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1、(10)授权公告号 CN 201762308 U (45)授权公告日 2011.03.16 CN 201762308 U *CN201762308U* (21)申请号 201020209343.6 (22)申请日 2010.05.31 C12M 1/00(2006.01) C12N 5/071(2010.01) G01N 33/53(2006.01) G01N 21/64(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) (73)专利权人 东北农业大学 地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材 街 59 号 (72)发明人 李庆章 林叶 侯晓明 (74)专利代理机构 哈尔滨市松花江。
2、专利商标事 务所 23109 代理人 岳泉清 (54) 实用新型名称 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒 (57) 摘要 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒， 它涉 及试验中使用的试剂盒。它解决了在进行乳腺上 皮细胞分离鉴定试验的过程中配制和准备试剂所 带来的实验过程复杂化的问题， 以及所制备出的 试剂本身给实验结果带来的稳定性和可靠性不高 的缺点。它由外包装盒、 七个试剂瓶和铜网组成， 七个试剂瓶分别为消化液试剂瓶、 DMEM/F12 基础 培养液试剂瓶、 D-Hank s 溶液试剂瓶、 胰蛋白酶 消化液试剂瓶， BSA 试剂瓶、 TBST 试剂瓶和荧光标 记的角蛋白 18 抗体试剂瓶， 其中 。
3、D-Hank s 溶液 试剂瓶和 TBST 试剂瓶的顶盖为冲洗盖， 其他的顶 盖为密封盖 ； 所述的七个试剂瓶和铜网位于外包 装盒内。乳腺上皮细胞分离鉴定试剂盒中的试剂 进行消化法快速分离获得乳腺上皮细胞， 并通过 进行细胞培养及纯化， 并鉴定其纯度。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)实用新型专利 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 1 页 CN 201762314 U1/1 页 2 1. 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒， 其特征在于它由外包装盒 (9)、 七个试剂瓶 和铜网 (8) 组成， 所述的七个试剂瓶分别为消化液试剂瓶 (1)、 DMEM/。
4、F12 基础培养液试剂 瓶 (2)、 D-Hank s 溶液试剂瓶 (3)、 胰蛋白酶消化液试剂瓶 (4)， BSA 试剂瓶 (5)、 TBST 试剂 瓶 (6) 和荧光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶 (7)， 其中 D-Hank s 溶液试剂瓶 (3) 和 TBST 试 剂瓶 (6) 的顶盖均为冲洗盖， 所述的冲洗盖是由上部锥形管和下部圆柱形盖壁构成一个整 体的冲洗盖， 下部圆柱形盖壁内侧设置有与瓶体连接的连接机构， 上部锥形管的顶端设置 有冲洗口， 瓶体和冲洗盖内部构成一个储液腔 ； 消化液试剂瓶 (1)、 DMEM/F12 基础培养液试 剂瓶 (2)、 胰蛋白酶消化液试剂瓶 (4)， B。
5、SA 试剂瓶 (5) 和荧光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶 (7) 的顶盖均为密封盖 ； 所述的七个试剂瓶和铜网 (8) 位于外包装盒 (9) 内。 2. 根据权利要求 1 所述的便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒， 其特征在于铜网 (8) 为 200 至 600 目的铜网。 3. 根据权利要求 2 所述的便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒， 其特征在于铜网 (8) 为 400 目的铜网。 4. 根据权利要求 1 所述的便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒， 其特征在于七个试剂 瓶的瓶口向上放置。 权 利 要 求 书 CN 201762308 U CN 201762314 U1/2 页 3 便于乳腺上。
6、皮细胞分离鉴定的试剂盒 技术领域 0001 本实用新型涉及一种试验中使用的试剂盒。 背景技术 0002 乳腺上皮细胞是泌乳生物学以及乳腺医学中常用的细胞类型， 设计一种快速稳定 的分离培养并快速鉴定乳腺上皮细胞的试剂盒是必要的。 在现阶段在进行乳腺上皮细胞分 离鉴定时， 需要进行试剂的配制和准备， 对于实验人员来说配制和准备试剂增加了实验过 程中的复杂性。并且因为制作实验试剂的过程中熟练程度和认知水平的不同， 可能配制出 的试剂也并不相同， 从而最终得到的结果稳定性和可靠性也不同。 实用新型内容 0003 本实用新型为了解决在进行乳腺上皮细胞分离鉴定试验的过程中配制和准备试 剂所带来的实验过程。
7、复杂化的问题， 以及所制备出的试剂本身给实验结果带来的稳定性和 可靠性不高的缺点， 而提出了一种便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒。 0004 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒由外包装盒、 七个试剂瓶和铜网组成， 所述 的七个试剂瓶分别为消化液试剂瓶、 DMEM/F12 基础培养液试剂瓶、 D-Hank s 溶液试剂瓶、 胰蛋白酶消化液试剂瓶， BSA 试剂瓶、 TBST 试剂瓶和荧光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶， 其 中 D-Hank s 溶液试剂瓶和 TBST 试剂瓶的顶盖均为冲洗盖， 所述的冲洗盖是由上部锥形 管和下部圆柱形盖壁构成一个整体冲洗盖， 下部圆柱形盖壁内侧设置有瓶体连接的连接。
