《一种丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)授权公告号 CN 102093250 B (45)授权公告日 2013.03.20 CN 102093250 B *CN102093250B* (21)申请号 201010578117.X (22)申请日 2010.12.02 C07K 5/062(2006.01) A61K 38/05(2006.01) A61P 17/02(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 31/18(2006.01) A61P 37/00(2006.01) (73)专利权人 海南本创医药科技有限公司 地址 570125 海南省海口市国贸路 48 号新 达商务大厦 2601 房 (。
2、72)发明人 王明 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11369 代理人 刘冬梅 CN 101463075 A,2009.06.24, 说明书第 1-3 页 . CN 1680428 A,2005.10.12, 说明书第 1-6 页 . US 5380934 A,1995.01.10, 实施例 . CN 1683391 A,2005.10.19, 说明书第 1-5 页 . CN 101519428 A,2009.09.02, 说明书第 1-9 页 . CN 1786019 A,2006.06.14, 说明书第 1-10 页 . CN 1931873 A,。
3、2007.03.21, 说明书第 1-8 页 . EP 0311057 A2,1989.04.12, 实施例 1. 肖湘， 等 . 丙氨酰 - 谷氨酰胺的简便有效合 成 .化学研究与应用 .2002, 第 14 卷 ( 第 3 期 ),332-333. QIAN Shao-Song,et al.A Novel Preparation Method of C-Terminal Glutamine Dipeptides.应用化学 .2006, 第 23 卷 ( 第 1 期 ),109-112. 肖湘， 等 . 丙氨酰 - 谷氨酰胺的简便有效合 成 .化学研究与应用 .2002, 第 14 卷 ( 。
4、第 3 期 ),332-333. 李永新， 等.L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成及 初步鉴定 .第三军医大学学报 .2001, 第 23 卷 ( 第 5 期 ),571-572. Takahiro Sano,et al.Process Research and Development of L-Alanyl-L-glutamine, a Component of Parenteral Nutrition. Organic Process Research & Development .2000, 第 4 卷 ( 第 3 期 ),147-152. (54) 发明名称 一种丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制。
5、方法 (57) 摘要 本发明提供了一种丙氨酰谷氨酰胺化合物及 其新方法， 其通过先将丙氨酰谷氨酰胺用活性炭 吸附纯化， 然后用有机溶剂沉淀， 再用色谱柱分离 纯化， 最后用有机溶剂析晶， 得到高纯度的丙氨酰 谷氨酰胺化合物。 本方法工艺简便易行， 反应条件 温和， 收率高， 纯度高， 提高了制剂的产品质量， 减 少了毒副作用， 保证了丙氨酰谷氨酰胺化合物在 制备肠外营养药物应用中的安全， 适合于规模化 大生产。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李享 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 。
6、1/1 页 2 1. 一种如下所示结构的丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法， 其特征在于先将丙氨酰谷氨酰胺用活性炭吸附纯化， 然后用有机溶剂沉淀， 再用色谱 柱分离纯化， 最后用有机溶剂析晶， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺化合物 ； 其中所述的色谱 柱分离纯化条件为 ： 以体积比 3 1 的水和乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.5-5.0ml/min， 柱温 30-40。 2. 根据权利要求 1 所述丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法， 其特征在于制备步骤包 括 ： （1） 将丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于纯化水中， 加入溶液总体积 0.2-0.4 g/ml 的活性炭， 60-70搅拌 。
7、20-30min， 趁热过滤脱炭， 收集滤液 ； （2） 向所得滤液中缓慢滴加入有机溶剂， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固 体 ； （3） 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比为 3 1 的水和乙腈 的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.5-5.0ml/min， 柱温 30-40， 分段收集 流分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； （4） 将洗脱液减压浓缩至 1/2 的体积， 加入有机溶剂， 搅拌， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 滤饼用有机溶剂洗涤， 60减压干燥 122 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺。 3. 根据权利要求 2 所。
