一种荞麦壳黄酮提取物及其作为AGES抑制剂的应用.pdf

本发明公开了一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，它是利用热水高压法提取荞麦壳黄酮得到的粗提物BHEs，再利用D101型大孔树脂纯化BHEs后得到精制物BHEs-A；荞麦壳黄酮提取物在不同反应体系中具有抑制牛血清白非酶糖基化早期、末期产物生成的能力和对已生成AGEs抑制性，在黄酮含量相同时，BHEs-A≥异槲皮苷>芦丁≥BHEs=芦丁和异槲皮苷混标≥芦丁、槲皮素和异槲皮苷混标>AG>槲皮素；BHEs-A为混合物，其中所含的芦丁和异槲皮苷含量不高，说明BHEs-A中可能还存在其他活性成分。荞麦壳黄酮提取物为AGEs抑制剂和裂解剂，在治疗糖尿病并发症方面有很好的应用前景。

1.    一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，它包括：将荞麦壳干燥、粉碎、加水，加热提取；过滤，滤液真空浓缩或冷冻干燥，得荞麦壳黄酮提取物BHEs。

2.   根据权利要求1所述的一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，其特征在于：所述的加热提取为高温高压。

3.  根据权利要求2所述的一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，其特征在于：所述的高温为121℃，高压加热20min后过滤，滤渣重复提取2次，将滤液合并。

4.  荞麦壳黄酮提取物BHEs，它是用权利要求1所述的一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法获得的。

