凝血酶抑制剂 本发明涉及非缓慢结合性凝血酶抑制剂，制备该抑制剂的方法，含有该抑制剂的药物组合物，和这些凝血酶抑制剂作为抗血栓形成药物的用途。
人们现在将注意力集中在凝血酶的抑制剂作为潜在的抗凝剂。酶“凝血酶”的抑制剂，在凝血级联(cascade)内关键丝氨酸蛋白酶有时候被认为是抗凝血预防和治疗的潜在备选物。尤其凝血酶在其对凝血因子、循环血液组分的作用上有着几方面的影响，和血管壁的细胞使之在各种病理状态中成为特别有吸引力的目标。而且，与目前使用的抗凝剂有关的限制，尤其出血并发症的发生，使得有必要寻找更专一作用试剂。
许多肽(样)丝氨酸蛋白酶抑制剂已经被公开，在其中有凝血酶的转变状态抑制剂。然而，后者化合物中许多是缓慢结合型抑制剂。凝血酶的缓慢结合抑制剂的使用倍受批评。在活体内，凝血酶可以稳定地在血浆中产生而且凝血酶抑制剂主要通过抑制凝血酶介导的放大步骤减缓凝血酶的形成来起作用。为了减缓该放大级联，非缓慢结合型抑制剂是优选的。将需要更大剂量的缓慢结合型抑制剂来获得同样的效果，为此相应地增加了副作用的危险。
相关的凝血酶抑制剂由Brady等人公开于生物有机&药物化学，3(1995)，1063-78，其中D-Phe-Pro-Arg-酰胺和D-Phe-Pro-Lys-X衍生物已经被公开，X是酮酯或胺。这些化合物被公开为缓慢结合型凝血酶抑制剂，同样这些化合物从本发明中排除。为了寻找非缓慢结合型凝血酶抑制剂，Jones等人，J.Enzyme Inhibition(酶抑制期刊)，9(1995)，43-60，试图通过使用D-Cha-Pro-Lys-COOH衍生物来获得一些改进。然而，尽管这些衍生物被证明是更具潜力的凝血酶抑制剂，但它们仍然显示出缓慢结合性能。
X是羧基酰胺或羧酸。这些化合物，其中特别公开的Me-D-Phe-Pro-Lys-COOH，被分类为缓慢结合型抑制剂。因此，这一化合物不会满足本发明地要求并从保护范围中排除。
具有烷基取代赖氨酸的凝血酶抑制剂公开于US5,523,308。在更早期的文献中Phe-Pro-Lys序列例如被Iwanowicz等人在生物有机&药物化学简报，2(1992)，1607-12中进行了描述，它公开了D-Phe-Pro-Lys-X衍生物，X尤其是酮酯。这些化合物也被描述为缓慢结合型凝血酶抑制剂。
另外还公开了用于抑制不同丝氨酸蛋白酶的其它类型的肽类。Tsutsumi等人在药物化学期刊，37(1994)，3492-3502中描述了具有噻唑和苯并噻唑C-末端的肽样化合物。已发现此类噻唑衍生物具有比相应的噻吩类似物高300倍以上的潜力。进一步发现C端杂环基团将提供与蛋白酶脯氨酰基内肽酶的组胺之间关键的氢键相互作用。虽然它进一步建议这一特征能够延伸到其它的丝氨酸蛋白酶，但没有特意提到凝血酶蛋白酶。Tsutsumi的机理解释后来受到Edwards等人在J.Med.Chem.(药物化学期刊)，38(1995)，76-85中的挑战，但这些作者都发现D-Phe-Val-Pro-Val-X型的弹性蛋白酶抑制剂，其中X是噻唑和苯并噻唑，是相关丝氨酸蛋白酶的非缓慢结合型抑制剂。这些作者建议开发肽基α-酮杂环作为其它丝氨酸蛋白酶的抑制剂。
本发明涉及以下惊人的发现：Edwards、Tsutsumi和其它人的启示也适用于凝血酶抑制剂。由Lewis、Jones和Brady公开的这些化合物的C-端杂环的应用提供了对凝血酶具有非缓慢结合性能的有潜力的凝血酶抑制剂。而且，这些化合物中许多显示出改进的生物半衰期和口服生物利用率。
所以本发明涉及具有以下通式的非缓慢结合型凝血酶抑制剂：
A-B-C-Lys-D其中A是H，2-羟基-3-环己基-丙酰基-，R1，R1-O-CO-，R1-CO-，R1-SO2-，-(CHR2)nCOOR3，或N-保护基，
其中R1选自-(1-6C)亚烷基-COOH，(1-12C)烷基，(2-12C)链烯基，
(6-14C)芳基，(7-15C)芳烷基和(8-16C)芳基链烯基，其芳基可被(1-6C)
烷基、(2-12C)烷氧基、羟基或卤素取代；
R2是H或具有与R1相同的意义；
R3选自H，(1-12C)烷基，(2-12C)链烯基，(6-14C)芳基，(7-15C)芳烷
基和(8-16C)芳基链烯基，其芳基可被(1-6C)烷基、(2-12C)烷氧基、羟
基或卤素取代；
n是1-3的整数；B是键，L-Asp或其酯衍生物，Leu，norLeu，-N(苄基)-CH2-CO-，-N(2-1，2-二氢化茚)-CH2-CO-，D-1-Piq，D-3-Piq，D-Tiq，Atc或具有疏水性芳族侧链的D-氨基酸；C是Azt，Pro，Pec，norLeu(环)Gly，通式-N[(3-8C)环烷基]-CH2-CO-或-N(苄基)-CH2-CO-之一的一个氨基酸，D选自COOH，四唑，噁唑，噻唑和苯并噻唑；或A和C具有前述意义，B是D-(3-8C)环烷基丙氨酸，和D是四唑，噁唑，噻唑或苯并噻唑；或其前体药物；或其药物学上可接受的盐；但化合物Me-D-Phe-Pro-Lys-COOH除外。
本发明的化合物可用于治疗和防止凝血酶介导的和与凝血酶有关的疾病。这包括凝血级联被活化的许多血栓形成和前血栓形成症状，这些疾病包括但不限于，深静脉血栓形成，肺栓塞，血栓性静脉炎，血栓或栓塞导致的动脉闭塞，在血管成形术或血栓溶解过程中或之后的动脉再闭塞，伴随动脉受伤或侵袭性心脏病过程的再狭窄，手术后静脉血栓形成或栓塞，急性或慢性动脉粥样硬化，中风，心肌梗死，癌症和癌转移，和神经变性疾病。本发明的化合物也可用作体外血液管路中的抗凝剂，正如在渗析和外科中所需要的。本发明的化合物还可以用作体外抗凝剂。
根据本发明的优选化合物是其中D是COOH的化合物。还有，优选A是H，(1-12C)烷基，-CO-(7-15C)芳烷基，-SO2-(1-12C)烷基，-SO2-(6-14C)芳基，或-SO2-(7-15C)芳烷基；B是键，L-Asp，norLeu，D-1-Piq或D-Phe；和C是Pro，norLeu(环)Gly，或-N-环戊基-CH2-CO-。更优选的是满足以下情况的非缓慢结合型凝血酶抑制剂：其中A是-SO2-苄基，B是键，和C是norLeu(环)Gly，或其中A是-SO2-乙基，B是D-Phe，和C是Pro；或其中A是氢，B是D-1-Piq和C是Pro。
根据本发明的其它化合物是其中D是噁唑或噻唑的那些。此外，优选A是H，(1-12C)烷基，2-羟基-3-环己基-丙酰基-，-CO-(CH2)nCOOH，-CO-(7-15C)芳烷基，-SO2-(6-14C)芳基，-SO2-(7-15C)芳烷基，-SO2-(1-12C)烷基，-(CHR2)nCOOR3，R2是H或(1-12C)烷基和R3是H，(1-12C)烷基或苄基；和C是Pro，norLeu(环)Gly，或-N[(3-8C)环烷基]-CH2-CO-。特别优选的是其中A是-(CH2)nCOOR3，R3是H，(1-12C)烷基或苄基；B是D-(3-8C)环烷基丙氨酸，或任意性被烷氧基或卤素单取代的D-Phe；和C是Pro的非缓慢结合型凝血酶抑制剂。本发明的最优选化合物是其中D是噻唑的那些化合物。特别优选的是非缓慢结合型抑制剂HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)。
在A部分的定义中所定义的N-保护基是在肽中所使用的任何N-保护基。合适的N-保护基见于T.W.Green和P.G.M.Wuts：有机合成中的保护基团，第二版(Wiley，NY，1991)以及见于肽，分析，合成，生物学，3卷，E.Gross和J.Meienhofer编(Academic Press，NewYork，1981)。
这里所使用的烷基是具有1-12个碳原子的支化或未支化烷基，如甲基，乙基，异戊基，十二烷基和类似基团。
术语(1-6C)亚烷基是指具有1-6个碳原子的支化或未支化亚烷基，如-(CH2)m-和m是1-6，-CH(CH3)-，-CH(CH3)-(CH2)-等。优选的亚烷基是亚甲基。
链烯基是具有2-12个碳原子的支化或未支化不饱和链烯基，例子是乙烯基，丙烯基，烯丙基和类似基团。
芳烷基和芳基链烯基分别是被一个或多个芳基取代的和碳原子总数分别是7-15和8-16的烷基和链烯基。优选的芳烷基例如式-(CH2)p-CH-(C6H5)2，p是1或2，或任意性被卤素取代的-(CH2)q-C6H5，q是1，2或3。
在本发明的化合物中使用的在上述定义和在芳基的定义中的芳基是具有6-14个碳原子的芳族结构部分。芳基可进一步含有一个或多个杂原子，如N，S或O。芳基的例子是苯基，萘基，(异)喹啉基，2，3-二氢化茚基等。最优选的是苯基。芳基可被一个或多个烷基(优选甲基)，烷氧基(优选甲氧基)，羟基或卤素所取代。术语卤素是指氟，氯，溴或碘。氯是优选的卤素。
术语D-1-Piq和D-3-Piq分别是指1-和3-羧基全氢异喹啉。术语Tiq是指1，2，3，4-四氢异喹啉-羧酸。Atc是2-氨基四氢化萘-2-羧酸。术语Azt和Pec分别是指2-氮杂环丁烷羧酸和2-哌啶酸。
术语norLeu(环)Gly是指具有下式的结构片段：
术语疏水性芳族侧链是指被一个或多个(6-14C)芳基(它可含有杂原子，例如氮原子)如苯基、吡啶基、萘基、四氢萘基等取代的(1-12C)烷基，该疏水性侧链可被疏水性取代基如卤素(优选氯)，三氟甲基，低级烷基(例如甲基或乙基)，低级烷氧基(例如甲氧基)，苯氧基，苄氧基等所取代。
术语(3-8C)环烷基是指环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基或环辛基。
四唑，噁唑，噻唑和苯并噻唑分别具有下式：
本发明还涉及所述通式的化合物的前体药物，它在被施用后能够代谢成活性化合物。合适的前体药物是例如所述通式的N-烷氧基羰基保护的(优选N-乙氧基羰基)衍生物。
这里所使用的术语药物学上可接受的盐是指保持了母体化合物的所需生物活性并不会产生任何不希望有的毒性作用的盐类。此类盐的例子是用无机酸例如盐酸，溴酸，硫酸，磷酸，硝酸等形成的酸加合盐。盐类也可以用有机酸如乙酸，草酸，酒石酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，葡糖酸，柠檬酸，苹果酸，抗坏血酸，苯甲酸，单宁酸，pamoic acid，藻酸，聚谷氨酸等形成。盐类可用多价金属阳离子如锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍等形成，或用从N，N’-二苄基亚乙基二胺或亚乙基二胺或它们的混合物形成的有机阳离子形成(例如单宁酸锌盐)。
本发明的化合物具有一个或多个手性碳原子，所以许多化合物可以作为纯对映体，或作为对映体的混合物，或作为含有非对映体的混合物获得。获得纯对映体的方法在现有技术中是众所周知的，例如，对从旋光性酸和外消旋混合物获得的盐进行结晶，或用手性柱进行色谱分离。对于非对映体，可以使用直相或反相柱。
本发明进一步包括制备所述通式的化合物的方法，该方法包括将被适当保护的氨基酸或氨基酸类似物加以偶联，随后除去保护基。
根据所述通式的化合物可按照与此类化合物类似的方式制备。为此，合适地Nα保护的(和侧链保护的，若存在活性侧链)氨基酸衍生物或肽在溶液中或在固体载体上被活化和偶联到合适地羧基保护的氨基酸或肽衍生物上。α-氨基官能团的保护一般可用尿烷官能团如酸不稳定的叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Z)和取代的类似基团或碱不稳定的9-芴基-甲氧基羰基(Fmoc)基团来实施。Z基团也可以通过催化氢化来除去。其它合适的保护基包括Nps，Bmv，Bpoc，Aloc，MSC等。对氨基保护基的较好的评述给出在肽，分析，合成，生物学，3卷，E.Gross和J.Meienhofer编(Academic Press，NewYork，1981)中。羧基的保护可通过形成酯如碱不稳定的酯如甲基或乙基酯，酸不稳定的酯如叔丁基酯或氢解不稳定的酯如苄基酯来实施。侧链官能团如赖氨酸的官能团的保护能够通过使用上述基团来实施。适当保护的氨基酸或肽的羧基的活化能够通过叠氮化物，混合酐，活性酯或碳化二亚胺方法，尤其通过加成催化和外消旋-抑制性化合物如1-羟基苯并三唑、N-羟基琥珀酰亚胺、3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-1，2，3-苯并三嗪、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺来实现。基于磷的酸类的酸酐也可以使用。参见，例如，肽，分析，合成，生物学(同上)以及纯和应用化学59(3)，331-344(1987)。
还有可能通过Merrifield的固相方法来制备化合物。不同的固体载体和不同的策略是已知的，参见Barany和Merrifield在肽，分析，合成，生物学，2卷，E.Gross和J.Meienhofer编(Acad.Press，N.Y.，1980)，Kneib-Cordonier和Mullen Int.J.Peptide Protein Res.，30，705-739(1987)以及Field和Noble Int.J.Peptide Protein Res.，35，161-214(1990)。
保护基的除去，和对于固相肽合成的情况，从固体载体上的清除，能够以不同途径来进行，这取决于这些保护基的性质和与固体载体连接的连接基的类型。通常在酸性条件和在清除剂的存在下实施去保护。参见，例如，肽，分析和合成，生物学(同上)中的3、5和9卷系列。
另一种可能性是在此类化合物的合成中使用酶；对于这方面的评述参见，例如，H.D.Jakubke在肽，分析，合成，生物学，9卷，S.Udenfriend和J.Meienhofer编(Acad.Press，N.Y.，1987)。
然而，这些化合物可用于制备药物，这些药物用于治疗与不希望有的血液凝聚有关的疾病。在这一情况下，所合成的具体化合物典型地与药物载体结合。药物载体可以从与注射用的无菌水那样较简单的物质变化到与微球和可生物降解植入物那样较复杂的物质。
作为药物，这些化合物优选通过口服、皮下、表面、鼻内、静脉内、肌内或局部(例如，经植入物)等途径施用。贮存施用也是可能的。
这些化合物和组合物的施用的精确剂量和方式将必然取决于被施用药物的各主体的需要，痛苦的程度或要求和当然还有医师的判断。一般来说肠胃外施用要求比其它主要取决于吸收的施用方法更低的剂量。然而，举例来说，剂量是0.001-100mg/kg体重，优选0.01-10mg/kg体重。
用这些化合物制得的药物也可以用作急性抗凝治疗的辅助剂。在这种情况下，该药物与用于治疗此类疾病的其它化合物一起施用。
该化合物还可以与可植入的药物器具如在US专利4,767,628(其内容被引入本文供参考)中描述的那些一起施用。该器具将含有足够量的化合物以缓慢地释放出化合物(例如达1个月以上)。
用来制造药物(含有供肠内或肠胃外施用的化合物)的方法被描述在标准参考物上，Gennaro等人，里明顿(Remington)药物科学(第18版，Mack Publishing Company，1990，尤其参见部分8：药物制剂和它们的制备)，1519-1580页。与药物学上合适的辅助剂混合，这些化合物可被压制成固体剂量单位，如丸剂和片剂，或被加工成胶囊或栓剂。借助于药物学上合适的液体，这些化合物也能够以溶液、悬浮剂、乳液的形式施用，例如，用作注射制剂，或作为喷雾剂，例如用作鼻用喷雾剂。
为了制造剂量单位，例如片剂，可以考虑普通的添加剂如填料，色料，聚合粘结剂和类似物。总的来说，能够使用不干扰活性化合物的作用的任何药物学上可接受的添加剂。可与组合物一起施用的合适载体包括以合适的量使用的乳糖，淀粉，纤维素衍生物和类似物，或它们的混合物。
本发明进一步通过下面的说明性实施例来解释。
实施例1
3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)
3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基-甲基酯
向3，3-二苯基丙酸(5.0g)在乙酸乙酯(100ml)中的冷溶液中连续添加DCCI(1，3-二环己基碳化二亚胺；5.03g)，HOBt(1-羟基-苯并三唑水合物；3.28g)，H-Pro-OMe.HCl(3.66g)和三乙基胺(3.1ml)。反应混合物在0℃下被搅拌1小时，并在室温下保持一夜。反应混合物被冷却至-20℃和通过过滤除去DCU(1，3-二环己基脲)。滤液连续用5％碳酸氢钠，水，5％硫酸氢钾和饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯；9/1 v/v)得到5.68g的3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基甲基酯，为结晶粉末物。TLC：Rf＝0.75，硅胶，二氯甲烷/乙酸乙酯＝7/3 v/v。 3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基-OH
