3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的 配合物及制备和应用 (一)技术领域
本发明涉及一种抗癌药3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物及其制造方法，以及其在制备抗癌药物中的应用。
(二)背景技术
四嗪是一类含四个氮原子的六元杂环化合物，在3种同分异构体中S-四嗪最稳定。1900年德国化学家Hantgsch首先合成了S-四嗪，20世纪70年代后人们陆续发现S-四嗪，尽管是芳烃，但可发生(4+2)环加成反应；一些特殊结构的四嗪衍生物具有明显的抗病毒活性、抗肿瘤活性以及可做为农药杀虫剂、液晶材料和火箭燃料等，因而引起了人们广泛的兴趣。
在四嗪类衍生物中，目前已经筛选出一些物质具有抗肿瘤活性，例如N，N’-二苯基-3，6-二甲基-1，4-二氢-1，2，4，5-四嗪-1，4-二甲酰胺；3，6-双(3-甲基吡啶-2基)-1，2，4，5-四嗪与过渡金属的配合物，等等。含不同取代基的不同结构的S-四嗪衍生物应具有不同的生物活性，通过四嗪类衍生物的筛选，可望筛选出高效低毒的抗癌药物，这将具有着非常重大的意义，也必将引起越来越多的科学工作者的关注。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种新的S-四嗪类抗癌药物，即3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物及其制备方法，以及该配合物在制备抗癌药物中的应用。
为达到发明目的本发明所采用的技术方案是：
一种3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物，所述的配合物具有下列通式(I)：
其中M为过渡金属Fe2+、Fe3+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Pt2+中的一种，L为无机配体Cl-、Br-、Ac-、I-、NO3-、SO42-中的一种，R为H或孤电子，x、y、z各为1～5的数，a、b、c各为0～10的数。
优选的，所述的过渡金属为Fe3+、Co2+、Ni2+、Cu2+中的一种，所述的无机配体为Cl-、NO3-、Ac-中的一种。
一种制备所述的3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪的方法，所述的方法是将水杨醛与水合肼在乙醇溶液中，反应制得化合物式(II)：2，2’-二羟基苯吖嗪，
反应式如(A)所示：
化合物式(II)在冰醋酸/酸酐溶剂中通入氯气制得化合物式(III)：α，α’-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪，
反应式如(B)所示：
化合物(III)在乙醇溶液中与水合肼反应生成化合物式(IV)：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-1，2，4，5-四嗪，
反应式如(C)所示：
化合物(IV)用亚硝酸氧化成化合物式(V)：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2，4，5-四嗪。
所述的亚硝酸由亚硝酸钠与醋酸反应制得。
反应式如(D)所示：
一种制备所述的3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物的方法，按前述方法制得化合物(IV)：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-1，2，4，5-四嗪，化合物(IV)与过渡金属的盐MeLf在乙醇溶剂中反应制成化合物式(I)：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪与过渡金属的配合物，其中e、f各为1～5的数。
反应式如(E)所示：
具体的，所述的方法按如下步骤进行：
(1)将水合肼溶液加入到水中，加入少量乙醇，搅匀成溶液A，将水杨醛溶于乙醇中成溶液B，将B溶液保持在10～20℃搅拌下，慢慢滴加入溶液A，1.5～2小时加完后，再搅拌反应2小时，加入水，抽滤，用大量水冲洗后干燥得2，2′-二羟基苯吖嗪(II)；
(2)将2，2′-二羟基苯吖嗪加到冰醋酸和醋酸酐的混合液中。搅拌使成较好的悬浮液，在10～20℃下通入氯气约1小时，此若固体未消失，补加冰醋酸和醋酐，于10～20℃下氯气1.5～2小时，用TLC点板，观察原料斑点消失止，停止通氯，放置过夜；抽滤，固体用乙醇洗涤，干燥得α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪(III)；
(3)将α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪溶于乙醇中，加热至回流，滴加80％水合肼，加完后再回流反应45分钟，冷却到室温，将析出的固体过滤，用乙醇洗涤，烘干得黄色固体3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-1，2，4，5-四嗪(IV)；
