水溶性膳食脂肪酸 背景
膳食脂肪酸或营养脂肪酸是一类不饱和脂肪酸， 包括 ω-3 脂肪酸， 如二十碳五烯 酸 (EPA) 和二十二碳六烯酸 (DHA)、 以及 ω-6 和 ω-9 脂肪酸。ω-3 脂肪酸的主要来源之 一是鱼油 ； 然而， 也可以从植物来源和藻类获得 ω-3 脂肪酸。除了它们一般的营养益处之 外， 这些脂肪酸的心血管疾病和其它健康益处也是已知的。由于对 ω-3 类脂肪酸健康益处 认识的提高， 鱼油和亚麻油膳食补充物已经变得流行， 并且， 一些食品公司已经将鱼油加入 到食物和饮料产品中。
直到最近， 才可获得实质上没有鱼腥味或气味的脱臭鱼油。 然而， 随着脱臭鱼油的 可获得， 现在有可能制造含 ω-3 脂肪酸或鱼油的饮料， 但是油在含水饮料中的溶解性是个 问题。 因此， 可期望提供溶于含水饮料的营养脂肪酸制剂， 或者可以作为饮料消费的水溶性 ω-3 脂肪酸制剂。也可期望得到不浑浊或透明的透明饮料。此外， 也可期望得到制作这样 的制剂的工艺或方法。
而且， 注意到食用营养脂肪酸或膳食脂肪酸已经被确定具有许多健康益处——具 有影响诸多疾病的潜力， 所述疾病如心血管疾病、 神经疾病、 免疫功能疾病和关节炎。为了 使任何治疗性分子物质有效地运输通过胃肠道， 进入血液， 最终到达身体内部的器官和细 胞， 该分子应该可溶于肠液水相中。没有可接受量的溶解， 药物会大部分通过胃肠道。如果 脂肪或油 ( 脂质 ) 在胃中被乳化作为部分消化， 它们则会变得更加可吸收。该过程涉及脂 质 - 水界面的产生和水溶性脂肪酶与不溶性脂质或脂肪之间的相互作用。通过该过程， 大 大增强了脂质的吸收。借助于通过预先存在的水溶性制剂先形成脂质 - 水复合体， 可增强 脂质， 如膳食脂肪酸的生物利用率或吸收。问题是， 营养脂肪酸， 如 ω-3 脂肪酸实际上不溶 于水， 而且， 如果被加入到饮料中作为浑浊乳液、 悬浮液或水包油混合物， 它们不能满足消 费者享用。
由于营养脂肪酸或膳食脂肪酸的许多可期望的特性， 提供这些脂肪酸的更可溶于 水的制剂和 / 或生物利用率提高的制剂用于体内应用会是有利的。
概述
本公开内容涉及独特的药学组合物， 其包含膳食脂肪酸或营养脂肪酸的水溶性 制剂。尤其地， 水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂可包含从 1wt％到 75wt％的膳食脂肪酸 ； 和从 25wt％到 99wt％的非离子表面活性剂。此外， 向对象递送膳食脂肪酸的方法可包括给对象 施用水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂， 使得膳食脂肪酸比单独递送相同量的膳食脂肪酸时更加 可生物利用。
在另一个实施方式中， 膳食脂肪酸溶液可包含 0.1wt％到 94.9wt％的水 ； 0.1wt％ 到 35wt％的膳食脂肪酸 ； 和 5wt％到 75wt％的非离子表面活性剂。在一个实施方式中， 非 离子表面活性剂可以以使膳食脂肪酸可溶于水形成透明溶液的浓度存在。此外， 向对象递 送膳食脂肪酸的方法可包含给对象施用膳食脂肪酸溶液， 使得膳食脂肪酸比单独递送相同 量的膳食脂肪酸时更加可生物利用。
将膳食脂肪酸溶于水中的方法可包含以下步骤 ： 将膳食脂肪酸与温的、 充分混合
的非离子表面活性剂组合， 形成表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物 ； 并且， 以至少慢如溶解所 述膳食脂肪酸所必要地， 用水连续混合所述表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物。
另外， 增强对象中膳食脂肪酸的生物利用率的方法可包含如上所述地将表面活性 剂 - 膳食脂肪酸混合物溶于水。
详细描述
本文使用的缩写具有其在化学和生物学领域中的常规含义。
本文使用的 “膳食脂肪酸” 包括营养脂肪酸—— ω-3 脂肪酸， 其衍生自天然来源， 如鱼、 植物来源， 如芡欧鼠尾草 (chia sage) 或芡欧鼠尾草 (Salvia hispanica)、 或来自亚 麻子的亚麻来源、 或者其是合成产生的。以下是 ω-3 脂肪酸的列表 ( 表 1)， 随后是 ω-3 脂 肪酸的植物提取物的列表 ( 表 2)。这些列表仅是示例性的， 而不被考虑为是限制性的。
表 1- 自然界中发现的几种常见 n-3 脂肪酸的列表
表 2-ω-3 脂肪酸植物提取物的来源俗名 芡欧鼠尾草 奇异果 紫苏 亚麻 越橘 别名 芡欧鼠尾草 弥猴桃 紫苏 亚麻子 越橘 林奈名称 芡欧鼠尾草 (Salvia hispanica) 中华猕猴桃 (Actinidia chinensis) 紫苏 (Perilla frutescens) 亚麻 (Limum usitatissimum) 越橘 (Vaccinium vitis-idaea) ％ n-3 64 62 58 55 496CN 102469815 A 亚麻荠 马齿苋 黑树莓
亚麻荠 半枝莲 -说明书36 35 333/12 页亚麻荠 (Camelina sativa) 马齿苋 (Portulaca oleracea) 黑树莓 (Rubus occidentalis)含 ω-3 脂 肪 酸 的 膳 食 脂 肪 酸 也 可 以 衍 生 自 藻 类，如 寇 氏 隐 甲 藻 (Crypthecodinium cohnii) 和裂殖壶菌 (Schizochythum)——其是 DHA 的丰富来源、 或者 褐藻 ( 大型海藻 )——EPA 的丰富来源。它们也可以包括结合的亚油酸 (CLA)、 ω-6 脂肪酸 和 ω-9 脂肪酸， 如亚麻酸、 亚油酸 (18:2) 和 γ 亚麻酸 (GLA， 18:3)。
