聚乙烯醇固定化与微生物制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN200910183402.9

申请日:

2009.09.21

公开号:

CN102021163A

公开日:

2011.04.20

当前法律状态:

撤回

有效性:

无权

法律详情:

发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C12N 11/08申请公布日:20110420|||实质审查的生效IPC(主分类):C12N 11/08申请日:20090921|||公开

IPC分类号:

C12N11/08; C12N11/04

主分类号:

C12N11/08

申请人:

江苏同和涂装机械有限公司

发明人:

孙中华; 王建龙

地址:

224051 江苏省盐城市亭湖经济开发区南机场路1号

优先权:

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

一种聚乙烯醇固定化与微生物制备方法,提供一种制备方法简单,采用聚乙烯醇固定化技术,利用一种新型的酶/微生物包埋固定化为载体,颗粒的机械强度明显得到提高,不易碎,化学稳定性能好,抗微生物分解性能强,是一种很好的包埋材料,其使用寿命长,产品质量好。

权利要求书

1: 一种聚乙烯醇固定化与微生物制备方法,包括以下制备方法是 :一、将聚乙烯 醇、海藻酸钠、丙烯酰胺与纯水互相混合均匀,经过水浴加热后进行溶化,成为聚乙烯 醇溶液 ; 其中 :聚乙烯醇加入量为 9.5-19%,海藻酸钠加入量为 0.1-
2: 0%,丙烯酰胺加入量 为 0.5-9.0%,其余量为水 ; 二、将酶与微生物悬浮液与聚乙烯醇溶液按一定的比例相混合 ; 三、将饱和硼酸溶液加入 1-2%氯化钙和 0.1-1.0%的 N, N’ ——亚甲基双丙烯酰 胺制备交联溶液 ; 四、用注射器或滴管将第 3 步制备的混合溶液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形 成白色球型颗粒,并在其中浸泡许多小时后,用生理盐水进行洗涤。