5.  荞麦壳黄酮提取物BHEs-A，它是将权利要求4所述的荞麦壳黄酮粗提取物BHEs，经大孔树脂动态吸附-洗脱，蒸发去除溶剂制得。

6.  根据权利要求5所述的荞麦壳黄酮提取物BHEs-A，其特征在于：所述的大孔树脂为D101型大孔树脂。

7.  权利要求4所述的荞麦壳黄酮提取物BHEs或权利要求5所述的荞麦壳黄酮提取物BHEs-A作为AGEs抑制剂的应用。

8.  权利要求4所述的荞麦壳黄酮提取物BHEs或权利要求5所述的荞麦壳黄酮提取物BHEs-A在制备治疗糖尿病并发症药物方面的应用。

一种荞麦壳黄酮提取物及其作为AGEs抑制剂的应用
技术领域
本发明属于保健食品药品领域，具体涉及一种荞麦壳黄酮提取物及其制备方法和作为AGEs抑制剂改善和治疗糖尿病及糖尿病并发症相关的食品和药品方面的应用。
背景技术
蛋白质非酶糖基化是非酶促条件下，氨基酸、蛋白质或脂类等大分子的游离氨基与葡萄糖（Glucose）或果糖（Fructose）等还原糖经缩合、重排、裂解、氧化修饰后产生的一系列稳定的非酶糖基化终末期产物（AGEs），也称其为美拉德反应产物或晚期糖基化终末产物。美拉德反应通常被用于描述发生在热加工食品如面包、饼干等中的反应，而糖化则是发生在人体内的反应。
AGEs呈黄棕色，具有交联性、荧光性、不溶性且不可逆的复杂物质。AGEs形成包括Amadori产物氧化和非氧化，Amadori产物氧化后的两种机制形成，AGEs的形成过程包括三阶段：在糖基化反应的早期阶段，蛋白质的氨基与生理糖的醛基反应形成可逆的席夫碱，席夫碱又通过重排进而形成Amadori产物；在糖基化反应的第二阶段，这些Amadori产物不可逆地转变成反应性二羰基中间体，如甲基乙二醛（MGO）或乙二醛（GO）等；在最后阶段，可以通过Amadori产物氧化进而形成AGEs，也可以通过甲基乙二醛（MGO）、乙二醛（GO）或3-脱氧葡糖醛酮等中间体发生非氧化反应^[5]，进一步与蛋白质的赖氨酸、精氨酸和半胱氨酸等氨基酸残基发生反应，通过一连串复杂的反应如脱水、氧化、分裂等产生大量的荧光性或非荧光性的交联或非交联终末产物，即AGEs。葡萄糖、葡萄糖自氧化产物（阿拉伯糖和乙二醛）和戊糖等各种糖均可以参与AGEs的形成，作为提供羰基的物质。也有研究发现，糖的氧化、脂质和氨基酸的氧化均可导致CML的形成。因此可以看出，蛋白质非酶糖基化是一个复杂的反应，而反应产物也有很多种，到目前为止，在组织中可能检测到的AGEs分为三类：荧光交联性的AGEs，如戊糖素；非荧光但具有交联性的AGEs，如甲基乙二醛赖氨酸二聚体（MOLD）；非荧光且非交联的AGEs，如羧甲基赖氨酸（CML）。
大量研究证实，引发糖尿病并发症的根本物质是蛋白质糖化终产物（AGEs）。糖尿病患者由于长期高血糖而加速形成和积累AGEs。研究发现，AGEs主要在长寿命的蛋白质上积累，如胶原蛋白，一种细胞外基质蛋白。AGEs的积累会改变胶原蛋白的理化性质和生理功能，对血管弹性有不好的影响。另外，AGEs通过在细胞膜结合到特定的受体（R-AGEs），可以触发核因子-κB（NF-κB）信号通路以诱导促炎介质的表达和引起氧化应激，从而导致细胞损伤，进而引起一些糖尿病并发症的发生与发展。
荞麦作为重要的杂粮，抗冻性强、生育期短、种植要求低。最广泛种植的荞麦品种包括普通荞麦（荞麦）和苦荞（苦荞），是生产苦荞茶、谷粒、面粉和面条原材料。荞麦因在慢性疾病的治疗效果吸引了来自食品科学家越来越多的重视。荞麦有平衡的氨基酸组成、丰富的维生素、可溶性碳水化合物、D-手性肌醇、荞麦糖醇和硫胺素结合蛋白等。荞麦中还含有丰富的抗氧化物质，如类黄酮、酚酸、维生素E、谷胱甘肽、肌醇磷酸盐和褪黑激素等。大多数水果、蔬菜和谷物相比，荞麦中含有较多的芦丁（槲皮素-3-芸香糖苷），它是一种高效的黄酮醇苷，具有抗氧化、抗炎、抗癌和抗糖化性能。