本文使用的 “非离子表面活性剂” 是在中性溶液 ( 例如， 中性水溶液 ) 中趋于非离 子化 ( 例如， 不带电荷 ) 的表面活性剂。
术语 “治疗 (treating)” 是指成功治疗或改善损伤、 病理学或状况的任何指示， 包括任何客观或主观参数， 如消除、 减缓、 逐渐减轻症状 ； 使患者对损伤、 病理学或状况更 能忍耐 ； 减缓退化或衰退的速率 ； 使最终的退化点衰弱较轻 ； 或者改善患者的身体或精 神健康。对症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数， 包括身体检查、 神经精神病学 (neuropsychiathc) 测试和 / 或精神病学评估的结果。同样， 治疗包括预防性治疗， 如促进 身体系统的整体健康， 如心或其它器官健康等。
如本文所使用的， 术语 “癌症” 指在哺乳动物中发现的所有类型的癌症、 赘生物 或恶性肿瘤， 包括白血病、 癌和肉瘤。示例性癌症包括脑癌、 乳腺癌、 子宫颈癌、 结肠癌、 头颈癌、 肝癌、 肾癌、 肺癌、 非小细胞肺癌、 黑素瘤、 间皮瘤、 卵巢癌、 肉瘤、 胃癌、 子宫癌和成 神经管细胞瘤。另外的例子包括霍奇金病、 非霍奇金淋巴瘤、 多发性骨髓瘤、 嗅母细胞瘤 (euroblastoma)、 卵巢癌、 横纹肌肉瘤、 原发性血小板增多、 原发性巨球蛋白血症、 原发性脑 肿瘤、 癌、 恶性胰岛素瘤 (pancreatic insulanoma)、 恶性类癌、 泌尿膀胱癌、 恶化前皮肤损 害、 睾丸癌、 淋巴瘤、 甲状腺癌、 成神经细胞瘤、 食管癌、 生殖泌尿道癌、 恶性高钙血综合征、 子宫内膜癌、 肾上腺皮质癌、 内分泌和外分泌胰的赘生物和前列腺癌。
“患者” 或 “对象” 指哺乳动物对象， 包括人类。
如本文所使用的， 术语 “滴定” 或 “逐滴加入” 意为向液体缓慢加入化合物或溶液， 同时混合。 加入化合物或溶液的速度不应该超过某一阈值， 否则， 溶质的透明特性和粘性丢 失。缓慢加入可以像细雨一样或者逐滴， 但在任何情况下都不应该等于大体积。可以将缓 慢加入指定为其每秒或每分钟被加入的体积百分比， 例如， 每秒 5mL 到 100mL 水， 或者每秒 或每分钟加入 5wt％的被加入到水或含水饮料中的含量。
如本文所使用的， 提及含膳食脂肪酸的溶液， 术语 “透明水溶液” 意为含水的溶液 ( 例如， 饮料 )， 所述溶液不含可见的未溶膳食脂肪酸颗粒。根据一些实施方式， 透明水溶液 不是分散体， 也不是悬浮液， 并且， 在静置不受干扰达 1 小时或更久后依然透明。通常， 形成 非常小的不可见胶束， 因而溶液是透明的。
在本文中， 术语 “水溶性” 指膳食脂肪酸的溶解或非常细的分散， 以便它们在溶液 中对裸眼是不可见的。 通常， 在本公开内容的制剂中， 脂肪酸可以在水中和非离子表面活性 剂屏障形成胶束， 并且， 胶束的尺寸可以小于约 100nm， 而且， 通常尺寸为约 15nm 到约 30nm。 因此， 无论膳食脂肪酸严格地溶解还是仅仅如此精细地分散以至于它们在其中形成的溶液是透明的， 这仍被认为是根据本公开内容的实施方式的 “水溶性的” 。
水溶性制剂
已经观察到， 当适当组合时非离子表面活性剂可用于提高膳食脂肪酸的溶解性和 / 或生物利用率。因此， 非离子表面活性剂可用于形成高度水溶性的脂肪酸凝胶制剂。
在一个方面， 本公开内容提供了水溶性制剂， 包括膳食脂肪酸和非离子表面活性 剂。在一些实施方式中， 水溶性制剂并不包括在水中的植物油悬浮液或可见的大胶束 ( 对 裸眼可见的胶束 )。在其它实施方式中， 水溶性制剂并不包括醇 ( 例如， 膳食脂肪酸并不首 先溶于醇， 然后加入水中 ) 或以另外方式增强膳食脂肪酸溶解性的其它添加剂。
据此， 水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂可包含 1wt ％到 75wt ％的膳食脂肪酸 ； 和 25wt％到 99wt％的非离子表面活性剂， 或者基本上由其组成。 在一个实施方式中， 凝胶制剂 可溶于水中并形成透明溶液， 重量比为 1 ∶ 3( 凝胶比水 )。在另一个实施方式中， 凝胶制 剂可溶于水中并形成透明溶液， 重量比为 1 ∶ 1。在再一个实施方式中， 膳食脂肪酸可以以 5wt％到 60wt％存在， 和非离子表面活性剂可以以 40wt％到 95wt％存在。
膳食脂肪酸溶液也可包含 0.1wt％到 94.9wt％的水 ； 0.1wt％到 35wt％的膳食脂 肪酸 ； 和 5wt％到 75wt％的非离子表面活性剂， 或者基本上由其组成。在一个实施方式中， 水可以以 15wt％到 75wt％存在 ； 膳食脂肪酸可以以 2wt％到 20wt％存在， 和非离子表面活 性剂可以以 20wt％到 50wt％存在。在一个实施方式中， 非离子表面活性剂可以以使膳食脂 肪酸可溶于水形成透明溶液的浓度存在。 根据这些实施方式， 膳食脂肪酸可以是营养脂肪酸—— ω-3 脂肪酸， 其衍生自天 然来源， 如鱼、 植物来源， 如芡欧鼠尾草 (chia sage) 或芡欧鼠尾草 (Salviahispanica)， 或 者来自亚麻子的亚麻来源， 或者其是合成产生的。示例性 ω-3 脂肪酸列于表 1 中， 而且， ω-3 脂肪酸的植物提取物的列表在表 2 中示出。 而且， 注意到含 ω-3 脂肪酸的膳食脂肪酸 也可以衍生自藻类， 如寇氏隐甲藻和裂殖壶菌——其是 DHA 的丰富来源， 或者褐藻 ( 大型海 藻 )—— EPA 的丰富来源。它们也可以包括结合的亚油酸 (CLA)、 ω-6 脂肪酸和 ω-9 脂肪 酸， 如亚麻酸、 亚油酸 (18:2) 和 γ 亚麻酸 (GLA， 18:3)。 也可以使用在本文没有列出的其它 膳食脂肪酸， 这取决于期望达到的结果。
