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1、(10)申请公布号 CN 103156876 A (43)申请公布日 2013.06.19 CN 103156876 A *CN103156876A* (21)申请号 201310132096.2 (22)申请日 2013.04.12 A61K 31/7048(2006.01) A61K 31/192(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (71)申请人 成都中医药大学 地址 611137 四川省成都市温江区柳台大道 1166 号 (72)发明人 徐世军 代渊 (74)专利代理机构 成都金英专利代理事务所 ( 普通合伙 ) 5121。
2、8 代理人 袁英 (54) 发明名称 一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物及 其制备方法和用途 (57) 摘要 本发明属于中药技术领域， 具体提供了一种 治疗中枢神经系统疾病的药物组合物， 原料药由 黄芩苷、 藁本内酯和阿魏酸组成， 其重量配比范围 为阿魏酸10-30重量份， 黄芩苷6-12重量份， 藁本 内酯 3-5 重量份。本发明还提供了该药物组合物 的制备方法和具体用途。本发明药物组合经药效 实验证明能够有效改善痴呆或认知障碍的认知功 能， 改善行为学异常， 提高患者生命质量， 也能有 效针对脑细胞氧化应激损伤、 微炎症损伤， 对中枢 神经系统退行性病变具有较好的治疗作用。 (51)In。
3、t.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 11 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书11页 (10)申请公布号 CN 103156876 A CN 103156876 A *CN103156876A* 1/1 页 2 1. 一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物， 其特征在于 ： 它是由以下原料及重量比 组成 ： 阿魏酸 10-30 重量份， 黄芩苷 6-12 重量份， 藁本内酯 3-5 重量份。 2. 根据权利要求 1 所述的一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物， 其特征在于 ： 所 述的各原料的重量份数比为 ： 阿魏酸 15-25 重量份， 黄。
4、芩苷 7-10 重量份， 藁本内酯 4 重量 份。 3. 根据权利要求 1 所述的一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物， 其特征在于 ： 所 述的各原料的重量份数比为 ： 阿魏酸 15 重量份， 黄芩苷 8 重量份， 藁本内酯 4 重量份。 4.一种制备权利要求13中任意一项权利要求所述的治疗中枢神经系统疾病的药物 组合物的方法， 其特征在于 ： 它包括以下步骤 ： S1 ： 按组分及重量比称取原料 ； S2 ： 将原料混合均匀后， 加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。 5. 根据权利要求 4 所述的一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物的制备方法， 其特 征在于 ： 所述的药物制。
5、剂为片剂、 泡腾片、 胶囊剂、 颗粒剂、 散剂或口服液。 6. 根据权利要求 4 所述的一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物的制备方法， 其特 征在于 ： 所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、 硬脂酸镁、 糊精和微晶纤维素。 7.如权利要求13中任意一项权利要求所述的药物组合物在制备治疗中枢神经系统 疾病药物中的用途。 8. 根据权利要求 7 所述的中枢神经系统疾病为老年痴呆、 血管性痴呆或认知障碍症。 权 利 要 求 书 CN 103156876 A 2 1/11 页 3 一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合物及其制备方法和 用途 技术领域 0001 本发明涉及一种治疗中枢神经系统疾病的药物组合。
6、物， 尤其是涉及一种治疗和缓 解老年痴呆、 血管性痴呆或轻度认知障碍症的药物组合物及其制备方法和用途， 属于中药 技术领域。 背景技术 0002 老年痴呆是指由于多种原因引起的， 以认知功能缺损为主要临床表现的老年疾 病， 是一种临床综合征。近年来， 随着世界各国人口的老龄化， 老年痴呆症的发病率呈急剧 上升趋势， 其死亡率仅次于心脏病、 肿瘤和中风而位居第 4 位。据统计， 在我国 60 岁以上人 口中患病率约 5， 约 600 万， 并随年龄增高而增加。老年性痴呆的病理变化， 在形态上主 要表现为大脑皮质明显萎缩， 以额叶、 颞叶、 顶叶为主。 脑回萎缩变窄， 脑沟增宽， 脑室扩大 ； 主。
