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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610139684.2 (22)申请日 2016.03.11 (71)申请人 浙江艾杰斯生物科技有限公司 地址 322299 浙江省金华市浦江县亚太大 道677号 (72)发明人 潘宏涛 卢亚萍 (74)专利代理机构 苏州慧通知识产权代理事务 所(普通合伙) 32239 代理人 丁秀华 (51)Int.Cl. A23L 3/3571(2006.01) A23L 3/3508(2006.01) (54)发明名称 含溶菌酶的食品防腐剂 (57)摘要 本发明涉及一种用于食品防腐的。
2、组合物， 组 合物中防腐活性成分由溶菌酶和荭草苷组成， 其 中溶菌酶占防腐活性成分的重量百分比为20- 80， 荭草苷占防腐活性成分的重量百分比为 80-20。 与传统化学防腐剂相比， 本发明的防腐 剂制备方法简单， 配伍合理， 两种活性成分在发 挥各自功效的同时， 又能协同抑制食品中的特定 细菌、 酵母菌等， 显著延长产品的货架寿命。 溶菌 酶和荭草苷来源天然， 无毒副作用。 权利要求书1页 说明书8页 CN 105707649 A 2016.06.29 CN 105707649 A 1.一种用于食品防腐的组合物， 其特征在于， 组合物中防腐活性成分由溶菌酶和荭草 苷组成， 其中溶菌酶占防腐。
3、活性成分的重量百分比为20-80， 荭草苷占防腐活性成分的重 量百分比为80-20。 2.根据权利要求1所述的防腐组合物， 其特征在于， 溶菌酶占防腐活性成分的重量百分 比为20-50， 荭草苷占防腐活性成分的重量百分比为80-50。 3.根据权利要求2所述的防腐组合物， 其特征在于， 溶菌酶和荭草苷占防腐活性成分的 重量百分比分别为25和75。 4.根据权利要求1所述的防腐组合物， 其特征在于， 所述防腐组合物中进一步包括食品 上可接受的添加剂。 5.根据权利要求4所述的防腐组合物， 其特征在于， 所述食品上可接受的添加剂选自稳 定剂、 乳化剂、 增味剂和抗结剂等中的一种或多种。 6.根据权。
4、利要求5所述的防腐组合物， 其特征在于， 所述稳定剂为葡萄糖酸- -内酯； 乳 化剂为单硬脂酸甘油酯或蔗糖脂肪酸酯， 优选为单硬脂酸甘油酯； 增味剂为氨基乙酸； 抗结 剂为二氧化硅或微晶纤维素， 优选为二氧化硅。 7.权利要求1-6任一项所述的防腐组合物在防止食品腐败中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述食品腐败是由金黄色葡萄球菌、 枯草 芽孢杆菌、 大肠杆菌、 酿酒酵母菌或黑曲霉导致的。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105707649 A 2 含溶菌酶的食品防腐剂 技术领域 0001 本发明涉及食品领域， 具体涉及一种食品防腐剂。 背景技术 0002 防。
5、腐剂是食品工业中不可缺少的一种添加剂， 为了抑制食品的腐化变质最直接的 方法就是在食品加工过程中添加适量的防腐剂。 食品防腐剂按来源分为化学合成防腐剂和 天然防腐剂。 目前我国使用最多的是化学防腐剂， 然而化学防腐剂存在潜在的危害， 如果超 量使用， 会给人们的健康带来极大的危害。 随着社会经济的发展和人们生活水平的提高， 人 们对食品的安全性要求越来越高， 寻求广谱、 高效、 低毒、 天然的食品防腐剂是目前食品科 学研究中的热点之一。 当前国内外主要的天然食品防腐剂有乳链球菌素、 纳他霉素和聚赖 氨酸， 但是只使用1种天然防腐剂很难达到理想的保藏效果， 同时由于生物防腐剂价格相对 较高， 因。