8、述的精制方法， 其特征在于所述的有机溶剂为体积比为 1 3 的 三氯甲烷和乙腈的混合溶剂。 权 利 要 求 书 CN 102093250 B 2 1/6 页 3 一种丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法 技术领域 0001 本发明涉及一种丙氨酰谷氨酰胺化合物及其新方法， 属于医学技术领域。 背景技术 0002 丙 氨 酰 谷 氨 酰 胺 又 名 N-(2)-L- 丙 氨 酰 -L- 谷 酰 胺，英 文 名 L-alanyl-L-glutamine， 化学名称为N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺， 分子式C8H15N3O4， 分子量 217.22， 结构式为 ： 0003 0004 为白色或类白色结晶。
9、性粉末， 无臭 ； 有引湿性， 在水中易溶， 在甲醇中几乎不溶， 在 冰醋酸中略溶。 0005 丙氨酰谷氨酰胺作为肠外营养药物， 可用于提高患者细胞免疫功能， 有效降低危 重患者的感染风险， 尤其对严重感染、 恶性肿瘤等重伤病人的治疗和恢复有重要作用， 可缩 短患者总住院时间。临床研究表明， 使用 Gln 对严重代谢疾病 ( 如烧伤 / 外伤 / 大手术、 急慢性感染、 骨髓移植和多器官功能障碍综合症 )、 肠道功能不全 ( 如肠炎短肠综合症和放 化疗所致粘膜损害 )、 免疫缺乏综合症 ( 如艾滋病、 危重病或骨髓移植后伴发的免疫功能低 下 ) 等疾病具有良好的治疗效果。丙氨酰谷氨酰胺的使用能。
10、较好地维持血循环中淋巴细胞 总数， 缓解手术及化疗导致的免疫抑制， 这可能与 Ala-Gln 提供给淋巴细胞充足的呼吸燃 料有关。 丙氨酰谷氨酰胺作为肠外营养的使用是十分有效 的， 能减轻胃肠癌手术化疗患者 机体的蛋白分解， 有效地改善氮平衡， 维持血循环中淋巴细胞的数目， 从而改善患者营养状 况， 增强机体对手术及化疗的耐受性。 0006 丙氨酰谷氨酰胺的作用机制为 ： L- 谷氨酰胺 (L-Glutamine， Gln) 是一种体内必需 的氨基酸， 也是人体内含量最多的氨基酸， 在蛋白质、 核酸合成中具有重要作用。 Gln在血浆 中的含量高达 0.8-0.9 毫摩尔 / 升， 约占游离氨基。
11、酸总量的 20。Gln 是肠粘膜上皮细胞、 肾小管上皮细胞和免疫活性细胞等代谢活跃细胞的能量来源， 被认为是机体的氮源运载工 具， 在体内各组织间转运氮源， 发挥清除氨等有毒物质等重要功能。 N-(2)-L-丙氨酰-L-谷 酰胺为营养物质， 体内降解出 L- 谷氨酰胺， 供给机体物质合成或能量消耗使用。 0007 丙氨酰谷氨酰胺首先由德国森尤斯 (Fresenius， AG) 研制， 1999 年进口到中国， 2004 年我国厦门大学的赵玉芬教授等科研人员采用全新的工艺路线， 合成出丙氨酰谷氨酰 胺， 这种原创性的合成方法具有工艺稳定、 原料易得、 副反应成分低、 产品安全性好等优点， 但得到。
12、的丙氨酰谷氨酰胺的纯度还有待进一步的提高从而增强药物临床使用的安全性。 0008 中国发明专利 CN1392156 公开了一种丙氨酰谷氨酰胺合成方法， N 端保护的氨基 酸与三苯基磷、 六氯乙烷在有机溶剂中反应形成活泼酯 ； 活泼酯与谷氨酰胺在有机溶剂和 说 明 书 CN 102093250 B 3 2/6 页 4 无机碱水溶液的混合溶液中进行， 用无机酸酸化， 然后脱去 N 端保护基团。其原料极为便 宜， 合成工艺简单， 中间产物不需要分离和提纯处理， 产物容易分离提纯 ； 反应结束生成住 主产物丙 - 谷二肽和副产物三苯基氧磷。 0009 CN1786019A 公开了一种丙氨酰谷氨酰胺的制。
13、造方法， 包括将酯化的 L- 乳酸在催 化剂存在的条件下， 与氯化亚砜反应， 得 2- 氯丙酸酯 ； 在 2- 氯丙酸酯中加碱液进行水解， 得2-氯丙酸 ； 将2-氯丙酸与氯化剂反应， 得2-氯丙酰氯 ； 将2-氯丙酰氯与L-谷氨酰胺反 应， 得 N-(2- 氯 )- 丙酰基 - 谷氨酰胺 ； 将 N-(2- 氯 )- 丙酰基 - 谷氨酰胺与氨水进行反应， 得丙 - 谷二肽产品等步骤。但在采用该合成方法的工业化生产工艺中， 由于得到的反应液 中含有氯化铵等杂质， 需要进行结晶除盐。目前关于丙氨酰谷氨酰胺生产工艺中除盐的常 规方法为采取醇 ( 如甲醇、 乙醇、 异丙醇等 ) 加水的方式进行结晶除。
14、盐。 0010 CN1164611C、 CN1302008C、 CN1315868C、 CN1680428A、 CN10162938B 也公开了丙氨 酰谷氨酰胺合成方法。但是用以上合成方法制备的丙氨酰 -L- 谷氨酰胺相关杂质较多且单 一杂质大于 0.5， 很难直接用于药品注射液的配制。相关杂质主要有 ： 丙氨酸， 谷氨酰胺， 焦谷氨酸， 丙氨酰 -L- 环谷氨酰胺， 和三苯基氧磷等。依然需要一种简单易行的精制甘氨 酰 -L- 谷氨酰胺的方法以提供高纯度的丙氨酰谷氨酰胺化合物以解决上述问题。本精制方 法操作简单， 环境污染小， 成本低， 满足了药物临床安全性对丙氨酰谷氨酰胺化合物高纯度 的要求。
15、。 0011 针对这些不纯的产品， 现有技术没有公开纯化丙氨酰谷氨酰胺化合物的方法， 实 际上， 本领域具有一般经验的技术人员清楚地知道在获得高纯度化合物方面面临的种种困 难， 所有这些绝非现有一般分离纯化的理论就可以预期解决的， 需要克服许多难题。 发明内容 0012 申请人在大量现有文献的基础上， 通过大量筛选的实验， 发现上述文献 以及一般 的纯化分离方法例如结晶等方法难于获得高纯度高产率的化合物， 而各种分离纯化方法以 及多种条件参数又存在多种多样组合的可能性和不可预测性。 本发明人经过长期认真的研 究， 令人惊奇地发现， 经过组合应用特定的方法并优化参数后可以提供高纯度高产率的丙 氨。
