技术领域
本发明涉及抗氧化剂制备领域，具体涉及一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法。
背景技术
三叶青，正名三叶崖爬藤，又名蛇附子，金线吊葫芦，葡萄科草质藤本。全草均可入药。主要生长在浙江、湖南、江西、福建、湖北、广东、广西、四川等地区。具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效，具备很好的药用价值。
锌元素是维持机体正常生理功能和生化代谢所必须的微量元素，锌在人体生长发育、生殖遗传、免疫、内分泌等重要生理过程中起着极其重要的作用。
锌元素被发现具有很多重要作用，它可以促进人体生长发育，维持人体正常食欲，促进伤口愈合，维持男性正常的精子功能，提高抵抗力，改善糖代谢等。
抗氧化剂是指能防止或延缓食品氧化，提高食品的稳定性和延长贮存期的食品添加剂。抗氧化剂的正确使用不仅可以延长食品的贮存期、货架期，给生产者、消费者带来良好的经济效益，而且给消费者带来更好的食品安全。
因此，研发一种食品抗氧化剂，使其不仅具有提高机体抗氧化性能的作用，又可以作为补锌剂，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法，其包括以下步骤：
（1）将三叶青前处理：
取三叶青地上部位洗净，晾干，粉碎；
（2）三叶青多糖提取：
采用一定温度的热水浸提三叶青粉末数小时，收集滤液，并在滤液中加入一定体积氯仿和正丁醇进行搅拌，然后离心除去蛋白层和有机层，将剩余滤液透析至体系无有机溶剂后冷冻干燥得三叶青多糖；
（3）制备三叶青锌多糖抗氧化剂：
将三叶青多糖配制成一定浓度的三叶青多糖溶液，然后加入一定浓度的锌源溶液，所述锌源为硫酸锌，氯化锌或者醋酸锌，所述三叶青多糖与锌源质量比为1:1–1:5，然后将反应体系置于40-90℃搅拌；
搅拌过程往反应体系里加入氢氧化钠溶液，控制反应体系的pH值在5-12，反应持续60-300min；
反应结束后，离心取上清液，将上清液用透析袋透析，收集溶液进行冷冻干燥，得到三叶青锌多糖抗氧化剂。
所述步骤（2）热水浸提条件为：温度40~90℃，时间为3~8h,料液比为1：10~1:50 g/mL。
所述步骤（2）加入的氯仿与正丁醇的体积比为3:1-6:1。
所述步骤（3）三叶青多糖配制的浓度为1~20mg/ml, 锌源溶液中锌离子浓度为1~20mg/ml，氢氧化钠浓度为1mol/L，反应pH为5-12，反应持续60-300min。
本发明采用以上技术方案，从三叶青地上部提取中药活性物质多糖，并与锌源（硫酸锌，氯化锌，醋酸锌）反应，制备得到三叶青锌多糖抗氧化剂。本发明制备得到的三叶青锌多糖抗氧化剂在提高机体抗氧化能力的同时，还可以作为补锌剂，维持机体的正常生理功能，其锌含量为20mg/g左右。另外，产品中含有三叶青中提取出的活性物质多糖，大大提高了原有的药理活性，比如具备了更高的抗氧化能力等。本发明制备的三叶青锌多糖抗氧化剂的抗氧化能力比同浓度的三叶青多糖高30%左右。
具体实施方式
一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将三叶青前处理：
取三叶青重要部位洗净，晾干，粉碎；
其中，取材部位是三叶青的地上部位。
（2）三叶青多糖提取：
采用40~90℃温度的热水，按料液比为1：10~1:50 g/mL，浸提三叶青粉末3~8h后，收集滤液，并在滤液中加入3:1-6:1体积比例的氯仿和正丁醇进行搅拌，然后离心除去蛋白层和有机层，将剩余滤液透析至体系无有机溶剂后冷冻干燥得三叶青多糖；
（3）制备三叶青锌多糖抗氧化剂：
将三叶青多糖配制成1~20mg/ml浓度的三叶青多糖溶液，然后加入1~20mg/ml浓度的锌源，所述锌源为硫酸锌，氯化锌或者醋酸锌，所述三叶青多糖与锌源质量比为1:1–1:5，然后将反应体系置于40-90℃搅拌；
搅拌过程往反应体系里加入1mol/L氢氧化钠溶液，控制反应体系的pH值在5-12，反应持续60-300min；
反应结束后，离心取上清液，将上清液用透析袋透析，收集溶液进行冷冻干燥，得到三叶青锌多糖抗氧化剂。
DPPH自由基清除能力测试：
用无水乙醇将自由基配制成1.3×10-3 mol/L的母液，使用时用无水乙醇稀释20倍，浓度为65µmol/L。取2mL样品溶液，加入65µmol/L自由基乙醇溶液2mL，室温下避光静置30min后，于517nm处测吸光度。
