技术领域
本发明属于食品保鲜领域，具体涉及一种具有食品防腐保鲜作用的植物乳杆菌929-2菌 株及其应用。
背景技术
目前，食品加工后均需要加入食品化学防腐剂，以确保货架期、保持原有风味和品质。 特别是泡椒凤爪、鸡翅、猪蹄、猪皮、猪耳朵和竹笋等加工食品，除了需要加入脱氢乙酸钠、 双乙酸钠、山梨酸钾和乳酸链球菌素等化学食品防腐剂外，还必须经过辐照，才能确保6个 月货架期。食品化学防腐剂和辐照残留的安全担忧已经引起社会普遍关注，国家食品新标准 出台，更严格控制使用一些加工助剂后，泡椒凤爪生产形势变得十分严峻，常常因防腐保鲜 不合格导致制厂家停产。
已有报道的食品保鲜剂有，中国专利申请CN102138668A公开了一种泡椒凤爪食品保鲜 剂，所述的保鲜剂由肉桂酸钾、乳酸链球菌素、D-异抗坏血酸钠、双乙酸钠和山梨酸钾组成。 《江苏农业学报》，2010，26(4)报道了复合生物保鲜剂对南美白对虾的保鲜效果，所述的复 合生物保鲜剂由壳聚糖、茶多酚和乳酸链球菌素组成。食品科学2008,29,（11）报道了一种 复合型生物保鲜剂在牡蛎保鲜中的应用研究，所述的复合生物保鲜剂由壳聚糖、茶多酚、溶 菌酶组成。上述生物保鲜剂本质上虽然是天然化学防腐剂，但仍属化学防腐保鲜剂。而中国 专利申请中CN1802937公开了一种含有酵母活菌与枯草芽孢杆菌活菌重量比为1∶1的混合 微生物活菌防腐保鲜剂及生产方法，但所菌种、制备方法、应用方式和对象与本发明也完全 不一样。特别是酵母活菌与枯草芽孢杆菌恰好正是泡椒凤爪食品等加工食品的主要危害菌， 因此，该专利不适合在泡制食品中应用。该行业尽管已经投入大量物力、人力和财力进行食 品生物保鲜剂研究，目前也侧重于筛选具有抗微生物作用的菌株，提取分离抗菌成分，研制 成天然化学防腐剂，如乳酸链球菌素和纳他霉素，该方法存在的主要缺陷是成本高和防腐效 果差，还需要结合辐照才能达到保鲜，成为目前制约行业品质提升主要技术瓶颈。
本发明的发明人经过4年多的筛选、研究、试制，最终优选出活力强的植物乳杆菌929-2， 能主动地在熟肉加工食品表面形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁 殖，确保食品在不加化学防腐剂和辐照条件下的安全性，确保了货架期，并保持原有风味和 品质。
发明内容
本发明所解决的技术问题是一种新的菌株，具有食品防腐保鲜作用，可确保食品货架期。
该菌株为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），编号929-2，该菌株于2012年8月21 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No.6463。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
植物乳杆菌929-2菌株的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示。
植物乳杆菌929-2菌株不能利用甘油、赤廯醇、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L- 木糖、阿东醇、β-甲基-D-木糖甙、山梨糖、鼠李糖、卫茅糖、肌醇、α-甲基-D-葡萄糖甙、菊 糖、淀粉、肝糖、木糖醇、D-松二糖、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩糖、L-岩糖、D-阿拉伯糖 醇、L-阿拉伯糖醇、葡萄糖酸盐和5-酮基-葡萄糖酸盐产酸，但能利用核糖、半乳糖、葡萄糖、 果糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、α-甲基-D-甘露糖甙、N-乙酰-葡糖胺、苦杏仁甙、熊果甙、 七叶灵、柳醇、纤维二塘、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、海藻糖、松叄糖、棉子糖、龙胆 二糖和2-酮基-葡萄糖酸盐产酸。
植物乳杆菌929-2菌株对碳水化合物利用情况与标准植物乳杆菌AS1.577区别如下：
植物乳杆菌929-2与标准植物乳杆菌AS1.577生化区别
本发明菌株可用于食品防腐保鲜，也可用于制备具有食品防腐保鲜作用的生物保鲜剂。 如将本发明菌株及其菌剂用于制备泡凤爪、泡翅膀、泡猪蹄、泡椒猪皮、泡猪耳朵和竹笋等 食品防腐保鲜，在食品中可检出本发明菌剂中的菌细胞数量为102～1014个cfu/g。
采用植物乳杆菌929-2菌株配制生物保鲜剂时，生物保鲜剂中每1ml或1g生物保鲜剂含 102～1014个菌细胞。
还可以采用植物乳杆菌929-2菌株与副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），嗜酸乳杆 菌（actobacillusacidophilus）、嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），戊糖片球菌 （Pediococcuspentosaceus），所述的粪肠球菌（Enterococcusfaecals）中的至少一种组合使用。
当植物乳杆菌929-2与其他益生菌混合时，菌株之间可以任意比例混合，但植物乳杆菌 929-2不取零。优选地，菌株之间比例为1-10：1-10。进一步优选，菌株之间以等比例混合。
