技术领域
本发明涉及，由肽和/或血液细胞成分的蛋白质组分构成的组合物，其中， 所述的组分具有低于10000Da的分子量；含有所述组合物的药剂；所述组合 物的制备；其用于治疗细胞免疫缺陷，尤其是癌症、败血病、变态反应的用途； 以及该药剂在使用例如细胞抑制剂或高能辐射治疗癌症患者时的预防用途。
人类或动物的生存环境中包括大量的传染性微生物，例如病毒、细菌、真 菌和寄生虫。此外，代谢的紊乱或改变，尤其是细胞分裂，可能会影响个体自 身对病理过程，例如在自身免疫力、肿瘤疾病或良性息肉结构中的处理。这些 过程—例如处理外部和内部感染—通常发生内部反应，例如在免疫反应中，从 而与病原体反应以尽可能使个体能进入环境中并引起细胞增殖。
上述过程可能引起病理性损害，并且在与生物体防御体系的不可控的相互 作用的情况下杀灭个体，例如宿主。通常，与病原体的斗争会持续有限的时间 间隔，然而，即使在这样有限的时间间隔中也可能在生物体中引起永久的损伤。 这些的反应的时限归因于作为个体的防御系统的免疫系统。
个体对环境影响或对在个体中的病理改变的免疫反应可以分为两种主要 的类型：体液的免疫反应和细胞的免疫反应，尽管通常还不能经常明确地将疾 病过程和逐渐康复过程归因于这两种免疫反应中的某一个，这是由于它们彼此 相互作用并且相互依赖。术语“细胞介导免疫”最初被创造用于对生物体，通 常是细胞内病原体的局部反应，其主要由于淋巴细胞和吞噬细胞引起，少量地 由于体液免疫系统部分的抗体引起。此外，术语“细胞介导免疫”被用于抗体 不起主要作用的任何免疫反应。细胞介导和抗体介导反应不能彼此分开，这是 由于例如细胞也包含在抗体的形成中，抗体是在大量细胞介质反应中假定的介 质元素的功能。
事实上，如果能以不同方式影响细胞反应的抗体不存在或者不是以最佳的 量存在，则在本发明意义上的细胞介导的反应就不可能起动。
细胞免疫反应尤其是与巨噬细胞、B-细胞、T-细胞、淋巴细胞、NK- 细胞、单核细胞以及很多其它细胞等相联系。
上述细胞对于细胞因子例如TNF、M-CSF或GM-CSF被释放负责。细 胞、细胞因子和环境影响以及个体自身的反应例如体液免疫的协同作用会导 致：
-杀微生物和杀肿瘤的活性，
-炎症反应和发烧，
-淋巴细胞的活化，以及
-组织重组和组织损害。
这不仅能杀灭微生物、多细胞寄生虫，还能破坏肿瘤细胞并引起发烧反应。
鉴于这部分免疫防御的上述各种功能，人们进行了大量提高该系统活性的 尝试。提高该部分免疫防御的效率在预防中体现出显著的优势，例如在病人有 重大的事故时或需要进行大的手术时，或者在采用细胞抑制剂或放疗治疗病人 时。提高细胞免疫反应的尝试能防止新的感染、其它的转移或者在腐败、炎症 过程中具有有益的效果。
尤其是在治疗自身免疫性疾病，例如牛皮癣、特异性湿疹、风湿性关节炎 或青少年糖尿病时，认为其具有良好的治疗效果，其条件是，在患者中细胞免 疫反应能得到改善。
尤其是对于癌症，关于细胞免疫体系作用的不断增长的新知识已经导致了 新的治疗方法。使用所谓的“癌症疫苗”，试图引导内生的细胞防御系统以准 确的方式应对肿瘤细胞。迄今为止细胞免疫治疗癌症的目的一直是，消除由于 肿瘤造成免疫体系的封锁以及激活抗肿瘤的细胞毒素T细胞。然而，这些过 程仍然与自身免疫反应的危险有关。
公知的方法在于，首先从血液或骨髓中分离出免疫细胞，在体外的试管中 培养，然后返回给患者。可以使用自体的细胞(同源细胞)或者来自外部供体 的细胞(异源细胞)。来自供体和受体的细胞之间的差别越大，移植细胞能够 识别肿瘤细胞的可能性就越大。
进一步提高细胞免疫反应的另一种方法是供给树状细胞。据认为，树状细 胞在激活免疫反应中起到关键作用。它们以下述方式显示出肿瘤细胞区别于其 它细胞对免疫系统的异常特征：可以发生标记的反应，该反应超出了一个细胞 的数量。
从特定患者身上取出树状细胞，与肿瘤细胞或其部分合并，然后返回患者 身上。在体内，以这种方式输入的树状细胞随后呈现出肿瘤细胞片断，从而引 起对肿瘤的免疫反应。
从骨髓或血液移植干细胞是另一种细胞免疫治疗的方式。干细胞移植最初 是用于更新被高剂量化疗治疗或辐射损伤的白血病患者的骨髓。然而，已经发 现移植来自外体的细胞也具有准确地对癌症细胞的直接效果，这是由于它们确 实一点也不与这些受体的所有组织特征相符。目前，患者所谓的有供体细胞形 成的新细胞免疫体系从而能将残留的白血病细胞认为外来细胞并与其斗争。
然而，细胞免疫反应的活化是高度规定的过程并需要大量的生物能量，此 外，还涉及自身免疫反应的危险。因此，这样的临床干预对于患者具有不利的 危险和副作用。
此外，在现有技术中公开了各种试剂，这些试剂可以从血液制品获得并用 于免疫系统的治疗性激活。WO 89/06538A公开了一种由全血得到的组合物， 该组合物会发生木瓜蛋白酶水解和醇变性。使用WO 89/06538所述的的组合 物，仅能在某些条件下治愈，这是由于化合物具有大量的副作用。
在现有技术的描述中，US 4384991公开了约25种不同的细胞提取物，其 基本都由白血球获得。即，本领域技术人员能从该专利推断出大量从这样的细 胞获得的组合物的存在。这些根据US 4384991的组合物由于各自的制备方法 或其原料而在它们的纯度上存在不同。特别优选的是使用马或小牛的白血球作 为原料。由来自马或小牛的原料得到的细胞提取物适合获得治疗产品。然而， 根据US 4384991的教导的核心是分离出纯的单独的肽。与所谓的指纹特征相 比，该肽的特征是高纯度分子。高纯度分离可以通过纯化步骤获得，例如离子 交换色谱或纸电泳。然而，来自马或小牛白血球的纯的肽在用于治疗时无法显 示出任何特别的效果。
虽然含有所揭示的肽的原始提取物也具有一定的效果，但该组分所需的量 很大，使得本领域技术人员无法在实际中使用。此外，仅对于纯的肽描述了不 存在毒性效果，由此可以认定，获得肽的原始提取物不具有这样优越的性质。
用丙酮洗涤US 4384991的原始部分，然后冰冻干燥。丙酮处理(在WO 89/06538中为水解和醇处理)导致原始部分的蛋白质组分的结构改变。尤其是 通过在粒性白细胞上的积聚能分离出期望的肽，即，能有效分离淋巴细胞和单 核细胞。从马或小牛血液提取的粒性白细胞提取物无法实际使用，这是由于其 仅在高浓度下具有一定的效果，此外还具有毒性作用。
EP 0140134中公开了一种来自哺乳动物器官或细胞培养物的提取物。此 外，其中还公开了由新鲜小牛血液或小牛血清中获得的细胞培养物的提取物。 所公开的组合物基本上是缺少具有超过10000Da成分的小牛血清、新鲜小牛 血液或去纤维蛋白的小牛血液。这样的提取物在目标生物体中会引起不期望的 防御反应。