7、要的组织病理学变化是在大脑细胞外出现了由 - 淀粉样蛋白的 42 个氨基酸肽的亚型 ( 即 A42) 聚集形成的淀粉样斑块 ( 老年斑 )(SP)， 以及在神经元内出现了由细胞微管和 过度磷酸化的 Tau 蛋白构成的神经纤维缠结 （NFT） 。由于 - 淀粉样蛋白的产生增多或清 除减少， 聚集的 - 淀粉样蛋白启动了一系列在中枢神经系统变性与痴呆发病中的病理过 程， 即淀粉样蛋白假说。A42 的聚集导致了淀粉样斑块的形成， 并启动一系列与神经元和 突触功能异常、 炎性反应、 Tau 蛋白的过度磷酸化、 神经纤维缠结形成、 神经元死亡、 神经递 质异常相关的改变， 最终导致痴呆的发生。老年性痴呆。
8、临床以意识模糊、 记忆缺损、 人格和 语言障碍为主要表现。 0003 现代医学对老年性痴呆的病因及发病机制已经进行了多年的研究， 但因其病因复 杂， 至今对其具体环节尚未明了， 目前对老年性痴呆的病因和发病机制的认识主要集中于 遗传和环境因素所引起的脑内慢性炎症和胆碱能系统功能进行性下降， 主要的较具代表性 的学说有 : 胆碱能学说、 自由基损伤学说、 钙超载学说及中医的血流变学说等。在治疗时常 常选用胆碱酯酶抑制剂、 谷氨酸受体拮抗剂、 脑血管扩张剂、 脑代谢赋活药物及中医中药进 行综合治疗。 0004 中医学对老年性痴呆病位、 病因、 病机已有全面认识， 中医辨证论治理论认为无论 血管性痴。
9、呆或阿尔茨海默病都主要表现为 “神” 的病变， 认为痰浊、 瘀血是加速脑衰老导致 老年痴呆的重要因素， 心肾不足、 气虚血亏、 阴损精衰是发病的核心， 而痰瘀火邪的作用只 是发病的重要因素。 在治疗时常常选用滋补肝肾、 活血化瘀和化痰通络的复方进行治疗。 在 临床上取得了满意的临床疗效， 且具有毒副作用小的优势。 0005 申请号 201010217290.7 中公布了一种治疗中枢神经系统退行性病变的药物组合 物及制备方法和用途， 其药物组合物包括了黄芩苷、 藁本内酯与阿魏酸。 该申请公布了各活 性成分间的重量配比 ： 黄芩苷18-24份， 藁本内酯10-15份， 阿魏酸3-6份， 优选为黄芩。
10、苷20 份、 藁本内酯 12 份、 阿魏酸 4 份。根据上述配比制成的药物虽然对老年痴呆、 血管性痴呆和 认知障碍症患者有一定的治疗作用， 但是其临床治疗效果不够明显， 其具体配伍比例还有 说 明 书 CN 103156876 A 3 2/11 页 4 待进一步深入改进。 发明内容 0006 本发明的目的在于解决现有技术中临床治疗效果不够明显的问题。 0007 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的 ： 提供一种治疗中枢神经系统退行性 病变的药物组合物， 它是由以下原料及重量比组成 ： 阿魏酸10-30重量份， 黄芩苷6-12重量 份， 藁本内酯 3-5 重量份 ； 优选地， 阿魏酸 12-2。
11、0 重量份， 黄芩苷 7-10 重量份， 藁本内酯 4 重 量份 ； 优选地， 阿魏酸 15 重量份， 黄芩苷 8 重量份， 藁本内酯 4 重量份。 0008 本发明的目的还在于提供一种制备本发明药物组合物制备方法， 它包括以下步 骤 ： 0009 S1 ： 按组分及重量比称取原料 ； 0010 S2 ： 将原料混合均匀后， 加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。 0011 本发明的药物组合物可以根据制药领域的常规方法制备成任何一种药剂学上所 述的剂型 ； 药物组合物可以通过口服、 吸入或肠外给药等方式施用于患者。 0012 所述的药学上常用的药物制剂类型包括 ： 口服给药时使用的。
12、片剂、 泡腾片、 胶囊 剂、 丸剂、 散剂、 颗粒剂、 糖浆、 口服液等 ； 在肠外给药时使用的冻干粉针及注射液等。 0013 所述的药用辅料包括 ： 淀粉、 硬脂酸镁、 糊精和微晶纤维素。 0014 本发明的另外一个目的在于该药物组合物用于在制备治疗和缓解中枢神经系统 退行性病变药物中的用途。 0015 该药物组合物用于在制备治疗和缓解老年痴呆、 血管性痴呆或认知障碍症药物中 的用途。 0016 本发明药物组合物经过药效学验证的有益效果是 ： 0017 本发明是将黄芩苷、 阿魏酸及藁本内酯三种药用原料进行配伍， 本发明配方在加 大阿魏酸剂量的同时减少了黄芩苷和藁本内酯的剂量。 与原有配方相比。
