预防或修复皮肤损伤的试剂
发明背景
皮肤癌是在美国经诊断的最常见癌症，而且皮肤癌发病率持续上升。流行病学研究已经记录了大量的阳光暴露增加发展非黑素瘤皮肤癌的风险。光保护是主要的预防性健康策略。遮光剂(Sunscreen)是光保护的最重要形式之一。
一般而言，市售遮光剂中的活性成分主要是芳烃类，其从紫外辐射(UV)中吸收光线并经由自由基而降解或产生极具反应性的中间体。这样的分解产物对皮肤可能有害(Free Radical Biology & Medicine 2006, 41, 1205–12)。若干最近的研究已经提出现有遮光剂可能增加癌症风险(Int J. Environ. Res. Public Health 2007, 4(2), 126-31；FEBS Letters1993, 324, 309-13)。
目前需要预防或修复皮肤中的DNA损伤或预防或修复对皮肤的光损伤的试剂或包含所述试剂的组合物。还需要用作遮光剂的试剂或组合物。还需要通过独特作用机制起作用或在较低浓度时有效或产生无毒光产物或较少有毒光产物或较低浓度光产物的试剂。
发明概述
与市场上的现有试剂和组合物(例如遮光剂)相比，本发明的试剂和组合物具有独特作用机制。本发明的试剂吸收紫外光并为皮肤提供光保护作用。产生的光产物通过增加DNA修复酶的细胞产量而启动机体的自然防御机制。因此，本发明提供具有提供光保护和刺激修复过程的双重作用的化合物和组合物。
在一个实施方案中，本发明提供的本发明化合物是下式I化合物或其盐：
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其中：
每个R1独立地为H、(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-，和两个R4基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；或
每个R4独立地为H、(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-，和两个R1基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；或
两个R4基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团，和两个R1基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；
标记为“a”的虚线键不存在，标记为“b”的虚线键是双键；或所有虚线键都是单键；
R2为H、(C1-C6)烷基或芳基，其中芳基被一个或多个Z1基团任选取代；
R3为H、(C1-C6)烷基或芳基，其中芳基被一个或多个Z1基团任选取代；
Y为O、S、NH、NRc、P、P(=O)或POH；
Y’为Si(Rb)2或-Si(Rb)2-O-Si(Rb)2-；
每个Ra独立地为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或芳基，其中芳基被一个或多个Z1基团任选取代；
每个Rb独立地为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或芳基，其中芳基被一个或多个Z1基团任选取代；
每个Rc独立地为Rg或C1-C18饱和或不饱和碳链，其被独立选自以下的一个或多个基团任选取代：氧代(=O)、羟基、巯基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷酰基氧基、NRdRe、羧基和芳基，其中Rc的任何芳基被一个或多个Rf任选取代；
每个Rd和Re独立地选自H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷酰基、苯基、苄基和Rg；
每个Rf独立地选自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷酰基氧基、–C(=O)-苯基和–C(=O)CH2C(=O)-苯基，其中任何苯基被独立选自以下的一个或多个基团任选取代：(C1-C6)烷基、-SO3H和(C1-C6)烷氧基；
每个Rg为
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；
每个Z1独立地选自(C1-C6)烷基、卤素、-CN、 ORn1、 NRq1Rr1、 NRn1CORp1、 NRn1CO2Rp1、NO2、 C(O)Rn1、 C(O)ORn1和 C(O)NRq1Rr1，其中Z1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rn1独立地选自H和(C1-C6)烷基，其中Rn1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rp1独立地为(C1-C6)烷基；和
Rq1和Rr1各自独立地选自H和(C1-C6)烷基，或Rq1和Rr1与它们所连接的氮一起构成哌啶、吡咯烷、吗啉、氮杂环丁烷、硫代吗啉、哌嗪或4-甲基哌嗪。
本发明还提供组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。
本发明还提供组合物，其包含两种或更多种式I化合物或其药学上可接受的盐的混合物、以及药学上可接受的载体。
本发明还提供保护哺乳动物(例如人)皮肤免受光损伤的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供保护哺乳动物(例如人)皮肤中的DNA免受光损伤的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供修复哺乳动物(例如人)皮肤中的光损伤的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供刺激哺乳动物(例如人)皮肤中的DNA修复的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中预防皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)或在哺乳动物(例如人)中减少感染皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)的可能性的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中逆转皮肤老化的现象或预防皮肤起皱的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中治疗着色性干皮病的方法，包括使所述皮肤与一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中治疗或预防电离辐射损伤的方法，包括用一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐治疗所述哺乳动物。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保护哺乳动物皮肤免受光损伤的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保护哺乳动物皮肤中的DNA免受光损伤的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于修复哺乳动物皮肤中的光损伤的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于刺激哺乳动物皮肤中的DNA修复的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中预防皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)或减少发展皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)的可能性的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中逆转皮肤老化的现象或预防皮肤起皱的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中治疗着色性干皮病的药物中的用途。
本发明还提供一种或多种式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中治疗或预防电离辐射损伤的药物中的用途。
本发明还提供本文公开的用于制备式I化合物或其盐的方法和中间体。
发明详述
使用以下定义，除非另有说明。
如本文使用的术语“烷基”，是指直链和支链烃基。对于个别基团例如丙基，仅包括直链基团，支链异构体例如异丙基是特别指明的。
如本文使用的术语“卤”或“卤素”，是指氟、氯、溴和碘。
术语“碳环”或“碳环基”是指具有3-7个碳原子的单个饱和(即环烷基)或单个部分不饱和(例如环烯基、环二烯基等)的环(即(C3-C7)碳环)。术语“碳环”或“碳环基”也包括多稠环系(例如包含2、3或4个碳环环的环系)。因此，碳环包括具有7-12个碳原子作为双环和至多大约20个碳原子作为多环的多环碳环。多环碳环可以经由单个碳原子彼此连接而构成螺连接(例如螺戊烷、螺[4,5]癸烷、螺[4.5]癸烷等)，经由两个相邻碳原子彼此连接而构成稠合连接例如双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系，或9或10个环原子排列为双环[5,6]或[6,6]系(例如十氢化萘、降桧烷、降蒈烷)或经由两个非相邻碳原子而构成桥连接(例如降莰烷、双环[2.2.2]辛烷等)。“碳环”或“碳环基”也可被一个或多个(例如1、2或3个)氧代基团任选取代。单环碳环的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基和环庚基。
如本文使用的术语“芳基”，是指单一芳环或多稠环系。例如，芳基可以具有6-20个碳原子、6-14个碳原子、或6-12个碳原子。芳基包括苯基。芳基也包括具有大约9-20个碳原子的多稠环系(例如包含2、3或4环的环系)，其中至少一个环为芳族的。这样的多稠环系可以被一个或多个(例如1、2或3个)氧代基团在多稠环系的任何碳环部分上任选取代。应当知道，如上定义的多稠环系的连接点可以在环系(包括环的芳环或碳环部分)的任何位置上。典型的芳基基团包括但不限于苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、蒽基等。
