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可用作 C-MET 的抑制剂的酰胺基苯氧基吲唑
    c-Met 是酪氨酸激酶生长因子受体家族的一个成员。c-Met 表达发生在内皮细胞、 上皮细胞和间充质细胞中。内源性配体， 肝细胞生长因子 (HGF) 与 c-Met 的结合促进细胞 迁移、 增殖和侵袭。
     c-Met 牵涉到某些肿瘤的进展。 许多肿瘤类型中已经显示了 c-Met 超量表达， 包括 结肠癌、 乳腺癌、 肾癌、 肺癌、 血管瘤、 鳞状上皮骨髓性白血病、 黑色素瘤、 恶性胶质瘤和星形 细胞瘤。肿瘤细胞 c-Met 受体的活化增强肿瘤细胞增殖、 侵袭 / 转移和抗凋亡和细胞毒治 疗。
     已经报告了各种酰胺基苯氧基杂芳基 c-Met 抑制剂。例如参见 US2005/0288290、 US2006/0211695、 US2006/0004006 和 WO 2007103308。
     然而， 对于抑制 c-Met 的其它化合物仍然存在着需要。本发明提供了被认为具有 通过抑制 c-Met 而治疗癌症的临床用途的新型酰胺基苯氧基吲唑化合物。还认为， 优选的 本发明的化合物提供了与本领域中存在的某些其它 c-Met 抑制剂化合物相比的效力改进。
     本发明提供了式 I 的化合物 ： 以下结构式的化合物 ：其中 ： R1 是 H 或甲基 ； R2 是氨基、 二甲基氨基、 氟、 环丙基、 任选被氨基取代基或 1-2 个甲基取代基取代的吡啶 基、 任选被两个甲基取代基取代的吡唑基、 2- 甲氧基 - 嘧啶 -5- 基、 4- 甲基磺酰基苯基、 四 氢 -2H- 吡喃 -4- 基氨基、 ( 四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 氨基羰基、 或吗啉 -4- 基取代基 ：其中 Ra、 Rb 和 Rc 独立地选自 H 或甲基 ； R3 是 H 或 F ； R4 是 H、 甲基、 哌啶 -1- 基甲基、 吗啉 -4- 基甲基、 或吡唑 -1- 基甲基 ； 5 R 是H或F； 和X 是 CH=N、 CH=CH、 CH=C(CH3)、 C(CH3)=CH, C(CH3)=N、 N(CH3) 或 C( 吗啉 -4- 基甲基 )=CH ； 或其药用盐。
     本发明提供了治疗哺乳动物中的选自肺癌， 乳腺癌， 结肠直肠癌， 肾癌， 胰腺癌， 头 部癌症， 颈部癌症， 遗传性乳头状肾细胞癌， 儿童期肝细胞癌和胃癌中的癌症的方法， 包括 将有效量的式 I 的化合物或其药用盐给药于需要这种治疗的哺乳动物。
     本发明还提供了包括的式 I 的化合物或其药用盐与药用载体、 稀释剂或赋型剂的 药物组合物。
     本发明还提供了用作药物的式 I 的化合物或其药用盐。另外， 本发明提供了式 I 的化合物或其药用盐在制备治疗癌症的药物中的用途。尤其， 这些癌症选自肺癌， 乳腺癌， 结肠直肠癌， 肾癌， 胰腺癌， 头部癌症， 颈部癌症， 遗传性乳头状肾细胞癌， 儿童期肝细胞癌 和胃癌。 此外， 本发明提供了用于治疗选自肺癌， 乳腺癌， 结肠直肠癌， 肾癌， 胰腺癌， 头部癌 症， 颈部癌症， 遗传性乳头状肾细胞癌， 儿童期肝细胞癌和胃癌中的癌症的药物组合物， 其 包括式 I 的化合物或其药用盐作为活性成分。
     技术熟练的读者将会理解， 大多数或全部的本发明的化合物能够形成盐。本发明 的化合物是胺类， 因此与许多无机和有机酸反应而形成药用酸加成盐。这种药用酸加成盐 以及制备它们的普通方法在本领域中是众所周知的。例如参见 P. Stahl 等人 , HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); L.D. Bighley, S.M. Berge, D.C. Monkhouse, “Encyclopedia of Pharmaceutical Technology” . Eds. J. Swarbrick 和 J.C. Boylan, 第 13 卷 , Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, Hong Kong 1995, 第 453-499 页 ; S.M. Berge 等人 ,“Pharmaceutical Salts” , Journal ofPharmaceutical Sciences , 第 66 卷 , 第 1 号 , 1977 年 1 月。本发 明的化合物的优选的药用盐是甲磺酸盐。
     优选的是式 I 的化合物， 其中 ： 1 (a) R 是H； (b) R1 是甲基 ； (c) R2 是氨基， 二甲基氨基， 环丙基， 6- 甲基 - 吡啶 -3- 基， 吡唑 -4- 基， 或下式的吗啉 -4- 基 ：;(d) (e) (f) (g) (h) (i) (j) (k) (l)R2 是氨基， 二甲基氨基， 吡唑 -4- 基， 或吗啉 -4- 基 ； 2 R 是吡唑 -4- 基 ； R1 是甲基， 且 R2 是吡唑 -4- 基 ； R3 是 F ； R1 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基， 且 R3 是 F ； R4 是 H、 甲基或吗啉 -4- 基甲基 ； 4 R 是H； 1 R 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基， R3 是 F， 且 R4 是 H ； R5 是 H ；(m) (n) (o) (p) (q) (r) (s) (t) 及 (u)R5 是 F ； R1 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基， R3 是 F， R4 是 H， 且 R5 是 H ； R1 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基，R3 是 F， R4 是 H， 且 R5 是 F ； X 是 CH=CH 或 CH=C(CH3) ； R1 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基， R3 是 F， R4 是 H， R5 是 H， 且 X 是 CH=CH 或 CH=C(CH3) ； 1 2 3 4 5 R 是甲基， R 是吡唑 -4- 基， R 是 F， R 是 H， R 是 F， 且 X 是 CH=CH 或 CH=C(CH3) ； 1 2 3 4 5 R 是甲基， R 是吡唑 -4- 基， R 是 F， R 是 H， R 是 H 或 F， 且 X 是 CH=C(CH3) ； 1 2 3 4 5 R 是甲基， R 是吡唑 -4- 基， R 是 F， R 是 H， R 是 H， 且 X 是 CH=C(CH3) ； 以R1 是甲基， R2 是吡唑 -4- 基， R3 是 F， R4 是 H， R5 是 F， 且 X 是 CH=C(CH3)。
     本发明的化合物能够根据下面的合成反应路线通过本领域公知且完全了解的方 法来制备。这些反应路线的步骤的适合的反应条件是本领域中公知的， 并且溶剂和共反应 剂的适当替代是在本领域技术人员的能力范围内。 同样地， 本领域技术人员将体会到， 合成 中间体根据需要可以通过各种公知技术来分离和 / 或提纯， 且常常可以在后续合成步骤中 直接使用各种中间体， 几乎不用提纯或不用提纯。 而且， 技术人员将体会到， 在一些情况下， 结构部分引入的顺序不是关键性的。 制备本发明的化合物所需的特定步骤次序取决于所要 合成的特定化合物、 起始化合物以及取代结构部分的相对倾向性， 这是熟练化学工作者所 充分领会的。除非另有说明， 所有取代基如前面所定义， 且所有试剂在本领域中是公知的。 本发明的化合物可以如在以下反应路线 I 中所示那样合成， 其中 X、 R3、 R4 和 R5 如 以上所定义， 且 R1’和 R2’ 等于 R1 和 R2 或是 R1 和 R2 的前体。
     反应路线 I
     本发明的化合物可以通过本领域技术人员公知的标准肽偶联条件来制备。 适当取代的 式 (a) 的吲唑苯胺与式 (b) 的酸化合物在肽偶联试剂如 1-(3- 二甲基氨基丙基 )-3- 乙基 碳二亚胺盐酸盐 (EDCI)、 1- 羟基苯并三唑水合物 (HOBt)、 适当的碱如 N- 甲基吗啉、 N,N- 二 异丙基乙胺 (DIPEA) 或三乙胺 (TEA) 的存在下， 在适合的溶剂如二氯甲烷 (DCM)、 N,N- 二甲 基甲酰胺 (DMF) 或四氢呋喃 (THF) 中反应， 从而获得所需的本发明的酰胺。如果 R1' 是适 合的氮保护基如四氢吡喃 (THP)， 或者如果 R2' 是用氮保护基保护的官能团， 则需要脱保护 步骤来获得所需的本发明的化合物。
     反应路线 II式 (a) 的化合物能够如反应路线 II 中所示那样制备， 其中 R1’ 、 R2’ 和 R3 如以上所定义。
     式 (f) 的化合物可以与适当取代的式 (g) 的化合物在高温下在适合的碱如碳酸氢 钠的存在下在适当的溶剂例如 DMF 中反应， 从而获得式 (e) 的化合物。 式 (e) 的化合物可以 用适当的甲基化试剂如甲基碘在适合的溶剂例如 THF 与适合的碱例如叔丁醇钾中甲基化， 从而获得式 (d) 的化合物， 其中 R1' 是甲基。式 (e) 的化合物还可以用适合的保护试剂例如 2,3- 二氢吡喃 (DHP) 在适当的溶剂例如 THF 中， 在酸例如 CH3SO3H 的存在下保护， 从而获得 1' 式 (d) 的化合物， 其中 R 是保护基例如 2- 四氢吡喃基。[ 引入或除去保护基的方法在本 领域中是公知的 ； 例如参见 Greene 和 Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第 3 版 , John Wiley and Sons, New York, (1999)]。
     式 (d) 的化合物能够在各种过渡金属促进的偶联条件下反应， 从而提供具有如以 2' 上所定义的适当取代的 R 的所需式 (c) 的化合物。更具体地说， 如果它是碳 - 碳偶联， 式 (c) 的化合物能够在诸如苏楚基偶联之类的偶联条件下用适合的硼酸、 适当的催化剂例如 1,1'- 双 ( 二苯基膦基 ) 二茂铁氯化钯 (II)(PdCl2(dppf)) 和适当的碱例如 CsF 在适合的 溶剂例如 1,4- 二 烷中在高温下来制备。如果它是碳 - 氮偶联， 式 (c) 的化合物能够在诸 如 Buchwald-Hartwig 偶联之类的偶联条件下用适当的含氮的反应剂例如吗啉、 适合的配 体如 2- 二叔丁基膦基 -2'- 甲基联苯、 碱如 KOH 和催化剂如三 ( 二苄叉基丙酮 )- 二钯 (0) (pd2(dba)3) 在适当的溶剂如叔丁醇中在高温下来制备。 偶联反应可以在普通加热条件下或 在本领域技术人员公知的微波反应条件下进行。
     式 (c) 的化合物能够在本领域技术人员公知的各种还原条件下还原为氨基化合 物。更具体地说， 式 (c) 化合物可以与氯化亚锡在适合的溶剂如乙酸乙酯 (EtOAc) / 乙醇 (EtOH) 中在高温下反应， 从而得到所需的式 (a) 的化合物。如果 R1' 是氮保护基如 2- 四氢 吡喃基， 保护基将被分裂。R1' 在还原之后将是质子。
     式 (c) 的化合物还可以通过与 N,N- 二甲肼和 FeCl3 在适当的溶剂如甲醇 (MeOH) 中反应或与 H2/ 钯碳 (Pd/C) 在适当的溶剂比如 EtOH 中反应来还原。两种还原条件仅仅将硝基还原为氨基， 而氮保护基 R1' 保持不变。
     技术人员公知的是， 在一些含氮杂环如吲唑化合物的氮上的反应可以产生互变异 构体。互变异构体的比率基本上取决于进行反应的模式和不同的条件。具有氮保护基如 THP 的本发明中公开的中间体可以作为区域异构体存在。在本发明的化合物中， 当 R1 是质 子时， 它可以作为如反应路线 III 中所示的一对快速交换的互变异构体存在。
     反应路线 III以下制备例和实施例使用 ChemDraw® Ultra version 10.0 来命名。
     制备例 1N -(4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 乙酰胺向 4- 甲氧基 -2- 甲基苯胺 (120 g， 0.88 mol) 在 DCM (400 mL) 中的溶液中滴加乙酸 酐 (120 mL， 1.2 mol)。将该反应混合物在室温 (RT) 下搅拌 3 小时。在添加石油醚 (PE) (1.6 L) 之后， 将该淤浆搅拌另外 1 小时。通过过滤来收集沉淀， 并用 PE 洗涤， 获得作为粉 红色固体的产物 (130 g， 82% 收率 )。MS (m/z ): 180.0 (M+H)。
     制备例 2 N- (5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 乙酰胺 在 0℃下， 向 N-(4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 乙酰胺 (130 g， 0.73 mol) 在乙酸 (800 mL) 中的溶液中滴加溴 (42 mL， 0.8 mol)。 在添加之后， 将所得混合物在室温下搅拌过夜。 添加 饱和 NaHSO3 水溶液， 直到获得透明溶液为止， 然后添加大量的水 (2.0 L)， 形成了沉淀。收 集沉淀的固体， 用水洗涤， 获得粗产物 ( 薄层色谱法 (TLC) 溶剂 ： DCM:EtOAc = 10:1)。将该 固体溶于最低量的回流 DCM 中， 然后添加 PE ( 所使用的 DCM 的约 10-20 体积 %)。将所得溶 液冷却至室温。在 2 小时之后， 收集沉淀的固体， 用 PE 洗涤， 得到白色产物 (108 g， 57% 收 率 )。MS (m/z ): 260.0 (M+H)。
     制备例 3 5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯胺 向 N-(5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 乙酰胺 (108 g， 0.42 mol) 在 MeOH (400 mL) 中的溶液中添加浓 HCl (160 mL， 2 mol)。在回流下加热过夜之后， 该混合物用 NaHCO3 水溶 液中和， 再用 EtOAc (1200 mL) 萃取。将有机相干燥， 再浓缩， 获得产物 (76 g， 84% 收率 )。 MS (m/z ): 216.0 (M+H)。
     制备例 4 1-(5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 四氟硼酸重氮盐 在 0℃下， 向 5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯胺 (76 g， 0.35 mol) 在 HBF4(48wt%， 140 mL) 和 H2O (280 mL) 中的溶液中添加 NaNO2 (27.6 g， 0.4 mol) 在 H2O (60 mL) 中的溶液。在添加完之后， 将反应混合物在 0℃下搅拌 30 分钟 (min)。将沉淀过滤， 用少量的冰水洗涤几 次， 再干燥， 获得产物 (110 g， 99% 收率 )。MS (m/z ): 229.0 (M+H)。
     制备例 5 6- 溴 -5- 甲氧基 -1H - 吲唑 将 1-(5- 溴 -4- 甲氧基 -2- 甲基苯基 ) 四氟硼酸重氮盐 (110 g， 0.35 mol) 一次性添 加到 KOAc (140.5 g， 1.43 mol) 和 18- 冠 -6- 醚 (9.3 g， 0.035 mol) 在 CHCl3 (800 mL) 中 的搅拌混合物中， 并在室温下搅拌过夜。将该混合物过滤， 固体用 DCM 洗涤。将合并的滤液 浓缩， 残留物通过硅胶柱色谱法 (DCM:MeOH = 50:1) 来提纯， 得到产物 (10 g)。 将滤饼加入 到 THF (1600 mL) 中， 并将该混合物在室温下搅拌 1 小时。将该混合物过滤， 将滤液浓缩， 得到 10 g 的粗产物 ( 总收率 88%)。MS (m/z ): 229.0 (M+H)。
     制备例 6 6- 溴 -5- 羟基 -1H- 吲唑 在 0 ℃下， 向 6- 溴 -5- 甲氧基 -1H- 吲唑 (60 g， 0.265 mol) 在 DCM (1300 mL) 中的 溶液中添加 BBr3 (105 g， 0.42 mol) 在 DCM (200 mL) 中的溶液。将该反应混合物加热至 室温， 并搅拌过夜。然后， 将反应溶液在 0 ℃下用 MeOH 猝灭。在真空中除去溶剂， 残留物 用 NaHCO3 固体中和。将该混合物在水 (1500 mL) 和 EtOAc (1500 mL) 之间分配。水层用 EtOAc(1500 mL) 萃取两次。将合并的有机层干燥， 浓缩， 获得粗产物， 该粗产物通过硅胶柱 色谱法 (PE:THF = 2:1) 来提纯， 从而得到所需产物 (42.5 g， 75% 收率 )。 MS (m/z ): 215.0 (M+H)。
     制备例 7 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 将 6- 溴 -5- 羟基 -1H- 吲唑 (7.0 g， 33.0 mmol)、 3,4- 二氟硝基苯 (4.98 mg， 31.0 mmol)、 NaHCO3 (2.5 g， 31.0 mmol) 在 DMF (100 mL) 中的混合物在 80℃下搅拌 4 小时。然 后， 添加 LiCl (10% 水溶液 )， 该溶液用 EtOAc 萃取。将有机相用无水 MgSO4 干燥， 过滤， 再 浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:DCM(1:1) 洗脱， 得到所需产物 (5.5 g， 46.6% 收率 )。MS (m/z ): 354.0 (M+H)。
