在人类肝脏中表达的表达序列标签.pdf

本发明公开了一类在人类肝脏中表达的表达序列标签的序列。利用本发明的在人类肝脏中表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝脏中特异表达的表达序列标签，从而寻找出人类肝脏疾病相关基因，从而在研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物中发挥重要作用。

1、  一类分离出的在人类肝脏中表达的表达序列标签的序列，其特征在于，包括：
(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列；
(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列的互补序列；
(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列，及
(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。

2、  根据权利要求1所述的一类分离出的在人类肝脏中表达的表达序列标签的序列，其特征在于：所述序列包括具有SEQ ID No.1～SEQ IDNo.50所示的序列。

3、  一种探针分子，其特征在于：所述的探针分子含有权利要求1中所述的序列中约8-100个连续的核苷酸。

在人类肝脏中表达的表达序列标签
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一类在人类肝脏中表达的表达序列标签。
背景技术
肝脏是人体内最大的消化腺。也是体内新陈代谢的中心站。据估计，在肝脏中发生的化学反应有500种以上，实验证明，动物在完全摘除肝脏后即使给予相应的治疗，最多也只能生存50多个小时。这说明肝脏是维持生命活动的一个必不可少的重要器官。肝脏的血流量极为丰富，约占心输出量的1/4。每分钟进入肝脏的血流量为1000-1200ml。肝脏的主要功能是进行糖的分解、贮存糖原；参与蛋白质、脂肪、维生素、激素的代谢；解毒；分泌胆汁；吞噬、防御机能；制造凝血因子；调节血容量及水电解质平衡；产生热量等。在胚胎时期肝脏还有造血功能。
肝脏疫病分为肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等。现代医学实验证明，肝病病毒侵入人体后，并不直接引起肝细胞的损害，只是在肝细胞内吸收营养赖以生存，并在肝细胞内复制、繁殖。其复制病毒的“零部件”如表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)释放在肝细胞膜上，引起人体免疫系统对这些抗原物质产生免疫反应，这种反应造成肝细胞的损伤、坏死。免疫反应的强弱决定于肝脏受损程度及临床症状轻重。这场由病毒引发的、免疫系统对肝细胞的战争，使大约25％的患者的肝脏成为战火连绵的战场，肝脏的损伤由此加重。肝病的危害绝不仅仅限于肝脏本身，它还可以引起其它多种疾病。常见的有：(1)糖尿病；(2)胰腺炎；(3)胆道感染；(4)功能性肾衰竭；(5)胆汗性肾病；(6)肾小球肾炎；(7)肾小管酸中毒；(8)溶血性贫血；(9)再生障碍性贫血；(10)心肌炎和心包炎；(11)结节性动脉炎；(12)消化性溃疡；(13)自发性腹膜炎；(14)性激素代谢紊乱；(15)甲状腺功能改变；(16)肝性骨病，等等。肝病不仅对患者的身体甚至生命造成危害，而且对患者心理上的打击也是十分沉重的。无论是肝病患者还是病毒携带者，在生活、社交、求职、升学等方面都会受到严重影响。
生物基因组中可转录表达的序列(即基因)仅占总序列的3-5％，对这部分序列进行测定，将直接导致新基因的发现，并获取基因组中与产业化关系最为密切的信息。20世纪80年代，高通量的自动测序的出现，使从质粒互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库随机选取许多cDNA克隆和决定来自非载体两端的几百个碱基的DNA序列成为可能。这些短的DNA序列叫做“表达序列标签”(Expressed Sequence Tags，简称ESTs)。表达序列标签的概念最早是由Adams等在1992年提出来的(Nature，355，642-644)。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic AcidsRes.19，1837-1843；Matsubara，et al.Nature Genetics，2，173-179)针对获得大量信使核糖核酸(mRNA)序列的迫切需要，提出大规模互补脱氧核糖核酸(cDNA)测序的研究战略。随后Venter创立了大规模表达序列标签技术。其基本特征就是从以质粒为载体，构建完成的目的组织互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库中，随机选择许多cDNA克隆，利用质粒上携带的通用引物对cDNA两端进行一轮脱氧核糖核酸序列测定，所获得的来自3’端或5’端的几百个碱基的非载体短脱氧核糖核酸(DNA)序列。简而言之，表达序列标签是来自表达基因片段3’端或5’端的短脱氧核糖核酸序列，代表一个表达基因的部分转录片段。
表达序列标签可用于新基因克隆、人类基因组图谱绘制、基因组序列编码区的确定等。如果一个表达序列标签在基因组中只出现一次，那么它可以作为序列标签位点(STS)。由表达序列标签构建的物理图谱叫表达图或转录图(expression or transcript map)。利用表达序列标签进行基因图制作，可以加快序列标签位点的制作和新基因的染色体定位。表达序列标签可以作为基因特异性探针，对组织特异性基因表达的研究具有重要的作用。表达序列标签还可以进行新基因的遗传进化关系分析。表达序列标签可以对所有动植物的基因作为一种数据库，通过不同的序列比较可以获得保守序列片段，从而获得基因的遗传进化图谱。正因为表达序列标签具有如此的优越性，因此表达序列标签测序已经成为许多基因组研究机构的工作重点。