13、其治疗效果更加优 越， 彼此之间的协同增效作用更为明显， 同时也节约了原料药的使用总量， 且通过多次反复 药学试验筛选得到了本发明药物组合物的最佳配比范围。 具体实施方式 0018 下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案， 但本发明的保护范围不 局限于以下所述。 0019 实施例 1 0020 称取原料阿魏酸100g， 黄芩苷60g， 藁本内酯30g， 加入辅料淀粉150g制粒， 硬脂酸 镁 5g， 糊精 150g、 微晶纤维素 150g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 0021 实施例 2 0022 称取原料阿魏酸120g， 黄芩苷70g， 藁本内酯40g， 加入辅料淀粉18。
14、0g制粒， 硬脂酸 镁 5g， 糊精 160g、 微晶纤维素 160g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 0023 实施例 3 0024 称取原料阿魏酸150g， 黄芩苷80g， 藁本内酯40g， 加入辅料淀粉230g制粒， 硬脂酸 镁 6g， 糊精 200g、 微晶纤维素 200g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 说 明 书 CN 103156876 A 4 3/11 页 5 0025 实施例 4 0026 称取原料阿魏酸 180g， 黄芩苷 100g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 300g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 250g、 微晶纤维素 250g， 均匀制得颗粒，。
15、 压片， 得到片剂。 0027 实施例 5 0028 称取原料阿魏酸 200g， 黄芩苷 100g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 300g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 260g、 微晶纤维素 260g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 0029 实施例 6 0030 称取原料阿魏酸 250g， 黄芩苷 120g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 380g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 280g、 微晶纤维素 280g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 0031 实施例 7 0032 称取原料阿魏酸 300g， 黄芩苷 120g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 42。
16、0g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 300g、 微晶纤维素 300g， 均匀制得颗粒， 压片， 得到片剂。 0033 实施例 8 0034 称取原料阿魏酸100g， 黄芩苷60g， 藁本内酯30g， 加入辅料淀粉150g制粒， 硬脂酸 镁 5g， 糊精 150g、 微晶纤维素 150g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0035 实施例 9 0036 称取原料阿魏酸120g， 黄芩苷70g， 藁本内酯40g， 加入辅料淀粉180g制粒， 硬脂酸 镁 5g， 糊精 160g、 微晶纤维素 160g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0037 实施例 10 0038 称取原。
17、料阿魏酸150g， 黄芩苷80g， 藁本内酯40g， 加入辅料淀粉230g制粒， 硬脂酸 镁 6g， 糊精 200g、 微晶纤维素 200g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0039 实施例 11 0040 称取原料阿魏酸 180g， 黄芩苷 100g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 300g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 250g、 微晶纤维素 250g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0041 实施例 12 0042 称取原料阿魏酸 200g， 黄芩苷 100g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 300g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 260g、 微晶。