     基本上通过制备例 7 的方法制备以下化合物 ：。制备例 9 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 向 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 (5.0 g， 14.2 mmol) 在 THF (50 mL) 中 的溶液中添加 DHP(2.4 g， 28.5 mmol) 和 CH3SO3H(1.0 g， 10.4 mmol)。将所得混合物在室 温下搅拌 1 小时。然后， 添加 EtOAc 和 NaHCO3 水溶液。分离有机相， 用无水 MgSO4 干燥， 过 滤， 再浓缩。 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(5:1) 洗脱， 得到所需产物 (5.5 g，
     89.0% 收率 )。MS (m/z ): 436.0 (M+H)。
     基本上通过制备例 9 的方法制备以下化合物 ：。
     制备例 11 6- 溴 -1- 甲基 -5-(4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 向用冰水浴冷却的 6- 溴 -5-(4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 (2.68 g， 8.02 mmol) 和 KOH (600 mg， 10.69 mmol) 在丙酮 (100 mL) 中的混合物中滴加甲基碘 (0.55 mL， 8.83 mmol)。 在将反应混合物在 0℃下搅拌 2 小时之后， 将它在室温下搅拌过夜。除去溶剂， 残留物通过 硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗脱， 获得产物 (1.50 g， 53.7% 收率 )。MS (m/z ):348.0 (M+H)。
     基本上通过制备例 11 的方法制备以下化合物 ：。或者， 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 ( 制备例 12) 还可以用 以下三步方法来制备 ： 将 2,4- 二溴 -5- 羟基 - 苯甲醛 (50 g， 178.6 mmol)、 1,2- 二氟 -4- 硝基苯 (28.4 g， 178.6 mmol) 和碳酸钾 (49.0 g， 357.2 mmol) 在 DMF (500 mL) 中在 60℃下搅拌 2 小时。 该 反应用水 (1000 mL) 猝灭， 再用甲基叔丁基醚 (MTBE) (2×500 mL) 萃取。有机层用饱和 氯化钠水溶液 (2×500 mL) 洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 再浓缩， 获得黄色固体。将粗固体在 EtOAc/PE(1:5) 中再结晶， 得到黄色固体状的 2,4- 二溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 ) 苯甲醛 (52.8 g， 70.6% 收率 )。
     将 2,4- 二 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 ) 苯 甲 醛 (13.0 g， 31.0 mmol) 与 甲 肼 (4.3 g， 93 mmol) 在 THF (130 mL) 中回流 2 小时。该反应用水 (150 mL) 猝灭， 再用 MTBE(2×150 mL) 萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液 (2×150 mL) 洗涤， 用无水硫酸钠干 燥， 再浓缩， 获得固体。 将该粗固体在 EtOAc / 己烷中再结晶， 获得黄色固体状的 1-(2,4- 二 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 ) 苄叉基 )-2- 甲肼 (10.6 g， 76.7% 收率 )。MS (m/z ): 447.9 (M+H)。
     在氮气下， 将 1-(2,4- 二溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 ) 苄叉基 )-2- 甲肼 (1.0 g，
     2.2 mmol)、 氯化亚铜 (22 mg， 0.2 mmol)、 碳酸钾 (0.638 g， 7.2 mmol)、 DMF (10 mL) 和搅拌 棒在压力管中合并。将盖密封， 将管放置在搅拌的油浴中。经 30 分钟将该浴加热至 100℃， 并在 100℃下保持 6 小时， 然后冷却至室温。 将该反应混合物倒入含有 MTBE(10ml) 和水 (10 mL) 的分液漏斗中。分离各层， 水层用附加部分的 MTBE(10mL) 萃取。将各有机层合并， 用水 洗涤， 随后用饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机层用硫酸镁干燥， 浓缩， 获得 0.70g 的粗产物。 将该粗固体溶于 DCM 和庚烷中， 然后浓缩， 以除去 DCM， 形成浆料。通过过滤来收集产物， 在 真空下干燥， 获得作为固体的 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 (0.65 g， 79% 收率 )。MS (m/z ): 367.8 (M+H)。
     制备例 13 6- 溴 -2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -5- 醇 在室温下， 向 6- 溴 -5- 羟基 -1H- 吲唑 (725.0 g， 3.4 mol) 在 THF (10.2 L) 中的溶液 中添加 DHP(336.5 mL， 3.57 mol) 和 CH3SO3H (65.4 g， 0.68 mol)。将所得混合物在室温下 搅拌 22 小时。反应混合物用蒸馏水 (6 L) 猝灭， 再用 EtOAc (6 L) 萃取。添加饱和 NaHCO3 水溶液 (1100 mL)， 以便将 pH 调节至 8。在相分离以后， 有机相先后用水 (4 L) 和饱和氯 化钠水溶液 (3 L) 洗涤， 用无水 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩， 得到作为固体的产物 (1.64 kg， 99.3% 收率 )。MS (m/z ): 299.0 (M+H)。 制备例 14 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 在室温下， 向 6- 溴 -2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -5- 醇 (1.475 kg， 4.96 mol) 在 DMF (5.3 L) 中的溶液中添加 3,4- 二氟硝基苯 (1.18 kg， 7.45 mol) 和 NaHCO3 (625.5 g， 7.45 mol)。将反应混合物在 70℃下加热 10 小时， 然后冷却到低于 20℃。将去离子 (DI) 水 (7.9 L) 慢慢地加入到该溶液中， 并将所得浆料在 15℃下搅拌 1 小时。通过真空过滤收 集固体， 固体滤饼用水 (8 L) 洗涤。然后将它在真空下在过滤器上风干， 用甲基 MTBE(18.6 L) 在回流条件下研制 2 小时。然后将该浆料冷却至室温， 固体通过真空过滤来收集。固体 滤饼用 MTBE(4 L×2) 洗涤， 在真空烘箱中在 35℃下干燥， 获得所需产物 (1.405 kg， 64.9% 收率 )。MS (m/z ): 436.0 (M+H)。
     制备例 15 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-6-( 吡啶 -4- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 将 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (5.0 g， 11.5 mmol)、 4- 吡啶硼酸 (3.0 g， 24.3 mmol)、 PdCl2(dppf) (1.8 g， 2.25 mmol) 和 CsF(5.0 g， 33.0 mmol) 在 1,4- 二 烷 (100 mL) 中的混合物在 110℃下搅拌过夜。然后， 添加 NH4Cl 水溶液和 EtOAc。分离有机相， 用无水 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗脱， 得到所需产物 (2.8 g， 56% 收率 )。MS (m/z ): 435.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 15 的方法制备以下化合物 ：
     *: 反应在微波条件下在 95℃下进行约 90 分钟。
     制备例 28 6-(2,6- 二甲基吡啶 -4- 基 )-5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢吡喃 -2- 基 )-1H- 吲 在氮气下， 向 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (1.3112唑102105462 A CN 102105465说明书10/49 页g， 3.0 mmol) 在 1,4- 二 烷 (20 mL) 中的溶液中添加联硼酸频那醇酯 (0.91 g， 3.6 mmol)， Pd2(dba)3 (0.14 g， 0.2 mmol)、 三环己基膦 (0.1 g， 0.4 mmol)、 乙酸钾 (KOAc) (0.59 g， 6.0 mmol)。在氮气下将反应混合物加热回流 3 小时之后， 将它冷却至室温。在氮气下， 添 加 4- 溴 -2,6- 二甲基吡啶氢溴酸盐 (0.8 g， 3.0 mmol)、 PdCl2(dppf) (0.16 g， 0.2 mmol)、 CsF(1.38 g， 9.0 mmol)。将所得混合物在氮气下回流加热过夜。滤出固体， 并将滤液浓缩。 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc (5:1 到 1:1) 洗脱， 得到产物 (0.67 g， 48.3% 收率 )。MS (m/z ): 463.1 (M+H)。
     制备例 29 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吗啉 在氮气下， 向 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基 - 苯氧基 )-1-( 四氢吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (8.0 g， 18 mmol) 在叔丁醇 (150 mL) 和 H2O (3.2 mL) 中的溶液中添加 Pd2 (dba)3 (320 mg， 0.35 mmol)、 2- 二 - 叔丁基膦基 -2'- 甲基联苯 (480 mg， 1.54 mmol)、 KOH (3.2 g， 57 mmol) 和 吗啉 (3.2 g， 36.7 mmol)。在将该混合物在 70℃下在氮气氛围下搅拌 2 小时之后， 将它过 滤， 再将滤液浓缩。将残留物在 EtOAc (100 mL) 与饱和 NH4Cl 水溶液 (30 mL) 之间分配。 分离有机层， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗 脱， 得到产物 (4.5 g， 56.5% 收率 )。MS (m/z ): 443.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 29 的方法制备以下化合物 ：。制备例 32 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -6- 基 )-2- 甲基 吗啉 ( 外消旋 ) 在 25 mL 微 波 管 形 瓶 内 添 加 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-2-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 (0.8 g， 1.8 mmol)、 4,5- 双 ( 二苯基膦基 )-9,9- 二甲基呫吨 (98 mg， 165 μmol) 和 Pd2(dba)3 (50 mg， 55 μmol)。将该混合物悬浮于甲苯 (12 mL， 113 mmol) 中， 然后添加 2- 甲基吗啉盐酸盐 (278 mg， 2.02 mmol) 和叔丁醇钠 (454 mg， 4.58 mmol)。 将反应混合物在微波反应器中在 150℃下加热 25 分钟。然后将反应混合物浓缩， 残留物上 硅胶柱提纯， 用己烷 (A) 和 EtOAc (B) 洗脱， 梯度经 60 分钟从 90% (A) :10% (B) 到 60%
     (A) :40% (B)， 然后到 50% (A) :50% (B)， 20 分钟， 得到作为所需产物的橙色固体 (410 mg， 39% 收率 )。MS (m/z ): 457 (M+H)。
     基本上通过制备例 32 的方法制备以下化合物 ：。制备例 35 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -6- 基 )-2,2- 二 甲基吗啉 将 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 (1.5 g， 3.4 mmol) 加入到 50 mL Genevac Carousel® 管内， 再悬浮到水合戊烯 (10 mL， 91.4 mmol) 中， 并将 N2 鼓泡到悬浮液中。向该混合物中添加 2-( 二 - 叔丁基膦基 )-2'- 甲基联苯 (97.7 mg， 309 μmol)、 Pd2(dba)3 (94.5 mg， 103 μmol) 和去离子水 (0.3 mL)， 并继续 N2 鼓泡 10 分钟。向该混合物中添加 2,2- 二甲基吗啉盐酸盐 (1.04 g， 6.9 mmol) 和 KOH (617 mg， 11.0 mmol) 溶于 0.3 mL 的蒸馏水的溶液。将反应混合物在 80℃下加热 2 小时， 然后冷却 至室温。然后将该混合物倒入 EtOAc (300 mL) 中， 先后用蒸馏水 (1×100 mL) 和饱和氯化 钠水溶液 (100 mL) 洗涤。合并的水层用 EtOAc(100 mL) 萃取。合并的有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩至干燥， 得到金色的固体。固体上硅胶柱提纯， 用己烷 (A) 和 EtOAc (B) 洗脱， 梯度经 70 分钟从 95% (A) :5% (B) 到 75% (A) :25% (B)， 得到作为所需产物的浅黄 色固体 (410 mg， 25% 收率 )。MS (m/z ): 470.8 (M+H)。
     制备例 36 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-6-( 吡啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-6-( 吡啶 -4- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 (2.8 g， 6.45 mmol) 在 EtOH (30 mL) 中的溶液中添加 HCl ( 浓， 5.0 mL)。将混合物在 80℃下搅拌 2 小时。然后， 添加 NaHCO3 水溶液和 EtOAc。将有机相用无水 MgSO4 干燥， 再浓 缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗脱， 得到所需产物 (1.95 g， 86.0% 收率 )。MS (m/z ): 351.0 (M+H)。
     制备例 37 3- 氟 -4-(6-( 吡啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯胺 将 5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-6-( 吡 啶 -4- 基 )-1H- 吲 唑 (1.95 g， 4.5 mmol) 和 SnCl2·2H2O (10.2 g， 45.3 mmol) 在 EtOAc/EtOH(200 ml/10 mL) 中的混合物在 80℃下搅
     拌 2 小时。然后， 添加 NaHCO3 水溶液和 EtOAc。将有机相用无水 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留 物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(2:1) 洗脱， 得到所需产物 (1.10 g， 61.0% 收率 )。 MS (m/z ): 321.0 (M+H)。