应用本发明生物保鲜剂制备保鲜食品时，制备方法包括如下步骤：
（1）预处理及清洗；
如：清洗、解冻、挑选大小、去除角质层、毛或爪甲等，清洗残留的血液或不干净物；
（2）沸水烫漂：沸水中煮至3-7成熟，滤过，冷却，备用；
（3）配制泡制母液：按常规用量将调味辅料加水配制成泡制母液，煮沸后，冷却至45℃ 以下；
所述的调味辅料可以有盐、味精、鸡精、香精、酵母膏、鸡膏和糖等。调味辅料只是用 于调整口味，满足食品的咸度、甜度、辣度、香味等调味要求，对于产品的保鲜没有影响， 用量按照食品领域常规用量添加即可。
进一步的，步骤（3）中如果采用泡椒调整风味，则在配制泡制母液时，取泡椒适量，按 常规用量将调味辅料加水配制泡制母液，煮沸后，冷却至45℃以下。其中，泡椒用量以风味 设定为准，用量无特别要求，可按常规用量添加。
进一步的，步骤（3）中煮沸时间优选15-30分钟。
（4）泡制：取步骤（3）所得泡制母液，加入本发明生物保鲜剂和步骤（2）处理后的肉 类食品，在温度15-45℃下浸泡，即得。
进一步的，步骤（4）中浸泡是指让食品入味，促进益生菌繁殖，实现抑制腐败菌生长。
进一步的，步骤（4）中益生菌添加量以固体益生菌计算，每100升泡制母液加入200-1200 克益生菌，或以含2%鲜菌细胞的液体益生菌计算，每100升泡制母液加入5-30升。
下面更进一步地描述本发明。
如本文使用的术语“生物防腐保鲜”具有其一般含义，并且在本文特别地是指采用本发明 的生物保鲜剂在腌制加工品表面形成一道强有力的生物屏障，抑制和防止腐败细菌的侵染和 繁殖，增加保鲜期和货架寿命。
如本文使用的术语“食品学可接受的”通常是指食品领域可使用，对产品或者对哺乳动物 无害，或具有合理的或可接受的利益/风险比。
如本文使用的术语“载体”和“赋形剂”可以是食品领域中任何常规的载体和赋形剂。具体 的载体和赋形剂的选择将取决于用于使用方式。用于特定保鲜模式的合适生物保鲜剂组合物 的制备方法完全在食品领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为食品学上可接受的载体 或赋形剂包括食品领域常规的载体、赋形剂、稀释剂、填充剂、溶剂、支持剂、崩解剂、表 面活性剂和吸附载体等。必要时，还可以包括香味剂和甜味剂等。
本发明生物保鲜剂的有益效果：
1、采用本发明菌株及其菌剂制备食品，制备过程未添加化学防腐剂，避免了化学防腐剂 影响人体健康。
2、采用本发明菌株及其菌剂制备食品，制备过程不采用辐照处理，彻底解除辐照对残留 担忧，同时也避免风味和质地破坏，并降低成本。
3、不改变组织状态，保持肉类食品原有鲜度，显著提升品质。
4、货架期能超过6个月。
5、去除肉类食品的腥膻味，改善其口味。
6、长期食用，可增加人体益生菌数量。
具体实施方式
植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），编号929-2，该菌株于2012年8月21日保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCCNo.6463。 保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
发明人将植物乳杆菌929-2菌株的16srDNA进行了测序，其16SrDNA具体序列如下 所示（SEQIDNo.1）：
1GTCACTTAGGCGGCTGGTTCCTAAAAGGTTACCCCACCGACTTTGGGTGTTACAAACTCT
61CATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATC
121CGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAG
181AATGGCTTTAAGAGATTAGCTTACTCTCGCGAGTTCGCAACTCGTTGTACCATCCATTGT
241AGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCT
301CCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACCAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTGATAATAA
361GGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCAT
421GCACCACCTGTATCCATGTCCCCGAAGGGAACGTCTAATCTCTTAGATTTGCATAGTATG
481TCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGT
541GCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAATG
601CTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCATTCATCGT
661TTACGGTATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTACCCATACTTTCGAGCCTCAG
721CGTCAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCAT
781TTCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTTTCCCAGTTTCCGA
841TGCACTTCTTCGGTTGAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCG
901CTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCA
961CGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAATACCGTCAATACCTGAACAGTTACTCTCAGAT
1021ATGTTCTTCTTTAACAACAGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGCGTT
1081GCTCCATCAGACTTTCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTT
1141GGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATTACCCTCTCAGGTCGGCTACGTATCATTGC
1201CATGGTGAGCCGTTACCCCACCATCTAGCTAATACGCCGCGGGACCATCCAAAAGTGATA
1261GCCGAAGCCATCTTTCAAACTCGGACCATGCGGTCCAAGTTGTTATGCGGTATTAGCATC
1321TGTTTCCAGGTGTTATCCCCCGCTTCTGGGCAGGTTTCCCACGTGTTACTCACCAGTTCG
1381CCACTCACTCAAATGTAAATCATGATGCAAGCACCAATCAATACCAGAGTTCGTTCGACT
1441GCATGTATAGCAG
使用单一的植物乳杆菌Lactobacillusplantarum929-2作为生物保鲜剂，或将植物乳杆菌 Lactobacillusplantarum929-2与副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌、粪肠 球菌中的至少一种混合作为生物保鲜剂，用于食品保鲜的实例如下：
生物保鲜菌剂制备实施例1
取植物乳杆菌929-2（Lactobacillusplantarum929-2）斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏 5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml， 调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时 活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5 克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液 体培养基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷 酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min 后制成的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量 为1012。
生物保鲜菌剂制备实施例2
取植物乳杆菌929-2（Lactobacillusplantarum929-2）斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5 克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调 节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌 株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量为3.3×1013。
生物保鲜菌剂制备实施例3
取副干酪乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量为 1011。
生物保鲜菌剂制备实施例4
取副干酪乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量为2.5×1011。
生物保鲜菌剂制备实施例5
取嗜酸乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量为 1010。
生物保鲜菌剂制备实施例6
取嗜酸乳杆菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量比为2.5×1011。
生物保鲜菌剂制备实施例7