因此，本发明的任务是提供一种技术教导，其不包括现有技术的上述缺陷， 能简单、安全并有效地治疗疾病，特别是由于细胞免疫反应的缺失而引起的疾 病，例如败血病、肿瘤疾病、湿疹、牛皮癣、神经性皮炎和自身免疫性疾病。 本发明的另一个目的是提供一种技术教导，尤其是一种药剂，该药剂可以在严 重事故时起预防作用，还可以在化疗和/或辐射治疗时将其与患者接触，通过 改善细胞免疫反应而使患者的状况达到最优化。本发明还有一个目的是，提供 一种用于预防和/或治疗由于休克和/或身体的、情绪的、精神的、病理的或放 射性的结果产生的疲劳综合症的药剂，
本发明的技术任务通过权利要求1所述的方法实现，该方法尤其是用于制 备包含如下成分的组合物：完全和/或部分的泛素特异性蛋白酶32、正辅因子 2谷氨酰胺/Q-富含的相关蛋白、钙粘着蛋白、转录因子GATA-2、推定的染色 质结构调节物、含CUE域1、SUPT6H蛋白、白细胞介素18受体1前体、白 细胞介素1受体类似的蛋白和粘蛋白4和/或腱生蛋白M、瞬时受体电位阳离 子通道、外切核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、SWI/SNF相关基质相关的肌动蛋 白依赖的染色质调节剂、SWI/SNF染色质调节复合体亚基OSA1 B120、OSA1 核蛋白、ATP酶、H+/K+交换多肽、锌指蛋白174、Ig重链V区域、ADAMTS -3前体/脱整联蛋白类和金属蛋白酶、凝结因子II(凝血酶)类受体3、二 酰甘油激酶θ、p250R、SWI/SNF染色质-重调节复合体亚基OSA2、金属磷 酸酯酶、AMP脱氨酶、α-甘露糖苷酶、钙粘着蛋白-9、Nik-相关激酶、 α-1B-肾上腺素能受体、BRCA1-相关蛋白-1、CD99抗原类似的2同种型 E3-E4、含SWHCF的肽和/或类FAT钙粘着蛋白-FATJ、ATP结合区、核孔 蛋白153kDa、ELK3蛋白、蛋白ELK-3ETS域、ATP酶、铜转运蛋白激酶、 蛋白-酪氨酸磷酸酶、无翅型MMTV整合位点族、MYC结合蛋白2、Cullin 7、 溶解的载体族5(碘化钠同向转运体)成员5、富谷氨酸的WD重复包含物1、 MAP激酶相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶1、ATP结合区、NOV-Plexin-A1蛋 白和/或E3泛素连接酶SMURF2、酰基-CoA合成酶、雌激素磺基转移酶、 2，4-二烯酰基CoA还原酶1前体、4-烯酰基-CoA还原酶、Claudin 10同 种型b、DMBT1、细胞外连接域包含物1、淋巴管内皮细胞特异透明质酸受体 LYVE-1、Rho GTP酶活化蛋白8同种型2、带有血小板应答蛋白型1基元的 类去整联蛋白和金属蛋白酶(Reprolysin类型)、Ig重链V区域、AS12蛋白、 线粒体核糖体蛋白S9、28S核糖体蛋白S9、蛋白激酶底物MK2S4、NP220、 推定的G蛋白偶联受体、动力蛋白、轴线(Axonemal)重多肽5、N酰基磷脂酰 乙醇胺水解磷脂酶D、白三烯B4受体、G-蛋白偶联受体16、蛋白质原转变 酶(Proprotein Convertase)枯草杆菌蛋白酶/Kexin类型-1-抑制剂CMKRL1、 双特异酪氨酸磷酸化-调节激酶3、调节红细胞激酶(长的形式)、DYRK3蛋 白、Igλ链V-VII区域(Mot)-人、谷胱甘肽还原酶、线粒体前体、胶原α 1(XVI)链前体、11-β-羟基类固醇脱氢酶1、胰岛素受体底物2、Vault多 (ADP-核糖)聚合酶(VPARP)、钙/钙调蛋白-依赖3’，5’-环核苷酸、锌 指蛋白161、类H2.0同源框-1、类H2.0(果蝇)同源框-1和/或DOCK6 (dedicator of cytokinesis 6)。
更令人惊讶的是，根据本发明的方法能从上述细胞血液成分，尤其是淋巴 细胞获得一种组合物，该组合物能用于预防和治疗细胞免疫的病原改变且没有 现有技术的缺点。独特的方法步骤会产生具有有利性质的变性产品和分解产 品。通过本发明的方法和组合物能解决长久以来不能解决的紧迫紧迫问题。迄 今为止，现有技术中解决细胞免疫的病理改变问题一直没有效果。根据本发明 的教导，提出了一个解决该问题的简单方法。目前，科学技术在不同的方向中 得到了发展(参见涉及现有技术状态的简明)。因此，根据本申请的教导显示 出短期进步中的成果，消除了现有技术中对上述问题的解决中的错误思想。尤 其是通过本发明的教导获得的技术进步在下述方面十分显著：改进或提高方法 的性能及由其获得的产品、低成本、节约时间、原料、处理步骤、费用和难以 获得的原料；改善可靠性、错误消除、改善质量、提高的预防和治疗能力、以 及提供其他试剂和提供获得可用于细胞免疫病理改变的其他方法，最后，通过 根据本申请的教导，可以得到的药物的范围得到扩展。
在一个优选的实施方式中，该组合物尤其是包含全部和/或部分白细胞介 素18受体1前体、白细胞介素1类受体蛋白和粘蛋白4、瞬时受体电位阳离 子通道、外切核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、SWI/SNF相关基质涉及的肌动蛋 白依赖的染色质调节物、SWI/SNF染色质调节复合体亚基OSA1 B120、OSA1 核蛋白、MYC结合蛋白2、Cullin 7、溶解载体族5(碘化钠同向转运体)成 员5、富谷氨酸WD重复包含物1、MAP激酶相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶1、 ATP结合区、DMBT1、细胞外连接域包含物1、淋巴管内皮细胞特异透明质 酸受体LYVE-1、Rho GTP酶活化蛋白8同种型2、带有血小板反应蛋白型1 模体的类解整联蛋白和金属蛋白酶(Reprolysine类型)、AS12蛋白、线粒体 核糖体蛋白S9、28S核糖体蛋白S9、蛋白激酶底物MK2S4、NP220、推定的 G蛋白偶联受体、动力蛋白、基因丝(Axonemal)重多肽5、N酰基磷脂酰乙 醇胺水解磷脂酶D、白三烯B4受体、G-蛋白偶联受体16、蛋白质原转变酶 枯草蛋白酶/Kexin类型1抑制剂CMKRL1、双特异酪氨酸磷酸化-调节激酶 3、调节红细胞激酶(长的形式)、DYRK3蛋白、Igλ链V-VII区域(Mot) -人。
令人惊奇的是，本申请的组合物能用于预防和治疗并具有生物活性。对于 治疗来说，可以将该组合物，特别是以组合物与药学上可以接受的载体的组合 的形式，作为药剂使用，用于慢性感染、败血感染、播散性神经性皮炎、变应 性湿疹、牛皮癣和其他上述的免疫疾病。该组合物的预防指征是例如将组合物 给正在使用细胞抑制剂进行化疗或放疗的患者用药，以抑制这样的治疗引起的 免疫降低。在患者的手术前阶段，将本发明的组合物预防给药也是有意义的， 例如，输血会引起细胞不耐受，导致患者的免疫状态发生不利地改变。不言而 喻，患者的免疫状态还可能由于事故、或大或小的损伤以及随后的创伤而有害 地改变，因此不可能立即进行直接的治疗。在这种情况下，本发明的组合物还 可以以预防的方式使用，以便稳定患者的状态，从而使创伤或病理改变可以从 病因上得到治疗。