由于本发明人类肝脏特异表达基因与一些肝脏疾病相关，因此，研究人类肝脏中特异表达的表达序列标签对探索肝脏疾病的发病机理及研制肝病的治疗药物具有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一类在人类肝脏中表达的表达序列标签。
本发明要解决的技术问题通过如下技术方案实现：
本发明提供了一类在人类肝脏中表达的表达序列标签的序列，其包括：
(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列；
(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列的互补序列；
(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列，及
(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。
较佳地，所述序列包括具有SEQID No.1～SEQID No.50所示的序列。
本发明还提供了一种探针分子，所述的探针分子含有上述序列中约8-100个连续的核苷酸。
由本发明的在人类肝脏中表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝脏中特异表达的表达序列标签，从而寻找出人类肝脏疾病相关基因，从而在研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物中发挥重要作用。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
人肝脏组织的mRNA的分离
组织分离(Tissue isolation)：肝脏来源于5个成年男性，在肝脏切除手术后，将肝脏组织立即置于液氮中冷冻保存。
mRNA的分离(mRNA isolation)：取出肝脏组织，用研钵研碎，加入盛有裂解液的50ml管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内，匀浆后移至50ml新管，抽提总RNA(TRIzol Reagents，Gibco，NY，USA)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量。用带Oligo d(T)的纤维素柱分离总RNA中的mRNA，定量。
实施例2
cDNA文库的构建(Constuction of cDNA library)
以mRNA为模板，合成双链cDNA。补平末端后，加含EcoRI切点的接头。磷酸化EcoRI末端后，用XhoI限制性内切酶消化1.5小时，再进行片断分离。过柱筛选长度＞500bp的片段，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，无菌水溶解，连接至Uni-ZAP XR载体(Strategene，CA9203，USA)，以ZAP-cDNA Gigapack III Gold Cloning Kit(Strategene，CA9203，USA)进行包装，宿主菌使用XL 1 Blue MRF’(Strategene，CA9203，USA)细菌。涂板并测定滴度。
实施例3
测序及数据库建立(Seqencing and Database Constructing)
挑选文库中有外源片段插入的克隆，扩增后抽提质粒(QiagenGermany)，用T3和T7作为3’和5’端的通用引物，采用终止物荧光标记(Bi g-Dye，Perkin-Elmer，USA)的方法，在ABI 377测序仪(Perkin-Elmer，USA)上进行EST大规模测序。测序结果用FACTURA软件去除载体序列，传输到SUN Ultra 450 Server上进行下一步的处理。所有的序列信息再用GCG软件包(Wisconsin group，USA)中的BLAST和FASTA软件搜索已有的数据库(Genebank+EMBL)，将无同源性或同源性低于95％的序列视为新基因建立数据库。
实施例4
基因的全长克隆(Cloning of FuIl-length cDNA)
在得到的新基因片段序列信息基础上，进行cDNA全长克隆，分两阶段进行：
(1)“电子克隆”(Electronic Cloning)
以新基因片段序列作为探针搜寻dbEST数据库，将重叠序列＞50bp，同源性在98％以上的表达序列标签(Expressed Sequence Tag，简称“EST”)序列认为同一序列(Consensus Sequence)，取出并用AUTOASSEMBLER软件进行连接，部分EST可以延伸探针序列。再用STRIDER软件分析被延伸的序列是否具有完整的开放阅读框架(Open ReadingFrame，ORF)，用BLAST搜寻Genbank或SwissProt以确定该序列的核苷酸和氨基酸水平上是否与其他物种有同源性，以帮助判别所得到的基因全长完整性如何。通过电子克隆的方法，通常可获取人肝脏相关基因的全长序列。
(2)cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNAEnds，RACE)
如果通过“电子克隆”方法仍未得到完整的cDNA全长，则在已有序列5’或3’端设计引物，在人类肝脏Marathon-Ready cDNA文库(Clontech Lab，Inc，USA)中进行长距离PCR反应。然后对PCR产物克隆、测序。用AUTOASSEMBLER及STRIDER软件分析被延长的序列有无完整的ORF，如无，重复上述过程直至获得全长。
(3)RT-PCR
对于5’和3’端的已知的序列，如果中间有一段间隙(gap)无法从已有的公共数据库或自身数据库获得，可考虑采用RT-PCR的方法。在序列5’端设计引物，3’端引物采用Oligo-dT，在肝脏总RNA库中进行扩增。然后对产物进行克隆、测序。最后拼接便获得全长。
通过组合使用上述3种方法，可获得人肝脏相关蛋白的全长编码序列。
                                  序列表
