(1)得到的混合液中添加杨树皮类脂，使其终浓度达到0.1～0.3％(重量百分比)，充分混合搅拌；
(3)在步骤(2)得到的上述混合液中添加泊罗沙姆188，使其终浓度达到0.1～0.2％(重量百分比)；
(4)将步骤(3)得到的混合液在4～8℃冷浸过滤；
(5)步骤(4)得到的滤液经巴氏消毒后加入终浓度为0.01％(重量百分比)的硫柳汞，分装，无菌检验合格备用。

3.  根据权利要求2所述方法，其特征在于所述的步骤(1)卵黄抗体的制备方法：所述的步骤(1)卵黄抗体的制备方法：利用鹅源鸭甲型肝炎基因3型毒株接种SPF鸭胚或非免疫鸭胚或鹅胚，收集60～120小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加终浓度为0.1％(重量百分比)的甲醛灭活；然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫；首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗，21日时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗，28日时进行第4次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗；于第4次免疫后14日，采集鸡血清测定抗DHAV中和抗体 效价，合格者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干，无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒入消毒好的组织捣碎机中，获得卵黄抗体。

4.  根据权利要求2所述方法，其特征在于所述步骤(2)中杨树皮类脂在使用前先过200～300目纱网过滤，然后将滤液转入220～440nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。

5.  根据权利要求2所述方法，其特征在于所述步骤(3)中混合液中添加泊罗沙姆188，先将其按照重量比配制成10％的水溶液。

6.  根据权利要求2所述方法，其特征在于所述步骤(4)的过滤方法为，100～200目纱网第一次过滤，然后将滤液转入220～440nm的微孔滤袋中，压力过滤。

7.  权利要求1-6任何一项所述一种雏鹅病毒性肝炎抗体的使用方法，所述抗体使用时，中和效价不低于1：128，且预防和治疗剂量不低于0.5ml/只。

一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用
技术领域
本发明属于兽用抗体制备领域，具体地涉及一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用。
背景技术
多流行于冬春季的鸭甲型肝炎病毒(Duck Hepatitis A Virus；DHAV),是一种鸭急性接触性传播性病毒，1～2周雏鸭最易感。DHAV从基因型可分为1，2，3型，引起雏鸭发病的主要为1，3型病毒。DHAV主要导致雏鸭运动失调、转圈、两脚痉挛后踢,头向后背等神经症状，该病发病急,传播快,雏鸭常在发病后几个小时内死掉。近年来，有研究报道雏鹅发生病毒性肝炎，但由于病因复杂，尚未有明确的报道确定鹅的病毒性肝炎病原是鸭甲型肝炎病毒，对该病原也没有进行分类研究的报道。我们先前研究证明，从发病小鹅瘟的雏鹅肝脏中分离获得的病原为鸭甲型肝炎病毒基因3型，从而将该病原予以明确，并在此基础上研究发现该病毒基因3型也能够感染雏鹅，导致1～2周龄雏鹅发病并且死亡，且流行病学调查表明，发生小鹅瘟的雏鹅携带该病毒的阳性率较高，达到20～30％。
传统上，防治鸭甲型肝炎的方法是使用鸭肝炎抗体。通过利用灭活的鸭甲型肝炎疫苗对产蛋鸡进行多次免疫，可获得安全、高效的卵黄抗体。但是，尚没有文献报道对鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒感染雏鹅是如何进行治疗和预防的，也未见有制备相应的抗体的报道。
产蛋鸡易于规模化饲养，产蛋率高，是大批量生产卵黄抗体的理想动物。 应用异源动物鸡制备卵黄抗体，不但减少了同源疫病传染的危险，也为研制其他疫病的异源高免卵黄抗体提供了有益的经验。
卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白IgG(egg yolkimmunoglobulins),简称为IgY。卵黄抗体的研究始于19世纪末，1893年，Klemperer发现了卵黄中富含抗体；1934年Jukes的实验证明母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中，从而为雏鸡提供被动免疫保护。Patters等的试验证实，相对别的血浆蛋白，IgG被选择性的转运到卵泡中。1969年，Leslie和Clem将这种抗体命名为IgY。
