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1、(10)申请公布号 CN 102586380 A (43)申请公布日 2012.07.18 CN 102586380 A *CN102586380A* (21)申请号 201110338275.2 (22)申请日 2011.11.01 C12P 39/00(2006.01) C12P 7/60(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/11(2006.01) C12R 1/085(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (71)申请人 江苏江山制药有限公司 地址 214500 江苏省泰州市靖江市江山路 61 号。
2、 (72)发明人 孔太 刘杰 黄建民 胡少斌 陈红 (74)专利代理机构 靖江市靖泰专利事务所 32219 代理人 陆平 (54) 发明名称 一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺 (57) 摘要 一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺， 在发酵容 器中加入含有山梨糖、 玉米浆、 尿素、 硫酸镁、 磷酸 二氢钾、 轻质碳酸钙营养物质的培养基， 接入能够 将山梨糖转化为 2 酮基 L 古龙酸的混菌种 液， 发酵 2 12 小时， 加入溶菌酶， 发酵液中溶菌 酶用量为10U/ml10000U/ml， 继续培养， 整个发 酵过程培养温度控制在 28 35， 培养 pH 值控 制在5.48.5， 。
3、至发酵液中残存山梨糖低于1mg/ ml, 发酵结束。本发明降低了溶菌酶用量， 缩短了 发酵周期 10 15 小时， 提高了生产效率， 降低了 生产成本。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 1/1 页 2 1. 一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺， 其特征在于 ： 在发酵容器中加入含有山梨糖、 玉 米浆、 尿素、 硫酸镁、 磷酸二氢钾、 轻质碳酸钙营养物质的培养基， 接入能够将山梨糖转化为 2 酮基 L 古龙酸的混菌种液， 发酵 2 12 小时， 加入溶菌酶， 发酵液中。
4、溶菌酶用量为 10U/ml10000 U/ml， 继续培养， 整个发酵过程培养温度控制在2835， 培养PH值控制 在 5.4 8.5， 至发酵液中残存山梨糖低于 1mg/ml, 发酵结束。 2. 根据权利要求 1 所述的一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺， 其特征在于 ： 所述的混菌 为小菌和伴生菌混合培养菌系， 所述的小菌为普通生酮基古龙酸菌即酮古龙酸菌 ； 所述的 伴生菌有巨大芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 苏云金芽孢杆菌中的一种。 权 利 要 求 书 CN 102586380 A 2 1/2 页 3 一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺 0001 技术领域 ： 本。
5、发明涉及维生素 C 的加工领域， 尤其涉及一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺。 0002 技术背景 ： 2 酮基 L 古龙酸是合成维生素 C 重要前体。目前国内主要维生素 C 生产厂家均 采用二十世纪七十年代我国尹光琳等发明的 “二步发酵法” 生产工艺， 这一技术的关键步骤 是其第二步发酵过程， L- 山梨糖在一种混合菌系作用下被生物氧化为 2-KLG， 该混合菌系 由两种微生物组成， 其中起糖酸转化作用的微生物最初被定名为氧化葡萄糖酸杆菌 （行业 中俗称小菌， 革兰氏阴性菌） ， 近年来经系统鉴定对其分类位置重新进行了确定， 小菌又被 更名为普通生酮基古龙酸菌 （即酮古龙酸菌） ； 混。