6、此实际应用中仍以化学防腐剂为主。 为了降低化学防腐剂的使用， 研究人员不断寻 找能够增强天然防腐剂的方法。 0003 溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N- acetylmuramide glycanohydrlase)， 是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。 主要通过破 坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的 -1,4糖苷键， 使细胞壁不溶性黏多 糖分解成可溶性糖肽， 导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。 溶菌酶还可与带负电荷 的病毒蛋白直接结合， 与DNA、 RNA、 脱辅基蛋白形成复盐， 使病毒失活。 因此， 该酶具有。
7、抗菌、 消炎、 抗病毒等作用。 溶菌酶(也称溶解酶)是一个分子量为14.4kDa的酶， 它能够通过催化 肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖残基间和壳糊精中N-乙酰葡糖胺残基间的1, 4- 链的水解， 而破坏细菌的细胞壁。 0004 溶菌酶(lysozyme)由18种129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白， 分子量为 14.4KDa。 化学性质非常稳定。 当pH值为1.211.3范围内剧烈变化时， 其结构几乎不变。 在 酸性环境中， 溶菌酶对热的稳定性很强； 当pH值为47时100处理1min仍能保持原酶活 性； 当pH值为3时能耐100加热处理45min； 在干燥条件下， 溶菌酶可以长期在。
8、室温存放， 其 纯品为白色或微黄色。 黄色的结晶体或无定形粉末， 无臭， 味甜。 易溶于水， 遭碱易破坏， 不 溶于丙酮和乙醚。 作为医药用品， 溶菌酶具有生物相容性好、 对组织无刺激、 无毒性等优点。 0005 溶菌酶广泛存在于家禽、 鸟类的蛋清和哺乳动物的泪液、 唾液、 血浆、 尿、 乳汁、 白 细胞及其他体液和组织(如肝、 肾)细胞内； 从大麦、 无花果、 木瓜和卷心菜、 萝 卜等植物中也 能分离出溶菌酶， 其中以蛋清中含量为最高(约含0.3)。 按来源不同， 可将溶菌酶分为蛋 清溶菌酶、 动物溶菌酶、 植物溶菌酶、 微生物产生的溶菌酶和细菌噬菌体产生的溶菌酶； 按 作用细胞壁不同， 可。
9、将溶菌酶分为细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。 0006 鸡蛋清溶菌酶占蛋清总蛋白的3.4-3.5， 作为溶菌酶类的典型代表， 是目前重 点研究的对象， 也是了解最清楚的溶菌酶之一。 人乳、 眼泪、 唾液中的溶菌酶活性远高于蛋 清中(约为3倍)或其他来源的溶菌酶的活性。 在哺乳动物的乳汁中， 人乳汁中的溶菌酶含量 是牛乳的3000倍。 植物溶菌酶的分子量较大， 约为24000-29100， 植物溶菌酶对溶壁小球菌 说 明 书 1/8 页 3 CN 105707649 A 3 的溶菌活性不超过鸡蛋清溶菌酶的1/3， 但对胶体状甲壳质的分解活性则是鸡蛋清溶菌酶 的10倍。 微生物产生的溶菌酶则分。