<110>上海人类基因组研究中心
<120>在人类肝脏中表达的表达序列标签
<130>NP-10156
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<213>Homo sapiens
<400>16
  1 tcctaccagg cacttatttc ttcttctctt ctaaaatagc atcccaattt ccctttcagg
 61 gaacttgtcc ccctggctga ctatcagcca gggantcctt gcctcccctc actatggcgt
121 atacatgtac cctgaggtta gccagcctct ctcctgtgtc ctgtattttc caaagccaca
181 ttattctgct cttcctgtga ttctgaagct cttctgtgtc cttccaataa attccttttt
241 tattgcccat gaacaatggg cacgtgggag ggaaatacgg gaagggtaat ttaggcagga
301 ttgttgggca agttaaggtt aggcaaggat aaggtggggt ttctat tggt tggcaactta
361 aatatctttt aaaatatata tcattgggga aataggacat tggtaatgtt ctttttatgg
421 gaataatgga aaccaggctt aaccatttac tggattt
<210>17
<211>536
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>17
  1 ttttttnctg tttttcatca ttcagctaga aagtgagaag ttttatcntc catagtcctt
 61 ttaaatctta tgttagaact agcangacgt aggtggaaag atgaagaaat aancttgtcn
121 agactaaaga aaggaaagca ggttataaaa gccatagtag ccagtccagt tcattctgca
181 gatggcccca taccaatcgc tgttagagtt tgccacctcc actttcccac tgagaactgc
241 agcaatttta aaggatatga gaaagccaag actcaagaga tgagaagacc cccttggcga
301 aatatagtgt actcttcact gccactgcca ccaccaaatg ggtttttaga gctttgaaac
361 acaatctttg taaattaatc aaaacctccc tgtgacccac ctgccttctc cccataccca
421 aatttgacca tactggccta aaaggaagat ggggttcgat atagaggnct gctaagccag
481 taggaagggc tncacgggag tgacagtagg tcttcctctc canatgggat ntacac
<210>18
<211>411
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>18
  1 ttaaactctc aggactttta tttgcacctt ggatgacgaa acaaattctg cagttaacat
 61 taagaaaaac aagtcaatat gtaaacagta aaagtgaatt taccaatttt tccttttgcc
121 ttcccagaaa ctcttttttt ctttcactcg tgacttgatt actaattcta atctagaaac
181 gaactctaga ttagaatgct aggttagaat tagtaatcat cttgacaact aggtaatcac
241 aagtgtttgc cattctcatt acccaggaag tatactcata ccacatagtg gataggccaa
301 ctagaacaaa atccaatcag gtgtaaaaaa tgtactttgg ggcccggtgc agtggctcca
361 cacctgcaat cccagcaccc cggggaggcc caggtgggga ggattgatga g
<210>19
<211>478
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>19
  1 acttttttga tattttttat tataaaagaa aagagaacaa cataaaacta gtggggtact
 61 tgacattgtt tttgagaaac taatccatca gtatctggct tgatggaagt agttgcaatt
121 ctcagtgagt tctcaaggtg ctcatcagat attttggntc taattttact cntcgngntc
181 ctcnaccctg gaaaatngta gcccccaaat gtaagtgctg ccaaaaagca atgacatgaa
241 caaggtgtga ttgtgaagca agggatattt gtcattgggg aagacaggtc cttacaaaaa
301 gtccagtaaa gaggcaaaat caaatttttc tataagttga acatcagatt gcagctctag
361 gcattccatt tcaaaattgg ccaggtaaca tatatatgtc gactgaaaat gggagttgca
421 aatataccna aatattggat gattttttcc cgaaatcctg gnaatacccg gttttcca
<210>20
<211>406