18、纤维素 260g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0043 实施例 13 0044 称取原料阿魏酸 250g， 黄芩苷 120g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 380g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 280g、 微晶纤维素 280g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0045 实施例 14 0046 称取原料阿魏酸 300g， 黄芩苷 120g， 藁本内酯 50g， 加入辅料淀粉 420g 制粒， 硬脂 酸镁 8g， 糊精 300g、 微晶纤维素 300g， 均匀制得颗粒， 装入胶囊， 得到胶囊剂。 0047 下面通过具体的药学试验来证明本发明的有益效果 ： 0。
19、048 一、 本发明药物对抗东莨菪碱致拟痴呆小鼠的试验 0049 1 实验材料 0050 1.1 实验动物 0051 KM 小鼠 70 只， 体重 202g， 鼠龄 45 50 天， 雌雄各半， 均由四川省医学科学院实 验动物研究所提供， 动物许可证号 ： SCXK( 川 )2008-24， 在室温 22-24， 明暗周期 12h/12h 说 明 书 CN 103156876 A 5 4/11 页 6 条件下饲养， 自由饮水摄食。 0052 1.2 药品与试剂 0053 安理申 （盐酸多奈哌齐片） ， 卫材 （中国） 药业有限公司生产， 批号 080709。氢溴酸 东莨菪碱液 （SCOP） ，。
20、 上海禾丰制药有限公司生产， 批号 6A18007。ACHE 试剂盒， 南京建成生 物工程所， 批号 20090606。 0054 1.3 实验主要仪器及试剂 ： 0055 DT-200 小鼠跳台测试仪 （及测试箱） ， 成都泰盟科技有限公司 0056 BA-200 自动避暗测试仪 （及测试箱） ， 成都泰盟科技有限公司 0057 2 实验方法 0058 2.1 分组及处理 0059 KM 小鼠， 雌雄各半， 按体重及性别随机分为正常对照组、 模型对照组、 安理申阳性 对照组、 试验A组 （黄芩苷:藁本内酯:阿魏酸20 ： 12 ： 4） 、 试验B组 （阿魏酸:黄芩苷:藁 本内酯 10 ： 。
21、6 ： 3） 、 试验 C 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 15 ： 8 ： 4） 、 试验 D 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 30 ： 12 ： 5） 各组动物按 0.2ml/10g 体重 / 天 ig 给药。避暗、 跳台实验 组各组小鼠分别于第 14 日给药后 50min， 除空白对照组外， 其余各组小鼠在避暗训练、 跳台 训练前 10min， ip 给予 SCOP2mg/kg 体重 （0.1ml/10g 体重） ， 造成小鼠记忆获得障碍模型。 空白对照组 ip 等量的 N.S。各组小鼠在行为学试验结束时， 立刻取脑组织， 制备脑匀浆， 按 AchE 试剂盒步骤说明测定各。
22、组小鼠全脑 AchE 活性。 0060 2.2 小鼠学习记忆能力测试 0061 2.2.1 避暗法 0062 （1） 避暗训练 ： 避暗试验组小鼠于实验第 14 日 ig 给药或蒸馏水 50min 后， 除空白 对照组外， 其余各组小鼠 ip.SCOP 造模， 造模后 10min 后将动物背对洞口放入避暗箱明室， 适应 3min， 通 36V 交流电， 即刻计时， 记录 5min 内各动物的潜伏期和错误次数。 0063 （2）避暗测试 ： 避暗组小鼠于实验第 15 日 （避暗训练 24 小时后） ig 给药或 N.S60min 后， 同上法将小鼠放入避暗箱明室， 同时通 36V 交流电、 计时。
23、， 记录 5min 内各动物 的潜伏期和错误次数。 0064 2.2.2 跳台法 0065 （1） 跳台训练 ： 跳台试验组小鼠于实验第 14 日 ig 给药或 N.S50min 后， 采用与避 暗实验相同的方法造小鼠记忆获得障碍模型， 10min 后将各组小鼠放跳台上， 适应 3min， 然 后给予 32V 交流电， 即刻计时， 记录动物 5min 内的潜伏期和错误次数。 0066 （2）跳台测试 ： 跳台组小鼠于实验第 15 日 （跳台训练 24 小时后） ， ig 给药或 N.S60min 后， 同上法将小鼠放于跳台上， 同时给予 32V 交流电、 并计时， 记录动物 5min 内的 潜。
