技术领域
本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，具体涉及脆弱拟杆菌在制备促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的组合物中的应用。
背景技术
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称，其具有缓解乳糖不耐症、调整肠道微生态、增强自身免疫力等多种功效，目前越来越多的研究人员聚焦于益生菌，逐渐意识到它们的巨大功效。
在益生菌中，受到广泛关注的双歧杆菌和乳酸菌，在摄入人和动物体内后，它们的特定菌株能够在肠粘膜上定居，在肠道内建群并且防止有害微生物在其上粘附，能通过保持肠内自然微生物区系，促进生物个体健康的可生长的微生物制剂，帮助维持人和动物的健康。
脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)作为一种革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染，有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，其分为产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存于结肠中，此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。目前，研究较多的是脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌，当宿主粘膜受损时，可侵犯粘膜下层，引起感染，也可经血液流动，引起身体其它器官如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织化脓性感染并伴发脓肿和引起急慢性腹泻等症状；此外，脆弱拟杆菌对结肠、直肠癌的发生也有促进作用。
然而，脆弱拟杆菌并非只是一种条件致病菌。1991年，张季阶发表了《一种无毒脆弱拟杆菌的分离鉴定》，其报导了关于1983年9月从一个发育良好的婴儿粪便中分离出量大而又较纯的细菌，经过一系列的鉴定、基础试验和临床应用观察，该细菌属于脆弱拟杆菌群中的一株无毒菌，是人体的益生菌，并定名为BF839菌株。由此，研究发现了，脆弱拟杆菌也是一种益生菌。但是，脆弱拟杆菌作为一种益生菌，并且在制备促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的组合物的相关应用，目前尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供脆弱拟杆菌在促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的组合物中的应用，所述的脆弱拟杆菌保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为CGMCC NO.7280，分类命名为Bacteroides fragilis。
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：
提供脆弱拟杆菌在制备促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的组合物中的应用。
其中，所述组合物为至少含有脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280的食品或药物。
其中，所述组合物选自奶粉、凝乳、冰激凌、奶基发酵食品、发酵谷类食品、婴儿食品或宠物食品中的任意一种。
其中，所述组合物为丸剂、片剂、颗粒制剂、胶囊、口服液或者管饲制剂。
其中，所述组合物为含有所述脆弱拟杆菌的液体细菌悬浮液。
其中，所述脆弱拟杆菌在所述组合物中的含量为108~1010cfu /ml。
本发明的有益效果是：
本发明发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域。本发明通过实验证明，脆弱拟杆菌安全无毒，对于促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长具有很好的效果，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食用和药用前景。脆弱拟杆菌作为一种益生菌，可用于制备促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的食品或药物组合物，进而为临床提供一种适合人体服食的保健和预防良品。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1 脆弱拟杆菌菌液的制备
（1）由婴儿粪便中分离脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280
按“正常菌群检查法”称取0.5克大便，置于先装有4.5ml生理盐水的试管中，以此连续稀释成10-1~10-6，由高稀积度向低稀积度滴到Bd培养基平板上，置于厌氧产气盒中加厌氧产气袋进行厌氧培养。置37℃，2~7天后开罐检查。选取单一菌落进行纯培养、染色镜检、培养特性、生理生化检测。
（2）脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280的增菌培养及菌液制备
选取纯化后的单个菌落接种于改良的胰蛋白胨肉汤中进行增菌培养，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min，离心15min，去上清，沉淀物用生理盐水洗涤后，沉淀物用生理盐水稀释，用麦氏比浊管做菌数测定，稀释至108 cfu /ml，109 cfu /ml，1010 cfu /ml，保存备用。
实施例2 脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280的毒力实验
采用实施例1制备的脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280菌液进行以下实验：
（1）小鼠急性毒力实验
取体重22±2克C57BR/C小鼠（雌雄各半）60只，分成高剂量组、低剂量组和对照组，各组20只。高剂量组每只小鼠每天灌胃1012 cfu /ml菌液0.5ml，低剂量组每天灌胃109 cfu /ml菌液0.5ml，对照组每天灌胃0.5ml生理盐水。连续观察14天。
实验结果：小鼠正常生长，未见死亡，LD50测不出。
（2）大鼠毒力实验
取150±20克SD大鼠30只（雌雄各半），分为3组：高低剂量组和对照组。高剂量组每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml，低剂量组每天灌胃109cfu/ml菌液2ml，对照组每天灌胃2ml生理盐水。连续观察14天，14天后抽静脉血测血象、肝肾功。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。
实验结果：均未见明显异常。
（3）恒河猴毒力实验
取恒河猴10只（雌雄各半），分为2组：高低剂量组和对照组。高剂量组每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml，低剂量组每天口服109cfu/ml菌液100ml。连续观察60天。14天、30天、45天、60天后分别抽静脉血测血象、肝肾功，测心电图。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。
实验结果：均未见明显异常。
实施例3 脆弱拟杆菌促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的实验
采用实施例1制备的脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280菌液进行以下分组实验：
A组：106cfu/ml的脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上，用涂布棒涂布均匀；
B组：106cfu/ml的双歧杆菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上，用涂布棒涂布均匀；
C组：106cfu/ml的乳酸杆菌菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上，用涂布棒涂布均匀；
D组：106cfu/ml的双歧杆菌菌液100μL+106cfu/ml的脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上，用涂布棒涂布均匀；
E组：106cfu/ml的乳酸杆菌菌液100μL+106cfu/ml的脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280菌液100μL滴于胰蛋白胨血平板上，用涂布棒涂布均匀；
将所有平板放入厌氧培养罐，厌氧培养48小时开罐做菌落计数。
实验结果：D组中的双歧杆菌明显多于B组，E组中的乳酸杆菌明显多于C组，A、D、E组中的脆弱拟杆菌无明显差异。
实验结果证明，脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280能够促进双歧杆菌以及乳酸杆菌的生长。
实施例4 脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280促进双歧杆菌及乳酸杆菌生长的实验
采用实施例1制备的脆弱拟杆菌菌液进行以下实验：
（1）造模前动物禁食给水，随后用氨苄青霉素钠 （加生理氯化钠溶液配制）0.2g，灌胃，每只0.5ml，Bid，引起小鼠腹泻，排水样或糊状便。
给药组：将腹泻小鼠分别用108 cfu /ml、109 cfu /ml、1010 cfu /ml的菌液灌胃，每次0.5ml，Bid；
空白对照组：给等体积的生理盐水灌胃，Bid；
每组各20只小鼠；
（2）造模前取10只小鼠的新鲜大便作粪便菌群分析，治疗后第5天，各组活杀10只小鼠，取盲肠内容物作菌群分析，结果见表1：
表1. 肠道菌群分析 Lg g-1， n=10
*和空白对照组相比P<0.05。
实验结果说明，双歧杆菌、乳酸杆菌在脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280的作用下数量显著增加，脆弱拟杆菌CGMCC NO.7280能够促进双歧杆菌及乳酸杆菌的生长。