10、为7类： 内N-乙酰己糖胺酶， 此酶同于鸡蛋清溶菌酶， 破坏 细菌细胞壁肽聚糖中的 -1,4糖苷键； 酰胺酶， 切断细菌细胞壁肽聚糖中NAM与肽 “尾” 之间 的N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸键； 内切酶， 使肽 “尾” 及肽 “桥” 内的肽键断裂； -1,3、 -1,6葡聚 糖酶和甘露聚糖酶， 此酶分解酵母细胞的细胞壁； 壳多糖酶， 与葡聚糖酶共同作用， 可分解 霉菌和酵母； 磷酸甘露糖酶， 与葡甘露糖酶共同作用， 可分解原生质； 脱乙酰壳多糖酶， 主要 分解毛霉和根酶。 噬菌体产生的溶菌酶则是一种特异性的酶， 由噬菌体感染、 诱导产生， 但 在未被感染的宿主细胞上不存在该酶。 0007 溶菌酶。
11、的提取方法包括以下几种： 1、 直接结晶法： 此法操作简单， 成本低， 但不能 用以分离微量的溶菌酶。 2、 离子交换层析法： 此法具有简便、 高效、 成本低， 且可自动化连续 操作的优点圈。 3、 亲和层析： 亲和层析法分离纯化的倍数较高、 质量较好， 且可广泛应用于 各种来源的溶菌酶， 用于浓缩和精制微量的溶菌酶。 但是由于亲和吸附剂的制作较复杂， 限 制了其在工业上的大规模利用。 4、 超滤与亲和层析结合： 超滤与亲和层析结合提取溶菌酶， 是近年来开发的新方法。 首先用超滤除去大部分杂蛋白， 保留溶菌酶， 此时溶菌酶还较粗， 再用亲和层析法得到精制产品。 5、 膜色谱技术： 20世纪80。
12、年代末， 出现了亲和膜色谱技术。 该技术兼具膜分离与亲和分离的特点。 与传统的膜分离、 亲和色谱相比， 膜色谱技术不仅具 有纯化倍数高、 压降小、 分离时间短、 生物大分子在分离过程中变性概率小， 以及允许较快 的加料速度等特点， 而且比柱亲和色谱更易实现规模化生产。 6、 超滤： 与传统的生化分离技 术相比， 超滤技术主要的优点是产品的高产出量。 然而尽管超滤技术在反渗析及浓缩等过 程中得到广泛的应用， 但是作为在生物工业领域中潜能很大的一种蛋白质分离技术， 超滤 仍未被充分利用。 7、 反胶团提取： 反胶团萃取是近年发展起来的一种新的萃取方法， 它是利 用有机溶剂中加入少量表面活性剂形成的。
13、反胶团来提取的方法， 为一些不能使用有机溶剂 萃取的酶和活性蛋白质等生物活性物质开拓了一种新的分离技术， 扩大了有机溶剂萃取的 适用范围。 8、 生物分离技术： 以亲和力为基础的生物分离技术(固定金属亲和层析、 亲和沉 淀、 亲和过滤法)， 也是溶菌酶提取方法之一。 0008 溶菌酶具有多种独特而重要的药理作用。 0009 第一， 抗菌消炎。 细菌的细胞壁由胞壁质组成， 胞壁质是由N-乙酰氨基葡萄糖及N- 乙酰胞壁酸交替组成的多聚物， 胞壁残基上可以连接多肽， 称为肽聚糖。 多糖以直链形式存 在， 彼此邻近的多糖链之间可以通过肽链部分相互连接， 从而形成三维结构。 溶菌酶专一性 地作用于肽聚糖。
14、分子的N-乙酰胞壁酸与N-乙酰葡萄糖氨之间的糖苷键， 结果使细菌细胞壁 变得松驰， 失去对细胞的保护作用， 最后细胞溶解死亡； 溶菌酶能直接杀灭革兰阳性菌， 在 分泌型免疫球蛋白补体的参与下， 还能杀灭革兰阴性菌： 如大肠埃希氏菌。 溶菌酶还可与各 种诱发炎症的酸性物质结合， 减少细菌内毒素释放， 从而减轻内毒素血症发生， 减缓炎症发 生过程， 并对抗生素有一定增效作用， 改善组织基质的黏多糖代谢， 起到抗菌消炎、 修复组 织的作用。 经试验证明， 用1种纤维素共聚物将人溶菌酶和蛋白水解酶偶联， 可显著提高溶 菌酶抗菌能力， 加速伤口愈合。 0010 第二， 抗病毒。 溶菌酶在中性体液环境下带。
15、有大量正电荷， 可与带有负电荷的病毒 蛋白直接作用， 与DNA、 RNA、 脱附基蛋白相结合形成复盐， 使病毒失活。 在被疱疹病毒感染的 Hela细胞培养液中加溶菌酶后有抑制细胞变性作用。 溶菌酶也可抑制腺病毒生长， 可用于 说 明 书 2/8 页 4 CN 105707649 A 4 带状疱疹、 腮腺炎、 鸡水痘、 肝炎及流感等病毒性疾患治疗。 0011 第三， 增强免疫力。 溶菌酶参与机体内多种免疫反应， 在机体正常防御和非特异性 免疫中具有重要作用。 它可改善和增强巨噬细胞吞噬消化功能， 降低细胞抑制剂导致的白 细胞减少， 结合细菌脂多糖， 减轻内毒素作用， 以达到增强机体抵抗力的目的。。