更具体地说，在不同细胞类型在生长的不同阶段中增殖和分化需要得到优 化，当CD4或CD8和IF-γ的释放增加或者T淋巴细胞的活性增加时，该组 合物可以以促进或治疗的方式使用。
另一种使用可能性是，胸腺细胞群(Th 1)的激活或细胞因子和白细胞介 素的释放。此外，它可以激活钙例子通过细胞膜的转移或改善重要代谢器官例 如肝或肾的细胞的氧化代谢。此外，可以激活免疫级联的规则抑制机制。
显而易见的是，本发明的组合物可以包含常规的助剂，优选载体、辅药和 /或赋形剂。例如，所谓载体可以是填料、稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、 溶解阻滞剂、吸收促进剂、浸润剂、吸收剂和/或润滑剂。在这种情况下，该 组合物更具体地是指药物或药剂。
在本发明另一个优选的实施方式中，本发明的药剂以凝胶、药粉、粉末、 片剂、缓释剂、预混物、乳液、液体配方、滴剂、浓缩液、颗粒、糖浆、小丸、 大丸剂、胶囊、气溶胶、喷雾剂和/或吸入剂的方式制备和/或以这些方式使用。 片剂、糖衣药片、胶囊、丸剂和颗粒剂可以具有常规的、根据需要可以含有不 透明剂的涂膜层和外皮，并可以具有如下组成，使得有效物质的释放任选以延 迟的方式仅或优选在肠道中的适宜部位进行，其中，末端聚合物和石蜡可以用 作灌封物质。
例如，本发明的药物可以以任何口服容许的剂型用于口服给药，所述的剂 型包括胶囊、片剂、含水悬浮液和溶液，但并不限定这些。在使用片剂口服给 药的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如 硬脂酸镁。对于以胶囊的形式口服给药时，适宜使用的稀释剂包括乳糖和干燥 的玉米淀粉。在含水悬浮液的口服给药时，将活性物质与乳化剂和悬浮剂组合 使用。另外，如果需要，可以添加特定的甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
活性物质也可以任选地与一种或多种上述的载体物质形成微胶囊的形式。
对于栓剂，除了活性物质以外，还可以含有常规的水溶性或水不溶性载体 物质，例如聚乙二醇、脂肪，如可可脂和高级酯(例如C14醇与C16脂肪酸 的酯)或这些物质的混合物。
对于软膏、糊剂、乳膏和凝胶，除了活性物质以外，还可以含有常规的载 体物质，例如动物和植物脂肪、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚 乙二醇、聚硅氧烷、膨润土、硅酸、滑石、氧化锌、或者这些物质的混合物。
对于粉剂和喷雾剂，除了活性物质以外，还可以含有常规的载体物质，例 如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末、或者这些物质的混合 物。此外，喷雾剂还可以含有常规的推进剂，例如含氯氟烃。
对于溶液和乳液，除了活性物质即本发明的组合物以外，还可以含有常规 的载体物质，例如溶剂、增溶剂和乳化剂，如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、 乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油特 别是棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油，甘油、甘油缩甲醛、 四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、或者这些物质的混合物。对 于不经肠胃使用，溶液和乳液还可以以无菌和血液等渗的形式存在。
对于悬浮液，除了活性物质以外，还可以含有常规的载体，例如液体稀释 剂，如水、乙醇、丙二醇；悬浮剂，例如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨 糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(Aluminium metahydroxid)、 膨润土、琼脂和黄蓍胶、或者这些物质的混合物。
药物可以是冻干无菌注射制剂的形式，例如作为无菌注射的含水或含油悬 浮液存在。该悬浮液还可以采用本领域中已知的方法，通过使用适宜的分散剂 或湿润剂(例如Tween 80)和悬浮剂进行配制。无菌注射制剂还可以是在无 毒的、非肠道容许的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1，3 -丁二醇中的溶液。可以使用的容许的载体和溶剂包括甘露糖醇、水、林格溶 液和等渗压氯化钠溶液。此外，通常使用无菌、非挥发性的油作为溶剂或悬浮 介质。为此目的，可以使用任意柔和的非挥发性的油，包括合成的一或二甘油 酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可以在注射剂的制备中使用，例如天 然的药物可容许的油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化的形式。 这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇或类似的醇作为稀释剂或分散剂。
上述的配方还可以含有着色剂、防腐剂以及气味和味道改善添加剂，例如 薄荷油和桉叶油，以及甜味剂，例如糖精。优选的是，本发明的化合物以全部 混合物的约0.01-99.9重量％，优选约0.05-99重量％的浓度存在于上述药 物配方中。
除了该组合物以外，所列出的药物制剂还可以进一步含有其它的药物活性 物质，除了所谓的进一步的药物活性物质还可以含有盐、缓冲液、维他命、糖 衍生物尤其是糖化物、酶、蔬菜提取物等。缓冲液和糖衍生物可以有利地减轻 皮下给药时的疼痛，并且，酶例如透明质酸酶能提高效果。上述药物制剂的制 备采用根据公知方法的常规途径进行，例如通过将活性物质与载体物质混合。
对于人类和动物，上述制剂可以经口、直肠、非肠道(静脉内、肌内、皮 下)、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(粉剂、软膏、滴剂)使用，用于治疗 下面所述的疾病。注射溶液、用于口服治疗的溶液和悬浮液、凝胶、浸剂、乳 液、软膏或滴剂均可以作为适宜的制剂。对于局部治疗，可以使用眼药和皮肤 的配方、银盐和其它的盐、耳部滴剂、眼膏、粉剂或溶液。对于动物，给药还 可以通过具有适宜配方的饲料或饮用水进行。此外，药剂还可以包含在其它的 载体物质例如塑料—用于局部给药的塑料链、胶原或者骨质粉中。