可以使用的有用非离子表面活性剂包括， 例如非离子水溶性甘油单酯、 甘油二酯 或甘油三酯 ； 聚乙二醇的非离子水溶性单 - 和二 - 脂肪酸酯 ； 非离子水溶性失水山梨糖醇 脂肪酸酯 ( 例如， 失水山梨糖醇单油酸酯， 如 SPAN 80 和 TWEEN 20( 聚氧乙烯 20 山梨糖醇酐 单油酸酯 )) ； 多糖酵解的 (polyglycolyzed) 甘油酯 ； 非离子水溶性三嵌段共聚物 ( 例如， 聚 ( 氧化乙烯 )/ 聚 -( 氧化丙烯 )/ 聚 ( 氧化乙烯 ) 三嵌段共聚物， 如波洛沙姆 406(PLURONIC F-127) 及其衍生物。
非离子水溶性甘油单酯、 甘油二酯或甘油三酯的例子包括丙二醇二辛酸酯 / 二 癸酸酯 ( 例如， Miglyol 840)、 中链甘油单酯和甘油二酯 ( 例如， Capmul 和 ImwitoR72)、 中链甘油三酯 ( 例如， 辛酸和癸酸甘油三酯， 如 LAVRAFAC、 MIGLYOL 810 或 812、 CRODAMOL GTCC-PN 和 SOFTISON 378)、 长链甘油单酯 ( 例如， 单油酸甘油酯， 如 PECEOL 和单亚油酸甘 油酯， 如 MAISINE)、 聚烃氧基蓖麻油 ( 例如， 聚乙二醇甘油蓖麻醇酸酯、 聚乙二醇羟基硬脂 酸甘油酯、 聚乙二醇鲸蜡硬脂酰醚 )、 聚乙二醇 660 羟基硬脂酸酯及其衍生物。
聚乙二醇的非离子水溶性单 - 和二 - 脂肪酸酯包括 d-α- 维生素 E 聚乙二醇 1000
琥珀酸酯 (TPGS)、 聚乙二醇 660 12- 羟基硬脂酸酯 (SOLUTOL HS 15)、 油酸聚烃氧基酯和硬 脂酸聚烃氧基酯 ( 例如， PEG 400 单硬脂酸酯和 PEG 1750 单硬脂酸酯 ) 及其衍生物。
多糖酵解的甘油酯包括聚氧乙基化油酸甘油酯、 聚氧乙基化亚油酸甘油酯、 聚 氧乙基化辛酸 / 癸酸甘油酯及其衍生物。具体例子包括 Labrafil M-1944CS、 Labrafil M-2125CS、 Labrasol、 SOFTIGEN 和 GELUCIRE。
在一些实施方式中， 非离子表面活性剂是甘油 - 聚乙二醇羟基硬脂酸酯或其衍生 物。这些化合物可以通过使蓖麻油或氢化蓖麻油与不同量的环氧乙烷反应而合成。聚乙二 醇甘油蓖麻醇酸酯是 83wt％相对疏水组分和 17wt％相对亲水组分的混合物。相对疏水部 分的主要组分是甘油聚乙二醇蓖麻醇酸酯， 而相对亲水部分的主要组分是聚乙二醇和甘油 乙氧基化物。聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯 ( 甘油 - 聚乙二醇羟基硬脂酸酯 ) 是混合物， 约 75wt％是相对疏水的， 其主要部分是甘油聚乙二醇 12- 羟基硬脂酸酯。
在一些实施方式中， 水溶性制剂包括膳食脂肪酸和甘油 - 聚乙二醇羟基硬脂酸 酯， 以形成透明水溶性制剂， 这意味着可以用裸眼清楚地看透制剂， 但制剂可任选地被着 色。透明水溶性制剂可在水中溶剂化， 形成透明溶液。在一些实施方式中， 透明水溶性制剂 并不含有裸眼可见的颗粒 ( 例如， 未溶解的膳食脂肪酸的颗粒 )。在某些实施方式中， 光可 以通过透明水溶性制剂传播而不漫射或散射。 因此， 在一些实施方式中， 透明水溶性制剂不 是不透明的、 浑浊的或者乳白色的。 在一些实施方式中， 水溶性制剂是非醇制剂， 这表明制剂并不包括 ( 或者仅以痕 量包括 ) 甲醇、 乙醇、 丙醇或丁醇。 在其它实施方式中， 制剂并不包括 ( 或者仅以痕量包括 ) 乙醇。
在一些实施方式中， 制剂可以是非疏质子溶剂化制剂， 意为水溶性疏质子溶剂不 存在或者仅以痕量被包括。 水溶性疏质子溶剂是水溶性非表面活性剂溶剂， 其中， 氢原子不 与氧或氮结合， 因而不能贡献氢键。
在一些实施方式中， 水溶性制剂并不包括 ( 或者仅以痕量包括 ) 极性疏质子溶 剂。极性疏质子溶剂是这样的疏质子溶剂 ： 它的分子表现出分子偶极矩， 但它的氢原子不 与氧或氮原子结合。极性疏质子溶剂的例子包括醛、 酮、 二甲亚砜 (DMSO) 和二甲基甲酰胺 (DMF)。在其它实施方式中， 水溶性制剂并不包括 ( 或者仅以痕量包括 ) 二甲亚砜。因此， 在一些实施方式中， 水溶性制剂并不包括 DMSO。 在有关的实施方式中， 水溶性制剂并不包括 DMSO 或乙醇。
在其它实施方式中， 水溶性制剂并不包括 ( 或者仅以痕量包括 ) 非极性疏质子溶 剂。非极性疏质子溶剂是这样的疏质子溶剂 ： 它的分子表现出约为零的分子偶极子。例子 包括烃， 如烷烃、 烯烃和炔烃。
本发明的水溶性制剂包括溶于水中的制剂 ( 即， 含水制剂 )。在一些实施方式中， 当被加入到水中时， 水溶性制剂形成透明水溶性制剂。 因此， 根据本公开内容的一些实施方 式， 由于本文制备的水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂的性质， 通常， 用于形成本公开内容的膳食 脂肪酸溶液的仅仅水和任选少量的稳定剂， 例如， 醇、 疏质子溶剂 ( 极性或非极性的 ) 等不 是溶剂化膳食脂肪酸所需要的。
在一些实施方式中， 水溶性制剂基本上由膳食脂肪酸和非离子表面活性剂组成。 在水溶性制剂 “基本上由膳食脂肪酸和非离子表面活性剂组成” 的情况下， 该制剂包括膳食
脂肪酸、 非离子表面活性剂和任选地本领域中众所周知的在营养药 (neutraceutical) 制 剂中有用的另外组分， 如防腐剂、 增味剂、 颜料、 缓冲剂、 水等， 其不影响制剂的基本溶解性， 即不需要另外的有机溶剂化溶剂。
在一些实施方式中， 水溶性制剂是水溶解的制剂， 意为膳食脂肪酸和非离子表面 活性剂与水 ( 例如， 含水的液体 ) 混合， 形成本公开内容的溶液， 但并不包括有机溶剂 ( 例 如， 乙醇或其它醇或溶剂化溶剂 )。 在一些实施方式中， 水溶解的制剂是透明的水溶性制剂。