目前，荞麦加工的主要利用荞麦籽粒，荞麦壳是荞麦加工中的副产物，可用做枕芯填充料。但这仅仅是荞麦壳极少部分的利用，大多数还是直接被丢弃，并没有得到有效和充分的利用。
发明内容
    本发明的目的是为了更好地利用废弃的荞麦壳，而提供一种提取荞麦壳黄酮类化合物的方法。
一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，它包括：
将荞麦壳干燥、粉碎、加水，加热提取；过滤，滤液真空浓缩或冷冻干燥，得荞麦壳黄酮提取物BHEs；
所述的加热提取为高温高压；
所述的高温为121℃，高压加热20min后过滤，滤渣重复提取2次，将滤液合并。
荞麦壳黄酮提取物BHEs，它是用上述的一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法获得的。
荞麦壳黄酮提取物BHEs-A，它是将荞麦壳黄酮粗提取物BHEs，经大孔树脂动态吸附-洗脱，蒸发去除溶剂制得；
所述的大孔树脂为D101型大孔树脂。
上述的荞麦壳黄酮粗提取物BHEs或 BHEs-A作为AGEs抑制剂或裂解剂的应用。
上述的荞麦壳黄酮粗提取物BHEs或 BHEs-A在制备治疗糖尿病并发症药物方面的应用。
发明详述
本发明甜荞麦壳为材料，利用热水高压法提取荞麦壳黄酮得到的粗提物BHEs，再利用D101型大孔树脂纯化BHEs后得到精制物BHEs-A；利用果糖胺法和荧光分光光度计法检测早期产物和晚期AGEs生成的情况，研究不同牛血清白蛋白非酶糖基化反应发生的体系中研究荞麦壳黄酮对不同阶段产物的抑制作用和对已经生成的AGEs的抑制作用；再利用SDS-PAGE法分析糖化BSA的变化，进而辅助判断荞麦壳黄酮作为AGEs抑制剂和裂解剂的可能。经实验证明：
1．三种还原糖-牛血清白蛋白体系中发生非酶糖基化的反应中，AGEs生成量由高到低依次为核糖>果糖>葡萄糖；BHEs对Ribose-BSA体系无抑制作用，在Glucose-BSA和Fructose-BSA体系中呈现显著的抑制作用（p<0.05）；
2．BHEs和BHEs-A在Glucose-BSA和Fructose-BSA体系中对非酶糖基化的早期产物具有显著的抑制活性且呈现剂量依赖关系，Glucose-BSA体系中的抑制效果要好于Fructose-BSA体系；Glucose-BSA体系中在BHEs-A浓度为0.05mg/mL时，抑制率就可达到72.85%，显著高于AG的抑制性；
3．BHEs和BHEs-A在Glucose-BSA和Fructose-BSA体系中有显著的抑制糖基化终末产物AGEs生成的能力，BHEs-A当浓度为0.2mg/mL时对三个月内生成的AGEs的抑制率分别为71.11%和89.43%，显著高于同时期内同浓度下AG的抑制活性（p<0.05）；SDS-PAGE结果显示对糖化BSA的生成情况的影响也与抑制产物形成的效果一致，说明荞麦壳黄酮对牛血清白蛋白-葡萄糖体系的非酶糖基化有抑制作用；
4．BHEs和BHEs-A在MGO-BSA和GO-BSA体系中对AGEs也有抑制效果，BHEs-A当浓度为0.2mg/mL时，抑制AGEs生成的能力分别为58.97%和46.69%，显著高于同时期内同浓度下AG的抑制活性（p<0.05）；SDS-PAGE结果显示对糖化BSA的生成情况也有一定的影响；
5．在黄酮含量相同时，BHEs-A≥异槲皮苷>芦丁≥BHEs=芦丁和异槲皮苷混标≥芦丁、槲皮素和异槲皮苷混标>AG>槲皮素，且BHEs-A和异槲皮苷未呈现显著性差异（p<0.05），但BHEs-A为混合物，其中所含的芦丁和异槲皮苷含量不高，且BHEs-A中可能还存在其他活性成分。
6．初步判断荞麦壳黄酮对已生成的AGEs也有抑制作用。