24、伏期和错误次数。 0067 2.3 统计学处理 0068 应用 SPSS15.0 统计软件进行数据统计处理。 0069 3. 结果 0070 3.1 对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响 （避暗法） 0071 表 1 药物对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响 （避暗法） 0072 说 明 书 CN 103156876 A 6 5/11 页 7 0073 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ；*P0.01. 0074 由表 1 可知， 与模型对照组比较， 药物各剂量组、 安理申组能显著延长小鼠的潜伏 期 （p0.05） ， 并减少 5min 内小鼠的错误次数 （p0.05） ， 其中试验 C 组疗效最。
25、为显著。 0075 3.2 配伍组方 （SZ） 对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响 （跳台法） 0076 表 2 药物组方对小鼠逃避潜伏期和错误次数的影响 （跳台法） 0077 0078 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ； *P0.01. 0079 由表 2 可知， 与模型对照组比较， 药物各剂量组、 安理申组能显著延长小鼠的潜伏 期 （p0.05） ， 并减少 5min 内小鼠的错误次数 （p0.05） ， 其中试验 C 组疗效最为显著。 0080 3.3 对记忆获得障碍小鼠脑组织 AchE 活性的影响 0081 表 3 药物组方对 SCOP 致记忆障碍模型小鼠脑内 AchE 活性的影响。
26、 说 明 书 CN 103156876 A 7 6/11 页 8 0082 0083 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ；*P0.01. 0084 由见表3可知， 与模型对照组比较， 药物各剂量组、 安理申组能显著降低AchE活性 （p0.05） 。 0085 4 结论 0086 本发明药物组合物能显著提高东莨菪碱所致拟痴呆小鼠学习记忆能力， 降低脑组 织 ACHE 活性， 其中试验 C 组疗效最为显著。 0087 二、 本发明药物组合物对血管性痴呆模型的试验 0088 1 实验材料 0089 1.1 实验动物 ： 0090 SD 大鼠， 雌雄各半， SPF 级， 350-500g， 由四。
27、川省医学科学院实验动物研究所提供， 动物许可证号 ： SCXK( 川 )2008 24， 在室温 22-24， 明暗周期 12h/12h 条件下饲养， 自由 饮水摄食。 0091 1.2 药品与试剂 ： 0092 尼莫地平片， 江苏聚荣制药集团有限公司制造， 批号 ： 080218 ； MDA、 MAO 试剂盒， 南 京建成生物工程所， 批号 20091106、 20091107。 0093 1.3 实验主要仪器 ： 0094 MT-200 水迷宫， 成都泰盟科技有限公司 0095 2 实验方法 0096 2.1 模型制备 0097 大鼠采用 2-VO 法永久性结扎双侧颈总动脉， 空白组只分离。
28、双侧颈总动脉， 不结 扎， 术后每只大鼠每天 im 注射用青霉素钠 10 万单位抗感染， 共 3 天， 术中注意补水， 术后注 意保温， 术后自由饲养一月后动物进行分组给药。 0098 2.2 分组与给药 0099 造模大鼠 SD 大鼠 60 只， 按体重分层随机分为模型对照组、 尼莫地平阳性对照组、 试验 A 组 （黄芩苷 : 藁本内酯 : 阿魏酸 20 ： 12 ： 4） 、 试验 B 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 10 ： 6 ： 3） 、 试验 C 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 15 ： 8 ： 4） 、 试验 D 组 （阿魏酸 : 黄芩 苷 : 藁本内酯 30 ：。
29、 12 ： 5） ， 另取 10 只同批大鼠作为空白对照组， 各组动物按 1ml/100g 体 重 / 天 ig 给药， 模型对照组、 空白对照组给予等量生理盐水， 连续给药 15 日， 于实验第 11 日给药后开始进行水迷宫行为学试验， 前4天进行定位航行实验， 第5天去平台进行空间搜 说 明 书 CN 103156876 A 8 7/11 页 9 索实验。 0100 2.3Morris 水迷宫测试大鼠学习记忆能力 0101 MT-200 水迷宫水池平分为 4 个象限， 平台位于 SW 象限中央， 水温 24， 水面高于 平台 1.5cm， 水中加牛奶至不透明， 大鼠每日于 SW 象限中间位。