将3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基-甲基酯(5.6g)溶于二噁烷/水中；7/3v/v(60ml)，在室温下用4M氢氧化钠溶液(6.2ml)分几份处理30分钟，保持pH值在10-10.5之间。30分钟后，将反应混合物用水(60ml)稀释，添加4M盐酸直到pH为2.0为止，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水，饱和的氯化钠水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥和通过蒸发除去溶剂而得到3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基-OH，为浆状物(5.18g)。TLC：Rf＝0.65，硅胶，EPAW(乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水)63/20/6/11 v/v/v/v。Boc-Lys(Cbz)-NMeOMe
Boc-Lys(Cbz)-OH.DCHA(10g)被悬浮在二氯甲烷(200ml)中。悬浮液用冷0.1N盐酸溶液洗涤两次。2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(6.0g)和盐酸O，N-二甲基-羟基胺(1.82g)被加入到所得到的有机相中，通过添加三乙基胺将pH值调整到8。反应混合物在室温下被搅拌1小时。混合物连续用冷2N盐酸溶液，水，5％碳酸氢钠，和水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤和蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/甲醇；5/5v/v)得到Boc-Lys(Cbz)-NMeOMe(7.2g)。TLC：Rf＝0.55，硅胶，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v。Boc-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
向正丁基锂(63.9mmol)在乙醚(58ml)中的冷(-78℃)的、搅拌溶液中滴加2-溴噻唑(10.5g)在乙醚(30ml)中的溶液。溶液在-78℃下被搅拌30分钟，之后缓慢添加Boc-Lys(Cbz)-NMeOMe(8.2g)在干THF(四氢呋喃；75ml)中的溶液。混合物在-78℃下被搅拌1小时，然后，加入5％的碳酸氢钠水溶液。让混合物升至室温并分层。水相用乙醚萃取。合并的有机相用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷；3/1v/v)得到Boc-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(8.6g)。TLC：Rf＝0.77，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA
将Boc-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(500mg)溶于50％的TFA(三氟乙酸)/二氯甲烷(5ml)中并在室温下搅拌1小时。通过蒸发除去溶剂后以定量产量分离出粗H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA，并立即用于下一步中。TLC：Rf＝0.25，硅胶，EPAW＝60/20/6/11 v/v/v/v。3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
向3，3-二苯基丙酰基-脯氨酰基-OH(385ml)在二甲基甲酰胺(5ml)中的冷(0℃)溶液中连续添加DCCI(270mg)，HOBt(176mg)，H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA(515mg)和N-乙基吗啉(0.28ml)。反应混合物在0℃下被搅拌1小时，并在室温下保持一夜。反应混合物被冷却至-20℃和通过过滤除去DCU。滤液被蒸发至干。残余物溶于乙酸乙酯并连续用5％碳酸氢钠水溶液，水，5％硫酸氢钾和饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷；4/1 v/v)得到3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(332mg)。TLC：Rf＝0.40，硅胶，乙酸乙酯/庚烷；3/1 v/v。3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)
3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(320mg)在室温下用TFA/苯硫基甲烷10/1 v/v(3.3ml)处理3小时。反应混合物被真空浓缩，残余物被溶于水中。水相用乙醚彻底地洗涤。
使用20％A/60％B/20％C-20％A/80％C的梯度洗脱体系，经45分钟，以20ml/min的流速将含有3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)的水相直接加入到制备性HPLC Supelcosil LC-18-DB柱中(A：0.5M磷酸钠缓冲液pH2.1，B：水，C：乙腈/水；3/2 v/v)。
产量：47mg 3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)。TLC：Rf＝0.57，硅胶，EPAW；63/20/6/11 v/v/v/v。Rt(LC)：32.9分钟20％A/60％B/20％C-20％A/0％B/80％C，在40分钟内。
实施例2
按照与实施例1所述的相似的方式制备：
(a).H-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：25.67分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(b).H-D-1-Tiq-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：23.40分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。(Tiq＝四氢异喹啉)
(c).H-D-(p-Cl)-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：30.47分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(d).1，2-二氢化茚甘氨酰-(N-环丙基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：27.88分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(e).H-D-Phe-(N-环戊基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：31.07分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(f).乙酰基-D-Phe-(N-环丙基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：33.73分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(g).H-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：30.59分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。(Cha＝环己基丙氨酸)
(h).H-D-Phe-(N-环丙基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：5.1分钟isocratic；55/45 MeOH/25mM磷酸盐pH＝7
(i).3，3-二苯基丙酰基-(N-环丙基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：8.1分钟isocratic；75/25 MeOH/25mM磷酸盐pH＝7
(j).H-D-Phe-(N-环丁基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：30.59分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
(k).H-Atc-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：27.79+28.04分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C 40分钟。(Atc＝2-氨基1，2，3，4-四氢化萘-2-羧酸)
(l).H-D-Phe-(N-苄基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：16.99分钟；20％A/60％B/20％C-20％A/0％B/80％C40分钟。
(m).H-D-Cha-(N-环丙基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：30.84分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C40分钟。
(n).p-氯-3-苯基丙酰基-(N-环戊基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)Rt(LC)：36.15分钟；20％A/60％B/20％C-20％A/0％B/80％C 40分钟。
(o).(N-苄基)-Gly-(N-环戊基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)Rt(LC)：28.14分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/80％C 40分钟。实施例3HOOC-CH2-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)N-环戊基-Gly-OMe
向23.2g H-Gly-OMe.HCl在200ml的甲醇中的溶液中添加15.6g环戊酮。混合物被搅拌15分钟，添加7g氰基硼氢钠。pH值被调节到6。反应混合物在室温下被搅拌16小时。为了完成反应，添加1g环戊酮并继续搅拌。用TLC监视反应。当所有的起始原料消失时，混合物被酸化到pH值为2并搅拌30分钟。除去溶剂并用水稀释残余物。溶液用醚洗涤，pH值用6N氢氧化钠调节到12，用二氯甲烷萃取。合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发得到16g油。Rf＝0.46，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v。N-(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OMe
向26g H-D-Cha-OMe·HCl在300ml的乙腈的搅拌溶液中添加17g溴乙酸叔丁基酯。反应的pH值用二异丙基乙基胺调节到8.5。反应混合物在室温下被搅拌16小时并真空蒸发。残余物被溶于二氯甲烷中，溶液用水洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发。在硅胶上、己烷∶乙酸乙酯9∶1 v/v中进行色谱分离得到20g标题产物。Rf＝0.46，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水 15.75/5/1.5/2.75 v/v/v/v。N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OMe
将20gN-(叔丁氧基-甲基)-D-Cha-OMe和17g二碳酸二叔丁基酯的溶液的pH值用二异丙基乙基胺调节到pH 8.5。混合物在室温下被搅拌16小时。真空除去溶剂。向残余物中添加二氯甲烷和水。有机层被分离，用1N冷盐酸，水，5％的碳酸氢钠和水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，滤液被蒸发成无定型固体，得到28g。Rf＝0.60，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水252/20/6/11 v/v/v/v。N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OH
将28g N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OMe在420ml的二噁烷：水9/1中的溶液在室温下用足够的1N氢氧化钠处理90分钟，保持pH值为13。酸化后，混合物被倾入水中，用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥。蒸发滤液，得到24g标题化合物。Rf＝0.23，硅胶，二氯甲烷/甲醇9/1 v/v。N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-OMe
向24g N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OH在300ml的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中添加10.2g N-环戊基-Gly-OMe和21.2g 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3，-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)。混合物的pH值被调节到8.5。混合物在室温下被搅拌一夜，真空浓缩。向残余物中加入水和乙酸乙酯。有机层被分离并用1N盐酸，水，5％碳酸氢钠和水洗涤，经硫酸钠干燥。滤液被蒸发和残余物在硅胶上、作为洗脱液的己烷：乙酸乙酯8∶2 v/v中进行色谱分离。包含标题产物的级分被合并和蒸发。产量：17g。Rf＝0.57，硅胶，己烷/乙酸乙酯7/3 v/v。N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-OH
使用与N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-OH相同的程序，17gN，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-OMe被皂化，得到15g无定型固体。在硅胶上用二氯甲烷/甲醇95/5 v/v作为洗脱液进行色谱分离，得到13g标题化合物。Rf＝0.30，硅胶，二氯甲烷/甲醇9/1 v/v。HOOC-CH2-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例1所述的相同的方法，使用N，N-Boc，(叔丁氧基羰基-甲基)-D-Cha-(N-环戊基)-Gly-OH，制备该化合物。Rt(LC)：23.57分钟；20％A，60％B，20％C-20％A，80％C在40分钟内。(a).按照以上所述相同的方法，使用盐酸脯氨酸和HONSu(与实施例11中一样)，制备HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)：31.44分钟；20％A，80％B，0％C-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例43-苯基丙酰基-Pro-LysΨ[COCO]-OHBoc-Lys(Cbz)-OMe