荞麦壳黄酮提取物在不同反应体系中具有抑制牛血清白非酶糖基化早期、末期产物生成的能力和对已生成AGEs的抑制性，荞麦壳黄酮提取物为AGEs抑制剂和裂解剂，在治疗糖尿病并发症方面有很好的应用前景。
本发明提供了一种提取荞麦壳黄酮类化合物BHEs的方法，它是利用热水高压法提取荞麦壳黄酮得到的粗提物BHEs，再利用D101型大孔树脂纯化BHEs后得到精制物BHEs-A；荞麦壳黄酮提取物在不同反应体系中具有抑制牛血清白非酶糖基化早期、末期产物生成的能力和对已生成AGEs抑制性，在黄酮含量相同时，BHEs-A≥异槲皮苷>芦丁≥BHEs=芦丁和异槲皮苷混标≥芦丁、槲皮素和异槲皮苷混标>AG>槲皮素，但BHEs-A为混合物，其中所含的芦丁和异槲皮苷含量不高，说明BHEs-A中可能还存在其他活性成分。荞麦壳黄酮提取物为AGEs抑制剂和裂解剂，在治疗糖尿病并发症方面有很好的应用前景。
附图说明
图1为荞麦壳提取物BHEs的HPLC分析结果；其中(A) 标品检测结果. (1)芦丁 (2) 异槲皮苷 (3)槲皮素； (B) 荞麦壳提取物检测结果；
图2为BHEs和BHEs-A在还原糖-牛血清白蛋白体系中对AGEs形成的抑制作用；
图3为 BHEs和BHEs-A抑制非酶糖基化早期产物果糖胺的形成；
图4为葡萄糖-牛血清白蛋白（Glucose-BSA）体系中SDS-PAGE分析；其中：A：SDS-PAGE条带(1 标品；2 BSA；3糖化BSA； 4 AG 0.05mg/mL；5 AG 0.2mg/mL；6 BHEs 0.05mg/mL；7. BHEs 0.2mg/mL； 8 BHEs-A 0.05mg/mL；9. BHEs-A 0.2mg/mL)，B：糖化BSA/初始BSA；
图5为果糖-牛血清白蛋白（Fructose-BSA）体系中SDS-PAGE分析；其中：A：SDS-PAGE条带(1 标品；2BSA；3糖化BSA； 4 AG 0.05mg/mL；5 AG 0.2mg/mL；6 BHEs 0.05mg/mL；7. BHEs 0.2mg/mL； 8 BHEs-A 0.05mg/mL；9. BHEs-A 0.2mg/mL) ，B：糖化BSA/初始BSA；
图6 为BHEs和BHEs-A在丙酮醛-牛血清白蛋白体系中对AGEs形成的抑制作用；
图7为 BHEs和BHEs-A在乙二醛-牛血清白蛋白体系中对AGEs形成的抑制作用；
图8为标准品、 BHEs及BHEs-A在Glucose-BSA体系中对AGEs形成的抑制作用比较；其中：R：芦丁; Q：槲皮素; I：异槲皮苷; R&I：芦丁与槲皮素混合; R&Q&I：芦丁、槲皮素及异槲皮苷混合物；
图9为标准品、 BHEs及BHEs-A在Fructose-BSA体系中对AGEs形成的抑制作用比较；其中：R：芦丁; Q：槲皮素; I：异槲皮苷; R&I：芦丁与槲皮素混合; R&Q&I：芦丁、槲皮素及异槲皮苷混合物；
图10为 BHEs和BHEs-A在Glucose-BSA体系中对已形成AGEs-BSA的抑制作用；
图11 为BHEs和BHEs-A在Fructose-BSA体系中对已形成AGEs-BSA的抑制作用。
具体实施方式
实施例1荞麦壳提取物的制备
将干燥后的荞麦壳用高速粉碎机粉碎、过60目筛后放入干净的烧杯中，加入粗粉质量10倍的蒸馏水，在121℃条件下，高压加热20min后过滤，滤渣重复提取2次。将滤液合并，在60℃条件下真空浓缩至膏状，冷冻干燥24h后即获得荞麦壳黄酮粗提物（BHEs），其颜色为棕色。上清液配制成1%浓度的母液，试验时稀释使用。
取25mg BHEs加入50ml蒸馏水溶解，加入常规方法处理的D101型大孔树脂2 g，在常温下置于100 r/min摇床中24 h后；将吸附有效成分的大孔树脂用70%乙醇50ml浸泡，在常温下置于100 r/min摇床中24 h后，将大孔树脂滤出，剩余液体即为吸附。吸附和未吸附的液体分别在60℃条件下旋转蒸发去除溶剂，用恒温水浴锅在100℃条件下水浴干燥直至固体析出，最后真空干燥处理得到干燥的吸附物（BHEs-A）和未吸附物（BHEs-NA）。