在本发明的另一个优选的实施方式中，本发明的组合物在药物制剂中的浓 度为0.1-99.5，优选为0.5-95，特别优选为20-80重量％。即，本发明的 组合物在上述的药物制剂例如片剂、丸剂、颗粒剂等中存在的浓度为全部混合 物的0.1-99.5重量％。有效物质量，即与载体物质结合获得单一剂量形式的 本发明组合物的量，可以由本领域技术人员根据待治疗的患者、被治疗的肿瘤 和特定的给药方式而改变。一旦患者的状况得到改善，制剂中活性化合物的比 率可以进行改变，以得到维持剂量。然后，根据症状情况，给药的剂量或频率 或两者被降低到维持改善状况的水平。一旦症状缓和达到期望的程度，治疗应 当停止。然而，如果疾病症状复发，患者可能需要长期的间歇治疗。因此，组 合物的份额，即它们在药物制剂全部混合物中的浓度，以及其组成或结合是可 以改变的，可以由本领域普通技术人员进行改变和调整。
本领域技术人员都知道，本发明的组合物可以以不同的途径与生物体，优 选人类或动物接触。另外，本领域技术人员还知道，药剂可以以不同的剂量使 用。给药应当以这样一种方式进行，即，尽可能有效地消除病患，或者通过预 防性的给药避免该疾病的发生。给药的浓度和方式可以由本领域技术人员通过 常规的试验确定。本发明组合物的优选给药方式是：对于口服给药，粉剂、片 剂、糖浆、滴剂、胶囊等；对于直肠给药，栓剂、溶液等；对于非肠道给药， 注射、输液和溶液；对于局部给药，软膏、膏药、泥罨剂、洗剂等。与本发明 的组合物接触最好是以预防或治疗的方式。
例如，所选择给药方式、剂量、给药体系、辅药的选择等的适合性可以通 过以下所述确定：从患者即人类或动物身上取出血清试样，并在治疗过程中测 试疾病指征的存在。一种替代或伴随的方法是，以常规方法确定肾、肝等的状 况以及免疫系统的T细胞或其他细胞的量，以获得对患者免疫状况的常规调 查，尤其是对代谢重要器官的状况。此外，可以观察患者的临床状况以获得期 望的效果。当获得的治疗效果不充分时，可以使用本发明的药剂对患者进行进 一步的治疗，任选使用其他公知的药物进行修饰以带来整体状况的改善。显而 易见的是，可以还可以改变药剂的载体或赋形剂或改变给药的途径。
除了口服摄入外，注射例如肌肉内、皮下或血管中注射可以认为是本发明 的组合物另一优选的治疗给药途径。同时，还可以使用通过导管或手术管进行 注入，例如通过导管直接导向特定的器官，例如肾、肝、脾、肠、肺等。
在一个优选的实施方式中，本发明的组合物可以以优选为每24小时0.05 -500mg/kg体重的总量给药，更优选为5-100mg/kg体重。其中，有利地是 使用的治疗量能预防或改善紊乱、响应或病理生理学状况的症状。
显而易见的是，剂量取决于年龄、健康状况、受药人的体重、疾病的程度、 必要的同步治疗的方式、治疗的频率和期望效果以及副作用。0.05-500mg/kg 体重的每日剂量可以作为单剂量或多剂量使用，从而获得期望的结果。通常， 该药剂被用于每日进行1-10次给药，或者，作为替代或附加的方式以连续输 液进行给剂。这样的给药可以用作慢性疾病或急症的治疗。当然，与载体物质 联用以获得单剂量形式的活性物质的量，可以根据治疗主体和给药的特定方式 而改变。优选的是，将目标剂量分成2-5次给药，其中，在每一次给药中， 例如将1-2片具有0.05-500mg/kg体重的活性物质含量的片剂给药。当然， 也可以选择更高的活性物质含量，例如最高至5000mg/kg的浓度。片剂还可以 是缓释片剂，这样，每日给药的次数减少至1-3次。缓释片剂的活性物质的 含量可以是3-3000mg。当活性物质如上所述是通过注射给药时，优选的 是，受体每日通过持续输液与本发明的组合物接触1-10次，优选每日的量为 1-4000mg。这一优选的每日总量在人类和动物药物中均是有利的。有时可能 需要偏离上述的剂量，这取决于用于治疗对象的种类和体重、疾病的类型和程 度、配方类型和药物给药的方式、以及给药的时间或间隔。因此，在某些情况 下可能优选的是，将药剂以少于上述的活性物质量与生物体接触，在另外的情 况下，上述规定的活性物质的量必须被超过。本领域普通技术人员可以容易地 确定每一个病例中需要的最佳剂量以及活性物质给药的类型。
在本发明另一个特别优选的实施方式中，一次给药中使用1-100，特别 是2-50mg/kg体重的该药剂。与每日的总量同样(参见上文)，每次使用的一 次给药剂量也可以由本领域的技术人员根据其专业知识加以改变。类似地，根 据本发明使用的组合物可以以上述单一的浓度和配方与饲料或饲料配方或饮 用水一起用于兽医。一次剂量优选包含在一次给药中给药的活性物质的量以及 通常对应于1天、半天的剂量或1/3天、1/4天的剂量的活性物质的量。因此， 剂量单元可以优选含有1、2、3或4或更多的一次剂量或0.5、0.3或0.25个 一次剂量。优选的是，本发明的组合物的每日剂量分为2-10次给药，更优选 为2-7次，特别优选为3-5次。当然，将本发明的药剂连续输液也是可以的。
在本发明的一个特别优选的实施方式中，在本发明组合物的每一次口服给 药时，使用1-2个片剂。根据本发明的片剂可以具有本领域技术人员公知的 包衣层和外壳层，或者可以按如下方式组成，即，使得仅在受体的优选的特定 部位释放活性物质。
在本发明的另一个实施方式中优选的是，组合物的单独成分可以彼此联用 或者与载体联用，包藏在脂质体中，在本发明的意义上，包藏在脂质体中并不 是指组合物必须存在于脂质体中。在本发明的意义上，包藏是指组合物与脂质 体的膜联用，例如将组合物固定在膜的外部。本发明的组合物在脂质体中或在 其上的这种描述，当技术人员选择具有免疫刺激效果的脂质体时是有利的。对 于本领域技术人员来说，由DE 19851282可以获知改变脂质体的免疫刺激效果 的各种方法。脂质体可以是简单的脂质体例如酯和酰胺，或者是复合的脂质体 例如糖脂类(如脑苷脂或神经节苷脂)、鞘脂类或者磷脂。
本发明还涉及制备组合物的方法，该组合物用于上述预防和治疗指征以及 用于与治疗相关的生物效率的改善，尤其是细胞免疫系统。
本发明的方法包括，收集基本没有免疫耐受问题的血液、血浆或血清成分 并将其均匀化。例如，均匀化可以采用机械方法进行和/或通过冷冻-融化循 环或者采用本领域技术人员公知的其它匀化方法进行。此外，优选的是，首先 将用于制备组合物的起始组分或组合物本身冻结，然后例如使用切片机进行切 割。