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>20
  1 taagacaagg tcttactctg ttgcccaggc gggacanctn ttgatttaag tgaaaaaact
 61 caatgcatcc tggaggatat cctagaacag aacatggaac tcttctgcat tccttttaat
121 agttgcatag aattccattg tgtatatccg atcgtgattt cttccaccag attttgttga
181 tgggtatttt tttgggttgt ttctggtctt ttgttctcat gactacatct taaccagtgg
241 ttctaaagat gtggtaccca gaacaacatc attactacct aaaaatctat tagaaatgaa
301 aattattggg tggaagccag atcttacctg aatccgatac tcnggagtga ggnccaggga
361 atcttggcac catacgtccn ggtanaggga tcnggacgcn agcccg
<210>21
<211>440
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>21
  1 aacctgtgga gcacgtgtat atctatacat atcgactgaa gaattcatct agtaattctg
 61 acaaaaatga tagacttaaa ttaagtcaga agaattgggt acaaaattgg gatgggtttg
121 ggagaaattt aggtaatgtc agaagctggt taacgactga ctagttctga gggtcagcag
181 ttgtaaangn ccngggaagn tgntgcttaa gatgaccctc caaggtttag gcttggatga
241 cctgggtgga tgatgccatt agtcagcata ngtgaataag aggtgcaggg agggcaggcc
301 cactagggta gttagacaga agttcagttt tggatgtgga caatgttttc tcatatgtct
361 ttcatcacta tattgtcagc tacatgactt tagcnaatac taacttactt gacttttgag
421 atttttagcc agcctataat
<210>22
<211>640
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>22
  1 tttggaacat tgaattttct ttattgcaaa ttcttagggt ttctgtcaaa agagatttga
 61 aatacaacat gaaatgatgt actcacatcc ctcaccacca tctccaaata actgaattac
121 ataaataaaa cattatatga aaagtgcttt gctacaattt atgggaggta aatttaagaa
181 gagctggctc attgtaggaa aattcaactt atcttttcct gatcctttta tttaatacag
241 ggagagaaat ttatggcagt taaaaaaatc tattactgtt tctcataact gaatccatta
301 tttttctcca tgatccatca gggtaaaaac aagaataata gattgctttg acagaacctt
361 ggaacataaa tgtccccaag aatcaaacac agtaagttaa acngggtatc aggtgggatt
421 aaaacaggaa aggataactt cttttcatat ttcaaaatca gatcttactt aaaaatttat
481 naattattag ctacccaaaa ggaccaacta tataggggcn gaattggcaa ttggaatggg
541 ggatattcca atccttccaa atgngcgcng gaaaatttaa cctggaaggg ttccaggaag
601 ggaccatttc cttccntttt ggcaccgggt attaaaattc
<210>23
<211>454
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>23
  1 tataaattca tgggatatga gtataattta actatattga tatattgcac tatggcgaat
 61 tcaaggcctt cagtgtatcc atcactggaa caacacatat tgtatccacc aagcaacctg
121 aaagattttt taaaatcagc aaacattctt aattgtatta tatgtaatta actttttcca
181 ttatggttag tactttatgt atgtagttta agaaatattg gtgtattcaa gatcataaat
241 tcccctaggc attctctaga agctctattg ttttacctat cacatttaga tcaacaatcc
301 atctacaatt tcgttatgaa tgatgtgaag tagagaatca acatnacatt ttttccataa
361 acatatttat tgaaaagacc atcctttctc cactgctcta ccgtggtcat ctttggtggt
421 tatagactga atgtttgtgt gtcccccaaa ttca
<210>24
<211>548
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>24