采用已经公布的NaNO₂-Al(NO₃)₃比色法和常规HPLC法分别对BHEs、BHEs-A、BHEs-NA中的总黄酮含量和黄酮类物质进行检测分析。结果表明，三种样品的黄酮含量呈现显著性差异，其中BHEs为（390.28±26.61） mg/g，占荞麦壳粗提取物的39.03%； BHEs-A为（643.18±43.95） mg/g，占荞麦壳粗提物的64.32%，BHEs-NA中残留的总黄酮含量较少，仅为（106.88±3.47）mg/g。如图1所示，根据图1（A）中标准品芦丁（1）、异槲皮苷（2）、槲皮素（3）出现峰的时间分析荞麦壳提取物中是否含有该物质，由图1（B）可知，荞麦壳提取物中主要含有芦丁和异槲皮苷，槲皮素并未在BHEs中检测到。
实施例2 荞麦壳提取物对还原糖-BSA体系的抑制效果比较
分别用含有0.02% 叠氮化钠（NaN₃）的磷酸盐缓冲液（PBS，200mM，pH 7.4）配置出浓度为10 mg/ml的牛血清白蛋白(BSA)溶液，浓度为500 mM的葡萄糖（Glucose）或果糖（Fructose）或核糖（Ribose）溶液和浓度为1mg/mL 的测试样品（BHEs和BHEs-A）。反应液中包括5mL糖溶液、10mLBSA溶液、以及终浓度为0.05、0.10、0.15、0.20 mg/mL的测试样品（BHEs）。然后在37℃条件下培养4周，取出部分样品检测，其中不含还原糖和测试样品的反应液为空白组，不含测试样品的为对照组，含测试样品的反应液为试验组，氨基胍AG 作为阳性对照。蛋白非酶糖化反应中AGEs的含量通过检测激发波长360nm和发射波长460nm下的荧光产物的荧光强度值来评估，荧光强度高表明AGEs含量高。
结果如图2所示，BHEs和BHEs-A在葡糖糖-BSA和果糖-BSA体系中培养一个月对AGEs形成的抑制作用，而对核糖-BSA体系无抑制作用。
实施例3荞麦壳提取物抑制非酶糖基化早期产物的形成
反应体系为实施例2所述，分别在1、2、3、4、13周取出部分样品，采用糖化血清蛋白（GSP）测试盒——果糖胺法对不同时间反应体系中的早期产物果糖胺进行检测。
结果如图3所示，BHEs和BHEs-A均对蛋白质非酶糖基化的早期产物-果糖胺的生成有显著的抑制效果，比阳性对照氨基胍效果更为显著，而且含有更高总黄酮含量的BHEs-A在低浓度时就已出现较高的抑制效果，初步判断荞麦壳黄酮在Glucose-BSA和Fructose-BSA体系中能够抑制糖基化早期产物的生成。
实施例4荞麦壳提取物抑制非酶糖基化终末产物的形成
反应体系为实施例2所述，分别在1、2、3、4、13周取出部分样品，利用荧光酶标仪在激发波长360nm和发射波长460nm，增益50的条件下，检测其荧光强度，按下面的公式计算出抑制率（%）：
抑制率(%)=100-100×(FL_s-FL_b)/(FL_c-FL_b)
其中FLs是指试验组的荧光强度, FLb 是指空白组的荧光强度，FLc 是对照组的荧光强度。
结果如表1所示，在Glucose-BSA体系中，1-13周，随着时间的增加，荧光强度逐渐增大，表明反应生成的AGEs在不断积累增加，各样品均表现出了抑制糖基化终产AGEs形成的能力，且呈现剂量依赖关系；第1、2周数据显示，各样品的抑制率由高到低为：BHEs-A>AG>BHEs，呈显著性差异（P<0.05），第2周浓度为0.2mg/mL时，BHEs-A的抑制率最高，为62.88%；第13周时，BHEs和BHEs-A仍表现出抑制性，与阳性对照AG相比，BHEs-A的抑制性更强，当浓度为0.2mg/mL时抑制率可达71.11%。