16、 溶菌酶本身 具有T细胞表位， 能诱导2型(Th2)T辅助细胞反应。 口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性Th1和 Th2免疫反应， 增强免疫功能， 因此， 口服溶菌酶具有控制上呼吸道感染和治疗痢疾的功能。 此外， 溶菌酶还具有激活血小板的功能， 可改善组织局部血液循环障碍， 分解脓液， 增强局 部防卫功能， 从而体现其止血、 消肿及加快机体损伤组织的修复作用。 它还可作为一种宿主 抵抗因子， 对组织局部起保护作用。 0012 溶菌酶是一种无毒、 无害、 安全性很高的高盐基蛋白质， 又具有一定的溶菌作用， 所以将其作为一种天然防腐剂添加在食品工业中将会有广阔的应用价值。 对冷却猪肉的保 鲜期进行研究。
17、， 通过试验得出使用生物保鲜剂溶菌酶并采用真空包装， 保鲜期达到15d 时， 色泽红润、 TVBN值仍在一级鲜度的标准内， 且在整个过程中能有效控制肉样的pH变化， 保鲜效果较好。 GNa液、 溶菌酶、 乳酸菌肽(Nisin)单一因子对冷却肉保鲜效果的比较试验研 究表明， 溶菌酶单独使用时显著优于GNa， 略优于Nisin， 且溶菌酶对抑制细菌总数的增殖、 减缓TVB-N值上升具有及其重要的作用。 当前国内外保鲜剂开发的方向是多种防腐剂混合 形成复合保鲜剂， 这既能扩大原单一保鲜剂的作用范围， 还能降低单一保鲜剂的作用量， 同 时得到更好的保鲜效果。 国外有报道， 乳铁蛋白与溶菌酶联合作用后能。
18、增强抑菌效果， 溶菌 酶首先对细胞壁进行溶解， 乳铁蛋白使胞壁溶解完全或不完全的细菌粘连在一起而产生协 同抑菌作用。 在国内也进行了此方面的研究并取得了一定的成果。 采用复合保鲜的方法对 分割托盘小包装冷却肉的保鲜技术进行了研究， 研究发现在非真空托盘包装保鲜的条件 下， Nisin、 溶菌酶、 GNa的共同使用对细菌的增长有一定抑制作用， 而且能有效抑制脂肪的 酸败。 对溶菌酶、 Nisin在冷却肉中的保鲜效果研究， 结合山梨酸钾保鲜成分， 进行了正交试 验， 根据正交试验结果进行的极差分析， 采用浓度为2.5的Nisin， 浓度为2.5的溶菌酶 和2的山梨酸钾， 用乳酸将这种冷却肉保鲜液调。
19、pH至4.5， 保鲜效果良好， 保鲜时间达到 30d左右。 天然保鲜液对冷却猪肉保鲜效果的研究发现： 由壳聚糖(0.5)、 混合香辛料浸提 液(2.5)、 蜂胶(0.1)、 Nisin-溶菌酶(0.15)和茶多酚(0.5)混合得到的保鲜液贮存 稳定性好， 对各种菌的抑制力均较强， 可使冷却猪肉表面的初始菌数降低1-3个数量级， 在 贮存第21天， 细菌总数、 假单胞菌属、 肠杆菌科、 乳酸菌、 热死环丝菌和嗜冷菌的对数值分别 为5.176、 5.342、 5.000、 5.447、 3.114和3.980， TVB-N值为11.0mg/100g， 7种生物胺指标均达 到保鲜目标要求， 产品色泽。
20、为紫红色， 保鲜效果理想。 研究冷藏条件下用Nisin与溶菌酶等 几种复合生物保鲜剂对三角帆蚌的保鲜效果， 结果表明Nisin和溶菌酶单独使用或混合添 加具有明显的保鲜效果， 混合添加保鲜效果最佳， 在其他相同的情况下， 可延长保鲜期约1 倍或更长的时间。 保鲜剂不只是在冷却肉保鲜中能发挥其栅栏因子的作用， 在肉制品中同 样有效， 研究表明将溶菌酶添加于熟香肠、 色拉米香肠和维也纳香肠， 发现加热处理后溶菌 酶、 NaCl、 NaNO2， 三者结合较单独使用效果要好。 研究表明， 采用0.05Nisin、 0.05溶菌 酶、 2乳酸钠和1双乙酸钠组成的复合防腐保鲜剂、 真空包装和真空包装后低温。
