C型肝炎病毒复制的新颖抑制剂
相关申请案交叉参考
本申请案主张在2007年2月12日提出申请的美国临时申请案第60/889,433号的权益，所述案件全部以引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及用于治疗C型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、其合成方法、组合物及方法。
背景技术
在美国，C型肝炎病毒(HCV)感染是最常见的慢性血液传染感染。尽管新感染的人数减少了，但慢性感染造成的负担是巨大的，据疾病控制中心估计，在美国有3,900,000(1.8％)受感染人员。在美国，慢性肝脏疾病是造成成年人死亡的第十大主导因素且每年可造成大约25,000人死亡或大约占所有死亡人数的1％。研究表明40％的慢性肝脏疾病是与HCV相关，据估计，每年造成8,000-10,000人死亡。与HCV有关的末期肝脏疾病是成年人肝脏移植的最常见适应症。
在过去十年期间，慢性C型肝炎的抗病毒疗法发展迅速并取得了显著的治疗功效改良。然而，即使使用聚乙二醇化IFN-α+利巴韦林实施组合疗法，仍有40％至50％患者治疗失败，即，为无应答者或复发者。对于此等患者目前尚无有效的替代治疗方式。具体来说，根据肝脏活组织检查患有晚期肝纤维化或肝硬化的患者处于发展成晚期肝脏疾病并发症(包括腹水、黄疸、静脉曲张破裂出血、脑病、及进行性肝脏衰竭)的重大风险以及显著增强的肝细胞癌瘤风险中。
在美国，慢性HCV感染的高发病率对于未来慢性肝脏疾病的负担来说具有重要的公共健康意义。得自国家健康和营养检查调查(NHANES III)的数据表明自20世纪60年代晚期到20世纪80年代初期新HCV感染发生率大幅增加，主要发生在年龄为20岁到40岁的人员中。据估计，长期承受HCV感染(20年或更长时间)的人员数目在从1990年到2015期间可翻两番以上，即，从750,000到3,000,000以上。感染30年或40年的人员的相对增长数可能会甚至更大。由于患与HCV相关的慢性肝脏疾病的风险与感染时程相关且感染长达20年以上的人员患肝硬化的风险逐级增加，结果此会在1965年到1985年期间感染的人员中导致与肝硬化相关的发病率和死亡率大大地增加。
HCV在黄病毒科家族中是有包膜的正链RNA病毒。单链HCV RNA基因组的长度为大约9500个核苷酸且具有编码含约3000个氨基酸的单一大多聚蛋白的单一开放阅读框架(ORF)。在受感染细胞中，此多聚蛋白在多个位点处经细胞和病毒蛋白酶切割而产生所述病毒的结构和非结构(NS)蛋白。在HCV情形中，成熟非结构蛋白(NS2、NS3、NS4、NS4A、NS4B、NS5A、及NS5B)的产生受两种病毒蛋白酶的影响。第一种病毒蛋白酶在所述多聚蛋白的NS2-NS3接点处切割。第二种病毒蛋白酶是在NS3的N-末端区域内所含丝氨酸蛋白酶(本文称作“NS3蛋白酶”)。NS3蛋白酶介导在所述多聚蛋白中相对于NS3位置在下游的位点(即，位于NS3的C-末端与多聚蛋白的C-末端之间的位点)处的所有后续切割事件。NS3蛋白酶在呈顺式(在NS3-NS4切割位点处)及呈反式时对残留NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B位点均呈现活性。据信，NS4A蛋白具有多种功能，用作NS3蛋白酶的辅因子且可能帮助NS3和其它病毒复制酶组份进行膜定位。显而易见，在NS3与NS4A之间形成复合体为NS3介导的处理事件所必需并会增强由NS3识别的所有位点处的蛋白水解功效。NS3蛋白酶还呈现核苷三磷酸酶和RNA解旋酶的活性(对应于RNA解旋酶活性的蛋白区域在本文中称作“NS3解旋酶”)。作为复制前的必需步骤，活性解旋酶对病毒RNA解螺旋。据认为，NS3解旋酶对于拟发生在细胞中的病毒复制来说十分重要且因此抑制NS3结构域是治疗人类HCV复制的具有吸引力的方法。NS5B是参与HCV RNA复制的RNA依赖性RNA聚合酶。
文献
贾里纳里(Gallinari)，P.(1998)病毒学杂志(Journal of Virology)，第6758-6769页；吉姆(Kim)，J.W.(2003)病毒学杂志(Journal of Virology)，第57l-582页；陈(Chang)，S.C.(2000)病毒学杂志(Journal of Virology)，第9732-9737页；菲利普(Phillip)，S.P.(2002)欧洲分子生物学组织杂志(The EMBO Journal)21(5)：1168-1176；萨密尔(Sameer)，S.和伟兰卡(Velankar)(1999)细胞(Cell)97：75-84，；塞拉布(Serebrov)，V.自然(Nature)430：476-480。
发明内容
本发明提供通式(I)化合物
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其中：n为自0至3的整数；
R1选自由下述组成的群组：H、-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；或者R1不存在且当Z2为O或S时n为0；
其中如果R1为-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么n不为0：
A1和A2独立地选自由任选地经取代的芳基和任选地经取代的杂芳基组成的群组；
L1为氧基、C1-6烷氧基、-NR5C(O)-烷基-、-NR5C(O)CH2S-、-NR5CH2-或不存在；
L2为-CR3aR3b-、-CR3aR3bCR3aR3b-、-CR3a＝CR3a-、或不存在；
每一R3a和每一R3b独立地选自由下述组成的群组：H、卤素、羟基、NH3+、-NHC(O)NH2、-NHC(O)OR9、-NHC(O)R9、及任选地经取代的：C1-6烷基、环烷基-烷基、杂环基-烷基、杂芳烷基、芳烷基、或芳基，或者R3a和R3b一起形成氧代基；
R3a和R2一起任选地形成任选地经取代的环烷基或任选地经取代的杂环基；
Y选自由下述组成的群组：H、卤素、乙炔基、-C(O)H、-CN、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)NHSO2R9、-PO3H2、1H-四唑-5-基、1H-1，2，4-三唑-5-基、1H-吡唑-5-基、1，2-二氢-1，2，4-三唑-3-酮-5-基、及1，2-二氢-吡唑-3-酮-5-基，
其中如果Y为H，那么：
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的芳基，或
R1为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；
R7选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R10选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、或不存在，或者R7和R10一起形成任选地经取代的环或环系统；
R11选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基、或不存在；
每一Z1独立地为C或N；
Z2为CH、N、O、或S；
Z3为C或N；
R2选自由下述组成的群组：H、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-C(O)NHCH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、-C(O)-烷基、芳基、-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，
其中如果R1不为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么：
R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-CH2-(任选地经取代的杂芳基)、和任选地经取代的-C(O)-芳烷基，
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的杂芳烷基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且至少一个Z1为N，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R10为苯基或-O-苄基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R11为-O-(任选地经取代的苯基)，或
Y为-C(O)OH或-C(O)H，R7为-O-苄基且R10为-O-甲基；
R4为H或任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R5和R6各自独立地选自由下述组成的群组：H、CN、及任选地经取代的：C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-杂环基-C(O)OR4、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、或环烷基-烷基，或者R5和R6一起形成任选地经取代的环或环系统；且
R9选自由烷基、环烷基、及芳基组成的群组；
限制条件为：
如果R1为吡啶、嘧啶、或喹啉，或者如果R1为萘且n不为0，那么Y不为CO2H；
如果R1为未经取代苯基，那么Y不为-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C(O)O-t-Bu、-C(O)OBn、-C(O)NMe2、-C(O)NEt2、或-C(O)N(i-Pr)2；
如果n小于3且R1为未经取代苯基或未经取代联苯基且Y为-C(O)OH，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OH且R1为经单一卤素、-SO2Me、-OCF3、-OCF2CF3、-OCF2CF2H、-NC(O)CH2Br、-Me、-SCH3、或-t-Bu取代的苯基或者R1为与二氧戊环稠合的苯基，那么R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OMe且R1为经单一Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)OEt且R1为经单一卤素、-SO2Me、-NH2、-OH、-OCH3、或-NO2、或两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-(经取代苯基)且R1为经两个C1取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-烷基-苯基且R1为未经取代苯基或经单一Br取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果n为0且R1为未经取代苯基或经单一甲基取代的苯基，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基、A1为未经取代苯基、A2为经单一CF3取代的苯基、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1不存在、A1为苯并呋喃、A2为噻唑、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；且
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基或不存在、A1为未经取代苯基、A2为未经取代苯基、R2为烷基、且Y为-C(O)O-烷基，那么R7为-OBn。
其它实施例提供具有下列定义的式I化合物：
n为自0至3的整数；
R1选自由下述组成的群组：H、-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、-C(O)-杂芳基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；或者R1不存在且当Z2为O或S时n为O；
其中如果R1为-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么n不为0：
A1和A2独立地选自由任选地经取代的芳基和任选地经取代的杂芳基组成的群组；
L1为氧基、C1-6烷氧基、-NR5C(O)-烷基-、-NR5C(O)CH2S-、-NR5CH2-、-NR5或不存在；
L2为-CR3aR3b-、-CR3aR3bCR3aR3b-、-CR3a＝CR3a-、或不存在；
每一R3a和每一R3b独立地选自由下述组成的群组：H、卤素、羟基、NH3+、-NHC(O)NH2、-NHC(O)OR9、-NHC(O)R9、-C(O)R4及任选地经取代的：C1-6烷基、环烷基-烷基、杂环基-烷基、杂芳烷基、芳烷基、或芳基，或者R3a和R3b一起形成氧代基；
R3a和R2一起任选地形成任选地经取代的环烷基或任选地经取代的杂环基；
Y选自由下述组成的群组：H、卤素、乙炔基、-C(O)H、-CN、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)NHSO2R9、-C(O)NHOR4、-C(O)OCH3OC(O)R4、-NHC(O)R4、-C(O)NHOR4、-C(O)OCH3OR4、-PO3H2、1H-四唑-5-基、1H-1，2，4-三唑-5-基、1H-吡唑-5-基、1，2-二氢-1，2，4-三唑-3-酮-5-基、及1，2-二氢-吡唑-3-酮-5-基，
其中如果Y为H，那么：
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的芳基，或
R1为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；
R7选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R10选自由下述组成的群组：H、卤素、-CN、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、或不存在，或者R7和R10一起形成任选地经取代的环或环系统；
R11选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基、或不存在；
每一Z1独立地为C或N；
Z2为CH、N、O、或S；
Z3为C或N；
R2选自由下述组成的群组：H、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-C(O)NHCH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、-C(O)-烷基、芳基、-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，
其中如果R1不为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么：
R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-CH2-(任选地经取代的杂芳基)、及任选地经取代的-C(O)-芳烷基，
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的杂芳烷基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且至少一个Z1为N，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R10为苯基、经一个或多个氨基取代的苯基、或-O-苄基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R11为-O-(任选地经取代的苯基)，或
Y为-C(O)OH或-C(O)H，R7为-O-苄基且R10为-O-甲基；
R4为H或任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环基、或杂芳烷基；
R5和R6各自独立地选自由下述组成的群组：H、CN、及任选地经取代的：C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-杂环基-C(O)OR4、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、或环烷基-烷基，或者R5和R6一起形成任选地经取代的环或环系统；且
R9选自由烷基、环烷基、及芳基组成的群组；
限制条件为：
如果R1为吡啶、嘧啶、或喹啉，或者如果R1为萘且n不为0，那么Y不为CO2H；
如果R1为未经取代苯基，那么Y不为-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C(O)O-t-Bu、-C(O)OBn、-C(O)NMe2、-C(O)NEt2、或-C(O)N(i-Pr)2；
如果n小于3且R1为未经取代苯基或未经取代联苯基且Y为-C(O)OH，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn、Br、或经一个或多个氨基取代的苯基；
如果Y为-C(O)OH且R1为经单一卤素、-SO2Me、-OCF3、-OCF2CF3、-OCF2CF2H、-NC(O)CH2Br、-Me、-SCH3、或-t-Bu取代的苯基或者R1为与二氧戊环稠合的苯基，那么R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OMe且R1为经单一Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)OEt且R1为经单一卤素、-SO2Me、-NH2、-OH、-OCH3、或-NO2、或两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn或R10为经一个或多个硝基取代的苯基；
如果Y为-C(O)O-(经取代苯基)且R1为经两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-烷基-苯基且R1为未经取代苯基或经单一Br取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果n为0且R1为未经取代苯基或经单一甲基取代的苯基，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基、A1为未经取代苯基、A2为经单一CF3取代的苯基、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1不存在、A1为苯并呋喃、A2为噻唑、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；且
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基或不存在、A1为未经取代苯基、A2为未经取代苯基、R2为烷基、且Y为-C(O)O-烷基，那么R7为-OBn。
本发明实施例提供一种抑制NS3/NS4解旋酶活性的方法，其包含使NS3/NS4解旋酶与本文所揭示化合物接触。
本发明实施例提供一种通过调节NS3/NS4解旋酶来治疗肝炎的方法，其包含使NS3/NS4解旋酶与本文所揭示化合物接触。
优选实施例提供一种包含优选化合物的医药组合物；及医药上可接受的载剂。
优选实施例提供一种治疗个体C型肝炎病毒感染的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
优选实施例提供一种治疗个体肝脏纤维化的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
优选实施例提供一种增强具有C型肝炎病毒感染的个体的肝脏功能的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
优选实施例提供一种调节NS3活性的方法，其包含使NS3蛋白与本文所揭示化合物接触。
优选实施例提供一种通过调节NS3解旋酶来治疗肝炎的方法，其包含使NS3解旋酶与本文所揭示化合物接触。
附图说明
图1绘示描绘NS3于各种缓冲液存在时的解旋酶活性的图表。
图2A绘示描绘对于各种浓度NS3酶来说NS3解旋酶活性随着时间变化的图表。
图2B绘示描绘解螺旋反应初始速率(RFU/秒)随着NS3酶浓度变化的图表。
图2C绘示描绘对于各种浓度NS3酶来说解螺旋反应初始速率(RFU(平均))随着时间变化的图表。
图2D绘示描绘解螺旋反应幅值(最终RFU)随着酶浓度变化的图表。
图3绘示描绘NS3解旋酶在包含不同量MgCl2的溶液中的活性的图表。
图4A和4B绘示描绘NS3解旋酶在包含不同量ATP的检验中的活性的图表。
图5A和5B绘示描绘NS3解旋酶在包含不同量寡核苷酸底物的检验中的活性的图表。
图5C绘示描绘各绘图斜率的图表，其绘示NS3解旋酶在包含不同量寡核苷酸底物的检验中的活性随着寡核苷酸底物浓度的变化。
具体实施方式
定义
如本文所用术语“肝纤维化”与“肝脏纤维化”在本文中可互换使用，是指在慢性肝炎感染中可能出现于肝脏中的瘢痕组织生长。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”及“患者”在本文中可互换使用且是指哺乳动物，包括但不限于灵长类动物，包括猿类及人类。
如本文所用术语“肝脏功能”是指肝脏的正常功能，包括但不限于合成功能，包括但不限于诸如血清蛋白(例如，白蛋白、凝血因子、碱性磷酸酶、氨基转移酶(例如，丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)、5′-核苷酶、γ-谷酰胺基转肽酶等)等蛋白的合成、胆红素的合成、胆固醇的合成、及胆汁酸的合成；肝脏代谢功能，包括但不限于碳水化合物代谢、氨基酸和氨代谢、激素代谢、及脂质代谢；外源药物的解毒；血液动力学功能，包括内脏和门静脉血液动力学；及诸如此类。
如本文所用术语“持续病毒应答”(SVR；也称作“持续应答”或“持久应答”)是指个体对HCV感染治疗方案的应答，以血清HCV效价计。一般来说，“持续病毒应答”是指在停止治疗后至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、或至少约6个月期间在患者血清中未发现可检测HCV RNA(例如，少于约500、少于约200、或少于约100基因组拷贝每毫升血清)。
如本文所用“治疗失败患者”通常是指对先前HCV疗法没有产生应答的HCV感染患者(称作“非应答者”)或开始对先前疗法有应答但在其中没有维持治疗应答的HCV感染患者(称作“复发者”)。先前疗法通常可包括用IFN-α单一疗法或IFN-α组合疗法进行治疗，其中所述组合疗法可包括投与IFN-α和诸如利巴韦林等抗病毒剂。
如本文所用术语“治疗”(“treatment”、“treating”及诸如此类)是指获得期望的药理学及/或生理学效应。该效应可为预防性的(从完全或部分防止疾病或其症状方面来说)及/或可为治疗性的(从部分或完全治愈疾病及/或可造成所述疾病的不良影响方面来说)。如本文所用“治疗(Treatment)”涵盖哺乳动物(尤其是人类)的任何疾病治疗且包括：(a)防止在可能易患所述疾病但尚未诊断为患有所述疾病的受试者中出现所述疾病；(b)抑制所述疾病，即，阻止其发展；及(c)减轻所述疾病，即，造成所述疾病退行。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”及“患者”在本文中可互换使用且是指哺乳动物，包括但不限于鼠类、猿类、人类、哺乳类农场动物、哺乳类体育动物、及哺乳类宠物。
如本文所用术语“I型干扰素受体激动剂”是指任何天然或非天然人类I型干扰素受体配体，所述配体结合所述受体并通过所述受体达成信号转导。I型干扰素受体激动剂包括干扰素，包括天然干扰素、经修饰干扰素、合成干扰素、聚乙二醇化干扰素、包含干扰素和异源蛋白的融合蛋白、改组干扰素；干扰素受体特异性抗体；非肽类化学激动剂；及诸如此类。
如本文所用术语“II型干扰素受体激动剂”是指任何天然或非天然人类II型干扰素受体配体，所述配体结合所述受体并通过所述受体达成信号转导。II型干扰素受体激动剂包括天然人类干扰素-γ、重组IFN-γ物种、糖基化IFN-γ物种、聚乙二醇化IFN-γ物种、经修饰IFN-γ物种或变型体IFN-γ物种、IFN-γ融合蛋白、所述受体的特异性抗体激动剂、非肽类激动剂、及诸如此类。
如本文所用术语“III型干扰素受体激动剂”是指任何天然或非天然人类人类IL-28受体(“IL-28R”)配体，所述配体的氨基酸序列由谢帕德(Sheppard)等人阐述，所述配体结合所述受体并通过所述受体达成信号转导。
如本文所用术语“干扰素受体激动剂”是指任何I型干扰素受体激动剂、II型干扰素受体激动剂、或III型干扰素受体激动剂。
如本文所用术语“给药事件”是指对有需要的患者投与抗病毒剂，所述事件可涵盖抗病毒剂自药物配制装置释放一次或多次。因此，如本文所用术语“给药事件”包括但不限于安装连续递送装置(例如，泵或其它控制释放可注射系统)；及单次皮下注射继而安装连续递送系统。
如本文所用“连续递送”(例如，在“将药品连续递送给组织”中)意欲指药物到达递送位点的运动，例如，以在选定时段内将期望量的药品供入组织中的方式进入所述组织中，同时在所述选定时段内患者每分钟接收大约相同量的药物。
如本文所用“控制释放”(例如，在“控制药物释放”中)意欲涵盖药品(例如，I型或III型干扰素受体激动剂，例如，IFN-α)以选定或其它可控制速率、间隔及/或量释放，此基本不受使用环境的影响。因此，“控制释放”涵盖但不一定限于基本连续递送及模式化递送(例如，在一段时间内以有规则或无规则时间间隔中断的间歇递送)。
如在药物递送中所用“模式化”或“暂时”意指在预选定时段(例如，与诸如推注有关的时期以外的时段)内以一定模式(通常为基本规则的模式)递送药物。“模式化”或“暂时”药物递送意欲涵盖以递增、递减、基本恒定或脉动速率或速率范围(例如，每单位时间的药物量或每单位时间的药物调配物体积)递送药物且进一步涵盖连续的或基本连续的或缓慢的递送。
术语“受控药物递送装置”意欲涵盖其中药物或其中所含其它期望药品的释放(例如，速率、释放时间)受所述装置本身控制或取决于所述装置本身且基本不受使用环境的影响或者释放以在使用环境内可再现的速率进行。
如在(例如)“基本连续输注”或“基本连续递送”中所用“基本连续”意欲指药物以在预选定药物递送期内基本无中断的方式递送，其中在所述预选定时期中在任一8小时间隔期间被所述患者接收的药物量不会低至零。而且，“基本连续”药物递送亦可涵盖药物以基本恒定、预选定速率或速率范围(例如，每单位时间的药物量或单位时间的药物调配物体积)递送，所述递送在预选定药物递送期内基本没有中断。
在涉及可随时间变化的生物参数的上下文中所用的“基本稳定状态”意指所述生物参数在一段时程内呈现基本恒定的数值以使得通过随时间变化的生物参数值在所述时程期间的任何8小时时期内界定的曲线下面积(AUC8hr)高于或低于所述生物参数在所述时程期间的8小时时期平均曲线下面积(AUC8hr平均值)的量不大于约20％或在约20％以下且优选地不大于约15％或在约15％以下，且更优选地不大于约10％或在约10％以下。所述AUC8hr平均值定义为所述生物参数在整个时程内的曲线下面积(AUC总值)除以在所述时程内8小时间隔的数目(总值/3天)的商值(q)，即，q＝(AUC总值)/(总值/3天)。举例来说，在药物的血清浓度中，当所述药物在所述时程期间于任何8小时时期内随时间变化的血清浓度曲线下面积(AUC8hr)比所述药物在所述时程内于任何8小时期间的平均血清浓度曲线下面积(AUC8hr平均值)高或低不大于约20％时，即，当所述AUC8hr比所述药物血清浓度在所述时程内的AUC8hr平均值高或低不大于20％时，所述药物的血清浓度在此段时程内维持在基本稳定状态。
本文所用术语“烷基”是指具有1个至20个碳原子的单价直链或具支链原子团，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基、及诸如此类。
本文所用术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
本文所用术语“烷氧基”是指经由--O--链接基团共价键结到母体分子的直链或具支链烷基原子团。烷氧基基团的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基及诸如此类。
本文所用术语“烯基”是指具有2个至20个碳原子且含有一个碳双键的单价直链或具支链原子团，包括但不限于1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、及诸如此类。
本文所用术语“炔基”是指具有2个至20个碳原子且含有一个碳三键的单价直链或具支链原子团，包括但不限于1-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、及诸如此类。
本文所用术语“芳基”是指经稠合或未经稠合的同素环状芳香族原子团。芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、并四苯基、及诸如此类。所述芳基可与其它芳基环、杂芳基环、环烷基环、环烯基环、或杂环基环稠合。
本文所用术语“环烷基”是指具有3个至20个碳原子的饱和脂肪族环系统原子团，包括但不限于环丙基、环戊基、环己基、环庚基、及诸如此类。所述环烷基可与其它环烷基环、芳基环、杂芳基环、环烯基环、或杂环基环稠合。
本文所用术语“环烯基”是指具有3个至20个碳原子且在环中具有至少一个碳碳双键的脂肪族环系统原子团。环烯基基团的实例包括但不限于环丙烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、及诸如此类。所述环烯基可与其它环烯基环、芳基环、杂芳基环、环烷基环、或杂环基环稠合。
本文所用术语“多环烷基”是指具有至少两个使用桥头碳或不使用桥头碳稠合的环的饱和脂肪族环系统原子团。多环烷基基团的实例包括但不限于二环[4.4.0]癸烷基、二环[2.2.1]庚烷基、金钢烷基、降冰片基、及诸如此类。
本文所用术语“多环烯基”是指具有至少两个使用桥头碳或不使用桥头碳稠合的环的脂肪族环系统原子团，其中至少一个环具有一个碳碳双键。多环烯基基团的实例包括但不限于降冰片烯基(norbornylenyl)、1，1′-二环戊烯基、及诸如此类。
本文所用术语“多环状烃”是指其中所有环成员均为碳原子的环系统原子团。多环状烃可为芳香族或可含有少于最大非累计双键数目的双键。多环状烃的实例包括但不限于萘基、二氢萘基、茚基、茀基、及诸如此类。
本文所用术语“杂环状”或“杂环基”是指具有至少一个环系统且其中一个或多个环原子不为碳(即，杂原子)的非芳香族环状环系统原子团。杂环状基团的实例包括但不限于吗啉基、四氢呋喃基、二氧戊环基、吡咯啶基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、及诸如此类。所述杂环基可与其它杂环基环、芳基环、杂芳基环、环烷基环、或环烯基环稠合。
本文所用术语“杂芳基”是指维持呈单环或多环芳香系统的杂环状基团，无论一个或多个环在形式上是分别通过三价还是二价杂原子置换一个或多个次甲基及/或亚乙烯基基团而衍生自芳烃。杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、吡咯基、噁唑基、吲哚基、及诸如此类。所述杂芳基可与其它杂芳基环、芳基环、环烷基环、环烯基环、或杂环基环稠合。
本文所用短语“环或环系统”是指环烷基、环烯基、多环烷基、多环烯基、杂环基、或杂芳基原子团。
本文所用术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指附接到烷基原子团的一个或多个芳基基团。芳基烷基基团的实例包括但不限于苄基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、及诸如此类。
本文所用术语“环烷基烷基”是指附接到烷基原子团一个或多个环烷基基团。环烷基烷基的实例包括但不限于环己基甲基、环己基乙基、环戊基甲基、环戊基乙基、及诸如此类。
本文所用术语“杂芳基烷基”或“杂芳烷基”是指附接到烷基原子团的一个或多个杂芳基基团。杂芳基烷基的实例包括但不限于吡啶基甲基、呋喃基甲基、苯硫基乙基、及诸如此类。
本文所用术语“杂环基烷基”是指附接到烷基原子团的一个或多个杂环基基团。杂环基烷基的实例包括但不限于吗啉基甲基、吗啉基乙基、吗啉基丙基、四氢呋喃基甲基、吡咯啶基丙基、及诸如此类。
本文所用术语“芳氧基”是指经由--O--链接基团共价键结到母体分子的芳基原子团。
本文所用术语“烷硫基”是指经由--S--链接基团共价键结到母体分子的直链或具支链烷基原子团。烷氧基基团的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、正丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基及诸如此类。
本文所用术语“芳硫基”是指经由--S--链接基团共价键结到母体分子的芳基原子团。
本文所用术语“烷基氨基”是指连接一个或多个烷基基团的氮原子团。因此，单烷基氨基是指连接一个烷基基团的氮原子团且二烷基氨基是指连接两个烷基基团的氮原子团。
本文所用术语“氰基氨基”是指连接腈基团的氮原子团。
本文所用术语“氨基甲酰基”是指RNHCOO-。
本文所用术语“酮基”和“羰基”是指C＝O。
本文所用术语“羧基”是指-COOH。
本文所用术语“氨磺酰基”是指-SO2NH2。
本文所用术语“磺酰基”是指-SO2-。
本文所用术语“亚磺酰基”是指-SO-。
本文所用术语“硫代羰基”是指C＝S。
本文所用术语“硫代羧基”是指CSOH。
本文所用术语“C-酰胺基”是指-C(O)NR2，其中每一R独立地为H或C1-C6烷基。
本文所用术语“N-酰胺基”是指-NR2C(O)R，其中每一R独立地为H或C1-C6烷基。
如本文所用，原子团指示具有单一未配对电子以使得含有所述原子团的物质可共价键结到另一物质上的物质。因此，在此上下文中，原子团不一定为自由基。而是，原子团指示一个较大分子的一个特定部分。术语“原子团(radical)”与术语“基团(group)”可互换使用。
如本文所用，经取代基团源自未经取代母体结构，其中已有一个或多个氢原子换为另一原子或基团。当经取代时，所述经取代基团为一个或多个分别地独立地选自下述的基团：C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基(例如，四氢呋喃基)、芳基、芳烷基、杂芳基、卤素(例如，氯、溴、碘和氟)、氰基、羟基、羟基-C1-C6烷基、卤化C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤化C1-C6烷氧基(例如，全卤化C1-C6烷氧基)、芳氧基、氢硫基(巯基)、C1-C6烷硫基、芳硫基、单-和二-(C1-C6)烷基氨基、季铵盐、氨基(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷硫基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷基氨基、氰基氨基、硝基、N-氨基甲酰基(例如，-NHC(O)O-叔丁基、-N(环丙基)C(O)O-叔丁基等)、C-氨基甲酸基、酮基(氧基)、羰基、O-羧基(例如，-OC(O)CH3等)、脲、C-羧基(例如，-C(O)OCH3、-C(O)O-烷基等)、C1-C6-烷基羧基、C-酰胺基(例如，-C(O)N(CH3)2、-C(O)NH2等)、N-酰胺基(例如，-N(CH3)C(O)CH3、-NHC(O)CH3、-N(CH3)C(O)H、-N(CH2CH3C(O)H等)、C1-C6-烷基-OC(O)NH-C1-C6-烷基、羟乙酰基、氨基乙酰基、肼基、脒基、氨磺酰基、磺酰基(例如，C1-C6-烷基磺酰基、羟基-C1-C6-烷基磺酰基)、磺酰基氨基(例如，C1-C6-烷基磺酰基氨基(例如，-N(CH3)SO2CH3))、亚磺酰基、硫代羰基、硫代羧基、及其组合。可形成上述取代基的保护性衍生物的保护基团为所属领域的人员所熟知且可参见诸如格林(Greene)和伍兹(Wuts)，有机合成的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)；约翰威利(John Wiley)和森(Sons)：纽约(New York)，1999等参考文献。每当将取代基阐述为“任选地经取代的”时，所述取代基可经上述取代基取代。
在所述化合物中可存在不对称碳原子。所有此等同分异构体，包括非对映异构体和对映异构体以及其混合物均意欲包括于所述化合物的范围内。在某些情形中，化合物可以互变异构体形式存在。所有互变异构体形式均意欲包括于所述范围内。同样，当化合物含有烯基或亚烯基基团时，所述化合物有存在顺式-和反式-同分异构体形式的可能性。本发明涵盖顺式-和反式-同分异构体二者以及顺式-和反式-同分异构体的混合物。因此，除非在上下文中明确地指明，否则本文所述及化合物包括所有的上述同分异构体形式。
在本发明实施例中包括各种形式，包括多晶型物、溶剂化物、水合物、构象异构体、盐、和前药衍生物。多晶型物是一种具有相同化学式但具有不同结构的组合物。溶剂化物是一种通过溶剂化作用(溶剂分子与溶质的分子或离子组合)形成的组合物。水合物是一种通过纳入水形成的化合物。构象异构体是一种构象同分异构体结构。构象异构化是具有相同结构式但若干原子绕一旋转键结呈不同构象(构象异构体)的现象。化合物的盐可借助所属领域人员已知的方法来制备。举例来说，化合物的盐可通过使适当碱或酸与化学计量当量的所述化合物反应来制备。前药是一种在经历生物转化(化学转化)后呈现其药理效益的化合物。举例来说，一种前药因此可视为一种含有用于暂时地改变或消除母体分子不期望特性的专门保护基团的药物。因此，除非在上下文中明确地指明，否则本文所述化合物包括所有的上述形式。
当提供一个数值范围时，应理解，本发明各实施例涵盖所述范围的上限与下限之间的每一中间值以及所述范围内的任一其它指定值或中间值，除非上下文中明确地指明，否则精确至下限值单位的十分之一。本发明也涵盖可独立地包括在较小范围内的这些较小范围的上限和下限，除去任一明确不包括在所述范围内的限值。当所述范围包括所述限值的一者或两者时，各实施例也包括不包括那些所包括限值两者中的任一者的范围。
除非另外说明，否则本文所用所有技术和科学术语均具有与所述实施例所属领域的一名普通人员通常所理解的含义相同的含义。尽管任何与那些本文所述者相似或等效的方法和材料也可以用于所述实施例的实践或测试，但现在阐述优选方法和材料。本文所述所用公开案件均以引用的方式并入本文中以揭示和阐述与所述公开案相关联的方法及/或材料。
必须注意：如本文及在随附权利要求书中所用，除非在上下文中明确地指明，否则单数形式“一”、“和”及“所述”均包括复数个指示物。因此，举例来说，当提及“一种方法”时，包括复数个所述方法且当提及“一剂”时包括述及一剂或多剂及其那些所属技术领域人员已知的等效形式，等等。
本发明各实施例提供式I化合物以及包含任一式I化合物的医药组合物和调配物。标题化合物可用于治疗HCV感染和其它病症，如下文所述。
组合物
本发明各实施例提供通式(I)化合物
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其中：n为自0至3的整数；
R1选自由下述组成的群组：H、-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；或者R1不存在且当Z2为O或S时n为0；
其中如果R1为-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么n不为0：
A1和A2独立地选自由任选地经取代的芳基和任选地经取代的杂芳基组成的群组；
L1为氧基、C1-6烷氧基、-NR5C(O)-烷基-、-NR5C(O)CH2S-、-NR5CH2-或不存在；
L2为-CR3aR3b-、-CR3aR3bCR3aR3b-、-CR3a＝CR3a-、或不存在；
每一R3a和每一R3b独立地选自由下述组成的群组：H、卤素、羟基、NH3+、-NHC(O)NH2、-NHC(O)OR9、-NHC(O)R9、及任选地经取代的：C1-6烷基、环烷基-烷基、杂环基-烷基、杂芳烷基、芳烷基、或芳基，或者R3a和R3b一起形成氧代基；
R3a和R2一起任选地形成任选地经取代的环烷基或任选地经取代的杂环基；
Y选自由下述组成的群组：H、卤素、乙炔基、-C(O)H、-CN、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)NHSO2R9、-PO3H2、1H-四唑-5-基、1H-1，2，4-三唑-5-基、1H-吡唑-5-基、1，2-二氢-1，2，4-三唑-3-酮-5-基、及1，2-二氢-吡唑-3-酮-5-基，
其中如果Y为H，那么：
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的芳基，或
R1为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；
R7选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R10选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、或不存在，或者R7和R10一起形成任选地经取代的环或环系统；
R11选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基、或不存在；
每一Z1独立地为C或N；
Z2为CH、N、O、或S；
Z3为C或N；
R2选自由下述组成的群组：H、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-C(O)NHCH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、-C(O)-烷基、芳基、-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，
其中如果R1不为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么：
R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-CH2-(任选地经取代的杂芳基)、和任选地经取代的-C(O)-芳烷基，
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的杂芳烷基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且至少一个Z1为N，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R10为苯基或-O-苄基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R11为-O-(任选地经取代的苯基)，或
Y为-C(O)OH或-C(O)H，R7为-O-苄基且R10为-O-甲基；
R4为H或任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R5和R6各自独立地选自由下述组成的群组：H、CN、及任选地经取代的：C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-杂环基-C(O)OR4、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、或环烷基-烷基，或者R5和R6一起形成任选地经取代的环或环系统；且
R9选自由烷基、环烷基、及芳基组成的群组；
限制条件为：
如果R1为吡啶、嘧啶、或喹啉，或者如果R1为萘且n不为0，那么Y不为CO2H；
如果R1为未经取代苯基，那么Y不为-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C(O)O-t-Bu、-C(O)OBn、-C(O)NMe2、-C(O)NEt2、或-C(O)N(i-Pr)2；
如果n小于3且R1为未经取代苯基或未经取代联苯基且Y为-C(O)OH，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OH且R1为经单一卤素、-SO2Me、-OCF3、-OCF2CF3、-OCF2CF2H、-NC(O)CH2Br、-Me、-SCH3、或-t-Bu取代的苯基或者R1为与二氧戊环稠合的苯基，那么R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OMe且R1为经单一Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)OEt且R1为经单一卤素、-SO2Me、-NH2、-OH、-OCH3、或-NO2、或两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-(经取代苯基)且R1为经两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-烷基-苯基且R1为未经取代苯基或经单一Br取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果n为0且R1为未经取代苯基或经单一甲基取代的苯基，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基、A1为未经取代苯基、A2为经单一CF3取代的苯基、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1不存在、A1为苯并呋喃、A2为噻唑、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；且
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基或不存在、A1为未经取代苯基、A2为未经取代苯基、R2为烷基、且Y为-C(O)O-烷基，那么R7为-OBn。
在一些替代实施例中，式I化合物具有下列定义：
n为自0至3的整数；
R1选自由下述组成的群组：H、-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、-C(O)-杂芳基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；或者R1不存在且当Z2为O或S时n为0；
其中如果R1为-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么n不为0：
A1和A2独立地选自由任选地经取代的芳基和任选地经取代的杂芳基组成的群组；
L1为氧基、C1-6烷氧基、-NR5C(O)-烷基-、-NR5C(O)CH2S-、-NR5CH2-、-NR5或不存在；
L2为-CR3aR3b-、-CR3aR3bCR3aR3b-、-CR3a＝CR3a-、或不存在；
每一R3a和每一R3b独立地选自由下述组成的群组：H、卤素、羟基、NH3+、-NHC(O)NH2、-NHC(O)OR9、-NHC(O)R9、-C(O)R4及任选地经取代的：C1-6烷基、环烷基-烷基、杂环基-烷基、杂芳烷基、芳烷基、或芳基，或者R3a和R3b一起形成氧代基；
R3a和R2一起任选地形成任选地经取代的环烷基或任选地经取代的杂环基；
Y选自由下述组成的群组：H、卤素、乙炔基、-C(O)H、-CN、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)NHSO2R9、-C(O)NHOR4、-C(O)OCH3OC(O)R4、-NHC(O)R4、-C(O)NHOR4、-C(O)OCH3OR4、-PO3H2、1H-四唑-5-基、1H-1，2，4-三唑-5-基、1H-吡唑-5-基、1，2-二氢-1，2，4-三唑-3-酮-5-基、及1，2-二氢-吡唑-3-酮-5-基，
其中如果Y为H，那么：
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的芳基，或
R1为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基；
R7选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基；
R10选自由下述组成的群组：H、卤素、-CN、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、或不存在，或者R7和R10一起形成任选地经取代的环或环系统；
R11选自由下述组成的群组：H、卤素、-CH＝CH-C(O)OR4、-OR4、-SR4、-CH2NHC(O)OR4、-CH2NHSO2R9、-CH2NHC(O)R4、及任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烷基烷氧基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂芳烷基、或不存在；
每一Z1独立地为C或N；
Z2为CH、N、O、或S；
Z3为C或N；
R2选自由下述组成的群组：H、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-C(O)NHCH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：烷基、-C(O)-烷基、芳基、-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，
其中如果R1不为-A1-L1-A2或任选地经取代的：芳基、杂芳基、-C(O)-芳基、-C(O)-芳烷基、或-C(O)-杂环基-芳烷基，那么：
R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、-CH2-(任选地经取代的杂芳基)、及任选地经取代的-C(O)-芳烷基，
至少一个R3a或R3b为任选地经取代的杂芳烷基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且至少一个Z1为N，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R10为苯基、经一个或多个氨基取代的苯基、或-O-苄基，
Y为-C(O)OH或-C(O)H且R11为-O-(任选地经取代的苯基)，或
Y为-C(O)OH或-C(O)H，R7为-O-苄基且R10为-O-甲基；
R4为H或任选地经取代的：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂环基、或杂芳烷基；
R5和R6各自独立地选自由下述组成的群组：H、CN、及任选地经取代的：C1-6烷基、C3-7环烷基、杂环基、-杂环基-C(O)OR4、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、或环烷基-烷基，或者R5和R6一起形成任选地经取代的环或环系统；且
R9选自由烷基、环烷基、及芳基组成的群组；
限制条件为：
如果R1为吡啶、嘧啶、或喹啉，或者如果R1为萘且n不为0，那么Y不为CO2H；
如果R1为未经取代苯基，那么Y不为-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C(O)O-t-Bu、-C(O)OBn、-C(O)NMe2、-C(O)NEt2、或-C(O)N(i-Pr)2；
如果n小于3且R1为未经取代苯基或未经取代联苯基且Y为-C(O)OH，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn、Br、或经一个或多个氨基取代的苯基；
如果Y为-C(O)OH且R1为经单一卤素、-SO2Me、-OCF3、-OCF2CF3、-OCF2CF2H、-NC(O)CH2Br、-Me、-SCH3、或-t-Bu取代的苯基或者R1为与二氧戊环稠合的苯基，那么R7为-OBn或Br；
如果Y为-C(O)OMe且R1为经单一Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)OEt且R1为经单一卤素、-SO2Me、-NH2、-OH、-OCH3、或-NO2、或两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn或R10为经一个或多个硝基取代的苯基；
如果Y为-C(O)O-(经取代苯基)且R1为经两个Cl取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果Y为-C(O)O-烷基-苯基且R1为未经取代苯基或经单一Br取代的苯基，那么R7为-OBn；
如果n为0且R1为未经取代苯基或经单一甲基取代的苯基，那么R2选自由下述组成的群组：-C(O)-A1-L1-A2、-CH2-A1-L1-A2、-C(O)CH2-A1-L1-A2、及任选地经取代的：-C(O)-芳基、芳烷基、-C(O)-芳烷基、或杂芳烷基，或R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基、A1为未经取代苯基、A2为经单一CF3取代的苯基、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；
如果R1为-A1-L1-A2、L1不存在、A1为苯并呋喃、A2为噻唑、且Y为-C(O)OH，那么R7为-OBn；且
如果R1为-A1-L1-A2、L1为甲氧基或不存在、A1为未经取代苯基、A2为未经取代苯基、R2为烷基、且Y为-C(O)O-烷基，那么R7为-OBn。
本发明提供一种抑制NS3解旋酶活性的方法，其包括使NS3解旋酶与本文所揭示化合物接触。
本发明提供一种通过调节NS3解旋酶来治疗肝炎的方法，其包括使NS3解旋酶与本文所揭示化合物接触。
例示性式I化合物陈述于表1至39中且其中所揭示化合物係如下文所示。
优选化合物包括下文所述化合物100-795。
优选实施例提供一种治疗个体C型肝炎病毒感染的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
优选实施例提供一种治疗个体肝脏纤维化的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
优选实施例提供一种增强具有C型肝炎病毒感染的个体的肝脏功能的方法，所述方法包含对所述个体投与有效量的包含优选化合物的组合物。
本发明各实施例进一步提供包含通式I化合物(包括其盐、酯或其它衍生物)的组合物，包括医药组合物。标题医药组合物包含标题化合物及医药上可接受的赋形剂。诸多医药上可接受的赋形剂为所属领域所知且不必具体地论述于本文中。医药上可接受的赋形剂详细地阐述于多个公开文献中，包括，举例来说，A.吉纳罗(Gennaro)(2000)“雷明顿(Remington)：制药科学和实践(The Science and Practice of Pharmacy)，”第20版，利宾各特(Lippincott)，威廉姆(Williams)和威尔金(Wilkins)；医药剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)(1999)H.C.安斯艾尔(Ansel)等人编辑，第7版，利宾各特(Lippincott)，威廉姆(Williams)和威尔金(Wilkins)：及医药赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.吉布(Kibbe)等人编辑，第3版，美国医药协会(Amer.Pharmaceutical Assoc.)。
诸如媒剂、佐剂、载剂或稀释剂等医药上可接受的赋形剂可被公众容易地获得。而且，诸如pH调节剂和缓冲剂、渗透调节剂、稳定剂、润湿剂及诸如此类等医药上可接受的辅助物质可被公众容易地获得。
在许多实施例中，标题化合物抑制C型肝炎病毒(HCV)NS3解旋酶的酶活性。可使用任何已知方法来容易地确定标题化合物是否可抑制HCV NS3解旋酶。典型方法涉及测定于所述药剂存在时NS3解旋酶介导的解螺旋是否受到抑制。在许多实施例中，与不存在所述化合物时NS3的酶活性相比，标题化合物可抑制至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％、或更多的NS3酶活性。
在许多实施例中，标题化合物可抑制具有少于约50μM IC50的HCV NS3解旋酶的酶活性，例如，标题化合物可抑制具有少于约40μM、少于约25μM、少于约10μM、少于约1μM、少于约500nM、少于约250nM、少于约125nM、或更小IC50的HCV NS3解旋酶。
在许多实施例中，标题化合物可抑制C型肝炎病毒(HCV)NS3解旋酶的酶活性。可使用任何已知方法来容易地确定标题化合物是否可抑制HCV NS3解旋酶。在许多实施例中，与不存在所述化合物时NS3的酶活性相比，标题化合物可抑制至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％、或更多的NS3酶活性。
在许多实施例中，标题化合物可抑制HCV病毒复制。举例来说，与不存在所述化合物时的HCV病毒复制相比，标题化合物可抑制至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％、或更多的HCV病毒复制。可使用所属领域已知的方法来确定标题化合物是否可抑制HCV病毒复制，包括活体外病毒复制检验。
治疗肝炎病毒感染
本文所述方法和组合物通常可用于治疗HCV感染。
可通过病毒负载减少、血清转变时间缩短(在患者血清中不可检测到病毒)、对疗法的持续病毒应答速率提高、在临床结果中的发病率或死亡率减少、或其它疾病应答指标来确定标题方法是否可有效地治疗HCV感染。
一般来说，式I化合物和(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可有效地减少病毒负载或达成对疗法持续病毒应答的量。
可通过测量病毒负载或通过测量与HCV感染有关的参数(包括但不限于肝脏纤维化、血清转氨酶含量升高、及肝脏坏死性炎症活性)来确定标题方法是否可有效地治疗HCV感染。肝脏纤维化的指标具体地论述于下文中。