在本发明的意义上，匀化包括所有能引发或促进细胞溶解的方法。通过匀 化，能在所有的范围内混合自身不能混合或仅能少量混合的系统组分，从而使 所得到的物质基本上不依赖于成分的数目，呈现出少量的相、尤其是单一相。 匀化能降低分散相的粒度，将颗粒聚集体解体并能提供具有提高的沉积稳定性 的分散。匀化可以使用动态装置实现，也可以使用静态装置实现，即在没有移 动部件的搅拌器中进行。优选的原料是血液细胞，特别是白细胞。例如，血液 细胞可以以血沉棕黄色层糖剂(Buffy-Coat-Konserve)的形式制备，其富含血 小板和红血球，制备这样糖剂的标准方法是本领域的技术人员公知的。显而易 见的是，匀化试样还可以以白血球浓缩物的形式获得。
此外优选的是，首先，以血沉棕黄色层糖剂的形式制备原料，例如红和/ 或白血液细胞，通过冷冻-融化循环将生物活性成分匀化。即，单独的方法步 骤的准确顺序在本发明中是可改变的。通过渗析、离心和/或过滤，基本上能 将大于10000Da的所有成分从通过冷冻融化循环或其它匀化方法获得的产物 中移除。特别优选的是，所有移除的成分大于3000Da。尤其是这些组合物具 有上述优越性质。
优选的是，将上述渗析、离心或过滤的产物浓缩。在本发明的一个优选实 施方式中，首先将细胞血液成分例如白血球均匀化，然后渗析。在此之后进行 冻干。接着，优选的是制备溶液，首先将其预过滤，然后进行超滤，接着再无 菌过滤。
所得滤液可以在例如水浴中进行巴氏消毒。在该过程后，经过巴氏消毒的 物质进行灭菌并再冻干。显而易见的是，还可以使用其它的无菌化方法，例如 采用高能辐射，如UV辐射或X-射线进行处理。上述每一个单独的步骤均可 以在质量控制下完成。例如，可以从试样中取出等分试样并测试等分试样中存 在的微生物、病毒或其它不期望的成分。
血液细胞浓缩物，尤其是白血球浓缩物优选通过冷冻/融化循环、细胞的 超声波处理或者这两种方法的组合来制备。
尤其是通过冷冻/融化循环可以从上述血液细胞成分的蛋白质和肽获得稳 定且可再生产的片段。本发明的组合物表现为来自血液细胞，尤其是白血球细 胞的冻干、无菌、过滤和渗析的匀浆，其经过了多次冷冻/融化循环和在约100 ℃的温度下的无菌化。冷冻/融化循环可以以如下方式设计：例如使用切片机 切割冷冻的材料，然后融化并任选再冷冻。优选的是，冷冻/融化循环是冷冻 —切割—融化循环。该方法的条件这样来选择，即使得仅有肽和蛋白质的稳定 碎片存在于所得组合物中。
匀化产物的渗析这样来进行，即，低分子量的胶体微粒或大分子通过扩散 从匀化产物经由半透性膜迁移到不间断的纯溶剂中，从而留住大的分子。渗析 的速率可以通过提高温度或在例如电渗析中设定电压而提高。显而易见的是， 渗析还可以使用渗析柱进行，从而移除分子量大于10kDa的分子。
冻干尤其是可以用于渗析物的浓缩。本发明意义上的冻干的含义如下：通 过将溶剂冻出，使其在冷冻状态下通过升华蒸发而将深冷的材料在高真空中干 燥。本发明意义上的冷冻干燥，还可以以脱水的方式尤其是在使用溶液的情况 下进行，优选在添加溶液例如血清、牛奶、碳水化合物、氨基酸、酶、缓冲液、 盐和/或维他命的情况下进行。为了将冻干的材料重新溶解而使用，可以将其 溶解在蒸馏水或其它的溶剂中。
在制备出该溶液后，测定该物质的紫外光谱，尤其是在200nm～400nm的 范围内。如果该物质没有不期望的成分或这些成分很少，优选通过例如微孔膜 进行预过滤。在该过程中，将固体微粒从液体中分离出去。此时，使用多孔介 质，例如具有预过滤器AP15的微孔薄膜RA(1,2/im)，流过液体的连续相， 其中，分散相同时保留在多孔介质的表面或在其内部。
具有极限值10kDa的材料可以使用超滤移除。优选的是，可以通过进一 步的过滤步骤，例如使用无菌过滤器微孔GS(0.22μm)使所得材料无菌，例 如，可以使用膜微过滤器或反渗透进行超滤。对于超滤，大多使用对称结构的 多孔膜，其由多种有机和无机材料制成，例如管、毛细管、中空纤维和平膜形 式的聚砜或陶瓷。
优选的是，所得到的无菌材料通过高温去活而巴氏法灭菌。例如，巴氏灭 菌可以在水浴中、60℃的温度下进行数小时。显而易见的是，巴氏法灭菌可以 在低于100℃的任意温度下进行，在特定的情况下，也可以在100℃以上进行 任意的时间。即，超过100℃的灭菌也是本发明意义上的巴氏法灭菌。
优选的是，这样的在超过100℃下灭菌或巴氏法灭菌能获得可再生的、稳 定的、能良好使用的变性产品和分离产品，其没有现有技术组合物的缺陷。尤 其是当细胞原料是人类白血球时。更令人惊讶的是，上述令人吃惊的优点可以 通过组合如下特征获得：(i)将人类白血球作为原料，(ii)使用本发明的方法 进行处理，和/或(iii)在超过100℃下巴氏法灭菌。特别优选的是，原料无需 进行木瓜蛋白酶水解或醇改性。此外，有利的是，没有在例如离子交换色谱或 纸电泳中遇到的激烈的清洁步骤，这是因为，它们会导致其它在治疗中基本无 法使用的产品。此外，有利的是不存在红血球细胞。令人吃惊的是，对该方法 少量的修改，例如使用有机溶剂进行初始改性，将获得完全不同的方法产物， 其不能用于解决本发明的问题。只有在某些特定情况中，非人类的白血球能用 于实现本发明目的。此外，有利的是将大于3000Da的所有成分移除。
本发明还涉及本发明的组合物和/或药剂在治疗与细胞免疫缺陷、例如根 据ICDI0代码：D.84.4的缺陷相关的疾病中的用途。这些疾病可以是败血病、 炎症反应和发烧、自身免疫性疾病和与细胞分裂紊乱相关的疾病，例如癌症。
本发明意义上的炎症，是由结缔组织和血管产生的、生物体对外部或内部引 起的炎症刺激产生的反应，其目的是消除或失活该炎症刺激并修复由于刺激导致的 组织损坏。引发是由于机械刺激(异物、压力、损伤)和其它的物理因素(离子束、 UV光、热、冷)、化学物质(碱、酸、重金属、细菌毒素、过敏原和免疫络合物) 以及病原体(微生物、寄生虫、昆虫)或致病的新陈代谢产物、变态酶、恶性肿瘤 等产生的。该过程开始于带有循环机能不全和组织变质的短暂的小动脉变窄(由于 Adrenalin作用)，接着显现出典型的局部炎症(主要症状；根据GALEN和 CELSUS)，即，变红(＝发红；由于组胺引起的血管扩张)，发热(＝灼热；由于 局部新陈代谢增强引起)，肿块(＝肿瘤；由于富蛋白的液体-还通过组胺-从改 变的血管壁流出引起，由于血停滞前至血停滞中的延缓的血液循环而被促进)，疼 痛(＝痛；由于增加的组织张力和引发疼痛的炎症产物引起，例如缓激肽)和功能 障碍(＝Functio laesa)。该过程伴随有：电解质代谢(矿物质的传输)的紊乱、嗜 中性粒细胞和单细胞通过血管壁的迁移(白细胞趋向性)，其目的是，消除炎症的 刺激和受到损害乃至坏死的神经细胞(吞噬作用)；此外，还迁移入淋巴作用细胞， 从而形成对于炎症刺激的特定的抗体(免疫反应)以及嗜酸性粒细胞(在治疗阶段 或者—在非常早期阶段—在过敏性反应性过程中产生)。由于在反应中发生的补充 体系的活化，使得这些体系产生碎片(C3a和C5a)，其—例如组胺和缓激肽—作 为炎症的传递质起作用，即，在刺激下会产生所述血液细胞的趋化性；此外还激活 血液的凝结。接着，发生相关器官软组织的损坏(营养不良和凝集坏死)。取决于 炎症的强度和种类，整个的生物体发生反应，例如发热、应激反应(还表现为适应 综合症)、白细胞增多和在血浆蛋白质的组成的改变(急性阶段反应)，导致加速的 血细胞沉降反应。优选本发明中的炎症是化脓的、渗出性、纤维化、坏疽性、 颗粒化、出血的、粘膜性、坏死性、增殖的或多产性、假膜的、血清的、特异 的和/或溃疡性的炎症。
