《一种酚类化合物及其制备方法和应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种酚类化合物及其制备方法和应用.pdf（10页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103524472 A (43)申请公布日 2014.01.22 CN 103524472 A (21)申请号 201310503209.5 (22)申请日 2013.10.23 C07D 311/58(2006.01) A01N 43/16(2006.01) A01P 1/00(2006.01) (71)申请人 云南烟草科学研究院 地址 650106 云南省昆明市高新技术开发区 科医路 41 号 (72)发明人 杨光宇 陈永宽 刘志华 韩熠 段沅杏 张霞 张涛 缪明明 (74)专利代理机构 昆明知道专利事务所 ( 特殊 普通合伙企业 ) 53116 代理人 姜开侠 。
2、姬介南 (54) 发明名称 一种酚类化合物及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一种烟草中的酚类化合物及其 制备方法和应用。所述的酚类化合物是从烟草根 茎中分离得到， 其分子式为 C15H20NaO3， 具有下述 结构 ：所述酚类 化合物的制备方法， 是以烟草根茎为原料， 经浸膏 提取、 硅胶柱层析、 高压液相色谱分离步骤， 具体 为 ： 将烟草根茎粉碎后乙醇分超声提取， 提取液 合并， 过滤， 减压浓缩成浸膏 ； 浸膏用硅胶干法装 柱进行硅胶柱层析 ； 以体积配比为 1:01:2 的氯 仿 - 丙酮溶液进行梯度洗脱 ； 洗脱液的 9:1 部分 进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的。
3、酚类 化合物。 本发明经试验证明， 对烟草花叶病毒具有 较好的细胞活性。 本发明化合物结构简单， 人工合 成容易实现， 化合物的活性好， 可作为抗烟草花叶 病毒的先导性化合物。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 (10)申请公布号 CN 103524472 A CN 103524472 A 1/1 页 2 1. 一种酚类化合物， 其特征在于所述化合物是从烟草根茎中分离得到， 其分子式为 C15H20NaO3， 具有下述结构 ： 。 2. 一种权利要求 1 所。
4、述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于以烟草根茎为原料， 经 浸膏提取、 硅胶柱层析、 高压液相色谱分离步骤， 具体为 ： A、 浸膏提取 ： 取烟草根茎样品， 粉碎至 2040 目， 用 9099% 乙醇超声提取 35 次， 每次 3060 min， 合并提取液、 过滤， 减压浓缩成浸膏 ； B、 硅胶柱层析 ： 浸膏用重量比 23 倍量的 160200 目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析 ； 以体积配比为1:01:2的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱， 合并相同的部分， 收集各部分洗脱 液并浓缩 ； C、 高压液相色谱分离 ： B 步骤洗脱液的 9:1 部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 所述的酚类。
5、化合物。 3. 如权利要求 2 所述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于所述的 A 步骤中乙醇浓度 为 95%。 4. 如权利要求 2 所述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于所述 B 步骤中浸膏在经硅 胶柱层析粗分前， 用重量比 1.53 倍量的纯甲醇溶解后用重量比 0.81.2 倍的 80100 目硅 胶拌样。 5. 如权利要求 2 所述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于所述 B 步骤中氯仿 - 丙酮 溶液体积配比为 1:0、 20:1、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 1:1、 1:2。 6. 如权利要求 2 所述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于 ： 所述的 C 步骤中高压。
