含母乳型氨基酸与超氧化物歧化酶结合物及制备方法 【技术领域】
本发明涉及超氧自由基及活性氧的清除剂，更具体地指一种应用复合氨基酸作载体，使超氧化物歧化酶(SOD)不易失活，起到SOD清除超氧自由基及活性氧的作用以及它的生产工艺。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD)是能清除超氧阴离子自由基而起保护细胞作用的重要抗氧化酶。由于生理性和病理性原因，人体内不断产生自由基，在体内自由基中，氧自由基占了很大比例，它包括超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢、单线性氧，他们都是极为活泼的，破坏性很大的物质。自由基清除剂可分为二大类：一类是小分子的自由基清除剂，其中包括抗氧化剂类如维生素E、维生素C；另一类为大分子的自由基清除剂，有几种酶是体内天然的自由基及活性氧的清除剂。正常健康体内的形成和清除处于一种动态平衡，一旦这种动态平衡被破坏，即自由基在机体内积累过多或过少，则机体就会患病或衰老。SOD作为国际学术界公认的重要的自由基清除剂，早在七十年代就被发达国家列入重点系统研究的对象。SOD的作用与功效、SOD的制备工艺等大约在90年代被逐渐作为添加剂用于药品、食品、化妆品的产品中。我国在上世纪九十年代中期也开始进入产品的使用，例如：“大宝SOD化妆品”、“SOD啤酒”、“SOD口腔清洁剂”等。同时，作为清除超氧阴离子自由基清除剂，SOD在临床上获得了广泛的应用。
超氧阴离子自由基所引起的疾病，主要为以下这些：
A、高压氧与氧中毒。氧中毒三种类型：即肺型氧中毒，表现为肺水肿；神经性氧中毒，表现为脑电变化；眼型氧中毒，表现为视网膜受损。
B、吞噬作用与急性炎症和水肿。在机体发炎中活性氧自由基起着主要作用，过剩的自由基如不能被SOD及时分解则可深入细胞，破坏正常细胞。
C、自身免疫性疾病。各种不同类型的自身免疫性疾病的发病机制虽各有不同特点，但氧自由基、前列腺素来衍生产物以及有巨噬细胞单核白细胞产生的水解酶类在引起病变上都起重要作用。
D、肺气肿。肺组织中含有弹性蛋白酶及其抑制剂，它们的不平衡是肺气肿成病的主要原因。抑制剂的活力可受超氧自由基地进攻而失活，从而导致弹性蛋白酶增高，使肺气肿可能性增大。
E、老年性白内障。眼晶状体受活氧自由基的氧化而损害，是各类型白内障发病的主要原因，人衰老时活性氧自由基在眼内积累的增多，易引起眼内酶及膜蛋白质以及晶状体的脂质过氧化。脂质过氧化产物丙二醛易与晶体蛋白交联形成白内障。
F、衰老时自由基对人体损伤作用。在人体不饱和脂肪酸比饱和脂肪酸要丰富得多。它们主要分布在生物膜上。不饱和脂肪酸的特点是当有自由基引发剂和氧存在时发生过氧化作用。机体衰老时，由于自由基的不平衡导致体内生物膜上不饱和脂肪酸的过氧化，使膜结构发生变化，机体趋老化，同时引起脂褐素产生。
G、氧自由基的致癌作用。从癌症产生看，正常细胞变成癌细胞必须经过二个阶段，即诱发与促进。在诱发阶段活性氧可直接损伤DNA，也可通过脂类过氧化酶间接损伤DNA。
作为清除超氧阴离子自由基清除剂SOD，不仅在上述疾病的临床应用上很广泛。同时作为一种有效的抗衰老药物也具有很好的预防功效。
但是，SOD是一种活性酶，半衰期极短仅为6分钟，而且遇到高温和酸性环境时易失活，吞服后进入人体又易被胃酶、胰酶所分解，这就很难以达到人体吸收的理想效果。而同时易失活的特征也使得它难以在终极产品中长期保持其活性。因此，如何能使SOD在常温下较长时间不失活？加工SOD产品时如何保证由单方到多方合成而不失活？其产品在进入人体时又如何保证不被胰酶所排斥、分解，保持被人体吸收？是SOD发展研究与实施过程中三大难题。由于保存和使用的不方便，使21世纪初发达国家在系统研究SOD的功能制备和应用的同时，正在着手研究半衰期长的SOD修饰衍生物。
【发明内容】
本发明的目的是利用含母乳型的氨基酸作载体，使SOD与其结合成含母乳型氨基酸与SOD的结合物，该结合物克服SOD的不稳定性，使其在生产、应用时保持它的有效活性，在体内达到清除超氧自由基和活性氧作用的目的。同时在单方氨基酸到多种氨基酸与SOD复合成结合物的产品生产过程中保证其SOD的活性，使SOD在人体中的功效真正得以发挥。
本发明的另一目的是提供制备含母乳型氨基酸与超氧化物歧化酶结合物的方法。
本发明是这样实施的：设计具有母乳结构成份的复合氨基酸作为SOD的共存体。
含母乳型氨基酸成份结构如下：(*为人体必须氨基酸)名称含母乳型氨基酸成份 重量百分比含量％本发明氨基酸成份重 量百分比含量％异亮氨酸* 5.12 4.5亮氨酸* 11.02 11-12赖氨酸* 6.89 4-7蛋氨酸* 1.67 1.5-6.5苯丙氨酸* 3.54 1.5-4缬氨酸* 5.61 4-5苏氨酸* 4.43 4-5色氨酸* 1.67 1.5-2精氨酸 3.74 3-4胱氨酸 2.07 1.5-2.5组氨酸 2.85 2.5-3.5丙氨酸 3.84 3.5-5天冬氨酸 8.76 8-9.5谷氨酸 18.60 17-19甘氨酸 2.26 2.5-4.5脯氨酸 9.55 8-10丝氨酸 4.53 4-5酪氨酸 3.84 3.5-4