本发明意义上的自身免疫性疾病，是完全地或部分地归因于自身抗体形成 以及其对整个生物体或器官体系的有害影响，即自身侵入的疾病。一种分类是分 为器官特异的、媒介的和/或系统性的自身免疫性疾病。优选的器官特异自身免疫 性疾病是HASHIMOTO甲状腺炎、原发粘液水肿、甲状腺中毒(BASEDOW疾病)、 恶性贫血、ADDISON疾病、重症肌无力和/或少年糖尿病。优选媒介自身免疫性疾 病是GOODPASTURE综合症、自身免疫溶血性贫血、自身免疫白细胞减少、自发 性血小板减少症、寻常天疱疮、交感神经眼炎、原发肝硬化、自身免疫性肝炎、结 肠慢性溃疡和/或SJGREN综合症。优选的系统性自身免疫性疾病是类风湿性关节 炎、风湿性发热、系统性红斑狼疮、皮肤肌炎/多肌炎、渐进性系统性硬化、 WEGENER颗粒化、全身动脉炎和/或过敏性脉管炎。典型的自身免疫性疾病是甲 状腺中毒、甲状腺引发的的粘液水肿、HASHIMOTO甲状腺炎、全身性内分泌疾 病、恶性贫血、A型慢性胃炎、血液的单独性或总体性微粒元素疾病(例如自身免 疫性溶血作用贫血、自发性血小板减少或原发性疾病；自发性白血球减少或粒细胞 缺乏症)、寻常天疱疮和类天疱疮、交感神经眼炎和多种葡萄膜炎、原发肝硬化和 慢性侵入自身免疫性疾病、I型糖尿病、CROHN疾病和结肠慢性溃疡炎、SJGREN 综合症、ADDISON疾病、播散性红斑狼疮和作为这些疾病的Diskoide形式，作为 皮肤肌炎、皮肤硬化、类风湿关节炎(＝原发慢性多关节炎)、抗肾小球基膜-肾 炎。基础的是侵入的免疫反应，其包括由于抑制细胞导致的相对于自身终点的免疫 耐受性崩溃，且T-抑制细胞(具有淋巴细胞标记T8)的活性降低或T-协助细胞 (具有淋巴细胞标记T4)过多；此外，还可以形成自身抗体基因，例如通过与具 有半抗原(例如药物)的活性蛋白质联用，通过组织的个体发育，其首先对自身耐 受性产生影响，并用于与例如注射的病毒或细菌相关的蛋白质成分中暴露的蛋白质 的改变；此外，还与新蛋白质中存在的肿瘤相关。
本发明意义上的败血病，是由于来自疾病病灶的病原细菌和/或它们的毒 素连续或间歇的入侵和它们在淋巴血液路线上扩散而形成整体或局部的感染。
本发明意义上的败血病，优选是创伤败血病(蜂窝织炎、血栓静脉炎、淋 巴管炎)、分娩败血病(在分娩发烧中)、耳因性败血病(在耳炎介质中)、扁 桃体败血病(在咽痛、扁桃体周炎中)、胆管败血病(在含脓胆囊炎、胆管炎 中)、门静脉败血病(在门静脉炎中)、脐带败血病(在脐炎等中)、菌尿症以 及牙齿肉芽瘤。本发明意义上的败血病可以是急性或高度急性(爆发的)、亚 急性(例如心内膜炎)或慢性的，显而易见的是，还可以是新生儿败血病。
因此，本发明意义上的败血病是患者的所有病理改变，其可以涉及间歇性 的发烧和寒冷，具有脾肿瘤、毒性反应或骨髓或血液的损害(多核白血球增多、 贫血症、溶血、血小板减少)或在心脏和血管收缩神经中(心动过速、血液循 环的集中化、水肿、少尿症；可能地休克)或在消化道(干燥、舌苔脱落、腹 泻)具有病理反应或具有毒血症(具有败血梗塞形成和转移脓肿形式的毒血 症)。
在本发明的意义上，优选的与细胞免疫系统缺陷相关的疾病还包括：
AIDS、AKne、蛋白尿(Proteinurie)、Alcoholentzugs综合症、Allergien、 秃头症(头发脱落)、ALS(肌萎缩性脊髓侧索硬化症)、Alzheimer疾病、AMD (年龄相关性黄斑变性)、贫血症、抑郁症、炭疽(Milzbrand)、大动脉硬化、 下肢动脉闭塞疾病、动脉硬化、动脉闭塞、Arteriitis temporalis、动脉硬化、动 静脉瘘管、关节炎、关节病、气喘、呼吸不足、自身免疫性疾病、心室照影区、 酸中毒、腰椎间盘突出、腹膜的炎症、胰腺癌、Becker肌肉营养不良、良性增 生(BPH)、膀胱肉瘤、血友病、支气管肉瘤、乳腺癌、BSE、布特-希阿里氏 病、Bulimia nervosa、膑前水囊瘤、Byler综合症、Bypass、衣原体感染、慢性 疼痛、硬化、脑震荡(Gehirnerschutterung)、Creutzfeld-Jakob-疾病、肠肉 瘤、肠癌、肠结核、抑郁、尿崩症、轻度糖尿病、青少年糖尿病、糖尿病性视 网膜病变、Duchenne肌肉营养不良、十二指肠肉瘤、营养不良、Dystrophia musculorum progressiva、营养不良、埃博拉病毒、湿疹、阳痿、肥胖、纤维症、 子宫颈癌、子宫癌、脑出血、脑炎、头发脱落、偏瘫、溶血性贫血、血友病、 尿间断、宠物敏感(动物毛发敏感)、皮肤癌、疱疹带状疹子、心脏梗塞、心 博不足、心瓣炎、脑新陈代谢、脑中风、脑癌、睾丸癌、局部缺血、Kahler- 疾病(浆细胞瘤)、脊髓灰质炎(小儿麻痹症)、骨质疏松、结肠肉瘤、接触湿 疹、瘫痪、肝硬化、白血病、肺纤维化、肺癌、肺浮肿、淋巴腺癌(Morbus Hodgkin)、淋巴肉芽肿病、淋巴瘤、狂犬病、胃肉瘤、癌性乳腺炎、脑膜炎、 恶性炭疽、黏稠液病(囊肿性纤维化)、多硬化(MS)、心肌梗塞、Neurodermitis、 纤维神经瘤、神经肿瘤、肾癌(肾细胞肉瘤)、骨质疏松、胰腺肉瘤、肺炎、 多发性关节炎、神经病、力量紊乱、进行性系统性硬皮病(PSS)、前列腺癌。 荨麻疹、Querschnitts综合症、外伤性、直肠肉瘤、胸膜炎、颅脑外伤、阴道 肉瘤、窦炎、食道癌、颤抖、肺结核、癌症疼痛、烧烫伤、上瘾、病毒性脑膜 炎、更年期、软组织肉瘤、软组织肿瘤、脑血液循环紊乱和/或ZNS肿瘤。
在一个优选实施方式中，被治疗或预防的肿瘤疾病或癌症选自：耳-鼻-喉范围 的癌症疾病或肿瘤疾病，肺、纵隔、胃肠道、泌尿生殖系统、妇科系统、乳房、内分 泌系统、皮肤、骨骼的肿瘤疾病，软组织肉瘤、间皮瘤、黑瘤、中枢神经系统的螯生 物，在婴儿期中的肿瘤疾病或癌症，淋巴瘤，白血病，癌旁的综合症、无基本癌症的 转移瘤(CUP-综合症)、腹膜乳房癌素、恶性免疫缺陷和/或癌转移瘤。