  1 tgagatgggg ctctcactat gttgcccagg gtggtctcta tcttctggga tcaagtgatc
 61 cttctgcctc agtttcccat gtggctggta ctactggtgc atgccactgt gtctgtcaca
121 ttttttaaaa tcataaactg attctaaatt ataaataaat caagaggaaa gacagaggac
181 ttactatggt gctatcttga caacatcaaa gtaactaatc cccaaaangt ttattcaaaa
241 atcacaagtt gtttcatctt aagacccaat ttctgtaccc aaataaagcc tattatactc
301 cataatgaaa agtacagata attgaaaagt acagagccca gtgatgctta aatgatgcca
361 tgtaatctaa tagctttgat gagtcagttt ccaagatata taattatatt caaagagttc
421 tgtctggttc ngttgatact acaatccaat tcctncctcg gctgcagaca acacctggta
481 ccttaagcng aagctgaggc atggnccccc actatacgcc tctaacaacg gntatgtgga
541 aggcctag
<210>25
<211>478
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>25
  1 gaatttaaaa tcctgggagg cattgcactg taatagtaag tctgcccatc caggatcatg
 61 catgtctttt ctttcattca agtcttattt tatatctttc agtaaatttt catatagatc
121 ttgtgaatcg aattattttt acatttcaaa ttcaactaac aattattaat agaaaatgaa
181 aacattgatt tttttcaata tttattttgt gtccaagtat atattaaata ttttangtag
241 actttcttgg atatttgaaa gtatattctg caaataatag catcctgtga tccagcaatc
301 attttaggaa tctatcctat aganatagca atgtagtaag cctggtgcng tgggctcacg
361 cctggtaatc ccagcacttt taggagggcc gngngtgggg tggatcacga ggatcaggag
421 ttcnagacca gtctgggcca aganggtgga accccgtctc tactaaaaaa tacaaaaa
<210>26
<211>441
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>26
  1 ttttcaagct ggggaaaaca cctgttaaat ataatgacag aatatgctct catcaaaacc
 61 caggaaactt taagaataca ctaaacctca caaaatgggg gcgaaataca atgatgacca
121 cacgtatgag aaatggtcaa tggtagaatt gaaagaaatg caagggaaat aaaaggtaag
181 gggtcctttc cgagcaaagt ggcaacgtca caacagctca cagtcaggct tggcgggaca
241 agaatgctgg gcagtgctgg tttgcaggga ggggtcaact tttctggaag cagcccagca
301 aagtgcccca gagccatcaa ttattcctgt gcttcgcagc cacagcccac cgaatgcagg
361 tgcagccaca gaagcgctgg cagaggggag gctgagagtg gcgctggttg aagatttctc
421 acaggaaaca aaanggcccc g
<210>27
<211>487
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>27
  1 tttgagatgg agtctcactg tcacccaggc tggagtgtag tgctgcgatc ctgactcgct
 61 gcaacctcca cctctggagt tcaggtgatt ctcctgcctc agccttccga gtacctggga
121 atacaggaat gcaccaccat gcccggcgaa tttttctatt ttcagtagag acggagtttt
181 gccatgttgg ccaggctggt ctcgaactcc tgaactcagg tgatccaccc gcctcagtct
241 cccaatagat tagatatatt attaatgaat tgcttccttt aacaccctat tcattgaatt
301 ttccagtaaa ccacaattac taattactcc tgaaatcaga aaagaggtta aaaagatttt
361 ataacagtat cctatgaaat ctactacttt caagtaatag tagttgaatt accaaaaccc
421 gtcactcaag ccaatgacta caattaagat atgagtaaca tttcctaaga taataaagtc
481 aattaat
<210>28
<211>551
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>28