本领域技术人员将会理解，具有手性中心的本发明化合物可以以旋光和外消旋形式存在并分离。某些化合物可以具有多态性。应当知道，本发明包括本发明的化合物的任何外消旋、旋光、多晶型或立体异构形式或其混合物，其具有本文所述的有用特性，本领域众所周知如何制备旋光形式(例如，通过重结晶技术对外消旋形式进行拆分，通过从旋光原料进行合成，通过手性合成，或通过使用手性固定相的色谱分离)。
以下所列对于基团、取代基和范围的具体值仅用于说明目的；它们不排除对于基团和取代基的其它指定值或指定范围内的其它值。所列出的具体值是对于式I和II以及式I的所有子式(例如式Ia、Ib、Ic、Id、Ie、If等)的化合物的值。
一组具体的式I化合物是式Ia的化合物或其盐：
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其中X为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
另一组具体的式I化合物是式Ib的化合物或其盐：
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其中X为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
另一组具体的式I化合物是式Ic的化合物或其盐：
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其中X为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
另一组具体的式I化合物是式Id的化合物或其盐：
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其中X为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
另一组具体的式I化合物是式Ie的化合物或其盐：
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其中每个X独立地为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
另一组具体的式I化合物是式If的化合物或其盐：
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其中每个X独立地为-(C3-C8)烷基-基团或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团。
具体地讲，(C1-C6)烷基可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基。
具体地讲，(C3-C7)碳环可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基及其部分不饱和的衍生物。
R1的一个具体值为H。
X的一个具体值为-(C3-C8)烷基-或-(C2-C6)烷基Y(C2-C6)烷基-。
X的另一具体值为-(C2-C6)烷基Y(C2-C6)烷基-。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中每个R1独立地为H或(C1-C6)烷基，和两个R4基团一起构成-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R1为H和X为-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-；或R1为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环、芳基或RaC(=O)-；和X为-(C3-C8)烷基-或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基。
Y的一个具体的值为NH。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R2和R3各自独立地为(C1-C6)烷基。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R2和R3各自为甲基。
具体的式I化合物是：
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或其盐。
在本发明的一个实施方案中，式I化合物不包括:
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。
在本发明的另一个实施方案中，式I化合物不包括：
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其中每个R2a为甲基或每个R2a为乙基；和n为3-6。
一组具体的化合物是式I化合物或其盐，其中：
每个R1独立地为H、(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-，和两个R4基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；或
每个R4独立地为H、(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-，和两个R1基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；或
两个R4基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团，和两个R1基团一起构成-(C3-C8)烷基-基团、-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-基团或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团；
标记为“a”的虚线键不存在，标记为“b”的虚线键是双键；或所有虚线键都是单键；
R2为H、(C1-C6)烷基或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)Z1基团任选取代；
R3为H、(C1-C6)烷基或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)Z1基团任选取代；
Y为O、S、NH、P、P(=O)或POH；
Y’为Si(Rb)2或-Si(Rb)2-O-Si(Rb)2-；
每个Ra独立地为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)Z1基团任选取代；
每个Rb独立地为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个) Z1基团任选取代；和
每个Z1独立地选自(C1-C6)烷基、卤素、-CN、 ORn1、 NRq1Rr1、 NRn1CORp1、 NRn1CO2Rp1、NO2、 C(O)Rn1、 C(O)ORn1和 C(O)NRq1Rr1，其中Z1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rn1独立地选自H和(C1-C6)烷基，其中Rn1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rp1独立地为(C1-C6)烷基；和
Rq1和Rr1各自独立地选自H和(C1-C6)烷基，或Rq1和Rr1与它们所连接的氮一起构成哌啶、吡咯烷、吗啉、氮杂环丁烷、硫代吗啉、哌嗪或4-甲基哌嗪。
具体的化合物是选自以下的化合物：
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及其盐。
具体的Rc选自丁酰基、十六酰基、十八酰基、苯甲酰基、3-苯基丙-2-烯酰基、3-(4-甲氧基苯基)丙-2-烯酰基、3-羧基-3-羟基丙酰基、2-(N-乙酰基氨基)-3-巯基丙酰基、4-(4-甲氧基-3-磺基苯甲酰基)苯甲酰基、4-(3-(4-甲氧基苯基)-1,3-二氧代丙基)苯甲酰基和
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。
具体的化合物是选自以下的化合物：
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及其盐。
具体的化合物是选自以下的化合物：
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及其盐。
制备式I和式II化合物的方法在本发明的其它实施方案中提供并在流程1和2中说明。
流程1
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其中X为-(C3-C8)烷基-或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团，并且所有其它变量具有本文所述的值。
流程2
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其中X为-(C3-C8)烷基-或-(C2-C6)烷基-Y-(C2-C6)烷基-或-(C1-C6)烷基-Y’-(C1-C6)烷基-基团，并且所有其它变量具有本文所述的值。
式II化合物还可刺激DNA修复酶并因此具有本文所述的用途。
因此，本发明还提供组合物，其包含下式II化合物：
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或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体，
其中：
R1为H、(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-；
R2为H、(C1-C6)烷基或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个) Z1基团任选取代；
R4为H、(C1-C10)烷基、(C3-C7)碳环或RaC(=O)-；
Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C7)碳环或芳基，其中芳基被一个或多个(例如1、2、3、4或5个) Z1基团任选取代；
每个Z1独立地选自(C1-C6)烷基、卤素、-CN、 ORn1、 NRq1Rr1、 NRn1CORp1、 NRn1CO2Rp1、NO2、 C(O)Rn1、 C(O)ORn1和 C(O)NRq1Rr1，其中Z1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rn1独立地选自H和(C1-C6)烷基，其中Rn1的任何(C1-C6)烷基被一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)卤素任选取代；