更具体地说，肿瘤可以包括下述类型的癌：乳腺癌、前列腺癌和结肠癌；各种形 式的在支气管中开始的肺癌；骨髓癌、黑瘤、肝细胞瘤、神经母细胞瘤；乳头状瘤； 胺前体摄取脱羧细胞瘤、迷芽瘤、鰓原瘤；恶性癌症-并发症；癌症-心脏疾病、癌 (例如沃克癌、基础细胞-癌、嗜硷扁平细胞癌、Brown-Pearce癌、导管癌、埃尔 利希癌、原位癌、癌-2癌、美克耳细胞癌、粘液性癌、非-小细胞支气管癌、oat -细胞癌、乳头状癌、硬癌、细支气管-小泡癌、小支气管癌、鳞状上皮细胞癌和过 渡型细胞癌)；组织细胞功能性紊乱；白血病(例如涉及B-细胞白血病、总细胞白 血病、中性细胞白血病、T-细胞白血病、慢性T-细胞白血病、HTLV-II-联合白 血病、急性淋巴囊肿白血病、慢性淋巴囊肿白血病、肥大细胞白血病和脊髓白血病)； 恶性组织细胞增殖、霍奇金癌症、非霍奇金淋巴瘤、单独血浆细胞癌；网状内皮细胞 组织增殖、成软骨细胞瘤；软骨瘤、软骨肉瘤；纤维瘤、纤维肉瘤；大细胞癌；组织 细胞增殖；脂肪瘤、脂肪肉瘤；白血病性肉瘤；间皮瘤；粘液瘤；粘液肉瘤；骨瘤； 骨皮瘤；尤因皮瘤；滑膜瘤；腺纤维瘤；腺淋巴瘤；癌肉瘤；脊索瘤、颅咽管瘤、无 性细胞瘤、错构瘤、间质瘤；中肾瘤；肌肉瘤、成釉细胞瘤、牙骨质瘤；牙瘤； 畸胎瘤；胸腺瘤、成绒(毛)膜细胞瘤；腺肌肉瘤、腺瘤；胆管瘤；珠光瘤；圆 柱瘤；半胱胺加氧酶瘤、囊腺瘤；粒层细胞癌；两性胚细胞瘤；汗腺腺瘤；岛 状细胞瘤；Leydig细胞癌；乳突淋瘤；塞尔托利细胞癌、囊细胞癌、平滑肌瘤； 平滑肌肉瘤；成肌细胞瘤；肌瘤；肌肉瘤；横纹肌瘤；横纹肌肉瘤；室管瘤； 神经节细胞瘤、神经胶质瘤；成神经管细胞瘤、脑(脊)膜瘤；神经鞘瘤；成神 经细胞瘤；神经上皮瘤、纤维神经瘤、神经瘤、副神经节瘤、非嗜铬副神经节 瘤、血管角质瘤、嗜酸性的成血管淋巴增殖；硬化型血管瘤；血管肉瘤；血管 球瘤；血管内皮瘤；血管瘤；血管外皮细胞瘤、血管肉瘤；淋巴管瘤、淋巴管 瘤、淋巴管肉瘤；松果体瘤；叶状膀胱肉瘤；血管肉瘤；淋巴管肉瘤；多发性 黏液瘤、卵巢瘤；肉瘤(例如尤因肉瘤、实验、卡波济氏肉瘤和肥大细胞肉瘤)； 瘤(例如骨状瘤、胸腔瘤、消化系统瘤、结肠直肠瘤、肝瘤、胰腺瘤、脑垂体 瘤、睾丸瘤、眼眶瘤、头部和颈部肿瘤、中央神经系统肿瘤、耳部肿瘤、骨盆肿瘤、 呼吸道肿瘤和泌尿生殖器肿瘤)；多发性神经纤维瘤和颈部平上皮结构不良。
在另一个优选的实施方式中，被治疗和避免的肿瘤疾病或癌症选自下列范围的癌 症或肿瘤：耳-鼻-喉；肺；纵隔；胃肠道；泌尿生殖系统；妇科系统；乳房；内分 泌系统；皮肤；骨骼和软组织；间皮瘤；中枢神经系统的肿瘤；幼年癌症或肿瘤疾病； 淋巴组织瘤；白血病；paraneoplastischen综合症；无已知原生肿瘤的转移瘤(CUP- 综合症)、peritoneale致癌性转移瘤、免疫抑制相关的恶性肿瘤和/或转移瘤。
对于肿瘤而言，特别是涉及下列癌症：乳腺癌；前列腺癌和结肠癌；各种 形式的肺癌；支气管癌；骨髓癌；黑素瘤；肝细胞癌；神经节神经胶质瘤；乳 头状瘤；Apudom；迷芽瘤；鰓原瘤；恶性癌症综合症；癌症-心脏疾病、癌(例 如沃克癌、基础细胞-癌、嗜硷扁平细胞癌、Brown-Pearce癌、导管癌、埃尔利希 癌、原位癌、癌-2癌、美克耳细胞癌、粘液性癌、非-小细胞支气管癌、Hafer细胞 癌、乳头状癌、硬癌、细支气管-小泡癌、小支气管癌、鳞状上皮细胞癌和过渡型细 胞癌)；组织细胞功能性紊乱；白血病(例如涉及B-细胞白血病、总细胞白血病、 中性细胞白血病、T-细胞白血病、慢性T-细胞白血病、HTLV-II-联合白血病、 急性淋巴囊肿白血病、慢性淋巴囊肿白血病、肥大细胞白血病和脊髓白血病)；恶性 组织细胞增殖、霍奇金癌症、非霍奇金淋巴瘤、单独血浆细胞癌；网状内皮细胞组织 增殖、成软骨细胞瘤；软骨瘤、软骨肉瘤；纤维瘤、纤维肉瘤；大细胞瘤；组织细胞 增殖；脂肪瘤、脂肉瘤；白血病性肉瘤；间皮瘤；粘液瘤；粘液肉瘤；骨瘤；骨皮瘤； 尤因皮瘤；滑膜瘤；腺纤维瘤；腺淋巴瘤；癌肉瘤；脊索瘤、颅咽管瘤、无性细胞瘤、 错构瘤、间质瘤；中肾瘤；肌肉瘤、成釉细胞瘤、牙骨质瘤；牙瘤；畸胎瘤；胸 腺瘤、成绒(毛)膜细胞瘤；腺肌肉瘤、腺瘤；胆管瘤；珠光瘤；圆柱瘤；半胱 胺加氧酶瘤、囊腺瘤；粒层细胞癌；两性胚细胞瘤；汗腺腺瘤；岛状细胞瘤； 莱迪希氏细胞癌；乳突淋瘤；塞尔托利细胞癌、囊细胞癌、平滑肌瘤；平滑肌 肉瘤；成肌细胞瘤；肌瘤；肌肉瘤；横纹肌瘤；横纹肌肉瘤；室管瘤；神经节 细胞瘤、神经胶质瘤；成神经管细胞瘤、脑(脊)膜瘤；神经鞘瘤；成神经细胞 瘤；神经上皮瘤、纤维神经瘤、神经瘤、副神经节瘤、非嗜铬副神经节瘤、血 管角质瘤、嗜酸性的成血管淋巴增殖；硬化型血管瘤；血管肉瘤；血管球瘤； 血管内皮瘤；血管瘤；血管外皮细胞瘤、血管肉瘤；淋巴管瘤、淋巴管瘤、淋 巴管肉瘤；松果体瘤；叶状膀胱肉瘤；血管肉瘤；淋巴管肉瘤；多发性黏液瘤、 卵巢瘤；肉瘤(例如尤因肉瘤、实验、卡波济氏肉瘤和肥大细胞肉瘤)；瘤(例 如骨状瘤、胸腔瘤、消化系统瘤、结肠直肠瘤、肝瘤、胰腺瘤、脑垂体瘤、睾 丸瘤、眼眶瘤、头部和颈部肿瘤、中枢神经系统肿瘤、耳部肿瘤、骨盆肿瘤、 呼吸道肿瘤和泌尿生殖器肿瘤)；多发性神经纤维瘤和颈部平上皮结构不良。
在另一个优选的实施方式中，被治疗或防止的癌症或肿瘤选自下组：耳- 鼻-喉范围的肿瘤，包括鼻内、鼻窦、鼻咽、唇、口腔、口咽、喉、咽下部、 耳、唾液腺、副神经结瘤；肺肿瘤，包括非小细胞支气管癌、小细胞支气管癌； 纵隔的肿瘤；胃肠道的肿瘤，包括食管、胃、胰、肝、胆囊和胆道、小肠、结 肠和直肠癌、肛门癌；泌尿生殖器癌，包括肾癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺 癌、尿道癌、阴茎和睾丸癌；妇科癌症，包括子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、子 宫癌、恶性滋养层疾病、卵巢癌、输卵管癌(Tuba Faloppii)；腹腔癌；乳房癌； 内分泌器官癌，包括甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺皮质癌，内分泌胰腺癌、 致癌性肿瘤和致癌性并发症、多内分泌瘤；骨肉瘤和软组织肉瘤；间皮瘤；皮 肤癌、黑素瘤，包括皮肤和皮内黑素瘤；中枢神经系统癌；婴儿期的癌症，包 括成视网膜细胞瘤、Wilms癌、神经纤维瘤、成神经细胞瘤、尤因肉瘤癌症族、 横纹肌肉瘤；淋巴瘤，包括非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、中枢神经系统 的原发淋巴瘤、霍奇金疾病；白血病，包括急性白血病、慢性白血病和淋巴组织 白血病，血浆细胞瘤、骨髓塑料化综合症、瘤形成综合症、无已知原发肿瘤的 转移瘤(CUP-综合症)、peritoneale致癌性转移瘤、免疫性缺陷相关的恶性肿 瘤，包括AIDS相关的恶性肿瘤，如Kaposi肉瘤、与AIDS联发的淋巴瘤、与 AIDS联发的中枢神经系统淋巴瘤、与AIDS联发的霍奇金疾病和与AIDS联发 的肛门和生殖器癌、移植相关的恶性肿瘤、转移瘤性癌，包括脑部转移瘤、肺 部转移瘤、肝部转移瘤、骨转移瘤、胸膜和心包转移瘤以及恶性腹水。