6、液 相色谱分离纯化是采用 21.2 mm 250 mm， 5m 的 C18色谱柱， 流速为 20 mL/min， 流动相 为65%的甲醇， 紫外检测器检测波长为352 nm， 每次进样200 L， 收集18.6 min的色谱峰， 多次累加后蒸干。 7. 如权利要求 2 所述的酚类化合物的制备方法， 其特征在于所述 C 步骤中高压液相色 谱分离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解， 再以纯甲醇为流动相， 用凝胶柱层析分离， 以进一 步分离纯化。 8. 一种权利要求 1 所述的酚类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 103524472 A 2 1/5 页 3 一种酚类化合物。
7、及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明属于烟草化学领域， 具体涉及一种从烟草根茎中提取的酚类化合物及其制 备方法与应用。 背景技术 0002 烟草是人类所认识的各种植物中含化学物质最丰富的一种， 经过几十年的研究， 人们目前从烟草中鉴定出来的单体化学物质就超过 3000 多种， 而且还有许多成分尚未鉴 定出来。 烟草除主要用于卷烟抽吸用途外， 还可从中提取多种有利用价值的化学成分， 从中 发现有开发利用价值的先导性化合物。特别是对于烟草的根和茎、 一般都作为烟叶生产过 程中的废弃物处理。 因此， 除作为卷烟消费外， 加强烟草及其废弃物的综合利用具有重要意 义。 0003 酚类化合物是一。
8、类天然植物中普遍存在的化合物， 也是烟草中的重要成分， 该类 化合物具有广泛的药理作用 , 如抗肿瘤、 抗人类免疫缺陷病毒 (HIV)、 抗氧化、 抗菌、 抗凝血 等 ； 同时已有研究证实 , 其药理作用与化学结构密切相关 , 可进一步研究和开发更多的酚 类化合物 , 从中寻找有效的先导化合物和活性基团。本发明从烟草根茎中分离得到了一种 具有抗烟草花叶病毒活性的新酚类化合物， 该化合物至今尚未见到相关报道。 发明内容 0004 本发明的第一目的在于提供一种酚类化合物 ； 第二目的在于提供所述酚类化合物 的制备方法 ； 第三目的在于提供所述酚类化合物在制备抗烟草花叶病药物中的应用。 0005 本。
9、发明的第一目的是这样实现的， 所述化合物是从烟草根茎中分离得到， 其分子 式为 C15H20NaO3， 具有下述结构 ： 该化合物为黄色胶状物， 化学名称为 1-(5- 甲氧基 -2,2- 二甲基 -3,4- 二氢 -2H- 色 烯 -7- 基 )-2- 丙酮 (1-(5-methoxy-2,2-dimethyl-3,4-dihydro-2H-chromen-7-yl) propan-2-one)。 0006 本发明的第二目的是这样实现的， 所述酚类化合物的制备方法是以烟草根茎为原 料， 经浸膏提取、 硅胶柱层析、 高压液相色谱分离步骤， 具体为 ： A、 浸膏提取 ： 取烟草根茎样品， 粉碎。
10、至 2040 目， 用 9099% 乙醇超声提取 35 次， 每次 3060 min， 合并提取液、 过滤， 减压浓缩成浸膏 ； B、 硅胶柱层析 ： 浸膏用重量比 23 倍量的 160200 目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析 ； 说 明 书 CN 103524472 A 3 2/5 页 4 以体积配比为1:01:2的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱， 合并相同的部分， 收集各部分洗脱 液并浓缩 ； C、 高压液相色谱分离 ： B 步骤洗脱液的 9:1 部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 所述的酚类化合物。 0007 以上述方法制备的酚类化合物的结构是通过以下方法测定出来的 ： 本发明化合物为黄色胶状。
11、物 ； 紫外光谱 (溶剂为甲醇), max (log ) 210 (4.26), 250 (3.76), 330 (2.87) ； 红外光谱 ( 溴化钾压片 ) max 3416, 2918, 2854, 1716, 1606, 1542, 1427, 1387, 1161, 956, 815 cm-1； 高分辨质谱 (HRESIMS) 给出准分子离 子峰 m/z 271.1317 M+Na+ ( 计算值 271.1310)。结合 1H 和13 C NMR 谱给出一个分子式 C15H20NaO3， 不饱和度为 6。从 1H 和13CNMR 谱 ( 数据归属见表 -1) 信号可以看出化合物中有 。