21、二次杀 菌相结合的综合保鲜技术保鲜烧鸡， 能有效抑制烧鸡储藏期间的菌落总数， 延缓TVB-N值和 TBA值的变化， 改善感官质量， 烧鸡在15-20条件下贮藏保质期可达60d。 说 明 书 3/8 页 5 CN 105707649 A 5 0013 乳制品特别是巴氏杀菌奶中添加溶菌酶， 能有效延长其保存期， 一般在包装前加 入300600 g/mL； 另外， 由于溶菌酶具有一定的耐高温性， 因而也可被用于高温瞬间杀菌 奶中。 文献报道溶菌酶经固定化后耐热性提高、 耐酸性增强； 固定化后的溶菌酶与底物壳聚 糖的亲和力下降， 重复使用5次时， 酶活力残留率为57.6。 在奶酪加工中添加一定量的溶 。
22、菌酶可以防止中后期奶酪的起泡、 风味变差， 并且对奶酪老化过程中奶酪基液的品质不造 成影响， 同时还能起到较好的抑菌作用， 不至引起酪酸发酵， 有效防止由于丁酸梭状芽孢杆 菌(Clostridium tyrobutyricum)污染发酵奶酪中的乳酸盐而产气或 “后期的开裂” 现象。 此外， 还能利用溶菌酶生产酵母浸膏和核酸类调味品。 溶菌酶还可作为防腐剂用于蛋糕、 奶 油等极易腐败变质的食品中。 据报道转基因羊能够产生富含溶菌酶的奶， 溶菌酶含量可达 到270mg/L， 占人乳的67。 0014 近年来， 溶菌酶也广泛应用于果蔬的防腐保鲜中， 并且起到了良好的保鲜效果。 溶 菌酶对豆豉和四川泡。
23、菜等热敏感的发酵食品具有防腐抑菌作用， 可有效地抑制发酵食品发 生褐变， 维持原有色泽， 还可极明显地减少食盐用量， 降低泡菜和豆瓣的咸味， 提高产品风 味， 同时避免了高温杀菌对这类食品风味的破坏作用。 此外， 溶菌酶作为一种蛋白质的指示 剂， 可以检测鲜切蔬菜中过敏蛋白质的行为。 0015 因溶菌酶具有杀菌、 抑菌的作用， 近年来， 很多研究学者研究了溶菌酶对水产品的 防腐保鲜效果， 并且取得了良好的成果。 溶菌酶可作为鱼丸等水产熟制品的保鲜剂， 将一定 浓度的溶菌酶溶液喷洒在产品上， 可起到防腐保鲜的作用； 一些新鲜水产品(虾、 蛤蜊肉等) 在0.05的溶酶菌溶液中浸渍5min后， 沥去。
24、水分， 进行低温贮藏， 均可延长贮存期。 0016 荭草苷(orientin)是一种具有生物活性的黄酮类化合物单体， 分布广泛， 如陵齿 蕨科(Lindsaeaceae)乌蕨属植物， 刚竹属(Phyllostachys)竹叶， 木豆(Cajanus cajan(L.) Millsp.)叶， 山楂属光叶桑(Crataegus laevigata)等多种药用植物中均含有该化合物成 分。 荭草苷的分子式为C21H20O11， 分子量448.38， 化学名为2-(3,4-二羟基苯基)-8-beta-D- 吡喃葡萄糖基-5,7二羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮。 0017 荭草苷对大鼠急性心肌缺血具有预。
25、防和治疗的双重作用。 冠状动脉供血不足或心 肌细胞耗氧量增加是导致心肌缺血的主要原因。 实验表明， 提前给予1.0mg/kg的荭草苷可 以明显减小垂体后叶素对大鼠心电图ST段的抬高作用， 表明荭草苷对垂体后叶素所致的急 性心肌缺血具有一定的预防作用； 而皮下注射异丙肾上腺素所致大鼠急性心肌缺血后， 舌 下静脉注射荭草苷可以明显改善心电图ST段抬高的现象， 表明荭草苷对异丙肾上腺素所致 的急性心肌缺血具有一定的治疗作用， 然而其作用机制仍不明确。 进一步研究表明， 预防性 给予荭草苷可以增强心肌梗塞大鼠心肌收缩功能， 减轻心肌缺血程度， 保护缺血心肌， 主要 体现在以下方面： (1)荭草苷干预的。