所述方法涉及投与有效量的式I化合物，任选地与有效量的一种或多种额外抗病毒组合投与。在一些实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可有效地将病毒效价降低至不可检测程度的量，例如，至约1000、至约5000、至约500、至约1000或至约100、至约500基因组拷贝/mL血清。在一些实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可有效地将病毒负载减少至低于100基因组拷贝/mL血清的量。
在一些实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可在个体血清中有效地达成1.5-log、2-log、2.5-log、3-log、3.5-log、4-log、4.5-log、或5-log病毒效价降低的量。
在许多实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可有效地达成持续病毒应答的量，例如，在停止治疗后至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、或至少约6个月期间于患者血清中检测不到或基本检测不到HCV RNA(例如，少于约500、少于约400、少于约200，或少于约100基因组拷贝每毫升血清)。
如上文所述，可通过测量诸如肝脏纤维化等与HCV感染有关的参数来确定标题方法是否可有效地治疗HCV感染。在下文中详细地论述确定肝脏纤维化程度的方法。在一些实施例中，肝脏纤维化的血清标记物含量表明肝脏纤维化程度。
作为一个非限制性实例，使用标准检验测量血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量。一般来说，少于约45国际单位的ALT含量被视为正常的。在一些实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是可有效地将ALT含量减少至少于约45IU/ml血清的量。
式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是与未经治疗个体或经安慰剂治疗个体的肝脏纤维化标记物血清含量相比可有效地将所述标记物含量减少至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、或至少约80％或更多的量。测量血清标记物的方法包括基于免疫学的方法，例如，酶联免疫吸附检验(ELISA)、放射免疫检验及诸如此类，使用给定血清标记物的特异性抗体。
在许多实施例中，式I化合物和额外抗病毒剂的有效量是协同量。如本文所用，式I化合物和额外抗病毒剂的“协同组合”或“协同量”是与可从仅仅加合性地组合下述来预计或期望的治疗结果递增改良相比可更有效地治疗性或预防性地治疗HCV感染的组合剂量：(i)当以与单一疗法相同的剂量投与时，式I化合物的治疗性或预防性益处和(ii)当以与单一疗法相同的剂量投与时额外抗病毒剂的治疗性或预防性益处。
在一些实施例中，选择量的式I化合物和选择量的额外抗病毒剂在用于疾病的组合疗法中时有效但所述选择量的式I化合物及/或所述选择量的额外抗病毒剂在用于所述疾病的单一疗法中时无效。因此，本发明各实施例涵盖(1)其中选择量的额外抗病毒剂在用于疾病的组合疗法中时增强选择量的式I化合物的治疗益处的治疗方案，其中所述选择量的额外抗病毒剂在用于所述疾病的单一疗法中并不提供治疗益处；(2)其中选择量的式I化合物在用于疾病的组合疗法中时增强选择量的额外抗病毒剂的治疗益处的治疗方案，其中所述选择量的式I化合物在用于所述疾病的单一疗法中时并不提供治疗益处；及(3)其中选择量的式I化合物及选择量的额外抗病毒剂在用于疾病的组合疗法中时提供治疗益处的治疗方案，其中所述选择量的式I化合物与所述选择量的额外抗病毒剂各自在分别用于所述疾病的单一疗法中时并不提供治疗益处。如本文所用“协同有效量”的式I化合物和额外抗病毒剂及其语法等效的表述形式应理解为包括上述(1)-(3)中任一者所涵盖的任何治疗方案。
肝纤维化
本发明各实施例提供治疗肝脏纤维化(包括由HCV感染造成的或与之相关的若干肝脏纤维化形式)的方法，通常涉及投与治疗量的式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂。有效量的式I化合物(与或不与一种或多种额外抗病毒剂一起)以及给药方案陈述于下文中。
可通过用于测量肝脏纤维化和肝脏功能的许多公认技术中的任何一种来确定用式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂治疗是否可有效地减少肝脏纤维化。通过分析肝脏活组织检查试样来确定肝脏纤维化减少。肝脏活组织检查分析包含对两个主要部分的评估：评估坏死性炎症的“等级”，其作为严重性和进行中疾病活动的量度；以及评估纤维化损伤与器质或血管重构的“阶段”，其可反应长期疾病的进程。参见，例如，布朗特(Brunt)(2000)肝脏病学(Hepatol).31：241-246；及METAVIR(1994)肝脏病学(Hepatology)20：15-20。根据肝脏活组织检查分析来指定评分。存在可提供肝纤维化程度和严重程度的定量评估的许多标准化评分系统。这些包括METAVIR、诺达尔(Knodell)、舒德(Scheuer)、路德维格(Ludwig)、和伊沙克(Ishak)评分系统。
METAVIR评分系统是基于肝脏活组织检查各种特征的分析，包括肝纤维化(门静脉肝纤维化、中央小叶肝纤维化、和肝硬化)；坏死(麦片状和小叶状坏死、嗜酸性收缩、和气球样变性)；炎症(肝门束炎症、门静脉集合淋巴结、和门静脉炎症散布)；胆管变化；及诺达尔(Knodell)指数(门静脉周围坏死、小叶状坏死、门静脉炎症、肝纤维化、和总体疾病活性的评分)。在METAVIR系统中每一阶段的界定如下：评分：O，无肝纤维化；评分：1，肝门束星状增大但无间隔形式；评分：2，肝门束增大且有稀少间隔形成；评分：3，有许多间隔但无肝硬化；及评分：4，肝硬化。
诺达尔(Knodell′s)评分系统(也称为肝炎活性指数)是基于四个组织学特征类别的评分来划分样本：I.门静脉周围及/或桥接坏死；II.小叶内变性和局灶性坏死；III.门静脉炎症；及IV.肝纤维化。在诺达尔(Knodell)分期系统中，评分如下：评分：O，无肝纤维化；评分：1，轻度肝纤维化(纤维门静脉扩张)；评分：2，中度肝纤维化；评分：3，严重肝纤维化(桥接肝纤维化)；及评分：4，肝硬化。评分愈高，则肝脏组织损害愈严重。诺达尔(Knodell)(1981)肝脏病学(Hepatol).1：431。
在舒德(Scheuer)评分系统中，评分如下：评分：0，无肝纤维化；评分：1，纤维肝门束增大；评分：2，门静脉周围或门静脉-门静脉有间隔，但无完整体系结构；评分：3，肝纤维化和体系结构变形，但无明显的肝硬化；评分：4，很可能有或肯定有肝硬化。舒德(Scheuer)(1991)肝脏病学杂志(J.Hepatol.)13：372。
伊沙克(Ishak)评分系统阐述于伊沙克(Ishak)(1995)肝脏病学杂志(J.Hepatol).22：696-699中。0期，无肝纤维化；1期，某些门管区的纤维化扩大，有或无短纤维间隔；2期，大部分门管区的纤维化扩大，有或无短纤维间隔；3期，大部分门管区的纤维化扩大且偶有门静脉-门静脉(P-P)桥接；4期，门管区的纤维化扩大且有明显的桥接(P-P)以及门静脉-中心静脉(P-C)桥接；5期，明显的桥接(P-P及/或P-C)且偶有结节(不完全肝硬化)；6期，很可能有或肯定有肝硬化。
也可借助蔡-普氏(Child-Pugh)评分系统来测量和评估抗纤维化疗法的益处，所述蔡-普氏评分系统包含基于在血清胆红素含量、血清白蛋白含量、凝血酶原时间、腹水的存在和严重程度、及脑病的存在和严重程度方面的异常的多元点系统(multicomponent point system)。根据这些参数异常的存在和严重程度，可将患者划入严重程度递增的三个类别的临床疾病之一中：A、B、或C。
在一些实施例中，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是根据治疗前和治疗后肝脏活组织检查可使纤维化阶段改变1个或更多个单位的量。在特定实施例中，治疗有效量的式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂在METAVIR、诺达尔(Knodell)、舒德(Scheuer)、路德维格(Ludwig)、及伊沙克(Ishak)评分系统中可使肝脏纤维化减少至少一个单位。
也可使用肝脏功能二级或间接指数评价式I化合物的治疗功效。也可通过基于肝脏纤维化的胶原及/或血清标记物特定染色的计算机化半自动形态测定评估来衡量肝脏纤维化量化程度以指示标题治疗方法的功效。肝脏功能的二级指数包括但不限于血清转氨酶含量、凝血酶原时间、胆红素、血小板计数、门静脉压力、白蛋白含量、及蔡-普氏评分评估。
式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的有效量是与未经治疗个体或经安慰剂治疗个体的肝脏功能指数相比可有效地使肝脏功能指数增加至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、或至少约80％、或更多的量。所属领域的技术人员能够使用标准检验方法容易地测量所述肝脏功能指数，其中许多检验方法可购得且在临床环境中经常使用。
也可测量肝脏纤维化血清标记物以指示标题治疗方法的功效。肝脏纤维化的血清标记物包括但不限于透明质酸、N-末端前胶原III肽、IV型胶原的7S结构域、C-末端前胶原I肽、和层粘连蛋白。肝脏纤维化的额外生物化学标记物包括α-2-巨球蛋白、触珠蛋白、γ球蛋白、载脂蛋白A、及γ谷氨酰转肽酶。
式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是与未经治疗个体或经安慰剂治疗个体的肝脏纤维化标记物的血清含量相比可有效地使所述标记物含量减少至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、或至少约80％、或更多的量。所属领域的技术人员能够使用标准检验方法容易地测量所述肝脏纤维化血清标记物，其中许多可购得且在临床环境中经常使用。测量血清标记物的方法包括基于免疫学的方法，例如，酶联免疫吸附检验(ELISA)、放射免疫检验及诸如此类，使用给定血清标记物的特异性抗体。
肝脏储备功能的定量测试也可用于评估干扰素受体激动剂和吡非尼酮(或吡非尼酮类似物)的治疗功效。这些包括：吲哚花青绿清除率(ICG)、半乳糖消除能力(GEC)、氨基比林呼吸试验(ABT)、安替比林(antipyrine)清除率、单乙基甘油二甲基苯胺(MEG-X)清除率、及咖啡因清除率。
如本文所用“与肝脏硬化有关的并发症”是指一种作为失代偿性肝脏疾病后遗症，即，或在肝脏纤维化发展后或作为肝脏纤维化发展结果的病症，且包括但不限于形成腹水、静脉曲张破裂出血、门静脉高血压、黄疸、进行性肝脏功能不足、脑病、肝细胞癌瘤、需要肝脏移植的肝脏衰竭、及与肝脏相关的死亡率。
式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是与未经治疗个体或经安慰剂治疗个体相比可有效地将与肝脏硬化有关的病症发病率(例如，个体会发展成的可能性)减少至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、或至少约80％、或更多的量。
所属领域的技术人员可容易地确定用式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂进行治疗是否可有效地减少与肝脏硬化有关的病症发病率。
肝脏纤维化减少，肝脏功能增强。因此，本发明实施例提供用于增强肝脏功能的方法，通常涉及投与治疗有效量的式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂。肝脏功能包括但不限于诸如血清蛋白(例如，白蛋白、凝血因子、碱性磷酸酶、氨基转移酶(例如，丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)、5′-核苷酶、γ-谷酰胺基转肽酶等)等蛋白的合成、胆红素的合成、胆固醇的合成、及胆汁酸的合成；肝脏代谢功能，包括但不限于碳水化合物代谢、氨基酸和氨代谢、激素代谢、及脂质代谢；外源药物的解毒；血液动力学功能，包括内脏和门静脉血液动力学；及诸如此类。
所属领域的技术人员使用公认的肝脏功能试验可容易地确定肝脏功能是否增强。因此，诸如白蛋白、碱性磷酸酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、胆红素、及诸如此类等肝脏功能的标记物合成可通过使用标准免疫学和酶促检验测量这些标记物在血清中的含量来评估。可使用标准方法通过门静脉楔压及/或抵抗来测量内脏循环和门静脉血液动力学。可通过测量氨在血清中的含量来测量代谢功能。
可通过使用标准免疫学和酶促检验来测量由肝脏正常分泌的血清蛋白的含量来确定所述蛋白是否在正常范围内。所属领域的技术人员知道所述血清蛋白的正常范围。下列是非限制性实例。丙氨酸转氨酶的正常含量是约45IU每毫升血清。天冬氨酸转氨酶的正常范围是自约5个至约40个单位每升血清。使用标准检验测量胆红素。正常胆红素含量通常少于约1.2mg/dL。使用标准检验测量血清白蛋白含量。血清白蛋白的正常含量是在自约35至约55g/L的范围内。使用标准检验测量凝血酶原时间的延长。正常凝血酶原时间是比对照长不足约4秒。
式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是可有效地将肝脏功能增强至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或更大的量。举例来说，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量是可有效地将肝脏功能血清标记物的高含量减少至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或更多的量或者是可有效地将肝脏功能血清标记物的含量减少到在正常范围内的量。式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂的治疗有效量也是可有效地将肝脏功能血清标记物的低含量增加至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或更多的量或者是可有效地将肝脏功能血清标记物的含量增加到在正常范围内的量。
剂量、调配物、及投与途径
在标题方法中，可使用任一能够达成期望治疗效果的方便方式对宿主投与活性药剂(例如，式I化合物及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂)。因此，所述药剂可纳入各种用于治疗性投药的调配物中。更具体来说，本发明各实施例的药剂可通过与适当的医药上可接受的载剂或稀释剂组合来调配成医药组合物且可以固体、半固体、液体或气体形式调配成各种制剂，例如，片剂、胶囊、粉剂、颗粒、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂和气溶胶。
调配物
可使用熟知的试剂和方法来调配上述活性药剂。组合物可与医药上可接受的赋形剂一起以调配物提供。诸多医药上可接受的赋形剂为所属领域所知且不必具体地论述于本文中。医药上可接受的赋形剂详细地阐述于多个公开文献中，包括，举例来说，A.吉纳罗(Gennaro)(2000)“雷明顿(Remington)：制药科学和实践(The Science andPractice of Pharmacy)，”第20版，利宾各特(Lippincott)，威廉姆(Williams)和威尔金(Wilkins)；医药剂型和药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems)(1999)H.C.安斯艾尔(Ansel)等人编辑，第7版，利宾各特(Lippincott)，威廉姆(Williams)和威尔金(Wilkins)；及医药赋形剂手册(Handbookof Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.吉布(Kibbe)等人编辑，第3版，美国医药协会(Amer.Pharmaceutical Assoc.)。
诸如媒剂、佐剂、载剂或稀释剂等医药上可接受的赋形剂可被公众容易地获得。而且，诸如pH调节剂和缓冲剂、渗透调节剂、稳定剂、润湿剂及诸如此类等医药上可接受的辅助物质可被公众容易地获得。
在一些实施例中，在水性缓冲液中调配药剂。适宜水性缓冲液包括但不限于乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液，浓度在自约5mM至约100mM之间变化。在一些实施例中，水性缓冲液包括提供等渗溶液的试剂。所述试剂包括但不限于氯化钠及糖，例如，甘露糖醇、葡萄糖、蔗糖及诸如此类。在一些实施例中，所述水性缓冲液进一步包括诸如聚山梨醇酯20或80等非离子型表面活性剂。任选地，所述调配物可进一步包括防腐剂。适宜防腐剂包括但不限于苄基醇、酚、氯丁醇、苯扎氯铵、及诸如此类。在许多情形中，所述调配物在约4℃下储存。调配物也可以冻干，在此情形中，所述调配物通常包括诸如蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖醇、及诸如此类等冷冻保护剂。冻干调配物即使在环境温度下也可以长期储存。
因此，可以各种方式达成药剂投与，包括经口、口腔、直肠、非直肠、腹膜腔内、皮内、皮下、肌内、经皮、气管内等投与。在许多实施例中，藉由推注(例如，皮下推注、肌内推注、及诸如此类)进行投药。
本发明各实施例的医药组合物可经口、非直肠或通过植入型药囊投与。优选地，经口投与或通过注射投与。
可使用标准方法和装置(例如，针和注射器、皮下注射口递送系统、及诸如此类)来完成本发明各实施例的医药组合物的皮下投与。参见，例如，美国专利第3,547,119号、第4,755,173号、第4,531,937号、第4,311,137号、及第6,017,328号。用于经由皮下注射口对患者投与本发明各实施例医药组合物的所述注射口与装置的组合在本文中称作“皮下注射口递送系统”。在许多实施例中，通过使用针和注射器推注递送来实现皮下投与。
在医药剂型中，所述药剂可以其医药上可接受的盐形式投与或者其也可以单独使用或与其它医药活性化合物适当地联合以及组合使用。下列方法和赋形剂仅仅是例示性的而非以任一方式对本发明加以限制。
对于口服制剂来说，所述药剂可单独使用或与适当添加剂组合使用以制造片剂、粉剂、颗粒或胶囊，举例来说，与诸如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉等习用添加剂组合使用；与诸如结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶等粘合剂组合使用；与诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧基甲基纤维素钠等崩解剂组合使用；与诸如滑石粉或硬脂酸镁等润滑剂组合使用；且如果需要，那么可与稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂和矫味剂组合使用。
可通过将所述药剂溶于、悬浮于或乳化于诸如植物油或其它类似油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸或丙二醇的酯等水性或非水性溶剂中来将所述药剂调配成若干注射制剂；且如果需要，那么可与诸如助溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂及防腐剂等习用添加剂一起使用。
而且，所述药剂可通过与诸如乳化基质或水溶性基质等各种基质混合来制成栓剂。本发明各实施例的化合物可通过栓剂经直肠投与。所述栓剂可包括诸如可可脂、碳蜡和聚乙二醇等媒剂，所述媒剂在体温下熔化但在室温下呈固体。
可提供诸如糖浆、酏剂、及悬浮液等经口或直肠投与的单位剂型，其中每一剂量单位(例如，茶匙容量、大汤匙容量的片剂或栓剂)含有包含一种或多种抑制剂的预定量组合物。类似地，用于注射或静脉内投与的单位剂型可包含所述抑制剂的组合物，作为存于无菌水、生理盐水或另一医药上可接受的载剂中的溶液。
如本文所用术语“单位剂型”是指适用作人类和动物受试者的单位剂量的物理离散单元，每一单元含有预定量的本发明各实施例化合物，所述化合物的量计算为足以与医药上可接受的稀释剂、载剂或媒剂联合产生期望效果。关于本发明各实施例的新颖单位剂型的具体说明取决于所采用特定化合物及拟达成的效果以及在宿主中与每一化合物有关的药物动力学。
诸如媒剂、佐剂、载剂或稀释剂等医药上可接受的赋形剂可被公众容易地获得。而且，诸如pH调节剂和缓冲剂、渗透调节剂、稳定剂、润湿剂及诸如此类等医药上可接受的辅助物质可被公众容易地获得。
其它抗病毒或抗纤维化药剂
如上文所论述，在一些实施例中，可通过投与NS3抑制剂(为式I化合物)及(任选地)一种或多种额外抗病毒剂来实施标题方法。
在一些实施例中，所述方法进一步包括投与一种或多种干扰素受体激动剂。干扰素受体激动剂如上文所述。
在其它实施例中，所述方法进一步包括投与吡非尼酮或吡非尼酮类似物。吡非尼酮和吡非尼酮类似物如上文所述。
适用于组合疗法的额外抗病毒剂包括但不限于核苷酸和核苷类似物。非限制性实例包括叠氮胸苷(AZT)(齐多夫定(zidovudine))及其类似物和衍生物；2′，3′-双脱氧肌苷(DDI)(去羟肌苷(didanosine))及其类似物和衍生物；2′，3′-双脱氧胞苷(DDC)(双脱氧胞苷)及其类似物和衍生物；2′，3′-双脱氢-2′，3′-双脱氧胸苷(D4T)(司他夫定(stavudine))及其类似物和衍生物；双汰芝(combivir)；阿巴卡韦(abacavir)；阿的法韦(adefovirdipoxil)；西多福韦(cidofovir)；利巴韦林；利巴韦林类似物；及诸如此类。
在一些实施例中，所述方法进一步包括投与利巴韦林。可从ICN医药公司(科斯塔梅莎(Costa Mesa)，加利福尼亚(Calif))购得的利巴韦林，1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺阐述于默克索引(Merck Index)，化合物编号8199，第11版中。其制造和调配物阐述于美国专利第4,211,771号中。一些实施例还涉及利巴韦林衍生物的使用(参见，例如，美国专利第6,277,830号)。所述利巴韦林可以胶囊或片剂形式经口投与或以相同或不同投与形式及以相同或不同途径作为干扰素受体激动剂投与。当然，本发明涵盖可获得的两种药物的其它投与类型，诸如使用鼻喷雾、经皮、静脉内、使用栓剂、使用持续释放剂型等。任何投与形式只要可在不破坏活性成份的情况下递送适当剂量均可起作用。
在一些实施例中，所述方法进一步包括投与利托那韦。可从雅培(AbbottLaboratories)获得的利托那韦，10-羟基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)-1-[2-(1-甲基乙基)-4-噻唑基1-3，6-二氧代基-8，11-双(苯基甲基)-2，4，7，12-四氮杂十三烷-13-酸5-噻唑基甲酯[5S-(5R*，8R*，10R*，11R*)]是一种人类免疫缺陷病毒蛋白酶的抑制剂以及经常参与治疗分子在人体中肝脏代谢的细胞色素P450 3A和P450 2D6肝脏酶的抑制剂。鉴于其对细胞色素P450 3A的强抑制作用及对细胞色素P450 2D6的抑制剂作用，利托那韦可以低于正常治疗剂量的剂量与其它病毒酶抑制剂组合以达成第二病毒酶抑制剂的治疗效果同时减少所需剂量单元的量、给药频率或减少所需剂量单元量和投药频率。NS-3解旋酶抑制剂是一种病毒酶抑制剂。
也可以利用低剂量利托那韦共投与来补偿药物相互作用，所述药物相互作用往往会减少被CYP3A代谢的病毒酶抑制剂的含量。利托那韦的结构、合成、制造和调配物阐述于美国专利第5,541,206号、美国专利第5,635,523号、美国专利第5,648,497号、美国专利第5,846,987号及美国专利第6,232,333号中。利托那韦可以胶囊或片剂或口服溶液形式或以相同或不同投与形式及以相同或不同途径作为NS-3抑制剂化合物投与。当然，本发明涵盖可获得的两种药物的其它投与类型，诸如使用鼻喷雾、经皮、静脉内、使用栓剂、使用持续释放剂型等。任何投与形式只要可在不破坏活性成份的情况下递送适当剂量均可起作用。
在一些实施例中，额外抗病毒剂可在整个NS3抑制剂化合物治疗过程期间投与。在其它实施例中，所述额外抗病毒剂在与NS3抑制剂化合物治疗时段重叠的时段内投与，例如，所述额外抗病毒剂治疗可在开始NS3抑制剂化合物治疗之前开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之前结束；所述额外抗病毒剂治疗可在开始NS3抑制剂化合物治疗之后开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之后结束；所述额外抗病毒剂治疗可在NS3抑制剂化合物治疗开始之后开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之前结束；或所述额外抗病毒剂治疗可在NS3抑制剂化合物治疗开始之前开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之后结束。
治疗方法单一疗法
本文所述NS3抑制剂化合物可用于HCV疾病的急性或慢性疗法。在许多实施例中，将所述NS3抑制剂化合物投与一段约1天至约7天、或约1周至约2周、或约2周至约3周、或约3周至约4周、或约1个月至约2个月、或约3个月至约4个月、或约4个月至约6个月、或约6个月至约8个月、或约8个月至约12个月、或至少1年的时间，且可投与更长的时段。所述NS3抑制剂化合物可以每日5次、每日4次、每日三次(tid)、每日二次(bid)、每日一次(qd)、隔日一次(qod)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次(qw)、隔周一次(qow)、每月三次、或每月一次投与。在其它实施例中，所述NS3抑制剂化合物可以连续输注方式投与。
在许多实施例中，本发明各实施例的NS3抑制剂化合物经口投与。
结合上文所述用于治疗患者HCV疾病的方法，如本文所述NS3抑制剂化合物可以自约0.01mg至约100mg/kg患者体重/日的剂量每日分1个至5个分剂量投与患者。在一些实施例中，所述NS3抑制剂化合物可以自约0.5mg至约75mg/kg患者体重/日的剂量每日分1个至5个分剂量投与。
可与载剂材料组合以产生剂型的活性成份量可视拟治疗宿主和特定投药模式而变化。典型医药制剂可含有自约5％至约95％的活性成份(w/w)。在其它实施例中，医药制剂可含有自约20％至约80％的活性成份。
所属领域的技术人员会容易地认识到：剂量水平可随着特定NS3抑制剂化合物、症状严重程度及受试者对副作用的易感性而变化。给定NS3抑制剂化合物的优选剂量可由所属领域的技术人员使用各种方式来容易地确定。优选方式在于可测量给定干扰素受体激动剂的生理学效能。
在许多实施例中，投与多个NS3抑制剂化合物剂量。举例来说，NS3抑制剂化合物可以每月一次、每月两次、每月三次、隔周一次(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、隔日一次(qod)、每日一次(qd)、每日两次(qid)、或每日三次(tid)投与，历经一段自约1天至约1周、自约2周至约4周、自约1个月至约2个月、自约2个月至约4个月、自约4个月至约6个月、自约6个月至约8个月、自约8个月至约1年、自约1年至约2年、或自约2年至约4年、或更长的时间。
利巴韦林的组合疗法
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的利巴韦林的组合疗法。利巴韦林可以约400mg、约800mg、约1000mg、或约1200mg/日的剂量投与。
一个实施例提供经改造以包括在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间对患者共投与治疗有效量的利巴韦林的任一上文所述方法。
另一实施例提供经改造以包括在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间对患者经口共投与约800mg至约1200mg利巴韦林/日的任一上文所述方法。在另一实施例中，任一上文所述方法可经改造以包括在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间对患者经口共投与(a)1000mg利巴韦林/日，当患者具有少于75kg的体重时或(b)1200mg利巴韦林/日，当患者具有大于或等于75kg的体重时，其中利巴韦林的每日剂量任选地可分成2个剂量。
左旋韦林的组合疗法
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的左旋韦林的组合疗法。左旋韦林通常以自约30mg至约60mg、自约60mg至约125mg、自约125mg至约200mg、自约200mg至约300gm、自约300mg至约400mg、自约400mg至约1200mg、自约600mg至约1000mg、或自约700至约900mg每日、或约10mg/kg体重/日的量范围投与。在一些实施例中，左旋韦林在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间以约400、约800、约1000、或约1200mg/日的剂量经口投与。
韦拉米啶的组合疗法
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的韦拉米啶的组合疗法。韦拉米啶通常以自约30mg至约60mg、自约60mg至约125mg、自约125mg至约200mg、自约200mg至约300gm、自约300mg至约400mg、自约400mg至约1200mg、自约600mg至约1000mg、或自约700至约900mg每日的量范围、或以约10mg/kg体重/日投与。在一些实施例中，韦拉米啶在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间以约800或约1600mg/日的剂量经口投与。
利托那韦的组合疗法
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的利托那韦的组合疗法。利托那韦通常以自约50mg至约100mg、自约100mg至约200mg、自约200mg至约300mg、自约300mg至约400mg、自约400mg至约500mg、或自约500mg至约600mg的量范围投与，每日两次。在一些实施例中，利托那韦在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间以约300mg、或约400mg、或约600mg的剂量经口投与，每日两次。
α-葡糖苷酶抑制剂的组合疗法
适宜α-葡糖苷酶抑制剂包括上述亚氨基糖中的任一种，包括如在美国专利公开案第2004/0110795号中所揭示亚氨基糖的长烷基链衍生物；与内质网有关的α-葡糖苷酶的抑制剂；膜结合α-葡糖苷酶的抑制剂；米格列醇(miglitol)![]()
及其活性衍生物和类似物；及阿卡波糖(acarbose)![]()
及其活性衍生物和类似物。
在许多实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的α-葡糖苷酶抑制剂的组合疗法，投与时段为约1天至约7天、或约1周至约2周、或约2周至约3周、或约3周至约4周、或约1个月至约2个月、或约3个月至约4个月、或约4个月至约6个月、或约6个月至约8个月、或约8个月至约12个月、或至少1年，且可投与更长的时段。
α-葡糖苷酶抑制剂可以每日5次、每日4次、tid(每日三次)、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月一次投与。在其它实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以连续输注方式投与。
在许多实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂经口投与。
结合用于黄病毒感染治疗、HCV感染治疗、及由HCV感染造成的肝脏纤维化治疗的上文所述方法，所述方法提供包含对患者投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的α-葡糖苷酶抑制剂的组合疗法，投与剂量为自约10mg/日至约600mg/日(分成若干分剂量)，例如，自约10mg/日至约30mg/日、自约30mg/日至约60mg/日、自约60mg/日至约75mg/日、自约75mg/日至约90mg/日、自约90mg/日至约120mg/日、自约120mg/日至约150mg/日、自约150mg/日至约180mg/日、自约180mg/日至约210mg/日、自约210mg/日至约240mg/日、自约240mg/日至约270mg/日、自约270mg/日至约300mg/日、自约300mg/日至约360mg/日、自约360mg/日至约420mg/日、自约420mg/日至约480mg/日、或自约480mg至约600mg/日。
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的α-葡糖苷酶抑制剂的组合疗法，投与剂量为约10mg，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约15mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约20mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约25mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约30mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约40mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约50mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约100mg剂量投与，每日三次。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂以约75mg/日至约150mg/日的剂量投与，分成2个或3个分剂量，其中个体重60kg或更轻。在一些实施例中，α-葡糖苷酶抑制剂是以约75mg/日至约300mg/日的剂量投与，分成2个或3个分剂量，其中个体重60kg或更重。
可与载剂材料组合以产生剂型的活性成份(例如，α-葡糖苷酶抑制剂)的量可视拟治疗宿主及特定投与模式而变化。典型医药制剂可含有自约5％至约95％的活性成份(w/w)。在其它实施例中，医药制剂可含有自约20％至约80％的活性成份。
所属领域的技术人员会容易地认识到：剂量水平可随着特定α-葡糖苷酶抑制剂、症状严重程度及受试者对副作用的易感性而变化。给定α-葡糖苷酶抑制剂的优选剂量可由所属领域的技术人员使用各种方式来容易地确定。典型方式在于可测量给定活性药剂的生理学效能。
在许多实施例中，投与多个α-葡糖苷酶抑制剂剂量。举例来说，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的α-葡糖苷酶抑制剂的组合疗法，投与频率为每月一次、每月两次、每月三次、隔周一次(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、隔日一次(qod)、每日一次(qd)、每日两次(qid)、或每日三次(tid)，投与时间为自约1天至约1周、自约2周至约4周、自约1个月至约2个月、自约2个月至约4个月、自约4个月至约6个月、自约6个月至约8个月、自约8个月至约1年、自约1年至约2年、或自约2年至约4年、或更长。
胸腺素-α的组合疗法
在一些实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的胸腺素-α的组合疗法。胸腺素-α(ZadaxinTM)通常通过皮下注射投与。胸腺素-α在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间可以tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、每月一次、基本连续地或连续地投与。在许多实施例中，胸腺素-α在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间以每周两次投与。胸腺素-α的有效剂量范围是自约0.5mg至约5mg，例如，自约0.5mg至约1.0mg、自约1.0mg至约1.5mg、自约1.5mg至约2.0mg、自约2.0mg至约2.5mg、自约2.5mg至约3.0mg、自约3.0mg至约3.5mg、自约3.5mg至约4.0mg、自约4.0mg至约4.5mg、或自约4.5mg至约5.0mg。在特定实施例中，胸腺素-α是分若干剂量(包含1.0mg或1.6mg的量)投与。
胸腺素-α可在自约1天至约1周、自约2周至约4周、自约1个月至约2个月、自约2个月至约4个月、自约4个月至约6个月、自约6个月至约8个月、自约8个月至约1年、自约1年至约2年、或自约2年至约4年、或更长的时间范围内投与。在一个实施例中，胸腺素-α在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间投与。
干扰素的组合疗法
在许多实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的干扰素受体激动剂的组合疗法。在一些实施例中，在本文所述治疗方法中共投与式I化合物与I型或III型干扰素受体激动剂。适用于本文的I型干扰素受体激动剂包括任一干扰素-α(IFN-α)。在某些实施例中，所述干扰素-α是聚乙二醇化干扰素-α。在某些其它实施例中，所述干扰素-α是复合干扰素，诸如![]()
干扰素αcon-1。在又一些实施例中，所述干扰素-α是单PEG(30kD，线性)-基化复合干扰素。
IFN-α的有效剂量范围是自约3μg至约27μg、自约3MU至约10MU、自约90μg至约180μg、或自约18μg至约90μg。![]()
复合IFN-α的有效剂量包括约3μg、约6μg、约9μg、约12μg、约15μg、约18μg、约21μg、约24μg、约27μg、或约30μg药物/剂。IFN-α2a和IFN-α2b的有效剂量范围是从3,000,000单位(MU)至10MU/剂。![]()
聚乙二醇化IFN-α2a的有效剂量包含约90μg至270μg、或约180μg药物/剂的量。![]()
聚乙二醇化IFN-α2b的有效剂量包含约0.5μg至3.0μg药物/kg体重/剂。聚乙二醇化复合干扰素(PEG-CIFN)的有效剂量包含约18μg至约90μg、或自约27μg至约60μg、或约45μg CIFN氨基酸重量/剂的PEG-CIFN量。单PEG(30kD，线性)-基化CIFN的有效剂量包含约45μg至约270μg、或约60μg至约180μg、或约90μg至约120μg药物/剂的量。IFN-α可以每日一次、隔日一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本连续地或连续地投与。
在许多实施例中，I型或III型干扰素受体激动剂及/或II型干扰素受体激动剂可投与一段约1天至约7天、或约1周至约2周、或约2周至约3周、或约3周至约4周、或约1个月至约2个月、或约3个月至约4个月、或约4个月至约6个月、或约6个月至约8个月、或约8个月至约12个月、或至少1年的时间且可投与更长的时间。投药方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月一次投与。一些实施例提供上文所述方法中的任一种，其中通过推注递送对患者经皮下投与期望剂量的IFN-α，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、或每月一次；或通过基本连续地或连续地递送每日对患者经皮下投药，持续期望的治疗时程。在其它实施例中，可实践上文所述方法中的任一种，其中通过推注递送对患者经皮下投与期望剂量的聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)，qw、qow、每月三次、或每月一次，持续期望的治疗时程。
在其它实施例中，在本发明各实施例的治疗方法中共投与NS3抑制剂化合物和II型干扰素受体激动剂。适用于本文的II型干扰素受体激动剂包括任何干扰素-γ(IFN-γ)。
IFN-γ的有效剂量范围可为自约0.5μg/m2至约500μg/m2，通常为自约1.5μg/m2至200μg/m2，视患者个头大小而定。此活动是基于106个国际单位(U)每50μg蛋白。IFN-γ可以每日一次、隔日一次、每周三次、或基本连续地或连续地投与。
在相关具体实施例中，IFN-γ是以自约25μg至约500μg、自约50μg至约400μg、或自约100μg至约300μg的单位剂型投与个体。在相关具体实施例中，所述剂量为约200μg IFN-γ。在许多相关实施例中，投与IFN-γ1b。
当所述剂量为200μg IFN-γ/剂时，IFN-γ量/体重(假定体重范围是自约45kg至约135kg)是在自约4.4μg IFN-γ/kg体重至约1.48μg IFN-γ/kg体重的范围内。
受试个体的体表面积范围通常为自约1.33m2至约2.50m2。因此，在许多实施例中，IFN-γ的剂量范围是自约150μg/m2至约20μg/m2。举例来说，IFN-γ的剂量范围是自约20μg/m2至约30μg/m2、自约30μg/m2至约40μg/m2、自约40μg/m2至约50μg/m2、自约50μg/m2至约60μg/m2、自约60μg/m2至约70μg/m2、自约70μg/m2至约80μg/m2、自约80μg/m2至约90μg/m2、自约90μg/m2至约100μg/m2、自约100μg/m2至约110μg/m2、自约110μg/m2至约120μg/m2、自约120μg/m2至约130μg/m2、自约130μg/m2至约140μg/m2、或自约140μg/m2至约150μg/m2。在一些实施例中，所述剂量组范围是自约25μg/m2至约100μg/m2。在其它实施例中，所述剂量组范围是自约25μg/m2至约50μg/m2。
在一些实施例中，I型或III型干扰素受体激动剂是在第一给药方案中投与，然后实施第二给药方案。I型或III型干扰素受体激动剂的第一给药方案(也称作“诱导治疗方案”)通常涉及投与较高剂量的I型或III型干扰素受体激动剂。举例来说，在![]()
复合IFN-α(CIFN)情形中，所述第一给药方案包含以约9μg、约15μg、约18μg、或约27μg投与CIFN。所述第一给药方案可能涵盖单一给药事件、或至少两次或更多次给药事件。I型或III型干扰素受体激动剂的所述第一给药方案可以每日一次、隔日一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本连续地或连续地投与。
I型或III型干扰素受体激动剂的所述第一给药方案在第一时期内投与，此时期可为至少约4周、至少约8周、或至少约12周。
I型或III型干扰素受体激动剂的第二给药方案(也称作“维持剂量”)通常涉及投与少量I型或III型干扰素受体激动剂。举例来说，在CIFN情形中，第二给药方案包含以至少约3μg、至少约9μg、至少约15μg、或至少约18μg的剂量投与CIFN。第二给药方案可涵盖单一给药事件、或至少两次或更多次给药事件。
I型或III型干扰素受体激动剂的第二给药方案可以每日一次、隔日一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本连续地或连续地投与。
在一些实施例中，其中实施I型或III型干扰素受体激动剂的“诱导”/“维持”给药方案，包括“初免”剂量的II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)。在这些实施例中，在开始I型或III型干扰素受体激动剂治疗之前，持续一段自约1天至约14天、自约2天至约10天、或自约3天至约7天的时间投与IFN-γ。此时段称作“初免”阶段。
在这些实施例的一些中，在I型或III型干扰素受体激动剂治疗的整个时期内持续II型干扰素受体激动剂治疗。在其它实施例中，所述II型干扰素受体激动剂治疗在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束之前中止。在这些实施例中，II型干扰素受体激动剂的总治疗时间(包括“初免”阶段)为自约2天至约30天、自约4天至约25天、自约8天至约20天、自约10天至约18天、或自约12天至约16天。在又一些实施例中，所述II型干扰素受体激动剂治疗是在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始时中止。
在其它实施例中，所述I型或III型干扰素受体激动剂在单一给药方案中投与。举例来说，在CIFN情形中，CIFN的剂量通常在自约3μg至约15μg或自约9μg至约15μg的范围内。所述剂量的I型或III型干扰素受体激动剂通常以每日一次、隔日一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、或基本连续地投与。所述剂量的I型或III型干扰素受体激动剂是在一段时间内投与，此段时间可为(例如)从至少约24周至至少约48周或更长。
在一些实施例中，其中实施I型或III型干扰素受体激动剂的单一给药方案，包括“初免”剂量的II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)。在这些实施例中，在开始I型或III型干扰素受体激动剂治疗之前，持续一段自约1天至约14天、自约2天至约10天、或自约3天至约7天的时间投与IFN-γ。此时段称作“初免”阶段。在这些实施例的一些中，在I型或III型干扰素受体激动剂治疗的整个时期内持续II型干扰素受体激动剂治疗。在其它实施例中，所述II型干扰素受体激动剂治疗在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束之前中止。在这些实施例中，II型干扰素受体激动剂的总治疗时间(包括“初免”阶段)为自约2天至约30天、自约4天至约25天、自约8天至约20天、自约10天至约18天、或自约12天至约16天。在又一些实施例中，II型干扰素受体激动剂治疗是在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始时中止。
在额外实施例中，在本文所述方法中于期望的治疗时程内共投与NS3抑制剂化合物、I型或III形干扰素受体激动剂及II型干扰素受体激动剂。在一些实施例中，在本文所述方法中于期望的治疗时程内共投与NS3抑制剂化合物、干扰素-α及干扰素-γ。
在一些实施例中，本发明提供使用有效量的I型或III型干扰素受体激动剂、II型干扰素受体激动剂及NS3抑制剂化合物治疗患者HCV感染的方法。一些实施例提供使用有效量的IFN-α、IFN-γ及NS3抑制剂化合物治疗患者HCV感染的方法。一个实施例提供一种使用有效量的复合IFN-α、IFN-γ及NS3抑制剂化合物治疗患者HCV感染的方法。
一般来说，提供剂量比率为1μg CIFN：10μg IFN-γ的适用于本发明各实施例方法的有效量的复合干扰素(CIFN)和IFN-γ，其中CIFN和IFN-γ两者均为未经聚乙二醇化及未经糖基化物质。
在一个实施例中，本发明提供经改造以在患者HCV感染治疗中使用有效量的![]()
复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1μg至约30μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约10μg至约300μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1μg至约9μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约10μg至约100μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约10μg至约50μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约9μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约90μg至约100μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约30μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约200μg至约300μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的聚乙二醇化复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的聚乙二醇化复合IFN-α(PEG-CIFN)(包含约4μg至约60μgCIFN氨基酸重量/剂的PEG-CIFN量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约30μg至约1,000μg药物/周的量，分若干分剂量以qd、qod、tiw、biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的聚乙二醇化复合IFN-α和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的聚乙二醇化复合IFN-α(PEG-CIFN)(包含约18μg至约24μgCIFN氨基酸重量/剂的PEG-CIFN量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约100μg至约300μg药物/周的量，分若干分剂量，以qd、qod、tiw、biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
一般来说，提供剂量比率为1,000,000单位(MU)IFN-α2a或2b或2c：30μg IFN-γ的适用于本发明各实施例方法的有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ两者均为未经聚乙二醇化及未经糖基化物质。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a、2b或2c(包含约1MU至约20MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约30μg至约600μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a、2b或2c(包含约3MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约100μg药物/剂的IFN-γ，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a、2b或2c(包含约10MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的IFN-γ(包含约300μg药物/剂的IFN-γ，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2a和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约90μg至约360μg药物/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约30μg至约1,000μg药物/周，分若干分剂量以qd、qod、tiw、或biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2a和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约180μg药物/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约100μg至约300μg药物/周，分若干分剂量以qd、qod、tiw、biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2b和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约0.75μg至约3.0μg药物/千克体重/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约30μg至约1,000μg药物/周的量，分若干分剂量投与，以qd、qod、tiw、或biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2b和IFN-γ的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1.5μg药物/千克体重/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定总周剂量的IFN-γ(包含约100μg至约300μg药物/周的量，分若干分剂量以qd、qod、tiw、或biw、或基本连续地或连续地经皮下投与)。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；及50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；及100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；25μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；200μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；及25μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：9μg![]()
复合IFN-α，以qd或tiw经皮下投与；及200μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：100μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：100μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：100μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：100μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：100μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：150μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：150μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：150μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：150μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：150μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：200μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：200μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：200μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与；及利巴韦林，以qd经口投与，其中治疗时程为48周。在此实施例中，对重量少于75kg的个体投与1000mg量的利巴韦林，且对重量为75kg或更重的个体投与1200mg。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：200μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及50μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
一个实施例提供经改造以包含对具有HCV感染的个体投与有效量的NS3抑制剂的任何上文所述方法；及如下治疗方案：200μg单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，以每10天一次或qw经皮下投与；及100μg![]()
人类IFN-γ1b，以tiw经皮下投与，其中治疗时程为48周。
涉及投与NS3抑制剂、I型干扰素受体激动剂(例如，IFN-α)及II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)的任何上文所述方法可通过投与有效量的TNF-α拮抗剂(例如，除吡非尼酮或吡非尼酮类似物外的TNF-α拮抗剂)来扩展。适用于所述组合疗法的例示性非限制性TNF-α拮抗剂包括![]()
及HUMIRATM。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ及有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
包含自约0.1μg至约23mg/剂、自约0.1μg至约1μg、自约1μg至约10μg、自约10μg至约100μg、自约100μg至约1mg、自约1mg至约5mg、自约5mg至约10mg、自约10mg至约15mg、自约15mg至约20mg、或自约20mg至约23mg的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ、及有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