12、一个 5,7- 取代的二氢色烯母体 (C 73.2 s， 33.4 t， 21.4 t， 162.9 s， 112.0 d， 134.1 s， 108.9 d， 152.1 s， 115.2 s， 26.8 q (2C) ；H 1.78 2H (t) J=6.8， 2.64 2H (t) J=6.8， 6.62 1H (d) J=2.2， 6.44 (d) J=1.8， 1.62 6H s)， 一个丙酮基 (C 49.2 t， 206.2 s， 31.0 q ；H 4.15 2H s， 2.43 3H s)， 以及一个甲氧基(C 56.0 q，H 3.80 3H s)， 根据H-11和 C-6。
13、、 C-7、 C-8， 以及 H-6、 H-8 和 C-11 的 HMBC 相关可证实丙酮基取代在 C-7 位， 根据甲氧基 氢和 C-5 的 HMBC 相关可证实甲氧基取代在 C-5 位。至此化合物的结构得到确认。 0008 表 -1. 化合物的 1H NMR 和 13C NMR 数据 (C5D5N) No.dC(m)dH(m,J,Hz) 273.2s 333.4t1.78(t)6.8 421.4t2.64(t)6.8 5162.9s 6112.0d6.62(d)2.2 7134.1s 8108.9d6.44(d)2.2 9152.1s 10115.2s 1149.2t4.15s 12206。
14、.2s 1331.0q2.43s 14,1526.8q1.62s 5-OMe56.0q3.80s 本发明的第三目的是这样实现的， 即将所述酚类化合物应用于烟草花叶病药物中的制 备。 0009 本发明化合物是首次被分离出来的， 通过核磁共振和质谱测定方法确定了为酚类 化合物， 并表征了其具体结构。 经对抗烟草花叶病毒的实验， 其相对抑制率达到38.5%， 具有 很好的抗烟草花叶病毒活性， 比阳性对照品南宁霉素的相对抑制率 （28.2%） 高。以上结果 揭示了本发明的化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中有良好的应用前景。 本发明化合物结 构简单活性好， 可作为抗烟草花叶病毒药物的先导性化合物。 附图说。
15、明 0010 图 1 为化合物的核磁共振碳谱 ； 图 2 为化合物的核磁共振氢谱 ； 说 明 书 CN 103524472 A 4 3/5 页 5 图 3 为化合物的主要 HMBC 相关。 具体实施方式 0011 下面结合实施例及附图对本发明作进一步的说明， 但不以任何方式对本发明加以 限制， 基于本发明教导所作的任何变换或改进， 均落入本发明的保护范围。 0012 除非另有说明， 本发明中所采用的百分数均为质量百分数。 0013 本发明所述酚类化合物 C15H20NaO3的制备方法包括浸膏提取、 硅胶柱层析、 高压液 相色谱分离步骤， 具体包括 ： A、 浸膏提取 ： 取烟草根茎样品， 粉碎。
16、至 2040 目， 用 9099% 乙醇超声提取 35 次， 每次 3060 min， 合并提取液、 过滤， 减压浓缩成浸膏 ； B、 硅胶柱层析 ： 浸膏用重量比 23 倍量的 160200 目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析 ； 以体积配比为1:01:2的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱， 合并相同的部分， 收集各部分洗脱 液并浓缩 ； C、 高压液相色谱分离 ： B 步骤洗脱液的 9:1 部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得 所述的酚类化合物。 0014 所述 A 步骤的溶剂乙醇浓度为 95%。 0015 所述 B 步骤的浸膏在经硅胶柱层析粗分前， 用重量比 1.53 倍量的纯甲醇溶解后 用重量比 。
17、0.81.2 倍的 80100 目硅胶拌样。 0016 所述 B 步骤的氯仿 - 丙酮溶液体积配比为 1:0、 20:1、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 1:1、 1:2。 0017 所述的C步骤中高压液相色谱分离纯化是采用21.2 mm 250 mm， 5m的C18色 谱柱， 流速为 20 mL/min， 流动相为 65% 的甲醇， 紫外检测器检测波长为 352 nm， 每次进样 200 L， 收集 18.6 min 的色谱峰， 多次累加后蒸干。 0018 所述 C 步骤中高压液相色谱法分离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解， 再以纯甲醇 为流动相， 用凝胶柱层析分离， 以进一步分离纯化。
