一种本氏烟叶片提取物及其制备方法和应用.pdf

本发明公开了一种本氏烟叶片提取物及其制备方法和应用。本发明通过将本氏烟叶片采用体积分数70％乙醇水溶液浸提，离心取上清液，过滤，蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。本发明的制备方法，其需求的设备简单，成本低廉且用时较短，初始原料来源于本氏烟，生长周期短，且产物毒性低，对环境污染少。将喷洒本氏烟叶片提取物溶液的植物饲喂斜纹夜蛾幼虫，能显著的抑制斜纹夜蛾幼虫对植物的取食量。本发明的本氏烟叶片提取物在生物农药的开发方面具有巨大潜能，未来势必对夜蛾科害虫的防治做出突出贡献。

1.一种本氏烟叶片提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将本氏烟叶片采用乙醇溶液浸提，取浸提物的上清液，过滤，蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的采用乙醇溶液浸提是采用体积分数70％乙醇水溶液浸提。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的本氏烟叶片先经冷冻干燥去除水分后再采用乙醇溶液浸提，所述的采用乙醇溶液浸提是采用摇床震荡或超声萃取的方式浸提。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将本氏烟叶片经冷冻干燥机干燥3天后，以干燥的本氏烟叶片：体积分数70％乙醇水溶液为1g:10mL的比例加入体积分数70％乙醇水溶液中，然后10℃、150rpm摇床震荡浸提8小时，再将浸提物10℃、10000rpm离心后取上清液，过滤，用旋转蒸发仪45℃水浴加热蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。 5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的作为提取原料的本氏烟叶片是新鲜的或液氮冻存的绿色、健康、无黄斑、无虫咬和无病菌的本氏烟叶片。 6.一种按照权利要求1、2、3、4或5所述的制备方法制备得到的本氏烟叶片提取物。 7.权利要求6所述的本氏烟叶片提取物在防治斜纹夜蛾幼虫中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的斜纹夜蛾幼虫是III龄期及更小龄期的斜纹夜蛾幼虫。 9.一种斜纹夜蛾幼虫防治药物，其特征在于，含有有效量的权利要求6所述的本氏烟叶片提取物作为活性成份。 10.根据权利要求9所述的斜纹夜蛾幼虫防治药物，其特征在于，所述的斜纹夜蛾幼虫防治药物是III龄期及更小龄期的斜纹夜蛾幼虫的防治药物。

技术领域

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种本氏烟叶片提取物及其制备方法和应用。

背景技术

本氏烟(Nicotiana benthamiana)，因具备接收来自其他物种和病毒的基因并不产生排斥反应的独特能力，数十年来一直作为一种模式植物种植于实验室，通过测试病毒和疫苗用于研究基因功能。它具有生产周期短，适应性强等优点。至今未见利用本氏烟制备的植物农药原料，本氏烟这一品种的烟草也只在实验室小范围使用，未见大批量人工种植。

斜纹夜蛾，Spodoptera litura(Fabricius)，属夜蛾科斜纹夜蛾属，是典型的暴食性农作物害虫且具有世界性分布的特点，我国除青海、新疆外，各省均有发现。斜纹夜蛾的幼虫可以取食番茄、甘薯、棉花、大豆、烟草、甜菜等多种植物叶片，间歇性猖獗为害。

目前对斜纹夜蛾的防治主要采用氰戊菊酯、溴氰菊酯等菊酯类制剂或甲维盐喷雾。菊酯类制剂击倒速度快，持效期长，但毒性大，对害虫天敌无选择性。甲维盐虽以毒性微弱无残留致胜，但致死作用慢。所以，植物来源的生物农药必将在病虫害防治领域起到重要的作用。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种本氏烟叶片提取物及其制备方法，利用该方法能够得到有效防治斜纹夜蛾幼虫的本氏烟叶片提取物。

本发明的本氏烟叶片提取物是通过以下方法制备得到的，该方法包括以下步骤：

将本氏烟叶片采用乙醇溶液浸提，取浸提物的上清液，过滤，蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。

优选，所述的采用乙醇溶液浸提是采用体积分数70％乙醇水溶液浸提。

优选，所述的本氏烟叶片先经冷冻干燥去除水分后再采用乙醇溶液浸提，所述的采用乙醇溶液浸提是采用摇床震荡或超声萃取的方式浸提。用冷冻干燥机干燥处理的目的是减少叶片自身含水量，减少提取所需有机试剂用量及旋转蒸发的时间和成本。采用摇床震荡或超声萃取的方式浸提的目的是提高提取效率。

优选，将本氏烟叶片经冷冻干燥机干燥3天后，以干燥的本氏烟叶片：体积分数70％乙醇水溶液为1g:10mL的比例加入体积分数70％乙醇水溶液中，然后10℃、150rpm摇床震荡浸提8小时，再将浸提物10℃、10000rpm离心后取上清液，过滤，用旋转蒸发仪45℃水浴加热蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。

优选，所述的作为提取原料的本氏烟叶片是新鲜的或液氮冻存的绿色、健康、无黄斑、无虫咬和无病菌的本氏烟叶片。挑选生长健康的叶片作为提取原料，目的是保证之后的提取能得到较高产量的抗虫活性物质。