包含自约0.1mg/kg至约4.5mg/kg、自约0.1mg/kg至约0.5mg/kg、自约0.5mg/kg至约1.0mg/kg、自约1.0mg/kg至约1.5mg/kg、自约1.5mg/kg至约2.0mg/kg、自约2.0mg/kg至约2.5mg/kg、自约2.5mg/kg至约3.0mg/kg、自约3.0mg/kg至约3.5mg/kg、自约3.5mg/kg至约4.0mg/kg、或自约4.0mg/kg至约4.5mg/kg/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经静脉内投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的HUMIRATM、有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ及有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望治疗时程内对患者投与一定剂量的HUMIRATM，包含自约0.1μg至约35mg、自约0.1μg至约1μg、自约1μg至约10μg、自约10μg至约100μg、自约100μg至约1mg、自约1mg至约5mg、自约5mg至约10mg、自约10mg至约15mg、自约15mg至约20mg、自约20mg至约25mg、自约25mg至约30mg,或自约30mg至约35mg/剂的HUMIRATM量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
吡非尼酮组合疗法
在许多实施例中，所述方法提供包含投与如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物的组合疗法。在一些实施例中，在本发明实施例的治疗方法中共投与NS3抑制剂化合物、一种或多种干扰素受体激动剂、及吡非尼酮或吡非尼酮类似物。在某些实施例中，共投与NS3抑制剂化合物、I型干扰素受体激动剂及吡非尼酮(或吡非尼酮类似物)。在其它实施例中，共投与NS3抑制剂化合物、I型干扰素受体激动剂、II型干扰素受体激动剂及吡非尼酮(或吡非尼酮类似物)。适用于本文的I型干扰素受体激动剂包括诸如干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素αcon-1等任何IFN-α及诸如聚乙二醇干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b等聚乙二醇化IFN-α′s以及诸如单PEG(30kD，线性)-基化复合干扰素等聚乙二醇化复合干扰素。适用于本文的II型干扰素受体激动剂包括任何干扰素-γ。
在一段自约1天至约1周、自约2周至约4周、自约1个月至约2个月、自约2个月至约4个月、自约4个月至约6个月、自约6个月至约8个月、自约8个月至约1年、自约1年至约2年、或自约2年至约4年、或更长的时间范围内，吡非尼酮或吡非尼酮类似物可以每月一次、每月两次、每月三次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每日一次、或分若干个日剂量(在从每日一次至每日5次的范围内)投与。
吡非尼酮或特定吡非尼酮类似物的有效剂量包括在自约5mg/kg/日至约125mg/kg/日范围内的基于体重的剂量或约400mg至约3600mg/日、或约800mg至约2400mg/日、或约1000mg至约1800mg/日、或约1200mg至约1600mg/日的固定剂量，每日分1个至5个分剂量经口投与。适用于治疗纤维化疾病的吡非尼酮和特定吡非尼酮类似物的其它剂量和调配物阐述于美国专利第5,310,562号、第5,518,729号、第5,716,632号、及第6,090,822号中。
一个实施例提供经改造以在期望的NS3抑制剂化合物治疗过程期间对患者共投与治疗有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物的任何上文所述方法。
TNF-α拮抗剂的组合疗法
在许多实施例中，所述方法提供包含投与有效量的如上文所述NS3抑制剂化合物及有效量的TNF-α拮抗剂的组合疗法，所述组合疗法用于治疗HCV感染。
TNF-α拮抗剂的有效剂量是介于0.1μg至40mg/剂之间，例如，自约0.1μg至约0.5μg/剂、自约0.5μg至约1.0μg/剂、自约1.0μg/剂至约5.0μg/剂、自约5.0μg至约10μg/剂、自约10μg至约20μg/剂、自约20μg/剂至约30μg/剂、自约30μg/剂至约40μg/剂、自约40μg/剂至约50μg/剂、自约50μg/剂至约60μg/剂、自约60μg/剂至约70μg/剂、自约70μg至约80μg/剂、自约80μg/剂至约100μg/剂、自约100μg至约150μg/剂、自约150μg至约200μg/剂、自约200μg/剂至约250μg/剂、自约250μg至约300μg/剂、自约300μg至约400μg/剂、自约400μg至约500μg/剂、自约500μg至约600μg/剂、自约600μg至约700μg/剂、自约700μg至约800μg/剂、自约800μg至约900μg/剂、自约900μg至约1000μg/剂、自约1mg至约10mg/剂、自约10mg至约15mg/剂、自约15mg至约20mg/剂、自约20mg至约25mg/剂、自约25mg至约30mg/剂、自约30mg至约35mg/剂、或自约35mg至约40mg/剂。
在一些实施例中，TNF-α拮抗剂的有效剂量是以mg/kg体重表示。在这些实施例中，TNF-α拮抗剂的有效剂量是自约0.1mg/kg体重至约10mg/kg体重，例如，自约0.1mg/kg体重至约0.5mg/kg体重、自约0.5mg/kg体重至约1.0mg/kg体重、自约1.0mg/kg体重至约2.5mg/kg体重、自约2.5mg/kg体重至约5.0mg/kg体重、自约5.0mg/kg体重至约7.5mg/kg体重、或自约7.5mg/kg体重至约10mg/kg体重。
在许多实施例中，TNF-α拮抗剂是在约1天至约7天、或约1周至约2周、或约2周至约3周、或约3周至约4周、或约1个月至约2个月、或约3个月至约4个月、或约4个月至约6个月、或约6个月至约8个月、或约8个月至约12个月、或至少1年的时期内投与且可投与更长的时间。TNF-α拮抗剂可以tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、每月一次、基本连续地或连续地投与。
在许多实施例中，投与多剂TNF-α拮抗剂。举例来说，TNF-α拮抗剂是在自约1天至约1周、自约2周至约4周、自约1个月至约2个月、自约2个月至约4个月、自约4个月至约6个月、自约6个月至约8个月、自约8个月至约1年、自约1年至约2年、或自约2年至约4年、或更长的时段范围内以每月一次、每月两次、每月三次、隔周一次(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、隔日一次(qod)、每日一次(qd)、每日两次(bid)、或每日三次(tid)、基本连续地或连续地投与。
TNF-α拮抗剂与NS3抑制剂通常以独立的调配物投与。TNF-α拮抗剂与NS3抑制剂可在基本同时投与或彼此间隔约30分钟、约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约16小时、约24小时、约36小时、约72小时、约4天、约7天、或约2周投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的TNF-α拮抗剂及有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的TNF-α拮抗剂，包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
及有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
包含自约0.1μg至约23mg/剂、自约0.1μg至约1μg、自约1μg至约10μg、自约10μg至约100μg、自约100μg至约1mg、自约1mg至约5mg、自约5mg至约10mg、自约10mg至约15mg、自约15mg至约20mg、或自约20mg至约23mg的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
和有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
包含自约0.1mg/kg至约4.5mg/kg、自约0.1mg/kg至约0.5mg/kg、自约0.5mg/kg至约1.0mg/kg、自约1.0mg/kg至约1.5mg/kg、自约1.5mg/kg至约2.0mg/kg、自约2.0mg/kg至约2.5mg/kg、自约2.5mg/kg至约3.0mg/kg、自约3.0mg/kg至约3.5mg/kg、自约3.5mg/kg至约4.0mg/kg、或自约4.0mg/kg至约4.5mg/kg/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经静脉内投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的HUMIRATM和有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的HUMIRATM，包含自约0.1μg至约35mg、自约0.1μg至约1μg、自约1μg至约10μg、自约10μg至约100μg、自约100μg至约1mg、自约1mg至约5mg、自约5mg至约10mg、自约10mg至约15mg、自约15mg至约20mg、自约20mg至约25mg、自约25mg至约30mg、或自约30mg至约35mg/剂的HUMIRATM量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或隔月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
胸腺素-α的组合疗法
在许多实施例中，所述方法提供包含投与有效量的如上文所NS3抑制剂化合物述与有效量的胸腺素-α的组合疗法，所述组合疗法用于治疗HCV感染。
胸腺素-α的有效剂量是在自约0.5mg至约5mg的范围内，例如，自约0.5mg至约1.0mg、自约1.0mg至约1.5mg、自约1.5mg至约2.0mg、自约2.0mg至约2.5mg、自约2.5mg至约3.0mg、自约3.0mg至约3.5mg、自约3.5mg至约4.0mg、自约4.0mg至约4.5mg、或自约4.5mg至约5.0mg。在特定实施例中，胸腺素-α是以包含1.0mg或1.6mg量在内的剂量投与。
一个实施例提供一种在治疗患者HCV感染中使用有效量的ZADAXINTM胸腺素-α和有效量的NS3抑制剂的方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的ZADAXINTM，包含自约1.0mg至约1.6mg/剂的量，以每周两次经皮下投与。
TNF-α拮抗剂与干扰素的组合疗法
一些实施例提供一种治疗具有HCV感染的个体的HCV感染的方法，所述方法包含投与有效量的NS3抑制剂及有效量的TNF-α拮抗剂及有效量的一种或多种干扰素。
一个实施例提供经改造以在治疗患者HCV感染中使用有效量的IFN-γ和有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-γ，包含约10μg至约300μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与；以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂，包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与。
一个实施例提供经改造以在治疗患者HCV感染中使用有效量的IFN-γ和有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-γ(包含约10μg至约100μg药物/剂的IFN-γ量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-γ和有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一IFN-γ总周剂量(包含约30μg至约1,000μg药物/周的量，分若干分剂量以qd、qod、tiw、biw或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-γ和有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一IFN-γ总周剂量(包含约100μg至约300μg药物/周的量，分若干分剂量以qd、qod、tiw、biw或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
一个实施例提供经改造以在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
复合IFN-α和TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1μg至约30μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
一个实施例提供经改造以在治疗患者HCV感染中使用有效量的![]()
复合IFN-α和TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1μg至约9μg药物/剂的![]()
量，以qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的聚乙二醇化复合IFN-α与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的聚乙二醇化复合IFN-α(PEG-CIFN)(包含约4μg至约60μgCIFN氨基酸重量/剂的PEG-CIFN量，以qw、qow、每月三次或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的聚乙二醇化复合IFN-α与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的聚乙二醇化复合IFN-α(PEG-CIFN)(包含约18μg至约24μgCIFN氨基酸重量/剂的PEG-CIFN量，以qw、qow、每月三次或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a或2b或2c(包含约1MU至约20MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a或2b或2c(包含约3MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的IFN-α2a或2b或2c与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的IFN-α2a或2b或2c(包含约10MU药物/剂的IFN-α2a、2b或2c量，以qd、qod、tiw、biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2a与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约90μg至约360μg药物/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2a与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约180μg药物/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2b与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约0.75μg至约3.0μg药物/千克体重/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
另一实施例提供经改造以在患者病毒感染治疗中使用有效量的![]()
聚乙二醇化IFN-α2b与有效量的TNF-α拮抗剂的任何上文所述方法，其包含在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内对患者投与一定剂量的![]()
(包含约1.5μg药物/千克体重/剂的![]()
量，以qw、qow、每月三次、或每月一次经皮下投与)以及投与一定剂量的TNF-α拮抗剂(包含自约0.1μg至约40mg/剂的TNF-α拮抗剂量，以qd、qod、tiw、或biw、或每天基本连续地或连续地经皮下投与)。
其它抗病毒剂的组合疗法
诸如HCV NS3解旋酶抑制剂等其它药剂也是组合疗法的有吸引力的药物且预期可用于本文所述组合疗法。诸如HeptazymeTM等核酶及与HCV蛋白序列互补且可抑制病毒核蛋白表达的硫代磷酸寡核苷酸也适用于本文所述组合疗法。
在一些实施例中，额外抗病毒剂是在用本文所述NS3抑制剂化合物治疗的整个过程中投与且并与所述治疗时期同时开始及同时结束。在其它实施例中，所述额外抗病毒剂在与NS3抑制剂化合物治疗时段重叠的时段内投与，例如，所述额外抗病毒剂治疗可在开始NS3抑制剂化合物治疗之前开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之前结束；所述额外抗病毒剂治疗可在开始NS3抑制剂化合物治疗之后开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之后结束；所述额外抗病毒剂治疗可在NS3抑制剂化合物治疗开始之后开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之前结束；或者所述额外抗病毒剂治疗可在NS3抑制剂化合物治疗开始之前开始且在NS3抑制剂化合物治疗结束之后结束。
所述NS3抑制剂化合物可与一种或多种额外抗病毒剂一起投与(即，以不同调配物同时投与；以相同调配物同时投与；以不同调配物且在约48小时内、在约36小时内、在约24小时内、在约16小时内、在约12小时内、在约8小时内、在约4小时内、在约2小时内、在约1小时内、在约30分钟内或在约15分钟内或在更短时间内投与)。
作为非限制性实例，以IFN-α治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案代替标题IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案代替标题IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案代替标题IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的![]()
干扰素αcon-1治疗方案代替标题IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次或每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的![]()
干扰素αcon-1治疗方案代替标题IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次或每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-γ治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ治疗方案代替标题IFN-γ治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次投与经皮下。
作为非限制性实例，以IFN-γ治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ治疗方案代替标题IFN-γ治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-γ治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ治疗方案代替标题IFN-γ治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以TNF拮抗剂治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的TNF拮抗剂治疗方案代替标题TNF拮抗剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的选自由下述组成的群组的TNF拮抗剂：(a)依那西普，以25mg药物/剂的量每周两次经皮下投药；(b)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重/剂的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与；或(c)阿达木单抗，以40mg药物/剂的量每周一次或每2周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与IFN-γ组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与IFN-γ组合治疗方案代替标题IFN-α与IFN-γ组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次，每8天一次、或每10天一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量，每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α、IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次经皮下投与；(b)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(c)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含100μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含150μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α，包含200μg药物/剂的量，每周一次、每8天一次、或每10天一次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含9μg药物/剂的量，每日一次与或每周三次经皮下投；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-α与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的![]()
干扰素αcon-1，包含15μg药物/剂的量，每日一次与或每周三次经皮下投；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的IFN-γ，包含25μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的IFN-γ，包含50μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，以IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案代替标题IFN-γ与TNF拮抗剂组合治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内(a)投与一定剂量的IFN-γ，包含100μg药物/剂的量，每周三次经皮下投与；及(b)投与一定剂量的选自下述的TNF拮抗剂：(i)依那西普，以25mg的量每周两次经皮下投与，(ii)英利昔单抗，以3mg药物/千克体重的量在此后第0周、第2周和第6周及每8周一次经静脉内投与，或(iii)阿达木单抗，以40mg的量每周一次或隔周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，包括单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的聚乙二醇干扰素α-2a治疗方案代替单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的聚乙二醇干扰素α-2a，包含180μg药物/剂的量，每周一次经皮下投与。
作为非限制性实例，包括单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的聚乙二醇干扰素α-2a治疗方案代替单PEG(30kD，线性)-基化复合IFN-α治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的聚乙二醇干扰素α-2a，包含1.0μg至1.5μg药物/千克体重/剂的量，每周一次或两次经皮下投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以包括在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的利巴韦林，包含400mg、800mg、1000mg或1200mg药物的量，每日经口投与，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以包括在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内投与一定剂量的利巴韦林，含有(i)对于具有小于75kg体重的患者来说，每日经口投与的量为1000mg药物或(ii)对于具有大于或等于75kg体重的患者来说，每日经口投与的量为1200mg药物，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS3抑制剂治疗方案代替标题NS3抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(0.01mg至0.1mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS3抑制剂治疗方案代替标题NS3抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(0.1mg至1mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS3抑制剂治疗方案代替标题NS3抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(10mg至100mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS3抑制剂治疗方案代替标题NS3抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(0.1mg至1mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，以NS5B抑制剂治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS5B抑制剂治疗方案代替标题NS5B抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(0.01mg至0.1mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，以NS5B抑制剂治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS5B抑制剂治疗方案代替标题NS5B抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(0.1mg至1mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，以NS5B抑制剂治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS5B抑制剂治疗方案代替标题NS5B抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(1mg至10mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
作为非限制性实例，以NS5B抑制剂治疗方案为特征的任何上文所述方法可经改造以用包含下述的NS5B抑制剂治疗方案代替标题NS5B抑制剂治疗方案：在期望的NS3抑制剂化合物治疗时程内每日经口投与一个剂量(10mg至100mg药物/千克体重)，任选地以两个或更多个分剂量/日投与。
患者识别
在某些实施例中，在治疗HCV患者中所用药物疗法的特定治疗方案依据由患者呈现出的某些疾病参数来选择，诸如初始病毒负载、患者HCV感染的基因型、肝脏病史及/或患者肝脏纤维化阶段。
因此，一些实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以在48周时程内治疗治疗失败的患者。
其它实施例提供用于HCV的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以治疗非应答患者，其中所述患者接受48周治疗历程。
其它实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以治疗复发患者，其中所述患者接受48周治疗历程。
其它实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以治疗感染HCV基因型1的未经治疗患者，其中所述患者接受48周治疗历程。
其它实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以治疗感染HCV基因型4的未经治疗患者，其中所述患者接受48周治疗历程。
其它实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以治疗感染HCV基因型1的未经治疗患者，其中所述患者具有高病毒负载(HVL)，其中“HVL”是指大于2×106HCV基因组拷贝/mL血清的HCV病毒负载，其中所述患者接受48周治疗历程。
一个实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有晚期肝脏纤维化或肝脏纤维化处于严重阶段的患者，如通过3或4诺达尔(Knodell)评分测量的且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约60周、或约30周至约1年、或约36周至约50周、或约40周至约48周、或至少约24周、或至少约30周、或至少约36周、或至少约40周、或至少约48周、或至少约60周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有晚期肝脏纤维化或肝脏纤维化处于严重阶段的患者，如通过3或4诺达尔(Knodell)评分测量的且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续约40周至约50周、或约48周的时期。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载大于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约60周、或约30周至约1年、或约36周至约50周、或约40周至约48周、或至少约24周、或至少约30周、或至少约36周、或至少约40周、或至少约48周、或至少约60周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载大于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约40周至约50周、或约48周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载大于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清且无肝脏纤维化或肝脏纤维化处于早期阶段(如通过0、1、或2的诺达尔(Knodell)评分测量的)的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约60周、或约30周至约1年、或约36周至约50周、或约40周至约48周、或至少约24周、或至少约30周、或至少约36周、或至少约40周、或至少约48周、或至少约60周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载大于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清且无肝脏纤维化或肝脏纤维化处于早期阶段(如通过0、1、或2的诺达尔(Knodell)评分测量的)的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约40周至约50周、或约48周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载小于或等于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约20周至约50周、或约24周至约48周、或约30周至约40周、或长达约20周、或长达约24周、或长达约30周、或长达约36周、或长达约48周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载小于或等于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约20周至约24周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1感染且初始病毒负载小于或等于2,000,000病毒基因组拷贝/ml患者血清的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约48周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型2或3感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约60周、或约30周至约1年、或约36周至约50周、或约40周至约48周、或至少约24周、或至少约30周、或至少约36周、或至少约40周、或至少约48周、或至少约60周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型2或3感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约20周至约50周、或约24周至约48周、或约30周至约40周、或长达约20周、或长达约24周、或长达约30周、或长达约36周、或长达约48周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型2或3感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约20周至约24周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型2或3感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段至少约24周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有HCV基因型1或4感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约24周至约60周、或约30周至约1年、或约36周至约50周、或约40周至约48周、或至少约24周、或至少约30周、或至少约36周、或至少约40周、或至少约48周、或至少约60周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有特征为HCV基因型5、6、7、8和9中任一种的HCV感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段约20周至约50周的时间。
另一实施例提供用于治疗HCV感染的任何上文所述方法，其中标题方法经改造以包括如下步骤：(1)识别具有特征为HCV基因型5、6、7、8和9中任一种的HCV感染的患者且随后(2)对所述患者施用标题方法药物疗法，持续一段至少约24周及长达约48周的时期。
适用于治疗的受试者
可对经诊断具有HCV感染的个体施用任何上文治疗方案。可对先前HCV感染治疗失败的个体(“治疗失败患者”，包括非应答者和复发者)施用任何上文治疗方案。
在许多实施例中，在临床上诊断为经HCV感染的个体尤其令人感兴趣。感染HCV的个体识别为在其血液中具有HCV RNA及/或在其血清中具有抗-HCV抗体。所述个体包括抗-HCV ELISA-阳性个体及重组免疫印迹检验(RIBA)呈阳性的个体。所述个体还可以，但不一定具有高血清ALT含量。
在临床上诊断为感染HCV的个体包括未经治疗个体(例如，先前未经受HCV治疗的个体，尤其是那些先前未接受基于IFN-α及/或基于利巴韦林的疗法的个体)及先前HCV治疗失败的个体(“治疗失败”患者)。治疗失败患者包括非应答者(即，先前HCV治疗(例如，先前IFN-α单一疗法、先前IFN-α与利巴韦林组合疗法、或先前聚乙二醇化IFN-α与利巴韦林组合疗法)并未明显地或充分地降低HCV效价的个体)；及复发者(即，先前经HCV治疗的个体，例如，接受先前IFN-α单一疗法、先前IFN-α与利巴韦林组合疗法、或先前聚乙二醇化IFN-α与利巴韦林组合疗法且HCV效价降低但接下来又升高的个体)。
在令人感兴趣的特定实施例中，个体具有至少约105、至少约5×105、或至少约106、或至少约2×106HCV基因组拷贝每毫升血清的HCV效价。所述患者可感染任一HCV基因型(基因型1，包括1a和1b、2、3、4、6等及亚型(例如，2a、2b、3a等))，尤其是诸如HCV基因型1及特定HCV亚型和准种等难以治疗的基因型感染。
由于慢性HCV感染而呈现严重纤维化或早期肝硬化(非代偿失调性Child′s-PughA级或更轻肝硬化)、或后晚期肝硬化(代偿失调性Child′s-Pugh B级或C级肝硬化)的HCV-阳性个体(如上文所述)及在经基于IFN-α疗法的抗病毒治疗之前呈现病毒血或不能够耐受基于IFN-α疗法或具有针对所述疗法的禁忌症候的HCV-阳性个体(如上文所述)也是令人感兴趣的。在令人感兴趣的特定实施例中，依据METAVIR评分系统处于3期或4期肝脏纤维化的HCV-阳性个体适合用本文所述方法进行治疗。在其它实施例中，适合用各实施例方法进行治疗的个体是具有呈现临床表现的代偿失调性肝硬化的患者，包括具有极晚期肝脏硬化的患者，包括那些等待肝脏移植的患者。在又一些实施例中，适合用本文所述方法进行治疗的个体包括具有轻度肝纤维化的患者，包括那些具有早期肝纤维化的患者(在METAVIR、路德维格(Ludwig)、及舒德(Scheuer)评分系统中，处于1期及2期或者在伊沙克(Ishak)评分系统中处于1期、2期、或3期)。
检验
尽管目前存在可测量NS3的蛋白酶、解旋酶和ATP酶活性的检验，但与检测任何酶活性的底物相比NS3在溶液中的低活性需要更大的酶浓度。纳入所述高酶浓度的检验往往会混乱地抑制，产生过多错误的阳性结果。业内目前需要可以足够灵敏性及特异性检测NS3蛋白酶活性、解旋酶活性和ATP酶活性的检验。在一些实施例中，这些检验可用于检测受到抑制性化合物(包括本文所揭示化合物)抑制的NS3蛋白酶、解旋酶及ATP酶活性。
在一些实施例中，将具有增强解旋酶活性的NS3酶纳入标准解旋酶检验中以测量解旋酶活性。在标准解旋酶检验中纳入具有增强解旋酶活性的NS3酶可增强测量NS3酶解旋酶活性的检验的灵敏性及/或特异性。
在一些实施例中，将具有增强蛋白酶活性的NS3酶纳入标准蛋白酶检验中以测量所述蛋白酶活性。在标准蛋白酶检验中纳入具有增强蛋白酶活性的NS3酶可增强测量NS3酶蛋白酶活性的检验的灵敏性及/或特异性。
在一些实施例中，将具有增强ATP酶活性的NS3酶纳入标准ATP酶检验中以测量所述ATP酶活性。在标准ATP酶检验中纳入具有增强ATP酶活性的NS3酶可增强测量NS3酶ATP酶活性的检验的灵敏性及/或特异性。
在一个实施例中，向所述NS3中添加胺氧化物以改良所述解旋酶活性。在一些实施例中，所述胺氧化物选自由下述组成的群组：月桂基(二甲基)-胺氧化物(LDAO)、N，N-二甲基己基胺N-氧化物、N，N-二甲基辛基胺N-氧化物、N，N-二甲基壬基胺N-氧化物、N，N-二甲基癸基胺N-氧化物、及N，N-二甲基十二烷基胺N-氧化物。在一个优选实施例中，使用LDAO。在一些实施例中，向含有NS3的溶液中添加LDAO，其中LDAO在溶液中的最终浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间：0.01mM、0.02mM、0.03mM、0.04mM、0.05mM、0.06mM、0.07mM、0.08mM、0.09mM、0.10mM、0.12mM、0.14mM、0.16mM、0.18mM、0.20mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.5mM、及/或20.mM。
在另一实施例中，向含有NS3的溶液中添加至少一种清洁剂以改良所述解旋酶活性。在一些实施例中，所述清洁剂选自由下述组成的群组：LDAO、吐温20(Tween 20)、曲拉通X100(Triton X100)、普朗尼克F127(Pluronic F127)、CHAPS、β-辛基葡糖苷、月桂基麦芽糖苷、N-月桂酰基肌氨酸、及十六烷基三甲基溴化铵。在一个优选实施例中，添加LDAO。在一个较为优选实施例中，向含有NS3和LDAO的溶液中添加至少一种额外清洁剂。在一些实施例中，所述额外清洁剂选自由下述组成的群组：吐温20、曲拉通X100、普朗尼克F127、CHAPS、β-辛基葡糖苷、月桂基麦芽糖苷、N-月桂酰基肌氨酸、及十六烷基三甲基溴化铵。表A表示于LDAO和至少一种额外清洁剂存在时、及于不存在LDAO及存在至少一种其它清洁剂时的NS3解旋酶活性。
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在一个实施例中，向所述NS3中添加胺氧化物以改良所述蛋白酶活性。在一些实施例中，所述胺氧化物选自由下述组成的群组：月桂基(二甲基)-胺氧化物(LDAO)、N，N-二甲基己基胺N-氧化物、N，N-二甲基辛基胺N-氧化物、N，N-二甲基壬基胺N-氧化物、N，N-二甲基癸基胺N-氧化物、及N，N-二甲基十二烷基胺N-氧化物。在一个优选实施例中，使用LDAO。在一些实施例中，向含有NS3的溶液中添加LDAO，其中LDAO在溶液中的最终浓度是约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间：0.01mM、0.02mM、0.03mM、0.04mM、0.05mM、0.06mM、0.07mM、0.08mM、0.09mM、0.10mM、0.12mM、0.14mM、0.16mM、0.18mM、0.20mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.5mM、及/或2.0mM。
在另一实施例中，向含有NS3的溶液中添加至少一种清洁剂以改良所述蛋白酶活性。在一些实施例中，所述清洁剂选自由下述组成的群组：LDAO、吐温20、曲拉通X100、普朗尼克F127、CHAPS、β-辛基葡糖苷、月桂基麦芽糖苷、N-月桂酰基肌氨酸、及十六烷基三甲基溴化铵。在一个优选实施例中，添加LDAO。在一个较为优选实施例中，向含有NS3和LDAO的溶液中添加至少一种额外清洁剂。在一些实施例中，所述额外清洁剂选自由下述组成的群组：吐温20、曲拉通X100、普朗尼克F127、CHAPS、β-辛基葡糖苷、月桂基麦芽糖苷、N-月桂酰基肌氨酸、及十六烷基三甲基溴化铵。在另一实施例中，可向含有NS3的溶液中添加盐、溶剂和稳定剂以改良其蛋白酶活性。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验可在解旋酶浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约上述两者之间时进行：0.001nM、0.01nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1.0nM、1.1nM、1.2nM、1.3nM、1.4nM、1.5nM、1.6nM、1.7nM、1.8nM、1.9nM、2.0nM、2.1nM、2.2nM、2.3nM、2.4nM、2.5nM、2.6nM、2.7nM、2.8nM、2.9nM、3.0nM、3.1nM、3.2nM、3.3nM、3.4nM、3.5nM、3.6nM、3.7nM、3.8nM、3.9nM、4.0nM、4.1nM、4.2nM、4.3nM、4.4nM、4.5nM、4.6nM、4.7nM、4.8nM、4.9nM、5.0nM、5.2nM、5.4nM、5.6nM、5.8nM、6.0nM、6.2nM、6.4nM、6.6nM、6.8nM、7.0nM、7.2nM、7.4nM、7.6nM、7.8nM、8.0nM、8.2nM、8.4nM、8.6nM、8.8nM、9.0nM、9.2nM、9.4nM、9.6nM、9.8nM、10.0nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、90nM、及100nM。在一个优选实施例中，在解旋酶浓度为5nM时进行解旋酶检验。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加Tris以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001mM、0.01mM、0.1mM、1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、31mM、32mM、33mM、34mM、35mM、36mM、37mM、38mM、39mM、40mM、41mM、42mM、43mM、44mM、45mM、46mM、47mM、48mM、49mM、50mM、52mM、54mM、56mM、58mM、60mM、62mM、64mM、66mM、68mM、70mM、72mM、74mM、76mM、78mM、80mM、82mM、84mM、86mM、88mM、90mM、92mM、94mM、96mM、98mM、100mM、200mM、300mM、400mM、及500mM。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加Tris以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为50mM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加MgCl2以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001mM、0.01mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、1.6mM、1.7mM、1.8mM、1.9mM、2.0mM、2.1mM、2.2mM、2.3mM、2.4mM、2.5mM、2.6mM、2.7mM、2.8mM、2.9mM、3.0mM、3.1mM、3.2mM、3.3mM、3.4mM、3.5mM、3.6mM、3.7mM、3.8mM、3.9mM、4.0mM、4.1mM、4.2mM、4.3mM、4.4mM、4.5mM、4.6mM、4.7mM、4.8mM、4.9mM、5.0mM、5.2mM、5.4mM、5.6mM、5.8mM、6.0mM、6.2mM、6.4mM、6.6mM、6.8mM、7.0mM、7.2mM、7.4mM、7.6mM、7.8mM、8.0mM、8.2mM、8.4mM、8.6mM、8.8mM、9.0mM、9.2mM、9.4mM、9.6mM、9.8mM、10mM、20mM、30mM、40mM、及50mM。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加MgCl2以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为5mM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在ATP底物浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001mM、0.01mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、1.6mM、1.7mM、1.8mM、1.9mM、2.0mM、2.1mM、2.2mM、2.3mM、2.4mM、2.5mM、2.6mM、2.7mM、2.8mM、2.9mM、3.0mM、4.0mM、5.0mM、10mM、25mM、50mM、及100mM。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在ATP底物浓度为1.5mM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在双链寡核苷酸浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001nM、0.01nM、0.1nM、1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM、10nM、11nM、12nM、13nM、14nM、15nM、16nM、17nM、18nM、19nM、20nM、21nM、22nM、23nM、24nM、25nM、26nM、27nM、28nM、29nM、30nM、31nM、32nM、33nM、34nM、35nM、36nM、37nM、38nM、39nM、40nM、41nM、42nM、43nM、44nM、45nM、46nM、47nM、48nM、49nM、50nM、52nM、54nM、56nM、58nM、60nM、62nM、64nM、66nM、68nM、70nM、72nM、74nM、76nM、78nM、80nM、82nM、84nM、86nM、88nM、90nM、92nM、94nM、96nM、98nM、100nM、200nM、300nM、400nM、及500nM。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在双链寡核苷酸浓度为50nM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在捕获链浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001mM、0.01mM、0.1mM、10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、220mM、230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM、300mM、310mM、320mM、330mM、340mM、350mM、360mM、370mM、380mM、390mM、400mM、410mM、420mM、430mM、440mM、450mM、460mM、470mM、480mM、490mM、500mM、520mM、540mM、560mM、580mM、600mM、620mM、640mM、660mM、680mM、700mM、720mM、740mM、760mM、780mM、800mM、820mM、840mM、860mM、880mM、900mM、920mM、940mM、960mM、980mM、1M、2M、3M、4M、及5M。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在捕获链浓度为250nM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加DTT以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：0.001mM、0.01mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、1.6mM、1.7mM、1.8mM、1.9mM、2.0mM、2.1mM、2.2mM、2.3mM、2.4mM、2.5mM、2.6mM、2.7mM、2.8mM、2.9mM、3.0mM、3.1mM、3.2mM、3.3mM、3.4mM、3.5mM、3.6mM、3.7mM、3.8mM、3.9mM、4.0mM、4.1mM、4.2mM、4.3mM、4.4mM、4.5mM、4.6mM、4.7mM、4.8mM、4.9mM、5.0mM、5.2mM、5.4mM、5.6mM、5.8mM、6.0mM、6.2mM、6.4mM、6.6mM、6.8mM、7.0mM、7.2mM、7.4mM、7.6mM、7.8mM、8.0mM、8.2mM、8.4mM、8.6mM、8.8mM、9.0mM、9.2mM、9.4mM、9.6mM、9.8mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、及100mM。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加DTT以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为10mM时进行。
在一个实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加甘油以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为约、至少、至少约、大于、大于约、介于、介于约下述两者之间时进行：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、及40％。在一个优选实施例中，所述NS3解旋酶检验是在向检验缓冲液中添加甘油以使其在所述检验缓冲液中的最终浓度为15％时进行。
在一些实施例中，采用ATP酶检验来分析NS3的ATP酶活性。用于HCV NS3ATP酶活性的此检验是间接可检测标记物检验原理。在一些实施例中，用于HCV NS3ATP酶活性的所述检验是基于市售检验试剂盒(TranscreenerTM Kinase Plus，贝布鲁克实验室(Bellbrook Labs)，U.S.A.)应用的间接荧光偏振检验原理.在一些实施例中，ATP底物在y-位置经脱磷酸化并因NS3 ATP酶活性而转化成ADP。结果，浓度增加的生成产物ADP与经可检测标记物标记的ADP示踪分子竞争结合ADP-特定抗体。在一个优选实施例中，用荧光标记物标记ADP示踪分子。
在一些实施例中，在确定培育期后，通过添加终止溶液来对NS3 ATP酶实施灭活。因此可以确定NS3 ATP酶的潜在抑制剂可将链接可检测标记物的ADP示踪剂与抗体结合而捕获来自可检测标记物的信号。荧光偶合的ADP示踪剂与抗体结合，产生荧光偏振信号。相比之下，活性NS3 ATP酶的存在导致荧光ADP示踪剂自抗体移置，产生低荧光偏振信号。
在一个优选实施例中，如在本文所提出实施例中所述具有增强解旋酶活性的NS3结合间接荧光检验使用以提供更多关于NS3 ATP酶活性特异性及/或灵敏性的结果。
在一个实施例中，采用解旋酶检验来分析NS3解旋酶活性。在此检验的若干实施例中，使用双链DNA寡核苷酸作为解旋酶解螺旋反应的底物。在一些实施例中，所述双链的一条链包含可检测标记物，其中对置链含有能够猝灭来自可检测标记物的信号的猝灭部分。在一个优选实施例中，(+)-DNA链用红移染剂(包括但不限于MR121和Att0647)在其5′-端加以标记。在一个优选实施例中，(-)-DNA链的3′-末端由含3个紧靠互补(+)-DNA链染剂的鸟苷(“G”)核苷酸的片段组成。荧光染剂与鸟苷碱基相互作用导致能量转移并有效地猝灭所发出信号。
在一些实施例中，NS3解旋酶与在本文所提出实施例中所述寡核苷酸底物一起培育。在一些实施例中，所述NS3解旋酶有利于DNA双链的ATP依赖性解螺旋及分离两条单链。在一个优选实施例中，添加“捕获”DNA单链以防止离散DNA链再退火。在一些实施例中，“捕获”寡核苷酸与(-)DNA链互补。在其它实施例中，“捕获”寡核苷酸与(+)DNA链互补。
在一些实施例中，鸟苷残基的所述“G”-猝灭效应由于含有鸟苷残基的DNA链3′-末端经生物素额外标记而进一步扩大。此改造有利于完整双链与抗生蛋白链菌素紧密结合，所述抗生蛋白链菌素在一些实施例中包含于终止溶液中。因此，所述染剂靠近抗生蛋白链菌素，导致来自红移染剂的信号受到进一步猝灭。
检验实例1
为了识别可产生高度HCV NS3/4a蛋白酶活性的反应条件，分析若干添加剂以确定其对反应速率的影响。所用基础缓冲液是50mM Tris-HCl，pH7.5，含有15％甘油。所用基于FRET的检验底物(序列：Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2)是从Anaspec公司(圣何塞(San Jose)，CA)获得。所用NS4a接替肽(KGSVVIVGRIILSGRK)是从中西生物技术(Midwest Biotech)(费希尔(Fishers)，IN)获得。所用NS3酶是源自HCV基因型lb-K2040的基准野生型全长酶。使用0.5μM底物在基础缓冲液中的NS3催化水解反应速率作为参考。研究不同浓度添加剂对反应速率的影响且数据概述于下表B中。
表B
所测试添加剂 所测试添加剂的浓度 结论
DTT 0、1、10和30mM 10和30mM DTT改良活性.