6、合菌系中另一种微生物为伴生菌， 大多为 革兰氏阳性芽孢杆菌， 如巨大芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 苏云金芽孢杆菌等 芽孢杆菌， 目前与小菌搭配的伴生菌以巨大芽孢杆菌 （行业中俗称大菌） 居多。 0003 在混菌发酵过程中， 大小菌既有共生作用， 又有拮抗作用， 在发酵中可形成一种协 同共生关系， 但由于是两种微生物一起进行培养， 一旦混菌比例失控， 会造成发酵异常， 周 期延长， 为此开发一种能对大小菌微生态调控， 进而缩短古龙酸发酵周期的新技术或新工 艺就显得尤为重要， 中国专利 200810242674.7 公布了一种控制大菌生长促进维生素 C 前 体 2 酮基 L 古龙酸生。
7、产的方法， 其原理是利用溶菌酶对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性 菌细胞壁作用效果的差异， 在发酵过程中， 当巨大芽孢杆菌达到对数末期时， 即发酵开始后 1215小时， 添加100000U/ml200000 U/ml浓度的溶菌酶破坏大菌细胞壁， 使大菌迅速 裂解释放胞内活性物质促进小菌生长和产酸， 使得混菌产量提高， 发酵周期缩短， 由于溶菌 酶价格昂贵， 该方法中溶菌酶的用量又很大， 这很大程度上限制了其在工业化大生产上的 应用。 0004 发明内容 ： 本发明的目的是提供一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺， 能降低溶菌酶用量， 缩短发酵 周期 10 15 小时， 提高生产效率， 降低生产成本。
8、。 0005 本发明是这样实现的， 一种 2- 酮基 -L- 古龙酸发酵工艺， 其特征在于 ： 在发酵容 器中加入含有山梨糖、 玉米浆、 尿素、 硫酸镁、 磷酸二氢钾、 轻质碳酸钙营养物质的培养基， 接入能够将山梨糖转化为 2 酮基 L 古龙酸的混菌种液， 发酵 2 12 小时， 加入溶菌 酶， 发酵液中溶菌酶用量为 10U/ml 10000 U/ml， 继续培养， 整个发酵过程培养温度控制 在2835， 培养PH值控制在5.48.5， 至发酵液中残存山梨糖低于1mg/ml,发酵结束。 0006 本发明所述的混菌为小菌和伴生菌混合培养菌系， 所述的小菌为普通生酮基古龙 酸菌即酮古龙酸菌 ； 所。
9、述的伴生菌有巨大芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 苏云金 芽孢杆菌中的一种。 0007 本发明降低了溶菌酶用量， 缩短了发酵周期 10 15 小时， 提高了生产效率， 降低 了生产成本。 0008 具体实施方式 ： 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明 ： 说 明 书 CN 102586380 A 3 2/2 页 4 实施例 1 ： 将培养好的普通生酮基古龙酸菌和枯草芽孢杆菌的混合菌液 10ml， 接入到 50 ml 含有 8% 的山梨糖、 1% 玉米浆、 1.1% 尿素、 0.02% 硫酸镁、 0.05% 磷酸二氢钾、 0.5% 轻质碳酸钙的发 酵培养基， 培养基初始 PH7.。
10、0， 培养温度 29， 摇床转速 200rpm， 培养 8 小时， 添加 1000 U/ ml溶菌酶， 发酵液终点2-酮基-L-古龙酸含量78.91mg/ml,培养周期54小时， 较未加溶菌 酶对照组缩短 13 小时。 0009 实施例 2 ： 将培养好的普通生酮基古龙酸菌和蜡状芽孢杆菌的混合菌液 10ml， 接入到 50 ml 含有 8% 的山梨糖、 1% 玉米浆、 1.1% 尿素、 0.02% 硫酸镁、 0.05% 磷酸二氢钾、 0.5% 轻质碳酸钙的发 酵培养基， 培养基初始 PH7.0， 培养温度 31， 摇床转速 220rpm， 培养 10 小时， 添加 5000 U/ ml的溶菌酶。
11、， 发酵液终点2-酮基-L-古龙酸含量78.69mg/ml,培养周期53小时， 较未加溶 菌酶对照组缩短 15 小时。 0010 实施例 3 ： 将培养好的普通生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌的混合菌液 1.5 升， 接入到 5 升含有 3% 的山梨糖、 1% 玉米浆、 0.2% 尿素、 0.02% 硫酸镁、 0.05% 磷酸二氢钾的发酵培养基中， 发酵 容器采用 10 升自动发酵罐， 培养基初始 PH6.7， 培养温度 30， 溶解氧 25%， 培养 2.5 小时， 添加 200 U/ml 的溶菌酶， 培养 8 小时开始用氢氧化钠控制发酵液 PH7.1， 培养 12 小时开始 流加浓度为32%的山梨糖溶液， 控制发酵最终总糖浓度11%， 发酵液终点2-酮基-L-古龙酸 含量 108.86mg/ml, 培养周期 46 小时， 较未加溶菌酶对照组缩短 12 小时。 说 明 书 CN 102586380 A 4 。