Boc-Lys(Cbz)-OH(25g)溶于二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v(500ml)中。加入TBTU(21.1g)，通过添加三乙基胺调节溶液pH值到8。反应混合物在室温下被搅拌1小时。混合物连续用冷2N盐酸溶液，水，5％碳酸氢钠和水洗涤，有机层经硫酸钠干燥，过滤和蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷＝1/4 v/v)得到Boc-Lys(Cbz)-OMe(26.7g)。TLC：Rf＝0.79，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。Boc-Lys(Cbz)Ψ[氰基乙酸酯(cvanoacetate)]
向Boc-Lys(Cbz)-OMe(20g)在干二氯甲烷(600ml)的冷(-78℃)溶液中以一定的速率滴加二异丁基氢化铝(127ml在己烷中的1M溶液)保持反应温度低于-70℃。所得到的溶液在-78℃被搅拌30分钟。向反应混合物中加入5℃的柠檬酸溶液(500ml)。两层混合物在室温下被搅拌10分钟，分离各层，水层用二氯甲烷萃取两次。合并的二氯甲烷层用水洗涤，经硫酸钠干燥和过滤。溶液被放置在氮气气氛下并用冰水浴冷却。添加氰化钠(24.85g)和氯化苄基三乙基铵(2.89)在水(500ml)中的溶液。在剧烈搅拌下，经30分钟分几份(6×6ml)加入乙酐。分离有机层，用二氯甲烷两次萃取水层。合并的二氯甲烷层用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝9/1 v/v)得到Boc-Lys(Cbz)-Ψ[氰基乙酸酯](17.2g)。TLC：Rf＝0.60，硅胶，二氯甲烷/乙酸乙酯＝7/3 v/v。Boc-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe
将Boc-Lys(Cbz)Ψ[氰基乙酸酯](17.2g)在乙醚/甲醇＝3/1 v/v(500ml)中的溶液在氮气气氛下冷却到-20℃，引入54.7g气态氯化氢并保持低于-5℃。反应混合物在4℃下保持一夜。向混合物中滴加水(85ml)，保持温度低于5℃。在室温下搅拌4小时后，分离有机层并用水洗涤。水层用氯化钠饱和，用仲丁醇/二氯甲烷＝3/2 v/v萃取。有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发得到17.4g粗胺。残余物溶解在二甲基甲酰胺中(DMF，200ml)，添加双-(叔丁基)酐(8.7g)和三乙基胺直到pH值为8为止。反应混合物在室温下被搅拌1夜。在减压下通过蒸发除去溶剂。残余物溶于乙酸乙酯中，用水和盐水连续洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷＝1/1 v/v)得到Boc-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe(6.22g)。TLC：Rf＝0.75，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe
将Boc-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe(60mg)溶于50％的三氟乙酸/二氯甲烷(6ml)中并在室温下搅拌1小时。在通过蒸发除去溶剂后，粗胺被定量地分离，并立即用来制备3-苯基丙酰基-Pro Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe。3-苯基丙酰基-Pro-OH溶于干DMF(5ml)中。加入三乙基胺(196ml)后，反应混合物被放置在氮气气氛下并冷却到-15℃。随后添加氯甲酸异丁基酯(183ml)，混合物在-15℃下被搅拌15分钟。粗胺溶于干DMF(5ml)中，使用三乙基胺中和，滴加到冷的混合酸酐溶液中。反应在-15℃下被搅拌1小时，随后在0℃下保持一夜。混合物被蒸发至干。残余物被溶于乙酸乙酯中并连续用水，5％的碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝95/5 v/v)得到3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe(246mg)。TLC：Rf＝0.92，硅胶，EPAW＝63/20/6/11 v/v/v/v。3-苯基丙酰基-Pro-LysΨ[CHOHCO]-OMe
向3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Cbz)Ψ[CHOHCO]-OMe(240mg)在甲醇(5ml)中的溶液中添加10％的钯/活性炭(50mg)和216ml的2N盐酸溶液。混合物在常压和室温下被氢化1小时。通过过滤除去钯催化剂，通过减压蒸发除去溶剂，定量得到3-苯基丙酰基-Pro-LysΨ[CHOHCO]-OMe。TLC：Rf＝0.13，硅胶，二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v。3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe
向苯基丙酰基-Pro-LysΨ[CHOHCO]-OMe(196mg.)在干DMF(5ml)中的溶液中添加双(叔丁基)酸酐(102mg)，通过添加三乙基胺将pH值调节到8.5。反应混合物在室温下被搅拌一夜。混合物被真空蒸发，所得到的残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝98/2 v/v)得到3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe(189mg)。TLC：Rf＝0.43，硅胶，二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH
将苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe(185mg.)溶于二噁烷/水＝7/3(5ml)中并在室温下用2N氢氧化钠溶液(267ml)分几份处理30分钟保持pH值在10-10.5之间。30分钟后，反应混合物用水(20ml)稀释，添加2M盐酸溶液直到pH为2.0为止，用二氯甲烷萃取水层。合并的有机相用水(50ml)，盐水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩得到3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH(228mg)。TLC：Rf＝0.60，硅胶，EPAW＝63/20/6/11 v/v/v/v3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH
向苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH(220mg)在干二氯甲烷(5ml)的溶液中添加255mg periodinane(Dess-Martin试剂)。在室温下搅拌1小时后，加入2％的硫代硫酸钠溶液(15ml)，混合物在室温下搅拌30分钟。分离有机层，用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发得到粗酮酸3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH(411mg)。TLC：Rf＝0.47，硅胶，EPAW＝63/20/6/11 v/v/v/v3-苯基丙酰基-Pro-LysΨ[COCO]-OH
在室温下，3-苯基丙酰基-Pro-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH(411mg)用90％的三氟乙酸/水处理1小时。反应混合物被真空浓缩，残余物被溶于水中，直接使用20％A/70％B/10％C-20％A/0％B/80％C的梯度洗脱体系，以20ml/min的速率，经45分钟加入制备性HPLC Supelcosil LC-18-DB柱中。(A：0.5M磷酸盐缓冲剂pH2.1，B：水，C：乙腈/水＝3/2)。产量：71mg的3-苯基丙酰基-Pro-LysΨ[COCO]-OH。Rf：24.9分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。按照上述相同的方法制备：(a).3，3-二苯基丙酰基-Pro-LysΨ[COCO]-OHRt(LC)：36.42分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。(b).3-苯基丙酰基-(N-环戊基)-Gly-LysΨ[COCO]-OHRt(LC)：34.29分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C 40分钟。(c).3-[(p-Cl)-苯基]丙酰基-(N-环戊基)-Gly-LysΨ[COCO]-OHRt(LC)：39.52分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。(d).3-[(p-Cl)-苯基]丙酰基-Pro-LysΨ[COCO]-OHRt(LC)：31.31分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。(e).萘基磺酰基-Asp-Pro-LysΨ[COCO]-OHRt(LC)：30.45分钟；20％A/80％B/0％C-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例5H-D-Cha-Pro-Lys-(2-苯并噻唑基)Boc-Lys(Cbz)-Ψ[CHOH]-(2-苯并噻唑基)
向Boc-Lys(Cbz)-OMe(1g)在二氯甲烷(25ml)中的冷(-78℃)溶液中滴加二异丁基氢化铝(DiBAL-H；7.6ml的在己烷中的1M溶液)，从而保持反应温度低于-70℃。所得到的溶液在-78℃下搅拌30分钟。将5％的柠檬酸溶液加入到反应混合物中。两层混合物在室温下被搅拌10分钟，分离各层，用二氯甲烷两次萃取水层。合并的二氯甲烷层用水，5％的碳酸氢钠，水洗涤，经硫酸钠干燥和过滤。溶液被放置在氮气气氛下，添加2-(三甲基甲硅烷基)苯并噻唑(0.79g)，反应混合物在室温下被搅拌16小时。蒸发至干后，残余物溶于干四氢呋喃(15ml)中，并添加氟化四丁基铵(3.8ml的在THF中的1M溶液)。混合物在室温下被搅拌2小时并添加水。该产物被二氯甲烷萃取，并通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝9/1 v/v)得到724mg Boc-Lys(Cbz)-Ψ[CHOH]-(2-苯并噻唑基)。TLC：Rf＝0.35，硅胶，二氯甲烷/乙酸乙酯＝7/3 v/v。Boc-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)
向Boc-Lys(Cbz)-Ψ[CHOH]-(2-苯并噻唑基)(700mg)在干二氯甲烷(10ml)的溶液中添加1g periodinane(Dess-Martin试剂)。在室温下搅拌1小时后，加入2％的硫代硫酸钠溶液，混合物在室温下再搅拌30分钟。分离有机层，用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v)得到193mgBoc-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)。TLC：Rf＝0.85，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)
将Boc-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)(193mg)溶于50％的TFA/二氯甲烷(2ml)中，并在室温下搅拌1小时。在通过蒸发除去溶剂后，粗胺被定量地分离，并立即用来制备Boc-D-Cha-Pro-Lys-(Cbz)-(2-苯并噻唑基)。Boc-D-Cha-Pro-OH溶于干二甲基甲酰胺(5ml)中。加入二异丙基乙基胺(DIPEA，66ml)后，反应混合物被放置在氮气气氛下并冷却到-15℃。随后添加氯甲酸异丁基酯(50ml)，混合物在-15℃下被搅拌15分钟。粗胺溶于干DMF(4ml)中，使用二异丙基乙基胺中和并滴加到冷的混合酸酐溶液中。反应在-15℃下被搅拌1小时，随后在0℃下保持一夜。混合物被蒸发至干。残余物被溶于乙酸乙酯中并连续用水，5℃的碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过在硅胶上的色谱分离方法来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷＝1/1 v/v)得到Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)(191mg)。TLC：Rf＝0.66，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。H-D-Cha-Pro-Lys-(2-苯并噻唑基)
在室温下，Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-苯并噻唑基)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v处理3.5小时。反应混合物被真空浓缩，残余物溶于水中。水相用乙醚彻底洗涤。包含H-D-Cha-Pro-Lys-(2-苯并噻唑基)的水层直接使用20％A/80％B-20％A/20％B/60％C的梯度洗脱体系，以20ml/min的速率，经40分钟加入制备性HPLC Supelcosil LC-18-DB柱中。(A：0.5mM磷酸钠缓冲剂pH2.1，B：水，C：乙腈/水＝3/2 v/v)。产量：98mg的H-D-Cha-Pro-Lys-(2-苯并噻唑基)。Rt(LC)：42分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例6H-D-Cha-Pro-Lys-(2-四唑基)Boc-Lys(Cbz)Ψ(CHOAc)-(2-四唑基)
向Boc-Lys(Cbz)Ψ[氰基乙酸酯](5.4g)在39ml的二甲基甲酰胺的溶液中添加801mg氯化铵和975mg叠氮化钠。反应混合物被加热到80℃并在氮气气氛下搅拌48小时。过滤出沉淀的盐，在减压下溶液被蒸发至干。得到4.9g所希望的化合物。TLC：Rf＝0.42，硅胶，甲苯/乙醇＝6/4 v/v。Boc-Lys(Cbz)Ψ(CHOH)-(2-四唑基)
将Boc-Lys(Cbz)Ψ(CHOAc)-(2-四唑基)(1.25g)溶于60ml的二噁烷/水7/3中，并添加2.65ml的2N氢氧化钠溶液。溶液在室温下被搅拌2.5小时，之后，反应完成。pH值被调节到5，所得的混合物在减压下蒸发至干。残余物溶于甲醇/二氯甲烷1/1中，过滤出不溶性的盐。得到1.27g脱乙酰化产物。TLC：Rf＝0.40，硅胶，甲苯/乙醇＝6/4 v/vBoc-Lys(Cbz)-(2-四唑基)
向0.56g Boc-Lys(Cbz)Ψ(CHOH)-(2-四唑基)在37ml的干二氯甲烷的溶液中添加1.38g Dess-Martin periodane试剂。混合物在室温下被搅拌30分钟，之后，反应用在水中的10％的硫代硫酸钠溶液骤冷。有机层用水和碳酸氢钠(5％，在水中)萃取，水层在用1-丁醇萃取后被合并。1-丁醇层在减压下被蒸发至干。残余物在硅胶柱上色谱分离，使用洗脱液：乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝263/20/6/11 v/v/v/v。产量：0.22g。TLC：Rf＝0.30，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝63/20/6/11 v/v/v/v。H-Lys(Cbz)-(2-四唑基).TFA.