16、酰谷氨酰胺化合物， 从而完成了本发明。 0013 本发明的目的在于提供一种丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法， 其通过活性炭吸 附、 有机溶剂沉淀、 色谱柱吸附分离纯化和有机溶剂析晶达到精制纯化的目的， 最终产物纯 度较现有产品有很大的提高， 优化了制剂产品质量， 减少了毒副作用， 保证了临床用药的安 全。 0014 本发明解决的技术方案如下 ： 0015 一种如下所示结构的丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法， 0016 0017 先将丙氨酰谷氨酰胺用活性炭吸附纯化， 然后用有机溶剂沉淀， 再用色谱柱分离 说 明 书 CN 102093250 B 4 3/6 页 5 纯化， 最后用有机溶剂析晶， 得到。
17、高纯度的丙氨酰谷氨酰胺化合物。 0018 在本发明的一个方面， 优选地， 上述方法中所述的活性炭吸附纯化包括加热搅拌 的步骤， 其中加热优选的温度为 30 90， 更优选的温度为 40 80， 特别优选的温度为 60 70。 0019 在本发明的一个方面， 药物的分离和纯化方法包括吸附方法， 如使用活性炭。不 幸的是， 除了去除颜色和其它不需要的物质外， 活性炭还不可逆地吸附所感兴趣的药物， 这 导致产率明显降低。本发明证实活性炭可用于丙氨酰谷氨酰胺的纯化， 其中活性炭的使用 量为溶液总体积的 0.05-4 (g/ml)， 优选为 0.1-1 (g/ml)， 特别优选为 0.2-0.4 (g/。
18、 ml)。 0020 在本发明的一个方面， 色谱柱的直径为约 0.1 至约 200cm， 优选为至少 5cm。此方 法中色谱柱长度范围优选为约 10 厘米至约 100 厘米， 更优选长度范围为约 20 厘米至约 30 厘米， 最优选的长度为 25 厘米。 0021 一般而言， 分离纯化过程中， 色谱柱填料可以为硅胶、 氧化铝或大孔树脂等， 所用 硅胶的粒径可为100200目或200300目 ； 所用氧化铝可为中性氧化铝 ； 所用的大孔树 脂型号可以为 AB-8、 D101、 DA-201、 HPD400、 HPD100、 D1300， 本发明人发现硅胶柱对本品纯 化有着独到分离的效果， 而且成。
19、本相对较低， 而氧化铝和大孔树脂柱对产品的纯度并没有 明显改善。 0022 本发明人在上述基础上进行大量的优化实验， 筛选得到了适宜的流动相， 因此 在本发明的一个方面， 优选地， 上述精制方法中所述的色谱柱纯化条件为 ： 以体积比为 3 1 的水和乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.5-5.0ml/min， 柱温 30-40。 0023 在本发明的一个方面， 作为优选， 每次纯化药物的质量与色谱柱填料的质量之比 为 1 10-200， 优选质量比为 1 15-100。流动相 ( 洗脱剂 ) 的用量只要满足将药物基本 上完全洗脱即可， 洗脱后的流分分段收集， 不同段的流分。
20、中药物的含量不同， 为了获得高纯 度的药物 ( 纯度大于 99.5 )， 需将药物含量大于 85的流分合并， 优选将药物含量大于 90的流分合并。优选地， 含量大于 90的流分基本上连续流出。 0024 作为本发明一优选实施方案， 本发明丙氨酰谷氨酰胺化合物的制备步骤包括 ： 0025 (1) 将丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于纯化水中， 加入溶液总体积 0.2-0.4 (g/ml) 的 活性炭， 60-70搅拌 20-30min， 趁热过滤脱碳， 收集滤液 ； 0026 (2) 向所得滤液中缓慢滴加入有机溶剂， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰 胺固体 ； 0027 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固。
21、体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比为 3 1 的水和 乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.5-5.0ml/min， 柱温 30-40， 分段 收集流分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 0028 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入有机溶剂， 搅拌， 逐渐析出固体， 冷藏 过夜， 过滤， 滤饼用有机溶剂洗涤， 60减压干燥 122 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰 胺。 0029 在本发明的一个方面， 优选地， 上述精制方法中所述的有机溶剂选自三氯甲烷、 二 氯甲烷、 乙腈、 甲醇、 异丙醇、 环己烷、 乙酸乙酯、 异丙醚、 石油醚、 乙醚中的一种或。
22、多种， 优选 说 明 书 CN 102093250 B 5 4/6 页 6 体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂。优选地， 所述有机溶剂与滤液的体积比为 1 1 10 1， 优选地为 3 1 7 1。 0030 在本发明的一个方面， 提供了本发明精制方法的丙氨酰谷氨酰胺化合物在制备肠 外营养药物中的应用。 0031 本发明提供的丙氨酰谷氨酰胺化合物的精制方法， 通过活性炭吸附、 有机溶剂沉 淀、 色谱柱吸附分离纯化和有机溶剂析晶， 大大提高了丙氨酰谷氨酰胺的纯度和含量， 优化 了制剂的产品质量， 减少了毒副作用， 保证了临床用药的安全， 而且与现有技术相比， 本方 法工艺简便易行， 反。
23、应条件温和， 成本低， 收率高， 纯度高， 适合于规模化连续大生产。上述 不合格的或从市 面上回收来的丙氨酰谷氨酰胺化合物， 均可以采用本发明的方法， 进行精 制。 0032 有文献报道了一些大孔树脂为填充剂的层析柱或离子树脂交换柱的纯化方法， 大孔树脂刚性不强、 易破碎以及致孔剂等合成原料或溶剂去除不净而残留， 易流入药液造 成二次污染， 对其预处理、 再生纯化工艺缺乏规范性指标， 使用离子树脂交换柱则是成本太 高， 还需要柱子的再生活化， 较为复杂， 而且会引入大量的钠离子， 纯度并没有明显改善。 本 发明人发现本发明的硅胶柱方法显著优于这些纯化方法。 具体实施方式 0033 以下通过具体。