30、置面向池壁入水， 实验时间 为 120s， 前 4 天定位航行， 由仪器自动记录其潜伏期， 平台停留时间、 平台停留距离， 经过平 台次数， 若大鼠在 120s 未找到平台， 计为 120s， 实验后所有大鼠均台上停 10s 以增强记忆 ； 实验共 5 天， 第五天去平台， 进行空间搜索实验， 时间为 120s， 空间搜索中， 手动记录其潜伏 期， 并由仪器自动记录其经过平台次数、 平台停留时间、 平台停留距离。结果见表 4。 0102 2.4 大鼠海马、 血清 MDA 含量、 MAO 活性的测定 0103 各组动物学习记忆行为学试验测试结束后， 立即取海马组织冻存备用， 取血并分 离血清， 。
31、按试剂盒说明进行大鼠海马、 血清 MDA 含量与 MAO 活性的检测。结果见表 5 和表 6。 0104 3 实验结果 0105 3.1 药物对鼠空间搜索能力的影响 0106 表 4 药物组方对 VD 模型大鼠空间学习记忆能力的影响 0107 0108 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ；*P0.01. 0109 由表 4 可知， 与模型对照组比较， 药物各剂量组能显著缩短大鼠的逃避潜伏期 （p0.01） ， 并增加 120s 内大鼠的经过平台次数 （p0.05） 、 平台停留时间 （p0.05） 、 平台停 留距离 （p0.05） 。3.2 对大鼠海马组织、 血清 MDA 含量、 MAO。
32、 活性的影响 0110 表 5 对大鼠海马组织 MDA 含量、 MAO 活性的影响 说 明 书 CN 103156876 A 9 8/11 页 10 0111 0112 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ；*P0.01. 0113 表 6 对大鼠血清 MDA 含量、 MAO 活性的影响 0114 0115 0116 注 ： 与模型组比较， *P0.05 ；*P0.01. 0117 由表 5 和表 6 可知， 与模型对照组比较， 药物各剂量组、 尼莫地平组能显著降低大 鼠海马组织、 血清 MDA 含量、 MAO 活性 （p0.05 ； p0.01） 。 0118 4、 结论 0119 本发明。
33、药物组合物可以显著提高血管性痴呆模型的学习记忆能力， 降低海马组织 和血清中 MDA 及 MAO 的活性， 其中试验 C 组疗效最为显著。 0120 三、 本发明药物组合物对小鼠软脑膜微循环试验 0121 1 实验材料 0122 1.1 实验动物 ： 0123 KM 小鼠 80 只， 体重 202g， 鼠龄 45 50 天， 雌雄各半， 均由四川省医学科学院实 验动物研究所提供， 动物许可证号 ： SCXK( 川 )2008-24， 在室温 22-24， 明暗周期 12h/12h 条件下饲养， 自由饮水摄食。 0124 1.2 药品与试剂 ： 0125 尼莫地平片， 江苏聚荣制药集团有限公司制。
34、造， 批号 ： 080218， 重酒石酸去甲肾上 腺素注射液， 上海禾丰制药有限公司出品， 批号 ： 0360602 ； 说 明 书 CN 103156876 A 10 9/11 页 11 0126 1.3 实验主要仪器及试剂 ： 0127 XTW-CTV 微循环彩色电视显微镜， 北京泰克仪器有限公司生产 ； 0128 2 实验方法 0129 取小鼠 80 只， 分为 6 组， 即空白对照组、 尼莫地平对照组、 试验 A 组 （黄芩苷 : 藁本 内酯:阿魏酸20 ： 12 ： 4） 、 试验B组 （阿魏酸:黄芩苷:藁本内酯10 ： 6 ： 3） 、 试验C组 （阿 魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内。
35、酯 15 ： 8 ： 4） 、 试验 D 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 30 ： 12 ： 5） ， 每组 12 只。连续给药 7 天后， 腹腔注射 1戊巴比妥钠麻醉后， 腹卧位头部固定， 颅顶正中 皮肤 “T” 型切开， 以矢状缝外 3mm， 冠状缝下 3mm 为中心， 用手术刀片掀开颅骨， 暴露软脑膜， 形成一个直径约 5mm 的颅窗， 加入生理盐水 20ul, 术后稳定 30min 后开始试验， 整个试验过 程保持动物体温 37。将实验动物置于微循环显微镜下选择直径为 30 50um 微动脉血 管， 稳定 30min， 测管径大小， 再滴加 0.1 NA10ul， 用 XTW-。
36、CTV 微循环彩色电视显微镜借助 于 JS 接目测微计连续观察滴加 NA 后 3、 9min 时微动脉血管管径大小的变化。同时观察正 常软脑膜及滴加 0.1 NA 后微循环的血色、 每视野交织网点数目。结果见表 7、 8。 0130 3 实验结果 0131 3.1 药物对小鼠软脑膜微动脉血管管径的影响 0132 表 7 对小鼠软脑膜微动脉血管管径的影响 0133 0134 注 ： 与空白对照组比较， *P 0.05，*P 0.01 0135 表 8 对小鼠软脑膜微血管交织网点数目的影响 （每视野） 0136 说 明 书 CN 103156876 A 11 10/11 页 12 0137 注 ：。