Boc-Lys(Cbz)-(2-四唑基)(0.21g)溶于16ml的三氟乙酸/水9/1中。混合物在室温下被搅拌1小时，之后，溶液被真空浓缩得到油。产量：0.34g，立即用来制备三肽Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-四唑基)。Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-四唑基)
根据实施例1中对二肽部分所述的相同的方法制备Boc-D-Cha-Pro-OH(0.19g)。按照与实施例5中所述的相同的方法进行与H-Lys(Cbz)-(2-四唑基)(0.17g)的偶联。通过在硅胶上提纯(洗脱液：乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝163/20/6/11 v/v/v/v)得到0.21g所希望的化合物。TLC：Rf＝0.17，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝63/20/6/11 v/v/v/v。H-D-Cha-Pro-Lys-(2-四唑基)
除去保护基团，按照实施例5中类似的方法进行HPLC提纯。产量：20mg。Rt(LC)：23.3和24.5分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例7HOOC-CH2-CO-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)H-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA.
根据实施例5中所述的方法制备Boc-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。0.30g该三肽溶于3ml三氟乙酸/二氯甲烷1/1 v/v中，溶液在室温下被搅拌1小时。在减压下将溶液蒸发至干，与甲苯共蒸发三次。产量：定量，油，立即用于下一步中。TLC：Rf＝0.30，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝163/20/6/11 v/v/v/v。(叔丁基-OOC-CH2-CO)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
H-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA.(0.33g)溶于3ml干二氯甲烷中并添加76mg丙二酸单叔丁基酯，pH用三乙基胺调节到约8。然后，添加六氟磷酸苯并三唑基氧基三(二甲基氨基)鏻(211mg)，反应混合物在室温下被搅拌2小时，在4℃下再搅拌16小时。溶液被真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，并用水和盐水洗涤3次。在经硫酸镁干燥后，有机层再次被真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行色谱分离，使用庚烷/乙酸乙酯2/8 v/v作为洗脱液：得到270mg的酰化三肽。TLC：Rf＝0.21，硅胶，庚烷/乙酸乙酯＝8/2 v/v。HOOC-CH2-CO-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
除去保护基团，按照实施例5中类似的方法进行HPLC提纯。产量：124mg。Rt(LC)：38.23分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例8HOOC-(CH2)2-CO-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)(HOOC-(CH2)2-CO)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将H-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA.(0.33g)溶于3ml干二氯甲烷和0.335ml吡啶中。向此溶液中添加48mg琥珀酐，在氮气气氛下将所得到的溶液在室温下搅拌。四小时后，反应完成，用几滴水骤冷。混合物被真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，用酸，水和盐水洗涤，和经硫酸镁干燥。除去盐后，有机层被真空浓缩，得到320mg油。TLC：Rf＝0.37，硅胶，二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v。HOOC-(CH2)2-CO-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
除去保护性基团，按照实施例5中类似的方法进行HPLC提纯。产量：187mg。Rt(LC)：38.31分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例9HOOC-CH(CH3)-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)(叔丁基-OOC-CH(CH3))-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将H-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA.(0.33g)溶于2ml乙腈中。然后，添加0.50g 2-β-溴丙酸叔丁基酯，之后，添加25mg碘化钠。溶液的pH值用二异丙基乙基胺调节到8，并在室温下保持该碱度12天。反应混合物被真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，用水洗涤，经硫酸镁干燥和再次浓缩。残余物通过在硅胶上进行色谱分离，使用乙酸乙酯/甲苯1/1 v/v作为洗脱液。产量：279mg。TLC：0.75，硅胶，乙酸乙酯。HOOC-CH(CH3)-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
除去保护性基团，按照实施例5中类似的方法进行HPLC提纯。产量：40mg和29mg(分离的非对映体)。Rt(LC)：30.06分钟和34.87分钟(分离的非对映体)；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例10HOOC-(CH2)2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)(叔丁基-OOC-(CH2)2)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将H-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA(0.21g)溶于5ml乙腈中。然后，分3份添加1.84ml丙烯酸叔丁基酯。溶液的pH值用二异丙基乙基胺调整到8并在室温下保持该碱度13天。反应混合物被真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，用水洗涤，经硫酸镁干燥和再次浓缩。残余物通过在硅胶上进行色谱分离，使用乙酸乙酯/甲苯2/1 v/v作为洗脱液。产量：92mg。TLC：Rf＝0.62，硅胶，乙酸乙酯。HOOC-(CH2)2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
除去保护性基团，按照实施例5中类似的方法进行HPLC提纯。产量：40mg。Rt(LC)：32.83分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例11N-Me-D-norLeu-Pro-Lys-(2-噻唑基)H-D-norLeu-OMe.HCl
向270ml冷却到-15℃的甲醇中加入18.2g亚硫酰氯。随后，让温度上升到-10℃，保持20分钟不变，之后，加入10g H-D-norLeu-OH。温度缓慢升高，在回流下保持5小时不变。在4℃下，从甲醇和乙醚结晶得到该产物，得到12.9g。TLC：Rf＝0.61，硅胶，正丁醇/乙酸/水10/1/3v/v/v。Boc-D-norLeu-OMe.
将H-D-norLeu-OMe.HCl(12.9g)溶于200ml干甲醇中，之后，添加二碳酸二丁基酯(15.5g)和三乙基胺(19.8ml)。反应在室温下被搅拌3小时，之后，混合物被真空浓缩。然后，残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。产物在硅胶上进行色谱分离，使用庚烷/乙酸乙酯3/1 v/v。产量：16.9g。TLC：Rf＝0.55，硅胶，庚烷/乙酸乙酯3/1 v/v。N-Me-Boc-D-norLeu-OMe.
在氮气气氛下，将Boc-D-norLeu-OMe(16.9g)溶于200ml干二甲基甲酰胺中。然后，添加甲基碘(24.9ml)，冷却到0℃，加入氢化钠(3.31g)，在室温下在16小时内让混合物进行反应。混合物被真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，用稀释的盐酸(0.1N)，水，碳酸氢钠(5％)和水洗涤，干燥和再浓缩。得到18.8g烷基化产物。TLC：Rf＝0.56，硅胶，庚烷/乙酸乙酯3/1 v/v。N-Me-Boc-D-norLeu-OH.
将N-Me-Boc-D-norLeu-OMe(18g)溶于400ml的二噁烷/水9/1v/v中，溶液的pH值用1N氢氧化钠调节到12。反应进行2小时，保持pH值为12不变。接着的程序是涉及pH调节为2，用冰冷却，加入过量的水(400ml)和用二氯甲烷萃取。有机层用盐水洗涤，干燥，过滤和真空浓缩。得到18.9g包含一些二噁烷的产物。TLC：Rf＝0.26，硅胶，二氯甲烷/甲醇9/1 v/v。N-Me-Boc-D-norLeu-Pro-OH.
首先，从N-Me-Boc-D-norLeu-OH开始制备琥珀酰亚胺酯。将18g该衍生物溶于乙腈(250ml)中，然后，添加EDCI(14.5g)和N-羟基琥珀酰亚胺(HONSu)(8.7g)。反应在室温下需要16小时，之后，除去溶剂，残余物溶于乙酸乙酯，用水洗涤并干燥。得到24.3g粗ONSu酯。下一步将脯氨酸.HCl(20.9g)溶于300ml二甲基甲酰胺和300ml水中，pH值用2N氢氧化钠溶液调节到8。把ONSu酯的溶液(24.3g，在300ml二甲基甲酰胺中)滴加到该溶液中，保持pH值不变。5小时后，反应完成，之后，在减压下通过蒸发大量除去有机溶剂。添加过量的水(300ml)，pH值被调节为2。产物用乙酸乙酯萃取和用水洗涤。干燥，过滤和浓缩后，获得22.2g为黄色油的产物。粗产物通过在硅胶上进行色谱分离，使用乙酸乙酯/甲醇8/2 v/v作为洗脱液。产量：13.2g。TLC：Rf＝0.65，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝163/20/6/11 v/v/v/v。N-Me-D-norLeu-Pro-Lys-(2-噻唑基)
在N-Me-Boc-D-norLeu-Pro-OH.和H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA之间的混合酐偶联，去保护和提纯是根据实施例5中所述的方法进行的。产量：107mg。Rt(LC)：23.22分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例12N-Me-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
获得三肽的所有步骤是按照实施例11中所述的相同的方式来进行的，用Boc-D-Cha-OH开始。产量：253mg。Rt(LC)：31.82分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例13N-Me-D-Phe-N-环戊基-Gly-Lys-(2-噻唑基)N-Me-Boc-D-Phe-N-环戊基-Gly-OMe.
将N-Me-Boc-D-Phe-OH(根据实施例11制备)(26g)和N-环戊基-Gly-OMe(21g，参见实施例3)溶于300ml二甲基甲酰胺。然后，添加TBTU(36g)，pH值用二异丙基乙胺(20ml)调节到8。反应混合物被搅拌16小时，然后，真空浓缩，溶于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠(5％)和盐水洗涤，经硫酸镁干燥和再次真空浓缩。产量：24.8g。TLC：Rf＝0.62，硅胶，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v。N-Me-Boc-D-Phe-N-环戊基-Gly-OH.
将N-Me-Boc-D-Phe-N-环戊基-Gly-OMe(17.3g)溶于150ml四氢呋喃/水135/15 v/v，加入4g氢氧化钠(在水中)。2小时后，反应通过将pH调节到2而被停止，产物用二氯甲烷萃取。用水洗涤，经硫酸镁干燥，真空浓缩和从二氯甲烷/乙醚结晶后，反应得到13.1g。TLC：Rf＝0.52，硅胶，二氯甲烷/甲醇9/1 v/v。N-Me-D-Phe-N-环戊基-Gly-Lys-(2-噻唑基)
根据实施例11中所述的方法进行后继步骤。产量：110mg。Rt(LC)：33.43分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例14N-Me-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
根据实施例1中的描述制备N-Me-Boc-D-Phe-Pro-OH。与H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)的混合酐偶联，去保护和提纯是根据实施例5进行的。产量：148mg。Rt(LC)：27.22分钟；20％A，80％B-20％A，20％B，60％C在40分钟内。实施例153，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys(乙氧基羰基)-(2-噻唑基)
如实施例1中所述的来制备3，3-二苯基丙酰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)。溶液由20mg在二噁烷/水4/1(4ml)中的二肽组成，pH值用1N氢氧化钠调节到12。然后，添加22mg氯甲酰乙酯，溶液在室温下被搅拌2小时。混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取，用水洗涤，经硫酸镁干燥，真空浓缩，最后，由叔丁醇/水1/1 v/v冻干。产量：15mg。TLC：Rf＝0.92，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝63/20/6/11 v/v/v/v。实施例16HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噁唑基)Boc-Lys(Cbz)Ψ(CHOH)-(2-噁唑基)
在-78℃下和氮气气氛下，向0.975g Boc-Lys(Cbz)-OMe在25ml二氯甲烷的溶液中添加6ml在己烷中的1M二异丁基氢化铝溶液。15分钟后，反应完成。混合物倾入150ml 2％的柠檬酸溶液中并过滤。分离有机层，用水和盐水洗涤，干燥(硫酸镁)和浓缩。残余物用甲苯共蒸发得到0.92gBoc-Lys(Cbz)-H。该酸酐(0.89g)溶于1.4ml的甲苯中，添加0.90g 2-(三甲基甲硅烷基)噁唑(根据：Edwards，P.D.，Wolanin，D.J.，Andisik D.W.，Davis W.，J.Med.Chem.38，76(1995)制备)并在80℃加热。60小时后，反应混合物被浓缩，残余物溶于5ml四氢呋喃，用在四氢呋喃溶液中的3ml 3M氟化四丁基铵处理，在室温下搅拌2小时。混合物被浓缩，溶于乙酸乙酯中，用3％的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，干燥(硫酸镁)和蒸发。通过用乙酸乙酯/二氯甲烷＝2/1(v/v)至乙酸乙酯的梯度洗脱，在硅胶上由柱色谱加以提纯得到一种油状物，然后用乙酸乙酯/庚烷＝1/1(v/v)至乙酸乙酯/庚烷＝1/3(v/v)的梯度洗脱，在硅胶上再次进行色谱分离，得到0.22g标题化合物。TLC：Rf＝0.7，硅胶，乙酸乙酯。
Boc-Lys(Cbz)-(2-噁唑基)
向0.22g的Boc-Lys(Cbz)-Ψ[CHOH]-(2-噁唑基)在10ml二氯甲烷中的溶液中加入0.22g的periodiane(Dess-Martin试剂)。在室温下搅拌1.5小时后，加入10ml的5％硫代硫酸钠溶液，混合物在室温下搅拌15分钟。分离出有机层，用水、5％碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，然后加以浓缩。通过用庚烷/乙酸乙酯＝1/1(v/v)洗脱在硅胶上由色谱法提纯，得到162mg的标题化合物。TLC：Rf＝0.5，硅胶，庚烷/乙酸乙酯＝1/3(v/v)。
(tBuOOCCH2)(Boc)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噁唑基)
使用如实施例5所述的方法，将0.16g的Boc-Lys(Cbz)-(2-噁唑基)去保护和用0.19g的(tBuOOCCH2)(Boc)-D-Cha-Pro-OH偶联，获得0.19g的(tBuOOCCH2)(Boc)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噁唑基)。
TLC：Rf＝0.3，硅胶，庚烷/乙酸乙酯＝1/3(v/v)。
HOOCCH2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噁唑基)
使用如实施例5所述的方法。由0.19g的(tBuOOCCH2)(Boc)-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噁唑基)获得52mg标题化合物。
Rt(LC)：28.46分钟，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。
实施例17
乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys-(2-噻唑基)
Boc-L-α-氨基-ε-己内酰胺
向L-α-氨基-ε-己内酰胺(10g)在二噁烷/水(2/1 v/v)(30ml)中的搅拌溶液中加入1N氢氧化钠溶液(7.8ml)，随后添加碳酸二叔丁基酯(18.8g)。混合物在室温下被搅拌16小时并真空浓缩。残余物被溶于乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。粗物料与己烷一起被研磨，过滤和真空干燥，得到Boc-L-α-氨基-ε-己内酰胺(16g)。
TLC：Rf＝0.85，乙酸乙酯/庚烷1/1 v/v，在硅石上。
Boc-norLeu(环)Gly-OMe
将Boc-L-α-氨基-ε-己内酰胺(10g)溶于二氯甲烷(100ml)中。在-20℃下，缓慢地添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺在THF/环己烷(1/1 v/v)(1当量)中的1M溶液，混合物被搅拌30分钟。随后添加溴乙酸甲酯(4ml)，混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的双(三甲基甲硅基)酰胺在THF/环己烷中的溶液以迫使反应完成。混合物用二氯甲烷稀释，用0.1N盐酸溶液、水、5％碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：庚烷/乙酸乙酯6/4 v/v)，得到Boc-norLeu(环)Gly-OMe(12g)。TLC：Rf＝0.55，乙酸乙酯/庚烷6/4 v/v，在硅石上。
乙基SO2-norLeu(环)Gly-OMe.