说明书


聚乙烯醇固定化与微生物制备方法

    技术领域 本发明涉及到一种聚乙烯醇与微生物技术,特别是一种聚乙烯醇固定化与微生 物制备方法。
     背景技术 聚乙烯醇简称 (PVA) 是一种富含羟基的水溶性高分子化合物,能与含羟基物 质产生物理交联作用,在固定化技术中,正常采用聚乙烯醇为包埋介质,但聚乙烯醇固 定化颗粒水溶膨胀性较大,易碎,聚乙烯醇同样是一种高粘性物质,聚乙烯醇与硼酸反 应较慢,将聚乙烯醇与硼酸的溶液相碰时会粘结在一起,并逐步溶合成一团,聚乙烯醇 颗粒有非常强附聚倾向,使聚乙烯醇凝胶成球困难,同时影响固定化酶的效力和重复作 用。
     聚乙烯醇与硼酸进行反应固定时,硼酸上的三个羟基部分进行了反应,反应后 形成的高聚物凝胶上还残留有亲水性的羟基,使得固定化颗粒在应用中存着很大的水溶 膨胀性,随着使用时间的延长,强度大为减弱,在实际应用过程中其效果不佳。 在化工 企业中不少科研人员不断地去探索、研究、试验聚乙烯醇固定化酶与微生物制备方法, 虽然取得一些进展,但在实际应用中仍然存在着尚未克服的技术难题。
     发明内容
     本发明的目的在于克服以上不足,提供一种制备方法简单,利用一种新型的酶 / 微生物包埋固定化为载体,颗粒机械强度高,不易碎,化学稳定性能好,抗微生物分解 性能强,是一种很好的包埋材料,其使用寿命长,产品质量好,一种实用性强的聚乙烯 醇固定化与微生物制备方法。
     本发明解决其技术问题所采用的技术方案是 :
     一、将聚乙烯醇、海藻酸钠、丙烯酰胺与纯水互相混合均匀,经过水浴加热后 进行溶化,成为聚乙烯醇溶液 ;
     其中 :聚乙烯醇加入量为 9.5-19%,海藻酸钠加入量为 0.1-2.0%,丙烯酰胺加 入量为 0.5-9.0%,其余量为水。
     二、将酶与微生物悬浮液与聚乙烯醇溶液按一定的比例相混合 ;
     三、将饱和硼酸溶液加入 1-2%氯化钙和 0.1-1.0%的 N, N’ ——亚甲基双丙 烯酰胺制备交联溶液 ;
     四、用注射器或滴管将第 3 步制备的混合溶液滴加到冷却的交联剂溶液中,使 其形成白色球型颗粒,并在其中浸泡许多小时后,用生理盐水进行洗涤。
     本发明的有效效果是 :
     通过在聚乙烯醇 - 硼酸交联过程中引入少量的 (0.1-1.0% ) 海藻酸钠成功地解决 了聚乙烯醇颗粒的附聚问题,增强了聚乙烯醇凝胶的成球能力 ;
     通过在聚乙烯醇 - 硼酸聚合反应过程中引入丙烯酰胺聚合反应,使之在聚乙烯醇凝胶颗粒内部及表面形成聚丙烯酰胺网状结构,有效地改善了聚乙烯醇凝胶的水溶 性、膨胀性。 聚合单体丙烯氨酰胺和交联剂 N,N’ ——亚甲基双丙烯酰胺 (BIS) 的加 入量分别为 0.5-9.0%和 0.1-1.0% ;
     聚乙烯醇固定化技术,可以使固定化颗粒制备方法简单,颗粒的机械强度明显 得到提高,其使用寿命延长。
     下面是结合实施例对本发明进一步描述 :
     实施方法 1
     (1) 将 10g 聚乙烯醇、0.5g 海藻酸钠、6.0g 丙烯酰胺与 100mL 水相混合,水浴加 热至溶化,然后静置降至常温 ;
     (2) 纤维素酶湿重 5g,悬浮于 10mL 0.9% NaCl 中,与 12mL 上述溶液相混合 ;
     (3) 将饱和硼酸溶液加入 1% CaCl2 和 0.3%的 N, N’ ——亚甲基双丙烯酰胺 制备交联剂溶液 ;
     (4) 用 0.40mmID 的注射器将 (2) 中混合液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形 成 2mm 直径的白色球型小珠,并在其中浸泡 20h,然后用生理盐水洗涤。
     实施方法 2 (1) 将 15g 聚乙烯醇、1.0g 海藻酸钠、4.0g 丙烯酰胺与 100mL 水相混合,水浴加 热至溶化,然后静置降至常温 ;
     (2) 丝孢酵母细胞湿重 5g,悬浮于 12mL 0.9% NaCl 中,与 10.0mL 上述溶液相 混合 ;
     (3) 将饱和硼酸溶液加入 1.5-2% CaCl2 和 0.6%的 N,N’ ——亚甲基双丙烯酰 胺制备交联剂溶液 ;
     (4) 用胶皮吸管将 (2) 中混合液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形成 3mm 直 径的白色球型小珠,并在其中浸泡 24h,然后用生理盐水洗涤。
     按照上述实施方法,聚乙烯醇固定化与微生物制备方法简单,颗粒的机械强度 高,使聚乙烯醇凝胶成球块,不易碎,其产品质量好,使用寿命长。
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资源描述

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1、10申请公布号CN102021163A43申请公布日20110420CN102021163ACN102021163A21申请号200910183402922申请日20090921C12N11/08200601C12N11/0420060171申请人江苏同和涂装机械有限公司地址224051江苏省盐城市亭湖经济开发区南机场路1号72发明人孙中华王建龙54发明名称聚乙烯醇固定化与微生物制备方法57摘要一种聚乙烯醇固定化与微生物制备方法,提供一种制备方法简单,采用聚乙烯醇固定化技术,利用一种新型的酶/微生物包埋固定化为载体,颗粒的机械强度明显得到提高,不易碎,化学稳定性能好,抗微生物分解性能强,是一种。

2、很好的包埋材料,其使用寿命长,产品质量好。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN102021177A1/1页21一种聚乙烯醇固定化与微生物制备方法,包括以下制备方法是一、将聚乙烯醇、海藻酸钠、丙烯酰胺与纯水互相混合均匀,经过水浴加热后进行溶化,成为聚乙烯醇溶液;其中聚乙烯醇加入量为9519,海藻酸钠加入量为0120,丙烯酰胺加入量为0590,其余量为水;二、将酶与微生物悬浮液与聚乙烯醇溶液按一定的比例相混合;三、将饱和硼酸溶液加入12氯化钙和0110的N,N亚甲基双丙烯酰胺制备交联溶液;四、用注射器或滴管将第3步制备的混合溶液滴加到冷却的交联。