     制备例 38 3- 氟 -4-(6-(4-( 甲基磺酰基 ) 苯基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧 基 ) 苯胺 向 5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-6-(4-( 甲 基 磺 酰 基 ) 苯 基 )-1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (320 mg， 0.63 mmol) 在 EtOAc (50 mL) 中的溶液中添加 Pd/C (10%， 100 mg)。 所得混合物通过抽空来脱气， 并用 H2 回填三次。 将它在 H2 气氛下在室温下搅拌过 夜。 通过过滤除去固体， 并将滤液浓缩。 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(20:1) 洗脱， 得到所需产物 (250 mg， 83% 收率 )。MS (m/z ): 482.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 38 的方法制备以下化合物 ：。制备例 41 4-(6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯胺 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1-( 四氢吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (900 mg， 2.13 mmol) 和 4-[ 5-(2- 氟 -4- 硝基 - 苯氧基 )-1-( 四氢吡喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 -6- 基 ]- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (3.1 g， 5.92 mmol) 在 EtOAc/EtOH (75 mL/75 mL) 中的 溶液中添加氯化亚锡二水合物 (10 g， 52.74 mmol)。将该反应混合物在回流下搅拌过夜。 在将其冷却并用饱和 NaHCO3 水溶液碱化至 pH 8-9 之后， 该混合物用 EtOAc (100 mL) 萃取。 分离有机相， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 首先用 PE:EtOAc (1:1) 洗脱， 然后用 EtOAc 洗脱， 得到产物 (1.75 g， 71.0% 收率 )。MS (m/z ): 310.0 (M+H)。
     基本上通过制备例 41 的方法制备以下化合物 ：
     。制备例 53 4-(6- 环丙基 -2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯胺 向 25 mL 玻璃管形瓶中添加 6- 环丙基 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2-( 四氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 (395 mg， 994 μmol) 和 MeOH (20 mL， 494 mmol)。向该悬浮液中添加 N,N- 二甲肼 (756 μL， 9.94 mmol) 和 FeCl3(163 mg， 994 μmol)。将该管形瓶盖上盖， 再 加热到 60℃， 搅拌 2 小时， 然后在 50℃搅拌过夜。 将该混合物用布氏漏斗过滤， 固体用 MeOH (100 mL) 洗涤。将滤液收集和浓缩， 得到棕色 / 橙色固体。残留物上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度经 50 分钟从 100% (A) 到 85% (A):15% (B)， 得 到作为标题化合物的黄色固体 (358 mg， 98% 收率 )。MS (m/z ): 368 (M+H)。
     基本上通过制备例 53 的方法制备以下化合物 ：
     。制备例 59 N-( 二苯基亚甲基 )-5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 胺 向 10 mL 微波管形瓶中添加 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 (500 mg， 1.37 mmol)、 4,5- 双 ( 二苯基膦基 )-9,9- 二甲基呫吨 (73 mg， 123 μmol) 和 Pd2(dba)3 (38 mg， 41 μmol)。将该混合物悬浮于甲苯 (5 mL， 47 mmol) 中， 然后添加二苯甲酮亚胺 (272 mg， 1.5 mmol) 和叔丁醇钠 (203 mg， 2.05 mmol)。 将该混合物在微波反应器中在 150℃ 下加热 20 分钟。 在冷却之后， 将反应溶液浓缩， 得到棕色油， 将该棕色油溶于 DCM (150 mL) 中， 并用饱和氯化钠水溶液 (2×50 mL) 洗涤。将水层合并， 并用 DCM (1×50 mL) 萃取， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩， 得到棕色残留物。 将该残留物上硅胶柱提纯， 用己烷 (A) 和 EtOAc (B) 洗脱， 梯度经 50 分钟从 85% (A):15% (B) 到 50% (A):50% (B)， 获得作为标题化合物的 黄色固体材料 (574 mg， 90.1% 收率 )。MS (m/z ): 467.2 (M+H)。
     制备例 60 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-N- 二苯甲基 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 胺 在 100 mL 圆底烧瓶内添加 N-( 二苯基亚甲基 )-5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲 基 -1H- 吲唑 -6- 胺 (424 mg， 909 μmol) 和 EtOH (35 mL， 601 mmol)。向该混合物中添加 甲酸铵 (1000 mg， 15.9 mmol)， 随后添加 10% Pd/C(300 mg， 141 μmol)， 再将反应混合物在 室温下搅拌 1 小时， 在 45℃下加热 15 分钟。除去溶剂， 将残留物溶于 DCM (150 mL) 和蒸 馏水 (100 mL) 中。有机层用蒸馏水 (1×100 mL) 洗涤， 且合并的水层用 DCM (1×50 mL) 萃取。将合并的有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩。将该粗产物上硅胶柱提纯， 用己烷 (A) 和 EtOAc (B) 洗脱， 梯度经 90 分钟从 90% (A):10% (B) 到 40% (A):60% (B)， 获得作为 标题化合物的灰白色的固体材料 (204 mg， 51% 收率 )。MS (m/z ): 438.8 (M+H)。
     制备例 61
     乙酸 -1- 乙酰基 -6- 溴 -1H- 吲唑 -5- 基酯 将 6- 溴 -5- 羟基 -1H- 吲唑 (25 g， 117 mmol) 在乙酸酐 (75 mL) 中的混合物在 110℃ 下搅拌 2 小时。在将其冷却之后， 添加乙醚 (100 mL)。通过过滤收集沉淀， 用乙醚 (30 mL) 洗涤， 在真空下干燥， 获得产物 (34 g， 98% 收率 )。MS (m/z ): 297.0 (M+H)。
     制备例 62 5- 羟基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 在高压釜中添加乙酸 -1- 乙酰基 -6- 溴 -1H- 吲唑 -5- 基酯 (25 g， 84 mmol)、 TEA(25 g， 252 mmol)、 二氯双 ( 苄腈 ) 合钯 (PD (PhCN)2Cl2) (1.6 g， 4.2 mmol)、 1,1’ - 双 ( 二苯 基膦基 ) 二茂铁 (dppf) (4.7 g， 8.4 mmol) 和 EtOH (500 mL)， 在 130℃下在 CO 气氛下搅 拌 8 小时。将反应混合物浓缩， 通过硅胶柱色谱法将残留物提纯， 获得产物 (15.5 g， 90% 收 率 )。MS (m/z ): 207.0 (M+H)。
     制备例 63 5- 羟基 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 在室温下， 向含有甲磺酸 (721 mg， 7.5 mmol) 的 5- 羟基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 (15.5 g， 75 mmol) 在 DCM (100 mL) 和 THF (100 mL) 中的溶液中滴加 3,4- 二氢 -2H- 吡喃 (6.6 g， 79 mmol) 在 DCM (20 mL) 中的溶液。 将所得溶液在室温下搅拌过夜。 在除去溶剂之后， 添 加 EtOAc (500 mL)、 饱和氯化钠水溶液 (500 mL) 和 NaHCO3 (5 g)。分离有机层， 干燥， 再浓 缩。将残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 获得该产物 (16.8 g， 77% 收率 )。MS (m/z ): 291.1 (M+H)。
     制备例 64 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 将 5- 羟基 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 (10.8 g， 37 mmol)、 1,2- 二氟 -4- 硝基苯 (7.1 g， 44 mmol)、 NaHCO3 (7.4 g， 88 mmol) 和 DMF (100 mL) 的混合 物在 80℃下搅拌 2 小时。在将其冷却到室温之后， 添加水 (400 mL) 和 PE (50 mL)， 并将该 混合物搅拌 20 分钟。收集沉淀， 并在真空下在 50℃干燥， 获得产物 (15 g， 95% 收率 )。MS (m/z ): 430.1 (M+H)。
     制备例 65 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 (22 g， 51.2 mmol) 在 THF (60 mL) 和 MeOH (60 mL) 和 H2O (10 mL) 中的溶液中添加 LiOH (3 g， 125 mmol)。将所得溶液在室温下搅拌 1.5 小时， 除去有机溶剂。含水残留物用冷 6N HCl 酸化至 pH 2， 用 EtOAc (150 mL) 萃取。分离有机相， 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱 法提纯， 用 PE:EtOAc: 乙酸 (100:100:1) 洗脱， 获得产物 (19.5 g， 95% 收率 )。MS (m/z ): 402.1 (M+H)。
     制备例 66 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁 酯 将 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸 (590 mg， 1.47 mmol)、 叠氮化磷酸二苯酯 (485 mg， 1.76 mmol)， TEA(179 mg， 1.76 mmol)、 4Å 分子筛(3 g) 在叔丁醇 (40 mL) 中的混合物在 80℃下搅拌过夜。 将混合物过滤， 并将滤液浓缩。 残 留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE/EtOAc(10:1) 洗脱， 得到所需产物 (400 mg， 65% 收率 )。 MS (m/z ): 473.1 (M+H)。
     制备例 67 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁 酯 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸 叔丁酯 (400 mg， 0.85 mmol) 在 EtOAc (50 mL) 中的溶液中添加 Pd/C (10%， 50 mg)。所得 混合物通过抽真空来脱气， 并用 H2 回填三次。将该混合物在 H2 气氛下在室温下搅拌过夜。 通过过滤除去固体， 并将滤液浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(10:1) 洗 脱， 得到所需产物 (300 mg， 80% 收率 )。MS (m/z ): 443.2 (M+H)。
     制备例 68 5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酰胺 将 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸 (0.5 g， 1.25 mmol)、 四氢吡喃 -4- 基胺 (0.13 g， 1.25 mmol)， EDCI (0.24 g， 1.25 mmol)、 HOBT(0.17 g， 1.25 mmol)、 N- 甲基吗啉 (0.5 mL) 在 DMF (5 mL) 中的溶液在室温下搅拌过夜。然后将 该反应混合物在饱和 NH4Cl 水溶液 (20 mL) 和 EtOAc (50 mL) 之间分配。分离有机相， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(1:1) 洗脱， 获得了产物 (0.49 g， 81.2% 收率 )。MS (m/z ): 485.1 (M+H)。
     制备例 69 5-(4- 氨 基 -2- 氟 苯 氧 基 )-1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酰胺 在 N2 下， 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-N-( 四氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酰胺 (0.49 g， 1.0 mmol) 在 MeOH (50 mL) 中的溶液中添加 Pd/ C (100 mg， 10wt%)。所得混合物通过抽空来脱气， 并用氮气回填。然后， 将该反应混合物 在 H2 气氛下在室温下搅拌过夜。通过过滤除去固体， 并将滤液浓缩， 得到粗产物 (0.42 g， 91.4% 收率 )。MS (m/z ): 455.1 (M+H)。
     制备例 70 5-( 苄氧基 )-6- 溴 -1H- 吲唑 向 6- 溴 -5- 羟基 -1H- 吲唑 (5 g， 23.5 mmol) 在 THF (50 mL) 中的溶液中添加苄 醇 (3.05 g， 28.2 mmol)、 PPh3(7.39 g， 28.2 mmol) 和偶氮二甲酸二乙酯 (4.46 mL， 28.2 mmol)。在将反应混合物在室温下搅拌过夜之后， 添加 EtOAc (50 mL) 和饱和 NH4Cl 水 溶液 (30 mL)。分离有机相， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(4:1) 洗脱， 获得了产物 (5.0 g， 70.2% 收率 )。MS (m/z ): 303.0 (M+H)。
     制备例 71 5-( 苄氧基 )-6- 溴 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 向 5-( 苄氧基 )-6- 溴 -1H- 吲唑 (5 g， 16.5 mmol) 在 THF (30 mL) 和 DCM (30 mL) 中 的溶液中添加 3,4- 二氢 -2H- 吡喃 (3 mL， 32.8 mmol) 和甲磺酸 (1 mL， 15.3 mmol)。在将反应混合物在室温下搅拌 2 小时之后， 添加 EtOAc (50 mL) 和饱和 NaHCO3 水溶液。分离有 机相， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(4:1) 洗脱， 得到 所需产物 (2.7 g， 42.2% 收率 )。MS (m/z ): 387.0 (M+H)。
     制备例 72 5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-N-( 四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 )-1H- 吲唑 -6- 胺 在 N2 下， 向 5-( 苄氧基 )-6- 溴 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (2 g， 5.16 mmol) 在甲苯 (30 mL) 中的溶液中添加四氢吡喃 -4- 基胺 (800 mg， 7.91 mmol)、 乙酸钯 (60 mg， 267 μmol)、 2- 二环己基膦基 -2'-(N,N- 二甲基氨基 ) 联苯 (200 mg， 508 mol) 和叔丁醇钠 (700 mg， 7.28 mmol)。将该反应在 100℃和氮气下搅拌 1 小时之后， 添加 EtOAc (30 mL)， 并将反应混合物过滤。 将滤液浓缩， 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 首先用 EtOAc:PE (1/1) 洗脱， 然后用 EtOAc 洗脱， 得到所需产物 (1.87 g， 88.8% 收率 )。MS (m/z ): 408.2 (M+H)。
     制备例 73 N-(5-( 苄 氧 基 )-1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 -6- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 ) 乙酰胺 向 5-( 苄 氧 基 )-1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 )-1H- 吲 唑 -6- 胺 (1.87 g， 4.59 mmol) 在 THF (30 mL) 中的溶液中添加乙酰氯 (0.39 mL， 5.48 mmol) 和 K2CO3 (760 mg， 5.50 mmol)。在将反应混合物回流加热 30 分钟之后， 添加 H2O (20 mL) 和 EtOAc (30 mL)。 分离有机相， 用饱和 NH4Cl 水溶液洗涤， 干燥， 再浓缩， 得到产物 (1.7 g， 82.4% 收率 )。MS (m/z ): 450.2 (M+H)。