方法
在本发明的另一个方面中描述了产生水溶性脂肪酸制剂的方法。 简单地加热并使 膳食脂肪酸与非离子表面活性剂 ( 如甘油 - 聚乙二醇羟基硬脂酸酯或其它相似的非离子表 面活性剂 ) 混合将不会产生透明水溶性溶液， 除非适当地加入。相反， 通过简单混合获得半 固体凝胶状浑浊或乳状的、 高粘性溶液。 这种蜡状浑浊的、 高粘性凝胶并不适于在水中或饮 料中形成透明溶液。它变成凝固的乳状白块。通过将膳食脂肪酸缓慢滴定或加入到温的非 离子表面活性剂中同时混合， 可以获得透明溶液。
更具体而言， 将膳食脂肪酸溶于水中的方法可包含以下步骤 ： 将膳食脂肪酸与温 的、 充分混合的非离子表面活性剂租合， 以形成表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物 ； 以至少慢 如溶解膳食脂肪酸所必要地， 用水连续混合表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物。在某些具体 实施方式中， 温的、 充分混合的非离子表面活性剂通过将表面活性剂加热到约 90° F 至约 200° F 的温度同时混合直到透明的初步步骤制备。在另一个具体实施方式中， 组合步骤包 括将膳食脂肪酸缓慢加入到非离子表面活性剂中并搅拌直到彻底混合。 膳食脂肪酸可以充 分分散或溶于表面活性剂中， 以便产生的溶液不含可见的膳食脂肪酸胶束或颗粒。 例如， 混 合步骤可以包括将表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物缓慢加入到温水中， 速度为每秒不超过 5vol％的水。而且， 加热水溶性非离子表面活性剂的步骤可以包括在加热步骤期间的搅拌 或混合步骤。
膳食脂肪酸被加入到温的表面活性剂中的速度和表面活性剂的温度可帮助适当 地完成该过程， 以得到期望的结果， 例如形成透明溶液。 例如， 在一些实施方式中， 表面活性 剂不应该低于某一温度或高于某一温度。同样地， 如果将膳食脂肪酸凝胶混合物太快地加 入到水中， 则将产生固体凝胶样块。 非离子表面活性剂通常也应该被彻底搅拌， 以除去气泡 ( 氧气 )， 并且直到透明。一旦将膳食脂肪酸加入到表面活性剂中， 则将其搅拌至少 10 分钟 或更久， 而通常约 1 小时。
更详细地， 当将水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂加入到水中时， 制剂被加入到 100mL 水体积中的速度应该不超过每秒 5mL， 或者不超过每秒 5vol％被加入的水体积的水。加入 的速度取决于水的体积。 此外， 可以不断搅拌水同时缓慢加入膳食脂肪酸凝胶。 如果期望或 必要， 可将溶液加热， 以提高溶解性。 也就是说， 加热温度通常被选择， 以避免膳食脂肪酸和 / 或非离子表面活性剂的化学损坏。膳食脂肪酸凝胶 ( 膳食脂肪酸 / 非离子表面活性剂 ) 的温度通常不应该超过 200° F， 而水温通常也不应该超过 200° F。理想地， 两者的温度都 应该维持在 100 到 150° F， 而在一个实施方式中， 水可以任选地维持在约 100° F 同时缓慢 加入膳食脂肪酸凝胶混合物。在一些实施方式中， 所得的溶液是如上所述的水溶性制剂或 透明水溶性制剂。例如， 所得溶液可以是水溶性制剂， 其是清澈透明溶液， 没有裸眼可见的 颗粒。本公开内容也提供向对象递送膳食脂肪酸的方法， 包括将本文所述的制剂或溶液 施用给对象， 使得膳食脂肪酸比单独递送相同量的膳食脂肪酸时更加可生物利用。施用途 径将在下文详细描述， 但只需说， 还可以采用对治疗疾病或提供健康益处有效的任何施用 途径， 例如， 口的、 黏膜的、 眼的、 肠胃外或局部递送。
因此， 本公开内容可以提供在需要这种治疗的对象中治疗以下疾病的方法 ： 癌、 肥 胖、 糖尿病、 心血管疾病、 血脂异常、 年龄相关黄斑变性 ( 例如， 与年龄相关黄斑变性有关的 视力损失 )、 高胆固醇、 视网膜病 ( 例如， 糖尿病性视网膜病 ) 或神经疾病。 该方法包括给对 象施用有效量的本文公开的水溶性制剂。注意到尽管这样疾病被提供在共同的清单中， 但 它们不是相等的疾病， 而且， 在本文中应该被认为就像每一种疾病均被单独列出一样。
在另一个方面， 本发明提供增强膳食脂肪酸生物利用率的方法。该方法包括将膳 食脂肪和非离子表面活性剂组合， 形成表面活性剂 - 膳食脂肪酸混合物。可将表面活性 剂 - 膳食脂肪酸混合物施用给对象， 从而增强膳食脂肪酸的生物利用率。相比于不存在非 离子表面活性剂情况下的膳食脂肪酸的生物利用率， 生物利用率被增强。
剂量和剂型
足以治疗疾病或提供健康益处的膳食脂肪酸的量可被限定为 “治疗有效的剂量” 。 对于该用途有效的剂量方案 (dosage schedule) 和量， 即 “给药方案 (dosingregimen)” 将 取决于各种因素， 包括疾病或状况的阶段、 疾病或状况的严重性、 患者健康的总体状态、 患 者的身体状况、 年龄等等。在计算患者的给药方案期间， 同样考虑施用方式。 剂量方案也考虑本领域中悉知的药代动力学参数， 即吸收速率、 生物利用率、 代 谢、 清除率等等 ( 参见， 例如， Hidalgo-Aragones(1996)J.Steroid Biochem.MoI.Biol.58 ： 61 1-617 ； Groning(1996)Pharmazie 51 ： 337-341 ； Fotherby(1996)Contraception 54 ： 59-69 ； Johnson(1995)J.Pharm.Sci.84 ： 1 144-1 146 ； Rohatagi(1995)Pharmazie 50 ： 610-613 ； Brophy(1983)Eur.J.Clin.Pharmacol.24 ： 103-108 最 近 的 Remington ′ s，见 上 )。本领域的状态允许临床医生能够针对每个患者和治疗的疾病或状况确定剂量方案。
