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1、10申请公布号CN104193710A43申请公布日20141210CN104193710A21申请号201410445647522申请日20140904C07D311/30200601C07D311/40200601A61K31/352200601A61P35/0220060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称橙黄酮的制备方法及其在抗白血病药物中的应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及橙黄酮的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。制备方法包括以下步骤（1）取香藜的地上。
2、部分，用饱和1氨水浸泡26H，晾干，加入闪式提取器中，以8595乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；（2）将提取液浓缩，经氧化铝柱层析；（3）制备型液相色谱分离得到橙黄酮。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度橙黄酮的生产。橙黄酮具有抗肿瘤作用，药理实验表明橙黄酮在抗肿瘤方面有很好的效果，尤其是对人淋巴细胞白血病P388效果更佳，可用于制备抗白血病药物。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104193710ACN104193710A1/1页21橙黄酮的制备方法，其特征。
3、在于包括以下步骤（1）取香藜的地上部分，用1氨水浸泡26H，晾干，加入闪式提取器中，以8595乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；（2）上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩；（3）将上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集橙黄酮组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得产品。2根据权利要求1所述的橙黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中闪式提取电压为120160V，提取时间为90S120S。3根据权利要求1所述的橙黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中氧化铝为80100目，氯仿丙酮体积比为12，。
4、用量为柱体积的57倍。4根据权利要求1所述的橙黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤（3）中制备型液相色谱的流动相为乙腈015乙二胺水溶液，体积比为4159，紫外检测波长为254NM。5根据权利要求14所述方法制备的橙黄酮，在制备抗白血病药物中的应用。6根据权利要求5所述在制备抗白血病药物中的应用，其特征在于在制备防治淋巴性白血病和髓细胞白血病的应用。权利要求书CN104193710A1/4页3橙黄酮的制备方法及其在抗白血病药物中的应用技术领域0001本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及橙黄酮的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。背景技术0002橙黄酮（ARIDANIN）是从藜科C。
5、HENOPODIACEAE香藜CHENOPODIUMBOTRYSL地上部分中提取分离得到的一种黄酮类化合物。分子式为C20H20NO7，分子量为37237，MP169171，结构式为橙黄酮具有对小鼠髓性白血病细胞有诱导分化活性，浓度为50M、5M时，生长率分别为62和81对照100，吞噬细胞活性都10，浓度为100M、50M时，HL60细胞生长率分别为50和73，吞噬细胞活性25和10；抗肿瘤作用，浓度为30G/ML时，体外抑制埃氏腹水肿瘤细胞生长，生长抑制率为50，抑制嗜碱细胞释放由抗原和TPA诱导的组胺，其IC50分别为44和26M；抑制人单核细胞中白介素1诱导的组织因子的表达，IC50为。
6、10M；强的15脂氧化酶抑制剂，抑制亚油酸氢化，IC50为114M。0003白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他组织和器官，同时正常造血受抑制。临床可见不同程度的贫血、出血、感染发热以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛。据报道，我国各地区白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位。发明内容0004为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种橙黄酮的制备方法及其在抗白血病药物中的应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案橙黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）取香藜的地上部分，用。
7、1氨水浸泡26H，晾干，加入闪式提取器中，以8595乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；（2）上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩；（3）将上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集橙黄酮组分，说明书CN104193710A2/4页4将洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得产品。0006所述步骤（1）中闪式提取电压为120160V，提取时间为90S120S。0007所述步骤（2）中氧化铝为80100目，氯仿丙酮体积比为12，用量为柱体积的57倍。0008所述步骤（3）中制备型液相色谱的流动相为乙腈015乙二胺。
8、水溶液，体积比为4159，紫外检测波长为254NM。0009所述制备的橙黄酮，在制备抗白血病药物中的应用，尤其在制备防治淋巴性白血病和髓细胞白血病的应用。0010所述制备的橙黄酮，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0011采用本法制备橙黄酮，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0012下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式0013实施例1橙黄酮的制备取香藜的地上部分200G，用1氨水浸泡4H，晾干，加入闪式提取器。
9、中，以90乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为120V，提取时间为90S，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（100目）拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿丙酮（12）混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈015乙二胺水溶液为流动相，体积比为4159，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为15CM、直径为4CM，六通阀进样，进样体积为25ML，控制流速为50ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得橙黄酮42MG。
10、，经HPLC检测，纯度965。0014实施例2橙黄酮的制备取香藜的地上部分500G，用1氨水浸泡5H，晾干，加入闪式提取器中，以90乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为100S，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（100目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿丙酮（12）混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈015乙二胺水溶液为流动相，体积比为4159，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为15CM、直径为4CM，六通阀进样，进。
11、样体积为25ML，控制流速为50ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得橙黄酮97MG，经HPLC检测，纯度994。0015实施例3橙黄酮的制备说明书CN104193710A3/4页5取香藜的地上部分500G，用1氨水浸泡2H，晾干，加入闪式提取器中，以85乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为140V，提取时间为120S，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（80目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿丙酮（12）混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微滤膜过滤。
12、，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈015乙二胺水溶液为流动相，体积比为4159，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为25CM、直径为4CM，六通阀进样，进样体积为20ML，控制流速为20ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得橙黄酮88MG，经HPLC检测，纯度987。0016实施例4橙黄酮的制备取香藜的地上部分500G，用1氨水浸泡6H，晾干，加入闪式提取器中，以95乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为160V，提取时间为90S，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（100目）拌匀、干燥后装柱，用5倍柱体积的氯仿丙酮。
13、（12）混合溶液洗脱，薄层检测，收集橙黄酮流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经045M微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈015乙二胺水溶液为流动相，体积比为4159，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10M，柱长为50CM、直径为5CM，六通阀进样，进样体积为50ML，控制流速为150ML/MIN，紫外在线检测，检测波长为254NM，收集目标成分，减压回收试剂得橙黄酮96MG，经HPLC检测，纯度952。0017实施例5橙黄酮的其在抗白血病药物中的应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0018细胞株HL60（人髓原细胞白血病。
14、）细胞株，由中国科学院上海药物研究所提供。00192、方法在含有10胎牛血清的RPMI1640培养基中，将被试细胞调成密度为2104细胞/ML。将上述细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养24小时。分别加入溶剂对照01二甲基亚砜、阳性对照顺铂（DDP）以及不同浓度单体化合物的二甲亚砜溶液各50L，每组设3个复孔。培养72小时，于培养结束前4小时，各培养孔加入5MG/ML四唑翁盐MTT10L，置于饱和湿度、37和5CO2培养箱中培养4小时，每孔中加入150L二甲亚砜，振荡溶解生成MTT晶体甲臜，用酶标仪测570NMOD值，细胞存活率由样品OD值对于对照品OD值的比值计算。其中，橙黄酮对HL60细胞的半数抑制浓度（IC50）有剂量效应曲线得到。00203、结果实现结果（见表1）本发明橙黄酮对HL60细胞的生长有明显的抑制作用，其对HL60细胞的生长抑制活性强于阳性对照顺铂（DDP），说明橙黄酮具有极佳的急性髓原细胞白血病的活性，在制备抗白血病药物中有良好的应用前景。0021表1本发明橙黄酮对HL60细胞的抑制作用（N10，S）组别IC50（M）说明书CN104193710A4/4页6空白对照组阳性对照组6527橙黄酮组7224说明书CN104193710A。