18、。 0019 本发明所述的酚类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。 0020 本发明所用原料不受地区和品种限制， 均可以实现本发明， 下面以来源于云南玉 溪的烟草根茎样品对本发明做进一步说明 ： 实施例 1 烟草根茎样品来源于云南玉溪， 品种为云烟 -85。将烟草根茎取样 2.2 kg 粉碎到 30 目， 以 95% 的乙醇用超声提取 3 次， 每次提取 30min， 提取液合并， 过滤， 减压浓缩成浸膏， 得 浸膏 105.4 g。浸膏用重量比 2.5 倍量的纯甲醇溶解后用 150 g 的 100 目粗硅胶拌样， 1.5 kg 的 160 目硅胶装柱进行硅胶柱层析， 用体积配比为 1:0。
19、、 20:1、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 1:1、 1:2 的氯仿 - 丙酮梯度洗脱， TLC 监测合并相同的部分， 得到 8 个部分， 其中体积配比为 9:1 的氯仿 - 丙酮洗脱部分用安捷仑 1100 半制备高效液相色谱分离， 以 65的甲醇为流动相， Zorbax SB-C18 (21.2 250 mm, 5 mm) 制备柱为固定相， 流速为 20 ml/min， 紫外检测器 检测波长为352 nm， 每次进样200 mL， 收集18.6 min的色谱峰， 多次累加后蒸干 ； 所得产物 再次用纯甲醇溶解， 再以纯甲醇为流动相， 用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分。
20、离， 即得该新 化合物。 0021 实施例 2 说 明 书 CN 103524472 A 5 4/5 页 6 烟草根茎样品来源于云南玉溪， 品种为云烟 -85。将烟草根茎取样 3.5kg 粉碎到 40 目， 以 90% 的乙醇用超声提取 5 次， 每次提取 45 min， 提取液合并， 过滤， 减压浓缩成浸膏， 得浸膏 215 g。浸膏用重量比 2.0 倍量的纯甲醇溶解后用 300 g 的 80 目粗硅胶拌样， 1.5 kg 的 200 目硅胶装柱进行硅胶柱层析， 用体积配比为 1:0、 20:1、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 1:1、 1:2 的氯仿 - 丙酮梯度洗脱， TLC 。
21、监测合并相同的部分， 得到 8 个部分， 其中体积配比为 9:1 的氯仿 - 丙酮洗脱部分用安捷仑 1100 半制备高效液相色谱分离， 以 65的甲醇为流动相， Zorbax SB-C18 (21.2 250 mm, 5 mm) 制备柱为固定相， 流速为 20 ml/min， 紫外检测器 检测波长为352 nm， 每次进样200 mL， 收集18.6 min的色谱峰， 多次累加后蒸干 ； 所得产物 再次用纯甲醇溶解， 再以纯甲醇为流动相， 用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离， 即得该新 化合物。 0022 实施例 3 烟草根茎样品来源于云南玉溪， 品种为云烟 -85。将烟草根茎取。
22、样 5 kg 粉碎到 60 目， 以 99% 的乙醇用超声提取 3 次， 每次提取 60 min， 提取液合并， 过滤， 减压浓缩成浸膏， 得浸 膏 312 g。浸膏用重量比 1.6 倍量的纯甲醇溶解后用 500 g 的 90 目粗硅胶拌样， 1.8 kg 的 180 目硅胶装柱进行硅胶柱层析， 用体积配比为 1:0、 20:1、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 1:1、 1:2 的氯仿 - 丙酮梯度洗脱， TLC 监测合并相同的部分， 得到 8 个部分， 其中体积配比为 9:1 的 氯仿 - 丙酮洗脱部分用安捷仑 1100 半制备高效液相色谱分离， 以 65的甲醇为流动相， Zorb。