     制备例 74 N-(5- 羟基 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 )-N-( 四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酰胺 向 N-(5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 )-N-( 四氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 ) 乙酰胺 (1.7 g， 3.78 mmol) 在 EtOH (100 mL) 和 EtOAc (100 mL) 中的溶液中 添加 Pd/C (1 g， 10wt%)。 在将反应混合物在室温和氢气下搅拌过夜之后， 将它过滤， 并将滤 液浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 首先用 PE:EtOAc (1:1) 洗脱， 然后用 EtOAc 洗脱， 得到产物 (1.2 g， 88.2% 收率 )。MS (m/z ): 360.2 (M+H)。
     制备例 75 N-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酰胺 向 N-(5- 羟 基 -1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 -6- 基 )-N-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 ) 乙酰胺 (1.2 g， 3.34 mmol) 在 DMF (30 mL) 中的溶液中添加 1,2- 二氟 -4- 硝 基苯 (0.64 g， 4.02 mmol) 和 Cs2CO3(1.63 g， 5.00 mmol)。在将反应混合物在 100℃下搅拌 2 小时之后， 添加 EtOAc (60 mL) 和饱和 NH4Cl 水溶液。 分离有机相， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 首先用 PE:EtOAc (1:1) 洗脱， 然后用 EtOAc 洗脱， 得到产物 (1.44 g， 86.5% 收率 )。MS (m/z ): 499.2 (M+H)。
     制备例 76 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-N-( 四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 )-1H- 吲唑 -6- 胺 基本上通过制备例 41 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 343.1 (M+H)。制备例 77 5-( 苄氧基 )-6-(6- 甲基吡啶 -3- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 在 N2 下， 向 5-( 苄氧基 )-6- 溴 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (4 g， 10.3 mmol) 在 1,4- 二 烷 (25 mL) 中的溶液中添加联硼酸频那醇酯 (3 g， 11.8 mmol)、 dppf (0.3 g， 541 μmol)、 PdCl2(dppf) (0.42 g， 514 μmol) 和 KOAc (2 g， 20.4 mmol)。在将反应混 合物在回流下搅拌 5 小时之后， 添加 5- 溴 -2- 甲基吡啶 (2.1 g， 12.2 mmol)、 四 ( 三苯基 膦 ) 合钯 (Pd(PPh3)4) (0.6 g， 519 μmol) 和 Cs2CO3 (4 g， 12.3 mmol)， 并将该混合物在回 流下搅拌过夜。将反应混合物冷却和过滤， 将滤液浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(2:1) 洗脱， 得到产物 (1.9 g， 46.0% 收率 )。MS (m/z ): 400.1 (M+H)。
     制备例 78 6-(6- 甲基吡啶 -3- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -5- 醇 在 N2 下， 向 5-( 苄氧基 )-6-(6- 甲基吡啶 -3- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 (1.44 g， 3.60 mmol) 在 EtOH (50 mL) 和 EtOAc (50 mL) 中的溶液中添加 Pd/C (500 mg， 10wt%)。所得混合物通过抽空来脱气， 并用氮气回填。然后， 将该反应混合物在 H2 气氛下 在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤。将该滤液浓缩， 得到产物 (982 mg， 88.0% 收率 )。 MS (m/z ): 310.1 (M+H)。
     制备例 79 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-6-(6- 甲基吡啶 -3- 基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 基本上通过制备例 75 的相同方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 449.2 (M+H)。
     制备例 80 3- 氟 -4-(6-(6- 甲基吡啶 -3- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯胺 基本上通过制备例 41 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 335.1 (M+H)。
     制备例 81 1-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-2- 氟 -5- 甲基 -4- 硝基苯 基本上通过制备例 75 的相同方法来制备标题化合物。 1
     H NMR (d6- 二甲亚砜 (DMSO)) δ 8.20 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.30(d, 1H), 7.10(d, 1H)。
     制备例 82 4-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-5- 氟 -2- 甲基苯胺 基本上通过制备例 53 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 315.8 (M+H)。
     制备例 83 5-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-6- 氟 -1H- 吲唑 在室温下， 向 4-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-5- 氟 -2- 甲基苯胺 (5.2 g， 16.6 mmol) 在水 (100 mL) 中的悬浮液中添加氟硼酸 (6.06 g， 33.1 mmol)。将该溶液冷却至 0℃， 并添加溶 于水 (2 mL) 中的 NaNO2 (1.71 g， 24.8 mmol)。将该反应在 0℃下搅拌 40 分钟。添加 CHCl3 (200 mL)。 分离有机相， 用 Na2SO4 干燥， 再过滤。 向该滤液中添加 KOAc(7.31 g， 74.5 mmol) 和 18- 冠 -6- 醚 (0.218 g， 0. 82 mmol)。将反应在室温下搅拌 1 小时。将反应混合物用饱 和氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再蒸发。残留物用 DCM 洗涤， 再过滤， 获得作为浅黄色固体的所需产物。滤液通过色谱法提纯， 先后用 DCM 和 EtOAc: 己烷 (1:1) 洗脱， 得 到附加的所需产物。将该两部分固体合并， 获得所需产物 (3.2 g， 59% 收率 )。MS (m/z ): 324.8 (M+H)。
     制备例 84 5-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-6- 氟 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 基本上通过制备例 9 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 410.8 (M+H)。
     制备例 85 N-( 二苯基亚甲基 )-3- 氟 -4-(6- 氟 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧 基 ) 苯胺 将 5-(4- 溴 -2- 氟苯氧基 )-6- 氟 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 (0.97 g， 2.37 mmol)、 二苯甲酮亚胺 (0.64 g， 3.56 mmol)、 4,5- 双 ( 二苯基膦基 )-9,9- 二甲基呫吨 (0.10 g， 0.075 mol)、 Cs2CO3 (1.16 g， 3.56 mmol)、 Pd2(dba)3 (0.11 g， 0.12 mmol) 在 1,4- 二 烷 (20 mL) 中的混合物用氮气吹扫， 加热到 100℃， 并搅拌过夜。将该反应混合物冷却到室温， 用 EtOAc 萃取， 用饱和氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩 (1.45 g)。MS (m/ z ): 510 (M+H)。 制备例 86 3- 氟 -4-(6- 氟 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯胺 向 N-( 二苯基亚甲基 )-3- 氟 -4-(6- 氟 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基 氧基 ) 苯胺 (1.45 g， 2.85 mmol) 在 THF (30 mL) 和水 (5 mL) 中的溶液中添加 1N HCl 水 溶液 (5.69 mL， 5.69 mmol)。将反应在室温下搅拌 2 小时。添加 EtOAc， 该混合物用饱和 NaHCO3 水溶液、 饱和氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再蒸发。残留物通过色谱法 提纯， 先后用 DCM 和 EtOAc 己烷 (1:1) 洗脱， 获得苍白色凝胶状的所需产物 (0.53 g， 54% 收 率 )。MS (m/z ): 346 (M+H)。
     制备例 87 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 基本上通过制备例 75 的相同方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 430.1 (M+H)。
     制备例 88 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 (15 g， 35 mmol) 在 DCM (300 mL) 中的溶液中添加三氟乙酸 (TFA) (30 mL)， 并在室温下搅拌过 夜。蒸发 DCM。将残留物在 EtOAc (800 mL) 和 5% NaHCO3 水溶液 (400 mL) 之间分配。将 有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤， 用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE: 丙酮 (5:1) 洗脱， 获得产物 (10.4 g， 86% 收率 )。MS (m/ z): 346.1 (M+H)。
     制备例 89 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 基本上通过制备例 11 的方法来制备标题化合物 ： MS (m/z ): 360.1 (M+H)。
     制备例 90 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸 向 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸乙酯 (1.19 g， 3.5 mmol) 在
     THF/H2O (15 mL/5 mL) 中的溶液中添加 LiOH (0.2 g， 8.3 mmol)。在将该反应在室温下 搅拌 2 小时之后， 除去溶剂。残留物用 2N HCl 酸化至 pH 5， 再用 EtOAc (50 mL) 萃取。该 有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤， 干燥， 再浓缩， 得到产物 (1.1 g， 100% 收率 )。MS (m/z ): 332.0 (M+H)。
     制备例 91 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁酯 将 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 甲酸 (1.1 g， 3.3 mmol)、 叠氮磷 酸二苯酯 (0.91 g， 3.3 mmol)、 TEA(0.33 g， 3.3 mmol) 和 4Å 分子筛 (2.5 g) 在叔丁醇 (50 mL) 中的悬浮液在回流下加热过夜。然后， 滤出固体， 并将滤液浓缩。将残留物在饱和氯化 钠水溶液 (40 mL) 和 EtOAc (100 mL) 之间分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩， 残留物通过 硅胶柱色谱法提纯， 用 PE: 丙酮 (4:1) 洗脱， 得到产物 (0.64 g， 47.9% 收率 )。MS (m/z ): 403.1 (M+H)。
     制备例 92 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁酯 基本上通过制备例 38 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 373.1 (M+H)。
     制备例 93 5-(5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 胺 向 5-( 苄 氧 基 )-6- 溴 -1-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-1H- 吲 唑 (1.5 g， 3.87 mmol) 在 1,4- 二 烷 (50 mL) 中的溶液中添加 5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊 烷 -2- 基 ) 吡啶 -2- 胺 (1 g， 4.54 mmol)、 Pd(PPh3)4 (200 mg， 173 μmol) 和 Cs2CO3 (5 g， 10.6 mmol)。 在将反应混合物在回流下搅拌过夜之后， 将它在 EtOAc (100 mL) 和饱和 NH4Cl 水溶液 (50 mL) 之间分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(15:1) 洗脱， 得到产物 (0.80 g， 51.5% 收率 )。MS (m/z ): 401.1 (M+H)。
     制备例 94 5-(5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基氨基甲酸 叔丁酯 向 5-(5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 胺 (310 mg， 774 μmol) 在 THF (20 mL) 中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯 (250 mg， 1.13 mmol) 和 TEA(1 mL， 7.17 mmol)。在将反应混合物在室温下搅拌 3 小时之后， 将其在 EtOAc (50 mL) 和饱和 NH4Cl 水溶液 (20 mL) 之间分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱 色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗脱， 得到产物 (260 mg， 67.1% 收率 )。MS (m/z ): 501.2 (M+H)。
     制备例 95 5-(5- 羟基 -1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基氨基甲酸叔丁 酯 在 N2 下， 向 5-(5-( 苄氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基 氨基甲酸叔丁酯 (260 mg， 519 μmol) 在 EtOH (25 mL) 和 EtOAc (25 mL) 中的溶液中添加 Pd/C(100 mg， 10wt%)。所得混合物通过抽空来脱气， 并用氮气回填。然后， 将该反应混合物 在 H2 气氛下在室温下搅拌 6 小时。将反应混合物过滤。将该滤液浓缩， 得到产物 (200 mg，93.8% 收率 )。MS (m/z ): 411.1 (M+H)。