将Boc-norLeu(环)Gly-OMe(3g)溶于50％的TFA/二氯甲烷(30ml)中，并在室温下搅拌1小时。反应混合物被真空蒸发。粗胺溶于二氯甲烷(30ml)中，在0℃下缓慢添加乙烷磺酰氯(1.29)g在二氯甲烷(10ml)中的溶液，在反应中添加三乙基胺以保持pH值为8。混合物在室温下被搅拌1小时，之后，混合物被真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯中并用5％碳酸氢钠溶液，水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯95/5 v/v％)，得到乙基SO2-norLeu(环)Gly-OMe(1.45g)。TLC：Rf＝0.30，二氯甲烷/乙酸乙酯9/1 v/v，在硅石上。
乙基SO2-norLeu(环)Gly-OH.
在室温下，将乙基SO2-norLeu(环)Gly-OMe(1.45g)在50ml二噁烷/水9/1 v/v中的溶液用足够的1N氢氧化钠处理2小时，保持pH为13。酸化后，混合物被倾入水中，用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤和经硫酸钠干燥。蒸发滤液得到600mg标题化合物。TLC：Rf＝0.45，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。
乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将乙基SO2-norLeu(环)Gly-OH(482mg)溶于干二甲基甲酰胺(5ml)中。在添加乙基二异丙基胺(0.36ml)后，反应混合物被放置在氮气气氛下并冷却到-20℃。随后添加氯甲酸异丁酯(140ml)，混合物在-20℃下被搅拌15分钟。将H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。TFA溶液溶于干二甲基甲酰胺(3ml)中，并滴加到冷的混合酸酐溶液中，通过添加乙基二异丙基胺保持pH值为8.5。反应混合物在-20℃下被搅拌15分钟。反应混合物被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％碳酸氢钠水溶液，水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：二氯甲烷/甲醇95/5 v/v)，得到乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(607mg)TLC：Rf＝0.63，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水60/3/1/2 v/v/v/v，在硅石上。
乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys-(2-噻唑基)
在室温下，将乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(600mg)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v处理4小时。反应混合物被真空浓缩并将残余物溶于水中。水相用乙醚彻底洗涤。水层被真空浓缩，用稀释的盐酸共蒸发和由水冻干。使用20％A/80％B-20％A/40％B/40％C的梯度洗脱体系，以50ml/min的速率，经40分钟将粗产物加入制备性HPLCDeltapack C18 RP柱中。产量：233mg的乙基SO2-norLeu(环)Gly-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)：26.73分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
实施例18
苄基SO2-norLeu(环)Gly-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例17中所述的相似的方法制备该化合物。Rt(LC)：37.05分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C 40分钟。
实施例19
7-甲氧基-2-萘基磺酰基-norLeu(环)Gly-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例17中所述的相似的方法制备该化合物。Rt(LC)：26.40分钟；20％A/60％B/20％C-100％C在40分钟内。
实施例20
(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)
2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羧酸
按照EP0643073，实施例1所述的方法合成2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羧酸。TLC：Rf＝0.85，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-O-tBu
向2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羧酸(500mg)在二甲基甲酰胺(5ml)中的冷溶液(0℃)中连续添加DCCI(1，3-二环己基碳化二亚胺；342mg)，HOBT(1-羟基苯并三唑水合物；319mg)，H-Pro-OtBu(270mg)和三乙基胺(0.55ml)。0℃下搅拌反应混合物1小时，然后在室温下保持一夜。反应混合物被冷却到-20℃，通过过滤除去DCU(1，3-二环己基脲)。将滤液真空浓缩，把残留物溶于乙酸乙酯中。溶液连续用5％碳酸氢钠水溶液，3％柠檬酸水溶液，水和盐酸洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：庚烷/乙酸乙酯4/1v/v)，得到2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-O-tBu(634mg)TLC：Rf＝0.90，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。
2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-OH.
在室温下，2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-O-叔丁基酯(600mg)在二氯甲烷(1ml)，三氟乙酸(3ml)，茴香醚(0.15ml)的混合物中被搅拌1小时。反应混合物在低温下被真空浓缩，残余物在pH9.5下被溶于水中。水相用乙醚洗涤，之后，水层通过2M盐酸溶液被酸化到pH2.5。水层用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩，得到2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-OH(588mg)。TLC：Rf＝0.54，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水60/3/1/2 v/v/v/v，在硅石上。2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-OH(500mg)溶于干二甲基甲酰胺(5ml)中。添加乙基二异丙基胺(0.41ml)后，反应混合物被放置在氮气气氛下并冷却到-20℃。随后添加氯甲酸异丁酯(156ml)，混合物在-20℃下被搅拌15分钟。将H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA(594mg)溶于干二甲基甲酰胺(3ml)中，并滴加到冷的混合酸酐溶液中，通过添加乙基二异丙基胺保持pH值为8.5。反应混合物在-20℃下被搅拌15分钟。反应混合物被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％碳酸氢钠水溶液，水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：二氯甲烷/甲醇95/5 v/v％)，得到2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(880mg)。TLC：Rf＝0.42，乙酸乙酯/庚烷3/1 v/v，在硅石上。(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)
在室温下，将(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R，S)-羰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)(875mg)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v(10ml)处理4小时。反应混合物被真空浓缩并将残余物溶于水中。水相用乙醚彻底洗涤。水层被真空浓缩，用稀释的盐酸共蒸发和由水冻干。使用20％A/80％B-20％A/53％B/27％C的梯度洗脱体系，以50ml/min的速率，经40分钟将粗产物加入制备性HPLC Deltapack C18 RP柱中。产量：211mg的(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)：28分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例21
乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Boc-D-Cha-Pro-OBzl(Bzl＝苄基)
根据实施例1中所述的相似的方法，使用Boc-D-Cha和Pro-OBzl制备Boc-D-Cha-Pro-OBzl。TLC：Rf＝0.5，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Cha-Pro-OBzl
将Boc-D-Cha-Pro-OBzl(3.8g)溶于50％的TFA/二氯甲烷(25ml)中并在室温下搅拌30分钟。反应混合物被真空蒸发。粗胺溶于二氯甲烷(50ml)中并在-78℃下添加乙烷磺酰氯(0.8ml)。在反应中，添加三乙基胺以保持pH为8。混合物在0℃下被搅拌3小时，之后，添加水(25ml)。在室温下再搅拌30分钟后，混合物被真空浓缩。残余物溶于乙醚中并用1N的盐酸溶液，水，5％的碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。用甲醇研磨粗原料得到乙基SO2-D-Cha-Pro-OBzl(3.0g)。TLC：Rf＝0.6，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Cha-Pro-OH
向乙基SO2-D-Cha-Pro-OBzl(10g)在四氢呋喃(250ml)中的溶液添加氟化四丁基铵在四氢呋喃(84ml)中的1M溶液。反应混合物在室温下被搅拌30分钟并倾入水中(1升)。水溶液用乙酸乙酯萃取。合并的有机层连续用1N盐酸溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过乙酸乙酯/二异丙醚提纯，得到乙基SO2-D-Cha-Pro-OH(6.0g)。TLC：Rf＝0.2，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水163/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将乙基SO2-D-Cha-Pro-OH(397mg)溶于干二甲基甲酰胺(3ml)中。添加乙基二异丙基胺(0.19ml)后，反应混合物被放置在氮气气氛下并冷却到-20℃。随后添加氯甲酸异丁酯(130ml)，混合物在-20℃下被搅拌15分钟。将H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA溶于干二甲基甲酰胺(3ml)中，并滴加到冷的混合酸酐溶液中，通过添加乙基二异丙基胺保持pH值为8.5。反应混合物在-20℃下被搅拌15分钟和在室温下被搅拌1小时。反应混合物被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％碳酸氢钠水溶液，水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发。残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷2/1 v/v)，得到乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(575mg)。TLC：Rf＝0.32，乙酸乙酯/庚烷2/1 v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)
在室温下，将乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(570mg)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v(44ml)处理4小时。反应混合物被真空浓缩并将残余物溶于水中。水相用乙醚彻底洗涤。水层被真空浓缩，用稀释的盐酸共蒸发和由水冻干。使用20％A/80％B-20％A/30％B/50％C的梯度洗脱体系，以80ml/min的速率，经40分钟将粗产物加入制备性HPLCDeltapack C18 RP柱中。产量：275mg的乙基SO2-D-Cha-Pro-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)：26.06分钟；20％A/60％B/20％C-100％C在40分钟内。实施例22乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)Boc-D-Phe-Pro-OBzl
根据实施例1中所述的相似的方法，使用Boc-D-Phe和Pro-OBzl制备该化合物。TLC：Rf＝0.9，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/3/1/2 v/vv/v，在硅石上。乙基SO2-D-Phe-Pro-OH
根据实施例21中所述的相似的方法，使用Boc-D-Phe-Pro-OBzl制备该化合物。TLC：Rf＝0.48，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水163/20/6/11v/v/v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
根据实施例21中所述的相似的方法，使用乙基SO2-D-Phe-Pro-OH和Lys(Cbz)-(2-噻唑基)制备乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。TLC：Rf＝0.32，乙酸乙酯/庚烷8/2v/v，在硅石上。乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)，
在室温下，将乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(336mg)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v(44ml)处理4小时。反应混合物被真空浓缩并将残余物溶于水中。水相用乙醚彻底洗涤。水层被真空浓缩，与稀释的盐酸共蒸发和从水中冻干。使用20％A/65％B/15％C-20％A/20％B/60％C的梯度洗脱体系，以50ml/min的速率，经40分钟将粗产物加入制备性HPLC Deltapack C18 RP柱中。产量：160mg的乙基SO2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)：39.47分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例23D-Hpl-Pro-Lys-(2-噻唑基)(Hpl＝3-六氢苯基乳酸)H-D-Hpl-OMe
将H-D-Cha-OH(1.0g)溶于1N盐酸(4.8ml)，水(19.4ml)和乙酸(9.7ml)的混合物中。在0℃下，缓慢添加亚硝酸钠(3.4g)在水(5.8ml)中的溶液，在室温下，混合物被搅拌一夜。随后，添加盐酸，37％，(4.8ml)和在室温下，混合物被搅拌15分钟。反应混合物被蒸发并将残余物溶于乙醚/乙酮中。过滤后，溶液被真空浓缩，粗物料在甲醇(25ml)中被搅拌18小时。pH值为1.5。反应混合物被蒸发至干，残余物在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：甲苯/甲醇97/3 v/v％)，得到H-D-Hpl-OMe(612mg)。TLC：Rf＝0.9，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水163/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。THP-D-Hpl-OMe(THP＝四氢吡喃)
向H-D-Hpl-OMe(450mg)在二氯甲烷(2ml)的搅拌溶液中连续添加3，4-二氢-2H-吡喃(0.285ml)和对甲苯磺酸吡啶鎓(60mg)。混合物在室温下被搅拌6小时，用乙醚稀释。混合物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。粗物料在硅胶上进行色谱分离来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷1/4v/v)，得到THP-D-Hpl-OMe(498mg)。TLC：Rf＝0.64，乙酸乙酯/庚烷1/2v/v，在硅石上。THP-D-Hpl-OH.