取嗜热链球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量为 109。
生物保鲜菌剂制备实施例8
取嗜热链球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量为3.3×1010。
生物保鲜菌剂制备实施例9
取戊糖片球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量为 108。
生物保鲜菌剂制备实施例10
取戊糖片球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌 15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量为3.3×109。
生物保鲜菌剂制备实施例11
接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的斜面上， 在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5克， 硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液体培养 基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢 二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成 的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，取菌细胞菌悬液，分装，即得液体生物保鲜剂，其中每1ml菌细胞数量为 1010。
生物保鲜菌剂制备实施例12
取粪肠球菌斜面，接种于蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，吐温800.1 克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭 菌15min后制成的斜面上，在28-35℃下培养24小时活化菌株。
活化菌株接种于由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷酸氢二钾0.5 克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min后制成的液 体培养基中，在28-40℃下培养16-18小时，作为种子液。
按1-5%接种量接种种子液到由蛋白粉10克，牛肉膏5克，酵母膏10克，糖20克，磷 酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.05克，水1000ml，调节pH6.2～6.4，用高压锅在121℃灭菌15min 后制成的发酵培养基中，在28-40℃，发酵罐发酵培养36-48小时，获菌细胞悬液。
在无菌条件下，离心菌细胞悬液收集菌细胞，取乳酸菌菌细胞10份，加辅料30份混合， 干燥，粉碎，分装，即得固体制剂，其中每1克菌细胞数量为2.5×1011。
生物保鲜菌剂组合物制备实施例13
分别取生物保鲜菌剂制备实施例1与生物保鲜菌剂制备实施例3制备的植物乳杆菌929-2 与副干酪乳杆菌菌细胞菌悬液，在无菌条件下等体积混合，分装，即得液体生物保鲜菌剂组 合物，其中每1ml菌细胞数量为5.5×1011个。
生物保鲜菌剂组合物制备实施例14
分别取生物保鲜菌剂制备实施例2与生物保鲜菌剂制备实施例4制备的植物乳杆菌929-2 与副干酪乳杆菌菌细胞干粉，在无菌条件下等重量混匀，分装，即得植物乳杆菌929-2与副干 酪乳杆菌固体生物保鲜菌剂组合物，其中每1克菌细胞数量为2.5×1010个。
本发明复合生物保鲜剂均系在单方生物保鲜剂基础上，液体制剂按体积比，固体制剂按 重量比配制。因此，本发明复方生物保鲜剂，还包括由下述组成的固体或液体制剂制备实施 例见表1：
本发明生物保鲜菌剂组合物，均系在单方生物保鲜菌剂基础上，液体制剂按体积比，固 体制剂按重量比配制，发明人在试制时发现采用任意体积或重量比均可实现防腐保鲜的作用， 如10:1至1:10，或10:1:1:1:1:1至1:1:1:1:1:10，30:1，1:30，优选地，液体复方生物保鲜剂或 固体生物保鲜剂以菌种或菌株等比例混合最佳。因此，本发明生物防腐保鲜菌剂组合物，还 包括由下述组成的固体或液体菌剂制备实施例见表1。
表1生物防腐保鲜菌剂组合物实施例
生物防腐保鲜菌剂生物活性实施例1生物防腐保鲜剂抑菌作用
按照文献《食品与发酵工业》，2004年30卷3期：56-61方法，测定本发明生物保鲜菌 剂对食品有害微生物抑制作用，结果见表2：显示本发明生物保鲜剂对大肠杆菌、金色葡萄 球菌、肉毒杆菌、梭状芽孢杆菌、志贺氏杆菌、沙门氏杆菌、嗜热芽孢杆菌、枯草杆菌有非 常好的抗菌作用，复方生物保鲜剂组还表现活性增强作用，但需要合理比例。
表2液体生物防腐保鲜菌剂抑菌作用（抑菌圈直径，mm）
注：未注明比例均为等比例。
生物防腐保鲜菌剂生物学实施例2生物防腐保鲜菌剂抑菌作用及协同