每个Rp1独立地为(C1-C6)烷基；和
Rq1和Rr1各自独立地选自H和(C1-C6)烷基，或Rq1和Rr1与它们所连接的氮一起构成哌啶、吡咯烷、吗啉、氮杂环丁烷、硫代吗啉、哌嗪或4-甲基哌嗪。
本发明还提供组合物，其包含两种或更多种式I或式II的化合物(如上所述)或其药学上可接受的盐的混合物、以及药学上可接受的载体。
本发明还提供保护哺乳动物(例如人)皮肤免受光损伤的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供保护哺乳动物(例如人)皮肤中的DNA免受光损伤的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供修复哺乳动物(例如人)皮肤中的光损伤的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供刺激哺乳动物(例如人)皮肤中的DNA修复的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中预防皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)或在哺乳动物(例如人)中减少感染皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)的可能性的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中逆转皮肤老化的现象或预防皮肤起皱的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中治疗着色性干皮病的方法，包括使所述皮肤与式II化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明还提供在哺乳动物(例如人)中治疗或预防电离辐射损伤的方法，包括用式II化合物或其药学上可接受的盐治疗所述哺乳动物。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保护哺乳动物皮肤免受光损伤的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于保护哺乳动物皮肤中的DNA免受光损伤的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于修复哺乳动物皮肤中的光损伤的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于刺激哺乳动物皮肤中的DNA修复的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中预防皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)或减少发展皮肤癌(例如基底细胞癌或鳞状细胞癌)的可能性的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中逆转皮肤老化的现象或预防皮肤起皱的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中治疗着色性干皮病的药物中的用途。
本发明还提供式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于在哺乳动物中治疗或预防电离辐射损伤的药物中的用途。
本发明还提供本文公开的用于制备式II化合物(如上所述)或其盐的方法和中间体。
在化合物具有足够碱性或酸性的情况下，所述式的化合物的盐可用作分离或纯化式I或式II化合物的中间体。另外，式I或式II的化合物作为药学或皮肤病学上可接受的酸或碱盐的施用可能是合适的。包括皮肤病学上可接受的盐在内的药学上可接受的盐的实例是与形成生理上可接受的阴离子的酸形成的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。也可形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。
可使用本领域众所周知的标准程序，例如通过使足够碱性化合物(例如胺)与提供生理上可接受的阴离子的合适的酸反应，获得包括皮肤病学上可接受的盐在内的药学上可接受的盐。也可制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或碱土金属(例如钙)盐。
可将式I或式II的化合物配制成适合所选的施用途径的各种形式的药物组合物并施用给哺乳动物宿主例如人类患者，所述施用途径即经口服或胃肠外、静脉内、肌内、局部或皮下途径。应当知道，术语药学上可接受的载体还包括以下描述的适合局部使用的载体。在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的载体是皮肤病学上可接受的载体。
因此，本发明化合物可以与药学上可接受的溶媒例如惰性稀释剂或可吸收的可食用载体一起经系统施用，例如经口服。可将它们包入软壳或硬壳明胶胶囊中，可将它们压制成片剂，或者可将它们直接掺入患者饮食的食物中。对于口服治疗性施用，可将活性化合物与一种或多种赋形剂组合并以可摄取的片剂、口腔含化片剂、糖锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafers)等形式使用。这样的组合物和制剂应当含有至少0.1%活性化合物。组合物和制剂的百分率当然可以不同，可适宜在给定单位剂型的重量的大约2至大约60%之间。在这类治疗用组合物中的活性化合物的量使得将获得有效剂量水平。
片剂、糖锭剂、丸剂、胶囊剂等还可含有以下：粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；和甜味剂，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或可以加入矫味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊剂时，除了以上类型的材料之外，它还可含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。各种其它材料可以存在作为包衣剂，或以其它方式改变固体单位剂型的物理形态。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和矫味剂例如樱桃味或橙味。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料在所使用的量时都应当是药学上可接受的和基本上无毒的。另外，可将活性化合物掺入持续释放制剂和装置中。
活性化合物还可通过输注或注射经静脉内或腹膜内给予。活性化合物或其盐的溶液剂可以在水中配制，任选与无毒的表面活性剂混合。分散剂也可在甘油、液体聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中和在油中配制。在正常的贮存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以阻止微生物的生长。
适于注射或输注的药物剂型可包括无菌水性溶液剂或分散剂或包含适用于临时配制无菌注射用或输注用溶液剂或分散剂的活性成分的无菌粉剂，任选包入脂质体中。在所有情况下，最终的剂型在制造和贮存条件下应当是无菌的、流动的和稳定的。液体载体或溶媒可以是溶剂或液体分散介质，包括例如水、醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯及其合适的混合物。可通过例如形成脂质体、在分散剂的情况下通过维持所需的粒径、或通过使用表面活性剂，而维持适当的流动性。可通过各种抗菌剂和抗真菌剂阻止微生物活动，所述试剂例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，优选包含等渗试剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。可通过在组合物中使用延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶，达到注射用组合物的延长吸收。
无菌注射用溶液剂制备如下：通过将活性化合物以所需量掺入到含有以上列举的其它多种成分(视需要)的合适溶剂中，然后过滤除菌。对于制备无菌注射用溶液剂的无菌粉剂而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其得到活性成分加上存在于先前经无菌过滤的溶液中的任何其它所需成分的粉剂。
用于治疗所需的化合物或其活性盐或衍生物的量将是不同的，不仅取决于所选的具体的盐而且也取决于施用途径、待治疗的病况性质和患者的年龄和状况，最终将由主治医师或临床医生来决定。
然而，一般而言，合适剂量范围为大约0.5至大约100 mg/kg体重/天，例如大约10至大约75 mg/kg体重/天，例如3至大约50 mg/kg接受者体重/天，优选范围为6-90 mg/kg/天，最优选范围为15-60 mg/kg/天。
将化合物适宜配制成单位剂型；例如，每单位剂型含有5-1000 mg，适宜为10-750 mg，最适宜为50-500 mg活性成分。在一个实施方案中，本发明提供包含本发明化合物的组合物，其被配制在这样的单位剂型中。
所需剂量可适宜以单剂量或分次剂量存在，所述分次剂量以合适间隔施用，例如每天2、3、4或更多次亚剂量。亚剂量本身可以进一步分为例如多次离散的宽松隔开的施用；例如从吹药器中多次吸入或将多滴施加到眼睛。
可将式I或式II的化合物配制成皮肤病学组合物并通过局部途径施加到哺乳动物宿主，例如人。对于局部施用，本发明化合物可以纯形式施用，即当它们是液体时。然而，通常需要将它们作为与皮肤病学上可接受的载体(其可以是固体载体或液体载体)组合的组合物或制剂施用于皮肤。