24、实施方式进一步解释或说明本发明内容， 但实施例不应被理解为对 本发明保护范围的限制。 0034 实施例 1 丙氨酰谷氨酰胺的精制 0035 (1)将100g纯度为97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于800ml纯化水中， 加入1.6g 的活性炭， 60搅拌 20min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0036 (2) 向所得滤液中缓慢滴加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 2400ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0037 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比 3 1 的水和乙 腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.5。
25、ml/min， 柱温 30， 分段收集流分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 0038 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈 的混合溶剂 800ml， 60搅拌 1h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 12 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺 93.6g， 纯度为 99.9， 收率为 96.0。 0039 实施例 2 丙氨酰谷氨酰胺的精制 0040 (1) 将 100g 纯度为 97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品 1000ml 纯化水中， 加入 4g 的活 性炭，。
26、 70搅拌 30min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0041 (2) 向所得滤液中缓慢加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 7000ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0042 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比 3 1 的水和乙 腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 5.0ml/min， 柱温 40， 分段收集流分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 说 明 书 CN 102093250 B 6 5/6 页 7 0043 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈 的混。
27、合溶剂 800ml， 60搅拌 2h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 10 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺 92.7g， 纯度为 99.8， 收率为 95.0。 0044 实施例 3 丙氨酰谷氨酰胺的精制 0045 (1) 将 100g 纯度为 97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于 1000ml 纯化水中， 加入 3g 的活性炭， 65搅拌 20min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0046 (2) 向所得滤液中缓慢加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 5000ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得。
28、到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0047 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比为 3 1 的水和 乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 4.0ml/min， 柱温 35， 分段收集流 分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 0048 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和 乙腈 的混合溶剂 800ml， 60搅拌 2h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 12 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺 91.0g， 纯度为 99.9，。