卵黄抗体的形成过程是：当机体受到外界特异性抗原(尤其是灭活抗原)的刺激后诱发一系列的免疫应答反应，激发B细胞分化成能分泌特异性抗体的浆细胞，分泌大量的特异性抗体进入血液中。同时在产蛋禽体内，血液中的特异性抗体IgG(所有亚群)由卵巢IgG受体的介导逐步进入到卵巢滤泡和输卵管中，并在卵黄中蓄积起来，也正是由于这种卵黄累积作用，使卵黄中的IgG明显地高于血清中的含量，而血清中的其他抗体(主要是IgM，IgA)与输卵管中的卵白白蛋白一起混入到鸡蛋白中。
卵黄抗体在多种环境中有较高的稳定性，在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性，90℃处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在pH＜4时，仅有少量卵黄抗体失去活性。在pH4-12范围内，卵黄抗体的结合活性几乎不受影响，在pH＞12时，卵黄抗体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的特性，即使经过5次冻融，其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月，4℃保存可达5年以上，活性仅下降5％左右。由于具有这些稳定的理化性质，所以其的开发应用备受人们所关注。
除上述理化特性外，卵黄抗体还有其他重要的生物学特性。卵黄抗体浓度 高于血清IgG，单个卵黄(约15mL)含200mg左右的卵黄抗体，自卵黄中获得卵黄抗体较实验动物血清方便。且卵黄抗体不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG)结合，卵黄抗体还不与血清中的类风湿因子(RF)结合，可提高免疫学检测的准确性。因而可用卵黄抗体检测粪便中的病毒，因为粪便中经常含有大量SPA，用卵黄抗体检测可避免假阳性结果。卵黄抗体是独特的IgG同种型抗体，同时哺乳动物组织结构较禽类组织具有高度免疫性，卵黄抗体用于哺乳动物检测具有明显的优势，许多高度保守的抗原，在免疫动物后仅产生极小的免疫原性，却可用卵黄抗体进行区分，因此卵黄抗体可用于兽医和人类免疫学的检测。
杨树皮类脂(Poplar Bark Lipid，PBL)是从杨树皮中提取的一种橙黄色脂溶性物质，是一种天然的复杂混合物，富含大量的多糖、有机酸、甾醇、磷脂、甙类及维生素等物质。多糖类具有促胸腺体液反应、刺激网状内皮系统，提高机体特异性免疫反应能力；有机酸具有增强机体免疫功能的作用，能够刺激和促进单核吞噬细胞功能，对抗免疫抑制对免疫器官的抑制作用；甙类能够加速抗体的产生、促进淋巴细胞转化和增强网状内皮系统功能等作用。这些物质在动物体内协调统一，大大提高动物体的免疫机能。通过免疫反应切片观察注射过杨树皮类脂的家禽主要免疫器官如法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠和扁桃体等产生了强烈的免疫应答反应。因此，可以确定杨树皮类脂具有较强的免疫增强作用。这些机理的研究，为杨树皮类脂协助抗体用于预防和治疗某些家禽疫病提供了理论支持。
对于杨树皮类脂的免疫效果，我们前期研究证明，杨树皮类脂作为提高机体免疫力的免疫增强剂，也受到剂量的严格影响，其免疫诱导作用具有双向性。适量的剂量具有正向的免疫增强作用，杨树皮类脂的添加剂量影响着机体免疫 器官的应答反应程度。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供一种雏鹅病毒性肝炎抗体，以及该抗体的制备方法和应用领域。利用杨树皮类脂与鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒高免卵黄抗体进行混合，制备出用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒而导致的雏鹅病毒性肝炎的卵黄抗体。
本发明是通过如下技术方案来实现的：
一种雏鹅病毒性肝炎抗体，它包括杨树皮类脂0.1～0.3％(重量百分比)，鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒高免卵黄抗体，中和效价不低于1：128，泊罗沙姆1880.1～0.2％(重量百分比)，硫柳汞0.01％(重量百分比)。
本发明还提供一种雏鹅病毒性肝炎抗体的制备方法，步骤如下：
(1)制备卵黄抗体，按照不低于1：4的体积比例混合卵黄抗体和无菌生理盐水，进行匀浆；
(2)在步骤(1)得到的混合液中添加杨树皮类脂，使其终浓度达到0.1～0.3％(重量百分比)，充分混合搅拌；
(3)在步骤(2)得到的上述混合液中添加泊罗沙姆188，使其终浓度达到0.1～0.2％(重量百分比)；
(4)将步骤(3)得到的混合液在4～8℃冷浸过滤；