可以单次或多次施用膳食脂肪酸制剂， 这取决于患者所需和能忍受的剂量和频 率。制剂应该提供足够量的活性剂， 以有效治疗疾病状态， 或者提供适当的健康益处。与经 口服进入血液、 进入体腔或进入器官的腔相比， 可以使用较低剂量， 尤其在将膳食脂肪酸施 用到解剖学上隐蔽的部位时。在局部施用中可以采用较高剂量。制备可经肠胃外施用的膳 食脂肪酸制剂的实际方法对本领域的技术人员来说是已知的或显然的， 该方法在这样的公 开物， 如 Remington′ s 中， 见上， 有更详细地描述。 也参见 Nieman， In″ Receptor Mediated Antisteroid Action，″ Agarwal， et al.， eds.， De Gruyter， New York(1987)。
在 一 些 实 施 方 式 中， 膳 食 脂 肪 酸 以 1wt ％ 到 75wt ％， 或 者 可 选 地， 以 5wt ％ 到 50wt％、 10wt％到 35wt％或 20wt％到 25wt％的浓度存在于水溶性膳食凝胶制剂中。膳食 脂肪酸也可以以 0.1mg/mL 到 10mg/mL， 或者可选地， 以 0.5mg/mL 到 5mg/mL 的浓度作为溶 液存在于即饮饮料制剂中。 如果制备待被加入到另外的水中的浓缩物， 浓度可以为， 例如从 10 到 125mg/mL。这些范围并不意图是限制性的， 而是提供制备即饮制剂以及浓缩物的指导 方针。注意到， 如果期望透明溶液， 可以有最大浓度， 以获得无色透明溶液。
水溶性制剂也可以是药学组合物的形式。药学组合物可以包括膳食脂肪酸、 非离 子表面活性剂和药学上可接受的赋形剂。 在将包括本公开内容的膳食脂肪酸的药学组合物
配制在可接受的载体后， 可将其放于适当的容器中并标记用于治疗指出的状况。为了施用 膳食脂肪酸， 这样的标记可以包括， 例如， 关于施用的量、 频率和方法的说明。
任何合适的剂型对施用本公开内容的水溶性制剂都是有用的， 如口的、 肠胃外、 黏 膜的、 眼的和局部剂型。 口服制剂包括片剂、 丸剂、 粉剂、 糖衣丸、 胶囊 ( 例如， 软凝胶胶囊 )、 液剂、 糖锭、 凝胶剂、 糖浆、 膏剂、 饮料、 悬浮液等， 适于患者摄取。 液体制剂的例子包括滴剂、 喷雾剂、 气溶胶、 乳剂、 洗剂、 悬浮液、 饮用溶液、 漱剂和吸入剂。 本公开内容的制剂也可以通 过注射施用， 即经静脉内、 经肌肉、 经皮内、 经皮下、 经十二指肠内或经腹膜内施用。 同样， 本 文所述的制剂可以通过吸入施用， 例如， 经鼻内施用。 另外， 本发明的制剂可以局部施用， 如 经皮施用。 该制剂也可以通过眼内、 阴道内和直肠内途径施用， 包括栓剂、 吹入剂、 粉剂和气 溶胶制剂 ( 例如， 关于类固醇吸入剂， 参见 Rohatagi， J.Clin.Pharmacol.35 ： 1 187-1 193， 1995 ； Tjwa， Ann.Allergy Asthma Immunol.75 ： 107-111， 1995)。
为了从本公开内容的制剂制备药学组合物， 药学上可接受的载体可以是固体或者 是液体。固体形式的制备物包括粉剂、 片剂、 丸剂、 胶囊、 扁囊剂、 栓剂和可分散颗粒。固体 载体可以是一种或多种物质， 其还可以充当稀释剂、 风味剂、 粘合剂、 防腐剂、 片剂崩解剂或 者封装材料。 关于制剂和施用技术的细节在科技文献和专利文献中有充分的描述， 参见， 例 如， 最新版本的 Remington′ sPharmaceutical Sciences， Maack Publishing Co， Easton PA(″ Remington′ s″ )。 合适的载体包括碳酸镁、 硬脂酸镁、 滑石、 糖、 乳糖、 果胶、 糊精、 淀粉 ( 来自玉米、 小麦、 稻、 马铃薯或其它植物 )、 明胶、 西黄蓍胶、 低熔点蜡、 可可脂、 蔗糖、 甘露醇、 山梨醇、 纤 维素 ( 如甲基纤维素、 羟丙基甲基 - 纤维素或羧甲基纤维素钠 ) 和胶 ( 包括阿拉伯胶和西 黄蓍胶 ) 以及蛋白质， 如明胶和胶原。如果期望， 可以加入崩解剂或共增溶剂， 如交联的聚 乙烯吡咯烷酮、 琼脂、 褐藻酸或其盐， 如藻酸钠。在粉剂中， 载体是细分的固体， 其与细分的 活性组分形成混合物。 在片剂中， 活性组分以适当比例与具有必要结合特性的载体混合， 并 按照期望的形状和尺寸被压缩。
糖衣丸核心被提供有合适的涂层 ( 包衣 )， 如浓缩的糖溶液， 其也可含阿拉伯胶、 滑石、 聚乙烯吡咯烷酮、 卡泊波 (carbopol) 胶、 聚乙二醇和 / 或二氧化钛、 漆用溶液和合适 的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可加入到片剂或糖衣丸涂层， 以识别产品或表征活 性化合物的量 ( 即， 剂量 )。 本发明的药物制剂也可口服使用， 其利用例如， 由明胶制成的推 入配合 (push-fit) 胶囊以及由明胶和涂层， 如甘油或山梨醇制成的软的、 密封胶囊。推入 配合胶囊可含与以下混合的膳食脂肪酸 ： 填料或粘合剂， 如乳糖或淀粉、 润滑剂， 如滑石或 硬脂酸镁、 和任选地， 稳定剂。在软胶囊中， 膳食脂肪酸在稳定剂存在或不存在的情况下可 溶于或悬浮于适当的液体中， 如脂肪油、 液体石蜡或液体聚乙二醇， 或者可选地， 可被包封 作为水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂 ( 在加入水之前 )。