  1 gttcggaaac ttcttttatt aaaaaagatt ttaaatatta atgctatttt caatacaggt
 61 gtgataacac tcaataaagc atggtgtact tgatataaat ttcggaatgt aacagtccat
121 ctagttcctg gtcccctcca gtctccacca catagcctag taagcaaaac gtacacaccc
181 gtttaaaaat gaagaagctt ttgggcattg ggtgagcaca gtggggtggg gcaaggaaag
241 tgctcgttcc tgaattattc atgcttttgg ctttgacttc agttaagtaa catcaattct
301 aagagaactg agacaaactc ttctatgttc ccgcaaagga atgggagaaa aaagcctgcc
361 attccgcnag cagctntggg cnaaaaccag cgccagagta cagggggtcc gggaaatgag
421 gtattaaaaa aaaagtccgg ggtaaagtgc ncagttaccg tcaaaatata ttatttgatc
481 cnaagaaatt taaagattta tccaatgggc tngattgcng acctttaaac attgggtttc
541 atggacatca t
<210>29
<211>643
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>29
  1 gtttaaagtt aaagtttatt tgtattcttt gtaggaatat caataaaaga cctcaaacgt
 61 atctatatct gtacatgtac aagaactgtc aaaaattatt cacagaacaa aaataaatct
121 tctttagaac aaacccaggt aatgaaatgc tgatacggat ctcacatacg gaataatcta
181 aatgctacta gcacaaaaat atggctttaa aaataaaata aaatcttggg ttttgttttt
241 ctaaggtgta tttctctttc ttgaaataaa aaataaatta tttagagcta tcattgtaaa
301 atagtcgtgt gttaacacac tctntattaa ggccctggag atgaaaaaca aaatcaaatt
361 tagaaggtca tttcctcaca ggtggtaact ccaggttaat gtgctgctgt ctgccttaag
421 gttaatataa ctaggaaatg tctaagcacc aggtccaaat ttaacccaat ttacnattta
481 actttcccga ggtggtcatt gnggccatta ggaattaacc ntttggtgga cnggggaatt
541 gaaaggttcc ccccganaat tgggaatccc cctaaatggg atttcccnta aaatctgtnc
601 cccccnaggt ggtggngggc ccnaaacaca nctcggggga aac
<210>30
<211>431
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>30
  1 tatatttaaa taagtttaat gttacagtat tggtatttgg taggttttct tataaggttc
 61 ccttatccat tttgctgtaa ttaacaatcg gataatgtat tagccagcca aaaattatgt
121 atgctgtcag gataaatcaa gtcaaaatgt ttttcaatgt cactacagaa attgtttttg
181 gttcaactat atgactatca aaggttatgt acaacgcaca actctaccca gatactcatc
241 cttgcactgt tctaaataaa ggaaacaaga ctcttcagta ctctgttttt caaactgtag
301 gtcaagatct gttagtgagt tgtaaaatca atttagtcac cattgggcaa taaaatagaa
361 tagagaggca agtatccacc atggcatcca aacccaaagg gattgnaccg gtggnaaccg
421 ccctgccttc c
<210>31
<211>511
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>31
  1 aaattcctat gttagttgtg aacatttaaa taccaagaca tttctagctt ctctcaaaat
 61 gcaggagacc caactacctg aagtctgagt tcccatatgg caatgtttct ggtgctgaac
121 agtcactgcc acctctggac tctacaaagc atctcctcct gcccacagtt cccactccat
181 ccctggctgg cccttgtggt cattcgagtt tgcaaccctt cccaaggaat tcataaatac
241 atattctatc actaagagtt taaacgaaaa actgtattat gcttgtangg aattctggct
301 tgtaagtgaa ttgtttgcat acaaattggn cttctgtaag aactgctgga gttggcaggg
361 gatgaaaggt caggtggtng tcagcatttt tcntggagtt taatatggcc tttccccctg