     制备例 96 5-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基 氨基甲酸叔丁酯 基本上通过制备例 75 的相同方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 550.2 (M+H)。
     制备例 97 5-(5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-1-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-1H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基 氨基甲酸叔丁酯 基本上通过制备例 38 的方法来制备标题化合物。MS (m/z ): 520.2 (M+H)。
     制备例 98 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 向 溶 于 DCM (15.6 mL) 的 5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-1- 甲 基 -6-(1H- 吡 唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 (1.56 g， 4.42 mmol) 中添加二碳酸二叔丁酯 (1.09 mL， 4.83 mmol)。 将该混合物搅拌 30 分钟。HPLC 显示反应完全。在减压下除去溶剂。然后添加 MTBE(5 mL)。 将该溶液用冰水浴冷却， 并搅拌 15 分钟， 然后过滤， 得到作为固体的标题化合物 (0.764 g， 48.9 %)。
     制备例 99 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 向 3000 mL 烧 瓶 内 添 加 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝 基 苯 氧 基 )-2-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 (250 g， 573.1 mmol)， 随后添加 MeOH (1000 mL) 和 MeSO3H (112.71 ml,1.72 mol)， 再加热到 50℃， 保持 14 小时。固体从溶液中再结晶出来。然后将该混合物 冷却至室温。将该反应混合物在真空和 45℃下浓缩至干燥， 获得固体。固体用 DCM (2000 mL) 稀释， 用水 (1000 mL) 和 5N NaOH ( 约 350 mL) 处理， 直到 pH 是 8-9。分离有机层， 除 去溶剂， 随后与甲苯共沸， 获得 195.6 g 的黄色固体材料。MS (m/z ): 354.0 (M+H)。
     制备例 100 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 向 4000 mL 烧瓶内添加 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1H- 吲唑 (230 g， 653.2 mmol)、 DMF (3000 mL) 和 K2CO3(135.41 g， 979.78 mmol)。 反应混合物用冰浴冷却至 4.5℃。 向该混合物中添加甲基碘 (92.71 g， 653.19 mmol)， 将反应在相同温度下搅拌 20 分钟。将 反应混合物加热至室温， 并搅拌 13 小时。反应混合物通过液相色谱 - 质谱法监测。添加附 加甲基碘 (50 g) 和 NaHCO3 (33 g)， 并将反应混合物在室温下搅拌， 直到反应完成为止。反 应混合物被分成标记为 (A) 和 (B) 的两个部分， 每一部分均用水 (1 L) 猝灭， 随后用 EtOAc (1 L) 萃取， 使形成一些固体。(A) 和 (B) 的合并固体通过真空过滤收集， 获得 70g 重量的 粗产物， 具有约 90% 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 ( 它是所需异构 体 ) 和 8% 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-2- 甲基 -2H- 吲唑异构体。该固体然后用 1000 mL 的 DCM 和 750 mL 的 MeOH 研制一夜 ( 约 14 小时 )。固体通过过滤来收集， 用新鲜 DCM (100 mL) 冲洗， 得到 55.5g 标记为 (C) 的所需材料。将母液浓缩， 标记为 (D)。分离 (A) 和 (B) 的有机层， 并浓缩。将 (A) 和 (B) 的残留物合并， 获得 185 g 的标记为 (E) 的桔 黄色固体状粗产物。将粗化合物 (E) 溶于 MeOH 和 DCM 中， 然后将该溶液分成 3 个部分。将600 g 的硅胶与每一部分的溶液混合， 然后将该硅胶混合物装入到七个 270g 大小的空柱 内。七个 1.5 kg ISCO® 柱与以 25% EtOAc/ 己烷开始， 然后切换为 50% EtOAc/ 己烷的溶剂 体系一起使用， 获得 62g 的标记为 (F) 的黄色粉末状的所需化合物。在 7 个试验之后， 具有 一些 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑和 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧 基 )-2- 甲基 -2H- 吲唑异构体的混合级分。将这些级分合并， 并与上述工序的母液 (D) 合 并， 得到 17 g 的混合物。 将该混合物溶于 MeOH 和 DCM 中， 与 170 g 的硅石混合到该溶液中， 上 1.5 kg 柱， 得到 10 g 的标记为 (G) 的作为所需产物的黄色粉末。总产量 (55.5g (C)， 62g (F) 和 10g (G)) 是 127.5 g。
     制备例 101 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 向装有架顶搅拌装置、 热电偶、 加热罩、 冷凝器和液面下氮气喷射装置的 12 L 圆底烧瓶 中添加 1,4- 二 烷 (7.44 L) 和水 (1.67 L)。该溶液用 N2 吹扫 ( 入口管 )。接着， 添加 6- 溴 -5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 (595 g， 1.63 mol)， 再次用 N2 吹扫。 添加 4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (717.02 g， 2.44 mol)、 磷酸三钾 N- 水合物 (689.8 g， 3.25 mol) 和 1,1’ - 双 ( 二叔丁基膦 基 ) 二茂铁 (7.71 g， 16.25 mmol)。最后， 添加 Pd2(dba)3 (7.44 g, 8.13 mmol)。将该溶 液吹扫 15 分钟， 然后在 60 下加热 12 小时。反应不完全， 添加更多的 Pd2(dba)3 (7.44 g, 8.13 mmol)。将该溶液再次在 60℃下加热另外 3 小时， 反应是完全的。然后除去 1,4- 二 烷 (Buchi® 浴温 60℃ )， 将该残留物再溶于 10 倍体积 (6 L) 的 DCM 中。添加水 (3 L)， 然后分离各层。将该有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩， 获得深色油 (835 g)。该材料 没有纯化， 并前进到下一步。该材料为大约 60% 所需产物和约 40% 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧 基 )-1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑。所得粗产品在下一步中再保护。假定 50% 的该粗产物是 5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑。
     向装有架顶搅拌装置、 热电偶、 1L 加料漏斗、 N2 吹扫装置和冷却浴的 22 L 圆底烧 瓶内添加粗 5-(2- 氟 -4- 硝基 - 苯氧基 )-1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 (835 g， 1.18 mol) 在 DCM (6 L) 中的溶液。将溶于 DCM (350 mL) 中的二碳酸二叔丁酯 (283.69 g， 1.30 mol) 加入到加料漏斗中。经 48 分钟滴加该溶液。在反应完成之后， 通过旋转蒸发 除去 DCM， 获得深色油。向该深色油中添加 MTBE(2.5 L)， 并将该油性溶液冷却至约 0-5℃。 在该溶液中接种制备例 98 中获得的材料。在接种之后， 观察结晶， 将所得浆料搅拌 30-40 分钟。用聚丙烯垫过滤该浅黄色浆料， 滤饼用冷 (0-5℃ ) MTBE(1.5 L) 洗涤。将该固体在 40℃真空烘箱内干燥， 得到所需产物 (443 g， 60% 粗产物收率 )。MS (m/z ): 354.0 (M+H)。 根据 HPLC， 该材料显示为约 93-95% 纯， 因此进一步处理。
     制备例 102 4-(5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 向 3 加仑罐中添加 4-(5-(2- 氟 -4- 硝基苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡 唑 -1- 甲酸叔丁酯 (433.0 g， 952.8 mmol)， 随后添加 THF (6.5 L) 和 Pd/C (21.65 g， 10% Pd/C 和 21.65 g， 5% Pd/C)。将该混合物在氢气下加热至 35℃， 保持 2 小时。然后将该反应 冷却至室温， 并在氢气下搅拌过夜， 然后在氢气下加热至 40℃， 保持 7 小时。添加另外的 2 g Pd/C(1 g， 10% Pd/C 和 1 g， 5% Pd/C)， 并在氢气下搅拌另外 1 小时， 冷却至室温。将该混合物在氢气下再次搅拌过夜， 反应完成。将该混合物用 GFF® 和 Watman® 纸的组合来过滤。 将该滤液浓缩成微黄色固体 (446 g， 110% 回收率 )。
     制备例 103 2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸甲酯 向烧瓶中添加 2- 羟基烟酸 (10 g， 72 mmol)、 浓 H2SO4(2 mL) 和 MeOH (400 mL)， 随后添 加甲苯 (80 mL)。用迪安 - 斯达克分水器将反应混合物加热至回流过夜。在冷却至室温之 后， 将该混合物过滤， 并将滤液浓缩 该残留物溶于 DCM (200 mL) 中， 用饱和 NaHCO3 水溶 液中和至 pH 7， 并用 DCM (200 mL) 萃取三次。 将合并的有机相干燥， 再浓缩， 得到所需产物 (8.2 g， 74% 收率 )。MS (m/z ): 153.9 (M+H)。
     制备例 104 1-(4- 氟苯基 )-2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸甲酯 向 2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸甲酯 (6.0 g， 39 mmol)、 4- 氟苯基硼酸 (16.3 g， 116 mmol)、 乙酸铜 (14 g， 78 mmol) 和吡啶 (12 g， 0.156 mol) 在 DCM (300 mL) 中的混合物 中添加 4Å 分子筛 (5 g)。将反应混合物在与空气相通的情况下在室温下搅拌过夜。在将 固体过滤和用水洗涤之后， 滤液用 DCM (100 mL) 萃取。将有机层用 MgSO4 干燥， 再浓缩。残 留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:DCM (2:1 到 0:1) 洗脱， 得到产物 (9.6 g， 100% 收率 )。 MS (m/z ): 248.0 (M+H)。
     制备例 105 2-(4- 氟苯基 ) 肼甲酸乙酯 向 4- 氟苯肼盐酸盐 (2 g， 12.05 mmol) 在 THF (60 mL) 中的溶液中添加 DIPEA (6 mL， 34.40 mmol)、 氯甲酸乙酯 (1.2 mL， 12.55 mmol) 和 4- 二甲基氨基吡啶 (0.16 g， 1.31 mmol)。将混合物在室温下搅拌 4 小时。将该反应用水稀释， 用 EtOAc 萃取， 有机相用饱和 氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 先后用 DCM 和 DCM:MeOH(80:1) 洗脱， 获得标题化合物 (1.92 g， 80.5% 收率 )。MS (m/z ): 199 (M+H)。
     制备例 106 1-(4- 氟苯基 )-2- 甲肼 在冰 - 盐浴中， 在氮气下， 向 LiAlH4(1.1 g) 在 THF (15 mL) 中的混合物中滴加 2-(4- 氟 苯基 ) 肼甲酸乙酯 (1.9 g， 9.59 mmol) 在 THF (10 mL) 中的溶液。在添加之后， 移走冰浴， 并将混合物加热至 60℃过夜。将反应冷却， 用水猝灭。将沉淀过滤， 并用 EtOAc 洗涤。分离 有机相， 用 Na2SO4 干燥， 再浓缩。将残留物通过快速色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(80:1-60:1) 洗脱， 获得标题化合物 (1 g， 74% 收率 )。MS (m/z ): 141 (M+H)。
     制备例 107 2-(4- 氟苯基 )-1,5- 二甲基 -3- 氧代 -2,3- 二氢 -1H- 吡唑 -4- 甲酸乙酯 将 1-(4- 氟苯基 )-2- 甲肼 (0.6 g， 4.28 mmol)、 2- 乙酰基丙二酸二乙酯 (0.96 g， 4.75 mmol) 和乙酸 (0.51 g， 8.49 mmol) 在水 (15 mL) 中的混合物在 115℃下加热 3 小时。将 反应冷却， 并用 EtOAc 萃取两次。将有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 再浓 缩。将残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH( 从 150:1 到 60:1) 洗脱， 获得标题化合 物 (0.59 g， 49.5% 收率 )。MS (m/z ): 279 (M+H)。
     制备例 108(E)-2-(2-(4- 氟苯基 ) 肼叉基 ) 乙醛 将 4- 氟苯肼盐酸盐 (1 g， 6 mmol) 在 THF (20 mL) 中的溶液用 DIPEA(3 mL， 18 mmol) 处理。然后， 在冰浴中， 滴加 THF (10 mL) 中的乙二醛 (40% 水溶液， 0.89 g， 6.0 mmol)。在 添加之后， 将该混合物在室温下搅拌 30 分钟， 用水猝灭， 再用 EtOAc 萃取。该有机相用饱和 氯化钠水溶液洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 再浓缩， 获得粗标题化合物 (0.97 g， 97% 收率 )。 MS (m/ z ): 167 (M+H)。
     制备例 109 2-(4- 氟苯基 )-3- 氧代 -2,3- 二氢哒嗪 -4- 甲酸乙酯 将粗 (E)-2-(2-(4- 氟苯基 ) 肼叉基 ) 乙醛 (0.97 g， 5.8 mmol) 溶于 EtOH (50 mL) 中， 再添加丙二酸二乙酯 (0.93 g， 5.8 mmol) 和哌啶 (0.2 mL， 2.0 mmol)。将该混合物在回流 下加热过夜。然后将反应混合物冷却， 再浓缩。将残留物用水稀释， 并用 EtOAc 萃取两次。 将合并的有机萃取物用 Na2SO4 干燥， 再浓缩。 将残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc (3:1 到 1:1) 洗脱， 获得标题化合物 (0.26 g， 两步骤的收率 17 %)。 MS (m/z ): 263 (M+H)。
     制备例 110 3-(4- 氟苯基氨基 )-3- 氧代丙酸甲酯 向 4- 氟苯胺 (4.4 mL， 45 mmol) 在丙酮中的溶液中添加 TEA(8.5 mL， 67 mmol) 和甲基 丙二酰氯 (7.2 mL， 67 mmol)。将该混合物在室温下搅拌 5 小时， 然后浓缩。在添加水 (20 mL) 之后， 该残留物用浓 HCl 酸化至 pH 3。通过过滤来收集沉淀， 并用 PE 洗涤， 获得产物 (14.1 g， 100% 收率 )。MS (m/z ): 212.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 110 的方法制备以下化合物 ：。制备例 113 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 向 3-(4- 氟苯基氨基 )-3- 氧代丙酸甲酯 (10.1 g， 48 mmol) 在 EtOH (100 mL) 中的溶 57 mmol)。 将 液中添加反式 -4- 甲氧基 -3- 丁烯 -2- 酮 (5.7 g， 57 mmol) 和 CH3ONa(3.1 g， 该混合物在回流下加热过夜， 然后浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc (5:1 到 2:1) 洗脱， 得到产物 (2.1 g， 16% 收率 )。MS (m/z ): 276.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 113 的方法制备以下化合物 ：