(4)在常温下，将3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪(IV)溶于四氢呋喃(THF)中成溶液A，过渡金属的盐MeLf溶于乙醇中成溶液B，其中e、f各为1～5的数；在搅拌下，将A滴加到B中，30分钟滴完，再搅拌反应1小时，将生成的固体过滤，乙醇/水混合液洗涤得到络合物(I)3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪与过渡金属的配合物。
一种制备所述的3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物的方法，按前述方法制得化合物(V)3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2，4，5-四嗪，化合物(V)与过渡金属的盐MeLf在乙醇溶剂中反应制成化合物式(I)：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物，其中e、f各为1～5的数。
反应式如(F)所示：
具体的，所述的方法按如下步骤进行：
(1)水合肼溶液加入到水中，加入少量乙醇，搅匀成溶液A，将水杨醛溶于乙醇中成溶液B，将B溶液保持在10～20℃搅拌下，慢慢滴加入溶液A，1.5～2小时加完后，再搅拌反应2小时，加入水，抽滤，用大量水冲洗后干燥得2，2′-二羟基苯吖嗪；
(2)将2，2′-二羟基苯吖嗪加到冰醋酸和醋酸酐的混合液中。搅拌使成较好的悬浮液，在10～20℃下通入氯气约1小时，此若固体未消失，补加冰醋酸和醋酐，于10～20℃下通氯气1.5～2小时；用TLC点板，观察原料斑点消失止，停止通氯，放置过夜；抽滤，固体用乙醇洗涤，干燥得α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪；
(3)将α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪溶于乙醇中，加热至回流，滴加80％水合肼，加完后再回流反应45分钟，冷却到室温，将析出的固体过滤，用乙醇洗涤，烘干得黄色固体3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-1，2，4，5-四嗪；
(4)化合物(IV)与亚硝酸钠水溶液搅拌成悬浮液，加入醋酸，再于室温搅拌3小时，固体过滤、水洗，用乙醇重结晶得到红色晶体3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-s-四嗪(V)；
(5)在常温下，将3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪(V)溶于四氢呋喃(THF)中成溶液A，过渡金属的盐MeLf溶于乙醇中成溶液B，其中e、f各为1～5的数。在搅拌下，将A滴加到B中，30分钟滴完，再搅拌反应1小时；将生成的固体过滤，乙醇/水混合液洗涤得到络合物(I)3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物。
所述的3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物，在制备治疗白血病、肺癌或其它肿瘤的药物中的应用。
本发明所述的3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-S-四嗪与过渡金属的配合物及制备和应用的有益效果主要体现在：(1)提供了一种新的、有明显抗癌活性的抗癌药物；(2)制备流程简单，为新药筛选提供研究基础。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述：
实施例1：制备2，2′-二羟基苯吖嗪(II)
2.4g(85％)NH2NH2·H2O水溶液(0.04mol)加入到24ml水中，加入5ml乙醇，搅匀成溶液A，将9.8g水杨醛(0.08mol)溶于4ml乙醇中成溶液B。将B溶液保持在10～20℃搅拌下，慢慢滴加入溶液A，1.5～2小时加完后，再搅拌反应2小时。加入20ml水，抽滤，用大量水冲洗后干燥得2，2′-二羟基苯吖嗪9.1克，产率95％，m.p.214～216℃。
实施例2：制备α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪(III)
将5.5g2，2′-二羟基苯吖嗪(0.023mol)，加到40ml冰醋酸和4.5ml醋酸酐的混合液中。搅拌使成较好的悬浮液。在10～20℃下通入氯气约1小时，此时溶液变稠，但固体并未消失。补加40ml冰醋酸和4.5ml醋酐。于10～20℃下氯气1.5～2小时。用TLC点板，观察原料斑点消失止，停止通氯，放置过夜。抽滤，固体用乙醇洗涤，干燥得α，α′-二氯-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-吖嗪5克，收率58％，m.p.175～178℃。