在室温下，将THP-D-Hpl-OMe(10.3g)在二噁烷/水9/1(200ml)中的溶液用足够的1N氢氧化钠处理18小时以保持pH值为12。酸化后，混合物被倾入水(500ml)中并用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤，和经硫酸钠干燥。滤液被蒸发得到6.6g标题化合物。TLC：Rf＝0.78，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水163/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。THP-D-Hpl-Pro-OH.
向THP-D-Hpl-OH.(5.87g)在乙腈(75ml)的溶液中连续添加EDCI(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物)(4.84g)和N-羟基琥珀酰亚胺(2.9g)。反应混合物在室温下被搅拌16小时。混合物被真空浓缩，残余物溶于乙酸乙酯中。溶液用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。将粗物料溶于二甲基甲酰胺(100ml)中并加入到脯氨酸.HCl在二甲基甲酰胺/水，1/1 v/v(200ml)中的溶液中，它通过氢氧化钠将pH值调节到8.5。搅拌一夜后，反应混合物被真空浓缩并将残余物溶于水中。这一水溶液在0℃下被调节至pH2.5，随后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层连续用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥和真空浓缩。粗物料通过在硅石上进行色谱分离加以提纯(洗脱液：乙酸乙酯/甲醇，8/2 6/4，v/v％)得到THP-D-Hpl-Pro-OH(6.75g)。
TLC：Rf＝0.52，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水163/20/6/11 v/v/v/v，在硅石上。THP-D-Hpl-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将THP-D-Hpl-Pro-OH(390mg)溶于干燥二甲基甲酰胺(5ml)。在添加乙基二异丙基胺(0.19ml)后，反应混合物在氮气气氛下静置和冷却至-20℃。随后添加氯甲酸异丁基酯(130ml)，混合物在-20℃下搅拌15分钟。将H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA(1.05eq)溶解于干燥二甲基甲酰胺(5ml)中，并滴加到冷的混合酸酐溶液中，通过添加乙基二异丙基胺将pH保持在8.5。反应混合物在-20℃下搅拌15分钟和在室温下搅拌2.5小时。反应混合物被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中，并连续地用5％碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过在硅石上的色谱分离来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷2/1 v/v)得到THP-D-Hpl-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(497mg)。
TLC：Rf＝0.42，在乙酸乙酯/庚烷2/1 v/v中，在硅石上。D-Hpl-Pro-Lys-(2-噻唑基)
THP-D-Hpl-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(470mg)用三氟乙酸/苯硫基甲烷10/1 v/v (38.5ml)在室温下处理4小时。反应混合物被真空浓缩和残余物被溶于水中。水相用乙醚彻底地洗涤。水层被真空浓缩，与稀盐酸共蒸发，和从水中冻干。将粗产物加入到制备性HPLC Deltapack C18 RP柱中，使用20％A/65％B/15％C/-20％A/20％B/60％C的梯度洗脱体系，时间：40分钟，流速：50ml/min。产量：75mg的D-Hpl-Pro-Lys-(2-噻唑基)。
Rt(LC)：40.00min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。
实施例24HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)H-D-Phe-OMe.HCl
向冷(-20℃)和干燥的甲醇中滴加亚硫酰氯(130ml)。添加H-D-Phe-OH.HCl(147.6g)，反应混合物在回流下加热30分钟，然后在室温下保持一夜。混合物被真空浓缩，与甲醇(3次)共蒸发。残余物从甲醇/乙醚中结晶，得到白色晶体粉末形式的H-D-Phe-OMe.HCl(187.4g)。TLC：Rf＝0.54，硅胶，正丁醇/乙酸/水10/1/3 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-D-Phe-OMe
将溴乙酸叔丁基酯(65ml)加入到H-D-Phe-OMe.HCl(65.2g)在400ml乙腈中的搅拌溶液中。混合物的pH值用N，N-二异丙基乙基胺调节至8.5。混合物在室温下被搅拌16小时并真空蒸发。将残余物溶于二氯甲烷中，溶液用水洗涤，用硫酸钠干燥和真空蒸发。在庚烷/乙酸乙酯9/1(v/v)中在硅胶上进行色谱分离，得到96.4g的N-(叔丁氧基羰基甲基)-D-Phe-OMe。TLC：Rf＝0.90，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水376/31/18/7 v/v/v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OMe
用N，N-二异丙基乙基胺将N-(叔丁氧基羰基甲基)-D-Phe-OMe(96.4g)和二碳酸二叔丁基酯(72.2g)在N，N-二甲基甲酰胺(400ml)中的溶液的pH值调节至8.5。混合物在室温下被搅拌48小时。真空除去溶剂。将二氯甲烷和水加入到残余物中。分离出有机层，用冷1N盐酸、水、饱和碳酸氢钠和水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，滤液进行蒸发。残余物在作为洗脱液的甲苯/乙酸乙酯9/1(v/v)中在硅石上进行色谱分离。含有N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OMe的级分被合并，然后蒸发。产量：115.3g。TLC：Rf＝0.77，硅胶，甲苯/乙酸乙酯9/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OH
N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OMe(115.3g)在800ml二噁烷/水＝9/1(v/v)中的溶液用足够的2N氢氧化钠处理，在室温下将pH保持在12达16小时。在酸化后，将混合物倾入水中，用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥。滤液被蒸发，得到104g的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OH。
TLC：Rf＝0.10，硅胶，甲苯/乙酸乙酯7/3 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBzl
向N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OH(5.3g)在N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的冷(0℃)溶液中连续添加1-羟基苯并三唑(2.8g)，二环己基碳化二亚胺(3.2g)，H-Pro-OBzl.HCl(3.78g)和三乙基胺(2.16ml)。混合物在0℃下被搅拌1小时，然后在室温下保持一夜。将混合物冷却至-20℃，通过过滤除去二环己基脲。滤液被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯和连续地用5％碳酸氢钠、水、2％柠檬酸和盐水洗涤，用硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物在作为洗脱液的庚烷/乙酸乙酯6/4(v/v)中在硅胶上进行色谱分离。含有N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBzl的级分被合并和蒸发。产量：4.35g。TLC：Rf＝0.74，硅胶，庚烷/乙酸乙酯1/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH
将10％钯/碳(450mg)加入到N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBzl(4.35g)在甲醇(50ml)中的溶液中。混合物在室温下在常压下被氢化45分钟。通过过滤除去钯催化剂，在减压下蒸发除去溶剂，得到3.48g N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-OH。
TLC：Rf＝0.63，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水 664/31/18/7 v/v/v/v。
N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
向375mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH和276ml N，N-二异丙基乙基胺在10ml的N，N-二甲基甲酰胺中的冷(-20℃)溶液中，添加100ml氯甲酸异丁基酯。反应混合物在-20℃下被再搅拌20分钟。将H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).TFA(362mg)溶于5ml N，N-二甲基甲酰胺中，用N，N-二异丙基乙基胺调节为8。此溶液被缓慢添加到反应混合物中。反应混合物在-20℃下被搅拌15分钟，随后加热到室温。反应混合物被蒸发至干并将残余物溶于乙酸乙酯中。有机相用5％的碳酸氢钠，水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩，得到622mg粗物料。使用二氯甲烷/甲醇97/3 v/v作为洗脱液，硅胶提纯得到394mgN-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。
TLC：Rf＝0.50，硅胶，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v。HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
根据实施例1中所描述的方法，将被保护三肽(394mg)用三氟乙酸和苯硫基甲烷处理，在HPLC纯化后得到206mg HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
Rt(LC)：27.9min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例25HOOC-CH2-D-p-OCH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照与实施例24中所述相似的方法制备HOOC-CH2-D-p-OCH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)，从H-D-p-OCH3-Phe-OH.HCl开始。对345mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-OCH3-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)进行去保护(参见实施例1)，在HPLC纯化后得到153mg该产物。Rt(LC)：28.9min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例26HOOC-CH2-D/L-m-F-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-OH.
根据实施例24中所述的类似的方法，H-D/L-m-F-Phe-OH.HCl(5g)被转化成N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-OH。产量：8g。
TLC：Rf＝0.65，硅胶，乙酸乙酯/甲醇9/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-Pro-OMe.
向N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-OH(7.9g)在N，N-二甲基甲酰胺(80ml)中的冷溶液(0℃)中连续添加1-羟基苯并三唑(4.0g)，二环己基碳化二亚胺(4.5g)，H-Pro-OMe.HCl(3.6g)和三乙基胺(3.25ml)。混合物在0℃下被搅拌1小时并在室温下保持一夜。混合物被冷却到-20℃，通过过滤除去二环己基脲。滤液被蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％的碳酸氢钠，水，2％的柠檬酸和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物在庚烷/乙酸乙酯7/3 v/v中的硅胶上进行提纯，得到6.9g该产物。TLC：Rf＝0.65，庚烷/乙酸乙酯1/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-Pro-OH.
将溶于二噁烷/水：9/1(v/v)(60ml)的6.9g的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-Pro-OMe用1N的氢氧化钠溶液(13.8ml)分几份处理16小时，使pH值保持在10-10.5之间。反应混合物用冰水稀释，用2N的盐酸溶液酸化直到pH值为2为止。水层用二氯甲烷萃取。然后，有机相用冷水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩得到14.7g粗物料。经在乙酸乙酯/甲醇9/1v/v中的硅胶上提纯得到5.22g。TLC：Rf＝0.20，硅胶，乙酸乙酯/甲醇8/2v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).
N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-OH(601.3mg)与H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)的偶联是在实施例24中所述的相同的条件下进行的。产量：684.3mg。TLC：Rf＝0.74，硅胶，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v。HOOC-CH2-D/L-m-F-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
在相同的条件下，按实施例1中所述用三氟乙酸和苯硫基甲烷处理N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-F-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基(673.5mg)，经HPLC提纯后得到259mg纯产物。Rt(LC)：28.4min和29.0min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例27HOOC-CH2-D-p-CF3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-p-CF3-Phe-OH.
根据实施例24中所述的类似的方法，将H-D/L-p-CF3-Phe-OH.HCl(10.12g)转化成N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-p-CF3-Phe-OH.。产量：12.23g。TLC：Rf＝0.64，硅胶，乙酸乙酯/甲醇9/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-CF3-Phe-Pro-OBzl.
根据实施例24中所述的相同的方法，将6.10g的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-p-CF3-Phe-OH偶联到H-Pro-OBzl上。完成后，非对映异构体通过硅胶分离，使用庚烷/乙酸乙酯75/25 v/v，得到0.63g纯净的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-CF3-Phe-Pro-OBzl.TLC：Rf＝0.35，硅胶，庚烷/乙酸乙酯7/3 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-CF3-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。
将N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-CF3-Phe-Pro-OBzl(630mg)还原，随后使用实施例24中所述的方法将其偶联到H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)上。产量：317.7mg。TLC：Rf＝0.46，二氯甲烷/甲醇95/5 v/v。HOOC-CH2-D-p-CF3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
从N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-CF3-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(306.5mg)中除去保护性基团是使用实施例24中所描述的相同的方法进行的。HPLC提纯后，分离157mg该产物。Rt(LC)：36.7min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例28HOOC-CH2-D-p-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OH.
根据与实施例24中所述类似的方法，将H-D-p-Cl-Phe-OH.HCl(10g)转化成N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OH.。产量：16.7g。TLC：Rf＝0.27，硅胶，乙酸乙酯/甲醇9/1 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-ONSu.
在室温下，将N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OH(14.67g)在250ml的乙腈溶液用N-羟基琥珀酰亚胺(4.11g)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)盐酸化物(6.86g)处理一夜。反应混合物被蒸发至干，残余物溶于乙酸乙酯中。有机相用水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩得到19.11g活性酯，它被直接用于下一步中。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-OH.
将H-Pro-OH.HCl(10.79g)溶于100ml N，N-二甲基甲酰胺和100ml水中。反应混合物的pH值用1N氢氧化钠溶液调节到8。之后，滴加溶于120mlN，N-二甲基甲酰胺的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-ONSu(19.11g)。反应在pH值为8和在室温下被搅拌一夜。反应混合物被冷却并用1N的盐酸调节到pH值为2。水层用二氯甲烷萃取。有机相用水洗涤，经硫酸钠干燥和真空蒸发。硅胶提纯，使用乙酸乙酯/甲醇9/1的梯度，TLC：Rf＝0.24，硅胶，乙酸乙酯/甲醇8/2 v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基).