     。制备例 116 (Z)-4- 氨基戊 -3- 烯 -2- 酮 在室温下， 向 2,4- 戊二酮 (20.0 g， 0.2 mol) 在水 (20 mL) 中的溶液中滴加 25% 氨水 (13.2 mL， 0.2 mol)。将混合物在室温下搅拌 2 小时。然后， 除去溶剂， 获得作为固体的产 1 物 (20.0 g， 100% 收率 )。 H NMR ( 丙酮 -d6, 300 MHz): 1.88 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 2.8 (br s, 1H), 6.54 (br s, 1H), 9.7 (br s, 1H)。
     制备例 117 4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 将 (Z)-4- 氨基戊 -3- 烯 -2- 酮 (20.0 g， 0.2 mol) 在干燥 THF (20 mL) 中的溶液添加 到氰乙酸乙酯 (22.6 g， 0.2 mol) 和 TEA(20.2 g， 0.2 mol) 在干燥 THF (200 mL) 中的溶液 中。 将该反应混合物在回流下加热 56 小时， 然后浓缩。 将该残留物在室温下静置 5 小时， 将 沉淀过滤， 用 EtOAc 洗涤， 获得标题化合物 (7.3 g， 19.9% 收率 )。 MS (m/z) : 196.0 (M+H)。
     制备例 118 1-(4- 氟苯基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 将 4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 (5.0 g， 0.025 mol)、 4- 氟苯基 硼酸 (10.7 g， 0.077 mol)、 乙酸铜 (1.33 g， 0.007 mol)、 吡啶 (6.86 mL) 和 4Å 分子筛 (5.0 g) 在 1,4- 二 烷 (80 mL) 中的悬浮液在 80℃下加热 68 小时。滤出固体， 并将滤液浓缩。 将残留物在 EtOAc (50 mL) 与 2N HCl (70 mL) 之间分配。通过过滤来收集沉淀的固体， 用 EtOAc 洗涤， 获得标题产物 (1.2 g)。分离 EtOAc 滤液， 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色 谱法提纯， 用 PE:EtOAc:MeOH (40:20:1) 洗脱， 得到另一部分的产物 (0.12 g)， ( 总计 1.32 g， 17.8 % 收率 )。MS (m/z ): 290.1 (M+H)。
     制备例 119 4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1- 苯基 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 将 4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 (7.5 g， 0.038 mol)、 苯基硼酸 (14.1 g， 0.115 mol)、 乙酸铜 (1.38 g， 0.008 mol)、 吡啶 (7.5mL) 在 1,4- 二 烷 (80 mL) 中的悬浮液在 80℃下加热 96 小时。滤出固体， 并将滤液浓缩。将残留物在 EtOAc (50 mL) 和 2N HCl (70 mL) 之间分配， 通过过滤收集沉淀， 用 EtOAc 洗涤， 得到标题产物 (2.95 g)。 分离 EtOAc 溶液， 干燥， 再浓缩。该残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE: 丙酮 (2:1) 洗脱， 得到另一部分 (0.3 g)。(3.25 g, 31.2% 收率 )。MS (m/z ): 272.0 (M+H)。
     制备例 120 5-( 溴甲基 )-2-(4- 氟苯基 )-1- 甲基 -3- 氧代 -2,3- 二氢 -1H- 吡唑 -4- 甲酸乙酯 在室温下， 向 2-(4- 氟苯基 )-1,5- 二甲基 -3- 氧代 -2,3- 二氢 -1H- 吡唑 -4- 甲酸乙 酯 (1.2 g， 4.3 mmol) 和偶氮二异丁腈 (AIBN) (0.09 g， 0.06 mmol) 在 DCM 中的溶液中分 三批添加 N- 溴琥珀酰亚胺 (NBS) (0.9 g， 4.3 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌过 夜。将混合物浓缩， 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(4:1) 洗脱， 获得白色固体 状的产物 (1.3 g， 84% 收率 )。MS (m/z ) 357.0 (M+H)。
     制备例 121 5-((1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-2-(4- 氟苯基 )-1- 甲基 -3- 氧代 -2,3- 二氢 -1H- 吡 唑 -4- 甲酸乙酯 向 在 冰 - 水 浴 中 冷 却 的 5-( 溴 甲 基 )-2-(4- 氟 苯 基 )-1- 甲 基 -3- 氧 代 -2,3- 二 氢 -1H- 吡唑 -4- 甲酸乙酯 (1.3 g， 3.6 mmol) 和 1H- 吡唑 (0.25 g， 3.6 mmol) 在 THF (50 mL) 和 H2O (1 mL) 中的溶液中分三批添加固体 KOH (0.2 g， 3.6 mmol)。在将该反应混合 物在室温下搅拌过夜之后， 除去溶剂。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(4:1) 洗 脱， 得到产物 (0.87 g， 70% 收率 )。MS (m/z ): 345.1 (M+H)。
     基本上通过制备例 121 的方法制备以下化合物 ：。制备例 124 1-(4- 氟苯基 )-5-( 吗啉代甲基 )-2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 将 1-(4- 氟苯基 )-5- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 (0.275 g， 1 mmol)、 NBS(0.2 g， 1.1 mmol)、 偶氮异丁腈 (40 mg， 0.2 mmol) 在 CCl4 (20 mL) 中的混合物在回流下 加热 3 小时。 在将反应冷却之后， 添加吗啉 (0.088 mL， 1 mmol) 和 K2CO3 (0.14 g， 1 mmol)。 将该反应在室温下搅拌另外 2 小时。除去溶剂， 残留物用水 (10 mL) 稀释， 再用 EtOAc (20 mL) 萃取两次。合并的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤， 干燥， 再浓缩 残留物通过硅胶柱 色谱法提纯， 用 DCM:MeOH( 从 100:1 到 50:1， 在 MeOH 中含有 0.5% 2N NH3) 洗脱， 获得标题 化合物 (0.17 g， 47% 收率 )。MS (m/z ): 361.1 (M+H)。
     制备例 125 2-(4- 氟苯基氨基甲酰基 )-3- 甲基丁 -2- 烯酸乙酯 向 4- 氟苯胺 (2 g， 18 mmol) 在异丙叉基丙二酸二乙酯 (10 g， 50 mmol) 中的溶液中
     添加 1H- 咪唑 (0.25 g， 3.67 mmol)。将该反应混合物在 200℃下在氮气中搅拌 3 小时。在 将反应冷却之后， 添加硅胶。将该混合物加载到硅胶柱上， 并先后用 PE 和 PE:EtOAc (3:1) 洗脱， 得到产物 (1.85 g， 39% 收率 )。MS (m/z ): 266.1 (M+H)。
     制备例 126 1-(4- 氟苯基 )-4- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸乙酯 将 2-(4- 氟苯基氨基甲酰基 )-3- 甲基丁 -2- 烯酸乙酯 (1.85 g， 6.97 mmol) 和 N,N- 二 甲基甲酰胺二甲基缩醛 (5 mL， 37.45 mmol) 的混合物在 90℃下搅拌 90 分钟。在将反应冷 却之后， 添加 EtOAc (30 mL) 和饱和 NH4Cl 溶液 (20 mL)。分离有机相， 干燥， 再浓缩。残 留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(10:1) 洗脱。将含有产物的各级分浓缩， 残留物 与乙醚混合， 得到 1.2g 黄色固体， 将该黄色固体过滤， 并丢弃。将滤液浓缩， 再次通过硅胶 柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(20:1) 洗脱， 得到产物 (500 mg， 26% 收率 )。MS (m/z ): 276.1 (M+H)。
     制备例 127 2-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -3- 氧代 -2,3- 二氢哒嗪 -4- 甲酸乙酯 向 1- 三苯基磷叉基 -2- 丙酮 (3.18 g， 9.99 mmol) 在 THF (50 mL) 中的悬浮液中添加 酮基丙二酸二乙酯 (1.74 g， 9.99 mmol)。 将所得混合物在室温下搅拌 30 分钟， 得到透明溶 液。将该溶液添加到 4- 氟苯肼盐酸盐 (1.62 g， 9.96 mmol) 在 EtOH:H2O(30 ml:30 mL) 中 的溶液中。在将所得混合物回流 1 小时之后， 添加 TEA(3 mL)， 并将该混合物在回流下搅拌 另外 1 小时。然后， 将其浓缩， 残留物在饱和 NH4Cl 水溶液 (30 mL) 和 EtOAc (30 mL) 之间 分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc(3:1) 洗脱， 得到产物 (1.20 g， 43% 收率 )。MS (m/z ): 277.1 (M+H)。
     制备例 128 1-(4- 氟苯基 )-2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 向 1-(4- 氟苯基 )-2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸甲酯 (10.0 g， 0.04 mol) 在 MeOH (150 mL) 和水 (50 mL) 中的溶液中添加 LiOH (1.9 g， 0.08 mol)。将所得反应混合物在室 温下搅拌 0.5 小时。在除去大部分的 MeOH 之后， 该混合物用浓 HCl 水溶液酸化， 直到白色 固体沉淀为止。 固体通过过滤来收集， 用水 (5 mL) 洗涤， 得到所需产物 (8.7 g， 93% 收率 )。 MS (m/z ): 234.0 (M+H)。
     以下化合物基本上通过制备例 128 的方法来制备 ：*: KOH 用作碱 **: NaOH 用作碱。
     制备例 142 6- 甲基 -2- 氧代 -1- 苯基 -1,2- 二氢 - 吡啶 -3- 甲酸 向乙醇钠在 EtOH ( 由溶于 EtOH (40 mL) 的钠 (0.5 g， 21.75 mmol) 制备 ) 中的溶 液中添加 3- 氧代 -3-( 苯基氨基 ) 丙酸乙酯 (4 g， 19.30 mmol) 和反式 -4- 甲氧基 -3- 丁 烯 -2- 酮 (2 g， 19.98 mmol)。在将反应在回流下搅拌过夜之后， 将混合物浓缩。将残留物 在 H2O (50 mL) 和 EtOAc (50 mL) 之间分配。 水层用浓 HCl 酸化至 pH 3~4， 然后用 EtOAc 萃 取。将有机萃取物干燥和浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(25:1) 洗脱， 得到产物 (1.20 g， 27% 收率 )。MS (m/z ): 230.0 (M+H)。制备例 143 1,5- 二甲基 -3- 氧代 -2- 苯基 -2,3- 二氢 -1H- 吡唑 -4- 甲酸 在 75℃下， 向 1,5- 二甲基 -3- 氧代 -2- 苯基 -2,3- 二氢 -1H- 吡唑 -4- 甲醛 (2 g， 9.25 mmol) 在水 (100 mL) 中的混合物中缓慢地添加 KMnO4 (1.5 g， 9.49 mmol) 在水 (200 mL) 中的溶液。在添加完之后， 将反应混合物在 75℃下搅拌另外 1 小时。添加固体 KOH 以使该 溶液变成碱性， 趁热将该混合物过滤。向该滤液中添加 EtOH (10 mL) 和 EtOAc (50 mL)。 分离有机相并丢弃。水相用浓 HCl 酸化至 pH 5， 再用 EtOAc (60 mL) 和 DCM (60 mL) 萃取。 将各有机相合并， 干燥， 再浓缩， 得到标题产物 (1.9 g， 88.46% 收率 )。MS (m/z ): 233.1 (M+H)。
     制备例 144 3-(4- 氟苯基氨基 )-3- 氧代丙酸乙酯 向四颈 10 L 圆底烧瓶添加 DCM (5000 mL)、 4- 氟苯胺 (111 g， 1.0 mol) 和 TEA(166 mL， 1.2 mol)。在 0-5℃下 （在冰浴下） ， 在氮气氛围中， 在 4 小时的期间滴加 DCM (500 mL) 中的 乙基丙二酰氯 (196 g， 1.3 mol)。在添加之后， 将该混合物在该温度下搅拌 30 分钟。在该 温度下， 在搅拌的同时将水 (2 L) 加入到该混合物中。有机相用饱和 NaHCO3、 饱和氯化钠水 溶液洗涤， 再用无水 Na2SO4 干燥。该水相用 EtOAc (2×1 L) 萃取。有机相用饱和氯化钠水 溶液洗涤， 再用无水 Na2SO4 干燥。在过滤之后， 在减压下将合并的有机溶液浓缩至干燥。残 留物用 PE (1L) 洗涤， 得到作为黄色固体的 3-(4- 氟苯基氨基 )-3- 氧代丙酸乙酯 (230 g， 粗产物收率 102%)。MS (m/z ): 226.1 (M+H)。
     制备例 145 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 向四颈 3 L 圆底烧瓶中添加 EtOH (1500 mL)、 3-(4- 氟苯基氨基 )-3- 氧代丙酸乙酯 (139 g， 617 mmol)、 乙醇钠 (65.6 g， 925 mmol) 和 4- 甲氧基 -3- 丁烯 -2- 酮 (103 g， 925 mmol)。将该混合物回流 3 小时。将该溶液冷却至室温之后， 将反应混合物在减压下浓缩以 除去 EtOH。该残留物用 DCM (700 mL) 和 1M HCl (1500 mL) 稀释。水相用 DCM (3×500 mL) 萃取。合并的有机萃取物用饱和氯化钠水溶液 (1000 mL) 洗涤， 用无水 Na2SO4 干燥， 并 在减压下浓缩。残留物用 EtOAc (150 mL) 在室温 (10-15℃ ) 下研制 1 小时。在过滤和用 EtOAc (50 mL) 洗涤之后， 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸作为 黄色固体获得 (85.3 g， 56% 收率 )。MS (m/z ): 248 (M+H)。
     实施例 1 N-(3- 氟 -4-(1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯 基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺向 100 mL 圆 底 烧 瓶 内 添 加 4-(5-(4- 氨 基 -2- 氟 苯 氧 基 )-1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (1.43 g， 3.38 mmol)、 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (1.25 g， 5.07 mmol)、 EDCI(1.48 g， 7.6 mmol) 和 HOBt (776 mg， 5.07 mmol)， 随后添加 DMF (15 mL， 193.99 mmol)， 然后添加 DIPEA (1.47 mL， 8.44 mmol)。 将该混合物在室温下搅拌过夜。 将反应混合物稀释到 EtOAc (300 mL) 中， 并用饱和 氯化钠水溶液 (5×100 mL) 洗涤。合并的水溶液用 EtOAc (1×100 mL) 萃取， 然后将合并 的有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩至干燥。该固体上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度经 70 分钟从 100% (A) 到 80% (A) :20% (B)， 得到金色固体 状的 4-(5-(2- 氟 -4-(1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺基 ) 苯 氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (2.20 g， 87% 收率 )。MS (m/ z ): 653. (M+H), 675 (M+Na)。