DPPH自由基清除率按以下公式计算：
清除率=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%
式中A0-2.0mL自由基溶液+2.0mL无水乙醇的吸光值;
Ai-2.0mL DPPH自由基溶液样品液的吸光值;
Aj-2.0mL无水乙醇+2.0mL样品液的吸光值。
DPPH自由基清除率越大，表明抗氧化能力越强。
实施例1
一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将三叶青前处理：
取三叶青重要部位洗净，晾干，粉碎；
其中，取材部位是三叶青的地上部位。
（2）三叶青多糖提取：
采用40℃温度的热水，按料液比为1：10g/mL，浸提三叶青粉末3h后，收集滤液，并在滤液中加入6:1体积比例的氯仿和正丁醇进行搅拌，然后离心除去蛋白层和有机层，将剩余滤液透析至体系无有机溶剂后冷冻干燥得三叶青多糖；
（3）制备三叶青锌多糖抗氧化剂：
将三叶青多糖配制成5mg/ml浓度的三叶青多糖溶液，然后加入20mg/ml浓度的锌源，所述锌源为硫酸锌，所述三叶青多糖与锌源质量比为1:5，然后将反应体系置于90℃搅拌；
搅拌过程往反应体系里加入1mol/L氢氧化钠溶液，控制反应体系的pH值在12，反应持续100min；
反应结束后，离心取上清液，将上清液用透析袋透析，收集溶液进行冷冻干燥，得到三叶青锌多糖抗氧化剂。
本实施例制备的三叶青锌多糖抗氧化剂，锌含量为20mg/g。
实施例2
一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将三叶青前处理：
取三叶青重要部位洗净，晾干，粉碎；
其中，取材部位是三叶青的地上部位。
（2）三叶青多糖提取：
采用60℃温度的热水，按料液比为1：30 g/mL，浸提三叶青粉末5h后，收集滤液，并在滤液中加入4:1体积比例的氯仿和正丁醇进行搅拌，然后离心除去蛋白层和有机层，将剩余滤液透析至体系无有机溶剂后冷冻干燥得三叶青多糖；
（3）制备三叶青锌多糖抗氧化剂：
将三叶青多糖配制成1mg/ml浓度的三叶青多糖溶液，然后加入10mg/ml浓度的锌源，所述锌源为氯化锌，所述三叶青多糖与锌源质量比为1:3，然后将反应体系置于70℃搅拌；
搅拌过程往反应体系里加入1mol/L氢氧化钠溶液，控制反应体系的pH值在7，反应持续60min；
反应结束后，离心取上清液，将上清液用透析袋透析，收集溶液进行冷冻干燥，得到三叶青锌多糖抗氧化剂。
本实施例制备的三叶青锌多糖抗氧化剂，锌含量为17mg/g。
实施例3
一种三叶青锌多糖抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将三叶青前处理：
取三叶青重要部位洗净，晾干，粉碎；
其中，取材部位是三叶青的地上部位。
（2）三叶青多糖提取：
采用90℃温度的热水，按料液比为1:50 g/mL，浸提三叶青粉末8h后，收集滤液，并在滤液中加入3:1体积比例的氯仿和正丁醇进行搅拌，然后离心除去蛋白层和有机层，将剩余滤液透析至体系无有机溶剂后冷冻干燥得三叶青多糖；
（3）制备三叶青锌多糖抗氧化剂：
将三叶青多糖配制成20mg/ml浓度的三叶青多糖溶液，然后加入1mg/ml浓度的锌源，所述锌源为醋酸锌，所述三叶青多糖与锌源质量比为1:1，然后将反应体系置于40℃搅拌；
搅拌过程往反应体系里加入1mol/L氢氧化钠溶液，控制反应体系的pH值在5，反应持续300min；
反应结束后，离心取上清液，将上清液用透析袋透析，收集溶液进行冷冻干燥，得到三叶青锌多糖抗氧化剂。
本实施例制备的三叶青锌多糖抗氧化剂，锌含量为33mg/g。
将本实施例1-3制备的三叶青锌多糖抗氧化剂与维生素进行自由基清除能力测试。对自由基的IC50值是指自由基清除率达到时，所用的还原剂的浓度。
表1 抗氧化能力测试结果
自由基清除能力测试结果显示，维生素的IC50值为1.55，三叶青多糖的IC50值为1.87。本实施例1的三叶青锌多糖抗氧化剂的IC50值为0.43，为维生素的0.27左右，为三叶青多糖的0.23倍。本实施例2的三叶青锌多糖抗氧化剂的IC50值为0.57，为维生素的0.36，为三叶青多糖的0.3倍。本实施例3的三叶青锌多糖抗氧化剂的IC50值为0.39，为维生素的0.25，为三叶青多糖的0.2倍。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。