一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法.pdf

本发明涉及一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，属于农药残留的理化检测技术领域。本发明蔬菜中55种农药残留量的测定方法包括以下步骤：样品制备；样品前处理：称取样品，加水浸泡，有机溶剂提取，PSA填料去除色素杂质，氮气吹至近干，以流动相溶解残渣，溶液经滤膜过滤供GPC-GC-MS分析；标准溶液的配制；在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱议测定。本发明的一种测定蔬菜中55种农药残留量的在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱法，操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，回收率和重复性好。

权利要求书
1.  一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）样品制备：将样品绞碎匀浆，冷冻保存；
（2）样品前处理：称取冷冻的样品于50.0 mL聚丙烯塑料离心管中，加入5.0 mL去离子水，浸泡10分钟，加入乙腈，15000 rpm均质2 min，均质后加入氯化钠和无水硫酸钠，9000 rpm离心10 min，吸取上清液5 mL于离心管中；在离心管中加入PSA填料，涡旋2.0 min后，9000 rpm离心10 min，吸取上清液10 mL于试管中；温度45℃下水浴，高纯氮气吹至近干；用1 mL丙酮+环己烷定容，经0.22 μm微孔有机滤膜过滤，供在线凝胶色谱-气相色谱质谱分析；
（3）标准溶液的配制：混合标准工作液用丙酮、环己烷稀释；
（4）在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱测定：配制不同浓度的混合标准工作液，注入配有在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱仪中；
（5）残留量测定结果的计算：以保留时间与SIM方法相结合进行55种农药的定性分析，以峰面积进行55种农药的定量分析，用外标法计算结果。

2.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：所述样品为菠菜。

3.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：步骤（1）所述冷冻保存条件是-18℃保存。

4.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：步骤（2）所述的乙腈的加入量为每克样品加入5 mL，所述的氯化钠和无水硫酸钠的加入量为每克样品分别加入1克氯化钠和1克无水硫酸钠，所述的PSA填料的加入量为每毫升提取液加入10 mg。

5.  根据权利要求1或4所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：所述氯化钠和无水硫酸钠在使用前，均在马弗炉内400℃烘干。

6.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：步骤（2）所述丙酮∶环己烷的体积比是3∶7。

7.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：步骤（4）所述混合标准工作液的系列梯度浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5 μg/mL。

8.  根据权利要求1所述一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，其特征在于：步骤（5）所述采用的GPC 条件：色谱柱：Shodex CLNpak EV-200，2.1 mm×150 mm；流动相：体积比3/7的丙酮/环己烷；流速：0.1 mL/min；柱温：40℃；进样量：10 μL；GCMS 条件：色谱柱：惰性石英管：5 m×0.53 mm；预柱：Rtx-5 MS，5 m×0.25 mm×0.25 μm；分析柱：Rtx-5 MS，25 m×0.25 mm×0.25 μm；PTV进样口温度：120℃；柱温程序：82℃、5 min-8℃/min-300℃、7.75 min；载气：氦气；不分流进样：7 min；溶剂延迟：9.7 min；接口温度：300℃；离子源温度：230℃；采集方式：离子监测模式。

9.  一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法的应用，其特征在于：根据权利要求1~8任一项所述方法在检测蔬菜农药残留量中的应用。