421 ggaatgggca ctgggctggt tcacaggatt ggagtgaacn tggctggata gggatagcng
481 gttttagagc aggggnagtt taanaagcng g
<210>32
<211>607
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>32
1 gcatagccaa tcttttcatt tttattgctt taacacacat tttaattttc agttgaacaa
 61 attcttaatg agctacagag tgacatgagt tgaaattaga ataaagtaaa ataatactat
121 ataaccaaaa caaacccagt gttacatatc gtgaaataat gcaattaaga gcacaactaa
181 aaaaaatcat tgattcagtt aaacacaaaa gacatgcagg gtctcaaaca aggagtattt
241 gggcttctat gtcaatgtca taggaaagag ctttttctat ttctggataa atatttcatt
301 tttattgatt tggcaaaaat actttaagga taaatatggg accagaaagg cctacagtat
361 ttttgccaaa ttttatctat agccaaagca caaaactggc tttgaactgg gtcattaata
421 taatggggca gttcattcca tcatattccg gtcnctgcag agccggggtg aaatggaacc
481 agccaagatn ggtccggaac nccctcaacg gccnctaacc ntaagttccc caggatattg
541 cnggccataa cntggccnat tatggatngg gacctttatt ccccccngaa gtcctaggtt
601 aaccggc
<210>33
<211>454
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>33
  1 ttgtgagcaa catcggctgt ttattcactt gtgtgtgagt gggctgagtc cgagaaaggg
 61 gtcagcaaaa ggtggtggga ttatcattgg ttcttatagg tttgggatag gcggtgtagt
121 caggagcaat tttttacagg caggggatgg atattacaaa gtacattctc aagggtgggg
181 aggatgttac aaagtacatt cacaagggca gggagggtgt atcgtcacaa gggcagggag
241 gatgtattgt cacaagggtg gggaggaatg ttacaaagta cattcacaag gacaggagta
301 tcacaaagta cattatcaca agggtggggg aatgtcaccg tggcttgacc attagtgcag
361 ccagctccag aggaccttac caaaaagttt ccatacttgc acgtgttttc ctggtggcca
421 aaaatataaa acntttaatt tctgggattc cttt
<210>34
<211>480
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>34
  1 aaaagttctc tcccagacat gagtatattt taaagtacat attaaaagcc agcagttttt
 61 ttttaacagc aaaagccata aaacaagcag ttctcaattt acagttaaca tagcagccca
121 tcaagtgctc ctctccctta gcatatatgg tactttgatg catattgttg atattgacag
181 tcattttgca aataaatgtt ctgaaagctt tcatcttatt taaaggagta aacatggaaa
241 taaaggcacc attttaatca ggttattgtg ataagaccaa aaacattcca caaagtgcat
301 acctcatttt cgacttctct attaaattta aacttgagtt aaaatgttaa taatttggct
361 ttaattgaag agagagttca ttcagagaat tacagagttc gaattgggat gaatccccag
421 agtttattta atctggtacc cncattaatt ggnagaatgt gaggctcaaa atggaatgac
<210>35
<211>574
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>35
  1 tcatttccaa gttttaatta aatatctcta atggttagaa aatcaatgtc aaatacgaac
 61 attggtatac agcttaaaat acaaatgtca gcaattatta aagaacatga ttaatcattg
121 ttccaagtaa atgctagatc attatttccc aggaggcaag ttaagcatca ggtgcctgag
181 gggtaaggga cagggcttca gtcggctctg atagctgcat ggctgt ccca atgagctttc
241 cactcagata gtgccagggg agctctcatc acaggctggc tcactggcct ttatccccag
301 ctccaaggaa acaccagggc tttttctgcc atgagaatcg tgtttcagag tcaaatgatc