     向圆底烧瓶内添加 4-(5-(2- 氟 -4-(1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢 吡啶 -3- 甲酰胺基 ) 苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (1.92 g， 2.94 mmol) 和 DCM (50 mL)， 随后添加三乙基硅烷 (1.88 mL， 11.77 mmol) 和 TFA (17.8 mL， 235.35 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 1.5 小时。除去溶剂， 并稀释到 DCM (150 mL) 中， 用饱和 NaHCO3 水溶液 (2×100 mL) 洗涤。该有机溶液用 Na2SO4 干燥， 并在减压下浓 缩， 得到固体材料。固体上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度 经 70 分钟从 100% (A) 到 75% (A):25% (B)， 保持在该 75:25 比率达 15 分钟， 得到灰白色固 体状的标题化合物。将固体溶于热的 EtOH (50 mL) 中， 随后分批添加蒸馏水 (250 mL)， 从 而使白色固体沉淀。固体用布氏漏斗过滤， 用蒸馏水 (3×15 mL) 洗涤， 风干， 再在 60℃下 真空干燥 15 小时， 得到灰白色固体状标题化合物 (1.27 g， 78% 收率 )。MS (m/z ): 552.8 (M+H)。
     实施例 2 N-(3- 氟 -4-(1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯 基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺在 12 L 圆底烧瓶上安装架顶搅拌装置、 热电偶和 N2 吹扫装置。 将 4-(5-(4- 氨基 -2- 氟 苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (404 g， 954.08 mmol) 溶于 DMF (2 L) 中， 并加入到该烧瓶中。 使用 DMF (1 L) 冲洗该烧瓶。 添加 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲 基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (259.46 g ,1.05 mol) 和 EDCI (228.63 g， 1.19 mol)， 用 DMF (500 mL) 冲洗。然后添加 HOBt(189.94 g， 1.24 mol)， 再次用 DMF (500 mL) 冲洗。最后， 慢慢地添加 DIPEA(184.97 g， 1.43 mol)。然后将深色溶液在室温下搅拌整个 周末。向 20 L 底部有排出口的烧瓶中添加去离子水 (3 L) 和 DCM (5 L)。倒入反应混合 物， 并用 DCM (1 L) 冲洗。分离有机层， 用去离子水 (3×3 L) 洗涤， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 用 DCM 冲洗固体， 并将滤液浓缩。将 EtOAc (2 L) 加入到该残留物中， 并将溶液搅拌 1 小 时。产物结晶出来。将混合物浓缩。添加另一部分的 EtOAc (2 L)， 再浓缩， 以除去所有 的 DCM。将 EtOAc (650 mL) 和 MTBE(3 L) 添加到残留物中， 并将该溶液在冰浴中搅拌 1 小 时。棕褐色的浆料使用聚丙烯垫进行过滤。滤饼用 MTBE(2×500 mL) 冲洗。将该浅褐色 的固体在真空烘箱中在 40℃下干燥过夜， 得到粗产物 (553 g)。该粗产物通过硅胶柱色谱 法提纯， 用 (50% EtOAc (50%) :35% DCM (35%): 正庚烷 (15%)) 洗脱， 得到纯的所需产物 4-(5-(2- 氟 -4-(1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺基 ) 苯氧 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (424 g， 68%)。MS (m/z ): 651.0 (M-H)。
     将 4-(5-(2- 氟 -4-(1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰 胺基 ) 苯氧基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸叔丁酯 (423.9 g， 649.50 mmol) 溶于 DCM (4.24 L) 中。添加 HCl 的 MeOH 溶液 (5.74N， 799.99 mL， 4.59 mol)， 并将 该溶液在 30℃下加热 1 小时。然后， 将反应混合物加热至 45℃， 添加 DCM (1.5 L)。在两小 时后， 将溶液加热至 50℃， 并添加 DCM (2 L)。在 3 小时后， 添加 DCM (2 L)， 随后添加 HCl 的 MeOH 溶液 (4.5N， 721.67 mL， 3.25 mol)。在另外 45 分钟之后， 添加 DCM (1 L)、 HCl 的 MeOH 溶液 (4.5N， 288.67 mL， 1.30 mol) 和 MeOH (1.5 L)。然后将反应溶液加热至 60℃。 在 4 小时后， 添加 MeOH (2 L)， 10 分钟之后， 添加 DCM (1 L)， 随后添加 HCl 的 MeOH 溶液 (4.5N， 200 mL)。在 5 小时后， 反应完全。将反应混合物浓缩至约 1/3 体积。添加 MeOH (2 L)， 将该溶液浓缩成浓稠浆料。再次， 添加 MeOH (2 L)， 并将该混合物浓缩成浓稠浆料。将 该浆料冷却至约 10-15℃， 然后过滤。固体用 MeOH 洗涤。将固体在 55℃真空烘箱中放置 2 天， 得到所需产物 N-(3- 氟 -4-(1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯 基 )-1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺盐酸盐 (377 g， 92.8%)。 MS (m/z ): 551.0 (M-H)。在 氮 气 下 向 装 有 机 械 搅 拌 装 置 的 22 L 圆 底 烧 瓶 内 添 加 N-(3- 氟 -4-(1- 甲 基 -6-(1H- 吡 唑 -4- 基 )-1H- 吲 唑 -5- 基 氧 基 ) 苯 基 )-1-(4- 氟 苯 基 )-6- 甲 基 -2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺盐酸盐 (367 g， 0.62 mol)， 随后添加 DCM (7.34 L) 和水 (7.34 L)。添加 Na2CO3(181.6 g， 1.71 mol)， 并将该混合物在室温下搅拌 30 分钟。检查 pH， 发现 是约 9.4。将该混合物用聚丙烯过滤。收集固体， 并投入到 5 L 圆底烧瓶内。添加 20% 水 / MeOH 溶液 (2.6 L)， 并将该浆料搅拌 30 分钟。将该浆料过滤， 固体用 20% 水 /MeOH(600 mL) 洗涤。将固体在真空烘箱中在 35℃下放置一夜。第一次称量指示为 394 g ( 理论收率 324.8 g， 约 121% 质量回收率 )。TGA( 热重分析 ) /DSC ( 差示扫描量热法 ) 显示约 17 wt% 自由水分和熔融时 10-11 wt% 挥发损失。 在氮气吹扫下将固体在真空烘箱中在 55℃下干燥 3.5 小时 (354.7 g， 约 109% 质量回收率， NMR 显示约 9.3 wt% DCM)。根据 TGA/DSC， 无自由 水分存在。该材料被送去研磨。
     将手套袋中的喷射磨 (AljetTM 0101) 安装在通风柜的走道 （walk in hood） 中， 并将氮气连接到 100 lb 集管 （header） 。调节入口推进器喷嘴用于最大抽吸， 将最大氮气 流引入到磨机中。在推进器喷嘴上压力读数被记录为 90 psi， 在两个研磨喷嘴上记录为 85 psi。 将起始原料 (353.4 g) 慢慢地供应给磨机入口， 根据需要停止以排空接收袜 （receiver sock） 。总研磨时间是 22 分 25 秒。计算给料速率是 15.8 g/min (353.4 克除以 22.42 分 钟 )。研磨的材料 (335.7 g， 95%) 以 17.7 g 损失量获得。研磨材料的粒度分析结果是 4.6 微米的 d90。
     TGA/DSC 指示在熔融时约 11.4 wt% 挥发物， NMR (DMSO) 显示约 9.3 wt% DCM。1H NMR (DMSO) δ 12.94 (br s, 1 H), 11.88 (s, 1H), 8.44 (d, J = 7.47 Hz, 1 H), 8.12 (br s, 1 H), 8.00 (br s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.94 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.91 (d, J = 2.6 Hz, 1 H), 7.87 (s, 1H), 7.47-7.37 (m, 5 H), 6.82 (t, J = 9.26 Hz, 8.82 Hz, 1 H), 6.65 (d, J = 7.49 Hz, 1 H), 4.04 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H)。 LC/MS: (M + H) 553.1。
     无水晶形制备 向 20 mL 管形瓶内的 10 mL 的 EtOH 中添加 120 mg 上述化合物。在搅拌下， 将样品加 热至 70℃。最初， 固体开始溶解， 然后形成悬浮液， 随后形成白色沉淀物。在搅拌的同时将 样品冷却至室温。通过移液管取少量浆料样品， 进行风干。该材料是高度结晶的， 通过 TGA 证明是乙醇溶剂化物。向剩余悬浮液中添加 10 mL 的庚烷， 然后加热至沸腾。测定温度监 控在 70.8℃， 到体积已减少至 10 mL 为止。当温度开始升高时， 去除加热， 并将浆料在室温 下搅拌过夜。通过真空过滤分离固体， 在真空烘箱中在 45℃下干燥 3 小时， 导致 77% 回收 率。根据热重量分析， 该晶形从 25℃到 238℃显示了 0.17% 的重量减轻。该晶形的熔融起 始温度是 247.8℃。
     实施例 3 N-(3- 氟 -4-(1- 甲基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯 基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺甲磺酸盐向 3- 氟 -4-(1- 甲 基 -6-(1H- 吡 唑 -4- 基 )-1H- 吲 唑 -5- 基 氧 基 ) 苯 胺 (300 mg， 927.8 μmol) 和 1-(4- 氟苯基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (300 mg， 1.15 mmol) 在 DMF (5 mL) 中的溶液中添加 HOBt (130 mg， 0.962 mmol)、 EDCI(180 mg， 0.939 mmol) 和 N- 甲基吗啉 (0.5 mL)。 在将该反应混合物在 60℃下搅拌过夜之后， 将其在 EtOAc (50 mL) 和饱和 NH4Cl 水溶液 (30 mL) 之间分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩。该残 留物用 EtOAc (5 mL) 研制， 固体通过过滤来收集， 得到作为所需产物的 N-(3- 氟 -4-(1- 甲 基 -6-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺 (230 mg， 43.7% 收率 ) 。MS (m/z ): 567.2 (M+H)。
     向 N-(3- 氟 -4-(1- 甲 基 -6-(1H- 吡 唑 -4- 基 )-1H- 吲 唑 -5- 基 氧 基 ) 苯 基 )-1-(4- 氟苯基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺 (230 mg， 0.406 mmol) 在丙酮 (10 mL) 中的溶液中添加 MeSO3H (39 mg， 0.406 mmol)。在将该反应在室温下搅拌 0.5 小时之后， 将其浓缩。 残留物用乙醚洗涤， 再干燥， 得到 N-(3- 氟 -4-(1- 甲基 -6-(1H- 吡 唑 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-4,6- 二甲基 -2- 氧代 -1,2- 二 氢吡啶 -3- 甲酰胺甲磺酸盐 (250 mg， 92.9% 收率 ) 。MS (m/z ): 567.2 (M+H)。
     以下化合物基本上通过实施例 3 的方法来制备， 区别在于在某些情况下产生了游 离碱， 而不是盐 ：实施例 48 N-(4-(6- 氨基 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-6- 甲 基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺甲磺酸盐
     向 10 mL 螺口小瓶内添加 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-N- 二苯甲基 -1- 甲基 -1H- 吲 唑 -6- 胺 (91 mg， 208 μmol)、 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (66.7 mg， 269.78 μmol)、 EDCI (90.9 mg， 466.9 μmol) 和 HOBt (47.7 mg， 311.3 μmol)， 随后添加 DMF (2 mL， 25.9 mmol)。向该混合物中添加 DIPEA (90.5 μL， 518.8 μmol)， 并将该混合物在室温下搅拌 12 小时。添加附加的 EDCI(50 mg)、 HOBt(25 mg)、 DIPEA(0.02 mL) 和 1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (40 mg)， 并将该混合物 搅拌另外 24 小时。将反应稀释到 EtOAc (100 mL) 中， 并用饱和氯化钠水溶液 (3×25 mL) 洗涤。合并的水溶液用 EtOAc(1×25mL) 萃取。将合并的有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再 浓缩至干燥。该残留物上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度 经 60 分钟从 100% (A) 到 90% (A) :10% (B)， 得到作为所需产物的透明蜡状材料 (114 mg， 82% 收率 )。MS (m/z ) 667.8 (M+H)。
     向 25 mL 圆底烧瓶内添加 N-(4-(6-( 二苯甲基氨基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基氧 基 )-3- 氟苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺 (100 mg， 149.7 μmol) 和 DCM (15 mL， 15.6 mmol)， 随后添加三乙基硅烷 (0.3 mL， 1.8 mmol) 和 TFA (2 mL， 26.9 mmol)。 将该反应混合物在室温下搅拌 3 小时。 除去溶剂， 然后， 将残留物在 DCM (50 mL) 中稀释， 用饱和 NaHCO3 溶液 (1×25 mL) 洗涤。水层用 DCM (1×25 mL) 萃取， 合并的有机溶液用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩。残留物上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度经 50 分钟从 100% (A) 到 80% (A):20% (B)， 在 80:20 比率下保持 5 分钟， 然后梯度经 5 分钟到 70% (A):30% (B)， 得到作为所需产物的白色固体材料 (67 mg， 90% 收率 )。MS (m/z ): 501.8 (M+H)。
     向圆底烧瓶内添加在 DCM (2 mL， 31.2 mmol) 和 MeOH (2 mL， 49.4 mmol) 中的 N-(4-(6- 氨基 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺 (47.5 mg， 94.7 μmol)。添加 MeOH 中的 MeSO3H (6.2 µL, 94.7 µmol)。 将该溶液浓缩， 得到浅黄色固体 (54 mg， 96% 收率 )。 MS (m/z ): 501.8 (M+H)。
     以下化合物基本上通过实施例 48 的方法来制备 ：。实施例 50 N-(4-(6- 氨基 -1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1- 苯基 -1,2- 二 氢吡啶 -3- 甲酰胺甲磺酸盐