为了制备栓剂， 低熔点蜡， 如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物可首先被融化， 并 且， 使活性组分均匀地分散于其中， 如通过搅拌。然后， 将融化的均匀混合物倒入合适型号 的模中， 使其冷却， 并从而凝固。
液体形式的制剂包括溶液、 悬浮液、 饮料和乳液， 例如， 水或水 / 丙二醇溶液。对于 肠胃外注射， 可以在含水聚乙二醇溶液或其它合适的溶液中配制液体制备物为溶液， 用于 注射。
适于口服使用的水溶液和饮料可以通过如下制备 ： 将水溶性膳食脂肪酸凝胶制剂 溶于水中， 并根据期望加入合适的着色剂、 香料、 稳定剂和增稠剂。适于口服使用的水溶液 或悬浮液可通过如下制备 ： 使活性组分与以下物质分散于水中 ： 粘性物质， 如天然或合成 的胶、 树脂、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠、 羟丙基甲基纤维素、 藻酸钠、 聚乙烯吡咯烷酮、 西 黄蓍树胶和阿拉伯胶和分散剂或湿润剂， 如天然产生的磷脂 ( 例如， 卵磷脂 )、 烯化氧与脂 肪酸的缩合产物 ( 例如， 聚氧乙烯硬脂酸酯 )、 环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物 ( 例如， 十七烯化氧鲸蜡醇 (heptadecaethylene oxycetanol))、 环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖 醇的偏酯的缩合产物 ( 例如， 聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯 ) 或者环氧乙烷与衍生自脂肪酸 和己糖醇酐的偏酯的缩合产物 ( 例如， 聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯 )。 含水悬浮液也可以 含有一种或多种防腐剂， 如乙基或正 - 丙基对 - 羟基苯甲酸盐、 一种或多种着色剂、 一种或 多种风味剂和一种或多种甜味剂， 如蔗糖、 阿斯巴甜或糖精。可以针对同渗重摩调节制剂。
同样包括这样的固体形式的制剂 ： 其可在使用前一刻转换成液体形式的制剂， 用 于口服施用。这样的液体形式包括溶液、 悬浮液和乳液。除了膳食脂肪酸以外， 这些制备物 还可含着色剂、 香料、 稳定剂、 缓冲剂、 人工和天然的增甜剂、 分散剂、 增稠剂、 增溶剂等等。
可加入甜味剂以提供可口的口服制备物， 如甘油、 山梨醇或蔗糖。这些制备物 可通过加入抗氧化剂而被保存， 如抗坏血酸。作为可注射的油载体的例子， 参见 Minto， J.Pharmacol.Exp.Ther.281 ： 93-102， 1997。合适的乳化剂包括天然存在的胶， 如阿拉伯胶 和西黄蓍树胶、 天然存在的磷脂， 如大豆卵磷脂、 衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯， 如 失水山梨糖醇单油酸酯和这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物， 如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸 酯。乳液也可含甜味剂和风味剂， 如在糖浆和酏剂的制剂中。这样的制剂也可含有润滑剂、 防腐剂或着色剂。
本 发 明 的 制 剂 可 以 通 过 局 部 途 径 经 皮 递 送，可 被 配 制 为 敷 药 棒 (applicatorstick)、 溶液、 悬浮液、 乳液、 凝胶、 霜剂、 膏剂、 糊剂、 冻胶、 涂布剂、 粉剂和气溶 胶。
制剂也可以作为微球体被递送， 以在身体中缓慢释放。例如， 微球体可通过 皮 内 注 射 含 药 物 的 微 球 体， 其 经 皮 下 缓 慢 释 放 ( 参 见， Rao， J.Biomater Sci.Polym. Ed.7 ： 623-645， 1995 ； 作为生物可降解的和可注射的凝胶制剂 ( 参见， 例如， Gao Pharm. Res.12 ： 857-863， 1995) ； 或 者， 作 为 口 服 施 用 的 微 球 体 ( 参 见， 例 如， Eyles， J.Pharm. Pharmacol.49 ： 669-674， 1997) 而被施用。经皮和皮内途径均提供恒定的递送达数周或数 月。
本发明的制剂可以作为盐被提供， 并可用许多酸形成， 所述酸包括但不限于盐酸、 硫酸、 乙酸、 乳酸、 酒石酸、 苹果酸、 琥珀酸等。盐常常更可溶于含水或为相应的自由碱形式 的其它质子溶剂中。在其它情况下， 制备物可以是以 1mM-50mM 组氨酸、 0.1wt％到 2wt％蔗 糖、 2wt％到 7wt％甘露醇的冻干粉剂， pH 范围为 4.5 到 5.5， 其在使用前与缓冲液组合。
在另一个实施方式中， 本发明的制剂可以通过使用脂质体递送， 所述脂质体与细 胞膜融合或被胞吞， 即通过应用连接到脂质体或者直接连接到寡核苷酸的配体， 所述配体 与细胞的表面膜蛋白受体结合而导致胞吞作用。通过使用脂质体， 尤其在脂质体表面携 带对目标细胞特异或以其它方式优选针对特定器官的配体的情况下， 可以着重于膳食脂 肪酸、 膳食脂肪酸代谢物或其盐在体内向目标细胞内的递送。( 参见， 例如， Al-Muhammed，J.Microencapsul.13 ： 293-306， 1996 ； Chonn， Curr.Opin.Biotechnol.6 ： 698-708， 1995 ； Ostro， Am.J.Hosp.Pharm.46 ： 1576-1587， 1989)。