实施例3：制备3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪(IV)
将III(3.8克，0.01mol)溶于乙醇中(20ml)，加热至回流，滴加80％水合肼(0.8克，0.012mol)。加完后再回流反应45分钟。冷却到室温，将析出的固体过滤，用乙醇洗涤，烘干得黄色固体IV1.2克，收率35％，m.p.250℃(dec.)。
实施例4：制备3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2，4，5-四嗪(V)
化合物IV(3.37克，0.01mol)加入25ml 10％亚硝酸钠水溶液(0.036mol)搅拌成悬浮液，加入15ml醋酸，再于室温搅拌3小时。固体过滤、水洗，用乙醇重结晶得到红色晶体1.1克。收率33％，m.p.238.5～240.5℃。IR(KBr)3443，3126，1613，1569，1477，1417，1303，1224，1140，1088，1046，941，898cm-1；NMR(CDCl3)：δ7.1(d，2H，Ar-H)，7.5(d，2H，Ar-H)，8.6(s，2H，Ar-H)，10.8(s，2H，OH)；M/Z(％)：334(M+，7.55)，153(100.00)，125(56.36)，98(21.06)，63(61.50)。
实施例5：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪IV与过渡金属的络合物。
在常温下，将0.5克3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2-二氢-S-四嗪(IV)溶于30ml四氢呋喃(THF)中成溶液A，1.0g硝酸镍(Ni(NO3)2)溶于30ml乙醇中成溶液B。在搅拌下，将A滴加到B中，30分钟滴完，再搅拌反应1小时。将生成的固体过滤，乙醇/水混合液洗涤得到镍-IV络合物(VI)。
同样操作，用CoCl2溶液得到钴-IV络合物(VII)；
同样操作，用Ni(OAc)2溶液得到镍-IV络合物(VIII)；
络合物VI，VII，VIII摩尔电导率(s)及元素分析结果如下：络合物分子式 摩尔电导率 S.cm2.mol-1 元素分析(％) 实验值/计算值 C H NVINi(NO3)2·IV2·THF·1.5EtOH 33 42.09/42.11 3.12/3.74 14.07/14.03VIICo2Cl·IV·EtOH·7H2O 150 25.13/24.99 3.8/3.94 7.23/7.29VIIINi(AcO)2IV2·4H2O 43 38.83/39.00 3.13/3.72 12.10/12.14
实施例6：3，6-双(2’-羟基-5’-氯苯基)-1，2，4，5-四嗪(V)与过渡金属的络合物
0.5克V悬浮在30ml 1∶1的乙醇/水混合物溶液中。慢慢滴加5％的氢氧化钠水溶液至固体完全溶解。此时溶液PH为6.5～7，为溶液A；1g硝酸镍溶于30ml的水中为溶液B。在常温搅拌下，将A溶液滴加至B液中，加完后再搅拌1.5小时。将生成的固体过滤，用乙醇/水(1∶1)溶剂洗涤后得镍-(V)络合物(IX)；
同样操作，用三氯化铁溶液得铁-(V)络合物(X)；
同样操作，用氯化钴溶液得钴-(V)络合物(XI)；
络合物VIII，IX，X的摩尔电导率及元素分析结果如下：络合物 分子式 摩尔电导率 S.cm2.mol-1 元素分析(％) 实验值/计算值 C H NIX Ni2(NO3)2·V·8H2O 10 28.66/28.62 4.22/4.09 9.30/9.55X FeCl3·(V)3 430 43.61/43.20 2.08/1.93 14.83/14.40XI Co2Cl2·V·3.5EtOH，4·H2O 33 32.98/33.39 4.15/4.68 -/7.42
对上述化合物IV，V，及其络合物VI，IX，X，XI，用四氮唑盐酶还原法(MTT法)和磺酰罗丹明β蛋白染色法(SRB法)分别测定了化合物对P-388小鼠白血病细胞和A-549人肺癌细胞在体外生长的抑制率。其结果如下：
部份化合物在不同浓度下对癌细胞生长的抑制率 络合 物 MTT法 P-388细胞 SRB法 A-549细胞 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 IV 89.0 0 0 0 0 65.3 80.3 0 0 0 V 92.5 90.7 91.2 88.0 82.8 57.6 62.3 16.4 0 0 VI 95.5 96.3 94.4 / 94.0 57.6 69.0 74.3 71.5 74.6 IX 94.0 95.9 95.4 93.2 88.7 79.1 90.2 79.8 79.9 77.5 X 50.4 95.6 94.7 93.7 97.8 96.8 97.6 91.2 79.8 77.5 XI 91.7 73.6 92.4 92.6 87.2 100 100 98.9 97.2 90.7
一般认为在浓度为10-6mol/l，而抑制率达到50％以上则认为此类化合物有强效。按此标准，配体IV无效而配体V对P-388有强效；而4种配合物不论对P-388还是A-549均有强效。