说明书一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法
技术领域
本发明涉及一种蔬菜中农药残留量的测定方法，具体涉及一种蔬菜中55种农药残留测定的在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱方法，属于农药残留的理化检测技术领域。
背景技术
蔬菜与人们的日常生活密切相关，随着人们生活水平的提高，人们已经开始关注蔬菜的质量问题，人们不但蔬菜的营养成分，还关注其质量问题。
20世纪80年代以来，温室、大棚等保护地蔬菜种植面积迅速增加，重茬、连作导致蔬菜病虫害加重，各地在防治蔬菜病虫害中，大量和连续地使用化学农药，使得蔬菜病虫对化学农药产生了普遍的抗药性，菜农只能加大农药的使用量，由此，农药使用和依赖程度呈现出恶性循环状态，使得蔬菜中农药残留量超标问题突出。目前使用的农药，有些在较短时间内可以通过生物降解成为无害物质，而一些有机氯类农药却难以降解，是残留性强的农药。
化学农药的主要危害是化学农药在蔬菜作物上未完全降解的残留物进入食物，造成食物污染，直接毒害人畜。食用农药残留特别是有机磷农药残留严重超标的蔬菜、会直接危及人体的神经系统和肝、肾等重要器官，有的人在农药中毒后会出现头晕、头痛、腹痛、食欲减退、视觉模糊、恶心、呕吐、多汗等症状，重度中毒者还会出现胸部有挤压感、肌肉颤抖等，严重的可出现脉博、呼吸加快及潜质昏迷症状，甚至引起急性中毒而致死。长期食用受污染的蔬菜，残留农药在人体内蓄积过一定限度后会导致一些慢性疾病，如癌症、动脉硬化、心血管病、胎儿畸形、死胎、早夭、早衰等疾病。农药残留不但对人体健康造成极大的危害，同时也严重污染人类生存环境，造成空气、土壤、河流等污染，并在环境中不断积累起来，造成动植物中毒，破坏了生态平衡。
目前，国内外报道的农药残留检测多采用气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。由于气相色谱法一般只能够同时分析检测一类化合物，难以满足多类多残留分析的发展趋势。
在线凝胶色谱串联气相色谱质谱技术是由GPC纯化前处理装置与GC/MS在 线联接组成，采用微型GPC色谱柱的分离能力与新开发的GC/MS大体积进样法，实现了农药残留的多组份的同时快速分析。通过在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱技术检测农药有些报道，杨惠琴利用在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱技术对食品中的杀菌剂进行了分析，检出限为0.01μg/kg；郑健琨等通过在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱技术，对土壤中36种农药进行了研究。但这类文献往往仅限于几种或一类农药残留进行分析检测，通过在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱技术分析蔬菜中的多类农药残留，还未见报道，因此，发明一种快速高效的多农残检测方法是非常有必要的。
中国发明“一种蔬果中有机磷农药残留测定的提取净化方法”，申请号201310175339.0公开了一种蔬果中有机磷农药残留测定的方法；中国发明“辣椒红色素中有机磷农残的检测方法”，申请号201210220762.3公开了一种辣椒红色素中有机磷农残的检测方法。这些检测方法只能检测少数种类的残留农药，不能进行相对全面的农药残留检测。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，回收率和重复性好的蔬菜中55种农药残留测定的方法。
为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：
一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，包括如下步骤：
(1)样品制备：将样品绞碎匀浆，冷冻保存；
(2)样品前处理：称取冷冻的样品于50.0mL聚丙烯塑料离心管中，加入5.0mL去离子水，浸泡10分钟，加入乙腈，15000rpm均质2min，均质后加入氯化钠和无水硫酸钠，9000rpm离心10min，吸取上清液5mL于离心管中；在离心管中加入PSA填料，涡旋2.0min后，9000rpm离心10min，吸取上清液10mL于试管中；温度45℃下水浴，高纯氮气吹至近干；用1mL丙酮+环己烷定容，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，供在线凝胶色谱-气相色谱质谱分析；
(3)标准溶液的配制：混合标准工作液用丙酮：环己烷稀释；
(4)在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱测定：配制不同浓度的混合标准工作液，注入配有在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱仪中；
(5)残留量测定结果的计算：以保留时间与SIM方法相结合进行55种农 药的定性分析，以峰面积进行55种农药的定量分析，用外标法计算结果；所述样品为菠菜；步骤(1)所述冷冻保存条件是-18℃；