按照文献《食品与发酵工业》，2004年30卷3期：56-61方法，称取本发明固体生物保 鲜菌剂及其组合物干粉，制成每1ml含测定了本发明生物保鲜菌剂及其组合物12毫克对食品 有害微生物抑制作用，结果（表3）提示本发明生物保鲜剂及其组合物对大杆菌、金色葡萄 球菌、肉毒杆菌、梭状芽孢杆菌、志贺氏杆菌、沙门氏杆菌、嗜热芽孢杆菌、枯草杆菌有抗 菌作用，复方组合物组还表现活性增强作用，但需要合理配伍比例。
表3固体生物防腐保鲜菌剂抑菌作用（抑菌圈直径，mm）
注：未注明比例均为等比例。
应用实施例1益生菌泡椒凤爪制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒凤爪保鲜应用，按下述方法制备：
1.取鸡爪，解冻，挑选肉厚和个大的分割鸡爪，去除鸡爪上的角质层和爪指甲，称50kg， 用净化水泡洗鸡爪中残留的血液和不洗干净物；
2.将步骤2鸡爪置沸水预煮3～5分钟，滤过，冷却至室温备用；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸30分钟， 冷却至45℃下备用；
4.取步骤3处理后泡椒泡制母液，按泡制母液体积30%加入液体生物保鲜剂，搅拌均匀后， 再加入步骤2处理后的鸡爪，在温度15-45℃下，浸泡36小时；
5.分装：取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例2益生菌泡椒凤爪制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒凤爪保鲜应用，按下述方法制备：
1.取鸡爪，解冻，挑选肉厚和个大的分割鸡爪，去除鸡爪上的角质层和爪指甲，称50kg， 用净化水泡洗鸡爪中残留的血液和不洗干净物；
2.将步骤2鸡爪置沸水预煮5分钟，滤过，冷却至室温备用；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟， 冷却至45℃下备用；
4.取步骤3处理后泡椒泡制母液，按每100升泡制母液加入固体生物保鲜剂1200克，搅拌 均匀后，再加入步骤2处理后的鸡爪，在温度15-45℃下，浸泡36小时；
取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例3益生菌泡椒鸡翅制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒鸡翅保鲜应用，按下述方法制备：
1.鸡翅预处理：解冻，挑选肉厚、个大适中的鸡翅，用净化水泡洗不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸20分钟， 冷却至45℃下备用；
4.泡制：按鸡翅-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃ 下，浸泡24小时；
取适量泡制好鸡翅，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例4益生菌泡椒猪蹄制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪蹄保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪蹄预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪蹄中残留的血液和不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮3min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟， 冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪蹄-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃ 下，浸泡24小时；
取适量泡制好鸡爪，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例5益生菌泡椒猪皮制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪皮保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪皮预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪皮中不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮3min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟， 冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪皮-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3，置入同一容器中，在温度15-45℃ 下，浸泡15小时；
取适量泡制好猪皮，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例6益生菌泡椒猪耳朵制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒猪耳朵保鲜应用，按下述方法制备：