制剂可以作为单位剂型被施用。在这种形式中， 制备物被再分成含适当量的活性 组分的单位剂量。 单位剂型可以是包装的制备物， 该包装含有离散数量的制备物， 如包装的 片剂、 胶囊和瓶或安瓿中的粉剂。同样， 单位剂型本身可以是胶囊、 片剂、 扁囊剂或糖锭， 或 者其可以是包装形式的这些中任意一种的适当数量。
单位剂量制剂中活性组分的量可以根据具体应用和活性组分的潜力而变化或调 整。如果期望， 该组合物也可以含其它相容的治疗剂。
分析 (assay)
可以针对其溶解膳食脂肪酸的能力利用任何适当的方法分析对象非离子表面活 性剂。通常， 将非离子表面活性剂加热， 与膳食脂肪酸接触并利用摇动器、 涡旋器或超声波 仪设备机械和 / 或自动混合。可以任选地加入水， 例如， 在膳食脂肪酸和 / 或表面活性剂为 粉剂形式的情况下。将溶液加热以提高溶解性。选择加热温度以避免膳食脂肪酸或非离子 表面活性剂的化学损坏。表面活性剂或膳食脂肪酸通常不应该被加热超过 200° F， 而优选 不超过 150° F。
针对胶体颗粒， 可以从视觉上检查所得溶液， 以确定膳食脂肪酸的溶解程度。 可选 地， 可以过滤并分析溶液， 以确定溶解程度。例如， 可以使用分光光度计测定过滤溶液中存 在的膳食脂肪酸的浓度。通常， 将测试溶液与含一系列已知量的预过滤膳食脂肪酸溶液的 阳性对照比较， 以获得标准浓度对 UV/vis 吸收曲线。可选地， 可以采用高效液相色谱法测 定溶液中膳食脂肪酸的量。
高通量溶解性分析方法在本领域中是众所周知的。通常， 这些方法涉及自动分配 和混合具有不同量的非离子表面活性剂、 膳食脂肪酸以及任选地其它共溶剂的溶液。 然后， 可以利用上述任何适当的方法分析所得溶液以确定溶解程度。
具 有 修 饰 的 径 迹 刻 蚀 的 聚 碳 酸 酯、 0.4μm 膜 的 Millipore Multiscreen Solubility 滤 是 一 次 性 使 用 的、 96 孔 产 品 组 件， 其 包 括 滤 板 和 盖 子。 该 设 备 用 于 在 100-300μl 体积范围内处理水溶解性样品。真空过滤设计与标准的、 微孔板真空管 (microtiterplate vacuum manifold) 相容。该板也被设计成与标准的、 96 孔微孔接收板 相适， 用于滤液收集。Multiscreen Solubility 滤 已经被开发， 并针对一致过滤流动时 间 (consistent filtration flow-time)( 利用标准真空 )、 低含水 (low aqueous) 可提取 化合物、 高样品滤液回收及进行溶解性分析所需的其温育样品的能力被 QC 测试。低结合 膜 (low-binding membrane) 已经被特别开发， 用于在含水介质中高度回收溶解的有机化合 物。 水溶解性分析允许通过混合、 温育和在 Multiscreen Solubility 滤板中过滤溶液 而测定膳食脂肪酸的溶解性。利用真空过滤将滤液转移到 96 孔收集板之后， 通过 UV/vis 光谱学进行分析， 以测定溶解性。另外， LC/MS 或 HPLC 可用于测定化合物溶解性， 尤其对于 具有低 UV/Vis 吸收的化合物和 / 或具有低纯度的化合物。为了量化水溶解性， 可以在测定 水溶解性之前针对每个化合物测定并分析标准校正曲线。
测试溶液可以通过加入浓缩的给定化合物等份试样而制备。 在室温下在覆盖的 96 孔 Multiscreen Solubility 滤板中混合溶液 1.5 小时。然后， 将溶液真空过滤到 96 孔、 聚
丙烯、 V- 底的收集板中， 以除去任何不溶性沉淀物。完成过滤后， 将 160μL/ 孔从收集板转 移到 96 孔 UV 分析板， 并用 40μL/ 孔的乙腈稀释。用 UV/vis 微孔板分光计从 260-500nm 扫描 UV/vis 分析板， 以测定测试化合物的吸收分布 (absorbance profile)。
因此， 根据本公开内容的实施方式， 本领域的技术人员可以分析多种非离子表面 活性剂， 以测定其溶解膳食脂肪酸化合物的能力。
本文所采用的术语和表述被用作描述的术语而不是限制的术语， 并且， 在使用这 样的术语和表述中并不意图排除所示和所述特征的等同物或其部分， 认识到各种修饰在本 发明所要求的范围内都是可能的。此外， 本发明任何实施方式的任何一种或多种特征可以 与本发明任何其它实施方式的任何一种或多种其它特征结合， 而不背离本发明的范围。例 如， 制剂的特征同样适用于治疗本文所述疾病状态的方法。 本文引用的所有公开物、 专利和 专利申请通过引用以其整体并入本文， 用于所有目的。 实施例 以下实施例旨在举例说明本公开内容的某些实施方式， 而并不意图限制本发明的 范围。注意， 荧光黄 (Lucifer yellow) 来自分子探针 (Molecular Probes)(Eugene， OR)。 Hanks 缓冲液和所有其它化学品获自 Sigma-Aldhch(St.Louis， MO)。
实施例 1-ω-3 凝胶制剂 ( 鱼油 ) 和随后的 ω-3 脂肪酸水溶液的制备
利用非离子表面活性剂聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯 ( 甘油 - 聚乙二醇羟基硬脂酸 酯 ) 配制 ω-3 脂肪酸的水溶性组合物。首先， 将非离子表面活性剂加热至约 115° F 并搅 拌直到透明和几乎没有泡沫可见。将在室温下的脱臭 ω-3 脂肪酸鱼油——含 30wt％ ω-3 脂肪酸——非常缓慢地或逐滴加入到温的聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯中， 直到形成含溶解 的 ω-3 脂肪酸的透明的稍有粘性的溶液 ( 或者 “ω-3 凝胶制剂” 或 “脂肪酸凝胶制剂” )。 因而， ω-3 凝胶制剂含有 50g 的聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯和 10g 的 ω-3 脂肪酸， 这代表 约 17wt％的 ω-3 脂肪酸凝胶制剂。以约每秒 1mL 的速度将 ω-3 脂肪凝胶制剂缓慢地逐滴 加入到 100mL 温水， 用搅拌器以 100RPM 维持作为混合涡旋， 并维持在约 110° F 的温度直到 形成无色透明溶液。在加入阶段过程中和加入后立即不断搅拌水。