有用的固体载体包括细微固体，例如滑石粉、粘土、微晶纤维素、硅土、矾土、环糊精等。有用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇混合物，其中本发明化合物可以有效水平溶于或分散于其中，任选借助于无毒的表面活性剂。额外的载体包括植物油、烃油和蜡、硅油、动物或海产脂肪或油。可将辅料例如芳香剂和其它的抗微生物剂添加到组合物中以便为指定应用而优化性能。增稠剂例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料也可与液体载体一起用于形成可涂抹的糊剂、凝胶剂、软膏剂、肥皂等，用于直接施加到使用者皮肤上。美容组合物可含有本领域普通技术人员已知的常规成分，例如描述于以下文献的那些：Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical Technology, 第3版(1979), 第7卷, 第143-176页。具体成分，包括典型的遮光剂，列举在例如上述Kirk-Othmer Encyclopedia, 第153-154页。另外，局部制剂和美容制剂可以按照美国专利号4,199,576、4,136,165和4,248,861所述而制备。可用于将本发明的化合物递送到皮肤的其它有用的皮肤病学组合物的实例是本领域已知的；例如参见Jacquet等人(美国专利号4,608,392)、Geria (美国专利号4,992,478)、Smith等人(美国专利号4,559,157)和Wortzman (美国专利号4,820,508)。
组合物和制剂的百分率可以不同。一般而言，合适的皮肤病学组合物典型地包含式I或式II的化合物或其混合物并且可以适宜占皮肤病学组合物的重量的大约2-12%。在这类皮肤病学有用的组合物中的活性化合物的量使得可获得化合物的有效水平和/或维持化合物的有效水平所需的作用持续时间。
皮肤是机体最大的器官并且不断处于内源和外源因素的攻击之下。在引起皮肤光损伤的所有外源因素中，紫外辐射在破坏皮肤完整性上起到重要作用，正如多项研究所证明的那样(Photochemisty and Photobiology 2002, 76, 561–69)。
遮光剂通过减少表皮对太阳紫外辐射的吸收而保护DNA。在DNA损伤事件中，修复机制对于防止复制错误而言是至关重要的。DNA修复酶在减少DNA恶性中起到重要作用。
参与DNA损伤修复的酶的活性对于整个基因组完整性而言是至关重要的。酶xpc是参与核苷酸切除修复(NER)途径中的DNA光产物的识别和修复的重要酶。这种特别的酶(xpc)已知也修复由氧化应激和UVA辐射所致的DNA损伤[Mutation Research (2011) 728 (3) 107–117；The EMBO Journal (2006) 25, 4305 – 4315]。我们的皮肤试剂不仅通过吸收紫外光而保护DNA，而且也显示出刺激参与DNA损伤-修复信号转导级联的第一步的重要修复酶xpc。
一旦从阳光中吸收紫外线后，市售遮光剂中存在的化学成分就被分解形成光产物，其可与DNA反应，形成可能有毒的交联[Butt, S.T & Christensen, T；Toxicity and Phototoxicity of Chemical Sun Filters: Radiat Prot Dosimetry(2000) 91 (1-3): 283-286]。一直需要以独特的作用机制起作用的更安全和新的遮光剂，其具有附加益处的选择，例如抗老化和DNA修复酶刺激。
如上所述的式I和式II的化合物及其皮肤病学组合物可以用于遮光剂或其它美容制剂，尤其预期用于保护皮肤或皮肤中的DNA免受光损伤或用于修复光损伤的皮肤或皮肤中的光损伤的DNA的目的。本领域普通技术人员显而易见的是，组合物或制剂可以呈多种形式，包括但不限于，例如，溶液剂、洗液、油、喷雾剂、乳膏剂、糊剂、乳剂、喷雾剂或气雾剂并以合适方式递送。
光降解是除了皮肤中发生的生理变化之外的皮肤老化的因素之一。皮肤老化减缓了某些关键性的胞外基质成分的产生。本发明的试剂不仅可帮助保护皮肤免受紫外损伤，而且也启动细胞修复过程并因此也可用于刺激参与皮肤老化过程的关键因素例如胶原、弹性蛋白和透明质酸的产生。
在遮光剂或防晒露制剂中，有利的是包括有效量的本发明所述的化合物(例如一种或多种式I或式II的化合物)与其它常规遮光试剂的组合。其它遮光试剂包括但不限于阿伏苯宗、依莰舒、邻氨基苯甲酸甲酯、羟甲氧苯酮、二羟苯酮、磺异苯酮、octinoxate、胡莫柳酯、奥克立林和octylsalate。
已经确定，式I化合物吸收紫外光是在DNA吸收紫外光的同样波长。一旦暴露给紫外光后，式Ia、Ic或Ie的化合物分别转化为相应的式Ib、Id或If的化合物。因此，式Ia、Ic或Ie的化合物可用于保护哺乳动物(例如人)皮肤中的DNA免受损伤例如UV损伤(例如UV-B)损伤。在本发明的另一个实施方案中，式Ia、Ic或Ie的化合物可以保护皮肤免受光损伤。还已发现式Ia、Ic或Ie的化合物可以刺激DNA修复酶。因此，在另一实施方案中，式Ia、Ic或Ie的化合物可用于修复光损伤的皮肤或用于修复光损伤的DNA。
使用诸如辐射治疗和X射线等工具，电离辐射的暴露水平显著增加。另外，在核反应堆地点也可发生暴露。对辐射的暴露可在DNA中产生多种损伤，包括交联和二聚体形成。因此，迫切需要有效抗辐射药(例如可以预防或治疗电离辐射损伤的药物)。DNA损伤的修复对于所有细胞而言是至关重要的并且这些修复机制的刺激可能是有用的抗辐射治疗。本发明的某些化合物(例如式Ia、Ic或Ie的化合物)已知增加DNA修复酶的细胞生产。因此，这些化合物对于在哺乳动物中预防或治疗电离辐射损伤可能具有治疗用途。
可使用本领域众所周知的药理学模型，或使用下述测试A或测试B，测定本发明的化合物保护DNA免受光损伤的能力。
测试A. DNA保护测定(溶液剂)
黑色串联比色皿用于以下实验。黑色串联比色皿(NSG Precision Cells Farmingdale, NY；Cat# 56UV10)是标准1cm x 3cm比色皿，其分为2室。每一室容纳大约1.5mL液体。所有窗口和分区都是抛光的并且3面用黑色电工胶带包裹，只留下1面用于让紫外光通过并引导光线通过保护性溶液(外室)，然后进入内部溶液(内部溶液)。
将DNA (100μg pEGFP-C1 质粒DNA – Clontech/Takara)放入内室并通过在外室使用10mM化合物3a/24a或除气水而保护。然后在Rayonet中在4℃将串联比色皿暴露给1-300nm UV灯泡。在每一时间点采集等分试样(25μL)的DNA溶液(5、10或15分钟的间隔)。经辐射的DNA用T4内切酶V (对胸苷二聚体损伤具有特异性的一种酶)消化。将DNA在20U (1μL) T4内切酶V存在下在37℃孵育1小时，然后在1%琼脂糖凝胶上跑胶(1X TBE , 0.5 hr，在50 V)。再将凝胶用溴化乙锭染色并用BioRad Gel Documentation System观察。
测试B. B. DNA保护测定(乳膏剂)
将少量乳膏剂(0.1cc)施加到黑色串联比色皿外面，并将切割成比色皿的尺寸的石英载片放在乳膏剂上，形成平坦的一层。将石英比色皿包裹在黑色电工胶带中，只留下1面用于让紫外光通过并引导紫外光通过保护性乳膏剂。单独用乳膏剂溶媒或用在乳膏剂溶媒中的化合物3a/24a (5%)对DNA进行辐射。
将DNA (100μg pEGFP-C1质粒DNA – Clontech/Takara)放入外室并通过施加到比色皿外面的乳膏剂而保护。在Rayonette中在4℃将串联比色皿暴露给1-300nm UV灯泡。在每一时间点采集等分试样(25μL)的DNA溶液(5、10或15分钟的间隔)。经辐射的DNA用T4内切酶V (对胸苷二聚体损伤具有特异性的一种酶)消化。将DNA在20U (1μL) T4内切酶V存在下在37℃孵育1小时，然后跑1%琼脂糖凝胶(1X TBE , 0.5 hr，在50 V)。将凝胶用溴化乙锭染色并用BioRad Gel Documentation System观察。
使用本领域众所周知的药理学模型，或使用测试C，可以测定本发明的化合物保护细胞中的DNA的能力。
测试C. 细胞保护测定(乳膏剂)
将RPMI-8226细胞(2.5x106细胞/mL)放入3mL石英黑色比色皿中，比色皿底部放有搅拌棒，以便在实验期间保持细胞的均匀悬浮。将石英比色皿包裹在黑色电工胶带中，只留下1面用于让紫外光通过。将少量乳膏剂(0.1cc)施加到黑色串联比色皿外面，并将切割成比色皿的尺寸的石英载片放在乳膏剂上，形成平坦的一层，并引导紫外光通过保护性乳膏剂。在Rayonette中在4℃将细胞暴露给1-300 nm UV灯泡并用搅拌板持续搅拌。在每一时间点(15和30分钟的间隔)，将装有细胞的比色皿从Rayonette中取出。通过使用乳膏剂溶媒或在乳膏剂溶媒中的化合物3a/24a (5%)来保护细胞。
暴露后，将细胞移至无菌的1.7 mL管中，比色皿用1X 500μL PBS洗涤并将内容物移至相应的无菌1.7 mL管中。将各管在13K rpm和4℃离心2分钟，弃去上清液并将细胞沉淀物重悬于蛋白酶K中。将各管在55℃孵育3小时(至过夜)，然后使用来自全细胞方案(Whole Cell Protocol)的DNA分离，来分离DNA。所分离的DNA用T4内切酶V消化(1hr, 37°C)并在1%琼脂糖凝胶上跑胶(1X TBE, 1 hr，在50 V)。将凝胶用溴化乙锭染色并用BioRad Gel Documentation System观察。
在测试A、B和C中检查的、包括本发明化合物的化合物见下表I。
表I
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(在测试中检查的化合物表示为“x”)
当与对照相比时，在测试A、B和C中测试的化合物保护DNA免受紫外诱导的损伤达更长的时间段。这些结果证明本发明的化合物保护DNA免受光损伤。因此本发明的化合物可用作皮肤病学试剂，以包括遮光剂和化妆品在内的各种形式用于预防DNA损伤。
可使用本领域众所周知的药理学模型，或使用测试D，测定本发明的化合物保护动物皮肤的能力。
测试D. 鼠动物研究
依据IACUC Code Number: 0902A60149，将6-8周龄SKH-1在RAR屋中饲养并且在研究前不接受任何阳光。UVA、UVB和太阳模拟灯(SSL)治疗组包括留在笼中没动过的小鼠(无预防性治疗)和在其背部用乳膏剂溶媒或在乳膏剂溶媒中的AR化合物局部治疗并用手套摩擦的小鼠。在治疗后20分钟，将小鼠暴露给180mJ/cm2 UVA、UVB或SSL，其相当于夏季中午1小时阳光。UVA、UVB或SSL暴露后1、4、8和24小时，将小鼠经IP氯胺酮/赛拉嗪注射而安乐死并放血。采集血清并送至密歇根州立大学的群体和动物健康诊断中心(Diagnostic Center for Population and Animal Health ，DCPAH)进行25-羟基维生素D分析，并且送至明尼苏达大学-兽医中心的诊断实验室进行小动物分析分组(Small Animal Profile Panel)。
无UVA、UVB和SSL治疗组包括留在笼中没动过的小鼠(无预防性治疗)和在其背部用如上所述的乳膏剂溶媒或在乳膏剂溶媒中的AR化合物局部治疗的小鼠。治疗后，将小鼠放回它们的笼中，避开阳光。在治疗后1、4、8和24小时，无UVA、UVB和SSL治疗小鼠经IP氯胺酮/赛拉嗪注射而安乐死并放血。采集血清并送至密歇根州立大学的群体和动物健康诊断中心(DCPAH)进行25-羟基维生素D分析，并且送至明尼苏达大学-兽医中心的诊断实验室进行小动物肝和肾功能分析。