在另一个优选的实施方式中，被治疗和防止的肿瘤疾病或癌症选自：癌性 乳腺炎；胃肠癌，包括结肠癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、小肠癌；卵巢癌；子 宫颈癌；肺癌；前列腺癌；肾细胞癌和/或肝转移瘤。
本发明还涉及本发明的组合物在用于预防和/或治疗具有致病性改变和/或 细胞免疫性缺陷，尤其是与细胞抑制剂治疗、化疗和/或放疗相关的癌症、败 血病、过敏反应的人、动物和/或患者，以及/或者在与涉及核、生物、化学和/ 或辐射物质和/或材料相关的患者的治疗的过程中的用途，
本发明还涉及试剂盒及其在药物中的用途。优选的是，将本发明的组合物 或含有其的试剂盒用于联合治疗，尤其是用于治疗肿瘤。其中特别优选的是，所述的 联合治疗包括化学治疗、细胞抑制治疗和/或放射治疗。在本发明的一个特别优选的实 施方式中，联合治疗是辅助的生物特异性治疗方式。更特别优选的是，治疗方式为免 疫治疗。还特别优选的是，联合治疗包括基因治疗和/或使用本发明组合物的治疗。对 于本领域技术人员来说，各种不同的联合治疗，特别是用于肿瘤的联合治疗是公知的。 例如，优选的是，在联合治疗中进行细胞抑制治疗或例如在确定的肿瘤区域照射放射 线，其中，这些治疗可以与基因治疗结合，其中使用本发明的组合物作为抗肿瘤剂。 因此，可以特别优选的是，将本发明的组合物用于提高肿瘤细胞对细胞抑制和/或放射 线的敏感性。另外，优选的是，将本发明的组合物用于抑制细胞的活性、增殖和/或用 于引发程序性细胞死亡和细胞周期停滞。
以下，通过实施例对本发明进一步阐述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例
采用本发明的方法得到本发明的组合物的一般性说明。
白血球匀浆的制备
↓
渗析
↓
在过程中冻干
↓
合并单独的溶液形成本体溶液
↓
所得溶液的过程中控制
↓
预过滤
↓
超滤
↓
无菌过滤
↓
在水浴中巴氏灭菌
↓
杀菌
↓
(灌装
↓
冻干
↓
质量控制
↓
贴标签并封装
↓
最终控制)
方法描述
1.包含细胞血液成分，例如白血球或红血球的浓缩物的制备
首先，制备所选细胞的匀浆，例如通过将细胞重复冷冻-融化循环或超声 波处理，或者通过这两种方法的组合。然后，汇集单独的体积部分。
2.匀化物的渗析
在柱或膜渗析的方式下进行渗析，其中，移除所有大于10kDa的颗粒。
3.中间冻干
通过冻干浓缩渗析产物，所述冻干采用常规的标准方法进行。
4.本发明组合物临时溶液的制备
用2ml蒸馏水装满冻干产物。
5.中间控制
通过在260～280nm的光谱范围内的吸收测量进行中间控制。
6.预过滤
通过带有AP 15预过滤器的微孔膜RA(1.2μm)进行过滤。
7.超滤
通过在具有排除极限10kDa的微孔盒式体系中的PTGC膜进行超滤。
8.通过过滤无菌化
使用微孔GS过滤器(0.22μm)通过过滤进行无菌化。
9.加热灭活
在水浴中、60℃的温度下，在单容器中对根据本发明的溶液进行巴氏灭菌 10小时。
10.等分试样
在无菌条件下，将液体组合物自动等分试样(由2升全部溶液倒入5ml 小瓶中)。
11.冻干
使用标准方法进行冻干。在氮气氛围中和冷却条件下填充单个的等分试 样。
在不同的动物体系中，在体内试验本发明的组合物。通过在豚鼠T淋巴 细胞上的花结试验，观察在本发明组合物与氧代铂、开普拓(Campto)、泰素 (Taxol)和奥沙利铂(Eloxatin)联用的影响下细胞免疫力的状态。在每一个测试 中，将本发明的组合物给药后，测试免疫抑制的豚鼠的T淋巴细胞状态。在 试验前，采用花结试验确定豚鼠中的T淋巴细胞量，然后，确定由免疫抑制 剂咪唑硫嘌呤引起的T淋巴细胞量的减少。在咪唑硫嘌呤给药7天后，进行T 淋巴细胞的第二次测定。接着，将本发明组合物给试验动物皮下用药。在将本 发明组合物给药14-19天后，最后测定的豚鼠T淋巴细胞数。
在这些体内试验中发现，氧代铂给药后花结(Rosetten)的产生降低约30 ％。在本发明的组合物给药后，花结形成的平均增加为：单剂量氧代铂给药时 是27％，动物事先用2倍量的氧代铂治疗情况下是23％。
在使用开普拓(Campto)和该组合物的试验中，发现在开普拓给药后花 结的产生降低23％，在所述组合物给药后增加26％。
当使用泰素(Taxol)和该组合物时，花结的产生下降16％，在本发明的组 合物给药后增加23％。
在奥沙利铂(Eloxatin)给药后，花结的形成降低22％，在本发明的组合 物给药后增加29％。
此外，为了进一步验证本发明组合物的效果，对人类进行临床研究。
使用该组合物对五位患有硬化病(PSS)的女性患者进行了治疗。检测莲 座细胞的正常化。除了细胞免疫力正常外，还检测到肢体末端的循环也得到改 善。该组合物在莲座细胞水平的正常化中的临床效果获得了38％-64％的提 高。
此外，对于患有寻常牛皮癣和衍生自牛皮癣的关节炎形式的人类患者试验 本发明的组合物。以一周的间隔将该组合物向患者给药3个剂量，每一次单独 的剂量在2ml中包含4mg组合物。在开始治疗6个月后，发现在8位患者中 有3位的上述两种疾病的症状完全消失。在其它的五例中，观察到临床影象得 到显著改善。全部情况的免疫改善与全部相关临床数据的改善有关。患者中莲 座细胞的平均水平在开始治疗前为33％，在治疗结束时提高至67％。
在另一个临床试验中，将本发明的组合物用于被诊断为患有系统性红斑狼 疮(SLE)的女性患者。在这些患者中确认疾病的形成得到改善。此外，一些 患者感染了白念珠菌(Candida-Erregern)。类似地，在这些患者中确认临床总 体状况得到改善，使得可以开始进行常规的治疗。
此外，对35个诊断患有葡萄膜炎(anteriore Unveitis)的患者进行观察。 治疗周期为35-85个月，治疗的成功性通过在145-195个月的周期内反复观 察。可以阐述的是上述长期的给药在90％的患者中能防止葡萄膜炎的复发。 在诊断疾病复发的患者中，疾病以非常温和的形式出现。约5％的患者无法回 应治疗。
使用本发明的组合物对不同的癌症细胞线进行了试验，其中研究了测试单 独稀释液步骤，开始为500μg/ml。在30μg/ml确定有最佳效果。 细胞系 抑制％ Colo205 结肠 10.9 BT20 胸腔 0 PC3 前列腺 -7.4 SK-MTC 甲状腺 16.6 J82 膀胱 8.7 WI38 纤维原细胞 14.5 A431 肉瘤 13.3 HT29 结肠 9.4 PANC1 胰腺 17.0 MIAPaCa2 胰腺 34.9 LNCaP 前列腺 30.8
本发明的组合物对于大部分细胞系，特别是MIAPaCa-2胰腺癌细胞和 LNCaP激素敏感性前列腺癌细胞系具有抗增殖效果。