(5)步骤(4)得到的滤液经巴氏消毒后加入终浓度为0.01％(重量百分比)的硫柳汞，分装，无菌检验合格备用。
进一步，所述的步骤(1)卵黄抗体的制备方法：利用鹅源鸭甲型肝炎基因3型毒株接种SPF鸭胚或非免疫鸭胚或鹅胚，收集60～120小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加终浓度为0.1％(重 量百分比)的甲醛灭活；然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫；首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗，21日时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗，28日时进行第4次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗；于第4次免疫后14日，采集鸡血清测定抗DHAV中和抗体效价，合格者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干，无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒入消毒好的组织捣碎机中，获得卵黄抗体。
进一步，所述步骤(2)中杨树皮类脂在使用前先过200～300目纱网过滤，然后将滤液转入220～440nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。
进一步，所述步骤(3)中混合液中添加泊罗沙姆188，先将其按照重量比配制成10％的水溶液。
进一步，所述步骤(4)的过滤方法为，100～200目纱网第一次过滤，然后将滤液转入220～440nm的微孔滤袋中，压力过滤。
本发明还提供一种雏鹅病毒性肝炎抗体的使用方法，所述抗体使用时，中和效价不低于1：128，且预防和治疗剂量不低于0.5ml/只。
本发明与现有技术相比的有益效果
本发明雏鹅病毒性肝炎卵黄抗体制备工艺简单，材料来源方便，产量高，成本低，效果好。
首先制备抗体的病原来源不同，本发明制备抗体的病原来自雏鹅，而非鸭源，而制备鸭甲型肝炎抗体的病原来自雏鸭。这样制备的抗体更有针对性、明确性，抗体效果更确切。
其次，鸭甲型肝炎抗体主要用于雏鸭，而鹅源鸭甲型肝炎抗体主要用于雏 鹅。目前尚未有文献报道雏鸭和雏鹅感染鸭甲型肝炎病毒是否具有一致的病理变化。因此，鹅源鸭甲型肝炎抗体主要用于雏鹅更具有可行性。
再次，本发明利用抗体与杨树皮类脂结合使用比单独使用抗体的治疗效果更明显。杨树皮类脂具有双向性，本发明通过控制杨树皮类脂的用量，可将杨树皮类脂作为卵黄抗体的免疫佐剂，从而即可保持抗体特性，又能成为良好的免疫增强剂和刺激剂，雏鹅发生肝炎时，内脏多器官损伤，表现为机体抵抗力全面下降，单独使用抗体仅仅针对病毒，而不能同时提高机体全身免疫力，添加类脂后，由于类脂具有提高机体全身免疫力的作用，对于机体迅速清除病毒、恢复健康具有重要的促进作用。
最后，现有技术制备的抗体在放置一个月左右就会出现沉淀，泊罗沙姆188目前主要用于提取抗体，且使用剂量较大(1～5％)，本发明在制备的抗体中添加了微量泊罗沙姆188(0.1～0.2％)，使抗体性状稳定，久置不会出现沉淀；泊罗沙姆种类繁多，用途广泛，在卵黄抗体中应用主要是将卵黄中的脂类(不饱和脂肪酸、卵磷脂等)除去，但往往造成抗体效价降低，且不稳定，但是，通过定量添加，控制浓度，则完全发挥相反的效果，即可以使抗体稳定，且保护效价不降低。
本发明抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好的有点，同时还具有产生免疫力时间早：通过中和试验检测血清中的抗体，我们发现注射鹅体后1小时即可产生坚强免疫力，比不加杨树皮类脂的常规抗体提前2小时左右；保存运输方便：无需特殊冷藏设备，0～8℃保存12个月，常温6个月；应激性小，吸收良好。在紧急预防与治疗方面具有显著的效果。
具体实施方式
下面通过实施例来对本发明的技术方案作进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
实施例1