β-ME 0、1、10和100mM 活性改良很少
TCEP 0、0.5和1mM 对活性不利
LDAO 0、0.06和0.6mM LDAO在0.6mM下活性显著升高(～10倍)
CHAPS 0、0.2和2mM CHAPS在2mM下活性增强
β-OG 0、0.5和5mM 无活性改良
吐温-20 0、1.2和12μM 在12μM下活性改良
曲拉通X-100 0、6和60μM 在12μM下活性改良
NaCl 0、100和500mM NaCl对活性不利
NS4a肽 0、2.5、25、250和2500μM 在25和2500μM下活性最佳
发现产生最大蛋白酶活性的组成为
50mM Tris-HCl，pH7.5
15％甘油
0.6mM LDAO
10mM DTT
25μM NS4a肽
检验实例2
分析各种检验条件以确定对NS3解旋酶活性的影响。使用双链DNA寡核苷酸作为解旋酶解螺旋反应的底物来测量解旋酶活性。所述双链的(+)链包含荧光团FAM和(-)链，所述(-)链含有在与双链接触时能够猝灭来自FAM的信号的猝灭部分黑洞猝灭(BHQ-1)。所述NS3解旋酶在各种下文所述检验条件下与寡核苷酸底物一起培育，有利于DNA双链的ATP-依赖性解螺旋和两条单链的分离。添加“捕获”DNA单链以防止离散DNA链再退火。测量来自FAM的荧光信号以确定NS3活性度。
各种缓冲条件
使用各种缓冲条件同时改变酶浓度来分析解旋酶活性。开始，使用解旋酶或蛋白酶缓冲液的标准储存液。所述储存解旋酶缓冲液含有25mM MOPS，ph7.0，1.5mMMgCl2，0.005％曲拉通X-100。所述储存蛋白酶缓冲液含有50mM Tris，ph7.5，0.6mMLDAO及15％甘油。使用各种浓度的酶并添加补充有Mg、DTT、及/或LDAO的储存缓冲液来分析解旋酶检验。图1绘示所述酶于各种缓冲液存在时的解旋酶活性。
优化分析的结构揭露补充有1.5mM MgCl2和10mM DTT的储存蛋白酶缓冲液产生最佳的解旋酶活性结果，其次是补充有MgCl2的储存蛋白酶缓冲液。下一最佳结果是使用补充有LDAO和DTT的解旋酶缓冲液达成，其次是补充有LDAO的解旋酶缓冲液。单独的解旋酶缓冲液提供对照并显示最低的NS3解旋酶活性。
各种量的酶
使用各种浓度的全长野生型(WT FL)NS3酶来分析解旋酶活性。按照上文所述，于补充有1.5mM MgCl2和10mM DTT的蛋白酶缓冲液存在时实施解旋酶检验。图2A-2D绘示于各种浓度NS3酶存在时的NS3解旋酶检验结果。图2A绘示随时间变化的相对荧光单元(RFU)。图2B绘示随着酶浓度变化的解螺旋反应的初始速率(RFU/秒)。图2C绘示随着时间变化的解螺旋反应的初始速率(RFU(平均值))。图2D测量随着酶浓度变化的解螺旋反应的幅值(通过最终RFU测量)。
各种量的MgCl2
使用存于检验缓冲液中的各种浓度的MgCl2来分析NS3的解旋酶活性。按照下文所述测量解旋酶活性，其中反应物是由下述构成：1nM WT FL NS3酶、50nM寡核苷酸底物、250nM捕获寡核苷酸、300μM ATP，存于含有补充有10mM DTT的蛋白酶缓冲液的检验缓冲液中。向检验缓冲液中添加各种量的MgCl2以评价最佳MgCl2浓度。分析浓度为10mM、5mM、2.5mM、1.25、.625mM、.313mM、及0mM的MgCl2。图3绘示MgCl2优化评估的结果。
各种量的ATP
使用存于检验缓冲液中的各种浓度的ATP分析NS3的解旋酶活性。按照下文所述测量解旋酶活性，其中反应物是由下述构成：1nM WT FL NS3酶、50nM寡核苷酸底物、250nM捕获寡核苷酸、300μM ATP，存于含有补充有1.5mM MgCl2和10mMDTT的蛋白酶缓冲液的检验缓冲液中。向检验缓冲液中添加各种量的ATP以评价最佳ATP浓度。分析浓度为10mM、5mM、2.5mM、1.25、.625mM、.313mM、.156mM、.078mM及0mM的ATP。图4A和4B绘示ATP优化评估的结果。
各种量的双链寡核苷酸底物
使用存于检验缓冲液中的各种浓度的双链寡核苷酸底物分析NS3的解旋酶活性。按照下文所述测量解旋酶活性，其中反应物是由1nM WT FL NS3酶、300μM ATP构成，存于含有补充有1.5mM MgCl2和10mM DTT的蛋白酶缓冲液的检验缓冲液中。向检验缓冲液中添加各种量的双链寡核苷酸底物以评价最佳寡核苷酸底物浓度。分析浓度为200nM、100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.13nM、1.56nM、及0mM的双链寡核苷酸底物。图5A至C绘示ATP优化评估的结果。
作为所述优化的结果，形成最佳检验条件，其包括5nM酶、50mM Tris pH7.5、0.6mM LDAO、5mM MgCl2、1.5mM ATP、50nM双链寡核苷酸底物、250nM捕获链、10mM DTT及15％甘油。使用最佳检验条件观测的解螺旋速率(kobs)为0.02min-1。
NS3抑制剂的制备
方法
可按照每一节段所示程序和反应图来制备下列各节段的HCV解旋酶抑制剂。在合成中所用某些化合物和中间体已经阐述于其它地方。在每一下列NS3抑制剂制备节段中的编号意指仅适于特定节段且不应诠释为其它节段的相同编号或与其它节段的相同编号混淆。
NS3抑制剂的制备：第I节段
反应图1
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2-(1-((5-氯苯并[B]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
在0℃下向吲哚-3-乙酸(100mg，0,57mmol)存于1ml DMF的混合物中添加氢化钠(60％存于矿物油中的分散液，54.8mg，1.37mmol)。将所述混合物在0℃下搅拌30min。添加3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(179mg，0.79mmol)并继续搅拌1小时。用冰水猝灭所述反应物。将所得混合物用Et20(Et＝乙基)洗涤三次且随后用1N HCl酸化水性溶液。用EtOAc(3x)萃取浑浊混合物且有机萃取物用1N HCl(3x)洗涤并经Na2S04干燥且浓缩。通过将粗制产物与Et2O一起研磨获得白色粉末状期望产物2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸，产量64mg。APCI(阴性)354.0(M-1)。
反应图2
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2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
步骤1：2-(5-(苄氧基)-1-(3-溴苄基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯的制备
将2-(5-(苄氧基)-1-(3-溴苄基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(0.69g，1.5mmol)存于10mLDCM中的混合物置于100mL圆底烧瓶中。随后添加N，N′-二异丙基甲脒酸叔丁基酯(0.46g，2.3mmol)。将所述混合物加热至回流。所述溶液自澄清淡黄色变为浑浊白色。在2小时后，再添加N，N′-二异丙基甲脒酸叔丁基酯(0.46g，2.3mmol)且回流1小时并在室温下静置过夜。次日，再添加N，N′-二异丙基氨基甲酸叔丁基酯(0.46g，2.3mmol)并回流6小时。使反应物冷却至室温。过滤出白色固体且用二氯甲烷洗涤。将所述混合物浓缩成褐色油状物并通过色谱柱纯化，用己烷至5∶1己烷/EtOAc洗脱以获得期望产物澄清油状2-(5-(苄氧基)-1-(3-溴苄基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯(0.68g，产率为88％)。
步骤2：2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯的制备
向在密封试管中的2-(5-(苄氧基)-1-(3-溴苄基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯(100mg，0.20mmol)和4-氟-3-甲基苯基硼酸(30mg，0.20mmol)存于DME(4mL)和2MNa2CO3水溶液(2mL)的混合物的脱气溶液中添加肆(三苯基膦)钯(11.4mg.0.010mmol)。将所述反应混合物在回流下搅拌过夜。用乙酸乙酯和水稀释所述反应混合物。分离有机层，水性层用EtOAc(2X)萃取且经Na2SO4干燥并浓缩。通过色谱柱分离纯化残留物，用己烷至10％EtOAc/Hex洗脱以获得产物2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯(80mg，产率为76％)。
步骤3：2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
向在烧瓶中的2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸叔丁基酯(40mg，0.0075mmol)中添加2mL 10％TFA/CH2Cl2溶液(TFA＝三氟乙酸)。将所述混合物在室温下搅拌过夜。移除溶剂。随后通过哈里逊(Horizon)反相柱纯化残留物，用10％～85％CH3CN/水洗脱以获得期望产物2-(5-(苄氧基)-1-((4′-氟-3′-甲基联苯-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(26mg，产率为73％)。APCI(阴性)478.1(M-1)。
反应图3
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2-(1-(3′-甲氧基联苯-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
步骤1：2-(1-(3′-甲氧基联苯-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
向密封试管中填装2-(1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(210mg，10mmol)、4′-溴-3-甲氧基联苯基(326mg，1.24mmol)、二-叔丁基(2′，4′，6′三异丙基-联苯-2-基)phosphene(33mg，0.078mmol)、磷酸钾(307mg，1.45mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(24mg，0.026mmol)存于2mL甲苯中的混合物。向所述系统中通入N2，10min，随后加热至108℃，16小时。将所述反应物冷却回至室温并用EtOAc稀释。所述混合物经由硅藻土过滤并浓缩。通过Biotage纯化粗制产物，用20∶1至10∶1 Hex/EtOAc洗脱以获得期望产物2-(1-(3′-甲氧基联苯-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(300mg，产率为75％)。APCI(阴性)356.1(M-1)。
步骤2：2-(1-(3′-甲氧基联苯-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
将2-(1-(3′-甲氧基联苯-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(100mg，0.26mmol)溶于2mL 1∶1 THF/MeOH(THF＝四氢呋喃，Me＝甲基)中。添加氢氧化锂水合物(44mg，1.1mmol)并将所述反应物在室温下搅拌3小时。蒸发溶剂。添加水并添加几滴1N NaOH。所述混合物随后用Et2O(3X)萃取且丢弃Et2O萃取物。水性层随后用1N HCl酸化并用EtOAc(3x)萃取。有机层经Na2SO4干燥。通过自EtOAc/Hex结晶获得产物以获得黄色固体(65mg，产率为70％)。
反应图4
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2-(5-(苄氧基)-1-(3-(苄氧基)苄基)-1H-吲哚-3-基)-N-(甲基磺酰基)乙酰胺
将酸(10mg，0.021mmol)存于1，2-二氯乙烷(0.5mL)中的溶液添加至1，1′-羰基二咪唑(4.5mg，0.027mmol)中并在50℃下搅拌。在2h后，向其中添加甲烷磺酰胺(2.4mg，0.025mmol)、DBU(6.4mg，0.042mmol)并在室温下搅拌过夜。通过制备型TLC纯化部分反应混合物。LCMS(APCI)-，m/z 553.3(M-H)，Rt＝3.03min。
反应图5
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2-(5-(苄氧基)-1-(3-(苄氧基)苄基)-1H-吲哚-3-基)-1-(吡咯烷-1-基)乙酮
将酸(50mg，0.105mmol)存于二氯甲烷(1.0mL)中的溶液添加至1，1′-羰基二咪唑(23.75mg，0.146mmol)中并在室温下搅拌。在4h后，向其中添加环戊基胺(8.2mg，0.12mmol)并在室温下搅拌过夜。通过制备型TLC纯化部分反应混合物。LCMS(APCI)-，m/z 529.2(M-H)。
反应图6
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步骤1：2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙腈的制备
在0℃下，向2-(1H-吲哚-3-基)乙腈(300mg，1.92mmol)存于THF(6mL)的溶液中添加NaHMDS存于THF(1.92mL，1.92mmol)中的1.0M溶液并将反应物在0℃下搅拌5分钟且随后添加3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(502mg，1.92mmol)。使所述反应物升温至室温过夜。用EtOAc(20mL)稀释所述反应物且用1N HCl(aq)洗涤有机部分。水性相用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。通过硅胶柱纯化残留物，用5∶1己烷/EtOAc洗脱。随后通过PLC进一步纯化此材料，用二氯甲烷(DCM)洗脱且色谱分离带在Rf 0.45处，提供黄色油状2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(180mg，产率为28％)。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ7.78(d，J＝8.6Hz，1H)，7.65-7.03(m，8H)，5.46(s，2H)。
步骤2：3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚的制备
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(100mg，0.297mmol)存于DCM(2mL)的溶液中添加TMSN3(0.119mL，0.891mmol)和TBAF-3H2O(46.8mg，0.148mmol)。将所述反应物在密封试管中于120℃(外部温度)下搅拌15h。在真空中浓缩所述反应混合物并通过PLC纯化残留物，用2∶1 DCM/EtOAc洗脱。分离得灰白色固体状3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚(14mg，产率为12％)。检测到MS APCI(-)m/z 380。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.85(d，J＝8.6Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.45-7.03(m，7H)，5.56(s，2H)，4.42(s，2H)。
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步骤1：2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-2-苯基-1H-吲哚-3-基)乙腈的制备
在0℃下经2min向2-(2-苯基-1H-吲哚-3-基)乙腈(500mg，2.15mmol)存于THF(20mL)的溶液中缓慢地添加NaHMDS(2.15mL，2.15mmol)。随后一次性添加3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(563mg，2.15mmol)。将所述反应物经4h升温至室温。添加水(20mL)且过滤出米色固体并干燥。将所述固体与DCM一起研磨同时加热并进行超声波处理，过滤并干燥。分离出米色固体状2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-2-苯基-1H-吲哚-3-基)乙腈(404mg，45％)。检测到MS APCI(+)m/z 413。
步骤2：3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-2-苯基-1H-吲哚的制备
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-2-苯基-1H-吲哚-3-基)乙腈(150mg，0.363mmol)中添力TBAF-3H2O(57.3mg，0.182mmol)和TMSN3(0.146mL，1.09mmol)。添力甲苯(0.1ml)并将所述反应物在120℃下加热15h。在冷却后，添加1N HCl(aq)。过滤出固体并与DCM一起研磨。获得期望的米色固体状3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-2-苯基-1H-吲哚(124mg，产率为74.9％)。检测到MS APCI(-)m/z 454。1HNMR(400mHz.d6-DMSO)δ7.99-6.97(m，13H)，5.55(s，2H)，4.28(s，2H)。
反应图7
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步骤1：1-(2-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基)氨基脲的制备
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(165mg，0.464mmol)存于DCM(5mL)的溶液中添加BOP-Cl(118mg，0.464mmol)并将反应物在室温下搅拌5mins。随后添加三乙胺(0.0776mL，0.556mmol)，继而添加氨基脲盐酸盐(51.7mg，0.464mmol)。将所述反应物在室温下搅拌过夜。过滤所述反应物并在真空中浓缩滤液。通过PLC纯化残留物，用9∶1 DCM/MeOH洗脱。分离得淡米色固体状1-(2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基)氨基脲(130mg，产率为67.9％)。检测到MS APCI(-)m/z 411。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.86-7.08(m，9H)，5.57(s，2H)，3.71(s，2H)。
步骤2：5-((1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-4H-1，2，4-三唑-3-醇的制备
将1-(2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基)氨基脲(125mg，0.303mmol)存于1N NaOH(aq)(10mL)中的溶液在回流下加热3h。添加1N HCl(aq)以酸化所述反应混合物(pH1)并用DCM(2×40mL)萃取粗制产物。合并有机部分用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。将所述米色固体与醚一起研磨并过滤出固体以获得淡米色固体状5-((1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-4H-1，2，4-三唑-3-醇(23mg，产率为19.2％)。检测到MS APCI(-)m/z 393。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ11.2(s，1H)，11.12(s，1H)，8.04-7.03(m，9H)，5.64(s，2H)，3.83(s，2H)。
反应图8
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3-((1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-醇
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(329mg，0.925mmol)存于DCM(10mL)的溶液中添加DCC(191mg，0.925mmol)和DMAP(5.65mg，0.0462mmol)并将所述反应物在室温下搅拌5min。添加2，2-二甲基-1，3-二氧杂环己烷-4，6-二酮(133mg，0.925mmol)并将反应物在室温下搅拌15h。过滤出白色沉淀物(DCU)并在真空中浓缩滤液。向此粗制4-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)-3-酮基丁酸乙酯(200mg，0.4696mmol)存于EtOH(10mL)的混合物中添加单水合肼(0.02278ml，0.4696mmol)并将所述反应物在回流下加热6h。在真空中浓缩所述反应物。通过PLC纯化残留物，用9∶1 DCM/MeOH洗脱。色谱分离带在Rf 0.3处，获得米色固体状3-((1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)甲基)-1H-吡唑-5-醇(4mg，产率为2.163％)。检测到MS APCI(-)m/z 392。1HNMR(400mHz.CD3OD)δ7.86-7.02(m，10H)，5.55(s，2H)，4.00(s，2H)。
反应图9
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步骤1：2-(1-(2-羟基-2-苯基乙基)-1H-吲哚-3-基)乙腈的制备
在0℃下向2-(1H-吲哚-3-基)乙腈(2.00g，12.81mmol)存于DMF(20mL)的溶液中添加NaHMDS(12.81ml，12.81mmol)。将反应物在0℃下搅拌5mins且随后一次性添加2-苯基环氧乙烷(1.460ml，12.81mmol)。将所述反应物在室温下继续搅拌15h。添加饱和NaHCO3(aq)且有机部分用EtOAc(50mL)萃取。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。通过硅胶塞纯化残留物，用DCM(Rf0.18)洗脱以获得黄色油状产物，其在静置时结晶。分离得黄色结晶固体状2-(1-(2-羟基-2-苯基乙基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(1.46g，产率为41.26％)。检测到MS APCI(+)m/z 259(-H2O)。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.56-7.06(m，10H)，4.98(m，1H)，4.29(m，2H)，3.87(s，2H)。
步骤2：2-(3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-1-苯基乙醇的制备
向2-(1-(2-羟基-2-苯基乙基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(200mg，0.7238mmol)中添加叠氮基三甲基硅烷(0.2909mL，2.171mmol)和N，N，N-三丁基-N-氟丁-1-胺三水合物(114.2mg，0.3619mmol)。将所述反应物在密封试管中于120℃下搅拌15h。在真空中浓缩反应混合物并通过矽胶塞纯化残留物，用9∶1 DCM/MeOH洗脱，Rf0.3。(产物含有TBAF)。将残留物溶于1N NaOH(aq)中，用醚洗涤且用1N HCl(aq)中和水性相。用醚(20mL)萃取产物。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。随后自MeOH结晶出产物。分离得浅黄色结晶固体状2-(3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-1-苯基乙醇(61mg，产率为26.39％)。检测到MS APCI(-)m/z 318。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.39-6.99(m，10H)，5.01(m，1H)，4.39(s，2H)，4.31(m，2H)。
步骤3：2-(3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-1-苯基乙酮的制备
向2-(3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-1-苯基乙醇(20mg，0.063mmol)存于DCM(5mL)的溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(29mg，0.069mmol)并将反应物在室温下搅拌2h。所述反应物用DCM(20mL)稀释并用饱和NaHCO3(aq)洗涤。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。通过PLC纯化残留物，用9∶1 DCM/MeOH(Rf0.4)洗脱以获得白色固体状2-(3-((1H-四唑-5-基)甲基)-1H-吲哚-1-基)-1-苯基乙酮(12mg，产率为60％)。检测到MS APCI(-)m/z 316。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ8.13-7.03(m，10H)，5.79(s，2H)，4.46(s，2H)。
反应图10
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3-(1-(1H-四唑-5-基)乙基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚
在-78℃下向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(125mg，0.371mmol)存于THF(3mL)的溶液中添加NaHMDS(0.371mL，0.371mmol)存于THF的1.0M溶液并将所述反应物在-78℃下搅拌10mins。随后一次性添加碘甲烷(0.0231mL，0.371mmol)并将所述反应物在-78℃下搅拌10min，最后经15h升温至室温。添加EtOAc(30mL)并用1N HCl(aq)猝灭所述反应物。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。通过PLC纯化褐色残留物，用1∶1己烷/DCM洗脱。在Rf0.6处的色谱分离带含有2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)丙腈与2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙腈的混合物。向此含有2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)丙腈(90mg，0.257mmol)的混合物中添加TMSN3(0.206ml，1.54mmol)和TBAF.3H2O(40.5mg，0.128mmol)。将所述反应物于120℃下搅拌15h.在真空中浓缩反应混合物并通过矽胶塞纯化残留物，用2∶1DCM/EtOAc洗脱，Rf0.15。随后通过PLC纯化残留物，用9∶1DCM/MeOH洗脱。在残留物自MeOH结晶后自在Rf0.5处的色谱分离带分离得灰白色固体状3-(1-(1H-四唑-5-基)乙基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚(4mg，产率为3.96％)。检测到MS APCI(-)m/z 392。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.87-6.99(m，9H)，5.59(s，2H)，4.81(m，1H)，1.84(d，J＝7.0Hz，2H)。
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3-(2-(1H-四唑-5-基)丙-2-基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚
在-78℃下，向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙腈(125mg，0.371mmol)存于THF(3mL)的溶液中添加NaHMDS(0.371mL，0.371mmol)存于THF中的1.0M溶液并将所述反应物在-78℃下搅拌10mins。随后一次性添加碘甲烷(0.0231mL，0.371mmol)并将所述反应物在-78℃下搅拌10mins，随后经15h升温至室温。添加EtOAc(30mL)并用1N HCl(aq)猝灭所述反应物。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。通过PLC纯化褐色残留物，用1∶1己烷/DCM洗脱。在Rf0.6处的色谱分离带含有2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)丙腈与2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙腈的混合物。向此含有2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙腈(90mg，0.257mmol)的混合物中添加TMSN3(0.206ml，1.54mmol)和TBAF-3H2O(40.5mg，0.128mmol)。将所述反应物在120℃下搅拌15h。在真空中浓缩反应混合物并通过矽胶塞纯化残留物，用2∶1DCM/EtOAc洗脱，Rf0.15。随后通过PLC纯化残留物，用9∶1DCM/MeOH洗脱。也是通过PLC自在Rf0.4处的色谱分离带分离得白色固体状3-(2-(1H-四唑-5-基)丙-2-基)-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚(3mg，产率为2.87％)(NMR-3，MS-3)。检测到MS APCI(-)m/z 406。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.88-6.91(m，9H)，5.62(s，2H)，1.91(s，6H)。
反应图11
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步骤1：2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
在0℃下向2-(1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(1.00g，4.920mmol)存于1∶1v/v THF/DMF(6mL)的溶液中添加ZnCl2(2.012g，14.76mmol)和苯甲酰氯(0.5711ml，4.920mmol)。将所述反应物在室温下搅拌14h。所述反应物用DCM(20mL)稀释且混合物用1N HCl(aq)洗涤。有机层用饱和NaHCO3(aq)、盐水洗涤，经干燥(MgSO4)并在真空中移除溶剂。产物在浓缩时结晶。将结晶固体与醚(20mL)一起研磨并过滤出米色固体。获得米色固体状2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(840mg，产率为55.55％)。检测到MSAPCI(+)m/z 308。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ8.86(brs，1H)，7.82-7.16(m，9H)，4.12(m，2H)，3.83(s，2H)，1.22(m，3H)。
步骤2：乙基2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
向2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(797mg，2.59mmol)存于THF/MeOH(1∶1v/v)(10mL)的溶液中添加2N KOH(8mL)并将反应物在室温下搅拌4h。添加醚(20mL)并分离各层。用浓HCl将水性层酸化至pH1。用醚(20mL)萃取粗制产物且萃取物用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。将残留物与醚一起研磨且过滤出淡黄色固体并干燥。获得浅黄色固体状2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸(590mg，产率为81.5％)。检测到MS APCI(-)m/z 278。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.13(brs，1H)，11.56(brs，1H)，7.71-7.05(m，9H)，3.75(s，2H)。
步骤3：2-(2-苯甲酰基-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
在-78℃下，向2-(2-苯甲酰基-1H-吲哚-3-基)乙酸(100mg，0.3581mmol)存于DMF(4mL)的溶液中添加NaHMDS存于THF(0.7161ml，0.7161mmol)中的1.0M溶液。将所述反应物在-78℃下搅拌4mins，最后添加3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(93.65mg，0.3581mmol)。将所述反应物经15h升温至室温。添加1N HCl(aq)(10mL)并用醚(20ml)萃取粗制产物。醚层用盐水洗涤且经干燥(MgSO4)。在真空中移除溶剂。通过PLC纯化残留物，用9∶1DCM/MeOH洗脱。Rf0.45。在Rf0.45处色谱分离带获得淡黄色/绿色固体状2-(2-苯甲酰基-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(6mg，产率为3.643％)。检测到MS APCI(-)m/z 459。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ7.80-6.68(m，13H)，5.53(s，2H)，3.77(s，2H)。
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步骤1：2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
在0℃下向2-(1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(2.00g，9.841mmol)存于1∶1v/v THF/DMF(6mL)的溶液中添加ZnCl2(4.024g，29.52mmol)和联苯-4-羰基氯(2.132g，9.841mmol)。将所述反应物在室温下搅拌14h。所述反应物用DCM(20mL)稀释且混合物经由玻璃烧结漏斗过滤。用DCM(50mL)洗涤残留物。用1N HCl(aq)洗涤固体残留物同时进行超声波处理以破碎结块。通过冷MeCN研磨米色固体。含有产物的滤液开始固化。此固体自热乙腈(15mL)结晶。获得两种收获物以得到淡黄色固体状2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(1.57g，产率为41.61％)。检测到MS APCI(+)m/z 384。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ8.91(brs，1H)，7.92-7.19(m，13H)，4.12(m，2H)，3.90(s，2H)，1.21(m，3H)。
步骤2：2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
向2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(1.50g，3.912mmol)存于THF/MeOH(1∶1v/v)(10mL)的溶液中添加2N KOH(10mL)并将反应物在室温下搅拌4h。添加醚(20mL)并分离各层。用浓HCl将水性相酸化至pH1。用醚(20mL)萃取粗制产物且萃取物用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。将残留物与醚一起研磨且过滤出淡黄色固体并干燥。获得淡黄色固体状2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(1.105g，产率为79.48％)。检测到MS APCI(-)m/z 354。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.21(brs，1H)，11.66(s，1H)，7.88-7.12(m，13H)，3.88(s，2H)。
步骤3：2-(2-(联苯基羰基)-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
在-78℃下向2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(150mg，0.4221mmol)存于DMF(4ml)的溶液中添加NaHMDS存于THF(0.8442mL，0.8442mmol)的1.0M溶液。将所述反应物在-78℃下搅拌4mins，随后添加(溴甲基)环丙烷(0.04093ml，0.4221mmol)。将所述反应物经15h升温至室温。添加1N HCl(aq)(10mL)并用醚(20ml)萃取粗制产物。醚层用盐水洗涤且经干燥(MgSO4)。在真空中移除溶剂并通过PLC纯化残留物，用9∶1DCM/MeOH洗脱。在Rf0.5处的色谱分离带含有产物和杂质。此黄色胶状残留物通过自乙腈(3mL)结晶来纯化。获得淡黄色结晶固体状2-(2-(联苯基羰基)-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(35mg，产率为20.25％)。检测到MS APCI(-)m/z409。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.2(brs，1H)，7.87-7.15(m，13H)，4.25(d，J＝6.6Hz，2H)，3.52(s，2H)，1.09(m，1H)，0.38(m，2H)，0.20(m，2H)。
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步骤1：2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸乙酯的制备
在室温下向2-(苯并呋喃-3-基)乙酸乙酯(200mg，0.9793mmol)存于DCM(6mL)的溶液中添加联苯-4-羰基氯(212.2mg，0.9793mmol)和SnCl4(0.3438ml，2.938mmol)。将所述反应物在室温下搅拌15h。所述反应物用DCM(20mL)稀释且用1N HCl(aq)(20m1)、1N NaOH(aq)和盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，于真空中移除溶剂。材料自醚结晶以得到白色固体状2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸乙酯(186mg，产率为49.41％)。
步骤2：2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸的制备
向2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸乙酯(150mg，0.390mmol)存于1∶1v/vTHF/MeOH(8mL)的溶液中添加15％KOH水溶液(0.5mL)和水(0.5mL)并将反应物在室温下搅拌1h。添加醚(20mL)和水(20mL)并分离各层。用浓HCl将水性相酸化至pH1且过滤出所形成白色沉淀并干燥。获得白色固体状2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸(127mg，产率为91.3％)。检测到MS APCI(-)m/z 356。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.55(brs，1H)，8.17-7.43(m，13H)，4.17(s，2H)。
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步骤1：2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸甲酯的制备
在室温下向2-(苯并[b]噻吩-3-基)乙酸甲酯(1.000g，4.848mmol)存于DCM(6mL)的溶液中添加联苯-4-羰基氯(1.050g，4.848mmol)和SnCl4(1.702ml，14.54mmol)。将所述反应物在室温下搅拌15h。所述反应物用DCM(20mL)稀释并用1N HCl(aq)(20mL)、1N NaOH(aq)和盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，于真空中移除溶剂。通过矽胶塞纯化材料，用DCM洗脱，Rf0.2。自MeOH结晶材料以得到淡米色结晶固体状2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸甲酯(395mg，产率为21.08％)。
步骤2：2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸的制备
向2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸甲酯(380mg，0.983mmol)存于THF/MeOH(1∶1v/v)(10mL)的溶液中添加15％w/v KOH(0.5mL)并将反应物在室温下搅拌4h。添加水(15mL)和醚(20mL)并分离各层。用浓HCl将水性相酸化至pH1。沉淀出产物并过滤，用水冲洗并干燥。获得白色固体状2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸(260mg，产率为71.0％)。检测到MS APCI(-)m/z 372。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.47(brs，1H)，8.09-7.46(m，13H)，4.13(s，2H)。
反应图12
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步骤1：2-(2-(3-溴苯甲酰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
在室温下向2-(1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(18.600g，91.519mmol)存于DCM(180mL)的溶液中添加![]()
分子筛、3-溴苯甲酰氯(20.085g，91.519mmol)和ZnCl2(37.421g，274.56mmol)。将所述反应物在室温下搅拌15h。所述反应物用DCM(150mL)稀释且用1N HCl(aq)(200mL)和盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，于真空中移除溶剂。通过矽胶塞纯化褐色油状物，用DCM洗脱以得到黄色油状2-(2-(3-溴苯甲酰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(21.15g，产率为59.833％)，其在静置几天后结晶成米色固体。检测到MSAPCI(+)m/z 386/388。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ11.74(s，1H)，7.87-7.12(m，8H)，4.03(m，2H)，3.89(s，2H)，1.13(m，3H)。
步骤2：2-(2-(3′-(三氟甲基)联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
向2-(2-(3-溴苯甲酰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(200mg，0.518mmol)、Na2CO3(165mg，1.55mmol)和3-(三氟甲基)苯基硼酸(148mg，0.777mmol)中添加DME(6mL)、水(1mL)并通过通入氮5min来对所述混合物实施脱气。随后添加Pd(PPh3)4(29.9mg，0.0259mmol)并将密封试管在90℃(外部温度)下加热14h。添加DCM(20mL)且用饱和NaHCO3(aq)洗涤所述混合物。分离各层且有机相经干燥(MgSO4)。在真空中移除溶剂。通过PLC纯化粗制残留物，用DCM洗脱。在Rf0.4处的色谱分离带得到黄色油状2-(2-(3′-(三氟甲基)联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(201mg，产率为86.0％)。检测到MS APCI(-)m/z 450。
步骤3：2-(2-(3′-(三氟甲基)联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸的制备
向2-(2-(3′-(三氟甲基)联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(201mg，0.445mmol)存于THF/MeOH(1∶1v/v)(10mL)的溶液中添加20％w/v KOH(0.5mL)和水(1mL)并将反应物在室温下搅拌4h。添加醚(20mL)并分离各层。用浓HCl将水性相酸化至pH1。结晶出产物并滤出且干燥。获得黄色结晶固体状2-(2-(3′-(三氟甲基)联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(160mg，产率为84.9％)。检测到MS APCI(-)m/z 422。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.18(s，1H)，11.7(s，1H)，8.06-7.11(m，12H)，3.85(s，2H)。
反应图13
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2-(2-(联苯-4-基甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
向2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(100mg，0.281mmol)存于THF(4mL)的溶液中添加NaBH4(10.6mg，0.281mmol)。将所述反应物在室温下搅拌3h。用醚(20mL)稀释所述反应物并添加1N HCl(aq)。分离各层且有机相用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，在真空中移除溶剂。向此材料存于三乙基硅烷(0.44709ml，2.7992mmol)的悬浮液中添加TFA(3mL)。将所述反应物在室温下搅拌15h。在真空中浓缩所述反应混合物并通过与甲苯共沸蒸馏(两次)来移除过量TFA。将残留物与醚一起研磨并过滤出固体。在真空中浓缩滤液并通过PLC纯化，用9∶1DCM/MeOH洗脱以得到黄色胶状2-(2-(联苯-4-基甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(6mg，产率为6.2785％)。检测到MS APCI(-)m/z 340。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ7.73-7.12(m，13H)，4.16(s，2H)，3.79(s，2H)。
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2-(2-(联苯-4-基甲基)苯并呋喃-3-基)乙酸
向2-(2-(联苯基羰基)苯并呋喃-3-基)乙酸(75mg，0.21mmol)存于THF(4mL)的溶液中添加NaBH4(8.0mg，0.21mmol)。将所述反应物在室温下搅拌2h。所述反应物用DCM(20mL)稀释并添加1N HCl(aq)。分离各层且有机相用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，在真空中移除溶剂。向此材料(72mg，0.2115mmol)的溶液中添加三乙基硅烷(0.3379mL，2.115mmol)和TFA(1mL)。将所述反应物在室温下搅拌3h。在真空中浓缩反应混合物且通过与甲苯共沸蒸馏(两次)来移除过量TFA。通过PLC纯化残留物，用9∶1DCM/MeOH洗脱以得到白色结晶固体状2-(2-(联苯-4-基甲基)苯并呋喃-3-基)乙酸(48mg，产率为66.27％)。检测到MS APCI(-)m/z 341。1H NMR(400mHz.CDCl3)δ7.56-7.19(m，13H)，4.16(s，2H)，3.69(s，2H)。
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2-(2-(联苯-4-基甲基)苯并噻吩-3-基)乙酸
向2-(2-(联苯基羰基)苯并[b]噻吩-3-基)乙酸(75mg，0.20mmol)存于THF(4mL)的溶液中添加NaBH4(7.6mg，0.20mmol)。将所述反应物在室温下搅拌2h。所述反应物用DCM(20mL)稀释并添加1N HCl(aq)。分离各层且有机相用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)后，在真空中移除溶剂。向此材料(72mg，0.2020mmol)的溶液中添加三乙基硅烷(0.3226mL，2.020mmol)和TFA(1mL)。将所述反应物在室温下搅拌3h。在真空中浓缩所述反应混合物并通过与甲苯共沸蒸馏(两次)来移除过量TFA。残留物自甲苯结晶以得到白色结晶固体状2-(2-(联苯-4-基甲基)苯并噻吩-3-基)乙酸(27mg，产率为37.29％)。检测到MS APCI(-)m/z 357。1H NMR(400mHz.d6-DMSO)δ12.42(brs，1H)，7.78-7.27(m，13H)，4.25(s，2H)，3.88(s，2H)。