对于以上动物组，安乐死后，收集背部和腹部皮肤并保存在Zamboni氏固定剂中，用于进一步研究。将皮肤样品送至明尼苏达大学的比较病理学资源共享Masonic癌症中心(Masonic Cancer Center Comparative Pathology Shared Resource)进行H&E染色以检查皮肤刺激。通过免疫组织染色(p53、胸腺嘧啶二聚体、XPC和其它DNA修复酶、胶原、弹性蛋白等)和共聚焦显微镜术，在内部分析皮肤。
鼠动物模型测试结果(化合物3a/24a对SKH-1无毛小鼠背部皮肤的UV保护): 将在DMSO中的化合物3a (0.5%)局部施加到SKH-1无毛背部皮肤并用UVB (6Kj/m2 (8.33分钟)辐射。该剂量超出约3.5 kJ/m2的最小红斑剂量(MED)并且相当于单个晒斑。本研究中有2个对照小鼠组，未经治疗–无溶媒、无药物、无UV和仅有UV暴露组。这些小鼠用局部施用我们的化合物3a来治疗并与仅有紫外的对照相比，显示出针对紫外的明显的保护作用，仅有紫外的对照显示出胸腺嘧啶二聚体形成(DNA损伤)。第二对照组(未经治疗–无溶媒、无药物、无UV)未受影响。
将在乳膏剂溶媒中的化合物3a (0.5%)局部施加到SKH-1无毛小鼠背部皮肤并暴露给UVB光。将大约100 μl (0.1 cc)各制剂施加到小鼠背部皮肤20分钟，然后UVB暴露。治疗组接受6Kj/m2的标准剂量并在辐射后4小时收获。收获时，取下背部皮肤并固定在zamboni固定剂中。与仅UV的对照相比，在乳膏剂溶媒中的5%的3a针对胸腺嘧啶二聚体形成具有保护作用。
将在乳膏剂溶媒中的化合物24a (5% w/w)局部施加到SKH-1无毛小鼠背部皮肤并暴露给UVB光。将大约100 μl (0.1 cc)各制剂施加到小鼠背部皮肤20分钟，然后UVB暴露。治疗组接受6Kj/m2的标准剂量并在辐射后4小时收获。收获时，取下背部皮肤并固定在zamboni固定剂中。在本实验中，与仅UV的对照相比，在乳膏剂溶媒中的5%的24a针对胸腺嘧啶二聚体形成(DNA损伤)具有保护作用。
化合物3a/24a对关键DNA 修复酶(xpc)的上调，使用SSL (太阳模拟灯)：将在乳膏剂溶媒中的化合物3a (5%)局部施加到SKH-1无毛小鼠背部皮肤并暴露给6 KJ/m2太阳模拟灯(SSL)，其相当于夏季中午1小时阳光。在本实验中，在乳膏剂中的5% 3a在SSL暴露的SKH-1无毛小鼠背部小鼠皮肤中刺激xpc的产生。这表明与仅SSL乳膏剂的对照相比，在暴露给SSL后由化合物3a形成的二聚体被DNA修复酶识别并在SSL存在下将刺激更多xpc修复酶。刺激xpc产生的化合物不仅具有遮光剂益处，而且可在着色性干皮病(一种遗传性DNA修复障碍，其中对紫外光所致损伤的修复能力有损失)的治疗中证明了治疗性。
将在乳膏剂溶媒中的化合物24a (5%)局部施加到SKH-1无毛小鼠背部皮肤并暴露给180 mJ/cm2太阳模拟灯(SSL)，其相当于夏季中午1小时阳光。在本实验中，在乳膏剂中的5% 24a在SSL暴露的SKH-1无毛小鼠背部小鼠皮肤中刺激xpc的产生。这表明与仅SSL乳膏剂的对照相比，在暴露给SSL后由化合物24a形成的二聚体被DNA修复酶识别并在SSL存在下刺激更多xpc修复酶。刺激xpc产生的化合物不仅具有遮光剂益处，而且可在着色性干皮病(一种遗传性DNA修复障碍，其中对紫外光所致损伤的修复能力有损失)的治疗中证明了治疗性。
化合物10对关键DNA修复酶(xpc)的上调，未将皮肤暴露给SSL (太阳模拟灯): 将在乳膏剂溶媒中的化合物10 (5%)局部施加到SKH-1无毛小鼠背部皮肤并且不接受SSL辐射。将小鼠放回它们的笼中，避开阳光并且在施药后1小时20分钟、4小时20分钟和8小时20分钟实施安乐死。本实验的目的是观察化合物10是否可以刺激DNA修复酶。8小时时间点的皮肤切片对胸腺嘧啶二聚体的免疫反应性完全呈阴性。这很重要，因为它证明了二聚体抗体不能识别由化合物3a形成的二聚体，它仅与固有二聚体反应。在响应紫外诱导的DNA损伤受到刺激并且是其它修复酶级联的引发剂的DNA修复酶xpc，显示出与xpc抗体的明显的免疫反应性。这表明，在暴露给SSL时由化合物3a形成的二聚体被免疫系统识别并且在UV损伤不存在时能够刺激xpc修复酶。对于仅用SSL治疗的小鼠对照而言，用在乳膏剂中的化合物3a治疗并暴露给SSL的小鼠的xpc水平超出基线水平。
可使用本领域众所周知的药理学模型，或使用测试E，测定本发明的化合物保护人皮肤的能力。
测试E. 人皮肤研究
人皮肤得自明尼苏达大学BioNet组织获取设施并贮存在冰上或在细胞培养基中，直到准备使用。所有样品都在避开阳光处保存。将皮肤切成小片并放置在6孔细胞培养板上，孔底部有少量培养基，但不足以覆盖组织顶部。使用带手套的手，用乳膏剂溶媒或在乳膏剂溶媒中的AR药物摩擦皮肤。在治疗后20分钟，使皮肤暴露给180mJ/cm2 UVA、UVB或太阳模拟灯(SSL)，其相当于夏季中午1小时阳光。UVA、UVB或SSL暴露后，将额外培养基放入各孔底部并将板移入组织培养箱(37?C, 5% CO2)。在UVA、UVB或SSL暴露后1、4、8和24小时，将样品从培养箱中取出并放入Zamboni氏固定剂中用于进一步研究。
将未暴露给UVA、UVB或SSL灯的样品放入具有少量细胞培养基但不足以覆盖组织顶部的6-孔板中，并贮存在细胞培养箱中。将未暴露给UVA、UVB或SSL灯的皮肤样品用如上所述的乳膏剂溶媒和在乳膏剂溶媒中的AR治疗。在治疗后20分钟，将皮肤(在板中)移入细胞培养箱(37?C, 5% CO2)。在治疗后1、4、8和24小时，将样品从培养箱中取出并放入Zamboni氏固定剂中用于进一步研究。
通过免疫组织染色(p53、胸腺嘧啶二聚体、XPC和其它DNA修复酶、胶原、弹性蛋白等)和共聚焦显微镜术，在内部分析所有皮肤样品。
人皮肤模型测试结果：将5% 3a的局部治疗施加到皮肤上20分钟，然后SSL暴露。对照组织不接受任何局部治疗或SSL并在整个实验中维持在培养箱中。化合物孵育后，将需要SSL的组织放在SSL灯箱中，在生长培养基中2小时，或180mJ/cm2。SSL暴露后，将组织放回培养箱中并孵育4小时，然后在Zamboni氏固定剂中固定。组织经切割和相应染色，所用的第一抗体是针对胸腺嘧啶二聚体的小鼠单克隆抗体。与仅UV的对照相比，在乳膏剂溶媒中的5%的3a针对胸腺嘧啶二聚体形成具有保护作用。
化合物3a (5%)在紫外暴露的人皮肤中刺激xpc的产生。实验表明，与仅紫外乳膏剂的对照相比，在暴露给SSL后由化合物3a形成的二聚体被DNA修复酶识别并在紫外存在下将刺激更多xpc修复酶。刺激xpc产生的化合物不仅具有遮光剂益处，而且可对病况例如着色性干皮病和具有免疫抑制的个体(移植& HIV患者)证明了治疗性。
用二聚化化合物10治疗的人皮肤显示出比仅SSL的对照更高水平的xpc。非二聚化1,3TTP样品在非经辐射的人皮肤组织中不显示出任何明显的xpc染色。总之，二聚化化合物10在非SSL损伤的人皮肤中刺激xpc产生并且该刺激在施用后8小时仍然是明显的。刺激xpc产生的化合物不仅具有遮光剂益处，而且在着色性干皮病的治疗中可具有治疗性。酶xpc的刺激在UVA辐射所致的DNA氧化损伤(BER)的修复中也是有益的[The EMBO Journal 2006, 25, 4305-15]。
根据体外(质粒DNA和细胞)和体内(鼠和人皮肤)数据分析，所述化合物不仅针对紫外辐射的有害效应具有保护作用，而且刺激参与DNA修复过程的关键修复酶。共聚焦和常规表皮荧光图像已经用于在来自辐射及非辐射小鼠和人皮肤的背部皮肤切片的表皮角质细胞中评价胸腺嘧啶-胸腺嘧啶二聚体(DNA损伤)和修复酶xpc免疫反应性。
现在将通过以下非限制性实施例来说明本发明。
实施例
所有化学品均购自Sigma Chemicals, St. Louis, MO。所有化合物都通过1H NMR、13C NMR、质量和熔点分析而表征。核磁共振谱在Varian XL 600 MHz仪器上记录。所有1H和13C NMR 实验都以每百万分之(ppm)为单位而报告，并相对于氘化溶剂中的残余DMSO而计算。所有耦合常数都报告为Hz。熔点在Mel-Temp II仪器上测定并且未经校正。质量分析在装备有ESI或APCI源的Agilent LC-TOF 1100质谱仪上进行。
实施例1:化合物3a、3b、3c和3d的制备。
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向1,3-二溴丙烷(2.202 g, 10.07 mmol)的50 mL无水 DMF溶液中加入O,O’-双(三甲基甲硅烷基)-胸腺嘧啶(2) (6.256 g, 23.17 mmol)。将溶液加热至170℃并搅拌过夜。将反应物冷却至0℃并将10 mL水加入到反应物中以沉淀产物。将沉淀物在0℃搅拌15 min。将固体滤出，用100 mL氯仿-甲醇(1:1)洗涤并真空干燥，得到化合物3a (2.351 g, 81%)，为灰白色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.20 (s, 2H), 7.51 (s, 2H), 3.71 (t, 4H, J= 7.04 Hz), 1.91 (t, 4H, J= 7.04Hz), 1.73 (s, 6H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.72, 151.36, 141.68, 108.98, 45.27, 28.31, 12.37；质量(ESI-MS): 293.154 (M+H)；m.p: 330-334℃；按照对于化合物3a所述的程序制备化合物3b、3c和3d。3b: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.18 (s, 2H), 7.50 (s, 2H), 3.62 (br, 4H), 1.73 (s, 6H), 1.53 (br, 4H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.71, 151.35, 141.86, 108.90, 47.16, 25.84, 12.37；质量(ESI-MS): 307.157 (M+H)；m.p: 348-350℃；3c: 1H NMR (600 MHz , DMSO-d6): ): δ 11.15 (s, 2H), 7.47 (s, 2H), 3.57 (t, 4H, J= 7.05 Hz), 1.71 (s, 6H), 1.55 (五重峰, 4H, J= 7.05 Hz), 1.19 (br五重峰, 2H, J= 7.05 Hz)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.70, 151.29, 141.85, 108.82, 47.37, 28.48, 23.12；12.36；质量(ESI-MS): 321.174 (M+H)；m.p: 250-252℃；3d: 1H NMR (600 MHz , DMSO-d6): δ 11.14 (s, 2H), 7.48 (s, 2H), 3.56 (t, 4H, J= 7.04 Hz ), 1.71 (s, 6H), 1.52 (br 五重峰, 4H, J= 7.05 Hz), 1.22 (br五重峰, 4H, J= 7.04 Hz)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.71, 151.29, 141.82, 108.82, 47.42, 28.77, 25.87；12.35；质量(ESI-MS): 354.141 (M+H)；m.p: 233-235℃。