本发明复合氨基酸经与一般单性氨基酸结构作载体的SOD配伍作大量试验对比，发现二者之间的共存性，即SOD的活性程度具有较明显和较大的差异。母乳结构状的复合氨基酸与SOD的共溶性、共存性远优于采用多种单性氨基酸配伍的结构载体。采用不同种类的单性氨基酸合成结构与SOD配伍其活性保存都未能满足一般制成产品保质期(18个月～24个月)的产品保质要求。本发明从不断结构配方对比试验中，本发明设计的人乳结构载体是最为优化的。
本发明含母乳型氨基酸与超氧化物歧化酶结合物的制备方法如下：
1、从豆类蛋白水解液中提取复合氨基酸，测定10多种游离氨基酸成；
2、按母乳型氨基酸结构成份(见成份结构配比表)的游离氨基酸中复配对应单性氨基酸；
3、混合后把复配后氨基酸粉剂加以成份结构测定；
4、将购买来的从动植物中提取活性SOD溶液溶于水(30℃)；
5、SOD倍散后加上适量淀粉搅拌混合；
6、在0℃低温下使SOD形成单性颗粒；
7、在复合氨酸混合、去湿进行造粒过程中把温度调控制在25℃±5℃中，加入SOD颗粒。
8、经灭菌压片(温度控制在50℃～60℃)，制成能保持SOD活性状态的复合氨基酸片。
9、按上述流程制成产品在保质期中(18～24个月)可使SOD失活率控制在5％以下。
本发明母乳型氨基酸对SOD进入人体内的作用与影响。我们用小白鼠作了这一项目的实验。每组10只小白鼠饲养30天，结果如表： 对照组酶活 实验组酶活 增长率 第一组 466.0+72.4 670.7+52.2 18.3 第二组 460.0+55.1 560.9+55.1 21.3 第三组 452.8+80.9 671.0+84.6 20.7
需氧生物体内存着自由基产生的内源性机制，每天都有大量的自由基产生。同时生物体内也存在着自由基的清除机制，由超氧化物歧化酶(SOD)过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)等的自由基清除系统负担机体内自由基的清除任务，使体内自由基保持在很低水平，其中SOD对机体内O2的清除起重要作用，由于自由基非常活泼，因而对机体有强烈破坏作用。
A、自由基引起结缔组织大分子的交联，从而阻碍营养物质的扩散并损伤组织活力。
B、自由基对DNA破坏，可导致引起细胞突变，导致体内主要酶的表达产生缺陷，从而引起机体衰老、死亡。
C、自由基引起的膜脂类过氧化作用导致亚细胞器的完整性丧失和细胞内过氧化脂蛋白碎屑的积累，而后者会损伤细胞的功能。
因此机体内酶活力提高可充分表示进入到人体内活性SOD的作用功效发挥正常，作用明显。从上述表中亦可看出实验组的SOD活力明显比对照组要高。
本发明技术的实现：技术是以母乳状复合氨基酸与SOD配伍，实现SOD活性的长期保存。同时证明这二者的配伍产生明显的加和增效作用。
发明的效果：在母乳状复合氨基酸作为SOD载体情况下，SOD的存活期及活性保持率都得到了充分的保证。
【附图说明】
图1为本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
本发明采用从豆类蛋白水解液中提取复合氨酸，该水解液中提取氨基酸可以从复合氨基酸生产企业(湖南华容县生化食品厂)购得，测定其氨基酸成份及含量氨基酸分析(常规方法测定)，然后根据含母乳型氨基酸成份复配对应氨基酸组成本发明氨基酸成份的重量百分比的氨基酸粉剂待用。再将从SOD生产企业(上海宝安生物制品有限公司)购买来的动植物中提取活性的SOD溶液溶于水(或蒸馏水中)温度控制在室温，边搅拌将SOD倍散后加上适量淀粉搅拌均匀混合，在0℃低温下使SOD形成单性的颗粒待用。
将上述待用的复合氨基酸去湿进行造粒，此过程温度通常控制在25℃±5℃中，然后加入制得的SOD颗粒，搅拌均匀混和，再将混合物在50℃±60℃灭菌压片，制得能保持SOD活性状态的复合氨基酸片。
本发明所得的能保持SOD活性状态的复合氨基酸片作SOD的活性共存时间试验(见下表)：活性共存时间活性降低速度项目名称多种单性氨基酸与SOD配伍8～10个月3个月↓30％6个月↓70％10个月↓90％16个月↓97％项目名称母乳结构氨基酸与SOD配伍20个月以上3个月↓1.5％6个月↓2.8％10个月↓4.4％16个月↓5.7％
本发明提要：本发明提出用一种母乳型结构的复合氨基酸作为载体以解决SOD半衰期短、易失活的弱点，从而达到SOD在常温常态下长期保存活性的目的。由于设计上述的结构与SOD具有很强的共存性，互容性且还具有加和增效性，因此SOD的活性保持期达20个月以上。