26、急性心肌梗塞大鼠血清中缺血性心肌酶LDH、 ALT及AST 活性较模型组明显降低， 表明荭草苷可以减轻心肌细胞变性反应， 保护心肌缺血损伤； (2) 荭草苷干预提高急性心肌梗塞大鼠血清中抗氧化酶活性， 减轻心肌代谢产生的自由基对心 肌细胞的损害， 降低心肌梗塞程度。 荭草苷减轻心肌缺血损伤程度可能与调节NO-cGMP信号 通路有关。 此外， 荭草苷还能通过抑制脂质吸收， 促进脂类分解和排泄， 从而抑制动脉粥样 硬化。 荭草苷还具有抗缺氧及抗血小板聚集的作用。 给予小鼠静脉注射不同浓度荭草苷， 发 现小鼠在常压缺氧条件下的存活时间与给予的荭草苷浓度呈剂量依赖性关系。 进一步观察 荭草苷对夹闭气管。
27、的小鼠心电消失时间的影响， 发现给予荭草苷的剂量越高， 心电消失所 说 明 书 4/8 页 6 CN 105707649 A 6 需时间越长。 同时， 研究发现荭草苷可显著抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集， 从而抑制心 肌缺血。 此外， 荭草苷还能显著增加离体豚鼠心脏的冠脉流量， 从而改善心肌缺血的程度， 然而其具体机制尚未阐明。 0018 研究表明， 荭草苷可以在一定浓度范围内剂量依赖性的抑制促凋亡蛋白Bax、 Cty- c、 Caspase-3的表达， 从而减弱心肌I/R诱导的心肌细胞凋亡。 此外， 荭草苷还能够显著增加 新生小鼠心肌细胞中抗凋亡基因bcl-2的表达， 抑制Bax、 Cyt-。
28、c、 Caspase-3表达， 从而抑制 缺氧复氧诱导的新生小鼠心肌细胞凋亡。 进一步研究发现， 这一个抗凋亡过程可能通过 抑制线粒体凋亡通路的激活的方式实现。 首先， I/R导致线粒体功能紊乱并产生R OS， 而ROS 是线粒体通透性转换孔(Mitochondrial permeability transition pore， mPTP)开放的关 键因素， 线粒体内Cty-c释放增加， 可激活Bax等的表达， 而抑制Bcl-2的表达， 可诱导心肌细 胞凋亡。 而荭草苷可以通过抑制受损心肌细胞中PI3K/Akt通路， 从而抑制mPTP的开放， 达到 抑制心肌细胞凋亡的作用。 0019 实验表明。
29、， 荭草苷可以通过干扰内源性凝血系统因子的活性， 抑制纤维蛋白的生 成， 延长小鼠和家兔的凝血时间， 此外， 荭草苷还能显著抑制ADP引起的家兔血小板聚集， 从 而抑制动脉血栓的形成， 但荭草苷不具有纤溶活性。 说明荭草苷的抗血栓活性主要是通过 防止血栓形成实现的。 0020 研究发现， 荭草苷具有抗辐射作用。 小鼠接受11Gy射线全身照射后， 腹腔注射给 予荭草苷可以防止小鼠死于胃肠道综合征和骨髓型综合征， 最佳治疗量为50mg/kg体重， 增 加剂量保护作用不增加。 此外， 小鼠接受1Gy 60Co射线全身照射后， 腹腔注射荭草苷， 与 对照组相比， 可以显著降低胎鼠染色体变异、 成鼠造血。
30、细胞异常， 全血细胞计数恢复至正常 值， 同时可减少肿瘤发生率、 延迟肿瘤扩散。 荭草苷抗辐射的作用机制可能与其抗氧化性有 关， 而其具体机制还未能阐明。 0021 荭草苷还具有镇痛作用。 研究发现荭草苷可以剂量依赖性地抑制乙酸、 辣椒素以 及谷氨酸盐诱导的疼痛， 其镇痛作用是解热镇痛药乙酰水杨酸的20倍， 是吲哚美辛(消炎 痛)镇痛作用的3.5倍。 0022 目前， 以荭草苷为主要药效成分的荭叶心通软胶囊、 荭草复方冻干粉剂制剂已经 应用于临床， 在治疗冠心病、 心绞痛、 心血瘀阻症方面发挥重要作用。 根据目前对荭草苷的 研究可以看出， 荭草苷具有对缺血心肌的保护作用， 可减少心肌缺血再灌注。