由以上实施例可知， 通过将 ω-3 脂肪酸凝胶制剂加入到温水中获得溶解的 ω-3 脂肪酸的水溶液， 从而产生水溶性饮料。更具体而言， 含水 ω-3 脂肪酸凝胶制剂通过如下 制备 ： 保持凝胶制剂在约 115° F 的温度， 并将凝胶混合物滴定或逐滴加入到温水中， 形成 ω-3 脂肪酸的透明水溶液 ( 或者在视觉上是透明的非常精细的分散体 )。该含水 ω-3 脂 肪酸制剂将不具有不期望的滋味。含水 ω-3 脂肪酸制剂包括水 (100mL)、 聚乙二醇羟基硬 脂酸甘油酯 40(50mL) 和脱臭的 30wt％ ω-3 脂肪酸鱼油 (10mL)， ω-3 脂肪酸在含水膳食 脂肪酸制剂中的浓度约为 6.6wt％ ( 含水饮料 )。视觉检查确定溶液是无色透明的且没有 可见颗粒。通过 HPLC 分析含水 ω-3 脂肪酸制剂以检验其内含物。
实施例 2
将在 pH 7.4 的汉克平衡盐溶液 (Hank′ s Balanced Salt Solution)(10mM HEPES 和 15mM 葡萄糖 ) 中的 ω-3 脂肪酸的溶解性与 ω-3 凝胶制剂相比较。将至少 1mg ω-3 脂肪酸油 (30wt％ ω-3) 以及 100mg 的 ω-3 凝胶制剂与 1mL 的缓冲剂组合， 以分别产生＞ 1mg/mL 的 ω-3 油混合物和＞ 1mg/mL 的 ω-3 凝胶制剂混合物。利用台式涡旋器摇动各个
混合物 2 小时， 并在室温下静置过夜。在涡旋和静置过夜之后， 然后将 ω-3 油混合物通过 首先以样品饱和的 0.45-μm 尼龙注射过滤器 (Whatman， Cat#6789-0404) 过滤。
在涡旋和静置过夜之后， 以 14,000rpm 将 ω-3 凝胶制剂混合物离心 10 分钟。滤 液或上清液被连续取样两次， 并在分析前在 50 ∶ 50 分析缓冲液∶乙腈的混合物中稀释 10,100 倍和 10,000 倍。
通过 LC/MS/MS 利用电喷雾电离分析两种混合物对比在 50 ∶ 50 分析缓冲液∶乙 腈的混合物中制备的标准物 (standard)。标准浓度范围从 1.0μM 到 3.0nM。结果表明， 两 种制剂之间在溶解性上差异显著。
实施例 3
为了测试膳食脂肪酸通过 Caco-2 细胞单层的透性， 使 Caco-2 细胞单层生长， 在 12 孔 Costar 板中胶原涂布的、 微孔聚碳酸酯膜上汇合。
测试物品为含水膳食脂肪酸制剂， 并且， 在分析缓冲液 (HBSSg)——如在前面实施 例中的——中的剂量浓度为 2μM。在顶面 (A- 到 -B) 或基底侧面 (B- 到 -A) 上施用细胞单 层， 并与 5％ CO2 在潮湿的温育箱中在 37℃温育。在 120 分钟时从供给室 (donor chamber) 取样， 并在 60 和 120 分钟时从接收室 (receiver chamber) 收集样品。每个测定进行两次。 在经过测试物品之后， 针对每个单层测量荧光黄透性， 以确保在透性试验期间没有对细胞 单层造成损伤。 也测量阿替洛尔、 普萘洛尔和地高辛样品的透性， 以与膳食脂肪酸样品的透 性相比较。通过 LC/MS/MS 利用电喷雾电离， 所有样品均分析膳食脂肪酸或相应的相当化合 物。如本领域中已知地， 计算表观透性 (apparent permeability)(Papp) 和回收百分比。 -6 可以通过报告透性 (10 cm/s) 和跨 Caco-2 细胞单层的膳食脂肪酸的回收来表示膳食脂肪 酸透性结果。所有单层均通过试验后完整性控制 (integrity control)， 其中， 荧光黄 Papp -6 ＜ 0.8×10 cm/s。
实施例 4-ω-3 凝胶制剂 ( 亚麻籽油 ) 和随后 ω-3 脂肪酸的水溶液的制备
通过混合将五 (5) 克亚麻籽油溶于 50mL 温的聚乙二醇 660 羟基硬脂酸酯中， 直到 形成透明凝胶 ( “ω-3 凝胶制剂” )。然后， 将 ω-3 凝胶制剂非常缓慢地加入到 100mL 温的 蒸馏水中， 同时连续混合 ( 例如， 用悬浮并以 100RPM 转动的搅棒通过像细雨一样缓慢加入 混合或利用滴定装置逐滴加入混合 )。 将含有亚麻籽油的 ω-3 凝胶制剂非常缓慢地加入到 混合中的水中， 以避免液体凝固成固体凝胶或者浑浊的白块 ( 例如， 以每 10 秒 1mL 或更大 的速度， 同时连续搅拌 )。形成透明溶液， 不含可见颗粒或胶束。
实施例 5-ω-3 凝胶制剂 ( 鱼油 ) 和随后的 ω-3 脂肪酸水溶液的制备
通过混合将 30 克鱼油溶于 50mL 温的聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯 ( 甘油 - 聚乙二 醇羟基硬脂酸酯 )， 直到形成凝胶 (“ω-3 凝胶制剂” )。然后， 将 ω-3 凝胶制剂非常缓慢 地加入到 200mL 温的蒸馏水中， 同时连续混合 ( 例如， 用悬浮并以 100RPM 转动的搅棒通过 像细雨一样缓慢加入混合或利用滴定装置逐滴加入混合 )。 将含鱼油的 ω-3 凝胶制剂非常 缓慢地加入到混合中的水中， 以避免液体凝固成固体凝胶或者浑浊的白块 ( 例如， 以每 10 秒 1mL 或更大的速度， 同时连续搅拌 )。形成透明溶液， 不含可见颗粒或胶束。16