反应图14
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2-(2-(联苯基羰基)-5-溴-1H-吲哚-3-基)乙酸
向2-(2-(联苯基羰基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(50mg，0.141mmol)存于AcOH(4mL)的溶液中添加溴(0.00721mL，0.141mmol)。将所述反应物密封并在室温下搅拌14h。添加水(15mL)并用醚(20mL)萃取粗制产物。醚层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)且在真空中移除溶剂。将粗制产物与MeOH一起研磨以移除少量杂质。获得米色固体状2-(2-(联苯基羰基)-5-溴-1H-吲哚-3-基)乙酸(45mg，产率为73.6％)。检测到MS APCI(-)m/z432/434。1H NMR(400mHz.CD3OD)δ7.91-7.40(m，12H)，3.93(s，2H)。
反应图15
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反应图16
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化合物2的合成
在0℃下于氩气氛中向6-苄氧基吲哚(1，5.0g，22.39mmol)存于THF(40mL)的经搅拌溶液中添加丁基锂(1.6M，存于己烷中，15.4mL，24.63mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌30min。添加氯化锌(1.0M，存于醚中，24.6mL)。将所得混合物升温至室温并搅拌2h。逐滴添加溴乙酸乙酯(3.0mL，26.87mmol)并将所得反应混合物在室温下搅拌2天。将混合物浓缩、用乙酸乙酯稀释、用盐水洗涤、经干燥(Na2SO4)且浓缩至干燥。进行硅胶色谱分离，用存于己烷中的3-4％乙酸乙酯洗脱，得到3.1g浅褐色固体状化合物2。
化合物4和5的合成
在0℃下于氩气氛中将化合物2(309mg，1.0mmol)存于THF(2mL)中的溶液添加至氢化钠(60％，存于矿物油中，44mg，1.1mmol)存于THF(4mL)的经搅拌混合物中。将所得混合物在0℃下搅拌15min。添加存于THF(1mL)中的化合物3(288mg，1.0mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌2h且在室温下过夜。所述混合物用乙酸乙酯稀释、用盐水洗涤两次、经干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。实施硅胶色谱分离，用存于DCM-己烷(1∶1)中的1-2％乙酸乙酯洗脱，得到69mg化合物4和56mg化合物5，二者均为白色固体。
化合物6的合成
将化合物5(50mg)的溶液溶于二氧杂环己烷(3mL)和水(1mL)中。添加氢氧化钠(2.0M，1mL)。将所得混合物在室温下搅拌2h，用2N HCl酸化至pH3并浓缩。使残留物在DCM与盐水之间分配。有机相经干燥(Na2SO4)并浓缩。自DCM-己烷结晶，获得44mg白色固体状化合物6。
化合物7的合成
使用与对化合物6所述者相似的程序，对化合物4(62mg)实施水解以得到灰色固体状化合物7(56mg)。
化合物8的合成
在0℃下于氩气氛中将氢化钠(60％，10mg，0.25mmol)添加至DMF-共蒸发化合物7(48mg，1.0mmol)存于DMF(1mL)的经搅拌溶液中。将所得混合物在室温下搅拌10min。添加化合物3(34mg，0.13mmol)存于DMF(0.3mL)中的混合物。将所得混合物在0℃下搅拌2h。在正常处理后，对残留物实施硅胶色谱分离，用2％三乙胺和2-2.5％甲醇存于DCM中的混合物洗脱以得到18mg灰白色固体状化合物8。
化合物9-15的合成
使用与对化合物8所述者相似的程序，制备如下文所示化合物9-15。
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9R＝Me
10R＝Et
11R＝烯丙基
12R＝4-硝基苯基
13R＝2-甲基-4-硝基苯基
14R＝环丙基甲基
15R＝苄基
反应图17
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化合物17的合成
在氩气氛中将三氟甲磺酸铜(362mg，1.0mmol)添加至6-溴吲哚(16，3.92g，20mmol)存于DCM(100mL)的溶液中并将所得悬浮液冷却至0℃。经30min分若干份缓慢地添加重氮基乙酸乙酯(26mmol，2.7mL)。将所述混合物在0℃至室温下搅拌1h，随后在室温下过夜，用水洗涤一次、经干燥(Na2SO4)并浓缩。实施快速硅胶色谱分离，用DCM-己烷(4∶1至5∶1)洗脱，获得淡褐色残留物。在相同条件下进行二次色谱分离，得到2.11g淡黄色油状化合物17。
化合物18的合成
在0℃下于氩气氛中将化合物17(430mg，1.52mmol)存于DMF(2.5mL)中的混合物添加至氢化钠(60％，1.60mmol，64mg)存于DMF(1mL)的悬浮液中。将所述混合物在0℃下搅拌15min。添加3-溴甲基-5-氯苯并噻吩(3，437mg，1.67mmol)存于DMF(1.5mL)中的混合物。将所述反应混合物在0℃下搅拌1.5h。在正常处理后，对粗制物进行硅胶色谱分离，用DCM/己烷(1∶2至1∶1)洗脱以得到294mg无色泡沫状期望化合物18。
化合物20的合成
将化合物18(185mg，0.4mmol)、化合物19(146mg，0.8mmol)、Pd(PPh3)4(18.6mg，0.016mmol)和碳酸钠(1.0M，0.8mL)的混合物于82-84℃下在氩气氛中搅拌过夜。所述混合物用乙酸乙酯稀释、用盐水洗涤四次、经干燥(Na2SO4)并浓缩。实施硅胶色谱分离，用DCM洗脱，得到121mg淡黄色固体状化合物20。
化合物21的合成
将化合物20(119mg)的溶液溶于二氧杂环己烷(5mL)和THF(5mL)中。添加氢氧化钠(1.0M，0.6mL)和水(1.9mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜且随后浓缩。添加水并用2N HCl将所述混合物酸化至pH3。过滤出沉淀并用水洗涤三次且在真空中干燥以得到96mg黄色固体状化合物21。
化合物22的合成
将肼(65％，3mL)添加至化合物21(182mg)和锌粉(800mg)存于甲醇(9mL)和THF(12mL)的经搅拌混合物中。将所得混合物在室温下在氩气氛中搅拌4h。过滤出固体并用THF和甲醇(1∶1)的混合物洗涤。蒸发滤液。用硅胶将残留物纯化2次，用2％三乙胺和5-6％甲醇存于DCM中的混合物洗脱。用硅胶将产物纯化一次以上，用5-15％甲醇存于DCM中的混合物洗脱以得到49mg浅黄色固体状化合物22。
化合物23-26的合成
使用与对化合物22所述者相似的程序，制备如下文所示化合物23-26。
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23R＝乙炔基
24R＝苯基
25R＝3-氨基苯基
26R＝呋喃-2-基
反应图18
用于制备α-烷基(芳基)吲哚-3-乙酸衍生物的一般合成反应图阐述于下文反应图18中并分别通过下列关于化合物3(R＝苄基)与化合物5(R＝苄基)合成的阐述来例示。
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α-苄基-N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(3)的合成
将N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸1(0.2g，0.5mmol)溶于DMF(2mL)中并在冰浴中冷却所述溶液。添加NaH(22mg 60％存于油中的分散液，0.55mmol)并将所述反应混合物在0℃下搅拌10min。逐滴添加苄基溴(65μL，0.55mmol)存于DMF(1mL)中的混合物并将所述反应混合物在室温下搅拌30min。添加NH4Cl水溶液，继而用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。实施硅胶色谱柱分离，使用10％EtOAc存于己烷中的混合物洗脱，提供2(R＝苄基)(80mg，33％)。
向上述材料(70mg，0.14mmol))存于MeOH(2ml)和THF(1ml)的溶液中添加1NNaOH(2ml)并将所述反应混合物在RT下搅拌3小时。添加Dowex 50WX8(pyr+形式)以中和所述反应混合物。随后过滤出离子交换剂并将滤液蒸发至干燥。用硅胶柱对残留物实施色谱分离，使用MeOH存于DCM中的2-4％梯度进行洗脱以获得3(25mg，37％)。
α-苄基，α-羟基-N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(5)的合成
将N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙醛酸4(0.16g，0.5mmol)溶于THF(2.5ml)中并在干冰-丙酮浴中冷却所述溶液。逐滴添加苄基溴化镁(1.74ml，19％存于THF中的溶液，1.5mmol)并将所述反应混合物在室温下搅拌2小时。用2N HCl猝灭所述反应物达pH2-3并用EtOAc萃取。有机层经干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。实施色谱柱分离纯化，使用MeOH存于DCM中的1-2％梯度于0.5％TEA存在时进行洗脱，提供5(86mg，42％)。
反应图19
用于制备α-氨基吲哚-3-乙酸衍生物的一般合成反应图阐述于下文反应图19中并通过下列关于化合物9(R＝咪唑-4-基)合成的阐述来例示。
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α-(咪唑-4-羧基)氨基-N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(9)的合成
向N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙醛酸4(1.05g，3.27mmol)存于MeOH的溶液中添加NH4OAc(2.53g，32mmol)、NaBH3CN(0.6g，9.6mmol)及粉状分子筛![]()
(1g)。将所述反应混合物在回流下加热16小时、过滤并在真空中浓缩。使残留物在2N HCl与EtOAc之间分配，有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。实施硅胶色谱柱分离，使用20％甲醇存于DCM(4％NH4OH)中的混合物进行洗脱，提供6(0.3g，19％)。
将α-氨基酸6溶于MeOH(2ml)和DCM(4ml)中并逐滴添加TMSCHN2(0.63ml，存于己烷中的2N溶液，1.25mmol)。将所述反应混合物在RT下搅拌30min且蒸发至干燥以提供7。此材料无未经纯化即可用于下一步骤。
将酯7溶于DMF(2ml)中，添加PyBOP(198mg，0.38mmol)和DIPEA(109μM，0.63mmol)，继而添加咪唑-4-甲酸(42mg，0.38mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时，随后使其在H2O与EtOAc之间分配。有机层用H2O洗涤，经干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。实施硅胶色谱柱分离，使用MeOH存于DCM(1％TEA)中的2-4％梯度进行洗脱，提供8(60mg，56％)。
将化合物8(50mg，0.12mmol)溶于EtOH(2mL)中并添加1N NaOH(2mL)。将反应混合物在室温下搅拌30min且随后用Dowex 50X8(pyr+形式)中和。过滤出离子交换剂并将滤液蒸发至干燥以提供标题化合物9(30mg，63％)。
反应图20
用于制备二氢吲哚-3-乙酸衍生物的一般合成反应图阐述于下文反应图20中并通过下列关于化合物12(R＝Br，R1＝对-硝基甲苯甲酰基)合成的阐述来例示。
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5-溴-N-1-(对-硝基甲苯甲酰基)二氢吲哚-3-乙酸(12)的合成
将5-溴-N-1-对-硝基甲苯甲酰基-吲哚-3-乙酸甲酯10(0.2g，0.5mmol)与TFA(3mL)的混合物冷却至0℃并逐份添加NaBH3CN(314mg，5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，随后倾注于NaHCO3水溶液中并用EtOAc萃取。有机层用盐水(2x)、H2O(2x)洗涤，经干燥(MgSO4)并蒸发成糖浆。实施硅胶色谱柱分离，使用10％EtOAc存于己烷中的混合物进行洗脱，产生11(140mg，70％)。
将二氢吲哚11(130mg，0.32mmol)溶于EtOH(1ml)、THF(1mL)与1N NaOH(1mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，随后用Dowex 50X8(pyr+形式)中和。过滤出离子交换剂并将滤液蒸发至干燥以提供12(90mg，72％)。
反应图21
用于制备2-羟基-2-(吲哚-3-基)-3，3，3-三氟丙酸衍生物的一般合成反应图阐述于下文反应图21中并通过下列关于化合物16合成的阐述来例示。
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2-羟基-2-[5-溴-(N-1-对-硝基甲苯甲酰基)吲哚-3-基]-3，3，3-三氟丙酸(16)
将吲哚14(0.73g，2mmol，依据阿比德(Abid)，M.和托罗(Torok)，B.高级合成催化剂(Adv.Synth.Catal.)2005，347，1797自13合成)溶于DMF(15mL)中并添加Cs2CO3(1.49g，4.57mmol)和2-氟-5-硝基甲苯(0.34g，2.2mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌2小时，随后在室温下保持过夜。添加H2O，用EtOAc萃取混合物且有机层经干燥(MgSO4)。在移除溶剂后对残留物实施硅胶色谱柱分离，使用DCM存于EtOAc中的30-60％梯度进行洗脱以提供15(0.65g，65％)。
向15(100mg，0.2mmol)存于二氧杂环己烷(1mL)的溶液中添加1N NaOH(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌1小时且随后用Dowex 50X8(pyr+形式)中和。过滤出离子交换剂，将滤液在真空中蒸发至干燥并通过硅胶柱纯化残留物。使用1％MeOH存于DCM(1％TEA)中的混合物进行洗脱，提供标题化合物16(65mg，69％)。
反应图22
用于制备2-氨基甲酰基吲哚-3-乙酸(下文所示一般结构I)及2-羧基吲哚-3-乙酰胺(下文所示一般结构II)解旋酶抑制剂的合成反应图阐述于下文反应图22中。所述合成是基于在药物化学杂志(J.Med.Chem.)1991，34，1283-1292中的公开文献及其它文献并通过下列关于化合物451和500合成的阐述来例示。
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2-乙氧基羰基-1H-吲哚-3-乙酸乙酯(1，R1＝H)
将盐酸苯肼(14.5g，100mmol)、α-酮戊二酸(22g，150mmol)和水(300mL)的混合物回流2小时。将所述反应混合物冷却并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤、经MgSO4干燥并蒸发。将残留物溶于乙醇(500mL)中，小心地添加浓硫酸(75mL)并将所得混合物回流20小时。在低压下移除乙醇并使残留物在乙酸乙酯与水之间分配。有机层相继用水及碳酸氢钠洗涤且随后经MgSO4干燥。通过色谱分离(15-20％乙酸乙酯-己烷)分离目标双酯。产量13.6g(63％)
2-乙氧基羰基-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-3-乙酸乙酯(2，R1＝H)
在0℃下向化合物1，R1＝H(13.6g，49.5mmol)存于DMF的溶液中添加氢化钠(2.18g，60％存于矿物油中的悬浮液，54.4mmol)。在-20℃下将所述混合物搅拌15min并添加4-异丙基苄基溴(10.2mLl，59.4mmol)。将反应混合物在-20--10℃下搅拌1小时，同时用固体氯化铵猝灭所述反应混合物并使其在水与乙酸乙酯之间分配。有机层经硫酸镁干燥并蒸发。通过实施色谱柱分离(5-10％乙酸乙酯-己烷)来分离标题产物。产量16.8g(83％)。
2-羧基-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-3-乙酸(3，R1＝H)
向双-酯2，R1＝H(16.8g，41mmol)存于乙醇(200mL)的溶液中添加氢氧化钠(2N，100mL)并将所述反应物在60℃下搅拌1小时。在冷却至室温后，将反应混合物蒸发成固体，将所述固体溶于水中。用盐酸将所述溶液酸化至pH3并过滤出所形成固体，用水洗涤并自甲醇重结晶。产量13.7g(95％)。
2-羧基-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-3-乙酸甲酯(4，R1＝H)
向双酸3，R1＝H(13.7g，39mmol)存于甲醇(200mL)的悬浮液中添加HCl的二氧杂环己烷溶液(4M，20mL)。将所述悬浮液在室温下搅拌2小时，蒸发并在真空中干燥。产量：14.1g，100％。
2-(3-氯苄基氨基甲酰基)-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-3-乙酸(代表性化合物451)。
向上述酸4，R1＝H(50mg，0.14mmol)存于DCM(2mL)的溶液中相继添加HOBt(19mg，0.14mmol)及DCC(0.14mL，1M存于DCM中的溶液)。将反应混合物搅拌15min同时添加3-氯苄基胺(0.038mL，0.3mmol)并将所述反应混合物搅拌1小时。过滤出沉淀，用乙酸乙酯洗涤并相继用0.1N HCl、水和饱和碳酸氢钠洗涤滤液。有机相经硫酸镁干燥并蒸发。通过使用2％乙酸乙酯存于DCM中的混合物的色谱柱分离来分离标题化合物。产量70mg(100％)。
向此酯(70mg，0.14mmol)存于二氧杂环己烷(2mL)的溶液中添加2N盐酸并将所述反应物在90℃下加热2小时。在真空中蒸发有色反应混合物并与甲苯-乙醇混合物(3∶4)共蒸发两次。通过使用5-10％MeOH-DCM的色谱柱分离来分离标题化合物。产量：20mg(29％)。
5-溴-2-羧基(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-3-乙酰胺(代表性化合物500)
向双-酸3，R1＝Br存于DCM(2mL)的溶液中添加DCC并将所述混合物在室温下搅拌3小时且随后用氨(0.3mL 0.5M DCM溶液，1.5mmol)处理。在再搅拌1小时后，用乙酸乙酯稀释所述反应混合物，过滤出沉淀并相继用0.1N盐酸和水洗涤滤液。有机溶液经硫酸镁干燥并蒸发。通过使用10-15％甲醇DCM的色谱柱分离来分离标题化合物。产量：25mg(58％)。
反应图23
用于制备具有一般结构III和IV的化合物的合成反应图阐述于下文反应图23中。通过下列关于化合物501和502合成的阐述来例示所述合成：
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5-溴-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(6，R1＝Br)
在0℃下向市售5-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(804mg，3mmol)存于DMF(10mL)的溶液中添加氢化钠(144mg，作为60％矿物油悬浮液，3.6mmol)。在搅拌15min后，添加4-异丙基苄基溴(0.68ml，4mmol)并将反应物在室温下搅拌1小时。在用固体氯化铵猝灭后，使所述反应物在水与乙酸乙酯之间分配，分离有机相，经硫酸镁干燥并蒸发。通过使用5-10％乙酸乙酯-己烷的色谱柱分离来分离标题化合物。产量1.21g(100％)。
3-苯甲酰基-5-溴-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(7，R1＝Br)
用无水氯化铝(85mg，0.64mmol)和苯甲酸酐(108mg，0.48mmol)处理吲哚6(R1＝Br，128mg，0.32mmol)存于二氯乙烷中的溶液。在室温下搅拌过夜后，所述混合物用DCM稀释、相继用水及饱和碳酸氢钠洗涤。此有机溶液经硫酸钠干燥并蒸发。通过使用10-15％醚-己烷的色谱柱分离来分离目标化合物。产量：30mg(19％)。
3-苯甲酰基-5-溴-1-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-2-甲酸(化合物501)
用氢氧化锂(2N，0.2mL)处理化合物7(R1＝Br)(30mg，0.06mmol)存于乙醇(2mL)中的溶液。在搅拌30min后，反应混合物用2N盐酸酸化至pH3并蒸发。通过使用5-10％MeOH-DCM的色谱柱分离来分离目标化合物。产量26mg(92％)。
5-溴-3-甲酰基-1-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(8，R1＝Br)
将磷酰氯(0.73mL，8mmol)与N-甲基甲酰苯胺(0.98mL，8mmol)混合在一起并在室温下搅拌15min。向此混合物中添加5-溴-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(1.072g，4mmol)存于二氯乙烷(15mL)中的溶液并使反应在80℃下进行2小时。在冷却至室温后，将此反应混合物逐滴添加至乙酸钠(5g)存于水(10mL)的溶液中以提供目标化合物沉淀。过滤出此固体，相继用水及冷甲醇洗涤并在真空中干燥。产量1.06g(89％)。
5-溴-3-甲酰基-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(9，R1＝Br)
在标准苄基化条件下使用氢化钠和4-异丙基苄基溴存于DMF中的混合物自吲哚8制备化合物9。通过使用5-10％乙酸乙酯-己烷的色谱柱分离来分离目标化合物。产量：51％。
5-溴-3-甲酰基-(4-异丙基苄基)-1H-吲哚-2-甲酸(化合物502)
在室温下使用2N氢氧化锂的乙醇-水溶液对酯9(R1＝Br)(50mg)实施水解。在标准萃取处理后，通过使用5-10％MeOH-DCM的色谱柱分离来分离目标化合物。产量：35mg(76％)。
反应图24
咔唑衍生物的制备.
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3-溴-2-酮基环己烷甲酸乙酯(1)(药物化学杂志(J.Med.Chem.)2005.48，第8045-8054页)
向2-酮基环己烷甲酸乙酯(25g，0.15mol)存于二乙醚(50mL)的经搅拌0℃溶液中逐滴添加溴(7.7mL，0.15mol)。在0℃下搅拌15min且随后在室温下1.5h后，将反应混合物小心地倾注于经搅拌饱和碳酸钠水溶液中且随后用乙酸乙酯萃取。合并有机层经硫酸镁干燥并蒸发以得到淡黄色油状溴酮1。产量37g(99％)。
9-苄基-1，2，3，4-四氢咔唑-4-甲酸乙酯(2)(德国专利DE 2127352)
将苯基苄基胺(4.42g，24mmol)与酮基酯1的混合物在35℃下搅拌3天。向此褐色混合物中添加无水氯化锌(4g)并将所述反应混合物在125-130℃下搅拌1小时。在冷却至室温后，使深色反应混合物在水与乙酸乙酯之间分配。分离有机层；水相再用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物用2N HCl和水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。通过色谱柱分离使用30至40％乙酸乙酯-己烷分离四氢咔唑2。产量：2.21g(66％)。
9-苄基咔唑-4-甲酸乙酯(3)
将四氢咔唑2(500mg，1.50mmol)与DDQ(1.14g，5.02mmol)存于邻-二甲苯(15mL)中的溶液在120℃下搅拌1h。经冷却反应混合物经由硅藻土过滤并蒸发。在40％DCM-己烷中实施色谱柱分离后，咔唑3作为灰白色结晶材料分离出。产量：420mg(84％)。
9-苄基咔唑-4-甲酸(4)
用氢氧化钠(2M，2mL)处理酯3(420mg，1.28mmol)存于乙醇(5mL)中的溶液。在80℃下搅拌1h后，在真空中移除溶剂并使残留物溶于水中。在添加2N HCl达pH3后，通过标准萃取处理并随后自乙酸乙酯-己烷混合物(2∶1)结晶来分离酸4。产量300mg(78％)。
3，4-二氢咔唑-4-甲酸(5)
在-50℃下向酸4(250mg，0.83mmol)中添加液氨(大约10mL)继而添加钠(53mg，2.3mmol)。将深色溶液在相同温度下搅拌45min.同时用固体氯化铵猝灭所述反应物并蒸馏出氨。将深色残留物溶于水中并用1N HCl将溶液酸化至pH3。在正常萃取处理后，相继通过实施色谱柱分离(3％MeOH-DCM)以及自DCM-己烷(1∶1)结晶来分离酸5。产量70mg(40％)。
3，4-二氢咔唑-4-甲酸甲酯(6)
在0℃下向酸5(50mg，0.25mmol)存于甲醇(1mL)的溶液中添加三甲基甲硅烷基重氮基甲烷，作为存于THF(1.25ml，2.5mmol)中的2M溶液。将反应混合物在0℃下搅拌30min并蒸发以留下粗制酯6，其未经任何额外纯化即可用于下一步骤。
9-(2-甲基-4-硝基苯基)咔唑-4-甲酸甲酯(7)
向来自先前步骤的酯存于DMF(5mL)的溶液中添加3-硝基-5-氟甲苯(98mg，0.5mmol)和无水碳酸铯(244mg，0.75mmol)并将所述反应混合物在35℃下搅拌过夜。使所得深色混合物在水与乙酸乙酯之间分配且有机层用盐水洗涤并经硫酸镁干燥。实施色谱柱分离纯化(5％乙酸乙酯-己烷)，提供黄色油状标题产物。产量80mg(89％，两步)。
6-溴-9-(2-甲基-4-硝基苯基)咔唑-4-甲酸甲酯(8)
在0℃下，向咔唑7(80mg，0.22mmol)存于DCM(2mL)和乙酸(2mL)的溶液中添加NBS(46mg，0.26mmol)。将所述反应物在相同温度下搅拌1小时并倾注于经搅拌饱和碳酸氢钠溶液中。用DCM萃取产物。有机溶液经硫酸镁干燥并蒸发以得到溴咔唑8，其未经任何额外纯化即可用于下一步骤。产量80mg(83％)。
6-溴-9-(2-甲基-4-硝基苯基)咔唑-4-甲酸(9)
在80℃下使用存于乙醇(2mL)中的氢氧化钠(2M，1mL)对酯8(80mg，0.18mmol)实施水解1h。蒸发溶剂并使残留物溶于水中。添加2M HCl达pH3并用乙酸乙酯萃取产物。有机溶液经硫酸镁干燥并蒸发。自DCM结晶，得到白色固体状酸9。产量60mg(78％)。
吲哚衍生物的制备阐述于反应图25至反应图35中。
反应图25
吲哚衍生物的制备.
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化合物2的制备
将化合物1(2.03g，1当量)、1-(溴甲基)-3-甲氧基苯(2.00g，1当量)和Cs2CO3(4.88g，1.5当量)存于CH3CN(20mL)中的混合物加热至回流约8h。通过TLC追踪所述反应。在所述反应完成后，将反应混合物冷却至室温，过滤出固体，在低压下移除溶剂并通过色谱柱纯化粗制产物以得到2.20g化合物2(产率为68％)。
化合物3的制备
将化合物2(2.20g，1当量)溶于无水二氯甲烷(10mL)中。在冰冷条件下向此混合物中添加三溴化硼(3当量)并将所述反应混合物在室温下搅拌14小时。随后向所述反应混合物中添加1N氢氧化钠水溶液，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取反应混合物。有机层用盐水洗涤且随后经无水Na2SO4干燥。在低压下移除溶剂并通过色谱柱纯化粗制物以得到1.68g化合物3(产率为80％)。
化合物4的制备
将化合物3(1当量)、试剂B(2-3当量)、Cu(OAc)2(1.3当量)、吡啶(5当量)、吡啶N-氧化物(1.0当量)和![]()
分子筛存于二氯甲烷(5ml/l mmol化合物3)中的混合物于室外在室温下搅拌过夜。通过TLC监测反应且当发现反应完成后，用碳酸氢钠水溶液洗涤反应物，通过CH2Cl2萃取并通过制备型TLC分离粗制物以得到化合物4。
化合物5的制备
将化合物4(1当量)溶于THF-H2O(3∶1，4ml)中并向所述混合物中添加LiOH(5当量)。将所述混合物加热至70-80℃同时搅拌过夜。通过TLC监测反应。在反应完成后，用2M HCl将所述混合物酸化至pH2-3，随后用反应物体积的乙酸乙酯(EA)萃取3次，用盐水洗涤。合并各有机层，随后移除溶剂且通过制备型TLC纯化目标产物。
反应图26
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化合物2的制备
将化合物1(2.68g，1当量)、1-苄氧基-4-氯甲基-苯(4.0g，1当量)和Cs2CO3(6.43g，1.5当量)存于CH3CN(30mL)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到3.0g化合物2(产率为57％)。
化合物3的制备
于Pd/C(280mg)存在时在50Psi初始H2中于40-50℃下将化合物2(1.4g，)在MeOH/EtOAc(8∶1)中氢化约4h。随后过滤出触媒，在真空中移除溶剂以提供0.86g化合物3(产率为79％)，其未经进一步纯化即可用于下一步骤中。
化合物4的制备
将化合物3(1当量)、硼酸(2-3当量)、Cu(OAc)2(1.3当量)、吡啶(5当量)、吡啶N-氧化物(1.0当量)和分子筛![]()
存于二氯甲烷(5mL/l mmol化合物3)中的混合物于室外在室温下搅拌14-36h。通过TLC和LC-MS监测反应。在反应完成后，向所述反应混合物中添加饱和碳酸氢钠。分离有机层并用CH2Cl2萃取水性层。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型TLC纯化粗制物以得到粗制化合物4。
化合物5的制备
在室温下，向化合物4(1当量)存于THF-H2O(3∶1，4ml)的溶液中添加LiOH(5当量)。将所述混合物加热至70-80℃过夜。在冷却后，用2M HCl将反应混合物酸化至pH2-3。用EtOAc萃取水性部分。合并有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。通过制备型TLC纯化所得粗制物以得到纯净化合物5。
反应图27
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化合物2的制备
将化合物1(1当量)、1-溴甲基-4-溴苯(1当量)和Cs2CO3(1.5当量)存于CH3CN(5mL/l)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到化合物2。
化合物3的制备
在110℃下于氮气氛中搅拌化合物2(1当量)、苯基-胺(1.5当量)和碳酸铯(2当量)存于甲苯(5mL/l mmol试剂2)中的混合物，随后添加乙酸钯和xanphos(4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽)。将所述混合物在所述温度下搅拌过夜并通过TLC监测。通过制备型-TLC(PE/EA＝5∶1)分离化合物3。
化合物4的制备
将化合物3(1当量)、Cs2CO3和碘甲烷(3当量)存于DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC监测反应。当初始材料耗尽时，所述混合物用EtOAc萃取、用饱和盐水洗涤、经无水硫酸钠干燥、在真空中浓缩并通过制备型-TLC(PE/EA＝5∶1)分离目标产物。
化合物5的制备
于室外在50℃下搅拌化合物4(1当量)和NaOH(3当量)存于甲醇中的混合物。通过TLC监测反应。当初始材料耗尽时，经冷却混合物用EtOAc萃取、用饱和盐水洗涤、经无水硫酸钠干燥、在真空中浓缩并通过制备型-TLC(PE/EtOAc＝1∶1)分离目标产物。
反应图28
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化合物2的制备
将化合物1(1当量)、1-溴甲基-4-溴苯(1当量)和Cs2CO3(1.5当量)存于CH3CN(5mL/l)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到化合物2。
化合物3的制备
在110℃下于氮气氛中搅拌化合物2(1当量)、苯基-胺(1.5当量)和碳酸铯(2当量)存于甲苯(5mL/l mmol试剂2)中的混合物，随后添加乙酸钯和xanphos。将所述混合物在所述温度下搅拌过夜并通过TLC监测。通过制备型-TLC(PE/EtOAc＝5∶1)分离化合物3。
化合物4的制备
将化合物3(1当量)、Cs2CO3和碘甲烷(3当量)存于DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC监测反应。当初始材料耗尽时，所述混合物用EtOAc萃取、用盐水洗涤、经无水硫酸钠干燥、在真空中浓缩并通过制备型-TLC(PE/EA＝5∶1)分离目标产物。
化合物5的制备
在50℃下于室外搅拌化合物4(1当量)和NaOH(3当量)存于甲醇中的混合物。通过TLC监测反应。当初始材料耗尽时，经冷却混合物用EtOAc萃取、用饱和盐水洗涤、经无水硫酸钠干燥、在真空中浓缩并通过制备型-TLC(PE/EtOAc＝1∶1)分离目标产物。
反应图29
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化合物2的制备
将化合物1(100mg，1当量)、t-BuOK(114.8mg，1.5当量)存于DMA(10mL)中的混合物在150℃下搅拌0.5小时，随后添加试剂A(124.03mg，1.5当量)。将所得混合物在150℃下再搅拌2小时。通过TLC检测反应，在反应完成后，用水和EtOAc稀释混合物并用EtOAc萃取。合并各有机层，在低压下移除溶剂，通过制备型TLC纯化粗制物以得到140mg化合物2(产率为约50％)。
化合物3的制备
将化合物2(100mg，1当量)溶于THF-EtOH(1∶2.5)3.5mL中并将所述溶液冷却至0℃，添加NaBH4(14.4mg，1当量)。将所述混合物升温至室温并搅拌约2小时。通过TLC监测反应。在反应完成后，将溶液倾注于25％冷NH4OAc水溶液中。随后用EtOAc萃取所述混合物。合并各有机层并通过无水Na2SO4干燥。在低压下移除溶剂且通过制备型TLC纯化粗制物以得到100mg化合物3(产率为约90％)。
化合物4的制备
将化合物3(100mg，1当量)溶于干燥THF(2mL)中。将所述溶液冷却至0℃，随后逐滴添加PBr3。在添加PBr3后，将所述混合物升温至室温并搅拌约4小时。通过TLC监测反应。在反应完成后，将溶液倾注于冷饱和NaHCO3水溶液中。随后用EtOAc萃取所述混合物。合并各有机层且通过无水Na2SO4干燥。在低压下移除溶剂并藉由制备型-TLC纯化产物。获得50mg化合物4(产率为约40％)。
化合物5的制备
将化合物4(50mg，1当量)、(1H-吲哚-3-基)乙酸乙酯(33.8mg，1.1当量)和Cs2CO3(73.1mg，1.5当量)存于CH3CN(5mL)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂且通过制备型TLC纯化粗制物以得到60mg化合物6(产率为约70％)。
化合物6的制备
随后将化合物5(60mg，1当量)溶于THF-H2O(3∶1，4ml)中，添加LiOH(5当量)，将所述混合物加热至70-80℃并搅拌过夜。通过TLC监测反应。当反应完成时，使用2M HCl将所述混合物酸化至pH2-3，使用EtOAc萃取3次，用盐水洗涤。合并各有机层且通过无水Na2SO4干燥并移除溶剂且通过制备型TLC纯化目标产物。
反应图30
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化合物2的制备
将化合物1(1.08g，1当量)、1-氟-2，4-双(三氟甲基)苯(2.32g，1当量)和K2CO3(1.5g，1.1当量)存于NMP(20mL)中的混合物加热至100℃，约8h。在冷却后过滤出固体，通过EtOAc/H2O萃取所述滤液，浓缩各有机层，通过色谱柱纯化产物以得到2.56g化合物2(产率为80％)。
化合物3的制备
将化合物2(2.56g，1当量)溶于CCl4中，随后添加NBS(1.70g，1.2当量)和AINB(64mg，0.05当量)。在反应完成后，浓缩反应混合物，通过色谱柱纯化产物以得到2.71g化合物3(产率为85％)。
化合物4的制备
将化合物3(2.71g，1当量)、1H-吲哚-3-甲酸乙酯(1.28g，1当量)和Cs2CO3(2.64g，1.2当量)存于CH3CN(20mL)中的混合物加热至回流约8h。在冷却至室温后，过滤出固体，在低压下移除溶剂，并通过色谱柱纯化粗制物以得到2.41g化合物4(产率为70％)。
化合物5的制备
将化合物4(1当量)溶于THF-H2O(3∶1，4mL)中并向所述混合物中添加NaOH(3当量)。随后将所述混合物加热至70-80℃并搅拌过夜。通过TLC监测反应。当反应完成时，使用2M HCl将所述混合物酸化至pH3-4，随后使用EtOAc萃取3次，用盐水洗涤。合并各有机层，随后移除溶剂并通过制备型-TLC纯化目标产物(产率为90％)。
反应图31A
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化合物2的制备
将化合物1(5g，1当量)、1-苄氧基-4-氯甲基-苯(4.54g，1.2当量)和Cs2CO3(8.67g，1.5当量)存于CH3CN(50mL)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到6.0g化合物2(产率为70％)。
化合物3的制备
将化合物2(3.0g，1当量)、3-羟基苯基硼酸(2.2g，2当量)、Pd(PPh3)4(363.2mg，0.1当量)、Na2CO3水溶液(1.67g，2.5当量)存于1∶1甲苯-EtOH中的混合物在氮保护下加热至回流，通过TLC检测所述反应，在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化产物以得到1.95g化合物3(产率为63％)。
化合物4的制备
将化合物3(1.95g)溶于吡啶(10mL)中，随后添加乙酸酐(1.62g，5当量)、二甲基-吡啶-4-基-胺(532mg，1.1当量)，在室温下搅拌所得混合物，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，在低压下移除吡啶。通过色谱柱纯化产物以得到1.4g化合物4(产率为66％)。
化合物5的制备
于Pd/C(320mg)存在时在50Psi初始H2中于40-50℃下将化合物4(1.6g)在MeOH/EtOAc(8∶1)中氢化约4h。随后过滤出触媒，在真空中移除溶剂以提供0.89g化合物5(产率为79％)，其未经进一步纯化即可用于下一步骤中。
化合物6的制备
在室温下于室外将化合物5(1当量)、硼酸(2-3当量)、Cu(OAc)2(1.3当量)、吡啶(5当量)、吡啶N-氧化物(1.0当量)和分子筛![]()
存于二氯甲烷(5ml/l mmol化合物3)中的混合物搅拌14-36h。通过TLC和LC-MS监测反应。在反应完成后，向反应混合物中添加碳酸氢钠水溶液。分离有机层并用CH2Cl2萃取水性层。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型TLC纯化粗制物以得到纯净化合物6。
反应图31B
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化合物7的制备
将化合物1(5g，1当量)、3-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(5.5g，1.2当量)和Cs2CO3(8.67g，1.5当量)存于CH3CN(50mL)中的混合物加热至回流约2-3h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到4.0g化合物7(产率为50％)。
反应图32
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化合物2的制备
将化合物1(15g，1当量)、双(戊酰)二硼(29.9g，2当量)、KOAc(18g，3.4当量，Ac＝乙酰基)、Pd(dppf)Cl2(3.81g，0.1当量，dppf＝1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)存于N，N-二甲基甲酰胺中的混合物在氮保护下加热至80℃，通过TLC检测反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱分离纯化产物。获得16.1g化合物2(产率为92％)。
化合物3的制备
将化合物2(22g，1当量)、1-苄氧基-4-氯甲基-苯(17.05g，1.2当量)和Cs2CO3(32.6.g，1.5当量)存于CH3CN(500mL)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到14.7g化合物3(产率为43％)。
化合物4的制备
于Pd/C(5.0g)存在时在50Psi初始H2中于40-50℃下将化合物3(25g)在MeOH/EtOAc(8∶1)中氢化约4h。随后过滤出触媒，在真空中移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到14g化合物4(产率为67.1％)。
化合物5的制备
将化合物4(3.0g，1当量)、1-溴-3，5-二硝基-苯(4.2g，2.5当量)、Pd(dppf)Cl2(984mg，0.2当量)、无水K3PO4(3.65g，2.5当量)存于N，N-二甲基甲酰胺中的混合物在氮保护下加热至80℃，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过制备型-HPLC纯化产物以得到1.7g化合物5(产率为53％)。
化合物6的制备
于室外在室温下将化合物5(1当量)、硼酸(2-3当量)、Cu(OAc)2(1.3当量)、吡啶(5当量)、吡啶N-氧化物和分子筛![]()
存于二氯甲烷(5mL/l mmol化合物5)中的混合物搅拌14-36h。通过TLC和LC-MS监测反应。在反应完成后，向反应混合物中添加碳酸氢钠水溶液。分离有机层并用CH2Cl2萃取水性层。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩。通过色谱柱纯化粗制物以得到纯净化合物6。
化合物7的制备
将化合物6溶于乙醇和二氯甲烷(1∶1)中，随后添加浓盐酸(3mL/l mmol化合物6)和SnCl2(5.6当量)，将所得混合物加热至50℃，2h。通过TLC监测反应。在反应完成后，向反应混合物中添加碳酸氢钠水溶液。分离有机层并用EtOAc萃取水性层。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗制物以得到最终产物(碱性条件)。
反应图33
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化合物2的制备
在室温下搅拌化合物1(20g，1当量)、间-氯过氧苯甲酸(40.2g，2当量)存于二氯甲烷中的混合物，通过TLC监测反应。在反应完成后，用硫代硫酸钠水溶液猝灭所述混合物，随后在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到19.3g化合物2(产率为88％)。
化合物3的制备
将化合物2(33.6g，2当量)、试剂1(17.7g，1当量)存于二氯甲烷中的混合物加热至回流，通过TLC监测反应。在反应完成后，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到15.7g化合物3(产率为50.6％)。
化合物4的制备
将化合物3(5.0g)溶于50mL浓HCl中，将所得混合物加热至回流12h，通过TLC和LCMS监测反应。在反应完成后，将混合物浓缩，用NaHCO3水溶液中和，用CHCl3萃取3次。合并有机层用盐水洗涤、经无水Na2SO4干燥并浓缩以得到2.1g化合物4。产物未经进一步纯化即可用于下一步骤中(产率为50.6％)。
化合物5的制备
将化合物4(2.0g)、二碳酸二叔丁基酯(9.34g，4当量)和二甲基-吡啶-4-基-胺(1.31g，1当量)溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌所得混合物，通过TLC监测反应。在反应完成后，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到2.4g化合物5(产率为58.5％)。
化合物6的制备
将化合物5(100mg，1当量)溶于CCl4中，随后添加N-溴琥珀酰亚胺(NBS，48.1g，1.1当量)和AIBN(4.58mg，0.1当量)。将所得混合物加热至回流1h，随后再添加4.0当量NBS和0.4当量AIBN，将反应混合物回流过夜，通过TLC监测反应。在反应完成后，在低压下移除溶剂，以得到化合物6(110mg)。最终产物未经进一步纯化即可用于下一步骤中(产率为78.6％)。
化合物7的制备
将化合物6(2.5g)溶于25mL乙醇和10mL NH3-H2O中，随后将所得混合物加热至回流。通过TLC监测反应。在反应完成后，将所述混合物倾注于1N HCl中同时搅拌，添加NaHCO3水溶液以调节至pH＝7，随后用乙酸乙酯萃取所述溶液。合并有机层用盐水洗涤、经无水Na2SO4干燥并浓缩以得到化合物7。最终产物未经进一步纯化即可用于下一步骤中。
化合物8的制备
将化合物7溶于氯化氢气体(甲醇)中并在室温下搅拌，通过TLC监测反应。在反应完成后，向反应混合物中添加NaHCO3水溶液以调节至pH＞7，随后用乙酸乙酯萃取溶液。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩以得到化合物8。最终产物未经进一步纯化即可用于下一步骤中。
化合物9的制备
将化合物8(400mg，1当量)溶于THF-MeOH(4∶1)10mL中。将所述混合物冷却至0℃并添加NaBH4(76mg，1当量)。随后将反应混合物升温至室温并再搅拌2h。通过TLC监测反应，在反应完成后，将所述混合物倾注于NH4OAc水溶液中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层用盐水洗涤、经Na2SO4干燥并浓缩。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到320mg化合物9(产率为79％)。
化合物10的制备
将化合物9(200mg，1当量)、试剂2(845.8g，2当量)、Pd(PPh3)4(115.3mg，0.1当量)、Na2CO3水溶液(264.9g，2.5当量)存于1∶1甲苯-EtOH中的混合物在氮保护下加热至回流，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化产物以得到500mg化合物10(含有PPh3)。
化合物615的制备
在室温下向化合物10(500mg，1当量)存于THF-H2O(3∶1，4ml)的溶液中添加LiOH(5当量)。将所述混合物加热至70-80℃过夜。在冷却至室温后，用2M HCl将反应混合物酸化至pH5-6。用乙酸乙酯萃取水性层。合并有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到200mg纯净化合物615。
反应图34
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化合物2的制备
向4-氯苯硫酚(10.0g，69.4mmol)存于丙酮(200mL)的溶液中相继添加K2CO3(19.2g，138.8mmol)及2，3-二氯丙烯(7.6g，69.4mmol)。将所得溶液加热至60℃，1h，随后冷却至室温。在减压下移除丙酮以得到粗制残留物，将所述粗制残留物溶于乙酸乙酯(100mL)中并用水(100mL)洗涤。随后用乙酸乙酯(6×20mL)萃取水性层。合并有机层经干燥、过滤并蒸发至干燥以得到化合物2(14.0g，92％)。
化合物3的制备
将化合物2(6.0g，27.3mmol)溶于N，N-二甲基苯胺(60mL)中并加热至190℃24h，随后冷却至室温。向所述反应混合物中添加300mL叔丁基甲基醚(TBME)，随后用2M HCl(300mL)洗涤所述反应混合物。有机层经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到粗制残留物。通过色谱柱(己烷)纯化粗制物以得到化合物3(3.5g，70％)。
化合物4的制备
向AcOH(60滴)存于HBr(48％存于H2O中的混合物)(40mL)的溶液中添加2-甲基-5-氯苯并噻吩(4g，21.8mmol)，继而添加三氧杂环己烷(3.5g，39mmol)和十六烷基三甲基氯化铵(160mg，0.4mmol)。将所得悬浮液在室温下搅拌12h，随后用水(50mL)稀释所述反应混合物并过滤。残留物用水(2×50mL)洗涤、经空气干燥以得到白色固体状标题化合物4(5.8g，96％)。
化合物6的制备
在氮气氛中向6-溴吲哚(5.0g，25.5mmol)存于二氯甲烷(50mL)的溶液中添加Cu(OTf)2(923mg，2.55mmol)并将所得悬浮液冷却至0℃，缓慢地添加重氮基乙酸乙酯存于二氯甲烷(20mL)中的混合物。在将反应物于室温下搅拌12h后，用60mL水洗涤所得混合物、分离有机层、干燥、过滤并蒸发以得到粗制残留物，通过HPLC-色谱柱纯化所述粗制物以得到化合物6(1.9g.，26％)。
化合物7的制备
将化合物1(15g，1当量)、双(戊酰)二硼(29.9g，2当量)、KOAc(18g，3.4当量)、Pd(dppf)Cl2(3.81g，0.1当量)存于N，N-二甲基甲酰胺中的混合物在氮保护下加热至80℃，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化粗制物以得到化合物7(16.1g，92.％)。
化合物8的制备
在0℃下向NaH(60％，存于矿物油中)(800mg，20.0mmol)存于DMF(40mL)的悬浮液中添加化合物7(6.0g，18.2mmol)存于DMF(40mL)中的溶液。将所得溶液在0℃下搅拌10min，随后添加苯并噻吩(5.8g，21.1mmol)存于DMF(40mL)中的溶液。将所得溶液在0℃下搅拌3h。通过TLC追踪反应。在反应完成后，所述反应物用EtOAc(400mL)和2M HCl(100mL)稀释。有机层经分离并用盐水洗涤、随后经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到粗制残留物。通过HPLC-色谱柱纯化粗制物以得到化合物8(4.0g，42％)。