1.猪耳朵预处理：解冻，去除蹄甲，用净化水泡洗猪耳朵中不干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸30分钟， 冷却至45℃下备用；
4.泡制：按猪耳朵-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃ 下，浸泡36小时；
取适量泡制好猪耳朵，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例7益生菌泡椒竹笋制备
本发明生物保鲜菌剂在泡椒竹笋保鲜应用，按下述方法制备：
1.竹笋预处理：用净化水泡洗竹笋中不洗干净物；
2.沸水烫漂：沸水预煮5min，滤过；
3.称泡椒65kg，按常规用量加入调味辅料和水配制成泡制母液，煮沸后，煮沸15分钟， 冷却至45℃下备用；
4.泡制：按竹笋-泡制母液-生物保鲜剂重量比10:13:3.9，置入同一容器中，在温度15-45℃ 下，浸泡24小时；
取适量泡制好竹笋，装袋，抽真空、封口，即成。
应用实施例8保质防腐效果
按照生物防腐保鲜菌剂应用实施例1，使用液体菌剂，制成益生菌泡椒凤爪，室温条件下 放置6个月，依据泡椒凤爪行业标准DB51/T975-2009规定方法按时测定非益生菌总菌落数、 大肠菌菌落数和致病菌、按照GB4789.35-2010规定方法测定益生菌总菌落数，采用30人品 尝方法考察风味，结果非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数、致病菌（表4）均符合标准，风 味极佳。
表4液体菌剂制备的益生菌凤爪保质防腐作用
注：-示未检出，+++示品质和口感极佳；基于效果表中各组合比例均为等比例。
应用实施例9生物保鲜剂防腐效果
按照应用实施例2，使用固体菌剂，制成益生菌泡椒风爪，室温条件下放置6个月，依 据泡椒风爪行业标准DB51／T975—2009规定方法按时测定非益生菌总菌落数、大肠菌菌落数 和致病菌、按照GB4789．35—20lO规定方法测定益生菌总菌落数，采用30人品尝方法考察风 味，结果非盂生菌总菌落数、大肠菌菌落数、致病菌(表5)均符合标准，风味极佳。
表5固体菌剂制备的益生菌风爪的保质作用
注：-示未检出，+++示品质和口感极佳；基于效果表中各组合比例均为等比例。
应用实施例10生物防腐保鲜菌剂与传统自然发酵和防腐效果比较
为了进一步验证本发明效果，按照生物防腐保鲜菌剂应用实施例1和生物保鲜菌剂应用实 施例2制备益生菌泡椒凤爪，同时，采用传统自然乳酸菌发酵、市售的泡菜乳酸菌发酵剂发酵 和加化学防腐剂进行对比，相同包装后放置在37℃下的培养箱中观察14天变化情况。结果是 传统自然发酵和市售的泡菜发酵剂组均在第二天全部涨袋，化学防腐剂组则第三天全部涨袋， 生物防腐保鲜菌剂应用实施例1和生物保鲜菌剂应用实施例2制备益生菌泡椒凤爪组14天无一 涨袋。依据泡椒凤爪行业标准DB51/T975—2009规定方法，对非益生菌总菌落数进行检查， 发现传统自然发酵和市售的泡菜发酵剂菌非益生菌总菌落数不符合标准DB51/T975—2009规 定，而应用实施例1和按照应用实施例2制备益生菌泡椒凤爪未见非益生菌总菌落，完全符合 规定（见表6）。
发明人进一步研究表明，传统自然乳酸菌发酵和现有市售的泡菜乳酸菌发酵剂发酵区别 在于本发明筛选出的乳酸菌能产生高活性杀灭腐败微生物的细菌素，因此，本发明的生物防 腐保鲜菌剂还能在pH5—6之间继续产生杀灭腐败微生物作用，传统自然乳酸菌发酵和现有 市售的泡菜乳酸发酵剂发酵是依靠其产生的大量乳酸产生杀灭微生物作用，但乳酸对泡椒凤 爪中的腐败菌效果差，特别是一旦pH值高于4.8时就抑菌作用都丧失完全，现有化学防腐剂 与之完全相同，故均不及本发明。
值得注意是，表6仅列举了几种液体和固体物防腐保鲜菌剂，应当理解为，这些实施例 或试验例仅仅是用于具体地说明之用的随机选择代表，而不应理解为用于以任何形式限制本 发明。
表6生物保鲜剂对泡椒凤爪的防腐效果比较
注：未注明比例均为等比例。
还特别在室温条件下，考察了几种生物防腐菌剂组合物对货架期影响（表7），生物防腐 菌剂处理组能显著延长货架期，组合比例对货架期有显著影响。
表7生物防腐保鲜菌剂对泡椒凤爪货架期影响
注：未注明比例均为等比例。
为了更进一步验证本发明对不同食品效果，按照应用实施例3至应用实施例7制备益生菌 鸡翅、益生菌猪蹄、益生菌猪皮、益生菌猪耳朵和益生菌竹笋，后放置在37℃下的培养箱中 观察14天变化情况。结果是应用生物防腐保鲜菌剂制备益生菌鸡翅、益生菌猪蹄、益生菌猪 皮、益生菌猪耳朵和益生菌竹笋14天无一涨袋，化学防腐剂对照2天内全部涨袋，生物防腐剂 保质优势十分明显。参照行业标准DB51/T975—2009规定方法进行检查，发现完全符合规定 （见表8）。
表8生物防腐保鲜剂效果
注：未注明比例均为等比例。
综上所述，本发明优选出来的植物乳杆菌929-2及其组合物，能主动地在加工食品表面 形成一道强有力的生物屏障，抵御和防止腐败细菌的侵染和繁殖，确保食品在不加化学防腐 剂和辐照条件下的安全性，延长了货架期，并保持原有风味和品质，降低了成本，实现了一 种新的防腐保鲜的概念，有效克服了现有技术缺陷，经10家企业应用试验均获较佳效果，本 发明工业应用前景十分看好。