31、诱导的心肌细 胞损伤， 同时还表现出抗血栓形成的作用， 这对心肌缺血、 脑缺血等心脑血管疾病的防治具 有重要意义。 此外， 荭草苷在抗凋亡、 镇痛方面也具有显著作用， 说明荭草苷具有广阔的应 用前景。 0023 目前， 将溶菌酶与荭草苷组合用于食品防腐的应用尚未见报道。 发明内容 0024 本发明所要解决的技术问题是提供一种能有效防止食品腐败， 无毒副作用， 活性 成分来源天然的食品防腐剂。 0025 本发明解决上述问题所采用的技术方案是， 提供一种用于食品防腐的组合物， 组 合物中防腐活性成分由溶菌酶和荭草苷组成， 其中溶菌酶占防腐活性成分的重量百分比为 20-80， 荭草苷占防腐活性成分的。
32、重量百分比为80-20。 说 明 书 5/8 页 7 CN 105707649 A 7 0026 优选的， 溶菌酶占防腐活性成分的重量百分比为20-50， 荭草苷占防腐活性成分 的重量百分比为80-50。 0027 更优选的， 溶菌酶和荭草苷占防腐活性成分的重量百分比分别为25和75。 0028 优选的， 所述溶菌酶提取自鸡蛋清。 0029 优选的， 所述组合物中进一步包括食品上可接受的添加剂。 0030 更优选的， 所述食品上可接受的添加剂选自稳定剂、 乳化剂、 增味剂和抗结剂等中 的一种或多种。 0031 最优选的， 所述稳定剂为葡萄糖酸- -内酯； 乳化剂为单硬脂酸甘油酯或蔗糖脂肪 酸酯。
33、， 优选为单硬脂酸甘油酯； 增味剂为氨基乙酸； 抗结剂为二氧化硅或微晶纤维素， 优选 为二氧化硅。 0032 本发明还提供上述防腐组合物在防止食品腐败中的应用。 0033 优选的， 所述食品腐败是由金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、 大肠杆菌、 酿酒酵母 菌或黑曲霉导致的。 0034 本发明具有积极有益的效果： 令人惊奇的是， 经过反复多次试验， 本发明意外发现 将溶菌酶与荭草苷组合使用对于导致食品腐败的多种病菌的防治具有协同增效的效果。 与 传统化学防腐剂相比， 本发明的防腐剂制备方法简单， 配伍合理， 两种活性成分在发挥各自 功效的同时， 又能协同抑制食品中的特定细菌、 酵母菌等， 显著延长。
34、产品的货架寿命。 溶菌 酶和荭草苷来源天然， 无毒副作用。 具体实施方式 0035 下面结合实施例对本发明作更进一步的说明， 但本发明的实施方式不限于此。 下 述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明， 均为常规方法。 实施例和试验例中使用的溶 菌酶均为提取自鸡蛋清中的溶菌酶。 0036 实施例1 0037 称量1重量份的溶菌酶和3重量份的荭草苷， 分别粉碎成细粉后过200目筛， 将两者 混合后倒入搅拌机中搅拌10分钟， 按照要求分装， 包装成袋装， 即得用于食品的防腐组合 物。 0038 实施例2 0039 称量10重量份的溶菌酶和30重量份的荭草苷， 分别粉碎成细粉后过200目筛， 将两 者。
35、混合后与40重量份的葡萄糖酸- -内酯、 10重量份的单硬脂酸甘油酯、 5重量份的氨基乙 酸和5重量份的二氧化硅一同倒入搅拌机中搅拌15分钟， 按照要求分装， 包装成袋装， 即得 用于食品的防腐组合物。 0040 实施例3 0041 称量10重量份的溶菌酶和30重量份的荭草苷， 分别粉碎成细粉后过200目筛， 将两 者混合后与40重量份的葡萄糖酸- -内酯、 10重量份的蔗糖脂肪酸酯、 5重量份的氨基乙酸 和5重量份的微晶纤维素一同倒入搅拌机中搅拌15分钟， 按照要求分装， 包装成袋装， 即得 用于食品的防腐组合物。 0042 实施例4 0043 称量8重量份的溶菌酶和32重量份的荭草苷， 分。