根据实施例24中所述的方法，将N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-OH(369.4mg)转化成目标化合物。产量：249.1mg。TLC：Rf＝0.25，硅胶，二氯甲烷/甲醇97/3 v/v。HOOC-CH2-D-p-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例1中所述的方法，231.5mg的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-p-Cl-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)被去保护并提纯得到109.8mg该产物。Rt(LC)＝33.8min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例29HOOC-CH2-D-o-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例26中所述的相似的方法制备HOOC-CH2-D-o-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)，从H-D/L-o-Cl-Phe-OH.HCl开始。在保护的三肽阶段，两种非对映异构体被分离。根据实施例1中所述的方法，将230mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-o-Cl-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护，HPLC提纯后得到116mg该产物。Rt(LC)＝30.0min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例30HOOC-CH2-D/L-m，p-二-F-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例26中所述的相似的方法制备该化合物，从H-D/L-m，p-二-F-Phe-OH.HCl开始。除去被保护的三肽(720mg)的保护基团，之后，进行HPLC提纯，如实施例1所述的，得到170mg该产物。Rt(LC)＝30.7min和31.1min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例31HOOC-CH2-D/L-o，p-二-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例26中所述的相似的方法，从H-D/L-o，p-二-Cl-Phe-OH.HCl开始制备该化合物。除去被保护的三肽(1.07g)的保护基团，之后，进行HPLC提纯，如实施例1所述的，得到100mg该产物。Rt(LC)＝35.4min和36.1min。20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例32HOOC-CH2-D-Tyr-Pro-Lys-(2-噻唑基)Cbz-D-Tyr(tBu)-OH
将N-苄氧基羰氧基琥珀酰亚胺(5.75g)添加到D-Tyr(tBu)-OH(5.0g)在N，N-二甲基甲酰胺的溶液(40ml)中。溶液的pH值使用三乙基胺调节到8。反应混合物在室温下备搅拌一夜，随后蒸发至干。将残余物溶于二氯甲烷中并用冰水稀释。水层的pH值用2N盐酸调节到2.5。有机层被分离，水相用二氯甲烷萃取。有机层被合并并用水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。产量：9.95g。TLC：Rf＝0.31，庚烷/乙酸乙酯1/1。Cbz-D-Tyr(tBu)-OMe
将[四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓](7.45g)添加到Cbz-D-Tyr(tBu)-OH(9.95g)在二氯甲烷(45)和甲醇(5ml)的溶液中。混合物的pH值用N，N-二异丙基乙基胺调节到8。反应混合物在室温下被搅拌1小时，用5％的碳酸氢钠骤冷。在减压下，有机相被分离并用水，2％的柠檬酸和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。产量：10.2g。TLC：Rf＝0.74，庚烷/乙酸乙酯1/1。H-D-Tyr(tBu)-OMe.HCl
将10％的钯/碳(1.2g)添加到Cbz-D-Tyr(tBu)-OMe(10.2g)在甲醇(100ml)和4N盐酸(5ml)的溶液中。混合物在大气压和室温下氢化2小时。通过过滤除去钯催化剂。滤液被浓缩成更小的体积，随后从乙醚中结晶。产量：5.87g。TLC：Rf＝0.10，庚烷/乙酸乙酯1/1。HOOC-CH2-D-Tyr-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施24中所述的相似的方法，从H-D-Tyr(tBu)-OMe.HCl开始制备该化合物。根据实施例1中所述的方法，将586mg的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-Tyr(tBu)-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护，在HPLC提纯后得到283mg的该产物。Rt(LC)＝20.9min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例33HOOC-CH2-D/L-p-CH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)H-D/L-p-CH3-Phe-OH.HCl.
将氢化钠(3.28g，在矿物油中的60％分散体)在乙醇(40ml)中的悬浮液添加到a-氯-对二甲苯(10g)、乙酰氨基丙二酸二乙酯(19.3g)和碘化钠(8.55g)在二噁烷(80ml)和乙醇(20ml)中的溶液中。反应混合物在80℃下被回流90分钟。在减压下除去溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯中。有机相用5％的硫酸氢钠，5％的亚硫酸氢钠，水，5％的碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。该产物从庚烷中结晶得到19.8g浓缩产物。在95℃下，用6N的盐酸(420ml)和乙酸(210ml)处理一夜，在蒸发至干后，得到21.6g该产物。TLC：Rf＝0.15，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水664/31/18/7v/v/v/v。HOOC-CH2-D/L-p-CH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
根据实施例24中所述的相同的方法，从H-D/L-p-CH3-Phe-OH.HCl开始制备HOOC-CH2-D/L-p-CH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)。从被保护三肽(582mg)除去保护基团，在实施例1所述的类似的条件下，进行HPLC提纯。产量：120mg。Rt(LC)＝31.9min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例34HOOC-CH2-D-m-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
如实施例33所述，由3-氯苄基溴开始，制备H-D/L-m-Cl-Phe-OH.HCl。然后，根据实施例26中所述的相同的方法合成全保护三肽。在最后一步中，将1g N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-Cl-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)用三氟乙酸和苯硫基甲烷处理(参见实施例1)。在HPLC提纯后，分离出195mg HOOC-CH2-D-m-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)。Rt(LC)＝31.7min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例35HOOC-CH2-D-DPA-Pro-Lys-(2-噻唑基).(DPA＝二苯基丙氨酸)
根据实施例24中所述的相似的方法，从H-D-DPA-OH.HCl开始制备该化合物。根据实施例1所述的方法，将570mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D-DPA-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护，在HPLC提纯后，得到194mg最终产物。Rt(LC)＝35.6min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例36HOOC-CH2-D-m-OH-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基).
根据实施例24中所述的相似的方法，由H-D/L-m-OH-Phe-OH.HCl开始制备该化合物。在N-端基上引入Boc基团的过程中，酚式羟基官能团也被Boc基团保护。将1.21g N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-OBoc-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护(见实施例1)，在HPLC提纯后，得到所需要的非对映异构体。产量：99mg。Rt(LC)＝23.8min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例37HOOC-CH2-D/L-m-OCH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基).Boc-D/L-m-OH-Phe-OH.
将H-D/L-m-OH-Phe-OH.HCl(5.25g)溶于二噁烷(55ml)，水(28ml)和1N的氢氧化钠溶液(29.0ml)中。添加二碳酸二叔丁基酯(6.95g)并在pH为9时，将反应混合物在室温下搅拌一夜。反应混合物用水(200ml)稀释和用庚烷萃取。水相用乙酸乙酯(150ml)稀释，用1N的盐酸酸化到pH为2。有机层被合并并用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。产量：8.49g。TLC：Rf＝0.67，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水126/20/6/11 v/v/v/v。Boc-D/L-m-OCH3-Phe-OMe
将Boc-D/L-m-OH-Phe-OH(8.49g)，碳酸钠(23.9g)和碘代甲烷(20.3ml)在N，N-二甲基甲酰胺(60ml)中的混合物在60℃下搅拌48小时。然后，反应混合物被倾入冰水中并用2N的盐酸酸化到pH为2.5，随后，用乙酸乙酯萃取。有机层被合并并用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。粗产物通过硅胶的色谱分离来提纯，使用庚烷/乙酸乙酯7/3 v/v。产量：6.66g。TLC：Rt＝0.56，硅胶，庚烷/乙酸乙酯3/2 v/v。H-D/L-m-OCH3-Phe-OMe.TFA
将Boc-D/L-m-OCH3-Phe-OMe(6.66g)溶于二氯甲烷(20ml)和三氟乙酸(20ml)中并在室温下搅拌2小时。在减压下除去溶剂，两次从甲苯中共蒸发粗产物。产量：9.56gTLC：Rt＝0.32，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水126/20/6/11 v/v/v/v。HOOC-CH2-D/L-m-OCH3-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基).
根据实施例24中所描述的相同的路线，将H-D/L-m-OCH3-Phe-OMe.TFA用来合成N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-Boc-D/L-m-OCH3-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。用三氟乙酸和苯硫基甲烷(参见实施例1)处理624mg被保护三肽，随后进行HPLC提纯得到114mg该产物。Rt(LC)＝29.3min和29.8min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例38HOOC-CH2-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基).Boc-D/L-p-Br-Phe-OH.
将H-D/L-p-Br-Phe-OH(2.44g)在25ml的叔丁醇/水1/1 v/v中的悬浮液用足够的稀释氢氧化钠溶液(1N)调整到pH值为9。添加二碳酸二叔丁基酯(3.27g)并使混合物搅拌一夜同时pH保持在9。反应混合物用水稀释，随后用庚烷萃取。水层用乙酸乙酯稀释，随后使用2N盐酸将其酸化到pH2.5。有机相被分离并使用乙酸乙酯萃取水相。有机层被合并并用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。产量：3.35g。 TLC：Rt＝0.32，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水126/20/6/11 v/v/v/v。Boc-D/L-p-Br-Phe-Pro-OH.
根据实施例26所述的相同的方法，将Boc-D/L-p-Br-Phe-OH(3.35g)与H-Pro-OMe.HCl偶联，随后用氢氧化钠皂化。产量：3.13g。TLC：Rf＝0.45，硅胶，乙酸乙酯/甲醇9/1。Boc-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。
Boc-D/L-p-Br-Phe-Pro-OH(750mg)与H-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)的偶联是在实施例24中所述的相同的条件下进行的。产量：1.01g。TLC：Rf＝0.85，硅胶，二氯甲烷/甲醇9/1 v/v。H-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。TFA
将Boc-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(1.01g)溶于三氟乙酸(TFA，10ml)甲，并在室温下搅拌一小时。在减压下除去溶剂。产量：879mg。TLC：Rf＝0.75和0.68，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11v/v/v/v。N-(叔丁氧基羰基甲基)-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)
将溴乙酸叔丁酯(264ml)加入到H-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)。TFA(879mg)在乙腈(25ml)中的溶液。反应混合物的pH值用N，N-二异丙基乙基胺调节到8，之后，反应混合物在室温下静置一夜。通过蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯中。有机相用水，5％的碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。粗产物经硅胶提纯，使用二氯甲烷/甲醇95/5v/v，得到850mg被保护三肽。TLC：Rf＝0.91，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v。HOOC-CH2-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)。
将N-(叔丁氧基羰基甲基)-D/L-p-Br-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)(850mg)在与实施例1所述相同的条件下用三氟乙酸和苯硫基甲烷处理，在HPLC提纯后，获得123mg该产物。Rt(LC)＝33.9min和34.4min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例39HOOC-CH2-D-p-F-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基).
按照实施例38所述的相似的方式，由H-D-p-F-Phe-OH开始制备该化合物。将563mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-D-p-F-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护(参见实施例1)，在HPLC提纯后得到182mg该产物。Rt(LC)＝29.7min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例40HOOC-CH2-D/L-m，p-二-Cl-Phe-Pro-Lys-(2-噻唑基)
按照实施例38所述的相似的方法，由H-D/L-m，p-二-Cl-Phe-OH开始来制备该化合物。将480mg N-(叔丁氧基羰基甲基)-D/L-m，p-二-Cl-Phe-Pro-Lys(Cbz)-(2-噻唑基)去保护(参见实施例1)，在HPLC提纯后得到191mg该产物。Rt(LC)＝36.8min和37.8min，20％A/80％B-20％A/20％B/60％C，在40分钟内。实施例41BzlSO2-norLeu(环)Gly-LysΨ[COCO]-OH(Bzl＝苄基)Cbz-Lys(Boc)-OMe
将Cbz-Lys(Boc)-OH(28g)溶于二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v(500ml)中。添加四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(23.6g)，溶液通过添加三乙基胺将pH值调节到8。反应混合物在室温下被搅拌2小时。混合物连续用冷1N盐酸溶液，水，5％碳酸氢钠和水洗涤，经硫酸钠干燥。蒸发滤液，残余物通过在硅胶上进行色谱分离，乙酸乙酯/庚烷＝1/4 v/v作为洗脱液。包含Cbz-Lys(Boc)-OMe的级分被合并和蒸发。产量：29.1g。TLC：Rf＝0.85，硅胶，乙酸乙酯/庚烷＝3/1 v/v。Cbz-Lys(Boc)Ψ[氰基乙酸酯]
向Cbz-Lys(Boc)-OMe(29.1g)在干二氯甲烷(800ml)中的冷(-78℃)溶液中以一定的速率滴加氢化二异丁基铝(222ml在己烷中的1M溶液)，保持反应温度低于-70℃。所得到的溶液在-78℃下被搅拌1小时。向混合物中添加5％的柠檬酸溶液(600ml)。两层混合物在室温下被搅拌10分钟，分离各层并用二氯甲烷萃取水层。合并的二氯甲烷层用水洗涤，经硫酸钠干燥和过滤。溶液被放置在氮气气氛下并在冰水浴中冷却。添加氰化钠(36.3g)和氯化苄基三乙铵(4.2g)在水(600ml)中的溶液。在剧烈搅拌下，经30分钟，分几份(2×9ml)添加乙酸酐。分离有机层并用二氯甲烷萃取水层。合并的二氯甲烷层用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物通过硅胶上的色谱分离法提纯(洗脱液：庚烷/乙酸乙酯＝1/1 v/v)，得到Cbz-Lys(Boc)Ψ[氰基乙酸酯](26.3g)。TLC：Rf＝0.60，硅胶，二氯甲烷/乙酸乙酯＝7/3 v/v。Cbz-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe.