37、 与空白对照组比较， *P 0.05，*P 0.01 0138 由表78可见药物试验各组相对于空白对照组而言均可不同程度改善由去甲肾 上腺素所致的大鼠软脑膜局部微循环障碍， 使微动脉血管扩张， 血流增快， 每视野交织网点 数增多。 0139 四、 本发明药物组合物抗 A 海马注射痴呆大鼠模型的试验 0140 1. 实验部分 0141 1.1 仪器、 试药和动物 0142 根据不同配比制作组合物 ； 盐酸多奈哌齐 （安理申） ， 卫材 （中国） 制药有限公司生 产， 批号 ： 100319A。SPF 级 SD 大鼠， 3 4 月龄， 兼用各半， 体重 20020g 四川省医 学科学院实验动物研究。
38、所， 动物许可证号 ： SCXK( 川 )2008-24 ； 实验场地为国家中医药管理 局成都中医药大学中药药理三级实验室， 编号 ： TCM2032043。大鼠均在室温 22 24， 明暗周期 12h/12h 条件下饲养， 自由饮水摄食。淀粉样蛋白片段 (A25-35， SIGMA 公司 ) ； MT-200Morris 水迷宫 （成都泰盟科技有限公司） 。 0143 1.2 方法与结果 0144 1.2.1A 老化处理与模型制备 0145 A25-35溶入生理盐水 （终浓度为2g L 1） ， 37恒温箱孵育72h老化备用。 参 考文献制备模型。将大鼠用 0.3% 戊巴比妥钠麻醉 （30m。
39、g kg 1， ip） 后， 备皮， 将大鼠固定在 脑立体定位仪上， 用碘伏和 75% 酒精常规消毒头皮后， 用无菌手术刀在大鼠头皮正中线处 切开一长约 1.5cm 纵行切口， 暴露前囟， 钝性分离皮下组织及骨膜， 然后根据大鼠脑立体定 位图谱， 先在大鼠前囟后 3.0mm， 右侧 2.0mm 处用无菌牙科钻钻开颅骨， 用 5L 微量进样器 自颅骨开孔处进入大鼠右侧海马背部， 进针深度3.3mm， 缓慢匀速注射5L凝聚态A25-35， 注射速度为 1ul min 1， 5min 注射完毕， 留针 2min， 缓慢撤针 ； 同样方法在左侧海马背部注 射5L凝聚态A25-35， 造成拟痴呆大鼠模型。
40、。 术后缝合创口， 消毒， 假手术组注射等容积的 生理盐水， 术后自由饲养一周。 0146 1.2.2 分组及给药 0147 将存活的 60 只模型动物按照体重随机均分为 6 组， 即模型对照组、 安里申阳性组 （1.4mgkg 1） 和试验 A 组 （黄芩苷 : 藁本内酯 : 阿魏酸 20 ： 12 ： 4） 、 试验 B 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 10 ： 6 ： 3） 、 试验 C 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 15 ： 8 ： 4） 、 试验 D 组 （阿魏酸 : 黄芩苷 : 藁本内酯 30 ： 12 ： 5） ， 另取同批次 10 只正常大鼠， 同样操作方法，。
41、 两 侧海马背部各注射 5L 生理盐水作为空白对照组。除空白对照组和模型对照组大鼠 ig 给 予等体积的生理盐水外， 其余各组大鼠 ig 相应的药物， 给药体积为 10mlkg 1 体重， qd， 连续 ig 给药 90d。 0148 1.2.3Morris 水迷宫测试大鼠学习记忆能力 0149 定向航行和空间探索参考文献进行， 分别记录 2min 内的逃避潜伏期和第一相限 停留时间、 平台停留时间及经过平台次数， 结果见表 9 和表 10。 0150 表 9 本发明药物组合物对 A 注射模型逃避潜伏期的影响 0151 说 明 书 CN 103156876 A 12 11/11 页 13 01。
42、52 0153 注 ： 与模型组比较 *P0.05，*P0.01 0154 表 10 本发明药物组合物对 A 注射模型空间探索的影响 0155 0156 注 ： 与模型组比较 *P0.05，*P0.01 0157 由表 9 和表 10 可知 ： 模型组与空白组比较， 逃避潜伏期和第三象限时间均显著延 长， 第一相限时间和有效区停留时间均显著缩短， 有显著的统计学意义 （P0.05） ； 给药组与 模型组比较， 本发明药物组合物高、 中、 低剂量组逃避潜伏期训练第 3 天和第 5 天较模型对 照组显著缩短， 第三象限时间较模型对照组显著缩短， 第一相限时间和有效区停留时间则 显著延长， 有显著的统计学意义 （P0.05） 。提示本发明药物组合物具有改善模型大鼠学习 记忆的功能的作用。 0158 综上所述， 增加阿魏酸剂量比例的同时减少了黄芩苷和藁本内酯的剂量， 既可以 节约原料药的使用总量， 同时也可以增强其治疗作用。 说 明 书 CN 103156876 A 13 。