361 cactttaaga tgnaatttgg acagctccag ttnccggaat attcnaggtt taacctgggn
421 agttaagact tcccaanggc tgaagatang gctactaagg ggctgattgg acaagggttn
481 agggccaggg tccctcttna aaanatcttt ggtttgggcc cgganaaatn aattnaccgg
541 acctccttta gnaacccagt tcaagncccc aaat
<210>36
<211>500
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>36
  1 cttagaacac ctaaatattt atttggataa aataaaataa caagaatctg gagaaaagaa
 61 actaagagcc ccaaagttaa agctggtaaa atagttcaag aacttgcagc aagtacctag
121 aaaatattaa atggttagga caaaacattc acagttcaag gtcccaagaa aatgatctgg
181 tgagcaaata catatacaca cttaaaacta atctggatga attagtgaag caatgaataa
241 ataggtcaat tactaaaccc acataactta ttcaaataaa atctaataca aaaaataaac
301 ttaaaaaaat aggttaaaac actaaatctt aactaaaata ttaggcaaac tagaacagga
361 gggccgttat taaattggtt caccataact tactatttgg ggaccaaact ggaatnggaa
421 aatctggaat tgtggagaat aaaccagttg gtttctcaac tacaatttat ttgacagcta
481 ccccaaaaag nggcttatnc
<210>37
<211>580
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>37
  1 ctgtaggcac cattctgcat cttgaaccca gactgaagtg tgcctctcac agatggaagg
 61 tgcacacgct cctgtctcct cctcactctg ccacgttcac ttggcttttt cattggtacc
121 taggaattta agaatatcga agcgaganag taacaaacca tagatgagca gactcccaca
181 ccgggttttc ttgcccgtct ttaaggcact gtttctaaat tttgaactta gctctgaatc
241 cccaagaact tgagcacagc aagggttgct gagctgctgt cgccgcagcc ctggcccctg
301 gtgctggagc tgcagcacct ttngggagag gtcctgcgtc gtcctcagct gcgtcgctgt
361 gaactcccgc tctccactgt gttcctcagt gtctgctttt caggaagtct gctgtgacct
421 ttgcccaact tctgagctcc tcagggacta ggaacaattt cagtagcttt gccctgaacc
481 aaacgagaaa acaaaaggga actcccgtat gacccacgtc acgtggtgca ctcagagtgt
541 gtgcggcatg atcctcggtt gctcctcctc tcaatttaaa
<210>38
<211>434
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>38
  1 ctttttaaat tatatagtcc catggatttt caaatatttt atactagtta tataataaca
 61 ctattttaaa aactatatag aataaacagc actgaggaga gatgaagcaa tagaaaggtc
121 aaagttcaaa cttgttaaaa tatgtttggc tttgtttccc taaggttgga attattaaac
181 tggtgtgact ttagaaggtt ttcgaggaat tggtgtgtgt tactgcagaa tcactagctc
241 ttaatttgta atttgatggc taaaaacgga caagtcactt aaaggaatat atcgtattaa
301 aaagttactt tccttgacat ttggccacca gtcagccctg tctcccctag cctctgtctg
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 61 ttagtagaga cgggttttca ccatgttggc caggatggtt ttgtactcct gacctcaagt
121 gatctgccca cctcggcttc ccagagtgtt gggcttacag atgtgagcca ccacacctgg
181 ccaaaagatt tccttttaag aaaaatgtgg gattttttct acgaaggctc tttaaccaca
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301 gaaacatcca tcttattttt ctttttgagg cagggtttcc gctctttcac ccaagctggg
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