将Cbz-Lys(Boc)Ψ[氰基乙酸盐](26.3g)在乙醚/甲醇＝3/1 v/v(600ml)中的溶液在氮气气氛下冷却到-20℃，引入66g气体盐酸使温度低于-5℃。反应混合物在4℃下保持一夜。向反应混合物中滴加水(100ml)，保持温度低于5℃。在室温下搅拌16小时后，分离有机层并用水洗涤。水层用氯化钠饱和并用仲丁醇/二氯甲烷＝3/2v/v萃取。有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发，得到25.4g粗胺。残余物被溶解在N，N-二甲基甲酰胺(400ml)中，添加双-(叔丁基)-酸酐(16g)和三乙基胺，直到pH为8为止。反应混合物在室温下搅拌一夜。在减压下通过蒸发除去溶剂。将残余物溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水连续洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。残余物通过在硅胶上色谱分离来提纯(洗脱液：乙酸乙酯/庚烷＝4/6 v/v)得到Cbz-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe(15.8g)。TLC：Rf＝0.75，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v。H-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe.
将10％的钯/碳(92mg)和2.18ml的1N盐酸溶液添加到Cbz-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe(0.92g)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)的溶液中。在大气压和室温下将混合物氢化3小时。通过过滤除去钯催化剂，通过减压下蒸发除去溶剂，定量得到H-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe.HCl。TLC：Rf＝0.47，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝88/31/18/7 v/v/v/v。BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe
根据实施例18中的方法制备(S)-3-苄基磺酰基酰氨基-2-氧代-1-吖庚因乙酸。向(S)-3-苄基磺酰基酰氨基-2-氧代-1-吖庚因乙酸(BzlSO2-norLeu(环)Gly)(400mg)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)的溶液中连续添加1-羟基苯并三唑(238ml)，二环己基碳化二亚胺(267mg)，H-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe.HCl(385mg)和三乙基胺(0.32ml)。混合物在0℃下被搅拌1小时，然后，在室温下保持一夜。混合物被冷却到-20℃，通过过滤除去二环己基脲。滤液蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％的碳酸氢钠，水，2％的柠檬酸，饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过硅胶进行色谱分离，使用二氯甲烷/甲醇＝9/1(v/v)作为洗脱液。包含BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe的级分被合并和蒸发。产量：663mg。TLC：Rf＝0.91，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v。BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH
将BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe(650mg)溶于二噁烷/水＝7/3 v/v(20ml)中，用2M氢氧化钠溶液(1.05ml)在室温下分几份处理1小时，保持pH在12-13。反应混合物用水(20ml)稀释，添加2M盐酸溶液直到pH为2.0为止，水层用二氯甲烷萃取。合并的有机相用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩，得到BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH(740mg)。TLC：Rf＝0.44，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝63/20/6/11 v/v/v/v。BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH向BnSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[CHOHCO]-OH(740mg)在干二氯甲烷(20ml)中的溶液添加450mg的periodinane(Dess-Martin试剂)。在室温下搅拌1小时后，添加2％的硫代硫酸钠溶液(20ml)，反应混合物在室温下被搅拌30分钟。有机层被分离，用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发得到粗BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH(497mg)。TLC：Rf＝0.45，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水63/20/6/11 v/v/v/v。Bz[SO2-norLeu(环)Gly-LysΨ[COCO]-OH在室温下，将BzlSO2-norLeu(环)Gly-Lys(Boc)Ψ[COCO]-OH(497mg，粗)用90％的三氟乙酸/水(10ml)处理1小时。反应混合物被真空浓缩，将残余物溶于水中，并使用20％A/80％B-20％A/45％B/35％C的梯度洗脱体系，以80ml/min的速率，经45分钟将其直接加入制备性HPLC DeltaPakRP-C18中。产量：200mg的BzlSO2-norLeu(环)Gly-LysΨ[COCO]-OH。Rt(LC)：26.37分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例42H-(N-CH3)-D-norLeu-Pro-LysΨ[COCO]-OHBoc-(N-CH3)-NorLeu-Pro-OH
根据实施例11制备该化合物。按照实施例1中所述的相似的方法制备H-(N-CH3)-D-NorLeu-Pro-LysΨ[COCO]-OH。产量：69mgRt(LC)：13.27分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例43H-D-Phe-Pro-LysΨ[COCO]-OHBoc-D-Phe-Pro-OMe
向Boc-D-Phe-OH(5g)在N，N-二甲基甲酰胺(200ml)的冷(0℃)溶液中连续添加1-羟基苯并三唑(4.29g)，二环己基碳化二亚胺(4.29g)，H-Pro-OMe.HCl(3.1g)和N-乙基吗啉(3ml)。混合物在0℃下被搅拌1小时，然后，在室温下保持2天。混合物被冷却到-20℃，通过过滤除去二环己基脲。滤液蒸发至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并连续用5％的碳酸氢钠，0.1M盐酸溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥和真空浓缩。残余物通过硅胶进行色谱分离，使用庚烷/乙酸乙酯＝6/4(v/v)作为洗脱液。包含Boc-D-Phe-Pro-OMe的级分被合并和蒸发。产量：1.5g。TLC：Rf＝0.90，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝163/20/6/11 v/v/v/v。Boc-D-Phe-Pro-OH
将Boc-D-Phe-Pro-OMe(8.3g)溶于二噁烷/水＝6/4 v/v(150ml)中，用2M氢氧化钠溶液(16.5ml)在室温下分几份处理1小时，保持pH在12.5。向反应混合物中添加2M盐酸溶液，直到pH为3.0为止，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水，盐水洗涤和经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩，得到Boc-D-Phe-Pro-OH(6.9g)。TLC：Rf＝0.30，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝213/20/6/11 v/v/v/v。按照实施例1中所述的相似的方法来制备H-D-Phe-Pro-LysΨ[COCO]-OH。产量：417mgRt(LC)：16.22分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例44H-(N-CH3)-D-Phe-(N-环戊基)-Gly-LysΨ[COCO]-OHBoc-(N-CH3)-D-Phe-(N-环戊基)-Gly-OH
使用Boc-(N-CH3)-D-Phe-OH和HCl.H-(N-环戊基)-Gly-OMe.，根据实施例3中所述的方法制备该化合物。TLC：Rf＝0.52，硅胶，二氯甲烷/甲醇＝9/1 v/v。
按照实施例1中所述的相似的方法制备：H-(N-CH3)-D-Phe-(N-环戊基)-Gly-LysΨ[COCO]-OH。产量：87mgRt(LC)：23.92分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例45乙基磺酰基-D-Phe-Pro-LysΨ[COCO]-OH乙基磺酰基-D-Phe-Pro-OH
根据实施例22制备该化合物。
按照实施例41中所述的相似的方法制备：
乙基磺酰基-D-Phe-Pro-LysΨ[COCO]-OH。产量：90mg。Rt(LC)：28.04分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例46(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-LysΨ[COCO]-OH2-Cbz-(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-OH
根据实施例20制备该化合物。
按照实施例41中所述的相似的方法制备：
(4aR，8aR)-全氢化异喹啉-1(R)-羰基-Pro-LysΨ[COCO]-OH。产量：170mg。Rt(LC)：18.95分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例47HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Lys-(2-噻唑基)(Coa＝环辛基丙氨酸)环辛基甲基溴
将环辛基甲醇(8.16g)溶于47％的HBr溶液(70ml)中，在130℃下回流1小时。将反应混合物倾入冰水中(500ml)，添加饱和碳酸氢钠溶液(500ml)。用二氯甲烷萃取水溶液。合并的有机相用水，盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。残余物通过在作为洗脱液的甲苯中在硅胶上进行色谱分离。收集含环辛基甲基溴的级分并蒸发。产量：9.85g。TLC：Rf＝0.95，硅胶，甲苯。(R，S)-乙基-2-乙酰氨基-2-氰基-2-环辛基-丙酸酯
在室温下，将叔丁醇钾(6.85g)和乙酰氨基氰基乙酸乙酯(8.1g)溶于二甲基亚砜(100ml)中。将环辛基甲基溴溶于二甲基亚砜(25ml)中，并滴加到反应混合物中。混合物在室温下被搅拌44小时。被倾倒在500ml的水上后，沉淀物被过滤和干燥得到(R，S)-乙基-2-乙酰氨基-2-氰基-3-环辛基-丙酸酯(2.95g)TLC：Rf＝0.50，硅胶，庚烷/乙酸乙酯＝3/7 v/vH-D，L-环辛基丙氨酸-OH.HCl
将(R，S)-乙基-2-乙酰氨基-2-氰基-2-环辛基-丙酸酯(2.95g)悬浮在100ml20％的盐酸溶液中，回流22小时。反应混合物被冷却到5℃，过滤所形成的沉淀物，用乙醚洗涤和干燥。产量：2.69g H-D，L-环辛基丙氨酸-OH.HCl(H-D，L-Coa-OH.HCl)TLC：Rf＝0.27，硅胶，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水＝63/20/6/11 v/v/v/v。
按照实施例24中所述的相似的方法制备：HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Lys-(2-噻唑基)。产量：162mg。Rt(LC)：38.35分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。
按照实施例24中所述的相似的方法制备：实施例48
HOOC-CH2-D-2-Nal-Pro-Lys-(2-噻唑基)(Nal＝萘基丙氨酸)产量：423mg。Rt(LC)：35.78分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例49
HOOC-CH2-D-norLeu-Pro-Lys-(2-噻唑基)产量：344mg。Rt(LC)：24.84分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例50
HOOC-CH2-D-Leu-Pro-Lys-(2-噻唑基)
产量：138mg。Rt(LC)：24.50分钟；20％A/80％B-20％A/20％B/60％C在40分钟内。实施例51
抗凝血酶分析
凝血酶(因子IIa)是凝血级联中的因子。
通过分光光度法测量由凝血酶所施加的显色基质s-2238的水解速度来分析本发明的化合物的抗凝血酶活性。在缓冲体系中抗凝血酶活性的这一分析结果用于分析所测试化合物的IC50-值。
测试介质：Tromethamine-NaCl-聚乙二醇6000(TNP)缓冲液。参考化合物：I2581(Kabi)。媒介剂：TNP缓冲液。溶解可由二甲基亚砜、甲醇、乙醇、乙腈或叔丁醇协助进行，它们在最终反应混合物中高达2.5％的浓度下不会有不利影响。
技术级试剂*：1.Tromethamine-NaCl(TN)缓冲液。缓冲液的组成：Tromethamine(Tris)6.057g(50mmol)，NaCl 5.844g(100mmol)，水补充至1升。37℃下用HCl(1mmol·l-1)将溶液的pH值调节至7.4。2.TNP缓冲液：将聚乙二醇6000溶于TN缓冲液中得到3g·l-1的浓度。3.S-2238溶液：将一小瓶的S-2238(25mg；Kabi Diagnostica，瑞典)溶于20ml TN缓冲液中得到1.25mg·ml-1(2mmol·l-1)的浓度。4.凝血酶溶液：将人凝血酶(16 000nKat·小瓶-1，Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie，荷兰阿姆斯特丹)溶解于TNP缓冲液中得到835nKat·ml-1的贮备液。刚好在使用之前将这一溶液用TNP缓冲液稀释得到3.34 nKat·ml-1的浓度。-*所使用的所有成分是分析级-对于水溶液，使用超纯水(Milli-Q quality)。
测试和参考化合物溶液的制备
将测试和参考化合物溶于Milli-Q水中得到浓度为10-2mol·l-1的贮备液浓度。各浓度用媒介剂分几步骤稀释，分别得到10-3，10-4和10-5 mol·l-1的浓度。包括贮备液的稀释液被用于分析中(在反应混合物中的最终浓度：分别为3·10-3，10-3，3·10-4，10-4，3·10-5，10-5，3·10-6和10-6mol·l-1)。
操作程序
在室温下，0.075ml和0.025ml测试化合物或参考化合物溶液或媒介剂轮流被移液管移取到微量滴定板的孔中，这些溶液分别用0.115ml和0.0165ml TNP缓冲液稀释。将0.030ml S-2238溶液的等分试样加入到各孔内，将板预热并在培养器(Amersham)中在振荡下于37℃预培养10分钟。在预培养之后，通过向各孔中加入0.030ml凝血酶溶液来开始S-2238的水解。该板在37℃下培养(振荡30秒)。在1分钟培养后开始，使用动力学微量滴定板读数器(Twinreader plus，Flow Laboratories)在90分钟内每2分钟测量各样品在405nm下的吸光度。
所有的数据通过使用LOTUS-MEASURE收集在IBM个人计算机中。对于各化合物浓度(以mol·l-1反应混合物表示)和对于空白，描绘出吸光度与反应时间(分钟)的曲线。
响应的评价：对于各最终浓度，从分析曲线计算最大吸光度。根据Hafner等人(Arzneim.-Forsch./Drug Res.1977；27(II)：1871-3)使用对数值变换分析法来计算IC50-值(最终浓度，以μmol·l-1表示，引起空白试样的最大吸光度的50％抑制)。
在下表中，列出了本发明化合物的IC50-值： 实施例 IC50-值(μM) 2(e) 4.5 4(b) 4.34 39 19 41 0.135