化合物9的制备
向化合物8(2.0g，3.8mmol)存于DMF(20mL)的溶液中添加二氯化钯(II)二苯基膦基二茂铁(1.0g，50重量％)，继而添加磷酸钾(2.5g，11.8mmol)和1-溴-3，5-二硝基-苯(1.9g，7.76mmol)。将所得溶液加热至75℃2h，随后冷却至室温并用EtOAc(200mL)稀释。此溶液用1M HCl(100mL)洗涤，随后将水性层萃取至EtOAc(400mL)中。合并有机层用盐水洗涤，经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到粗制残留物。通过色谱柱(10％二氯甲烷/石油醚)纯化粗制物以得到淡黄色固体状标题化合物9(0.9g，43％)。
化合物617的制备
向化合物9(2.0g，3.55mmol)存于EtOH(100mL)和EtOAc(50mL)的溶液中添加浓HCl(10.5mL)和SnCl2(6.7g，35.5mmol)。将所得悬浮液在50℃下搅拌3小时。在反应完成后，将反应混合物冷却至室温，添加Na2CO3以中和所述酸，经由硅藻土过滤固体并蒸发滤液。通过HPLC-色谱柱(碱性条件)纯化粗制残留物以得到化合物617(1.0g，56％)。
反应图35
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化合物2的制备
将化合物1(15g，1当量)、双(戊酰)二硼(29.9g，2当量)、KOAc(18g，3.4当量)、Pd(dppf)Cl2(3.81g，0.1当量)存于N，N-二甲基甲酰胺中的混合物在氮保护下加热至80℃。通过TLC检测所述反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化产物以得到16.1g化合物2(产率为92％)。
化合物3的制备
将化合物2(2.0g，1当量)、1-溴甲基-4-异丙基-苯(1.3g，1.2当量)和Cs2CO3(3.0g，1.5当量)存于CH3CN(30mL)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到1.0g化合物3(产率为35％)。
化合物4的制备
将化合物3(1.0g，1当量)、1-溴-3，5-二硝基-苯(1.3g，2.5当量)、Pd(dppf)Cl2(500mg)、无水K3PO4(1.1g，2.5当量)存于N，N-二甲基甲酰胺中的混合物在氮保护下加热至80℃。通过TLC检测所述反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过制备型-HPLC纯化产物以得到0.5g化合物4(产率为53％)。
化合物5的制备
将化合物5溶于乙醇和二氯甲烷(1∶1，5mL/mmol化合物5)中，随后添加盐酸(3mL/1mmol化合物5)和SnCl2(5.6当量)。将所得混合物加热至50℃2h。通过TLC监测反应。在反应完成后，向反应混合物中添加碳酸氢钠以中和酸。过滤出固体，浓缩溶剂。通过制备型-HPLC(碱性条件)纯化粗制物。
化合物619的制备
在室温下向化合物5(1当量)存于EtOH-H2O(3∶1，4ml)的溶液中添加NaOH(5当量)。将所述混合物加热至70-80℃过夜。在冷却后，用2M HCl将反应混合物酸化至pH2-3。用EtOAc萃取水性部分。合并有机层用盐水洗涤、干燥并浓缩。通过制备型-TLC纯化所得粗制物以得到纯净化合物619。
反应图36
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化合物2的制备
将化合物1(21g，1当量)、胍(9.7g，1当量)、甲醇钠(5.4g，1当量)存于甲醇中的混合物加热至60℃，通过TLC检测所述反应，在反应完成后，用HCl中和溶剂。发现沉淀，随后过滤出产物、干燥以得到16g化合物2(产率为87％)。
化合物3的制备
将化合物2(18g，1当量)、乙酸酐(20g，2当量)和Py(10g)的混合物加热至回流约3h。在冷却后过滤出固体以得到20g粗制化合物3(产率为90％)。
化合物4的制备
将化合物3(5g，)存于POBr3(20g)中的混合物在氮保护下加热至80℃，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，将混合物倾注于冰水中，随后用Na2CO3中和溶剂，随后用EtOAc萃取。通过色谱柱纯化产物以得到2.5g化合物4(产率为53％)。
化合物6的制备
将化合物5(2.g，1当量)、2-(溴甲基)-5-氯苯并[b]噻吩(4.0g，1当量)和Cs2CO3(6.43g，1.5当量)存于CH3CN(30mL)的混合物加热至回流约5h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到3.0g化合物6(产率为56％)。
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MS-ESI：m/z＝510[M+1]+
化合物7的制备
在氮保护下向化合物6(3g，)存于无水DCM(5mL)的混合物中添加BBr3(2g)随后将温度保持在-78℃下，通过TLC检测所述反应。在反应完成后，将混合物倾注于冰水中，随后用Na2CO3中和溶剂，随后用EtOAc萃取。通过色谱柱纯化产物以得到2.5g化合物7(产率为50％)。
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MS-ESI：m/z＝428[M+1]+
化合物8的制备
将化合物4(286mg，1mmol)、化合物7(427mg，1mmol)、Pd(PPh3)4(10mg，0.1mmol)和Na2CO3(50mg)存于DMF中的混合物加热至60℃，通过TLC检测反应。在反应完成后，过滤所述混合物并用EtOAc萃取，随后通过制备型-HPLC纯化以得到20mg化合物8(产率为10％)。
化合物621的制备
使化合物8(50mg)和NaOH(30mg)存于EtOH中的混合物回流，在反应完成后，通过制备型-HPLC纯化反应混合物以得到20mg化合物62l(50％)。
化合物10的制备
使化合物7(200mg)和NaOH(100mg)的混合物在EtOH中回流，在反应完成后，用HCl中和反应混合物，通过制备型-HPLC纯化反应混合物以得到180mg化合物10(90％)。
化合物620的制备
将化合物4(286mg，1mmol)、化合物10(400mg，1mmol)、Pd(PPh3)4(10mg，0.1mmol)和Na2CO3(50mg)存于DMF中的混合物加热至60℃并通过TLC检测反应。在反应完成后，过滤所述混合物并用EtOAc萃取，随后通过制备型-HPLC纯化以得到50mg化合物620(产率为30％)。
化合物13的制备
将二异丙基胺(22ml)与THF(100ml)的混合物保持在-78℃下，随后添加正丁基锂(1.6M，48mL)。在3h后，添加化合物12(5.6mL)、甲酸乙酯(4.8mL)和K2CO3(13g)的混合物。随后添加丙酮(30mL)，并将反应混合物倾注于水中且用EtOAc萃取。浓缩EtOAc层且通过色谱柱纯化以得到3g化合物13(产率为50％)。
化合物14的制备
将化合物13(3g，1当量)、胍(9.7g，1当量)、甲醇钠(5.4g，1当量)存于甲醇中的混合物加热至60℃并通过TLC检测反应。在反应完成后，用HCl中和溶剂。过滤出沉淀，随后干燥以得到16g化合物14(产率为87％)。
化合物15的制备
将化合物14(1g，1当量)、乙酸酐(5g，.)和吡啶(3g)的混合物加热至回流约3h。在冷却后浓缩反应混合物，通过色谱柱纯化粗制物以得到400mg化合物3(产率为30％)。
化合物16的制备
在氮保护下将化合物15(400mg)存于POBr3(3g)中的混合物加热至80℃，通过TLC检测反应。在反应完成后，将混合物倾注于冰水中，随后用Na2CO3中和溶剂并用EA萃取，通过色谱柱纯化产物以得到200g化合物16(产率为37％)。
化合物623的制备
将化合物16(200mg，0.86mmol)、化合物7(427mg，1mmol)、Pd(PPh3)4(20mg，0.1mmol)和Na2CO3(50mg)存于DMF中的混合物加热至60℃并通过TLC检测反应。在反应后，过滤混合物且随后用EtOAc萃取，随后通过制备型-HPLC纯化以得到30mg化合物623(产率为6.5％)。
反应图37
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化合物2的制备
在氮保护下将化合物1(4.0g，1eq)、(4.3g，2eq)、Pd(PPh3)4(1.6g，0.1eq)、Na2CO3水溶液(3.7g，2.5eq)存于1∶1甲苯-乙醇中的混合物加热至回流，通过TLC检测反应。在反应完成后，过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化产物且获得3.6g化合物2(产率为63％)。
化合物3的制备
将化合物2(1当量)、1-溴甲基-4-溴苯(1当量)和Cs2CO3(1.5当量)存于CH3CN(5mL/l)中的混合物加热至回流约12h。在冷却后过滤出固体，在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化所得粗制物以得到化合物3。
化合物4的制备
在110℃下于氮气氛中搅拌化合物3(1当量)、苯基-胺(1.5当量)和碳酸铯(2当量)存于甲苯(5mL/l mmol试剂2)中的混合物，随后添加乙酸钯和xanphos。将所述混合物在所述温度下搅拌过夜并通过TLC监测。通过制备型-TLC(PE/EA＝5∶1)分离化合物4。
化合物5的制备
将化合物4(1当量)、Cs2CO3和碘甲烷(3当量)存于DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC监测反应。当初始材料耗尽时，所述混合物用EtOAc萃取、用饱和盐水洗涤、经无水硫酸钠干燥、在真空中浓缩并通过制备型-TLC(PE/EA＝5∶1)分离目标产物。
化合物624的制备
将化合物5(1当量)溶于无水二氯甲烷(5mL/mmol化合物5)中。在冰冷条件下向此混合物中添加三溴化硼(3当量)并将所述整体在室温下搅拌14小时。随后向反应混合物中添加1N氢氧化钠水溶液，用乙酸乙酯萃取所述整体。有机层用盐水洗涤且随后经无水Na2SO4干燥。在低压下移除溶剂。通过色谱柱纯化粗制物以得到化合物624。
反应图38
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化合物625的合成
将化合物1(139mg，0.3mmol)、化合物2(83mg，0.6mmol)、Pd(PPh3)4(17.4mg，0.015mmol)和碳酸钠(1.0M，0.75mL)的混合物在82℃下于氩气氛中搅拌过夜。所述混合物用乙酸乙酯稀释、用盐水洗涤四次、经干燥(Na2SO4)并浓缩。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的1-5％EtOAc洗脱，得到84mg无色固体状化合物3。
将化合物3(71mg)溶于MeOH(4mL)和THF(1mL)中并添加氢氧化钠(1.0M，0.6mL)和水(1.9mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜、用2N HCl酸化至pH2且随后浓缩。添加水并过滤出所得沉淀且用水洗涤三次。自DCM重结晶，得到57mg暗淡琥珀色固体状化合物625；1H NMR(DMSO-d6)δ3.67(s，2H)，5.72(s，2H)，6.7(m，1H)，7.01(t，J＝2.5Hz，1H)，7.1(m，1H)，7.22(t，J＝9.5Hz，1H)，7.28(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.41(dd，J＝10.5，2.5Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.56(s，1H)，7.57(d，J＝10Hz，1H)，7.8(m，1H)，8.01(d，J＝2.5Hz，1H)，8.03(d，J＝11.0Hz，1H)，9.43(s，1H)，12.24(s，1H)。
化合物626的合成
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使用与对化合物625所述者相似的程序，自化合物1(46mg，0.1mmol)和2-甲基苯硼酸(27mg，0.2mmol)制备化合物626(30mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ2.21(s，3H)，3.67(s，2H)，5.67(s，2H)，7.00(dd，J＝10.0Hz，1H)，7.19-7.29(m，4H)，7.41(dd，1H)，7.44(s，1H)，7.55(d，J＝10.0Hz，1H)，7.6(m，1H)，7.68(s，1H)，7.95(d，J＝2.5Hz，1H)，8.02(d，J＝10.5Hz，1H)，12.24(s，1H)。
化合物627的合成
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使用与对化合物625所述者相似的程序，自化合物1(46mg，0.1mmol)和2-甲基-5-氨基苯硼酸频哪醇酯(28mg 0.12mmol)制备化合物627(52mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ2.25(s，3H)，3.68(s，2H)，5.67(s，2H)，6.95-7.05(m，3H)，7.26(d，J＝9.5Hz，4H)，7.40(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.55(s，1H)，7.58(d，J＝10.0Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.93(d，J＝2.5Hz，1H)，8.03(d，J＝10.5Hz，1H)，9.9(bs，2H)，12.2(bs，1H)。
反应图39
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化合物628的合成
将化合物1(92mg，0.2mmol)、2-甲基-3，5-二硝基苯硼酸(68mg 0.3mmol)、氟化钾(58mg，1.0mmol)、Pd2(dba)3(8mg)和三(叔丁基)膦(0.2M，存于THF中，0.02mL，0.004mmol)存于THF(1mL)中的反应混合物在氩气氛中于室温下搅拌过夜。所述混合物用乙酸乙酯稀释、过滤、用盐水洗涤三次、经干燥(Na2SO4)并浓缩。实施硅胶色谱分离，用DCM/己烷(1∶3至3∶1)洗脱，得到98mg黄色固体状化合物5。
通过在室温下用氢气(55psi)在10％Pd/C上方实施催化氢化4h来还原存于EtOAc(40mL)中的化合物5(100mg)。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的1.5-3％MeOH洗脱，得到55mg化合物6。
将化合物6(52mg)存于MeOH(3mL)、水(0.5mL)和2N NaOH(0.2mL)中的溶液在室温下于氩气氛中搅拌2天。所述溶液经浓缩、用2N HCl酸化至pH2、用水稀释且浓缩至约1mL。过滤出沉淀、用水充分洗涤且在真空中干燥以得到52mg暗淡黄色固体状化合物628；1H NMR(DMSO-d6)δ1.84(s，3H)，3.67(s，2H)，5.65(s，2H)，6.14(s，1H)，6.30(s，1H)，6.90(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，7.40(dd，J＝11.0，2.0Hz，1H)，7.42(s，2H)，7.53(d，J＝10.0Hz，1H)，7.60(s，1H)，7.92(d，J＝2.5Hz，1H)，8.03(d，J＝10.5Hz，1H)。
反应图40
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化合物629的合成
将化合物1(2.16g，4.68mmol)、KOAc(1.59g，16.2mmol)、双(戊酰)二硼(1.37g，5.38mmol)和PdCl2(dppf)(191mg，0.23mmol)的混合物在80℃下搅拌过夜。所述混合物用EtOAc稀释、经硅藻土垫过滤、用EtOAc充分洗涤。所述滤液用盐水洗涤四次、经干燥(Na2SO4)并浓缩。实施硅胶色谱分离，用DCM-己烷(2∶1)洗脱，得到1.84g泡沫状化合物8。
将化合物8(0.82g，1.6mmol)和结合聚合物的硼酸(1-2mmol/g，8.0g)存于乙腈(35mL)和1.0N HCL(3.5mL)中的混合物在室温下搅拌24h。过滤出聚合物试剂且将滤液浓缩至干燥。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的1-2％MeOH洗脱，得到0.41g白色固体状化合物9。
将化合物9(43mg，0.1mmol)、4-氯-2，6-二氨基嘧啶(22mg，0.15mmol)、KF(20mg，0.33mmol)、Pd2(dba)3(9.2mg，0.01mmol)和P(t-Bu)3(0.2M，存于DMF，0.09mL)的混合物在80℃下于氩气氛中搅拌3天。所述混合物用DCM稀释、过滤并浓缩。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的5-8％MeOH洗脱，得到19mg化合物10。
将化合物10(19mg)存于MeOH(2mL)和1N NaOH(0.5mL)中的溶液搅拌过夜、用更多的水洗涤且浓缩以移除MeOH。用AcOH酸化所述水溶液且过滤所得沉淀并用水充分洗涤以得到8.1mg暗淡黄色固体状化合物629；1H NMR(DMSO-d6)δ3.68(s，2H)，5.71(s，2H)，5.84(bs，2H)，6.22(bs，2H)，6.25(s，1H)，7.33(s，1H)，7.43(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.57(d，J＝10.5Hz，1H)，7.62(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，8.00(d，J＝2.5Hz，1H)，8.05(d，J＝10.5Hz，1H)，8.10(s，1H)，12.2(bs，1H)。
化合物630的合成
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使用与对化合物629所述者相似的程序，自化合物9(86mg，0.2mmol)和4-氨基-2-氯嘧啶(38.8mg 0.3mmol)制备化合物630(27mg)；1H NMR(TEA盐，DMSO-d6)δ0.90(t，J＝9.0Hz，7.1H)，2.43(q，J＝9.0Hz，4.8H)，3.62(s，2H)，5.68(s，2H)，6.26(d，J＝7.0Hz，1H)，6.74(bs，2H)，7.23(s，1H)，7.40(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.54(d，J＝10.5Hz，1H)，7.98(d，J＝2.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.5Hz，1H)，8.05(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，8.09(d，J＝7.5Hz，1H)，8.39(s，1H)，12.2(bs，1H)。
反应图41
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化合物631的合成
将化合物9(86mg，0.2mmol)、氯二氨基三嗪(44mg，0.3mmol)、碳酸钠(1M，0.5mL)和Pd(PPh3)4(24mg，0.02mmol)存于DMF(1.2mL)中的混合物在氩气氛中于82℃下搅拌2天。蒸发溶剂且用MeOH和DCM的混合物萃取残留物。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的5-7％MeOH洗脱，得到47mg化合物12，用NaOH/H2O水解所述化合物12以得到灰白色固体状化合物631(31mg)；1H NMR(DMSO-d6+D2O)δ3.69(s，2H)，5.70(s，2H)，7.33(s，1H)，7.40(dd，J＝11.0，2.5Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.67(d，J＝11.0Hz，1H)，7.88(d8d，J＝10.5Hz，1H)，7.95(d，J＝2.5Hz，1H)，8.00(d，J＝10.5Hz，1H)，8.41(s，1H)。
化合物632的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(43mg，0.2mmol)和氯二(乙基氨基)三嗪(30mg，0.15mmol)制备化合物632(18mg)；1H NMR(DMSO-d6+D2O)δ1.13(t，J＝9.0Hz，6H)，3.37(q，J＝9.0Hz，4H)，3.69(s，2H)，5.70(s，2H)，7.34-7.70(m，4H)，7.81-7.95(m，2H)，7.99(d，J＝10.5Hz，1H)，8.37(s，1H)。
化合物633的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(64mg，0.2mmol)和4-氨基-2-氯-5-氟嘧啶(33mg 0.225mmol)制备灰白色固体状化合物633(21mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.67(s，2H)，5.69(s，2H)，7.29(s，1H)，7.40(dd，J＝10.5，2.5Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.59(d，J＝10.5Hz，1H)，7.95(dd，J＝10.5，1.5Hz，1H)，7.98(d，J＝2.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.5Hz，1H)，8.25(m，1H)，8.35(s，1H)。
化合物634的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(64mg，0.2mmol)和2-溴嘧啶(36mg 0.225mmol)制备暗淡黄色固体状化合物634(41mg)；1H NMR(CDCl3)δ3.82(s，2H)，5.54(s，2H)，7.06(s，1H)，7.15(t，J＝6.0Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.32(dd，J＝10.5，2.5Hz，1H)，7.67(d，J＝2.5.0Hz，1H)，7.74(d，J＝11.0Hz，1H)，8.27(dd，J＝10.5，1.5Hz，2H)，8.55(s，1H)，8.80(d，J＝6.0Hz，2H)。
化合物635的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(86mg，0.2mmol)和2-溴-4，6-二氨基嘧啶(57mg 0.3mmol)制备暗淡黄色固体状化合物635(15mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.62(s，2H)，5.63(s，2H)，5.97(s，4H)，7.17(s，1H)，7.39(s，1H)，7.41(dd，J＝11.0，2.5Hz，1H)，7.50(d，J＝10.5Hz，1H)，7.99(d，J＝2.5Hz，1H)，8.0(m，2H)，8.27(s，1H)，8.31(s，1H)，8.36(d，J＝1.5Hz，1H)。
化合物636的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(64mg，0.15mmol)和2-氨基-4，6-二氯嘧啶(37mg 0.225mmol)制备暗淡黄色固体状化合物636(16mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.65(s，2H)，5.73(s，2H)，7.31(s，1H)，7.39(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.50(s，1H)，7.60(d，J＝11.0Hz，1H)，7.84(dd，J＝10.5，1.5Hz，1H)，8.01(m，2H)，8.36(d，J＝1.5Hz，1H)。
化合物637的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(86mg，0.2mmol)和2-氨基-4，6-二氯-5-甲酰基嘧啶(58mg 0.3mmol)制备暗淡黄色固体状化合物637(18mg)；1HNMR(DMSO-d6)δ3.69(s，2H)，5.70(s，2H)，7.33(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，7.40(dd，J＝10.0，2.0Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.52(s，1H)，7.55(bs，2H)，7.60(d，J＝10.0Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.99(d，J＝21.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.5Hz，1H)，9.65(s，1H)，12.2(bs，1H)。
化合物638的合成
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使用与对化合物631所述者相似的程序，自化合物9(86mg，0.2mmol)和4-溴-2，6-二氨基吡啶(56.4mg 0.3mmol)制备暗淡黄色固体状化合物638(26mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.66(s，2H)，5.36(bs，4H)，5.70(s，2H)，5.95(s，2H)，7.23(d，J＝10.01H)，7.39-7.46(m，3H)，7.56(d，J＝10.0Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.98(s，1H)，8.03(d，J＝11.0Hz，1H)，9.65(s，1H)，12.2(bs，1H)。
反应图42
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化合物639的合成
向化合物9(0.47g)存于甲醇、1，4-二氧杂环己烷和水的混合物中的溶液中添加氢氧化钠(1N，1mL)。将所得溶液在室温下搅拌4h，用2N HCl酸化至pH3且浓缩至干燥。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的3-5％MeOH洗脱，得到0.41g无色泡沫状化合物14。
使用大功率Biotage微波反应器将化合物14(55mg，0.136mmol)、6-溴嘌呤(41.5mg，0.192mmol)、碳酸铯(2.0M，0.19mL，0.38mmol)、POPd2(0.1M，存于DMF中，0.077mL，0.0077mmol)和TBAI(3.7mg，0.01mmol)存于DMF(1mL)和水(0.19mL)的混合物在150℃下加热3h。所述混合物用AcOH酸化并浓缩。实施硅胶色谱分离，用2％TEA和10-15％MeOH存于DCM中的混合物洗脱，得到31mg 639的TEA盐。实施二次硅胶色谱分离，用存于DCM中的10-15％MeOH洗脱，得到13mg黄色固体状化合物639。
化合物640的合成
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使用与对化合物639所述者相似的程序，自化合物14(65mg，0.16mmol)和2-氯-6-甲基氨基嘌呤(59mg 0.32mmol)制备化合物640(6mg)。
反应图43
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化合物641和642的合成
将化合物14(70mg)存于饱和氨水溶液(40mL)中的溶液在室温下静置2天且随后浓缩至干燥。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的3-5％MeOH洗脱，得到34mg化合物16。向化合物16(23mg)存于MeOH(2mL)和THF(1.5mL)的溶液中依次添加锌粉(135mg)和65％肼(0.5mL)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。过滤出锌粉且浓缩滤液。向残留物中添加水，随后用2N HCl酸化所述残留物达pH2。过滤出沉淀，用水洗涤且在真空中干燥以得到14.3mg淡黄色固体状化合物641；1H NMR(DMSO-d6)δ3.61(s，2H)，5.41(s，4H)，5.62(s，2H)，6.50(m，2H)，6.67(s，1H)，6.77(s，1H)，6.99(d，J＝10.01H)，7.26(d，J＝11.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.41(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.51(m，3H)，8.01(d，J＝2.5Hz，1H)，8.03(d，J＝11.0Hz，1H)，12.2(bs，1H)。
使用与对化合物641所述者相似的程序，自化合物14(36mg)制备白色固体状化合物642(19mg)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.34(s，3H)，3.66(s，2H)，5.64(s，2H)，5.83(bs，2H)，6.47(d，J＝3.0Hz，1H)，6.52(dd，J＝10.5，3.0Hz，1H)，6.88(dd，7＝10.0，1.5Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.39(d，1H)，7.41(d，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.47(d，J＝10.0Hz，1H)，7.54(d，J＝10.5Hz，1H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，8.03(d，J＝10.5Hz，1H)，12.2(bs，1H)。
反应图44
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化合物643、644、645、646和647的合成
将化合物19(80mg，0.163mmol)、MeI(0.26mL)和TEA(0.136mL，0.98mmol)存于THF(2mL)中的溶液在45℃下搅拌2天并浓缩。实施硅胶色谱分离，用存于DCM-己烷(1∶1)中的EtOAc洗脱，得到5种不同的产物：6mg 643的酯、11mg 644的酯、4mg 645的酯、8mg 646的酯和8mg 647的酯。在室温下用存于MeOH/二氧杂环己烷/H2O中的氢氧化钠水解所述酯以分别得到643、644、645、646和647，均为暗淡褐色固体。
化合物643的1H NMR(DMSO-d6)δ2.90(s，12H)，3.45(s，2H)，5.66(s，2H)，5.98(s，1H)，6.30(d，J＝2.5Hz，，2H)，7.24(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.38(dd，7＝11.0，2.5Hz，1H)，7.53(d，J＝10.5Hz，3H)，7.64(s，1H)，7.66(s，1H)，7.95(d，J＝2.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.5Hz，1H)。
化合物644的1H NMR(DMSO-d6)δ2.69(s，3H)，2.88(s，6H)，3.61(s，2H)，5.4(bs，1H)，5.68(s，2H)，5.86(s，1H)，6.15(s，1H)，6.19(s，1H)，7.24(d，J＝10.5Hz，，1H)，7.4(m，2H)，7.52(d，J＝10.0Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.66(s，1H)，7.95(s，1H)，8.02(d，J＝10.5Hz，1H)。
化合物645的1H NMR(DMSO-d6)δ2.86(s，6H)，3.60(s，2H)，5.67(s，2H)，5.94(t，J＝2.5Hz，1H)，6.16(t，J＝2.0Hz，1H)，6.22(t，J＝2.0Hz，1H)，7.21(dd，J＝10.0，2.0Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.39(dd，J＝10.5，2.5Hz，1H)，7.51(d，J＝10.0Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.65(s，1H)，7.96(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝11.0Hz，1H)。
化合物646的1H NMR(DMSO-d6)δ2.66(s，6H)，3.63(s，2H)，5.3(bs，2H)，5.68(s，2H)，5.71(t，1H)，6.05(d，J＝2.5Hz，2H)，7.21(dd，J＝10.5Hz，1.5，1H)，7.39(s，1H)，7.39(dd，J＝11.0，2.5Hz，1H)，7.51(d，J＝10.0Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.64(s，1H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，8.02(d，J＝11.0Hz，1H)。
化合物647的1H NMR(DMSO-d6)δ2.64(s，3H)，3.62(s，2H)，5.67(s，2H)，5.76(s，1H)，6.04(s，1H)，6.12(s，1H)，7.19(d，J＝10.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.40(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.5(m，2H)，7.62(s，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝10.5Hz，1H)。
化合物648的合成
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将化合物19(75mg，0.15mmol)、乙酸酐(0.043mL)和吡啶(0.073mL)存于DCM(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。添加更多的乙酸酐(0.2mL)和吡啶(2mL)并将所述混合物搅拌3h且浓缩。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的2-5％MeOH洗脱，得到69mg二-N-乙酰基产物，用存于MeOH/H2O中的氢氧化钠水解所述产物以得到灰白色固体状化合物648；1H NMR(DMSO-d6)δ2.03(s，6H)，3.67(s，2H)，5.70(s，2H)，7.23(d，J＝10.0Hz，1H)，7.4(m，3H)，7.54(s，2H)，7.60(d，J＝10.5Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.87(s，1H)，7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(d，J＝10.5Hz，1H)，9.96(s，2H)。
化合物649和650的合成
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将化合物19(159mg，0.165mmol)、2-溴丙烷(0.79mL)和TEA(0.29mL)存于THF(2mL)和二氧杂环己烷(3mL)中的混合物在60℃下搅拌3天并浓缩。实施硅胶色谱分离，用存于DCM-己烷(1∶1)中的5-20％EtOAc洗脱，得到两种不同的产物(13mg 649的酯和57mg 650的酯)，用存于MeOH、二氧杂环己烷和水中的NaOH洗脱所述产物以分别得到化合物649和650，二者均为暗淡褐色固体。
化合物649：1H NMR(DMSO-d6+D2O)δ1.08(d，J＝7.5Hz，12H)，3.46(m，2H)，3.60(s，2H)，5.61(s，2H)，5.74(s，1H)，6.00(s，2H)，7.17(d，J＝10.0Hz，1H)，7.35-7.37(m，2H)，7.48(d，J＝10.0Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.60(s，1H)，7.87(s，1H)，7.97(d，J＝11.0Hz，1H)。
化合物650：1H NMR(DMSO-d6)δ1.11(d，J＝8.0Hz，6H)，3.49(m，1H)，3.60(s，2H)，5.66(s，2H)，5.78(s，1H)，6.05(s，1H)，6.09(s，1H)，7.17(d，J＝10.0Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.40(d，1H)，7.9-7.52(m，2H)，7.60(s，1H)，7.88(s，1H)，8.02(d，J＝11.0Hz，1H)。
反应图45
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化合物651、652和653的合成
将5-溴尿嘧啶28(2.30g，12mmol)、2.0N NaOH(43mL)、NH2OSO3(4.52g，40mmol)存于水(40mL)中的混合物在40℃下搅拌过夜。将所述混合物冷却、用AcOH酸化至pH4且浓缩至干燥。用MeOH-DCM(2∶1)充分萃取固体粗制物且浓缩各萃取物。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的3-6％MeOH洗脱，得到0.69g馏分1：29和31的混合物；及0.81g馏分2：28和30的混合物。馏分1自MeOH重结晶，得到0.12g化合物29，且馏分2自MeOH重结晶，得到0.51g化合物30。
将化合物9(86mg，0.2mmol)、化合物30(50mg，0.24mmol)、碳酸钠(1M，0.5mL)和Pd(PPh3)4(14.4mg，0.012mmol)存于DMF(1.2mL)中的混合物在氩气氛中于82℃下搅拌2天。蒸发溶剂且用MeOH和DCM的混合物萃取残留物。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的2-3％MeOH洗脱，得到26mg 652的乙酯，用NaOH/H2O水解以得到灰白色固体状化合物652(17mg)。
将化合物9(172mg，0.4mmol)、化合物29和31的混合物(104mg，0.48mmol)、碳酸钠(1M，1mL)和Pd(PPh3)4(28.8mg，0.024mmol)存于DMF(2.4mL)中的混合物在氩气氛中于82℃下搅拌4天。添加POPD2(15mg)并将所述混合物再加热1天。将所述混合物冷却，用AcOH酸化至pH4并浓缩。用MeOH和DCM的混合物萃取所述残留物。实施硅胶色谱分离，用存于DCM中的1-3％MeOH洗脱，得到2种不同的产物(653的酯：11mg和651的酯：23mg)；用NaOH/H2O水解所述产物以分别得到化合物653和651，二者均为灰白色固体。
化合物651：1H NMR(DMSO-d6)δ3.64(s，2H)，5.63(s，2H)，5.65(s，2H)，5.79(s，2H)，7.28(dd，J＝10.0，2.0Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.40(dd，J＝11.0，2.5Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.50(d，J＝10.5Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.84(s，1H)，7.98(d，J＝2.5Hz，1H)，8.02(d，J＝10.5Hz，1H)。
化合物652：1H NMR(DMSO-d6)δ3.55(s，2H)，5.60(s，2H)，5.5(b)，7.23(dd，J＝10.5Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.40(dd，J＝10.5，2.5Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.49(d，J＝10.0Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.77(s，1H)，7.99(d，J＝2.5Hz，1H)，8.01(d，J＝10.5Hz，1H)。
化合物653：1H NMR(DMSO-d6)δ3.63(s，2H)，5.58(s，2H)，5.64(s，2H)，7.24(d，J＝10.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.40(dd，J＝10.5，2.0Hz，1H)，7.48(d，J＝10.5Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.77(s，1H)，7.80(s，1H)，7.97(d，J＝1.5Hz，1H)，8.02(d，J＝10.5Hz，1H)，11.48(s，1H)。
反应图46
阐述在6位具有5-元杂环的吲哚抑制剂的合成。
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依据上文一般反应图按照下文对化合物656和化合物657所述制备标题化合物：
将经取代吲哚6-硼酸1(220mg，0.514mmol)、N-Boc保护的2-氨基-5-溴噻唑(287mg，1.03mmol)、甲苯(5ml)、1M碳酸钠(1.54ml)和Pd[P(Ph)3]4的混合物在氩气氛中于80℃下搅拌过夜。在冷却后，过滤出不溶性材料并使滤液在饱和碳酸氢钠与乙酸乙酯之间分配。有机相被分离、经硫酸镁干燥并在真空下蒸发。通过使用3-7％乙酸乙酯-DCM的色谱柱分离来纯化残留物以提供受完全保护的中间体2(R1＝H，R2＝Boc)，40mg(13％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.17(t，3H)，1.42(s，9H)，3.67(s，2H)，4.01(q，2H)，5.63(s，2H)，7.25(dd，1H)，7.38(dd，1H)，7.39(s，1H)，7.50(d，1H)，7.52(s，1H)，7.68(s，1H)，7.79(s，1H)，7.95(d，1H)，8.0(d，1H)，11.4(br.s，1H)。
化合物657：将化合物2(15mg，0.026mmol)溶于乙醇(2ml)和二氧杂环己烷(1ml)中。向所述混合物中添加2N氢氧化钠(0.1ml)并在40℃下实施水解2小时。蒸发反应混合物；将残留物溶于水中并添加2N盐酸(0.1ml)。用乙酸乙酯萃取所述化合物并通过自DCM沉淀来分离。产量10mg(69％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.42(s，9H)，3.61(s，2H)，5.63(s，2H)，7..24(dd，1H)，7.38(s，1H)，7.39(d，1H)，7.50(d，1H)，7.52(s，1H)，7.63(s，1H)，7.75(s，1H)，7.87(d，1H)，8.0(d，1H)。，11.4(br.s，1H)，12.2(br.s，1H)。
化合物654：作为化合物657合成。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：2.12(s，3H)，3.61(s，2H)，5.68(s，2H)，7.26(dd，1H)，7.38(s，1H)，7.39(dd，1H)，7.51(d，1H)，7.55(s，1H)，7.77(s，1H)，7.82(s，1H)，7.96(d，1H)，8.0(d，1H)，12.0(br.s，1H)，12.2(br.s，1H)。
化合物658：以与化合物657相似的方式合成。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.49(s，9H)，3.66(s，2H)，5.66(s，2H)，7.16(dd，1H)，7.20-7.23(s和dd，2H)，7.40-7.43(s和dd，2H)，7.45(s，1H)，7.50(d，1H)，7.58(s，1H)，7.82(s，1H)，8.02(d，1H)，8.04(d，1H)，11.6(br.s，1H)，12.2(br.s，1H)。
化合物659：以与化合物657类似的方式合成。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.50(s，9H)，3.69(s，2H)，5.78(s，2H)，7.42(dd，1H)，7.51(s，1H)，7.53(s，1H)，7.62-7.64(m，2H)，7.99(d，1H)，8.04(d，1H)，8.15(s，1H)，11.9(br s，1H)。
化合物656：向化合物2(12mg，0.021mmol)存于DCM(0.5ml)的溶液中相继添加三乙基甲硅烷基(0.05ml)及TFA(0.2ml)。在3小时后在室温下用甲苯(5ml)稀释所述反应混合物且在真空中蒸发。重复与甲苯共蒸发一次以上以提供白色固体状自由氨基中间体。按照上文所述将自由氨基中间体水解成标题化合物并通过使用5-20％MeOH-DCM的色谱柱分离来分离出白色泡沫状产物。产量6mg(63％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：3.62(s，2H)，5.65(s，2H)，6.98(s，2H)，7.12(dd，1H)，7.32(s，1H，7.39(s，1H)，7.41(dd，1H)，7.47(d，1H)，7.61(d，1H)，7.62(s，1H)，7.97(d，1H)，8.04(d，1H)，12.2(br.s，1H)。
化合物655：作为化合物656合成且作为三乙胺盐分离出。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：0.94(t，9H)，2.46(q，6H)，3.61(s，2H)，5.62(s，2H)，7.04(br.s，2H)，7.13(dd，1H)，7.17(br.s，1H)，7.23(br.s，1H)，7.40(d，1H)，7.42(s，1H)，7.44(d，1H)，7.62(s，1H)，7.73(s，1H)，8.01(d，1H)，8.03(d，1H)。
化合物660：以与化合物656相似的方式合成。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：3.67(s，2H)，5.74(s，2H)，7.27(s，2H)，7.42(dd，1H)，7.45(dd，1H)，7.46(s，1H)，7.53(s，1H)，7.59(d，1H)，7.94(s，1H)，7.95(d，1H)，8.04(d，1H)，12.2(br.s，1H)。
化合物661：依据一般反应图合成。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：3.67(s，2H)，5.67(s，2H)，6.61(br.s，1H)，7.12(dd，1H)，7.15(d，1H)，7.38(br.s，1H)，7.41(dd，1H)，7.46(s，1H)，7.57(d，1H)，7.60(s，1H)，7.71(d，1H)，7.76(s，1H)，8.01(d，1H)，8.03(d，1H)，12.2(br.s，1H)。
反应图47
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化合物662的合成
将初始溴吲哚(151mg，0.33mmol)、硼酸(187mg，0.65mmol)、乙醇(2ml)、甲苯(2ml)、1M碳酸钠(0.7ml)和Pd[P(Ph)3]4(10mg)的混合物在氩气氛中于80℃下搅拌过夜。在习用萃取处理后，通过使用2-3％乙酸乙酯-DCM的色谱柱分离来分离产物。产量180mg(91％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.47(s，9H)；1.58(s，9H)，3.75(s，2H)，5.66(s，2H)，7.21(dd，1H)，7.40(dd，1H)，7.45(s，1H)，7.50(s，1H)，7.53(d，1H)，7.71(s，1H)，7.80(d，1H)，8.03(d，1H)，8.28(s，1H)。
向来自上文的经保护化合物(100mg，0.165mmol)存于甲醇(3ml)和THF(2ml)的溶液中添加盐酸(6N，0.5ml)并将所述混合物在30℃下搅拌2小时。过滤出固体并将其重新悬浮于乙醇(2ml)中。添加氢氧化钠(2N，0.4ml)并在40℃下实施水解1小时。将所得溶液在真空中浓缩、溶于少量水中且用2N盐酸酸化至pH～3。过滤出固体状662，用水洗涤且在真空中干燥。产量30mg(39％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：3.64(s，2H)，5.64(s，2H)，7.22(d，1H)，7.39(s，1H)，7.41(d，1H)，7.47(d，1H)，7.53(s，1H)，7.53(d，1H)，7.77(s，1H)，7.80(s，1H)，8.03(d，1H)，11.09(s，1H)，11.21(s，1H)，12.21(br.s，1H)。
反应图48
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化合物663的合成
将初始溴吲哚(462.8mg，1mmol)、氰化铜(723mg，8mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(2ml)的混合物在145℃下加热过夜。在冷却至室温后，使反应物在10％氨与乙酸乙酯之间分配，过滤出无机固体且有机相被分离出、经硫酸镁干燥并蒸发。通过色谱柱分离(60-100％DCM-己烷)继而自乙酸乙酯-己烷结晶来分离氰基酯中间体。产量：294mg(72％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.15(t，3H)，3.80(s，2H)，4.05(q，2H)，5.75(s，2H)，7.39(dd，1H)，7.42(dd，1H)，7.66(s，1H)，7.71(d，1H)，7.73(s，1H)，7.97(d，1H)，8.04(d，1H)，8.26(s，1H)。