     向 5-(4- 氨基 -2- 氟苯氧基 )-1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁酯 (170 mg， 474 μmol) 和 6- 甲基 -2- 氧代 -1- 苯基 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酸 (120 mg， 0.52 mmol) 在 DMF (5 mL) 中的溶液中添加 HOBt (60 mg， 0.44 mmol)、 EDCI(90 mg， 0.47 mmol) 和 N- 甲基吗啉 (0.5 mL)。 在将该反应混合物在 60℃下搅拌过夜之后， 将其在 EtOAc (50 mL) 和饱和 NH4Cl 水溶液 (30 mL) 之间分配。分离有机相， 干燥， 再浓缩， 残留物通过硅胶柱色谱法提纯， 用 PE:EtOAc (1:1) 洗脱， 得到产物 (65 mg， 24.1% 收率 )。MS (m/z ): 570.2 [M+H])。
     向 5-(2- 氟 -4-(6- 甲基 -2- 氧代 -1- 苯基 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺基 ) 苯氧 基 )-1H- 吲唑 -6- 基氨基甲酸叔丁酯 (65 mg， 0.114 mmol) 在 DCM (10 mL) 中的溶液中添 加 TFA (1 mL， 13.5 mmol)。在将反应在室温下搅拌过夜之后， 将它浓缩。将残留物在饱和NaHCO3 水溶液 (30 mL) 和 DCM (50 mL) 之间分配， 并分离有机相， 干燥， 再浓缩。残留物通 过硅胶柱色谱法提纯， 用 DCM:MeOH(20:1) 洗脱， 得到所需产物 (35 mg， 65.3% 收率 )。 MS (m/ z ): 470.1 (M+H)。
     向 N-(4-(6- 氨基 -1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧代 -1- 苯 基 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺 (35 mg， 74.6 mol) 在丙酮 (10 mL) 中的溶液中添加 MeSO3H (7.16 mg， 74.6 μmol)。 在将该反应混合物在室温下搅拌 0.5 小时之后， 将其浓缩。 残留物 用乙醚洗涤， 干燥， 得到 N-(4-(6- 氨基 -1H- 吲唑 -5- 基氧基 )-3- 氟苯基 )-6- 甲基 -2- 氧 代 -1- 苯基 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺甲磺酸盐 (39 mg， 92.5 % 收率 )。MS (m/z ): 470.1 (M+H)。
     以下化合物基本上通过实施例 50 的方法来制备 ：。实施例 55 N-(3- 氟 -4-(6-(2- 甲基吗啉基 )-1H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺
     向 10 mL 螺 口 小 瓶 内 添 加 3- 氟 -4-(6-(2- 甲 基 吗 啉 基 )-2-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-2H- 吲 唑 -5- 基 氧 基 ) 苯 胺 (44 mg， 103.17 μmol)、 1-(4- 氟 苯 基 )-2- 氧 代 -1,2- 二 氢 吡 啶 -3- 甲 酸 (42 mg， 0.18 mmol)、 EDCI(45.177 mg， 232.13μmol)、 HOBT(23.699 mg， 154.75 μmol)， 随后添加 DMF (5 mL， 64.66 mmol) 和 DIPEA (44.980 μL， 257.92 μmol)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应稀释到 EtOAc (50 mL) 中， 并 用饱和氯化钠水溶液 (5×25 mL) 洗涤。将有机层用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再浓缩至干燥。将 残留物上硅胶柱提纯， 用己烷 (A) 和 EtOAc (B) 洗脱， 梯度经 40 分钟从 80% (A):20% (B) 到 30% (A):70% (B)， 在 30:70 比率下保持 15 分钟， 获得作为所需产物 N-(3- 氟 -4-(6-(2- 甲 基吗啉基 )-2-( 四氢 -2H- 吡喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-2- 氧 代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲酰胺的黄色固体 (70 mg， 99% 收率 )。MS (m/z ): 641.8 (M+H)。
     向 圆 底 烧 瓶 内 添 加 N-(3- 氟 -4-(6-(2- 甲 基 吗 啉 基 )-2-( 四 氢 -2H- 吡 喃 -2- 基 )-2H- 吲唑 -5- 基氧基 ) 苯基 )-1-(4- 氟苯基 )-2- 氧代 -1,2- 二氢吡啶 -3- 甲 酰胺 (66 mg， 102.86 μmol) 和 MeOH (5 mL， 123.54 mmol)。向所得混合物中添加 MeSO3H (20.229 µL, 308.57 µmol)， 并将该反应混合物加热至 40℃， 保持 6 小时。 将反应混合物浓 缩并用溶于 DCM(100 mL) 中。将该溶液用饱和氯化钠水溶液 (20 mL) 和饱和碳酸氢钠水溶 液 (1×20 mL) 的混合物洗涤。有机溶液用 DCM (1×25 mL) 萃取， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 再 浓缩。该残留物上硅胶柱提纯， 用 DCM (A) 和 MeOH 的 10% DCM 溶液 (B) 洗脱， 梯度经 60 分 钟从 100% (A) 到 70% (A):30% (B)， 得到作为所需产物的浅黄色固体 (40 mg， 62% 收率 )。 MS (m/z ): 557.8 (M+H)。
     以下化合物基本上通过实施例 55 的方法来制备 ：*: 甲磺酸盐基本上通过实施例 3 中的成盐步骤的相同方法来制备。
     下面的试验证明， 某些本发明的化合物有效地抑制细胞中的 c-Met 磷酸化， 有效 地抑制活体内 c-Met， 并且在某些异种移植模型中证明了剂量依赖性抗肿瘤活性。
     c-Met 蛋白表达和提纯 将人 c-Met 的激酶结构域 (KD) ( 从 Gly 966 到 Ser 1390, NCBI NM_000245) 克 隆 到 pFastBac®HT 载 体 (Invitrogen, Carlsbad, CA) 中。 使 用 Bac-to-Bac® 系 统(Invitrogen) 将 His-c-Met KD 结构体转座到杆状病毒 DNA 中。SF9 细胞用重组杆状病毒 感染。该受感染细胞通过离心来收获， 收集细胞颗粒， 在 -80℃下储藏。细胞在缓冲液 A(40 mM 三 ( 羟甲基 ) 氨基甲烷 (Tris)， pH 7.5， 500 mM NaCl， 20% 甘油和 10 mM 咪唑 ) 中溶解。 将细胞溶解物匀质化和离心。上清液用次氮基三乙酸镍 (Ni-NTA) 树脂孵育， 装载到柱中。 蛋白质用缓冲液 B ( 缓冲液 A+0.3M 咪唑 ) 洗脱， 将含有 c-Met 的级分汇集在一起， 填充到 Superdex®200 柱 (Amershan Bioscience , Piscataway， NJ) 中， 用缓冲液 C (40 mM Tris， pH 7.5， 250 mM NaCl 和 10% 甘油 ) 洗脱。
     HGF 刺激的 Met (pY1349) NCI-H460 细胞型 ELISA 将 NCI-H460 细胞 ( 从 ATCC 购买 ) 在补充有 10% 胎牛血清 （FBS）的 RPMI 1640 培养 基 (Invitrogen) 中培养， 以 20000 细胞 / 孔的密度和 80 μL 体积平板接种 （在 70% 融合之 前） 到 96 孔平底板中。细胞然后在细胞培养孵育器 (5% CO2， 95% 相对湿度 (RH) 和 37℃ ) 中孵育过夜， 并使之附着于板上。下一个早晨， 细胞用 2 倍体积的低血清培养基 （RSM） (补 充有 0.5% FBS 的 RPMI 1640 培养基） 洗涤。在除去最后一次洗液之后， 将 80 μL 的的 RSM 添加到细胞板的每一个孔中。将细胞板在细胞培养孵育器中孵育 2.5 小时， 然后定量加入 化合物。化合物抑制剂首先以 10 mM 溶解在 100% 二甲亚砜中， 然后用 2% DMSO RSM 稀释至 100μM。随后， 制备在 100μM-0.005μM 范围内的化合物系列稀释物 (1:3)。细胞计量添 加 20 μL 的化合物备料， 以产生 0.4% 的最终 DMSO 浓度和 20-0.001μM 之间最终化合物 浓度剂量。 在定量添加化合物之后， 将细胞板轻轻搅动以便混合， 然后在细胞培养孵育器中 孵育 30 分钟。在定量添加完成后， 通过以在 RMS 中的 100 ng/mL 的最终浓度添加 20μL/ 孔的肝细胞生长因子 （HGF） 来刺激细胞 （除了 MIN 孔以外的所有孔被刺激， MIN 孔定量添加 20 μL RSM） 。在细胞培养孵育器中孵育 10 分钟后， 从细胞板孔中除去液体， 通过添加补 充有磷酸酶 I 和 II 和蛋白酶抑制剂 (Sigma, St. Louis, MO) 的 50 μL 的冰冷的 Meso Scale Discovery® (MSD, Gaithersburg, Maryland) 1X 溶解缓冲液 (150 mM NaCl, 20 mM Tris, pH 7.5, 1 mM EDTA, 1 mM 乙二醇四乙酸和 1% TRITON® X-100) 来使细胞溶解。 在室温下溶解 30 分钟之后， 将溶解物转移和捕获到 BSA 封闭 ( 在 1X Tris 洗涤缓冲液中 的 30 mg/mL Block A) 的 MSD® Multi-Spot 96 孔 4-spot PhosphoMet 板上， 然后用 Tris 洗涤缓冲液洗涤一次。在 2 小时捕获 （在室温下） 之后， 从 MSD® 板上除去溶解物， 再用 1X Tris 洗涤缓冲液洗涤板。在印迹之后， 将 25 μL 的 5 nM Sulfo-Tag Anti-Total Met 抗 体 ( 检测抗体 , 在补充有 10 mg/mL BSA 和 0.1% Blocker D-R 的 1X Tris 洗涤缓冲液 中制备的 MSD®(MSD®)) 添加到 MSD® 板的孔中。在 1 小时捕获 （在室温下） 之后， MSD® 板孔 用 1X Tris 洗涤缓冲液洗涤， 然后添加 150μL 的 1X Read Buffer T ( 具有表面活性剂 , MSD®)。在添加 Read Buffer 之后， 立即用 SECTOR 6000 MSD® Imager 读板器分析板。相对 IC50 值使用 MSD 活性单位通过计算相对于板上 “MIN” 和 “MAX” 对照物的抑制百分率， 然后 将抑制百分率值和十点剂量反应数据拟合到四参数逻辑斯谛方程来测定。 该试验具有 2.06 的最小显著性比率 (MSR)。对于所有实施例化合物， IC50 值小于 0.2 μM。例如， 本试验中 的实施例 1 的平均 (n=6) IC50 值 (50% 抑制浓度 ) 是 0.0352 μM， 指示它有效地抑制细胞 中的 c-Met 磷酸化。
     c-Met 活体内靶点抑制试验 S114 细胞 ( 由 PHS 批准， 同时过表达人 HGF 和人 c-Met) 在补充有 10% 胎牛血清的生长培养基 ( 达尔伯克氏改良伊格尔培养基 ) 中培养和扩展。收获细胞， 用磷酸盐缓冲盐水 6 TM 洗涤两次， 将 2×10 个细胞与等体积的 BD Matrigel 基质 (BD Bioscience , Franklin , NJ) 混合， 皮下注射到裸鼠的胁腹中 （无胸腺裸鼠， 购自 Harlan, Indianapolis, IN） 。在植 入之后 8 天， 通过经口管饲法， 将化合物 （在 10% 阿拉伯树胶或 1% 羧甲基纤维素 /0.5% 十二 烷基硫酸钠 /0.05% 防沫剂中配制为悬浮液） 以 50mg/kg 给药于动物。在给药后 2 小时处死 动物， 采集肿瘤， 冷冻储藏至需要时。
     冷冻肿瘤使用研钵 - 研棒 （motar-pastel） 粉碎。 将该粉碎组织转移到装有 Lysing Matrix D 珠粒 (MP Biomedicals, Solon, OH) 和 600 μL 溶解缓冲液 (RIPA 缓冲液 , 含 有 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 脱氧胆酸钠 , 0.1% SDS, 购 自 Boston Bioproducts) 的管内。使用 FastPrep® 细胞破碎仪 (MP Biomedicals) 来破碎 组织和裂解细胞。溶解物通过 20 号针， 转移到清洁管内。蛋白浓度通过 Bradford 方法来 测定。
     将肿瘤溶解物加载到 MSD® phosphor-Met ELISA 板上， phosphor-c-Met 水平使用 与 H460 细胞型 ELISA 相同的操作规程来测定。对于所有实施例化合物， 在 50 mg/kg 的剂 量下 S114 活体内抑制值为等于或大于 50%。例如， 实施例 1 是 c-Met 磷酸化的有效抑制剂， 具有 2.9 mg/kg 的 ED50 值 （在肿瘤中产生 50% 抑制的剂量） ， 指示它是有效的活体内 c-Met 抑制剂。
     异种移植肿瘤模型 将人恶性胶质瘤细胞 U87MG、 人胃癌细胞 MKN45、 人非小细胞肺癌细胞 H441 和人肾癌细 胞 Caki-1 扩增培养， 采集， 并皮下注入到无胸腺裸鼠的后胁上。试验化合物在适当的载体 中制备， 当建立肿瘤时 （在植入之后 7-21 天） 通过经口管饲法给药。肿瘤反应通过在治疗 过程中每周两次进行的肿瘤体积测量来确定。肿瘤体积抑制 (% 生长抑制 ) 通过比较治疗 组与载体对照组来计算。体重被作为毒性的一般衡量标准。实施例 1 的化合物在这些模型 中证明了优异的剂量依赖的抗肿瘤活性。例如， 当剂量为 1.3 mg/kg ( 口服 (PO)， 每日两 次 (BID)×35) 时， 实施例 1 能够导致 U87MG 肿瘤的 59% 生长抑制。在 4 mg/kg 剂量 (PO， BID×35) 时， 获得了 82% 生长抑制。在 12 mg/kg 剂量 (PO， BID×3 5) 时， 达到了 92% 生长 抑制。
     c-Met 相关肿瘤和异种移植模型 c-Met 超量表达是包括肺部肿瘤、 乳腺肿瘤、 结肠直肠肿瘤、 胃部肿瘤、 肾脏肿瘤、 胰腺 肿瘤、 头和颈部肿瘤在内的许多人体肿瘤的共同特征 (1,2)。激酶结构域中的 c-Met 激活 突变被暗示为几种肿瘤例如遗传性乳头状肾细胞癌、 儿童期肝细胞癌和胃癌的原因 (3-7)。 Pfizer 的 c-Met 抑制剂在包括 U87MG、 GTL16、 H441、 Caki-1 和 PC3 在内的许多人体异种移 植肿瘤中证明了抗肿瘤功效 (8)。
     1. Christinsen, JG., Burrows, J. 和 Salgia, R. Cancer Letters 225: 1-26, 2005。
     2. Birchmeier, C., Birchmeier, W., Gherardi, E. 和 Vande Woude, GF. Nat Rev Mol Cell Biol 4: 915-925, 2003。
     3. Di Renzo, MF., Olivero, M., Martone, T. 等人 , Oncogene 19: 1547-1555, 2000。4.Lee, JH., Han, SU, Cho, H. 等人 , Oncogene 19: 4947-4953,2000。 5. Ma, PC., Kijima, T., Maulik, G. 等 人 , Cancer Res 63 : 6272-6281, 2003。
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     7. Schmidt, L., Duh, FM., Chen, F. 等人 , Nat Genet 16: 68-73, 1997。
     8. Zou, HY., Li, Qiuhua., Lee, JH. 等 人 , Cancer Res 67: 4408-4417, 2007。
     本发明的化合物优选作为通过各种途径给药的药物组合物配制。最优选， 这 种组合物用于口服给药。这种药物组合物及其制备方法是本领域所公知的。例如参见 REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro 等人编 , 第 19 版 , Mack Publishing Co., 1995)。
     式 I 的化合物一般在宽剂量范围内是有效的。例如， 日剂量正常是在约 1 mg 到约 200 mg 总日剂量， 优选 1 mg 到 150 mg 总日剂量， 更优选 1 mg 到 50 mg 总日剂量的范围内。 在有些情况下， 在上述范围的下限以下的剂量水平可能绰绰有余， 而在其它情况下， 可以使 用更大的剂量。 以上剂量范围没有打算以任何方式限制本发明的范围。 应当理解， 实际上给 药的化合物的量将由医生根据相关情况来决定， 包括所要治疗的疾病、 所选择的给药途径、 实际给药的一种或多种化合物、 个体患者的年龄、 体重和反应以及患者症状的严重度。
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