实施例2: 化合物8的制备.
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向胸腺嘧啶(1)的THF溶液中加入吡啶并将反应物冷却至0℃。在0℃小心加入苯甲酰氯并将反应物在室温下搅拌过夜。蒸发反应物，得到粗固体，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到N3-苯甲酰基胸腺嘧啶(4)，为白色固体。1H NMR (600 MHz, CD3OD): δ 7.94 (m, 2H), 7.71 (t, 1H, J= 7.3 Hz), 7.57 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 1.90 (s, 3H)；质量(ESI-MS): 231.22 (M+H)；m.p: 178- 180℃。
向N3-苯甲酰基胸腺嘧啶的THF溶液中加入PPh3和DIAD并将反应物冷却至0℃。将含化合物5的THF滴加到反应物中并让反应物缓慢升至室温。持续搅拌过夜。蒸发有机溶剂，得到深褐色残余物，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到NBz-双胸腺嘧啶化合物6。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 7.91 (m, 4H), 7.74 (t, 2H, J= 7.3 Hz), 7.67 (s, 2H), 7.56 (m, 4H), 3.74 (t, 4H, J= Hz), 2.79 (t, 4H, J= Hz), 1.79 (s, 6H), 1.43 (s, 9H)；13C NMR(150 MHz, DMSO-d6): δ 170.36, 163.49, 163.25, 155.57, 150.01, 149.86, 143.07, 135.82, 135.78, 131.85, 131.57, 130.96, 130.60, 129.89, 129.64, 108.78, 108.11, 79.92, 47.12, 45.67, 44.34, 43.12, 28.15, 12.37, 12.22；质量(ESI-MS): 630.33 (M+H)；m.p: 164-166℃。
将化合物6 溶于氨水中并在室温下搅拌过夜。真空蒸发反应物，得到灰白色固体，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到中间体7。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 7.93 (s, 1H), 5.56 (t, 1H), 5.21(s, 1H), 5.06 (m, 1H), 4.99 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.84 (m, 2H), 3.58-3.51 (m, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.71 (s,, 3H), 1.51 (s, 9H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 162.75, 157.15, 154.08, 151.74, 135.97, 117.46, 117.14, 86.76, 85.62, 74.13, 70.08, 61.83, 36.22, 31.23, 25.56；质量(ESI-MS): 422.43 (M+H)；m.p: 254-256℃。
将化合物7溶于6N HCl的二![]()
烷和水(1:1)的溶液中并在25℃搅拌过夜。真空蒸发溶剂，得到油状残余物，将其与甲苯重复蒸发后得到白色固体8。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.23 (s, 2H)；8.01 (s, 1H), 5.74 (t, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.53(m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.85-3.65 (m, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.85 (s,3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 165.81, 159.17, 155.80, 152.65, 136.01, 118.23, 117.94, 88.23, 86.75, 74.93, 71.48, 62.05, 36.76, 31.94；质量(ESI-MS): 322.23 (M+H)；m.p: > 320℃。
实施例3:化合物9的制备。
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向胸腺嘧啶1 (5.01 g, 39.76 mmol)的无水DMSO (135 mL)溶液中加入1-溴丙烷(1.601 g, 13.01 mmol)和无水碳酸钾(5.50 g, 39.28 mmol)并将所得悬液在室温下搅拌10-12 h。滤出固体，将滤液在50℃减压蒸发，得到无色半固体，将其悬于500 mL水中并用氯仿 (3x125 mL) 萃取。有机层经无水 Na2SO4干燥，过滤和蒸发，得到浅黄色固体，将其用无水乙醇重结晶，得到白色结晶固体9a (0.875 g, 40.13%，基于1-溴丙烷)。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.19 (s, 1H), 7.5 (s, 1H), 3.59 (t, 2H, J= 7.04 Hz), 1.72 (s, 3H), 1.59 (app. sext, 2H), 0.82 (t, 3H, J= 7.63 Hz)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.72, 151.32, 141.93, 108.72, 49.09, 22.16, 12.34, 11.09；质量(ESI-MS): 169.191 (M+H)；m.p: 133- 135℃。
按照对于化合物9a所述的程序，制备化合物9b和9c。9b: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.16 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.56 (t, 2H, J= 7.05 Hz), 5.56 (t, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.50-1.51 (m, 2H), 1.20-1.24 (m, 6H), 0.82 (t, 2H, J= 7.04 Hz)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.70, 151.28, 141.86, 108.78, 47.54, 31.26, 28.83, 25.89, 22.39, 14.27, 12.32；质量(ESI-MS): 211.135 (M+H)；m.p: 126- 128℃；9c: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): ): δ 11.14 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.57 (t, 2H, J= 7.63 Hz), 5.56 (t, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.22 (m, 6H), 0.83 (t, 2H, J= 7.04 Hz)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.70, 151.29, 141.86, 108.78, 47.54, 31.62, 29.01, 28.86, 26.23, 22.49, 14.35, 12.33, 质量(ESI-MS): 354.141 (M+H)；239.210；m.p: 112-114℃。
实施例4:化合物10的制备。
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在90℃，将3a (0.087 g, mmol)溶液溶于去离子水(175 mL, 脱气)，让其在500 mL Pyrex烧瓶中冷却至室温。在冷却至室温的过程中吹入氮气流。在Rayonett RPR 208反应器中将溶液在300 nm处辐射，并在每小时用50:1等分测试溶液监测反应物在270 nm处的吸收，直到反应完成(6 h)。终止辐射并将圆底烧瓶从反应器中取出。用NaHCO3水溶液将pH调节至9。加入KMnO4 (15 mg, 1.3当量)并在室温下搅拌4-5 h。 用饱和NaSH水溶液(10 mL) 沉淀MnO2，将其通过过滤移出。滤液中的碳酸盐通过小心加入甲酸而分解。将溶液浓缩至30 mL，得到光二聚体作为粗品，将其从水重结晶，得到白色固体10 (0.048 g, 55.17%)。 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 10.25 (s, 2H), 4.05 (d, 2H, J= 12.91 Hz), 3.89 (m, 2H), 2.71 (m, 2H), 1.47-1.85 (m, 2H), 1.35 (s, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 170.11, 151.29, 60.18, 46.99, 45.11, 23.96, 20.42；质量(ESI-MS): 292.115 (M+H)；m.p: > 340℃。