29、 收率为 93.3。 0049 实施例 4 丙氨酰谷氨酰胺的精制 0050 (1) 将 100g 纯度为 97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于 1000ml 纯化水中， 加入 4g 的活性炭， 60搅拌 30min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0051 (2) 向所得滤液中缓慢加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 4000ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0052 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比为 3 1 的水和 乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为硅胶， 流速为 2.8ml/min， 柱温 40， 分段收集流 分， 合并。
30、含量大于 90的洗脱液 ； 0053 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈 的混合溶剂 800ml， 60搅拌 2h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 12 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺 91.5g， 纯度为 99.9， 收率为 93.8。下面列举现有技术类似方法或本发明筛选过程的部 分对比实施例， 以说明本发明的技术效果。 0054 对比例 1 丙氨酰谷氨酰胺的精制 ( 不用色谱柱 ) 0055 (1)将100g纯度为97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于。
31、800ml纯化水中， 加入1.6g 的活性炭， 60搅拌 20min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0056 (2) 向所得滤液中缓慢滴加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 2400ml， 搅拌， 产生沉淀， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为13的三氯甲烷 和乙腈的混合溶剂 100ml洗涤， 60减压干燥12小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺91.8g， 纯度为97.9， 收 率为 92.3。 0057 对比例 2 丙氨酰谷氨酰胺的精制 ( 使用 DA-201 层析柱 ) 0058 (1) 将 100g 纯度为 97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品 1000ml 纯化水中， 加入 4g 的活 。
32、性炭， 70搅拌 30min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 说 明 书 CN 102093250 B 7 6/6 页 8 0059 (2) 向所得滤液中缓慢加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂 7000ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0060 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比 3 1 的水和乙 腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为 DA-201， 流速为 5.0ml/min， 柱温 40， 分段收集流 分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 0061 (3) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三。
33、氯甲烷和乙腈 的混合溶剂 800ml， 60搅拌 2h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 10 小时， 得到高纯度的丙氨酰谷氨酰胺 90.1g， 纯度为 98.2， 收率为 90.8。 0062 对比例 3 丙氨酰谷氨酰胺的精制 ( 使用氧化铝交换柱 ) 0063 (1) 将 100g 纯度为 97.4的丙氨酰谷氨酰胺粗品溶于 1000ml 纯化水中， 加入 3g 的活性炭， 65搅拌 20min， 过滤脱碳， 收集滤液 ； 0064 (2) 向所得滤液中缓慢加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈的混合溶剂。
34、 5000ml， 搅拌， 产生沉淀， 过滤得到丙氨酰谷氨酰胺固体 ； 0065 (3) 将丙氨酰谷氨酰胺固体上柱， 通过色谱柱分离纯化， 以体积比为 3 1 的水和 乙腈的混合溶剂为流动相， 固定相填料为氧化铝， 流速为 4.0ml/min， 柱温 35， 分段收集 流分， 合并含量大于 90的洗脱液 ； 0066 (4) 将洗脱液减压浓缩至约 1/2 的体积， 加入体积比为 1 3 的三氯甲烷和乙腈 的混合溶剂 800ml， 60搅拌 2h， 逐渐析出固体， 冷藏过夜， 过滤， 用体积比为 1 3 的三氯 甲烷和乙腈的混合溶剂 100ml 洗涤， 60减压干燥 12 小时， 得到高纯度的丙氨。
35、酰谷氨酰胺 90.1g， 纯度为 98.0， 收率为 90.7。 0067 上述实施例和对比例从不同方面充分说明了本发明特定组合方法的优越性， 尤其 是包括硅胶柱的色谱条件以及优化后的参数， 带来了意想不到的效果， 是理论上无法合理 预期的。 不受理论限制， 可能是各种纯化方法对药物中不同杂质的除去效果不同， 本发明提 供的精制方法具有实质的特点和显著的进步， 取得的意想不到的技术效果， 获得了高产率 高纯度的产品。 0068 应该理解， 虽然本发明结合实例进行了详细的说明， 但上述说明旨在举例说明， 而 不以任何方式限制其发明内容。对本领域技术人来说， 基于本文的说明可以最大程度地利 用本发明， 并可在没有脱离本发明的权利要求范围或精神内进行多种修改或修饰。本申请 所引用的各个参考文献， 在此全文引入作为参考。 说 明 书 CN 102093250 B 8 。