36、别粉碎成细粉后过200目筛， 将两 说 明 书 6/8 页 8 CN 105707649 A 8 者混合后与40重量份的葡萄糖酸- -内酯、 10重量份的单硬脂酸甘油酯、 5重量份的氨基乙 酸和5重量份的二氧化硅一同倒入搅拌机中搅拌15分钟， 按照要求分装， 包装成袋装， 即得 用于食品的防腐组合物。 0044 实施例5 0045 称量32重量份的溶菌酶和8重量份的荭草苷， 分别粉碎成细粉后过200目筛， 将两 者混合后与40重量份的葡萄糖酸- -内酯、 10重量份的单硬脂酸甘油酯、 5重量份的氨基乙 酸和5重量份的二氧化硅一同倒入搅拌机中搅拌15分钟， 按照要求分装， 包装成袋装， 即得 用。
37、于食品的防腐组合物。 0046 试验例1、 本发明防腐组合物在食品防腐中的应用 0047 以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtili)、 大肠杆菌(Escherichia coli)、 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、 黑曲 霉(Aspergillus niger)为指示菌， 用肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏3g， 蛋白胨10g， 氯化钠 15g， 琼脂20g， 水1000mL， pH7.07.2)活化培养金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌和大肠杆 菌， 用马铃薯培养基(马铃薯200mg， 葡萄糖20.。
38、0g， 琼脂2.0g， 水l000mL)活化培养酿酒酵母 菌和黑曲霉。 将培养管分成六组， A组加入2mL溶菌酶防腐剂(浓度为0.1， 无菌水稀释， 下 同)、 B组加入2mL荭草苷防腐剂(浓度为0.1)、 C组加入2mL重量比为2:8的溶菌酶和荭草苷 防腐组合物(含浓度为0.02的溶菌酶和浓度为0.08的荭草苷， 即防腐活性成分总浓度 为0.1)、 D组加入2mL重量比为1:3的溶菌酶和荭草苷防腐组合物(含浓度为0.025的溶 菌酶和浓度为0.075的荭草苷， 即防腐活性成分总浓度为0.1)、 E组加入2mL重量比为8: 2的溶菌酶和荭草苷防腐组合物(含浓度为0.08的溶菌酶和浓度为0.02。
39、的荭草苷， 即防 腐活性成分总浓度为0.1)、 F组加入2mL无菌水作为对照， 各组培养管置于37的恒温培 养箱中培养24h， 在波长560nm处测定其吸光度。 抑菌率采用以下公式计算： 0048 PI(ODC-24h-ODC-0h)-(ODT-24h-ODT-0h)/(ODC-24h-ODC-0h) 0049 式中ODC-24h和ODC-0h分别为对照样品在培养时间为24h和0h的吸光度， ODT-24h和 ODT-0h分别为含防腐剂的测试样品在培养时间为24h和0h的吸光度。 抑菌率的大小表示抑菌 效果的高低， 抑菌率值越大， 表明抑菌效果越好。 对上述五种防腐剂分别进行抑菌效果的测 定，。
40、 具体试验结果参见表1。 0050 表1本发明防腐组合物对各种微生物的抑菌效果 0051 说 明 书 7/8 页 9 CN 105707649 A 9 0052 0053 上述试验结果表明， 使用各种配比的本发明防腐组合物可抑制多种不同菌种， 证 实本发明防腐组合物在防止食物腐败方面的效果显著。 特别是在活性成分总量保持不变的 情况下， 使用本发明含溶菌酶和荭草苷的防腐组合物较单独使用含溶菌酶或荭草苷的防腐 剂， 对各类微生物的抑菌率明显提高， 证明溶菌酶和荭草苷的组合使用产生了协同效果， 减 少了活性成分的使用量。 其中溶菌酶与荭草苷重量比为1:3的防腐组合物效果最为突出， 产 生了难以预期的优异效果。 说 明 书 8/8 页 10 CN 105707649 A 10 。