实施例5:化合物11的制备。
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按照实施例4中对于化合物10所述的程序，制备化合物11。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 10.23 (s, 2H), 5.45 (t, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.53(m, 1H), 4.01 (m, 2H), 3.85-3.65 (m, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.85 (s,3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 165.81, 159.17, 155.80, 152.65, 136.01, 118.23, 117.94, 88.23, 86.75, 74.93, 71.48, 62.05, 36.76, 31.94；质量(ESI-MS): 322.31 (M+H)；m.p: > 330℃。
实施例6:化合物12的制备。
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将氢化钠(60%在矿物油中, 1.34 g, 54.33 mmol)缓慢加入到胸腺嘧啶(6.025 g, 47.87 mmol)的无水DMSO (25 mL)溶液中并将所得混合物在50℃搅拌2 h。加入双-氯甲基-1, 1,3, 3-四甲基二硅氧烷(5.021 g, 21.73 mmol)并将混合物在100 0C加热3天。让反应物升至室温并加入20 mL水。反应物用乙酸乙酯(3x 50 mL) 萃取。有机层用水、盐水洗涤并经无水 Na2SO4干燥。过滤有机层并真空干燥，得到粗化合物，为白色糖浆，将其用乙醇和乙酸乙酯(9:1)混合物重结晶并贮存于-20 ℃。沉淀的化合物经过滤并用20 mL乙醇洗涤并真空干燥，得到白色固体(6.35 g, 32.5%)。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 11.14 (s, 1H), 10.89 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.09 (s, 4H), 1.64 (s, 7H), 0.00 (s, 12H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 164.93, 151.50, 137.73, 108.15, 45.14, 11.92, 0.00；质量(APCI Neg.): 409.15 (M-H)；m.p: 288-290℃。
实施例7:化合物13的制备。
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将在油中的氢化钠60% (0.43 g, 10.7 mmol)加入到1,1' 三亚甲基双胸腺嘧啶(1.51 g, 5.1 mmol)的二甲基亚砜(80 mL)悬浮液中并在60-65℃搅拌过夜。将1, 3-二碘丙烷(1.63 g, 4.8 mmol)加入到反应混合物中并在80℃搅拌3天，得到澄清溶液。蒸发溶剂；残余固体用碳酸钾水溶液溶液(30 mL)、甲醇(20 mL)和乙醚(20 mL)洗涤。将产物经硅胶柱纯化，使用乙酸乙酯/甲醇为洗脱液，得到环状化合物II，为白色固体(0.204 g, 12% )。1H NMR (600 MHz, CDC13, ppm) : 7.05 (s, 2H, C6-H), 4.07 (t, 3H, N3-CH2), 3.75 (t, 4H, N1-CH2), 2.15(t, 2H, N3-C-CH2), 1.98 (t, 2H, N1-C-CH2), 1.89 (s, 6H, C5-CH3)；13C NMR (150 MHz, CDCl3): 164.11, 152.53, 141.21, 108.15, 51.20, 45.73, 28.20, 26.35, 10.35；质量(APCI-Neg): 331.13 (M-H)。
实施例8:化合物24a、24b、24c、24d、24e和24f的制备。
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在0℃，向双-(氯乙基)胺22 (1.393 g, 9.816 mmol)的苯(20 mL)溶液中加入溶于10 mL苯的丁酰氯(0.523 g, 4.908 mmol)并搅拌15 min。将反应物回流1 h，冷却至室温并将沉淀滤出。蒸发滤液，得到相应的酰胺23 (0.752 g, 72.3%)，为无色油状物。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 3.75 (t, 4H), 3.51 (t, 4H), 2.71 (t, 2H), 1.45 (m, 2H), 0.76 (t, 3H)；质量(ESI-MS): 212.143 (M+H)。
在室温下将化合物23 (0.251 g, 1.189 mmol)溶于无水1,2-二氯乙烷(30 mL)。将O,O’-双(三甲基甲硅烷基)-胸腺嘧啶(0.738 g, 2.733 mmol)一次性加入，再加入催化剂I2 (14 mG, 0.05当量)并回流24 h。蒸发反应物，得到粗固体，将其经SiO2 快速色谱法纯化，得到化合物24a (0.301 g, 70.82%)，为灰白色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.30 (s, 1H)；11.10 (s, 1H)；7.49 (s, 1H)；7.31 (s, 1H)；3.76 (t, 4H), 3.47 (t, 4H), 2.09 (t, 2H), 1. 72 (s, 3H)；1.68 (s, 3H)；1.36 (t, 2H), 0.75 (t, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 173.71, 164.41, 163.55, 152.23, 151.35, 141.74, 141.13, 109.23, 108.95, 57.74, 57.63, 47.63, 47.55, 35.84, 19.37, 13.55, 12.33, 12.21；质量(ESI-MS): 392.19 (M+H)；m.p: 298-300℃。
按照对于化合物24a所述的程序，制备化合物24b、24c、24d、24e和24f。24b: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.52 (s, 1H)；11.31 (s, 1H)；7.55 (s, 1H)；7.41 (s, 1H)；3.72 (t, 4H), 3.43 (t, 4H), 2.11 (t, 2H), 1. 75 (s, 3H)；1.65 (s, 3H)；1.53 (t, 2H), 1.33 (m, 2H)；1.29- 1.25 (m, 22H)；0.95 (t, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 173.15, 163.23, 163.10, 151.54, 151.43, 140.15, 139.85, 110.23, 110.20, 58.32, 58.30, 47.53, 47.50, 47.41, 35.33, 32.33, 30.68, 29.77, 29.75, 29.73, 29.72, 29.70, 29.68, 29.65, 28.98, 28. 03, 23.15, 15.15, 12.85, 12.73；质量(ESI-MS): 560.41 (M+H)；m.p: 285-288℃。24c: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.68 (s, 1H)；11.53 (s, 1H)；7.58 (s, 1H)；7.49 (s, 1H)；3.78 (t, 4H), 3.51 (t, 4H), 2.35 (t, 2H), 1. 85 (s, 3H)；1.78 (s, 3H)；1.63 (t, 2H), 1.46 (m, 2H)；1.35- 1.21 (m, 28H)；0.98 (t, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 173.31, 163.95, 163.23, 151.73, 151.81, 141.16, 140.95, 110.55, 110.34, 58.54, 58.50, 47.64, 47.61, 47.58, 35.43, 32.41, 30.72, 29.82, 29.75, 29.63, 29.71, 29.67, 29.65, 29.64, 29.61, 29.58, 28.88, 28. 53, 23.45, 15.24, 12.21, 12.13；质量(ESI-MS): 588.51 (M+H)；m.p: 310-312℃。24d: 1H NMR (600 MHz , DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H), 11.48 (s, 1H), 8.33-7.68 (m, 5H), 7.54 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.81 (t, 4H), 3.76 (t, 4H), 1.71 (s, 3H), 1.68 (s, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 170.71, 151.20, 150.11, 140.82, 139.95, 136.35, 129.36, 128.85, 128.73, 127.63, 109.83, 108.95, 58.54, 58.35, 48.42, 48.38, 28.77, 25.87；12.35, 12.25；质量(ESI-MS): 426.14 (M+H)；m.p: 320-322℃。24e: 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.63 (s, 1H), 11.53 (s, 1H), 8.43-7.87 (m, 5H), 7.64 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.28 (s, 1H,) 3.73 (t, 4H), 3.64 (t, 4H), 1.81 (s, 3H), 1.76 (s, 3H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 171.65, 152.21, 151.31, 142.24, 141.84, 140.55, 137.31, 130.26, 129.15, 129.13, 128.33, 120.33, 110.33, 110.51, 58.76, 58.55, 49.32, 49.71, 28.34, 26.67；12.51, 12.45；质量(ESI-MS): 452.17 (M+H)；m.p: 315-317℃。24f: 1H NMR (600 MHz , DMSO-d6): ): δ 11.45 (s, 1H), 11.37 (s, 1H), 7.78-6.35 (m, 5H), 7.24 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.41 (t, 4H), 3.26 (t, 4H), 1.81 (s, 3H), 1.78 (s, 3H)；质量(ESI-MS): 482.45 (M+H)；m.p: 298- 300℃。