步骤(2)所述加入乙腈的体积为每克样品加入5mL，所述加入氯化钠和无水硫酸钠的质量为每克样品分别加入1克氯化钠和1克无水硫酸钠，所述PSA填料的量为，每毫升提取液加入10mg的PSA填料；
所述氯化钠和无水硫酸钠在使用前，均在马弗炉400℃烘干；步骤(2)所述定容液丙酮+环己烷的体积比是3+7；步骤(3)所述溶剂丙酮：环己烷的体积比为3:7；步骤(4)所述混合标准工作液的系列梯度浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5μg/mL；
步骤(5)所述采用的GPC条件：色谱柱：Shodex CLNpak EV-200(2.1mm×150mm)；流动相：体积比3+7的丙酮/环己烷；流速：0.1mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；GCMS条件：色谱柱：惰性石英管：5m×0.53mm；预柱：Rtx-5MS，5m×0.25mm×0.25μm；分析柱：Rtx-5MS，25m×0.25mm×0.25μm；PTV进样口温度：120℃；柱温程序：82℃(5min)-8℃/min-300℃(7.75min)；载气：氦气；不分流进样：7min；溶剂延迟：9.7min；接口温度：300℃；离子源温度：230℃；采集方式：离子监测模式。
本发明的有益效果是：
用本方法检测蔬菜农药残留量，农药品种覆盖面广，处理操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，是一种回收率和重复性好的测定蔬菜农药残留量的方法。
附图说明
图1：55种农药的标准质谱图(浓度为0.1μg/mL)：
图中1-10依次为：甲胺磷，敌敌畏，乙酰甲胺磷，敌百虫，氧乐果，灭线磷，治螟磷，亚胺硫磷，久效磷，乐果；图中11-20依次为：特丁硫磷，地虫硫磷，二嗪磷，磷铵，倍硫磷，对硫磷，水胺硫磷，甲基异柳磷，硫环磷，喹硫磷；图中21-29依次为：杀扑磷，丙溴磷，三唑磷，甲基对硫磷，杀螟硫磷，马拉硫磷，毒死蜱，伏杀硫磷，蝇毒磷；图中30-39依次为:α-666，五氯硝基苯，β-666，γ-666，三唑酮，三氯杀螨醇，稻丰散，腐霉利，硫丹，p,p'-DDE；图中40-49依次为：p,p'-DDD,o,p'-DDT，百菌清,δ-666，乙烯菌核利，异菌脲，p,p'-DDT，甲氰菊酯，氯氟氰菊酯，氯菊酯；图中50-55依次为：氟氯氰菊酯，氟胺氰菊酯， 氯氰菊酯，氟氰戊菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯；
图2：蔬菜空白样品选择离子流图；
图3：蔬菜样品55种农药总离子流色谱图(浓度为0.1μg/mL)。
具体实施方式
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1
一种蔬菜中55种农药残留量测定的方法，包括如下步骤：
(1)样品制备：测定5个菠菜样品，将样品打浆，-18℃条件下冷冻保存；
(2)样品前处理：称取5g冷冻的样品于50.0mL聚丙烯塑料离心管中，加入5.0mL去离子水，浸泡10分钟，加入20.0mL乙腈，15000rpm均质2min，均质后加入5.0g氯化钠和5.0g无水硫酸钠，9000rpm离心10min，吸取上清液5mL于离心管中；在离心管中加入PSA填料50mg，涡旋2.0min后，9000rpm离心10min，吸取上清液10mL于试管中；温度45℃下水浴，高纯氮气吹至近干；用1mL丙酮+环己烷(体积比3+7)定容，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，供在线凝胶色谱-气相色谱质谱分析；
(3)标准溶液的配制：混合标准工作液用丙酮：环己烷(体积比为3:7)稀释；
(4)在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱测定：配制不同浓度的混合标准工作液，注入配有在线凝胶色谱串联气相色谱-质谱仪中，混合标准工作液的系列梯度浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5μg/mL；
(5)残留量测定结果的计算：以保留时间与SIM方法相结合进行55种农药的定性分析，以峰面积进行55种农药的定量分析，用外标法计算结果，结果在三个菠菜样品中检测到农药，结果见表1。
表1菠菜样品中残留农药的含量



重复性和回收率的测定。
采用阴性菠菜样品(55种农药均无检出)进行测定，以3倍信噪比确定分析物的检测限，以10倍信噪比确定分析物的定量限，结合回收率和样品量，方法的定量检出限为10-30ug/kg，采用样品中添加标准溶液的方法，在同样的样品处理下对55种农药进行加标回收率实验，结果见表2。
表2菠菜中55种农药进行加标回收率(n＝5)


表3在线凝胶色谱-气相色谱质谱测定蔬菜中55种目标化合物的特征离子、相关系数、检出限
表3在线凝胶色谱-气相色谱质谱测定菠菜样品中55种目标化合物的回收率及标准偏差(n＝5)


以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非是对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。