本发明的第二个目的是提供本氏烟叶片提取物在防治斜纹夜蛾幼虫中的应用。

优选，所述的斜纹夜蛾幼虫是III龄期及更小龄期的斜纹夜蛾幼虫。

本发明的第三个目的是提供一种斜纹夜蛾幼虫防治药物，其含有有效量的所述的本氏烟叶片提取物作为活性成份。

优选，所述的斜纹夜蛾幼虫防治药物是III龄期及更小龄期的斜纹夜蛾幼虫的防治药物。

本氏烟具有刺激性气味，并且相对其它品种抗性较强，体内可能存在更多更丰富的防御物质。

本发明通过采用体积分数70％乙醇水溶液浸提的方法制备得到本氏烟叶片提取物。本发 明的制备方法，其需求的设备简单，成本低廉且用时较短，初始原料来源于本氏烟，生长周期短，且产物毒性低，对环境污染少。将喷洒本氏烟叶片提取物溶液的植物饲喂斜纹夜蛾幼虫，能显著的抑制斜纹夜蛾幼虫对植物的取食量。本发明的本氏烟叶片提取物在生物农药的开发方面具有巨大潜能，未来势必对夜蛾科害虫的防治做出突出贡献。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

本发明的本氏烟叶片提取物是通过如下制备方法得到的：

采摘绿色、健康、无黄斑无虫咬无病菌的本氏烟叶片，将采摘的本氏烟叶片用液氮冻存，经冷冻干燥机干燥3天后，以干燥的本氏烟叶片：体积分数70％乙醇水溶液为1g:10mL的比例加入体积分数70％乙醇水溶液中，然后10℃、150rpm摇床震荡浸提8小时。最后将浸提物10℃、10000rpm离心后取上清液，过滤，用旋转蒸发仪45℃水浴加热蒸发浓缩得到本氏烟叶片提取物。

实施例1：

将通过上述制备方法得到的本氏烟叶片提取物取80mg溶解在1mL水中，喷洒于0.5g番茄叶片。将该处理番茄叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h，32h，40h和48h记录取食量。

实施例2:

将通过上述制备方法得到的本氏烟叶片提取物取80mg溶解在1mL水中，喷洒于0.5g烟草叶片。将该处理烟草叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h记录取食量。

实施例3：

将通过上述制备方法得到的本氏烟叶片提取物取80mg溶解在1mL水中，喷洒于0.5g生菜叶片。将该处理生菜叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h，32h记录取食量。

对比例1:

取与实施例1部位相同的0.5g番茄叶片，相同条件下喷洒1mL水。然后将该对比番茄叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h，32h，40h和48h记录取食量。

对比例2:

取与实施例2部位相同的0.5g烟草叶片，相同条件下喷洒1mL水。然后将该对比烟草叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h记录取食量。

对比例3:

取与实施例3部位相同的0.5g生菜叶片，相同条件下喷洒1mL水。然后将该对比生菜叶片饲喂1头III龄期斜纹夜蛾幼虫，分别在饲喂开始后8h，16h，24h，32h记录取食量。

通过斜纹夜蛾幼虫取食量表型分析，本发明制备得到的本氏烟叶片提取物(实施例1、实施例2、实施例3)抗虫效率比对照(对比例1、对比例2、对比例3)明显增加(表1、表2、表3)。和对比例相比，实施例1中斜纹夜蛾幼虫对番茄叶片的取食在16小时即与对比例1存在显著差异，即番茄叶片在进行喷洒本氏烟叶片提取物水溶液处理后强烈地抑制了斜纹夜蛾幼虫的取食量，并且之后这种取食差异一直保持(表1)。实施例2中斜纹夜蛾幼虫对烟草叶片的取食在24小时受到明显抑制，与对比例2的取食量有极显著差异(表2)。实施例3 和对比例3相比，实施例3中斜纹夜蛾幼虫的取食量16小时即显著低于对比例3(表3)。总结以上3个具体实施例可以看出，本发明所提供的本氏烟叶片提取物对斜纹夜蛾幼虫具有明显效果，在生物农药的开发方面具有巨大潜能，未来势必对夜蛾科害虫的防治做出突出贡献。

表1 实施例1与对比例1斜纹夜蛾幼虫对番茄叶片取食量比较

取食量(g/虫) 8h 16h 24h 32h 40h 48h 实施例1 0.04±0.01 0.06±0.01 0.07±0.01 0.1±0.04 0.15±0.05 0.16±0.06 对比例1 0.05±0.02 0.09±0.01 0.1±0.01 0.21±0.01 0.35±0.05 0.45±0.01

表2 实施例2与对比例2斜纹夜蛾幼虫对烟草叶片取食量比较

取食量(g/虫) 8h 16h 24h 实施例2 0.03±0.01 0.09±0.03 0.18±0.05 对比例2 0.05±0.03 0.21±0.05 0.38±0.03

表3 实施例3与对比例3斜纹夜蛾幼虫对生菜叶片取食量比较

取食量(g/虫) 8h 16h 24h 32h 实施例3 0.06±0.04 0.08±0.04 0.14±0.07 0.19±0.02 对比例3 0.08±0.02 0.15±0.05 0.33±0.06 0.37±0.05