3、剂溶液中,使其形成白色球型颗粒,并在其中浸泡许多小时后,用生理盐水进行洗涤。权利要求书CN102021163ACN102021177A1/2页3聚乙烯醇固定化与微生物制备方法技术领域0001本发明涉及到一种聚乙烯醇与微生物技术,特别是一种聚乙烯醇固定化与微生物制备方法。背景技术0002聚乙烯醇简称PVA是一种富含羟基的水溶性高分子化合物,能与含羟基物质产生物理交联作用,在固定化技术中,正常采用聚乙烯醇为包埋介质,但聚乙烯醇固定化颗粒水溶膨胀性较大,易碎,聚乙烯醇同样是一种高粘性物质,聚乙烯醇与硼酸反应较慢,将聚乙烯醇与硼酸的溶液相碰时会粘结在一起,并逐步溶合成一团,聚乙烯醇颗粒有非常强附聚倾向。

4、,使聚乙烯醇凝胶成球困难,同时影响固定化酶的效力和重复作用。0003聚乙烯醇与硼酸进行反应固定时,硼酸上的三个羟基部分进行了反应,反应后形成的高聚物凝胶上还残留有亲水性的羟基,使得固定化颗粒在应用中存着很大的水溶膨胀性,随着使用时间的延长,强度大为减弱,在实际应用过程中其效果不佳。在化工企业中不少科研人员不断地去探索、研究、试验聚乙烯醇固定化酶与微生物制备方法,虽然取得一些进展,但在实际应用中仍然存在着尚未克服的技术难题。发明内容0004本发明的目的在于克服以上不足,提供一种制备方法简单,利用一种新型的酶/微生物包埋固定化为载体,颗粒机械强度高,不易碎,化学稳定性能好,抗微生物分解性能强,是一。

5、种很好的包埋材料,其使用寿命长,产品质量好,一种实用性强的聚乙烯醇固定化与微生物制备方法。0005本发明解决其技术问题所采用的技术方案是0006一、将聚乙烯醇、海藻酸钠、丙烯酰胺与纯水互相混合均匀,经过水浴加热后进行溶化,成为聚乙烯醇溶液;0007其中聚乙烯醇加入量为9519,海藻酸钠加入量为0120,丙烯酰胺加入量为0590,其余量为水。0008二、将酶与微生物悬浮液与聚乙烯醇溶液按一定的比例相混合;0009三、将饱和硼酸溶液加入12氯化钙和0110的N,N亚甲基双丙烯酰胺制备交联溶液;0010四、用注射器或滴管将第3步制备的混合溶液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形成白色球型颗粒,并在其中浸。

6、泡许多小时后,用生理盐水进行洗涤。0011本发明的有效效果是0012通过在聚乙烯醇硼酸交联过程中引入少量的0110海藻酸钠成功地解决了聚乙烯醇颗粒的附聚问题,增强了聚乙烯醇凝胶的成球能力;0013通过在聚乙烯醇硼酸聚合反应过程中引入丙烯酰胺聚合反应,使之在聚乙烯说明书CN102021163ACN102021177A2/2页4醇凝胶颗粒内部及表面形成聚丙烯酰胺网状结构,有效地改善了聚乙烯醇凝胶的水溶性、膨胀性。聚合单体丙烯氨酰胺和交联剂N,N亚甲基双丙烯酰胺BIS的加入量分别为0590和0110;0014聚乙烯醇固定化技术,可以使固定化颗粒制备方法简单,颗粒的机械强度明显得到提高,其使用寿命延长。

7、。0015下面是结合实施例对本发明进一步描述0016实施方法100171将10G聚乙烯醇、05G海藻酸钠、60G丙烯酰胺与100ML水相混合,水浴加热至溶化,然后静置降至常温;00182纤维素酶湿重5G,悬浮于10ML09NACL中,与12ML上述溶液相混合;00193将饱和硼酸溶液加入1CACL2和03的N,N亚甲基双丙烯酰胺制备交联剂溶液;00204用040MMID的注射器将2中混合液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形成2MM直径的白色球型小珠,并在其中浸泡20H,然后用生理盐水洗涤。0021实施方法200221将15G聚乙烯醇、10G海藻酸钠、40G丙烯酰胺与100ML水相混合,水浴加热至溶化,然后静置降至常温;00232丝孢酵母细胞湿重5G,悬浮于12ML09NACL中,与100ML上述溶液相混合;00243将饱和硼酸溶液加入152CACL2和06的N,N亚甲基双丙烯酰胺制备交联剂溶液;00254用胶皮吸管将2中混合液滴加到冷却的交联剂溶液中,使其形成3MM直径的白色球型小珠,并在其中浸泡24H,然后用生理盐水洗涤。0026按照上述实施方法,聚乙烯醇固定化与微生物制备方法简单,颗粒的机械强度高,使聚乙烯醇凝胶成球块,不易碎,其产品质量好,使用寿命长。说明书CN102021163A。

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