注：FL表示AGEs的荧光强度，I%表示对AGEs的抑制率；表中所有数据均为平均值±标准偏差(n=3)，且每列中不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)
如表2所示，在Fructose-BSA体系中，1-13周，随着时间的增加，荧光强度逐渐增大，表明反应生成的AGEs在不断积累增加，各样品均表现出了抑制糖基化终产物AGEs形成的能力，且呈现剂量依赖关系；第1、2周数据显示，各样品的抑制率由高到低为：BHEs >AG>BHEs-A，呈显著性差异（P<0.05），第2周浓度为0.2mg/mL时，BHEs的抑制率最高，可达82.29%；第13周时，BHEs、BHEs-A及阳性对照AG的抑制活性有所提高，且组间差异显著（P<0.05），抑制性由高到低依次为BHEs-A>BHEs>AG，当浓度为0.2mg/mL时BHEs-A抑制率可达89.43%。

实施例5荞麦壳提取物对非酶糖基化蛋白分子量的影响
各组反应结束后，收集样本，按照XCell SureLockTM Mini-Cell说明书进行常规SDS-PAGE电泳检测。
结果如图4A所示和5A所示，具有葡萄糖化BSA的条带相对分子量（Mw≥98 kDa的）比原始的BSA较大，说明蛋白质之间的交联或碳水化合物结合到蛋白质发生在AGEs形成过程中。条带强度使用图像分析软件Gel-Pro计算糖化BSA的强度和原始-BSA的强度比值，结果见图4B和5B。所有的样品和氨基胍抑制糖化BSA的形成有显著效果。且呈现剂量依赖关系；BHEs-A呈现最强的抑制能力。
实施例6荞麦壳提取物对中间体-BSA中非酶糖基化的抑制
采用丙酮醛-牛血清白蛋白（MGO-BSA）、乙二醛-牛血清白蛋白（GO-BSA）为中间体-BSA体系。反应液中包括测试样品(BHEs 或 BHEs-A)、20 mg/ml BSA、1 mM MGO（或GO） 和 含0.02% (w/v) NaN₃的磷酸盐缓冲液（PBS，100 mM, pH 7.4）。充分混匀后在37℃避光条件下培养1周后，取部分反应液用于指标检测，其中不含MGO和抑制剂的反应液为空白对照，不含抑制剂的为对照组，含测试样品的反应液为试验组，氨基胍AG 作为阳性对照组。
结果如图6所示，所有样品对MGO-BSA均具有抑制活性，呈剂量依赖关系；且同浓度下的BHEs-A的抑制性明显高于BHEs和AG，在0.2mg/mL时，BHEs-A的抑制率可达58.97%。如图7所示，所有样品对GO-BSA均具有抑制活性，呈剂量依赖关系；浓度为0.1mg/mL BHEs-A的抑制性显著高于AG和BHEs的最高浓度，说明BHEs-A拥有很强的抗AGEs生成的能力，在0.2mg/mL时，BHEs-A的抑制率可达46.69 %。
实施例7黄酮标准品与荞麦壳提取物对非酶糖基化抑制作用的比较
进一步确定主要的活性成分是否为黄酮类化合物，比较了标准品和BHEs及BHEs-A之间的抑制性，用已知荞麦壳中含有的芦丁、异槲皮苷，以及未检出槲皮素和混合标准品作为抑制剂，加入到反应液中，检测其对AGEs的抑制作用。
标准品浓度均为0.08mM和0.32mM。对Glucose-BSA而言（如图8（A）所示），反应进行1个月时，除槲皮素外，各样品都表现出一定的抑制性，且呈剂量依赖关系，抑制性由高到低依次为：BHEs-A≥异槲皮苷>芦丁>BHEs=芦丁和异槲皮苷混标=芦丁、槲皮素和异槲皮苷混标>AG>槲皮素；对Fructose-BSA体系而言（如图9（A）所示），反应进行1个月时，抑制性由高到低依次为：BHEs-A=异槲皮苷>芦丁=BHEs=芦丁和异槲皮苷混标>芦丁、槲皮素和异槲皮苷混标>AG>槲皮素。两个体系反应3个月时（如图8（B）、图9（B)所示），所有样品的抑制性均普遍升高，BHEs-A、BHEs、异槲皮苷及芦丁都表现出很高的抑制性。因此，当黄酮含量相同时，BHEs-A与异槲皮苷的抑制性没有显著性差异，浓度为0.08mmol/L的黄酮类物质的抑制性要远远高于浓度为0.68mmol/L的AG。
实施例8荞麦壳提取物对已形成非酶糖基化蛋白的抑制作用
为明确荞麦壳提取物对已经生成或从体外摄入的AGEs同蛋白之间形成的交联是否发挥抑制作用，将荞麦壳提取物与已生成的AGEs共同培养，对Glucose-BSA和Fructose-BSA体系中的抑制作用进行了分析。
在Glucose-BSA体系培养1个月形成的AGEs溶液中加入不同浓度的BHEs和BHEs-A后，再培养一段时间，在激发波长360nm和发射波长460nm下检测荧光强度。结果如图10A所示，培养1个月，BHEs和BHEs-A的抑制活性均高于AG的抑制活性，且BHEs-A的抑制活性最强，在低浓度时抑制率已高出BHEs和AG，在0.2mg/mL时其抑制率达到53.75%；如图10B所示，培养3个月，明显看出抑制率均有所提升，但AG的效果依然不明显，而 BHEs-A仍然具有最强的抑制性，0.2mg/mL时其抑制率达到71.32%。
在Fructose-BSA体系培养1个月形成的AGEs溶液中加入不同浓度的BHEs和BHEs-A后，再培养一段时间。如图11A所示，培养1个月，BHEs和BHEs-A的抑制活性均高于AG的抑制活性，在0.2mg/mL时BHEs和BHEs-A的抑制率分别为49.58%和66.71%。如图11B所示，培养3个月，抑制率保持稳定状态，AG的抑制性依旧较低，而在0.2mg/mL时，BHEs和BHEs-A的抑制率分别为51.82%和69.61%。