实施例9:化合物28的制备。
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在0℃，向酸25 (1.752 g, 10.068 mmol)的无水DCM (50 mL)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺HCl (2.922 g, 15.303 mmol)和N -羟基苯并三唑(2.038 g, 15.103 mmol)并搅拌15 min。加入含双-(氯乙基)胺22 (1.511 g, 10.709 mmol)的DCM (10 mL)并将反应物在室温下搅拌过夜。反应物用50 mL DCM稀释并用NaHO3水溶液(20 ml)和盐水(20 mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥和真空浓缩，得到粗品，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到化合物26 (2.651 g, 75%)，为无色油状物。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 3.92 (t, 1H), 3.82-3.75 (m, 4H), 3.68 (m, 4H), 2.98-2.94 (dd, 2H), 1.55 (s, 3H), 1.59 (s, 3H)；质量(ESI-MS): 298.13 (M+H)。
在室温下将化合物26 (1.253 g, 4.218 mmol)溶于无水 1,2-二氯乙烷(30 mL)。将O,O’-双(三甲基甲硅烷基)-胸腺嘧啶(2.505 g, 9.281 mmol) 一次性加入，再加入催化剂I2 (20 mG, 0.05当量)并回流24 h。蒸发反应物，得到粗固体，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到化合物27 (1.153 g, 56.79%)，为灰白色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.29 (s, 1H), 11.13 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 4.71 (t, 1H), 3.74-3.71 (m, 4H), 3.60-3.52 (m, 4H), 3.21-3.32 (m , 2H) 1.72 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.44 (s, 6H), ；质量(ESI-MS): 478.67 (M+H)；m.p: 285-287℃。
将化合物27 (0.851 g)溶于12N HCl水溶液中并在室温下搅拌过夜。反应物经真空浓缩，残余物经冻干，得到化合物28，为白色固体(0.725 g, 96%)。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 12. 01 (br s, 1H), 11.36 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 4.34 (t, 1H), 3.82-3.75 (m, 4H), 3.71-3.58 (m, 4H), 3.31-3.28 (m, 2H), 2.83 (d, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.78 (s, 6H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 176.15, 171.87, 153.14, 152.34, 142.65, 142.11, 140.96, 137.84, 131.25, 129.62, 129.33, 128.72, 120.84, 109.31, 109.85, 71.21, 58.54, 49.75, 36.23, 28.34, 26.54；12.35, 12.29；质量(ESI-MS): 438.77 (M+H)；m.p: 321-323℃。
实施例10:化合物32的制备。
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在0℃，向酸29 (1.250 g, 4.045 mmol)的无水DCM (50 mL)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺HCl (0.819 g, 6.067 mmol)和N -羟基苯并三唑(1.158 g, 6.067 mmol)并搅拌15 min。加入含双-(氯乙基)胺22 (0.684 g, 4.854 mmol)的DCM (10 mL)并将反应物在室温下搅拌过夜。反应物用50 mL DCM稀释并用NaHO3水溶液(20 ml)和盐水(20 mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥和真空浓缩，得到粗产物，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到化合物30 (1.035 g, 59.24%)，为无色油状物。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 4.81 (m, 1H), 3.84-3.78 (m, 4H), 3.70-3.64 (m, 4H), 3.01-2.86 (dd, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.34 (s, 9H)；质量(ESI-MS): 433.45 (M+H)。
在室温下将化合物30 (0.752 g, 1.74 mmol)溶于无水 1,2-二氯乙烷(50 mL)。将O,O’-双(三甲基甲硅烷基)-胸腺嘧啶(1.445 g, 5.353 mmol)一次性加入，再加入催化剂I2 (20 mG)并回流24 h。蒸发反应物，得到粗固体，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到化合物11 (0.575 g, 55.82%)，为灰白色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6):δ 11.63 (s, 1H), 11. 45 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.01-3.84 (m,4H), 3.91-3.72 (m, 4H), 3.76-2.92 (dd, 2H), 1..75 (s, 6H), 1.51 (s, 9H), 1.45 (s, 9H)；质量(ESI-MS): 613.51 (M+H)；m.p:275-280℃。
将化合物31 (0.425 g, 0.857 mmol)溶于THF-H2O (1:1)并加入三丁基膦(0.173 g, 1.027 mmol)，将所得反应物在室温下搅拌24 h。蒸发溶剂，得到粗固体，将其通过SiO2快速色谱法纯化，得到化合物32 (0.245 g, 67.5%)，为白色固体。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 11.74 (s, 1H), 11. 65 (s, 1H), 7. 36 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.17-4.01 (m, 4H), 3.98-3.81 (m, 4H), 3.76-3.52 (dd, 2H), 1.73 (s, 6H), 1.35 (s, 9H)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 170.11, 163.65, 163.52, 155.81, 151.43, 151.38, 140.61, 110.32, 80.21, 58.67, 57.43, 47.81, 28.21, 28.18, 28.17 27.51, 12.25, 12.28；质量(ESI-MS): 525.13 (M+H)；m.p: 300-305℃。
实施例11.以下说明了含有式I化合物('化合物X')的代表性药物剂型，用于人类的治疗性或预防性用途。
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实施例12. 以下说明了含有式I或式II中所述的化合物('化合物X')的代表性皮肤病学制剂，用于人类的治疗性或预防性用途。
乳膏剂: 2-12%活性成分(化合物X)和88-98%无活性成分
无活性成分% (w/w)
水65
十六烷-1-醇(C16H34O, 鲸蜡醇)3.0
十八烷-1-醇(C18H38O, 硬脂醇)8.5
豆蔻酸异丙酯(C17H34O2)1.0
丙三醇0.3
丙二醇20.0
聚山梨酯20 (TWEEN 20)2.0
棕榈酸异丙酯0.2
无活性成分总计100.00
可通过制药领域众所周知的常规程序获得以上制剂。
所有出版物、专利和专利文件都通过引用结合到本文中，如同单独引用结合到本文中一样。已经参考了各种具体的和优选的实施方案和技术描述了本发明。然而，应当理解，可以进行许多变动和修改同时在本发明的精神和范围内。