应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮的方法 本发明涉及一种应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮的方法。特别是一种应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮IIA、隐丹参酮，丹参酮I的方法。
丹参(Salivia miltiorrhiza Bunge)是我国一种常用中药，在临床具有多方面的疗效，如镇痛、止痒，对治疗神经衰弱性失眠、晚期血吸虫病引起的肝硬变和脾肿大，浮肿、妇科疾病和黄疸型传染性肝炎的缩肝方面具有一定疗效，近年来的药理研究证明，丹参还具有改善冠状循环、抑制血栓性疾病的抗炎消肿的功效，已有成药上市。丹参酮类化合物是丹参脂溶性成分中的有效成份，是各种含丹参药物的指标成份。
但是如何快速、高效从丹参生药的粗提物中分离并纯化丹参酮类化合物是大家比较关心的一个课题。
本发明的目的是提供一种从丹参粗提物中分离纯化丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I的方法，该方法工艺简便，效率高，产品纯度大于95％。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：一种应用高速逆流色谱分离纯化丹参酮的方法，它包括：(1)，配制构成固定相、流动相的溶剂体系，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进样，根据检测器谱图接收目标成份，所述的溶剂体系由正己烷、乙醇、水组成，(2)，由(1)得到的部分分离物以高速逆流色谱仪作分离纯化，所述的溶剂体系为正已烷、乙酸乙酯、甲醇、水。
其中：正乙烷、乙醇、水体系地用量体积比为4∶2.3-2.7∶2；正已烷、乙酸乙酯、乙醇、水体系的用量体积比为3∶2∶2.5∶1.5-2。
下面结合实施例及附图对本发明作进一步说明。
图1为丹参粗提取物的半制备型高速逆流色谱的(HSCCC)色谱图
图2为分离图1中I部分的高速逆流色谱的(HSCCC)色谱图
图3为分离图1中III部分的高速逆流色谱的(HSCCC)色谱图
实施例1
1、将1000g的丹参生药在4000ml的65％乙醇水溶液中超声1小时后，浸泡24小时，抽滤出水溶液，在滤渣中再加入4000ml的65％乙醇水溶液，重复以上操作，共进行三次，将提取液合并用真空旋转蒸发器减压浓缩成浸膏，浓缩温度为40℃，减压干燥，干燥温度为40℃，得提取物205g。
2、将65％提取物溶于500ml水中，用500ml石油醚进行萃取。
即将提取物的水溶液与石油醚混合，摇匀，提取物溶入石油醚，移去石油醚，剩余部分再用石油醚萃取，重复操作10次，蒸干。得石油醚提取物101g。
3、用高速逆流色谱仪(北京市新技术应用研究所产品)分离丹参酮的石油醚提取物：
a、上样量200mg，溶剂体系及用量比为正已烷∶乙醇∶水＝4∶2.5∶2(体积)，柱体积：200ml，转速800rpm，上相为固定相，下相为流动相，流速2ml/min，固定相保留值：52％，检测：254nm，见图1
操作步骤是：按各种溶剂体积比配制溶剂体系，在分液漏斗中静置分层，分出上下相，上相为固定相，下相为流动相。使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进样，根据检测器谱图接收目标成份。
b、将a分离得到的“I”部分产物用HSCCC(高速逆流色谱仪)分离纯化。
色谱条件：柱体积：200ml；转速：800rpm
溶剂体系：正已烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝3∶2∶2.5∶1.5(体积比)
上样量：100mg，上相为固定相，下相为流动相，流速2ml/min，操作方法同a，固定相保留值：55％，见图2，图中A为隐丹参酮，B为丹参酮，C未知。
c、将分离得到的III部分产物用HSCCC分离纯化
色谱条件：柱体积：200ml，转速800rpm。
溶剂体系：正已烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝3∶2∶2.5∶2(体积比)
上样量80mg上相为固定相，下相为流动相，流速2ml/min，操作方法同a，固定相保留值：58％。见图3、图中D峰为丹参酮IIA。
按上述条件得到的丹参酮IIA，隐丹参酮及丹参酮I的纯度达99％以上。
以HPLC分析：色谱条件：柱子为Intersil ODS-3(4.6×15mm)，流动相为： 时间(min) 甲醇(％) 水(％) 0.01 75 25 10 75 25 22 100 0 25 100 0
和以紫外254nm下检测纯度。
本发明优点：本发明采用HSCCC色谱仪，并配以合适的溶剂体系，具有制备量大，分离效率高，分离时间短等特点，分离得到的丹参酮IIA、隐丹参酮及丹参酮I的纯度都在95％以上。