8、机 构， 上部锥形管的顶端设置有冲洗口， 瓶体和冲洗盖内部构成一个储液腔， 消化液试剂瓶、 DMEM/F12 基础培养液试剂瓶、 胰蛋白酶消化液试剂瓶， BSA 试剂瓶和荧光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶的顶盖均为密封盖 ； 所述的七个试剂瓶和铜网位于外包装盒内。 0005 乳腺上皮细胞分离鉴定试剂盒中的试剂进行消化法快速分离获得乳腺上皮细胞， 并通过进行细胞培养及纯化， 并鉴定乳腺上皮细胞纯度。 较传统方法有效率高、 结果稳定可 靠等优势。用于实验室快速稳定地从哺乳动物乳腺组织中分离得到高纯度乳腺上皮细胞， 操作简便的试剂盒。 附图说明 0006 图 1 是本实用新型的结构示意图。 具体实施。
9、方式 0007 具体实施方式一 ： 结合图 1 说明本实施方式， 本实施方式由外包装盒 9、 七个 试剂瓶和铜网8组成， 所述的七个试剂瓶分别为消化液试剂瓶1、 DMEM/F12基础培养液试剂 瓶 2、 D-Hank s 溶液试剂瓶 3、 胰蛋白酶消化液试剂瓶 4， BSA 试剂瓶 5、 TBST 试剂瓶 6 和荧 光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶 7， 其中 D-Hank s 溶液试剂瓶 3 和 TBST 试剂瓶 6 的顶盖均 为冲洗盖， 所述的冲洗盖是由上部锥形管和下部圆柱形盖壁构成一个整体冲洗盖， 下部圆 说 明 书 CN 201762308 U CN 201762314 U2/2 页 。
10、4 柱形盖壁内侧设置有瓶体连接的连接机构， 上部锥形管的顶端设置有冲洗口， 瓶体和冲洗 盖内部构成一个储液腔， 消化液试剂瓶 1、 DMEM/F12 基础培养液试剂瓶 2、 胰蛋白酶消化液 试剂瓶 4， BSA 试剂瓶 5 和荧光标记的角蛋白 18 抗体试剂瓶 7 的顶盖均为密封盖 ； 所述的七 个试剂瓶和铜网 8 位于外包装盒 9 内。 0008 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式一不同点在于铜网 8 为 200 至 600 目的铜网， 其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。 0009 具体实施方式三 ： 本实施方式与具体实施方式二不同点在于铜网 8 为 400 目 的铜网， 其。
11、它组成和连接方式与具体实施方式二相同。 0010 具体实施方式四 ： 本实施方式与具体实施方式一不同点在于七个试剂瓶的 瓶口向上放置。其它组成和连接方式与具体实施方式一相同。 0011 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒的操作步骤 ： 0012 （1） 新鲜获得的哺乳动物乳腺组织用氟康唑注射液 （或 75% 的无水乙醇） 清洗乳腺 组织 2 次， 再用 D-Hank s 溶液试剂瓶 3 对哺乳动物乳腺组织清洗 3 次。 0013 （2） 将清洗后的乳腺组织剔除脂肪组织， 留下富含乳腺上皮细胞的实体组织， 然后 将实体组织尽量剪碎成约 1mm3的小块。 0014 （3） 将剪碎后的乳腺组织小块用 。
12、D-Hank s 溶液试剂瓶 3 清洗干净。 0015 （4） 清洗后的乳腺组织小块通过胰蛋白酶消化液试剂瓶 4 中的消化液进行消化。 0016 （5） 消化后的组织经 400 目铜网过滤， 滤液进行离心后收集沉淀， 此沉淀即为乳腺 上皮细胞。 0017 （6） 收获的乳腺上皮细胞经 DMEM/F12 基础培养液试剂瓶 2 中的 DMEM/F12 基础培 养液悬浮， 使细胞分散均匀后， 接种在细胞培养瓶或培养板中， 置于 37、 5%CO2培养箱中培 养。 0018 （7） 乳腺上皮细胞纯化 ： 待细胞充分贴壁后， 再用 D-Hank s 溶液试剂瓶 3 对其清 洗 3 次， 胰蛋白酶消化液试。
13、剂瓶 4 中的加胰蛋白酶消化液， 37消化， 置于倒置显微镜下观 察， 待成纤维细胞细胞质回缩， 细胞间隙增大， 脱离瓶壁时， 立即加 DMEM/F12 基础培养液试 剂瓶 2 中的 DMEM/F12 培养液终止消化， 将液体倾出。然后在培养物中加入胰蛋白酶消化液 试剂瓶 4 中的胰蛋白酶消化液， 37继续消化 5min， 吸管轻轻吹打悬浮细胞， 离心， 重悬细 胞， 以适当密度接种于培养瓶中继续培养经过 3 次选择传代， 即可得到纯化的乳腺上皮细 胞。 0019 （8） 乳腺上皮细胞鉴定 ： 取一块洁净的盖玻片， 放入 6 孔板中接种细胞， 制作乳腺 上皮细胞爬片。待细胞长成 80% 汇合单。
14、层时， 倒掉培养液， 用预冷的 TBST 试剂瓶 6 冲洗细 胞 2 次。用 1ml 甲醇于 4固定 10min。再用 TBST 试剂瓶 6 冲洗细胞 3 次， 每次 5min。用 BSA 试剂瓶 5 中的 BSA 封闭液 37封闭 60min。去除封闭液， 用荧光标记的角蛋白 18 抗体 试剂瓶 7 中的荧光标记的角蛋白 18 抗体溶液作用 60min。去除抗体， 用 TBST 试剂瓶 6 冲 洗细胞 3 次， 每次 5min。封片后用激光扫描共聚焦显微镜或荧光显微镜观察细胞角蛋白 18 的特异性表达来鉴定乳腺上皮细胞， 有荧光信号的细胞为乳腺上皮细胞。 0020 本实用新型内容不仅限于上述各实施方式的内容， 其中一个或几个具体实施方式 的组合同样也可以实现发明的目的。 说 明 书 CN 201762308 U CN 201762314 U1/1 页 5 图 1 说 明 书 附 图 CN 201762308 U 。