23、ax SB-C18 (21.2 250 mm, 5 mm) 制备柱为固定相， 流速为 20 ml/min， 紫外检测器 检测波长为352 nm， 每次进样200 mL， 收集18.6 min的色谱峰， 多次累加后蒸干 ； 所得产物 再次用纯甲醇溶解， 再以纯甲醇为流动相， 用 Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离， 即得该新 化合物。 0023 实施例 4 取实施例 1 制备的化合物， 为黄色胶状物。 0024 测定方法为 ： 用核磁共振， 结合其它波谱技术鉴定结构。 0025 本发明化合物为黄色胶状物 ； 紫外光谱 ( 溶剂为甲醇 ), max (log ) 210 (4.26), 。
24、250 (3.76), 330 (2.87) ； 红外光谱 ( 溴化钾压片 ) max 3416, 2918, 2854, 1716, 1606, 1542, 1427, 1387, 1161, 956, 815 cm-1； 高分辨质谱 (HRESIMS) 给出准分 子离子峰 m/z 271.1317 M+Na+ ( 计算值 271.1310)。结合 1H 和13 C NMR 谱给出一个分子 式 C15H20NaO3， 不饱和度为 6。从 1H 和13CNMR 谱 ( 数据归属见表 -1) 信号可以看出化合物中 有一个 5,7- 取代的二氢色烯母体 (C 73.2 s， 33.4 t， 21.。
25、4 t， 162.9 s， 112.0 d， 134.1 s， 108.9 d， 152.1 s， 115.2 s， 26.8 q (2C) ；H 1.78 2H (t) J=6.8， 2.64 2H (t) J=6.8， 6.62 1H (d) J=2.2， 6.44 (d) J=1.8， 1.62 6H s)， 一个丙酮基 (C 49.2 t， 206.2 s， 31.0 q ；H 4.15 2H s， 2.43 3H s)， 以及一个甲氧基(C 56.0 q，H 3.80 3H s)， 根据H-11和 C-6、 C-7、 C-8， 以及 H-6、 H-8 和 C-11 的 HMBC 相关。
26、可证实丙酮基取代在 C-7 位， 根据甲氧基 氢和 C-5 的 HMBC 相关可证实甲氧基取代在 C-5 位。至此化合物的结构得到确认。 0026 实施例 5 取实施例 2 制备的化合物， 为黄色胶状物。测定方法与实施例 4 相同， 确认实施例 2 制备的化合物为所述的酚类化合物1-(5- 甲氧基 -2,2- 二甲基 -3,4- 二氢 -2H- 色 烯 -7- 基 )-2- 丙酮。 说 明 书 CN 103524472 A 6 5/5 页 7 0027 实施例 6 取实施例 3 制备的化合物， 为黄色胶状物。测定方法与实施例 4 相同， 确认实施例 3 制备的化合物为所述的酚类化合物1-(5-。
27、 甲氧基 -2,2- 二甲基 -3,4- 二氢 -2H- 色 烯 -7- 基 )-2- 丙酮。 0028 实施例 7 取实施例 13 制备的任一酚类化合物进行抗烟草花叶病毒活性试验， 试验情况如下 ： 采用半叶法， 在药剂的质量浓度均为 50 mg/L 时对本发明化合物进行抗烟草花叶病毒 活性测定。在 5 6 龄烤烟的植株上， 选取适用于测试的叶片 ( 叶行正常， 无病无虫 )， 先将 叶片均匀撒上细金刚砂， 用毛笔将备用的烟草花叶病毒源 (3010-3) 均匀抹在撒有金刚 砂的叶片上， 待所有中选的叶片接毒结束后， 立即放在盛有药液的培养皿中处理 20 min， 取 出， 洒去叶片上水珠和约。
28、液， 将两个半叶复原排放在铺有卫生纸保湿的搪瓷衙内加盖玻璃， 控温 (232)， 放在温室自然光照射， 2 3 d 即可见枯斑每个处理都设另一半叶为对 照， 另外设有 1 组为商品宁南霉素的处理作为对比， 按下公式计算相对抑制率。 0029 XI =(CK-T) CK100 X ： 相对抑制率 ( )， CK ： 浸泡于清水中半片接毒叶的枯斑数 ( 个 )， T 浸泡于药液中半 片接毒叶的枯斑数 ( 个 )。 0030 结果明本化合物的相对抑制率为 38.5%， 远高于对照宁南霉素的相对抑制率 28.2%， 说明化合物有很好的抗烟草花叶病毒活性。 说 明 书 CN 103524472 A 7 1/3 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 103524472 A 8 2/3 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 103524472 A 9 3/3 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 103524472 A 10 。