使用标准程序分离酯中间体(50mg，0.122mmol)以提供663，通过使用5％MeOH-DCM的色谱柱分离来分离。产量45mg(97％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：3.71(s，2H)，5.74(s，2H)，7.38(dd，1H)，7.42(dd，1H)，7.64(s，1H)，7.70(dd，1H)，7.72(s，1H)，7.98(d，1H)，8.04(d，1H)，8.25(s，1H)，12.3(br.s，1H)。
反应图49
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化合物664和665的合成
向初始酸(365mg，1mmol)存于DCM(4ml)的溶液中添加叔丁基胺(0.26ml，2.5mmol)，继而添加HOBT(2ml 0.5M存于THF中的溶液)和DCC(1ml1M THF溶液)。在室温下搅拌2小时及常用萃取处理后，通过使用10-15％乙酸乙酯-己烷的色谱柱分离来分离酰胺1。产量360mg(86％)。向此材料(360mg，0.86mmol)存于苯(3ml)的溶液中添加POCl3(0.42ml，4.6mmol)且反应在85℃下进行4小时。在冷却后，用乙酸乙酯稀释所述反应混合物、用饱和碳酸氢钠洗涤、经硫酸镁干燥并蒸发。实施色谱柱分离(DCM至2％EtOAc-DCM)提供白色固体状腈2。产量260mg(87％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.13(s，3H)，1.15(s，3H)，2.81-2.84(m，1H)，3.64(s，3H)，4.01(s，2H)，5.52(s，2H)，7.10(d，1H)，7.12(s，1H)，7.19-7.23(m，3H)，7.39-7.43(m，1H)，7.70-7.72(m，2H)。
按照标准程序水解化合物2(40mg，0.116mmol)以提供32mg(83％)664。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.13(s，3H)，1.15(s，3H)，2.49-2.51(m，1H)，3.89(s，2H)，5.51(s，2H)，7.11(d，1H)，7.12(s，1H)，7.18-7.22(m，3H)，7.37-7.43(m，1H)，7.69(d，1H)，7.72(d，1H)，12.2(br.s，1H)。
另一选择为，将化合物2(65mg，0.188mmol)溶于乙醇(2ml)中且在40℃下用2NNaOH(0.2ml)水解30min。在酯基团水解完成后，添加过氧化氢(30％，0.2ml)且使反应在相同温度下继续进行3小时。相继实施常用萃取处理及色谱柱分离(10％-20％MeOH存于DCM中的混合物)，提供白色固体状665。产量30mg(45％)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ：1.11(s，3H)，1.13(s，3H)，2.49-2.51(m，1H)，3.84(s，2H)，5.60(s，2H)，7.02(d，1H)，7.03(s，1H)，7.05-7.12(m，4H)，7.18-7.22(m，1H)，7.49(d，1H)，7.61(d，1H)，7.74(br.s，1H)，8.2(br.s，1H)，12.68(br.s，1H)。
反应图50
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步骤1：甲基2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸
在100mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-1H-吲哚-3-基)乙酸酯(6.685ml，0.6685mmol)悬浮于二氧杂环己烷(6mL)中。向此悬浮液中添加4，4，5，5-四甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(220.7mg，0.8691mmol)、乙酸钾(196.8mg，2.006mmol)和PdCl2(dppf)二氯甲烷加合物(16.50mg，0.02006mmol)。向此反应物中通入氮并将反应混合物加热至90℃，20小时。
通过在EtOAc中稀释来处理反应物且用饱和Na2CO3洗涤，随后通过硅胶柱纯化，使用6∶1Hex/EtOAc-＞4∶1Hex/EtOAc的梯度洗脱以提供黄色油状甲基2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(0.316g，0.673mmol，95％)。
步骤2：2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(5，5-二甲基-1，3，2-二氧杂硼烷基-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸酯
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(5，5-二甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸甲酯(0.227g，0.471mmol)存于2mL THF的溶液中添加2N HCl(2.36ml，4.71mmol)并将所得混合物在40℃下搅拌40小时以提供黄色油状2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(5，5-二甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸酯。
步骤3：2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(3，5-二氯苯基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(733)
向2-(1-((5-氯苯并[b]噻吩-3-基)甲基)-6-(5，5-二甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酸(44.1mg，0.09428mmol)和1-溴-3，5-二氯苯(21.30mg，0.09428mmol)存于甲苯(2mL)的溶液中添加Na2CO3(0.2357ml，0.4714mmol)和Pd(PPh3)4(5.447mg，0.004714mmol)。向所述溶液中添加0.5mL EtOH以助于溶解。在通入N2后，将反应混合物加热至90℃，过夜。
随后用2N HCl酸化所述反应物并用EtOAc(3x)萃取。合并各有机物且用盐水洗涤、用MgSO4干燥且浓缩成淡褐色-橙色固体。在CH2Cl2和Et2O中稀释此固体且通过过滤收集所得固体以提供733(15.8mg，产率为33.46％)。检测到MS APCI(+)m/z497.8。
反应图51
按照吲哚乙酸抑制剂生物电子等排体置换反应来合成吲哚异羟肟酸。用于制备异羟肟酸衍生物的一般合成反应图阐述于反应图51且通过关于化合物677(R＝R1＝H)和化合物692合成的阐述来例示。
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N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-甲烷异羟肟酸(677)的合成
向甲基N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(64mg，0.2mml)存于甲醇(2ml)的经搅拌溶液中添加羟基胺盐酸盐(56mg，0.8mmol)，继而添加5M KOH存于甲醇(0.2ml)中的混合物。将反应混合物在室温下搅拌48小时。过滤出沉淀并在低压下移除溶剂。使残留物在乙酸乙酯与1N HCl之间分配，有机层用水洗涤、经干燥(MgSO4)且在低压下浓缩。自DCM结晶，提供677(25mg)。通过硅胶柱对母液进行色谱分离，使用甲醇存于DCM中的1-4％梯度洗脱以再提供10mg 677(总产量55％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.13(s，3H)，1.15(s，3H)，2.82(m，1H)，3.38(s，2H)，5.31(s，2H)，6.96-7.59(m，9H)，8.76(s，1H)，10.61(s，1H)。
3-(四氢吡喃基氧基氨基甲酰基甲基)-6-(3-氨基-5-硝基苯基)-N-1-((5-Cl-苯并噻吩-3-基)甲基)吲哚(690)和6-(3-氨基-5-硝基苯基)-N-1-((5-Cl-苯并噻吩-3-基)甲基))吲哚-3-甲烷异羟肟酸(692)的合成
将6-(3-氨基-5-硝基苯基)-N-1-((5-Cl-苯并噻吩-3-基)甲基)吲哚-3-乙酸(98.mg，0.2mmol)溶于DMF(4ml)中且向此溶液中添加HOBt水合物(33mg，0.24mmol)、TEA(34μL，0.24mmol)和O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺(28mg，0.24mmol)。在冰浴中冷却所述混合物且添加EDAC(46mg，0.24mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，随后用乙酸乙酯稀释并用水萃取。有机层用水洗涤、经干燥(MgSO4)且在低压下浓缩。通过硅胶柱实施色谱分离，使用乙酸乙酯存于己烷中的25-50％梯度洗脱，提供690(56mg，47％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.21(m，2H)，1.47(m，2H)，1.60(m，2H)，3.44(m，3H)，3.90(m，1H)，4.79(s，1H)，5.71(s，2H)，5.82(s，2H)，7.23-8.02(m，11H)，11.19(s，1H)。
将化合物690(50mg，0.08mmol)溶于存于二氧杂环己烷(4ml)和甲醇(2ml)的4NHCl中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，随后蒸发至干燥且与甲醇共蒸发两次。自甲醇结晶，提供691(35mg，81％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ3.38(s，2H)，5.71(s，2H)，7.28-8.02(m，13H)，10.59(s，1H)。
将化合物691(30mg，0.06mmol)悬浮于甲醇(4ml)中且于10％Pd-C催化剂(25mg)存在时在30psi下氢化过夜。过滤出催化剂且在低压下移除溶剂以提供692(25mg，83％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ3.42(m)，5.67(s，2H)，6.44(s，1H)，6.76(s，2H)，7.19-8.02(m，10H)，10.59(s，1H)。
反应图52
利用在活体内不能穿过细胞膜的前药来递送药物。诸如乙酰基氧基甲基(AOM)和新戊酰基氧基甲基(POM)等前药部分经历受细胞酶催化的水解解离，因此释放活性成份。
用于制备吲哚3-乙酸抑制剂的乙酰基氧基甲基(AOM)和新戊酰基氧基甲基(POM)前药的一般合成反应图阐述于反应图52中且通过关于化合物698和701合成的阐述来例示。
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乙酰基氧基甲基5-溴-α-苄基-N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(698)的合成
向5-溴-α-苄基-N-1-(对-异丙基苄基)吲哚-3-乙酸(95mg，0.2mmol)存于DMF(5ml)的溶液中添加TEA(56μL，0.4mmol)和乙酸溴甲基酯(25μL，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜且随后用乙酸乙酯稀释并用NH4Cl水溶液萃取。有机层用盐水洗涤、经干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。实施硅胶色谱柱分离，使用乙酸乙酯存于己烷中的20-30％梯度洗脱，提供698(80mg，83％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ1.10(s，3H)，1.12(s，3H)，1.84(s，3H)，2.79(m，1H)，3.13(m，1H)，3.30(m，1H)，4.26(m，1H)，5.29(s，2H)，5.58(dd，2H)，6.95-7.72(m，13H)。
新戊酰基氧基甲基6-(3-氨基-5-硝基苯基)-N-1-((5-Cl-苯并噻吩-3-基)甲基))吲哚-3-乙酸(701)的合成
向6-(3-氨基-5-硝基苯基)-N-1-((5-Cl-苯并噻吩-3-基)甲基))吲哚-3-乙酸(98mg，0.2mmol)存于DMF(5ml)的溶液中添加TEA(56μL，0.4mmol)和新戊酸氯甲酯(38μL，0.26mmol)。将反应混合物在55℃下搅拌10小时，随后用乙酸乙酯稀释并用NH4Cl水溶液萃取。有机层用水洗涤、经干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。通过硅胶柱实施色谱分离，使用乙酸乙酯存于己烷中的25-30％梯度洗脱，提供701(50mg，42％)。1HNMR(DMSO-d6)：δ0.99(s，9H)，3.83(s，2H)，5.69(s，2H)，5.73(s，2H)，5.84(s，2H)，7.22-8.02(m，11H)。
化合物670至674按照反应图19合成且化合物686至688按照反应图4合成。
化合物670：1H NMR δ2.24(s，3H)，5.88(d，1H)，7.11-8.41(m，13H)，9.04(d，1H)，12.89(宽s，1H)。
化合物672：(2种立体异构体的混合物)1H NMR(DMSO-d6+D2O)δ1.7-2.4(m，7H)，3.24(m，1H)，3.673(m，1H)，4.26(m，1H)，5.66(d，1H)，7.11-8.40(m，8H)。
化合物674：1H NMRδ1.67-1.97(m，4H)，2.20(s，3H)，2.60(m，1H)，2.84(m，1H)，3.43-3.74(m，1H)，5.61(d，1H)，7.10-8.79(m，12H)，12.79(宽s，1H)。
化合物675：1H NMRδ3.63(s，2H)，3.77(s，3H)，4.80(宽s，4H)，5.81(t，1H)，6.15(d，2H)，7.16-7.50(m，4H)。
化合物676：1H NMRδ3.65(s，2H)，4.85(宽s，4H)，5.41(s，2H)，5.79(t，1H)，6.08(s，2H)，7.15-7.54(m，9H)。
化合物678：(TEA+盐)：δ1H NMRδ0.95(t，3H)，3.61(s，2H)，5.64(s，2H)，7.22-7.99(m，9H)。
化合物679：1H NMRδ3.64(s，2H)，4.85(宽s，4H)，5.67(s，2H)，5.81(t，1H)，6.12(d，2H)，7.17-8.00(m，9H)。
化合物680：1H NMRδ3.40(s，2H)，4.74(s，4H)，4.77(s，2H)，5.67(s，2H)，5.80(t，1H)，6.11(d，2H)，7.30-8.05(m，13H)，11.22(宽s，1H)。
化合物682：1H NMRδ3.04(s，6H)，3.68(s，2H)，5.72(s，2H)，7.12-8.05(m，11H)，9.89(宽s，2H)，12.24(宽s，1H)。
化合物683：1H NMRδ1.06(s，9H)，3.40(s，2H)，4.70(宽s，4H)，5.64(s，2H)，5.77(s，1H)，6.09(s，2H)，7.16-8.02(m，8H)，10.47(宽s，1H)。
化合物684：1HNMRδ1.11(s，3H)，1.12(s，3H)，2.80(m，1H)，2.98(m，1H)，3.79(m，1H)，5.28(s，2H)，7.01-7.45(m，12H)，7.88(s，1H)，8.72(s，1H)，10.56(s，1H)。
化合物686：1H NMRδ0.83(m，2H)，0.97(m，1H)，1.10(s，3H)，1.12(s，3H)，2.72(m，1H)，2.79(m，1H)，3.04(m，1H)，3.32(m，1H)，4.13(m，1H)，5.31(s，2H)，7.01-7.46(m，12H)，7.82(s，1H)，11.74(s，1H)。
化合物688：1H NMRδ0.93-1.04(m，4H)，2.87(m，1H)，3.67(s，2H)，5.66(s，2H)，5.77(s，1H)，6.08(s，2H)，7.17-8.02(m，8H)。
化合物693：1H NMRδ3.86(s，3H)，5.85(s，2H)，7.43(m，2H)，7.63(s，1H)，8.02-8.11(m，4H)，8.74(s，1H)。
化合物694：1H NMRδ2.79(t，2H)，3.60(m，2H)，4.60(t，1H)，5.60(s，2H)，7.09-8.01(m，8H)。
化合物695：1H NMRδ1.45-1.92(m，4H)，1.97(s，3H)，2.84(m，2H)，3.25(m，1H)，3.44(m，1H)，4.80(m，1H)，5.57(s，2H)，6.30-8.02(m，9H)。
化合物699：1H NMRδ0.82(s，9H)，1.10(s，3H)，1.12(s，3H)，2.78(m，1H)，3.12(m，1H)，3.35(m，1H)，4.27(m，1H)，5.28(s，2H)，5.56(d，1H)，5.66(d，1H)，6.95-7.73(m13H)。
化合物700：1H NMRδ2.00(s，3H)，3.84(s，2H)，5.67(s，2H)，5.84(s，2H)，5.89(s，2H)，7.23-8.02(m，11H)。
反应图53
用于制备解旋酶抑制剂的一般合成反应图阐述于反应图53且通过关于化合物734合成的阐述来例示。
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(6-溴-1H-吲哚-3-基)-乙酸乙酯(2)的合成
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在氮气氛中向6-溴吲哚1(7.4g，37.8mmol)存于DCM(135mL)的经搅拌溶液添加三氟甲磺酸铜(II)(683mg，1.89mmol)且在冰浴中冷却所述混合物(内部温度5℃)。经70min添加重氮基乙酸乙酯(5.16mL，49.1mmol，d 1.085)存于DCM(50mL)的溶液中，产生氮气。将所述反应物缓慢地升温至室温并搅拌16h。所述反应物用DCM(180mL)稀释且用水(350mL)洗涤。有机相经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂20％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到褐色油状标题化合物2(5.6g，53％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.17(br s，1H)，7.37(d，1H)，7.31(d，1H)，7.13(dd，1H)，6.91(d，1H)，4.10(q，2H)，3.65(s，2H)，1.19(t，3H)。
6-溴-3-乙氧基羰基甲基-吲哚-1-甲酸叔丁基酯(3)的合成
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向吲哚2(7.9g，27.9mmol)存于THF(130mL)的经搅拌溶液中添加Boc酸酐(12.8mL，55.9mmol，d 0.95)，继而添加DMAP(5.11g，41.9mmol)。将所述反应物在室温下搅拌2h且随后蒸发THF。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂10％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到淡黄色油状标题化合物3(8.2g，77％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.29(br s，1H)，7.46(s，1H)，7.30(m，2H)，4.10(q，2H)，3.60(s，2H)，1.59(s，9H)，1.19(t，3H)。
2-(3，5-二硝基-苯基)-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷(4)的合成
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将2，4-二硝基碘苯(2.00g，6.8mmol)、双频哪醇基-二硼(2.59g，10.2mmol)、乙酸钾(2.00g，20.4mmol)、Pd(dppf)Cl2(500mg，0.6mmol)和DMF(22mL)填装到烧瓶中并将所述混合物在氮气氛中于85℃下搅拌1h。添加更多的Pd(dppf)Cl2(100mg，0.12mmol)且继续在85℃下再搅拌2h。将所述混合物冷却至rt，用EtOAc(300mL)稀释且用水(300mL)洗涤。水性相随后用另外EtOAc部分(2×100mL)萃取。合并有机相用水(2×50mL)、盐水(25mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂20％EtOAc存于庚烷中的混合物)继而自庚烷重结晶来纯化粗制物以得到白色固体状标题化合物4(685mg，34％)。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.04(t，1H)，8.83(d，2H)，1.29(s，12H)。
6-(3，5-二硝基-苯基)-3-乙氧基羰基甲基-吲哚-1-甲酸叔丁基酯(5)的合成
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用氮对吲哚3(2.0g，5.2mmol)、硼酸酯4(2.3g，7.9mmol)、磷酸三钾(3.3g，15.7mmol)和PdCl2(PPh3)2(110mg，0.16mmol)存于DMF(40mL)中的经搅拌混合物实施脱气5min且随后在85℃下加热2h。将所述反应物冷却至室温，用EtOAc(100mL)稀释并用10％(w/v)柠檬酸水溶液(150mL)洗涤。用EtOAc(3×150mL)萃取水性相。合并有机相经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂10％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到黄色固体状标题化合物5(2.0g，81％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.91(t，1H)，8.76(d，2H)，8.50(m，1H)，7.62(m，2H)，7.51(d，1H)，4.14(q，2H)，3.68(s，2H)，1.63(s，9H)，1.22(t，3H)。
[6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(6)的合成
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向Boc-吲哚5(2g，4.2mmol)存于DCM(40mL)的经搅拌溶液中添加TFA(22mL)并将所述反应物在室温下搅拌2h。随后蒸发溶剂且使残留物与庚烷和DCM的混合物共沸。随后将其悬浮于DCM(5mL)和庚烷(30mL)中且将所述混合物加热至回流。将所述混合物冷却至室温并过滤，丢弃所收集得固体。滤液经蒸发，溶于EtOAc(100mL)中且用饱和NaHCO3(100mL)洗涤。在添加NaHCO3时形成沉淀，因此，用EtOAc(5×250mL)萃取水性相直至所有沉淀都溶解。合并有机相经干燥(MgSO4)、过滤并蒸发以得到黄褐色固体状标题化合物6(1.3g，83％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.97(t，1H)，8.81(d，2H)，8.35(br s，1H)，7.79(d，1H)，7.69(d，1H)，7.45(d，1H)，7.34(d，1H)，4.20(q，2H)，3.82(s，2H)，1.29(t，3H)。
[1-(5-溴-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(8)的合成
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在0℃下向吲哚6(50mg，0.14mmol)存于DMF(2mL)的经搅拌溶液添加氢化钠(60％，存于油中，6mg，0.15mmol)存于DMF(1.5mL)中的悬浮液并将所述反应物在0℃下搅拌10min。在0℃下添加烷基溴7(41mg，0.14mmol)存于DMF(1.5mL)中的溶液并经4h将反应物升温至室温。所述反应物用EtOAc(5mL)稀释且用10％(w/v)柠檬酸水溶液(2×8mL)洗涤。随后用EtOAc(2×10mL)萃取水性相且合并有机相经干燥(MgSO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂20％EtOAc存于庚烷中的混合物)，继而与庚烷一起研磨纯化粗制物以得到黄色固体状标题化合物8(20mg，25％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.94(t，1H)，8.75(d，2H)，7.87-7.73(m，3H)，7.60(s，1H)，7.48(m，2H)，7.26(s，1H)，7.00(s，1H)，5.58(s，2H)，4.19(q，2H)，3.81(s，2H)，1.28(t，3H)。
[1-(5-溴-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-6-(3，5-二氨基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(9)的合成
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使二硝基化合物8(20mg，0.034mmol)部分溶于EtOH(10mL)中同时加热且随后冷却至室温。所述混合物随后用浓HCl(0.5mL)及10％碳载钯(5mg)处理且在氢气氛中搅拌1h 40min。所述反应物经由硅藻土过滤、用EtOH(20mL)洗涤且蒸发滤液以得到乳色固体状标题化合物9(17mg，64％)。MS m/e 535(M++1)。
[1-(5-溴-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-6-(3，5-二氨基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸(734)的合成
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在室温下向乙酯9(17mg，0.028mmol)存于EtOH(3mL)的经搅拌溶液中添加2MNaOH(112μl，0.22mmol)并将所述反应物在40℃下搅拌2h。将所述反应物冷却至室温并蒸发溶剂。将残留物溶于水(pH8)中并用EtOAc(2mL)萃取。随后用1M HCl将所述水溶液的pH调节至pH5且用EtOAc(3×2mL)萃取所述溶液。来自酸性萃取物的合并有机相经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过色谱柱分离(硅胶，洗脱剂1-10％MeOH存于DCM中的混合物)纯化粗制物以得到乳色固体状标题化合物734(3mg，21％)。1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.91(d，1H)，7.70(d，1H)，7.52(d，1H)，7.43(d，1H)，7.37(dd，1H)，7.21(dd，1H)，7.10(d，2H)，6.36(d，2H部分交换)，6.03(s，1H部分交换)，5.48(s，2H)，3.59(s，2H)。MS m/e 506，508(M++1)。
化合物709的合成
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通过按照在反应图53中所述程序实施吲哚6(200mg，0.42mmol)与3-溴苄基溴(104mg，0.42mmol)的烷基化反应来制备橙色固体状[1-(3-溴-苄基)-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(10)(43mg，19％)。MS m/e 538，540(M++1)。
用氮对芳基溴10(43mg，0.08mmol)、3-氯苯基硼酸(19mg，0.12mmol)、磷酸三钾(51mg，0.24mmol)和PdCl2(dppf)(20mg，0.03mmol)存于DMF(2mL)中的混合物实施脱气2min且随后在75℃下加热1.5h。将所述反应物冷却至室温、用EtOAc稀释(8mL)且用10％(w/v)柠檬酸水溶液(10mL)洗涤。随后用EtOAc(3×10mL)萃取水性相且合并有机相经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂10％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到黄色油状[1-(3′-氯-联苯-3-基甲基)-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(11)(35mg，77％)。MS m/e 570，572(M++1)。
随后按照在反应图53中所述程序对化合物11实施氢化和皂化来获得化合物709。1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.48-7.01(m，12H)，5.28(s，2H)，3.63(s，2H)。MS m/e 482，484(M++1)。
通过反应图53合成额外化合物：
化合物702：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.98(d，1H)，7.56-7.63(m，4H)，7.25-7.53(m，3H)，6.72(d，2H部分交换)，6.56(d，1H部分交换)，5.66(s，2H)，3.75(s，2H)。MSm/e 443(M++1)。
化合物703：1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.20(s，1H)，7.97(d，1H)，7.55-7.51(m，2H)，7.43(s，1H)，7.25(s，1H)，7.19(dd，1H)，7.12(s，1H)，6.34(s，2H部分交换)，6.02(s，1H，部分交换)，5.56(s，2H)，3.55(s，2H)。MS m/e 453(M++1)。
化合物704：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.96(d，1H)，7.77(d，1H)，7.44-7.51(m，3H)，7.36(s，1H)，7.17-7.24(m，3H)，6.30(d，2H部分交换)，6.02(s，1H部分交换)，5.45(s，2H)，3.67(s，2H)，2.56(s，3H)。MS m/e 437(M++1)。
化合物705：1H NMR(DMSO，360MHz)δ8.06(dd，1H)，7.75-7.68(m，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.47(s，1H)，7.32-7.20(m，2H)，6.76(s，2H部分交换)，6.42(s，1H部分交换)，5.70(s，2H)，3.67(s，2H)。MS m/e 446(M++1)。
化合物706：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.93(m，2H)，7.66(s，1H)，7.59(d，1H)，7.45-7.41(m，2H)，7.32-7.26(m，3H)，6.88(s，2H部分交换)，6.53(s，1H部分交换)，5.52(s，2H)，3.72(s，2H)，2.10(s，3H)。MS m/e 453(M++1)。
化合物707：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.65(d，1H)，7.50-7.45(m，3H)，7.21(d，1H)，7.14(d，1H)，6.89(s，1H)，6.38(s，2H部分交换)，6.08(s，1H部分交换)5.37(s，2H)，3.57(s，2H)，2.46(s，3H)。MS m/e 476，478(M++1)。
化合物708：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.74(d，1H)，7.52(s，1H)，7.46-7.38(m，2H)，7.37(s，1H)，7.05(dd，1H)，6.67(d，1H)，5.54(s，2H)，3.84(s，2H)。MS m/e 445(M++1)。
化合物710：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.72-7.69(m，2H)，7.62-7.55(m，2H)，7.30-7.21(m，3H)，7.15(s，1H)，6.45(s，2H部分交换)，6.13(s，1H部分交换)，5.63(s，2H)，3.69(s，2H)。MS m/e 462，464(M++1)。
化合物791：1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.85(br s，1H)，8.05-7.78(br m，4H)，7.62-7.53(br m，3H)，7.39-7.30(br m，2H)，5.69(br s，2H)，4.08(q，2H)，3.75(br s，2H)，2.88(br s，3H)，1.17(t，3H)。MS m/e 465(M++1).
化合物792：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.95(t，1H)，8.76(d，2H)，7.87-7.77(m，2H)，7.59(s，1H)，7.47(dd，1H)，7.37-7.23(m，2H)，7.22-7.08(m，2H)，5.57(s，2H)，4.20(q，2H)，3.81(s，2H)，1.28(t，3H)。
化合物793：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.94(t，1H)，8.75(d，2H)，7.83-7.68(m，3H)，7.48-7.38(m，2H)，7.35-7.25(m，1H)，7.02(d，1H)，5.87(s，2H)，4.21(q，2H)，3.83(s，2H)，1.30(t，3H)。MS m/e 551(M++1)。
化合物794：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.62-7.55(m，2H)，7.41(s，1H)，7.27(d，1H)，7.19(1H，obs)，7.17-7.12(m，1H)，6.81(d，1H)，6.31-6.28(m，2H)，5.94-5.91(m，1H)，5.74(s，2H)，4.11(q，2H)，3.72(s，2H)，3.53(br s，4H)，1.20(t，3H)。MS m/e 491，493(M++1)。
反应图54
用于制备解旋酶抑制剂的另一一般途径阐述于反应图54中且通过关于化合物735合成的阐述来例示。
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(1-苯并噻唑-2-基甲基-6-溴-1H-吲哚-3-基)-乙酸乙酯(12)的合成
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在0℃下向氢化钠(60％，存于油中，28mg，0.70mmol)存于DMF(3mL)的悬浮液中经5min逐滴添加吲哚2(180mg，0.64mmol)存于DMF(1mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌5min且随后添加2-(溴甲基)-1，3-苯并噻唑(160mg，0.70mmol)存于DMF(1mL)中的混合物并将所述反应物在0℃下搅拌10min。将反应混合物倾注于饱和NaHCO3中并用EtOAc(4×10mL)萃取。合并有机相用水(2×5mL)和盐水(5mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂25％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到褐色油状吲哚化合物12(130mg，48％)。MSm/e 429，431(M++1)。
([1-苯并噻唑-2-基甲基-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(13)的合成
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用氮对吲哚12(58mg，0.14mmol)、硼酸酯4(59mg，0.20mmol)、磷酸三钾(85mg，0.40mmol)和PdCl2(PPh3)2(30mg，0.04mmol)存于DMF(2mL)中的混合物实施脱气5min且随后在85℃下加热1h。将所述反应物冷却至室温、用EtOAc(15mL)稀释且用10％(w/v)柠檬酸水溶液(2×5mL)洗涤。随后用EtOAc(3×10mL)萃取合并水性相。合并有机相用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂17-25％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到褐色固体状二硝基化合物13(28mg，52％)。MS m/e 517(M++1)。
([1-苯并噻唑-2-基甲基-6-(3，5-二氨基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(14)的合成
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将二硝基化合物13(33mg，0.072mmol)溶于EtOH(8mL)中同时加热且随后冷却至室温。随后用10％碳载钯(7mg)和浓HCl(8滴)处理所述混合物且在氢气氛中搅拌2h。所述溶液经由硅藻土过滤、用EtOH(25mL)洗涤且将滤液蒸发成油状残留物。将残留物溶于EtOAc(15mL)中且用饱和NaHCO3(15mL)洗涤。水性相随后用另外EtOAc部分(3×10mL)萃取且合并有机相用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂17-25％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到褐色油状酯14(12mg，42％)。MS m/e 457(M++1)。
[1-苯并噻唑-2-基甲基-6-(3，5-二氨基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸(735)的合成
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向酯14(12mg，0.42mmol)存于EtOH(3mL)的经搅拌溶液中添加2M NaOH(0.5mL，1mmol)且将所述溶液在55℃下搅拌4h。蒸发EtOH，残留物用水(5mL)稀释，用1M HCl和固体NaHCO3调节至pH5并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并有机相用盐水(5mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂5％MeOH存于DCM中的混合物)来纯化粗制物以得到灰白色固体状标题化合物735(1.7mg，11％)。1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.05(d，1H)，7.93(d，1H)，7.68(d，1H)，7.64(s，1H)，7.57(t，1H)，7.48-7.40(m，3H)，6.52(d，1H部分交换)，6.21(s，2H部分交换)，5.91(s，2H)，3.84(s，2H)。MS m/e 429(M++1)。
通过反应图54合成额外化合物：
化合物711：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ9.15(s，1H)，8.91(d，2H)，8.08(d，1H)，7.94(d，1H)，7.74(d，1H)，7.44-7.73(m，9H)，7.28(s，1H)，5.74(s，2H)，4.31(q，2H)，3.89(s，2H)，1.39(t，3H)。
化合物712：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.94(d，1H)，7.24-7.68(m，14H)，7.02(s，1H)，5.60(s，2H)，4.07(q，2H)，3.68(s，2H)，1.15(t，3H)。MS m/e 532(M++1)。
化合物713：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.78(d，1H)，7.16-7.76(m，11H)，6.84(s，1H)，6.32(s，2H部分交换)，6.08(s，1H部分交换)，5.34(s，2H)，3.52(s，2H)。MS m/e 504(M++1)。
化合物714：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.90(s，1H)，8.65(d，2H)，7.83(d，1H)，7.68(d，1H)，7.54(d，1H)，7.37-7.26(m，8H)，7.00(s，1H)，5.45(s，2H)，4.06(q，2H)，3.63(s，2H)，1.14(t，3H)。
化合物715：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.93(d，1H)，7.72(d，1H)，7.56(d，1H)，7.28-7.48(m，8H)，6.95(s，1H)，6.43(s，2H，部分交换)，6.19(s，1H部分交换)，5.57(s，2H)，3.63(s，2H)。MS m/e 538，540(M++1)。
化合物716：1H NMR(DMSO，250MHz)δ8.11(s，1H)，8.02(s，1H)，7.86(d，1H)，7.69(t，2H)，7.52(m，1H)，7.44(s，1H)，7.34-7.21(m，5H)，6.81(s，2H部分交换)，6.45(s，4H，部分交换)，6.15(s，2H部分交换)，5.96(s，2H部分交换)，5.61(s，2H)，3.71(s，2H)，3.67(s，2H)[5，6-和4，5-同分异构体的1∶1混合物].MS m/e 496(M++1)。
化合物717：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.95(s，1H)，8.77(d，2H)，7.91-7.80(m，2H)，7.58(s，1H)，7.50(m，2H)，7.28(m，2H)，7.11(s，1H)，5.61(s，2H)，4.20(q，2H)，3.81(s，2H)，1.28(t，3H)。MS m/e 560(M++1)。
化合物718：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.96(d，1H)，7.70(m，2H)，7.61(s，1H)，7.45-7.26(m，6H)，7.12(s，1H)，5.70(s，2H)，4.14(q，2H)，3.80(s，2H)，1.20(t，3H)。MSm/e 540(M++1)。
化合物719：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.85(d，1H)，7.57(s，1H)，7.49(d，1H)，7.44(s，1H)，7.23-7.14(m，4H)，6.36(s，2H部分交换)，6.10(s，1H部分交换)，5.51(s，2H)，3.64(s，2H)。MS m/e 512(M++1)。
化合物720：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.97(s，1H)，8.79(d，2H)，7.77(m，2H)，7.67(s，1H)，7.46(m，2H)，7.29(m，1H)，6.96(s，1H)，5.45(s，2H)，4.14(q，2H)，3.72(s，2H)，3.00(q，2H)，1.34(t，3H)，1.22(t，3H)。
化合物721：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.78(d，1H)，7.63(s，1H)，7.56(m，2H)，7.31(dd，1H)，7.25(dd，1H)，6.95(s，1H)，6.50(s，2H部分交换)，6.17(s，1H部分交换)5.48(s，2H)，3.66(s，2H)，3.00(q，2H)，1.26(t，3H)。MS m/e 490，492(M++1)。
化合物722：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.63(d，1H)，7.57(s，1H)，7.46(s，1H)，7.36(dd，1H)，7.25(s，1H)，7.20(s，1H)，6.94(s，1H)，6.51(s，2H部分交换)6.20(s，1H部分交换)，5.56(s，2H)，4.01(s，3H)，3.78(s，2H)。MS m/e 492，494(M++1)。
化合物723：1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.27(d，1H)，7.81(m，3H)，7.53(m，3H)，6.69(s，2H部分交换)，6.39(s，1H部分交换)，5.82(s，2H)，3.98(s，2H)。MS m/e 480(M++1)。
化合物724：1H NMR(DMSO，360MHz)δ7.60(d，1H)，7.49(m，2H)，7.41(d，1H)，7.24(s，2H)，7.13(s，1H)，6.35(s，2H)，6.05(s，1H)，5.53(s，2H)，3.63(s，2H)。MS m/e 496(M++1)。
化合物725：1H NMR(DMSO，360MHz)δ7.95(d，1H)，7.70(s，1H)，7.63(s，1H)，7.59-7.52(m，2H)，7.50(m，1H)，7.43(s，1H)，7.25(dd，1H)，6.16(s，2H)，5.86(s，1H)，5.75(s，2H)，3.70(s，2H)。MS m/e 462(M++1)。
化合物726：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.61(m，2H)，7.55(dd，1H)，7.38-7.32(m，3H)，7.29(s，1H)，6.52(s，2H部分交换)，6.22(s，2H，部分交换)，5.63(s，2H)，3.79(s，2H)。MS m/e 480，482(M++1)。
化合物727：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.92(s，1H)，7.83(d，1H)，7.72-7.59(m，5H)，7.49(s，1H)，7.45(d，1H)，7.40-7.34(m，4H)，7.32-7.21(m，3H)，6.85(s，2H部分交换)，6.84(s，2H部分交换)，6.69(s，1H部分交换)，6.36(s，1H，部分交换)，5.93(s，2H)，5.57(s，2H)，3.81(s，2H)，3.77(s，2H)[4-和6-同分异构体的1∶1混合物].MS m/e 462，464(M++1)。
化合物728：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.78(d，1H)，7.56(d，1H)，7.46(m，2H)，7.19(dd，2H)，7.07(d，2H)，6.50(s，2H部分交换)，6.07(s，1H部分交换)，5.42(s，2H)，3.62(s，2H)。MS m/e 462，464(M++1)。
化合物775：1H NMR(CDCl3，360MHz)5，6-同分异构体：δ7.87(s，1H)，7.59(d，1H)，7.46-7.42(m，2H)，7.19(m，2H)，7.03(s，1H)，5.31(s，2H)，4.09(m，2H)3.65(s，2H)，1.19(t，3H)。4，5-同分异构体：δ7.65(s，1H)，7.39-7.35(m，2H)，7.19(m，1H)，7.07(s，1H)，6.99(s，1H)，6.45(s，1H)，5.74(s，2H)，4.09(m，2H)，3.68(s，1H)，1.19(t，3H)[5，6-与4，5-同分异构体的3∶2混合物].MS m/e 497，499(M++1)。
化合物776：1H NMR(DMSO，250MHz)5，6-同分异构体：δ8.39(s，1H)，8.18(s，1H)，7.63-7.16(m，5H)，6.09-5.79(m，3H)，5.67(s，2H)，3.64(s，2H)。4，5-同分异构体：δ8.03(d，1H)，7.63-7.16(m，5H)，6.87(s，1H)，6.09-5.91(m，3H)，5.77(s，2H)，3.66(s，2H)。[5，6-与4，5-同分异构体的2∶1混合物].MS m/e 496(M++1)。
化合物777：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.67(d，1H)，7.58(s，1H)，7.44(d，1H)，7.38(s，1H)，7.21-7.16(m，2H)，6.79(s，1H)，5.29(s，2H)，3.59(s，2H)，2.50(s，3H)。
化合物778：1H NMR(MeOH，360MHz)δ7.65(d，1H)，7.50-7.45(m，3H)，7.21(d，1H)，7.14(d，1H)，6.89(s，1H)，6.38(s，2H部分交换)，6.08(s，1H部分交换)5.37(s，2H)，3.57(s，2H)，2.46(s，3H)。MS m/e 476，478(M++1)。
化合物779：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.43-7.35(m，4H)，7.17(m，1H)，7.02(s，1H)，6.97(s，1H)，5.33(s，2H)，4.06(q，2H)，3.63(s，2H)，1.16(t，3H)。MS m/e 498-500(M++2).