利用从雏鹅肝脏分离鉴定的假设代号为A的鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒分离毒株接种SPF鸭胚，收集60～96小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加0.1％甲醛灭活。然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫。首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗，21日时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗，28日时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗。卵黄抗体的制备第4次免疫后14日，采集鸡血清测定中和抗体效价，达到1：128者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干。无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒入消毒好的组织捣碎机中。1：4的比例混合卵黄液和无菌生理盐水，进行匀浆1～2min。杨树皮类脂120目纱网过滤，然后将滤液转入250nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。在混合卵黄液中添加杨树皮类脂(购自山东省莒县林产化工厂)，使杨树皮类脂终浓度达到0.1％，充分混合搅拌。在混合液中添加泊罗沙姆188，使其终浓度达到0.1～0.2％。将混合液6℃冷浸过滤，120目无菌纱网过滤，然后将滤液转入250nm的微孔滤袋中，无菌压力过滤。滤液经巴氏消毒后加入万分之一的硫柳汞，分装，无菌检验、安全检验合格(无菌检验、安全检验根据2008版农业部兽用生物制品质量标准进行)。
用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎。
治疗用量：对发病初期的5日龄雏鹅紧急颈部皮下注射1.0ml/只，治愈率可 达到85％以上。
预防用量：对3日龄雏鹅颈部皮下注射0.5ml/只，10天后再次于雏鹅颈部皮下注射0.5ml/只，保护率可达到85％以上。
抗体性状：稳定，久置不出现絮状沉淀。
实施例2
利用从雏鹅肠道分离鉴定的假设代号为B的鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒分离毒株接种非免疫鹅胚，收集60～96小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加0.1％甲醛灭活。然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫。首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗，21日时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗。卵黄抗体的制备第3次免疫后14日，采集鸡血清测定中和抗体效价，达到1：256者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干。无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒人消毒好的组织捣碎机中。1：4的比例混合卵黄液和无菌生理盐水，进行匀浆1～2min。杨树皮类脂120目纱网过滤，然后将滤液转入440nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。在混合卵黄液中添加杨树皮类脂(购自山东省莒县林产化工厂)，使杨树皮类脂终浓度达到0.2％，充分混合搅拌。其余步骤同实施例1。
用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎。
治疗用量：对发病初期的7日龄雏鹅紧急颈部皮下注射1.0ml/只，治愈率可达到90％以上。
预防用量：对5日龄雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，7天后再次于雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，保护率可达到90％以上。
抗体性状：稳定，久置不出现絮状沉淀。
实施例3
利用从雏鹅肾脏分离鉴定的假设代号为C的鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒分离毒株接种非免疫鸭胚，收集60～96小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加0.1％甲醛灭活。然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫。首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。卵黄抗体的制备第2次免疫后14日，采集鸡血清测定中和抗体效价，达到1：512者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干。无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒人消毒好的组织捣碎机中。1：4的比例混合卵黄液和无菌生理盐水，进行匀浆1～2min。杨树皮类脂120目纱网过滤，然后将滤液转入440nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。在混合卵黄液中添加杨树皮类脂(购自山东省莒县林产化工厂)，使杨树皮类脂终浓度达到0.3％，充分混合搅拌。其余步骤同实施例1。