化合物780：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.50(d，1H)，7.43(s，1H)，7.37-7.33(m，2H)，7.22(s，1H)，7.05(s，1H)，7.00(d，1H)，5.40(s，2H)，3.48(s，2H)。MS m/e 467，469(M++1)。
化合物782：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.65(d，1H)，7.61(d，1H)，7.47(d，1H)，7.41-7.31(m，3H)，7.21(s，1H)，7.18(dd，1H)，5.55(s，2H)，3.70(s，2H)。MS m/e 434，436，438(M++1)。
化合物783：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.63(s，1H)，7.54-7.42(m，3H)，7.34(dd，1H)，7.28(s，1H)，7.21(dd，1H)，5.57(s，2H)，3.76(s，2H)。m/e 453，455(M++1)。
化合物784：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.73(d，1H)，7.41(m，2H)，7.33(d，1H)，7.20(dd，1H)，7.09(d，1H)，7.06(s，1H)，5.75(s，2H)，3.63(s，2H)。MS m/e 434，436(M+)。
化合物785：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.80(s，1H)，7.54(d，1H)，7.50(s，1H)，7.38(m，1H)，7.20(dd，1H)，7.16(s，1H)，7.11(s，1H)，7.07(d，1H)，5.42(s，2H)，3.61(s，2H)。MS m/e 434，436，(M+)。
化合物786：1H NMR(DMSO，360MHz)δ12.3(bs，1H)，8.29(s，1H)，7.85(s，1H)，7.68(s，1H)，7.58(d，1H)，7.34(s，1H)，7.24(d，1H)，6.90(s，1H)，5.92(s，2H)，3.71(s，2H)。
化合物787：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.23(d，1H)，7.64(d，1H)，7.56(d，1H)，7.49(s，1H)，7.29-7.18(m，2H)，6.84(s，1H)，6.09(d，2H)，5.89(s，2H)，5.78(s，1H)，4.75(br s，1H)，3.66(s，2H)。MS m/e 496，498(M++1)。
化合物788：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.93(d，1H)，7.62-7.59(m，2H)，7.38-7.30(m，2H)，7.00(s，1H)，6.48(s，2H部分交换)，6.18(s，1H部分交换)5.50(s，2H)，3.64(s，2H)，2.60(s，3H)。MS m/e 494，496(M++1)。
化合物789：1H NMR(MeOD含有CDCl3，360MHz)δ7.90(s，1H)，7.68(d，1H)，7.52(s，1H)，7.31-7.29(m，2H)，7.26(m，1H)，7.15(s，1H)，6.94(s，1H)，5.39(s，2H)，3.24(s，2H)。MS m/e 381，383(M++1)。
化合物790：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.92(d，1H)，7.71(d，1H)，7.65-7.62(m，2H)，7.41-7.33(m，2H)，7.24(dd，1H)，7.13(s，1H)，5.62(s，2H)，3.83(s，2H)，2.71(s，3H)。MS m/e 370，372(M++1)。
反应图55
用于制备解旋酶抑制剂的另一一般途径阐述于反应图55中且通过关于化合物736合成的阐述来列示。
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[6-溴-1-(5-氯-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(41)的合成
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在-5℃下向吲哚2(1.0g，3.5mmol)存于DMF(35mL)的经搅拌溶液中经3分钟逐份添加氢化钠(60％，存于油中，156mg，3.9mmol)。随后经10min逐滴添加3-溴甲基-5-氯苯并噻吩(926mg，3.5mmol)存于DMF(15mL)中的溶液并将所述反应物在-5℃至5℃下搅拌1h 30min。所述反应物用水(30mL)稀释且随后用10％(w/v)柠檬酸水溶液制成酸性。用EtOAc(2×50mL)萃取水性溶液且合并有机相用盐水(100mL)洗涤、经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂10％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到褐色油状标题化合物41(1.07g，65％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.80(d，1H)，7.66(d，1H)，7.52(d，1H)，7.47(d，1H)，7.36(dd，1H)，7.26(dd，1H)，7.09(s，1H)，7.00(s，1H)，5.41(d，2H)，4.17(q，2H)，3.74(d，2H)，1.25(t，3H)。
[1-(5-氯-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-6-(4-氟-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(42)的合成
用氮对吲哚41(73mg，0.16mmol)、4-氟苯基硼酸(34mg，0.24mmol)、碳酸铯(166mg，0.49mmol)和Tetrakis Pd(PPh3)4(19mg，0.016mol)存于EtOH(1mL)和甲苯(2mL)中的经搅拌混合物实施脱气1min且随后在80℃下加热1h 30min。将所述反应物冷却至室温且经由硅藻土过滤，用EtOAc(20mL)洗涤。滤液经蒸发且通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂30％庚烷存于DCM中的混合物)来纯化粗制物以得到白色固体状标题化合物42(29mg，37％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.79(d，1H)，7.73-7.70(m，2H)，7.59-7.53(m，2H)，7.44(d，1H)，7.39-7.34(m，2H)，7.15-7.08(m，3H)，7.03(s，1H)，5.49(d，2H)，4.19(q，2H)，3.80(s，2H)，1.28(t，3H)。
1-[1-(5-氯-苯并[b]噻吩-3-基甲基)-6-(4-氟-苯基)-1H-吲哚-3-基]-丙-2-酮(745)的合成
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在室温下向乙酯42(29mg，0.061mmol)存于EtOH(7mL)的经搅拌溶液中添加2M NaOH(152μl，0.30mmol)并将所述反应物在50℃下搅拌2h。将所述反应物冷却至室温且蒸发溶剂。将残留物悬浮于水(3mL)中且用1M HCl酸化至pH1。所述混合物随后经过滤且在真空中干燥固体以得到淡黄色固体状目标化合物745(22mg，81％)。1HNMR(MeOD，360MHz)δ7.88(d，2H)，7.71-7.62(m，4H)，7.39-7.33(m，3H)，7.29(s，1H)，7.15(t，2H)，5.63(s，2H)，3.77(s，2H)。MS m/e 450，452(M++1)。
通过反应图55合成额外化合物：
化合物746：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.86-7.81(m，2H)，7.68-7.62(m，2H)，7.40-7.27(m，5H)，7.21-7.14(m，2H)，6.86(dd，1H)，5.58(s，2H)，3.84(s，3H)，3.78(s，2H)。MS m/e 484，486(M++1)。
化合物747：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.68(d，1H)，7.63(t，2H)，7.58(s，1H)，7.40-7.18(m，4H)，7.06(s，1H)，6.98-6.88(m，3H)，5.37(d，2H)，3.75(s，2H)，3.67(s，3H)。MS m/e 484，486(M++1)。
化合物748：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.70(d，1H)，7.64(d，1H)，7.60(d，1H)，7.45(dd，2H)，7.37(s，1H)，7.33-7.26(m，2H)，7.06(s，1H)，6.96(s，1H)，6.88(d，2H)，5.42(d，2H)，3.78(s，5H).MS m/e 484，486(M++1)。
化合物749：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.70(m，2H)，7.54-7.48(m，4H)，7.28-7.13(m，7H)，5.45(s，2H)，3.64(s，2H)。MS m/e 432，434(M++1)。
化合物750：1H NMR(DMSO，360MHz)δ8.03(d，1H)，7.95(d，1H)，7.68(s，1H)，7.56(m，2H)，7.45(s，1H)，7.40(dd，1H)，7.28-7.23(m，4H)，7.00(dd，1H)，5.67(s，2H)，3.67(s，2H)，2.21(s，3H)。MS m/e 446，448(M++1)。
化合物751：1H NMR(DMSO，360MHz)δ8.04(d，2H)，7.87(d，1H)，7.61-7.57(m，4H)，7.42(m，2H)，7.34(dd，1H)，7.72(d，2H)，5.74(s，2H)，3.68(s，2H)，2.35(s，3H)。MS m/e 446，448(M++1)。
化合物752：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.72-7.59(m，3H)，7.41(s，1H)，7.36-7.23(m，5H)，7.06(s，2H)，6.94(s，1H)，5.42(s，2H)，3.76(s，2H)，2.33(s，3H)。MS m/e 446，448(M++1)。
化合物753：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.85(m，2H)，7.69-7.60(m，5H)，7.42-7.30(m，5H)，5.62(s，2H)，3.79(s，2H)。MS m/e 466，468(M++1)。
化合物754：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.89(m，2H)，7.70-7.56(m，5H)，7.42-7.25(m，5H)，5.65(s，2H)，3.80(s，2H)。MS m/e 466，468(M++1)。
化合物755：1H NMR(DMSO，250MHz)δ8.03(m，2H)，7.93(dd，1H)，7.87(d，1H)，7.78(dt，1H)，7.64(m，3H)，7.55(m，2H)，7.41(dd，1H)，7.26(dd，1H)，5.71(s，2H)，3.69(s，2H)。MS m/e 457，459(M++1)。
化合物756：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.86(m，1H)，7.81(m，2H)，7.72(m，2H)，7.59(m，1H)，7.50(m，2H)，7.37(dt，2H)，7.20(s，1H)，7.02(s，1H)，5.52(s，2H)，3.85(s，2H)。MS m/e 457，459(M++1)。
化合物757：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.80(d，1H)，7.75-7.69(m，6H)，7.51(m，1H)，7.41(dd 1H)，7.37(dd，1H)，7.21(s，1H)，7.04(s，1H)，5.53(s，2H)，3.86(s，2H)。MSm/e 457，459(M++1)。
化合物758：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.87(m，2H)，7.69(d，1H)，7.64(s，1H)，7.51(td，1H)，7.39-7.31(m，5H)，7.26-7.15(m，2H)，5.65(s，2H)，3.81(s，2H)。MS m/e450，452(M++1)。
化合物759：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.84(m，2H)，7.67(d，2H)，7.46-7.33(m，6H)，7.30(s，1H)，7.01(t，1H)，5.62(s，2H)，3.78(s，2H)。MS m/e 450，452(M++1)。
化合物760：1H NMR(MeOD，250MHz)δ7.73(d，1H)，7.67(d，1H)，7.52(d，1H)，7.44(d，1H)，7.32(d，1H)，7.25-7.16(m，6H)，7.98(dd，1H)，5.47(s，2H)，4.40(s，2H)，3.67(s，2H)。MS m/e 462，464(M++1)。
化合物761：1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.11(m，2H)，7.99(d，1H)，7.92(m，3H)，7.74(t，1H)，7.65-7.56(m，5H)，5.90(s，2H)，4.01(s，2H)，3.37(s，3H)，3.28(s，3H)。MSm/e 503，505(M++1)。
化合物762：1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.89(dd，1H)，7.83-7.62(m，4H)，7.55-7.31(m，5H)，7.20(dd，1H)，7.11(d，2H)，5.47(s，2H)，5.31(s，1H)，3.82(s，2H)。MSm/e475，477(M++1)。
化合物763：1H NMR(MeOD，250MHz)δ8.15(d，1H)，7.86-7.70(m，6H)，7.48(t，1H)，7.42-7.21(m，4H)，5.62(s，2H)，3.61(s，2H)。MS m/e 475，477(M++1)。
化合物764：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.50(br s，2H)，7.90-7.83(m，3H)，7.79-7.70(m，3H)，7.50(d，1H)，7.35(br s，3H)，5.68(s，2H)，3.73(s，2H)。MS m/e 433，435(M++1).
化合物765：1H NMR(DMSO，360MHz)δ12.25(br s，1H)，8.02(m，2H)，7.75(s，1H)，7.56(m，2H)，7.42(m，2H)，7.26(dd，1H)，7.07(t，1H)，6.87(t，1H)，6.81(d，1H)，6.52(dd，1H)，5.71(s，2H)，1.47(br s，2H)，3.66(s，2H)。MS m/e 447，449(M++1)。
化合物766：1H NMR(DMSO，360MHz)δ12.29(br s，1H)，10.12(s，1H)，8.03(m，2H)，7.84(d，2H)，7.66-7.61(m，3H)，7.45(s，1H)，7.41(dd，1H)，7.34(d，2H)，7.28(dd，1H)，5.72(s，2H)，3.67(s，2H)，2.66(s，3H)。MS m/e 489，491(M++1)。
化合物767：1H NMR(DMSO，250MHz)δ12.24(br s，1H)，8.59(s，1H)，8.03(d，2H)，7.82(s，1H)，7.64-7.56(m，3H)，7.44-7.38(m，3H)，7.31-7.19(m，3H)，5.87(s，2H)，5.72(s，2H)，3.67(s，2H)。MS m/e 490，492(M++1)。
化合物768：1H NMR(DMSO，360MHz)δ12.26(br s，1H)，9.09(m，1H)，8.04(m，2H)，7.61-7.41(m，6H)，7.34-7.24(m，3H)，7.07(d，1H)，5.67(s，2H)，3.68(s，2H)，1.76(s，3H)。MS m/e 489，491(M++1)。
化合物769：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ9.07(s，1H)，8.06-7.99(m，2H)，7.96(dd，1H)，7.65(s，1H)，7.63-7.58(m，2H)，7.48-7.36(m，3H)，7.27-7.14(m，2H)，7.06-6.98(m，2H)，6.02(s，2H)，5.67(s，2H)，3.68(s，2H)。MS m/e 490，492(M++1)。
化合物770：1H NMR(MeOD含有CDCl3，360MHz)δ7.70(d，2H)，7.62-7.54(m，5H)，7.39-7.33(m，2H)，7.24(d，1H)，7.20(d，1H)，6.95(s，1H)，5.34(s，2H)，3.66(s，2H)，2.54(s，3H)。MS m/e 446，448(M++1)。
反应图56
用于制备解旋酶抑制剂的另一一般途径阐述于反应图56且通过关于化合物736合成的阐述来例示。
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2-溴-4-氯-苯硫醇(16)的合成
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用浓HCl(40mL)处理2-溴-4-氯苯胺15(28.0g，136mmol)存于水(90mL)中的悬浮液且将所述混合物在冰中冷却。经45min逐滴添加亚硝酸钠(10.3g，150mmol)存于水(30mL)中的溶液。在75℃下将所得重氮盐溶液经1h分若干份添加至乙基黄原酸钾(38.0g，236mmol)存于水(100mL)的经搅拌溶液中。在此温度下继续搅拌直至不再产生氮(约1h)。将反应混合物冷却且用DCM(3×100mL)萃取粗制黄原酸酯。合并有机相经蒸发、溶于EtOH(120mL)中且添加氢氧化钾(40g，714mmol)存于水(40mL)中的溶液。将所述溶液回流过夜，蒸发EtOH且用DCM(3×100mL)萃取所述混合物。合并有机层经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到黄色油状苯硫酚化合物16(25.2g，83％)。MS m/e 221 223 225(M--1)(阴离子电子喷雾)。
1-(2-溴-4-氯-苯基硫基)-丙-2-酮(17)的合成
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向NaOH(4.6g，114mmol)存于水(250mL)的经搅拌溶液中添加苯硫酚16(25.0g，112mmol)。随后添加氯丙酮(10.5g，114mmol)且将所得浑浊溶液搅拌3.5h，随后用DCM(3×100mL)萃取。合并有机相用盐水(50mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂16-33％TBME存于庚烷中的混合物)纯化粗制物以得到黄色油状硫醚化合物17(14.5g，46％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.56(d，1H)，7.25-7.18(m，2H)，3.70(s，2H)，2.32(s，3H)。
7-溴-5-氯-3-甲基-苯并[b]噻吩(18)的合成
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将硫醚17(5.0g，19mmol)存于氯苯(125mL)中的溶液添加至聚磷酸(PPA，18.0g)中并将所述混合物在80℃下搅拌48h。将所述混合物冷却且随后倾注于水(400mL)中。所述混合物用固体碳酸钠碱化且用DCM(3×100mL)萃取。合并有机相用盐水(50mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂100％庚烷)纯化粗制物以得到白色固体状溴化物化合物18(2.3g，64％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.45(s，1H)，7.32(s，1H)，6.98(s，1H)，2.2(s，3H)。
N-(5-氯-3-甲基-苯并[b]噻吩-7-基)-N-甲基-甲酰胺(19)的合成
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将溴化物18(1.0g，5.5mmol)、N-甲基甲酰胺(390mg，6.6mmol)、碳酸铯(2.7g，8.2mmol)、Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)和Xantphos(95mg，0.16mmol)填装至烧瓶中。添加二氧杂环己烷(30mL)并用氮对所述混合物进行短暂地脱气，然后在氮气氛中回流16h。将所述混合物冷却至室温、用DCM(100mL)稀释且用水(2×5mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂20％EtOAc存于庚烷中的混合物)纯化粗制物以得到白色固体状甲基苯并噻吩化合物19(580mg，44％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.35(s，1H)，7.60(s，1H)，7.14(s，1H)，7.10(s，1H)，3.33(s，3H)，2.37(s，3H)。
N-(3-溴甲基-5-氯-苯并[b]噻吩-7-基)-N-甲基-甲酰胺(20)的合成
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向甲基苯并噻吩19(640mg，2.7mmol)存于四氯化碳(10mL)的经搅拌溶液中添加N-溴琥珀酰亚胺(472mg，2.7mmol)和过氧化苯甲酰(70％，存于水中，20mg，0.083mmol)并将所述混合物在85℃下于氮气氛中搅拌4h。添加更多的N-溴琥珀酰亚胺(80mg，0.45mmol)和过氧化苯甲酰(20mg，0.083mmol)并再继续加热1h。在冷却后，蒸发溶剂并通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂25-33％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到白色固体状溴化物化合物20(695mg，82％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.36(s，1H)，7.81(s，1H)，7.52(s，1H)，7.12(s，1H)，4.65(s，2H)，3.33(s，3H)。
[1-[5-氯-7-(甲酰基-甲基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(21)的合成
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通过按照在反应图54中所述程序实施吲哚6与溴化物20的烷基化反应继而实施铃木偶合反应(Suzuki coupling)来制备甲酰胺化合物21。MS m/e 607(M++1)。
[1-[5-氯-7-(甲基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(22)的合成
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向甲酰胺21(200mg，0.33mmol)存于DCM(4mL)和EtOH(4mL)的经搅拌溶液中添加HCl(2mL)并将所述橙色溶液搅拌60h。随后蒸发溶剂且用EtOAc(15mL)和饱和NaHCO3(5mL)萃取残留物。用EtOAc(3×15mL)萃取水性相且合并有机相经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到橙色油状二硝基化合物22(200mg，定量产量)。MS m/e579，581(M++1)。
[1-[5-氯-7-(甲基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二氨基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸(736)的合成
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将二硝基化合物22(60mg，0.103mmol)悬浮于EtOH(8mL)和EtOAc(4mL)中同时加热并冷却至室温。随后用10％碳载钯(10mg)和浓HCl(4滴)处理所述混合物且在氢气氛中搅拌2h。所述溶液经由硅藻土过滤、用EtOH(25mL)洗涤且蒸发滤液。向粗制残留物存于EtOH(6mL)和水(1mL)的溶液中添加4M NaOH(1mL，4mmol)并将所述反应物在55℃下搅拌2h。蒸发EtOH且残留物用水(5mL)稀释，用1M HCl和固体NaHCO3调节至pH5并用EtOAc(3×10mL)萃取。合并有机相用盐水(5mL)洗涤、经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。将所述固体悬浮于含有几滴MeOH的CHCl3(5mL)中。小心地倾倒出液体且在真空中干燥残留固体以得到白色固体状化合物736(20mg，40％)。1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.50(d，1H)，7.40(s，1H)，7.20(d，1H)，7.08(d，1H)，6.95(s，1H)，6.36(m，H部分交换)，6.02(s，H部分交换)，5.41(s，2H)，3.59(s，2H)，2.80(s，3H)。MS m/e 491，493(M++1)。
化合物730的合成
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将胺22(40mg，0.07mmol)溶于DCM(2mL)和吡啶(1mL)的混合物中并添加![]()
分子筛。添加过量甲烷磺酰氯(100-200μl)并将所述混合物在室温下搅拌60h。所述混合物用DCM(20mL)稀释且过滤以移除分子筛。随后蒸发溶剂并通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂25％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到黄色固体状[1-[5-氯-7-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(23)(32mg，70％)。MS m/e 679(M++23)。
随后通过依据在反应图53中所述程序对23实施氢化和皂化以获得化合物730。通过HPLC实施纯化。1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.83(s，1H)，7.65(d，1H)，7.55(2xs，2H)，7.35-7.30(m，3H)，6.91(s，2H部分交换)，6.57(s，1H部分交换)，5.66(s，2H)，3.78(s，2H)，3.32(s，3H)，3.09(s，3H)。MS m/e 569，571(M++1)。
化合物731的合成
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依据在反应图56中所述程序使用N-乙基甲酰胺自18合成[1-[5-氯-7-(乙基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(24)。MS m/e 593(M++1)。随后通过依据在反应图54中所述程序对24实施氢化和皂化来获得目标化合物731。1H NMR(MeOD含有CDCl3，360MHz)δ7.5l(d，1H)，7.40(s，1H)，7.23(d，1H)，7.10(s，1H)，7.06(s，1H)，6.92(s，1H)，6.44(s，2H部分交换)，6.35(s，1H部分交换)，6.03(s，1H部分交换)5.41(2H)，3.65(s，2H)，3.20(q，2H obs)，1.24(t，3H)。MS m/e 505，507(M++1)。
化合物732的合成
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在-10℃下搅拌3M硫酸水溶液(28μL，0.084mmol)和12.3M甲醛水溶液(16.4μL，0.20mmol)的混合物。向经冷却混合物中添加胺24(40mg，0.068mmol)和硼氢化钠(9mg，0.24mmol)存于THF(1.5mL)中的悬浮液并搅拌所述反应物直至完全转化成产物，如通过LCMS所监测。添加饱和NaHCO3(4mL)并用EtOAc(4×4mL)萃取所述混合物。合并有机相经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到粗制产物，通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂25％EtOAc存于庚烷中的混合物)纯化所述粗制产物以得到橙色固体状[1-[5-氯-7-(乙基-甲基-氨基)-苯并[b]噻吩-3-基甲基]-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(25)(28mg，68％)。MS m/e 607(M++1)。
随后通过依据在反应图54中所述程序对25实施氢化和皂化以获得化合物732。通过实施色谱柱分离(反相硅胶(C18)，洗脱剂0-70％MeOH存于水中的混合物)来实施纯化。1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.75(d，1H)，7.70(s，1H)，7.60(s，1H)，7.48(d，1H)，7.38(s，1H)，7.29(s，1H)，7.05(s，1H)，6.62(s，2H部分交换)，6.31(s，1H部分交换)，5.72(s，2H)，3.90(s，2H)，3.45(q，2H obs)，3.05(s，3H)，1.30(t，3H)。MS m/e 519，521(M++1)。
通过反应图56合成的额外化合物包括下列：
化合物729：1H NMR(MeOD，360MHz)δ8.48(s，1H)，8.01(s，1H)，7.71(d，1H)，7.62(s，1H)，7.50(s，1H)，7.41(m，2H)，7.33(s，1H)，6.54(s，2H)，6.22(s，1H)，5.73(s，2H)，3.79(s，2H)，3.35(s，3H)。MS m/e 519，521(M++1)。
化合物771：1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.25(s，1H)，7.60(s，1H)，7.44(d，1H)，7.37(s，1H)，7.20(d，1H)，7.15(s，1H)，7.03(s，1H)，6.95(s，1H)，5.35(s，2H)，4.08(q，2H)，3.85(q，2H)，3.66(s，2H)，1.18(t，3H)，1.08(t，3H)。MS m/e 534，535(M++1)。
化合物772：1H NMR(MeOD，360MHz)δ7.48(s，1H)，7.38(d，1H)，7.10-7.05(m，2H)，7.02(s，1H)，6.98(s，1H)，6.43(s，1H)，5.37(s，2H)，3.60(s，2H)，3.15(q，2H)，1.19(s，3H)。MS m/e 478，480(M++1)。
反应图57
用于制备解旋酶抑制剂的另一一般途径阐述于反应图57中且通过关于化合物773合成的阐述来列示。
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化合物773的合成
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将芳基溴18(500mg，2.74mmol)、R-BINAP(90mg，0.14mmol)、Pd2(dba)3(50mg，3.33mmol)、胺54(565mg，3.27mmol)和叔丁醇钠(445mg，4.64mmol)存于甲苯(20mL)的经搅拌混合物在100℃下加热18h。随后将所述反应物冷却至室温且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂20％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到油状标题化合物49(704mg，73％)。MS m/e 355，357(M++1)。以与在药物化学杂志(J.Med.Chem)，2000，43，3099中所述方式相似的方式制备在此合成中所用(2-氨基-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁基酯54。
向胺49(704mg，1.99mmol)存于THF(4mL)的经搅拌溶液中添加Boc酸酐(433mg，1.99mmol)和DMAP(242mg，1.99mmol)并将所述反应物在70℃下加热6h。随后将所述反应物冷却至室温且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂17％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到油状标题化合物50(760mg，84％)。MS m/e477，479(M++23)。
通过按照在反应图58中所述程序对甲基苯并噻吩50(370mg，0.82mmol)实施溴化来制备油状化合物51(225mg，71％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.79(s，1H)，7.56(br s，1H)，7.27(br s，1H)，4.69(s，2H)，2.16(s，2H)，3.45(br m，2H)，2.89(s，3H)，1.42-1.25(br m，18H)。
通过按照在一般途径B中所述程序对吲哚2(120mg，0.42mmol)与烷基溴化物51(225mg，0.42mmol)实施烷基化反应来制备油状化合物52(135mg，43％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.57-7.45(m，2H)，7.28-6.96(m，5H)，5.40(s，1H)，4.18(q，2H)，3.81-3.74(m，2H)，3.44(br s，1H)，2.88(br s，1H)，1.65(br s，1H)，1.57(s，1H)，1.42-1.24(br m，21H)。
向Boc胺52(60mg，0.08mmol)存于DCM(5mL)的经搅拌溶液中添加TFA(1mL)并将所述反应物在室温下搅拌3h。随后蒸发溶剂并将残留物溶于DCM(10mL)中。有机溶液用饱和NaHCO3(10mL)、盐水(10mL)洗涤、经干燥(NaSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂0.1％Et3N和10％MeOH存于DCM中的混合物)纯化粗制物以得到油状标题化合物53(28mg，64％)。MS m/e 535，537(M++1)。随后通过依据在反应图54中所述程序对53实施皂化来获得目标化合物773。1H NMR(DMSO，360MHz)δ7.67(s，1H)，7.35-7.31(m，2H)，7.23(s，1H)，7.06(s，1H)，7.01(d，1H)，6.45(s，1H)，5.95(bm，1H)，5.44(s，2H)，3.49(s，2H)，2.85(t，2H)(两个信号隐藏在溶剂峰下)。MS m/e 507，509(M++1)。
化合物774的合成
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通过按照在反应图54中所述程序实施吲哚2(268mg，0.95mmol)与(3-溴甲基-5-氯-苯并[b]噻吩-7-基)-环丙基-氨基甲酸叔丁基酯(396mg，0.95mmol)(使用环丙基胺和一般途径E自18合成)的烷基化反应来制备油状化合物55(100mg，17％)。MS m/e 639-643(M++23)。随后通过依据在反应图54中所述程序对55实施皂化来获得目标化合物774。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.45-7.39(m，3H)，7.20(m，2H)，7.12(s，1H)，7.02(s，1H)，6.85(s，1H)，5.32(s，2H)，3.71(s，2H)，3.02(五重峰，1H)，1.34(s，9H)，0.72(m，2H)，0.46(m，2H)。MS m/e 613，615(M++23).
苯并噻吩合成
在通过反应图53-57制备所述化合物中所用烷基溴化物的合成阐述于反应图58、反应图59和反应图60中。
反应图58
制备溴苯并噻吩的一般途径阐述于反应图58且通过关于化合物29合成的阐述来列示。
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向氢氧化钠(270mg，6.8mmol)存于水(15mL)的经搅拌溶液中添加3-氯-4-氟苯硫酚26(1.00g，6.2mmol)。添加氯丙酮(0.49mL，6.15mmol，d 1.161)并将所得浑浊溶液搅拌3.5h，随后用DCM(10mL then 2×5mL)萃取。合并有机相用盐水(5mL)洗涤、经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂0-7％EtOAc存于庚烷中的混合物)纯化粗制物以得到无色油状1-(3-氯-4-氟-苯基硫基)-丙-2-酮(27)(1.1g，83％)。1H NMR(CDCl3，250MHz，)δ7.43(dd，1H)，7.20(m，1H)，7.05(dd，1H)，3.52(s，2H)，2.28(s，3H)。
将硫醚27(1.08g，4.94mmol)存于氯苯(30mL)中的溶液添加至PPA(4mL)中并将所述两相混合物在130℃下于氮气氛中搅拌16h。将所述混合物冷却至室温并过滤出氯苯层。将PPA层与水(50mL)一起搅拌且用DCM(3×25mL)萃取所得溶液。合并有机相(包括氯苯)用饱和NaHCO3(50mL)洗涤、经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂100％庚烷)纯化粗制物以得到白色固体状6-氯-5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩(28)(570mg，58％)，其为两区域异构体的大约1∶1混合物。1H NMR(CDCl3，250MHz)期望同分异构体δ7.85(d，1H)，7.44(d，1H)，7.12(s，1H)，2.72(s，3H)，不期望同分异构体δ7.66-7.50(m，2H)，7.12(s，1H)，2.39(s，3H)。
将甲基苯并噻吩28(560mg，2.8mmol)溶于四氯化碳(2mL)中，随后添加N-溴琥珀酰亚胺(500mg，2.8mmol)和过氧化苯甲酰(70％，小刮勺尖)并将所述溶液在80℃下于氮气氛中加热8h。蒸发溶剂并用庚烷(5×5mL)萃取残留物。蒸发合并有机萃取物并通过实施色谱柱分离(硅胶，0-5％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到作为区域异构体混合物的3-溴甲基-6-氯-5-氟-苯并[b]噻吩(29)(470mg，60％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)期望同分异构体δ7.89(d，1H)，7.58(s 1H)，7.21(s，1H)，5.05(s，2H)，不期望同分异构体δ7.67-7.60(m，2H)，7.17(s，1H)，4.67(s，2H)。
随后通过反应图54合成化合物723。在烷基化步骤后期望6-氯-5-氟区域异构体从其4-氯-5-氟区域异构体纯化出来。
反应图59
用于制备2-苯基-苯并噻吩的一般合成途径阐述于反应图59且通过关于化合物32合成的阐述来例示。
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向苯硫酚(241μL 2.4mmol，d 1.073)存于DMF(5mL)的经搅拌溶液添加碳酸钾(648mg，4.7mmol)并将所述反应物在室温下搅拌2min。随后添加1-溴-1-苯基-丙-2-酮(30)(500mg，2.4mmol)存于DMF(3mL)中的溶液且将所述反应物在室温下搅拌过夜。在18h后，反应完成，如通过TLC所监测，因此添加水(10mL)并将所述混合物萃取到EtOAc(3×20mL)中。合并有机相经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，5％EtOAc存于庚烷中的混合物)来纯化粗制物以得到黄色固体状1-苯基-1-苯基硫基-丙-2-酮(31)(172mg，30％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ7.15-7.40(m，10H)，5.0(s，1H)，2.25(s，3H)。
以与在四面体对称(Tetrahedron Asymmetry)，1994，5(7)，1249-1268中所述方式相似的方式制备在上文合成中所用溴-1-苯基-丙-2-酮(30)。本文所述其它经取代溴-1-苯基-丙-2-酮也可以相似方式制备。
通过按照在反应图56中所述程序对硫醚31(172mg，0.71mmol)实施环化来制备乳色固体状3-甲基-2-苯基-苯并[b]噻吩(32)(113mg，71％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.85(d，1H)，7.74(d，1H)，7.57(m，2H)，7.50-7.34(m，5H)，2.49(s，3H)。
反应图60
用于制备2-甲基-苯并噻吩的一般合成途径阐述于反应图60且通过关于化合物36合成的阐述来例示。
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向4-氯苯硫酚(2.88g，20mmol)存于丙酮(60mL)的溶液中添加碳酸钾(5.52g，40mmol)，继而添加2，3-二氯丙烯(2.20g，20mmol)。将所得溶液加热至60℃，1h且随后冷却至室温。蒸发丙酮并将粗制残留物溶于EtOAc(30mL)中且用水(30mL)洗涤。随后用EtOAc(2×20mL)萃取水性层。合并有机层经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到白色固体状1-氯-4-(2-氯-烯丙基硫基)-苯(34)(4.20g，96％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.25-7.40(m，4H)，5.28(s，2H)，3.70(s，2H)。
将硫醚34(2.00g，9.1mmol)溶于N，N-二甲基苯胺(10mL)中并加热至190℃，24h，随后冷却至室温。向所述反应混合物中添加TBME(30mL)，随后用2M HCl(3×30mL)洗涤。有机相经干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发以得到粗制残留物。此残留物自存于庚烷中的5％DCM结晶以得到白色针状5-氯-2-甲基-苯并[b]噻吩(35)(200mg，12％)。通过蒸发母液来另外回收到不太纯净的产物950mg(57％)。1HNMR(CDCl3，360MHz)δ7.68(m，2H)，7.23(d，1H)，6.91(s，1H)，2.58(s，3H)。
向乙酸(100μl)存于溴化氢(48％，存于H2O中，4mL)的溶液中添加苯并噻吩35(350mg，1.9mmol)，继而添加三氧杂环己烷(309mg，3.4mmol)和十六烷基三甲基溴化铵(14mg，0.04mmol)。将所得悬浮液在室温下搅拌5h。反应混合物随后用水(15mL)稀释且过滤、用水(2×5mL)洗涤以得到白色固体状3-溴甲基-5-氯-2-甲基-苯并[b]噻吩(36)(310mg，59％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ7.66(s，1H)，7.61(d，1H)，7.25(d，1H)，4.60(s，2H)，2.52(s，3H)。
其它苯并噻吩合成
5-氯-7-甲氧基-3-甲基-苯并[b]噻吩(37)
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向芳基溴18(600mg，2.3mmol)存于MeOH(6mL)和DMF(55μL)的经搅拌悬浮液中添加甲醇钠(1.24g，23mmol)并将所述反应物加热至80℃。添加溴化亚铜(I)(32mg，0.23mmol)并继续在80℃下搅拌6小时。反应混合物变为深蓝色。将所述反应物冷却至室温过夜且随后用DCM(80mL)稀释且用水(80mL)洗涤。用DCM(2×80mL)萃取绿色水性相且合并有机相经干燥(Na2SO4)、过滤且蒸发溶剂。通过实施色谱柱分离(硅胶，洗脱剂100％庚烷)纯化粗制物以得到无色油状标题化合物37(346mg，71％)。1HNMR(CDCl3，360MHz)δ7.33(s，1H)，7.11(s，1H)，6.78(s，1H)，4.00(s，3H)，2.40(s，3H)。
5-硝基-3-氯甲基-苯并[b]噻吩(39)
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在60℃下向5-硝基苯并噻吩38(800mg，4.48mmol)、浓HCl(1.04mL)和甲醛(30％，存于水中，600μL)的经搅拌溶液逐滴添加浓硫酸(680μL)。将所述反应物再加热24h且随后冷却至室温并用水(5mL)稀释。水性混合物用EtOAc(10mL)萃取且用水(10mL)、饱和NaHCO3(10mL)和水(10mL)洗涤。有机相经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂以得到橙色固体状标题化合物39(550mg，54％)。1H NMR(CDCl3，360MHz)δ8.80(d，1H)，8.27(dd，1H)，8.00(d，1H)，7.70(s，1H)，4.91s，2H)。
以与在美国化学会杂志(J.Am.Chem.Soc)，1935，57，1611中所述方式相似的方式制备在上文合成中所用5-硝基苯并噻吩38。
5-溴-3-溴甲基-苯并[b]噻吩(7)
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将5-溴苯并噻吩-3-甲醇40(49mg，0.20mmol)溶于33重量％溴化氢的乙酸(2mL)溶液中并将所述混合物在室温下搅拌20min。所述反应物随后用二乙醚(3mL)稀释且相继用水(3mL)及饱和NaHCO3(2×3mL)洗涤。有机相经干燥(MgSO4)、过滤并蒸发以得到米色固体状标题化合物7(49mg，79％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ8.04(d，1H)，7.74(d，1H)，7.55(s，1H)，7.50(dd，1H)，4.71(s，2H)。
反应图61
[1-(5-氯-苯并[b]噻吩-3-羰基)-6-(3，5-二硝基-苯基)-1H-吲哚-3-基]-乙酸乙酯(795)的合成
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向5-氯-苯并[b]噻吩-3-甲酸56(58mg，0.27mmol)存于DCM(2mL)的经搅拌溶液中相继添加DMF(1滴)和草酰氯(46μL，0.54mmol，d 1.478)并将所述反应物在室温下搅拌2h 30min。随后蒸发溶剂以留下粗制酰氯。
在0℃下向氢化钠(60％，存于油中，12mg，0.30mmol)存于DMF(1.5mL)的经搅拌溶液中添加吲哚6(100mg，0.27mmol)存于DMF(2mL)中的溶液并将所述混合物在0℃下搅拌5min。随后经5min中逐滴添加如上文所制备酰氯存于DMF(1mL)中的溶液并将所述反应物在0-8℃下搅拌2h。所述反应物随后用EtOAc稀释(10mL)且用10％(w/v)柠檬酸水溶液(10mL)洗涤。用EtOAc(10mL)萃取水性相且合并有机相经干燥(MgSO4)、过滤且蒸发溶剂。用无水快速色谱分离(硅胶，洗脱剂5-20％EtOAc存于庚烷中的混合物)纯化粗制物以得到黄色固体状标题化合物795(30mg，20％)。1H NMR(CDCl3，250MHz)δ9.03(t，1H)，8.90-8.83(m，3H)，8.20(d，1H)，8.11(s，1H)，7.89(d，1H)，7.83-7.76(m，1H)，7.73-7.61(m，2H)，7.48(dd，1H)，4.21(q，2H)，3.78(s，2H)，1.29(t，3H)。
反应图62
可通过反应图62合成吲哚目标化合物744的7种酯前药，化合物737-743。
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化合物744的合成如下文所示：
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使用任何所述反应图合成的额外化合物列示于下表“具活性实例”部分中。
实例A：HCV解旋酶促进的FRET检验
通过向在384-孔康思达(Costar)聚丙烯板中的18μL DMSO中添加6μL 10mM所述化合物的溶液来将测试化合物稀释到2.5mM。在所述板中使用DMSO作为稀释剂实施系列稀释(2.5x)，将每个孔的1μl溶液转移至新384-孔康思达(Costar)聚丙烯板中。
通过用由25mM MOPS(pH7.0)和1.5mM MgCl2、0.005％(v/v)曲拉通X-100构成的检验缓冲液稀释储备溶液来制备含有100nM解旋酶底物、500nM解旋酶捕获链(CS)和600μM ATP的2x混合物。通过对FAM-标记寡核苷酸实施退火产生BHQ-1标记寡核苷酸来制备储备解旋酶底物，所述标记寡核苷酸两者均以传统方式合成且在Biosearch Technologies经HPLC纯化。FAM-标记和BHQ-标记寡核苷酸具有下列序列：
5′FAM d(TAGTACCGCCACCCTCAGAACCTTTTTTTTTTTTTT)3′(SEQ ID NO.1)
3′BHQ-1(ATCATGGCGGTGGGAGTCTTGG)d5′(SEQ ID NO.2)
所述解旋酶捕获链均以传统方式合成且在Integrated DNA Technologies处纯化。解旋酶捕获具有下列序列：
5′d(TAGTACCGCCACCCTCAGAACC)3′(SEQ ID NO.3)
在用NaOH将pH调节至大约7的MilliQ水中制备ATP溶液。ATP粉末自西格马(Sigma)(A-7699)获得。通过A260(消光系数＝15,400M-1cm-1)测定浓度。
向含有1μL测试化合物的所有板孔中添加11.5μL检验缓冲液。将5μL化合物/检验缓冲液混合物添加至黑色聚苯乙烯384-孔Proxiplate中。通过用检验缓冲液稀释含有全长NS3(1-631)(在艾瑞生物医药(Array BioPharma)经纯化)的酶储备物来制备4x酶溶液。将5μL 4x酶溶液添加至Proxiplate中并培育5分钟(对于缺少酶的对照孔来说，使用检验缓冲液代替)。随后向Proxiplate的所有孔中添加10μL 2x底物/CS/ATP混合物。最终检验条件包括50nM底物、250nM捕获链、300μM ATP、5或6nM酶和2％(v/v)DMSO。使反应在易美逊(Envision)上于室温下进行70个循环(～30min.)。平板用易美逊(Envision)读取(顶端镜子＝FITC；激发滤光片＝FITC 485；发射滤片＝FITC 535)。记录荧光强度，总时长为30分钟。计算所述反应的初始速率且其用于计算IC50值。使用4-参数或5-参数对数等式实施IC50曲线拟合。
实例B：HCV解旋酶TR-FRET检验
按照在实例A中所述制备DMSO测试化合物板(用所述化合物存于DMSO中的10mM储备溶液开始)。
通过用由25mM MOPS(pH7.0)和500μM MgCl2、0.005％(v/v)曲拉通X-100构成的检验缓冲液稀释储备溶液来制备2x解旋酶底物/捕获链/ATP混合物。解旋酶底物是从珀金埃尔默(PerkinElmer)公司获得的TRUPOINTTM解旋酶检验试剂。按照珀金埃尔默(Perkin Elmer)的说明书册制备底物储备溶液；#AD0166作为1μM等份试样保存在-20℃下。捕获链也是从珀金埃尔默(PerkinElmer)公司获得的TRUPOINTTM解旋酶检验试剂。按照珀金埃尔默(Perkin Elmer)的说明书册制备捕获链储备溶液；#AD0164作为15μM等份试样保存在-20℃下。按照在实例A中所述制备ATP储备溶液。所得混合物含有8nM解旋酶底物、30nM捕获链和200μM ATP。
按照在实例A中所述向含有1μL测试化合物的所有板孔中添加11.5μL检验缓冲液。将5μL化合物/检验缓冲液混合物添加至白色聚苯乙烯384-孔Proxiplate中。通过用检验缓冲液稀释含有全长NS3(1-631)(在艾瑞生物医药(Array BioPharma)经纯化)的酶储备物来制备4x酶溶液。将5μL 4x酶溶液添加至Proxiplate中并培育5分钟(对于缺少酶的对照孔来说，使用检验缓冲液代替)。向所有孔中添加10μL 2x底物/CS/ATP混合物。最终检验条件包括4nM解旋酶底物、15nM解旋酶捕获链、100μMATP、2.5nM酶和2％(v/v)DMSO。使反应在易美逊(Envision)上于22℃下进行25个循环(即，动力学读数～30min.)。在易美逊(Envision)中读取平板(镜子＝LANCE/DELFIA；激发滤光片＝UV2(TRF)320；发射滤片＝Europium 615；延迟时间＝60μs，闪烁间时间窗口＝50μs，2000μs)。记录荧光强度，总时长为30分钟。计算所述反应的初始速率且其用于测定IC50值。使用4-参数或5-参数对数等式实施IC50曲线拟合。
活性实例
对于在下表中的IC50活性来说，A＝10～50μM，B＜10μM，C＞50μM及ND或nd＝未确定。
表1.使用反应图1或反应图2制备的化合物实例。
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A＝10～50μM
B＜10μM
表2.使用反应图3制备的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表3.使用反应图4和反应图5制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表4.在反应图6中制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表5.使用反应图7制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
表6.使用反应图8制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
表7.使用反应图9制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
表8.使用反应图10制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
表9.使用反应图11制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表10.使用反应图12制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表11.使用反应图13制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表12.使用反应图14制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
表13.使用反应图15制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
表14.使用反应图16和反应图17制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
C＞50μM
ND＝未确定
表15.使用反应图18、反应图19、反应图20和反应图21制造的化合物实例.
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A＝10～50μM
B＜10μM
C＞50μM
ND＝未确定
表16.使用反应图22和反应图23制造的化合物实例。
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A＝10～50μM
B＜10μM
C＞50μM
ND＝未确定
表17.使用反应图24制造的化合物实例.
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Example R1 R2 1，2-3，4 IC50 Activity
464 H CH2Ph CH2-CH2-CH2-CH2 C
465 H CH2Ph CH＝CH-CH＝CH C
466 H H CH2-CH2-CH2-CH2 C
467 H H CH＝CH-CH＝CH C
468 H H CH＝CH-CH2-CH2 C
469 H 2-Me-4-NO2-C6H3 CH2-CH2-CH2-CH2 C
470 H 2-Me-4-NO2-C6H3 CH＝CH-CH＝CH C
471 Br 2-Me-4-NO2-C6H3 CH＝CH-CH＝CH A
A＝10～50μM
B＜10μM
C＞50μM
表18.使用反应图25制造的化合物实例。
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表19.使用反应图26制造的化合物实例。
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表20.使用反应图27制造的化合物实例。
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表21.使用反应图28制造的化合物实例。
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表22.使用反应图29制造的化合物实例。
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表23.使用反应图30制造的化合物实例。
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表24.使用反应图31制造的化合物实例。
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表25.使用反应图32制造的化合物实例.
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表26.使用反应图33制造的化合物实例.
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表27.使用反应图34制造的化合物实例.
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表28.使用反应图35制造的化合物实例.
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表29.使用反应图36制造的化合物实例.
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表30.使用反应图37制造的化合物实例.
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表31.使用反应图38-45制造的化合物实例.
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表32.使用反应图46-49制造的化合物实例.
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表33.使用反应图50制造的化合物实例.
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表34.使用反应图51-52制造的化合物实例.
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表35.使用反应图53制造的化合物实例.
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表36.使用反应图54制造的化合物实例.
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表37.使用反应图55制造的化合物实例.
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表38.使用反应图56、反应图57和反应图61制造的化合物实例.
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表39.使用反应图62制造的化合物实例.
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结论
已经研发出HCV NS3解旋酶的强效小分子抑制剂。
尽管本发明参照其具体实施例进行阐述，但所属领域的技术人员应理解可实施各种改变并可用若干等效物替代而不背离本发明的真正精神和范围。另外，可做出许多修改以使特定情况、材料、物质组成、方法、方法的一个或多个步骤适应本发明的目的、精神及范围。所有这些修改形式均欲涵盖于随附权利要求书的范围中。