用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎。治疗用量：对发病初期的9日龄雏鹅紧急颈部皮下注射1.0ml/只，治愈率可达到95％以上。
预防用量：对7日龄雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，或5天后再次于雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，保护率可达到95％以上。
抗体性状：稳定，久置不出现絮状沉淀。
实施例4
利用从雏鹅肠道分离鉴定的假设代号为B的鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒 分离毒株接种非免疫鹅胚，收集60～96小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加0.1％甲醛灭活。然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫。首次免疫每只鸡胸部肌肉注射0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗，21日时进行第3次免疫，每只鸡肌肉注射l.0ml油乳剂灭活苗。卵黄抗体的制备第3次免疫后14日，采集鸡血清测定中和抗体效价，达到1：256者，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干。无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒人消毒好的组织捣碎机中。1：4的比例混合卵黄液和无菌生理盐水，进行匀浆1～2min。将混合液冷浸过滤，120目无菌纱网过滤，然后将滤液转入440nm的微孔滤袋中，无菌压力过滤。滤液经巴氏消毒后加入万分之一的硫柳汞，分装，无菌检验、安全检验合格(无菌检验、安全检验根据2008版农业部兽用生物制品质量标准进行)。
用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎。治疗用量：对发病初期的7日龄雏鹅紧急颈部皮下注射0.1ml/只，没有效果。
预防用量：对5日龄雏鹅颈部皮下注射0.1ml/只，7天后再次于雏鹅颈部皮下注射0.1ml/只，没有效果。
抗体性状：不稳定，久置出现絮状沉淀。
实施例5
利用从雏鹅肾脏分离鉴定的假设代号为C的鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒分离毒株接种非免疫鸭胚，收集60～96小时死亡胚胚体、绒毛膜和尿囊液混合捣碎，冻融三次，离心，取上清液，加0.1％甲醛灭活。然后与油佐剂充分乳化制成油乳剂灭活疫苗，用于健康产蛋鸡的免疫。首次免疫每只鸡胸部肌肉注射 0.5ml弱毒疫苗，14日后进行第二次免疫，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。卵黄抗体的制备第2次免疫后14日.采集鸡血清测定中和抗体效价，低于1：64，收集该鸡群产的蛋，自来水清洗污物后用0.05％百毒杀浸泡3～5min，纱布擦干后，再用75％酒精擦一遍，晾干。无菌条件下分离蛋清，把蛋黄倒入消毒好的组织捣碎机中。1：4的比例混合卵黄液和无菌生理盐水，进行匀浆1～2min。杨树皮类脂120目纱网过滤，然后将滤液转入440nm的微孔滤袋中，压力过滤，巴氏灭菌。在混合卵黄液中添加杨树皮类脂购自山东省莒县林产化工厂)，使杨树皮类脂终浓度达到0.2％，充分混合搅拌。其余步骤同实施例1。用于预防和治疗雏鹅感染鸭甲型肝炎基因3型病毒引起的雏鹅病毒性肝炎。
治疗用量：对发病初期的9日龄雏鹅紧急颈部皮下注射1.0ml/只，没有效果。
预防用量：对7日龄雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，或5天后再次于雏鹅颈部皮下注射1.0ml/只，没有效果。
抗体性状：不稳定，久置出现絮状沉淀。
表1各实施例条件对比

从表1可以看出：
实施例4说明，中和效价尽管超过本发明描述的1：128，但使用剂量低于本发明说描述的0.5ml，且没有添加杨树皮类脂，对病毒感染也不会产生保护效 果。不添加0.1-0.2％的泊洛沙姆，抗体形状不稳定，有絮状沉淀。
实施例5说明，使用剂量尽管达到本发明说描述的0.5ml以上，但中和效价低于本发明描述的1：64，对病毒感染也不会产生保护效果。不添加0.1～0.2％的泊洛沙姆，抗体形状不稳定，有絮状沉淀。